一種鹼處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法
2023-12-08 17:46:21 2
專利名稱：一種鹼處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法
技術領域：
本發明屬於生物製藥領域
背景技術：
血竭(Dragon,s blood或Resina Draconis)是傳統名貴中藥，有活血化 瘀、鎮痛止血、消炎抗菌等功效，在我國有悠久的用藥歷史，但歷來依靠進口。 在自然狀態下，龍血樹樹幹木質部在受到損傷或微生物侵染後，植物會產生防 御反應而形成防禦性物質來抵抗微生物侵染，這種物質提取後就是藥用的血竭。 1972年我國醫藥工作者在雲南、廣西等地發現了能產生血竭的劍葉龍血樹 coc力/"c力/'/7e/7".i1 (Lour.) S. C. Chen]。 1999年國家藥品監督管 理局頒布的國家標準中(WS3-082 (Z-016)-99(Z))，血竭以一類新藥材收載。隨 著需求的增長，野生龍血樹資源遭到了嚴重破壞。龍血樹生長極為緩慢，幾十 年樹齡的樹幹才有可能用於血竭生產，而且血竭產量很低。依靠人工繁殖龍血 樹，在樹幹上誘導血竭形成來解決血竭的藥源問題困難很大。
在龍血樹資源研究方面，李宗恆等人申請了專利《劍葉龍血樹種苗培育 方法(CN101116397A)》、《劍葉龍血樹栽培方法(CN101116398A)》，刀祥生等人 申請了《一種劍葉龍血樹的扦插繁殖方法(200510010881.6)》的專利。龍血樹 樹幹木質部形成傷口後，龍血樹會產生防禦反應而形成血竭，劉寶等人據此原 理申請了《一種快速獲得龍血竭原料的方法(CN101138305A)》的專利；在龍血 樹的傷口上施用植物激素，可以增加血竭的產量，楊本鵬等人據此原理申請了 《一種人工栽培龍血樹誘導生產血竭的方法(CN101032207A)》的專利。在傷口
上接種微生物，也可以刺激龍血樹產生較多的血竭，王興紅等人發表了相關的 研究論文(王興紅，江東福，馬萍等，真菌與龍血樹血竭形成關係的初步研究， 中國青年科學技術論文精選，中國科學技術出版社，1994， 11， 500 — 503;江東福，馬萍，王興紅等，龍血樹真菌群及其對血竭形成的影響，1995，雲南植 物研究，17 ( 1 ): 79—82。)；宋啟示等據此原理申請了《一種田間人工誘導生 產龍血竭的方法(CN1817105A)》、《一種龍血竭人工誘導劑及其製備方法 (CN1821387A)》、《一種龍血竭的人工培育方法(CN1821388A)》的專利；楊本 鵬等人還提出了利用組織培養方法生產血竭的專利申請《運用龍血樹組織培養 生產血竭的方法(CN1316876C)》。
這些方法雖然在一定程度上有望緩解龍血樹的資源問題和血竭形成問題， 除組織培養外，這些專利方法都必須利用活體龍血樹的樹幹木質部，而樹幹的 生長又是極其緩慢的，而且對樹幹的利用也只能是一次性的；組織培養也存在 培養時間長、成本高等問題，無法較快地滿足現實生產的緊迫需要。
自然狀態下龍血樹的樹葉生長較快，而且每年都會衰老枯死一批，還可以 通過快速培養龍血樹苗迅速得到大量的龍血樹葉片，所以利用龍血樹活葉片誘 導生產血竭，可以重複利用珍貴的龍血樹。目前，尚未發現有誘導龍血樹活葉 片生產血竭的專利申請或方法報導。人工誘導龍血樹葉片生產血竭有望解決血 竭生產原料嚴重短缺的局面，滿足人民群眾的用藥需求，又有助於保護自然資 源。
發明內容
本發明使用鹼處理龍血樹葉片，龍血樹葉片受到刺激後會產生防禦反應， 形成的反應產物就是血竭。
本發明所述的鹼處理龍血樹活葉片形成血竭的方法由以下步驟組成
一、 配製一定濃度的鹼性液體，或者鹼性固體粉末。
二、 將配製後的鹼性物質用以下三種方法中的一種或幾種處理生長健壯的 龍血樹葉片。2. 1將鹼性液體或鹼性粉末施於幼嫩的龍血樹葉片上。
2. 2將鹼性液體或鹼性粉末施於龍血樹葉片的基部或頂端的樹芯部位。
2.3採用刀片、釘子、或針狀物人為損傷葉片，在損傷處施用鹼性液體或
鹼性粉末。
三、 鹼處理龍血樹葉片一段時間以後，用潔淨的水淋洗葉片去掉鹼性物質， 以免葉片損傷過度並保持葉面清潔。
四、 鹼處理後的龍血樹按正常栽培條件管理，1-3周內即可在葉片受損處 產生紅色的血竭。
五、 將產生血竭的葉片收穫後，採下葉片上的紅色部位，乾燥後用甲醇或 乙醇浸泡含脂葉片，然後蒸發掉溶劑，提取物經乾燥後即可得到紅色血竭。
本發明所述的龍血樹，包括整個龍血樹屬(""cse朋)可以產生血竭的所 有植物，如劍葉龍血樹coc力^由./ 譜i^ (Lour.) S. C. Chen]， 索禾鬥牛寺拉龍血lt ["racse/ a c/"/7a6ar/Balf. f.]，龍血|^ ["racse/Ls dracoL.]， 阿拉伯龍血樹["racae朋sc力/zai^力a]，小花龍血樹或海南龍血樹["rscae朋 ca勵ot/Za朋Pierre ex Gagnep]，巖棕/oure/r/]等植物。
本發明所述的葉片，是指生長在活體龍血樹上有生命力的葉片，只有葉片 在生活狀態時，才會形成血竭，即血竭的形成是一個活細胞對損傷的反應，該 反應的啟動需要有一個時間過程，從幾個小時至幾天時間不等。已死亡的葉片 或即將死亡的葉片是不會形成血竭的。正常野生的龍血樹葉片很少會自動產生 血竭。
本發明所述的鹼，可以是純化的氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(K0H)、碳 酸鈣(CaC03)、生石灰(Ca0)、石灰水(Ca(0H)2)等鹼性化合物，也可以是含 有一種或幾種鹼性物質的混合物。這些鹼性物質可以混於液態溶劑中製成鹼性液體使用；也可以將這些鹼性物質混入其它非鹼性或鹼性的固態載體中，製成 鹼性固體粉末。
本發明所述的樹芯或葉片的基部，是龍血樹葉片分生組織存在的部位，它 具有形成和延長葉片的功能。損傷這些分生組織後，利用分生組織延長葉片的 自然特性，可以保持較長時間的誘導效果，葉片上能形成血竭的面積也較大。
本發明所述的人為損傷，是因為一般情況下特別是老的龍血樹葉片對鹼性 物質的腐蝕有較強的抵抗力，使用人為損傷的辦法，可以增加鹼處理的效果， 也可以利用此方法控制血竭在葉片上形成的位置和密度。
本發明所述的鹼處理時間和鹼液濃度，可根據葉片的生長時間、季節、樹 葉的老嫩程度、樹的活力狀態和鹼性物質的性質不同而適當作一些調整。 一般 情況下，處理嫩葉時鹼濃度可低一些，處理較老的葉片時，鹼液濃度可高一些； 生長旺盛的樹葉，鹼處理時間可長一些，生長狀態較差的樹葉，鹼處理時間可 以短一些。鹼性物質的使用濃度範圍在0. 5%-100%之間，依據鹼性物質的鹼性強 弱可以有濃度上的變化，如氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(KOH)的鹼性較強，使 用比例可以在0. 5%-10°/。之間，而生石灰(Ca0)和其溶於水後形成的石灰水 [Ca(0H)2]鹼性弱，生石灰(Ca0)作為固體粉末使用時可以用純的生石灰，石灰 水可以使用其飽和溶液。鹼性強時，鹼處理時間可短一些；反之亦然。以氫氧 化鈉(NaOH)為例，由於其鹼性較強，濃度為1%-5% (W/V)的氫氧化鈉水溶液 處理時間為12-72小時即可。若用碳酸鈣(CaC03)處理，由於其鹼性較弱，100% 含量的碳酸鈣處理時間可能需要長達1-2個月。評價鹼處理效果的唯一標準是: 不可讓葉片大面積死亡，只能讓葉片呈點狀損傷。
本發明所述的鹼性液體，其溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇或其它有 機溶劑；也可以是液體溶劑中含有固體成分的漿狀物，甚至可以在液體中加入 一定含量的粘結劑，增強鹼性物質在葉片中的附著性能。鹼性固體粉末，可以是鹼性物質本身，如生石灰粉，或者是將鹼性物質混在賦形劑中，如將氫氧化
鈉(NaOH)按一定比例配入硅藻土中等。
本發明所述的用清潔的水淋洗葉片，是指一般的生活用水即可，通過淋洗， 可以控制葉片鹼處理的程度，並保持葉面清潔，也有利於提高所提取的血竭質 量。特別是在鹼處理葉片過度時，適時淋洗是矯正的措施之一。在生產時需要
注意的是在人工淋洗鹼處理葉片之前，要防止雨水淋溼葉片而降低鹼處理的效果。
本發明要解決的技術問題是利用鹼的腐蝕性使龍血樹葉片受傷後，鹼性物 質又進一步刺激龍血樹葉片產生防禦反應形成血竭，並利用龍血樹葉的生長快 速且可反覆生長的特性，解決血竭資源短缺的問題。
該技術由以下的特徵組成將鹼性物質配製成鹼性液體或鹼性固體粉末； 噴塗鹼性物質於龍血樹活葉片上；鹼處理一段時間後用水淋洗去掉鹼性物質， 以免葉片損傷過度並保持葉面潔淨；葉片損傷後，必須滿足龍血樹的正常生長 條件；傷口形成1-2周後即開始出現血竭。繼續培養1-2月後，即可收穫含有 紅色血竭的葉片，乾燥後用乙醇或甲醇提取含脂葉片，提取物經乾燥後即可作 為藥用。
有益效果是利用龍血樹葉片的快速生長特性，通過鹼處理葉片快速形成 血竭，持續利用珍貴的龍血樹資源，解決龍血樹生長速度過慢、血竭資源緊張 的問題。
為了更好的理解本發明，下面用實驗數據進行說明
配製2%的氫氧化鈉水溶液，將鹼液噴或塗於人工損傷後的葉片上，增加鹼 處理的效果，3天後淋洗葉片，繼續培養葉片2個月，紅色血竭出現在傷口部位， 割取產脂葉片，去掉葉片的綠色部分，含脂葉片乾燥後，用甲醇提取，經旋轉 蒸發乾燥後即得紅色血竭。具體實施例1、 配製2%氫氧化鈉甲醇溶液，將氫氧化鈉甲醇溶液噴於葉片的基部24小
時後，用IO倍鹼液量的清水淋洗鹼處理部位，待2-3個月後，葉片伸長生長並 形成血竭後，繼續培養龍血樹2-3個月，割取含脂葉片，去掉葉片未產生血竭 的綠色部分，保留紅色含脂部分，乾燥後用95%的乙醇提取，提取物經千燥後即 得血竭。
2、 配製6%氫氧化鉀水溶液，將氫氧化鉀溶液呈霧狀直接噴於幼嫩的龍血樹 葉片上，48小時後，用2G倍量的清水淋洗鹼處理過的葉片，龍血樹按正常生長 條件管理，3個月後，收穫產脂葉片，去掉葉片綠色部位，保留紅色含脂部位， 含脂葉片乾燥後用乙醇提取，蒸發掉乙醇，提取物經乾燥即得紅色血竭。
3、 將碳酸鈣粉碎成過200目篩的粉末，加入碳酸鈣5倍重量的水和0.5% 的膠水，攪拌均勻。用刀片劃傷較老的葉片，將碳酸鈣漿狀物塗抹於傷口處， 繼續培養葉片6個月，傷口處出現紅色血竭，再繼續培養一段時間後，去掉葉 面上碳酸鈣塊狀物，收穫葉片，含脂葉片乾燥後用甲醇提取，再蒸發掉甲醇溶 劑，即得紅色血竭，粉碎後即可藥用。
4、 將生石灰粉碎成150目左右的粉末，直接噴撒於龍血樹嫩葉上，每IOO 平方釐米葉面約撒20克，15-30天後，葉面出現點狀損傷，用清水淋洗葉面， 保持龍血樹的正常生長狀態，3個月後收穫含脂葉片，葉片乾燥後提取血竭即可。
權利要求
1、一種鹼處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法，其特徵在於該方法由將鹼性物質施於龍血樹活葉片上，損傷並誘導龍血樹葉片產生血竭，收穫含有血竭的葉片，含脂葉片乾燥後，用乙醇或甲醇提取血竭、血竭提取物乾燥等步驟組成。
2、 根據權利要求l所述的鹼，是指PH大於7的所有鹼性物質，可以是液體狀 態，也可以是固體粉末狀，所謂的液體狀態，可以是溶解狀態，也可以是不溶 解的漿狀物，溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇等有機溶劑。
3、 根據權利要求1或2所述的誘導龍血樹葉產生血竭的方法，其特徵在於誘導 的部位是龍血樹的活葉片，而不是樹幹木質部，也不是已經死亡的葉片。
4、 根據權利要求1或2或3所述的誘導龍血樹葉產生血竭的方法，其特徵在於 所述的鹼處理龍血樹葉片時，鹼性物質的濃度根據鹼性的強弱、葉片的老嫩、 樹體的活力狀態等條件的不同，誘導所需的時間會有相應的變化,鹼處理程度 的標準是即要讓葉片呈現較多而小的斑點，而又不能讓葉片死亡。
全文摘要
本發明涉及一種鹼處理龍血樹活葉片誘導血竭產生的方法。本發明所述的方法由以下步驟組成一、將鹼性物質配入液體或固體粉末；二、將配製後的鹼性物質施於龍血樹葉片上或產生葉片的分生組織處；三、鹼性物質處理龍血樹葉片一段時間後，用水洗或用其它方法去掉鹼性物質；四、鹼處理龍血樹活葉片一段時間以後，血竭才可以形成；五、收穫產生血竭的含脂葉片，乾燥後用乙醇或甲醇提取，提取物經乾燥後即得血竭。本發明要解決的技術問題是利用龍血樹葉更新速度快的特性，將鹼性物質作為誘導龍血樹葉片損傷和血竭形成的誘導劑，解決龍血樹資源的可持續利用的問題。
文檔編號A01G7/06GK101406144SQ200810233619
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月21日 優先權日2008年11月21日
發明者王興紅 申請人:雲南大學