一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系及其製備方法
2023-05-09 01:35:51
專利名稱：一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系及其製備方法
技術領域：
本發明屬微生物動物細胞系領域，具體涉及一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系 RCC09HYF，及其製備方法。
背景技術：
腫瘤細胞系在腫瘤的基礎研究中具有重要的地位，採用細胞系進行體外實驗及體內動物模型的構建，對於在後基因組時代即功能基因組時代，挖掘重要基因的潛在功能至關重要。由於細胞系具有比較恆定的遺傳背景，因此細胞系仍是目前完成基因功能的體外檢測和驗證的重要工具。人癌細胞的體外培養，不僅能從分子、基因水平深入研究腫瘤發生和發展機理，而且對臨床的早期診斷、藥物篩選和腫瘤治療具有重要意義，如sunitinib malate治療轉移性腎透明細胞癌目前進入了 III期臨床實驗，之前該藥物在786-0等腎癌細胞系的作用機制的深入研究起到了奠基作用。腎肉瘤樣癌是腎臟惡性腫瘤的特殊類型，僅佔腎實質腫瘤的1.0% -8.0%，臨床少見，瘤體具有浸潤性生長的生物學特性，惡性程度高，病程進展迅速，轉移通常發生早，多數患者對放化療不敏感，預後極差。Tl患者的平均生存期為49. 7個月，T2-T4患者的平均生存期為6. 8個月。1968年Farrow等首先發現並命名為肉瘤樣癌(Farrow GM, Harrison EG,UTZ DG. Sarcomas and sarcomatoid and mixed malignant tumors of the kidney in adults-Part III. Cancer 1968,22 :556-563)。該腫瘤成分中，上皮部分可以是各種病理類型的腎細胞癌，70%為透明細胞癌或顆粒細胞癌；肉瘤樣部分可以表現為血管外皮肉瘤樣、 橫紋肌肉瘤樣、骨肉瘤樣、軟骨肉瘤樣及未分化肉瘤樣等結構。目前腎肉瘤樣癌的診斷水平和治療效果沒有突破性進展，早期發現並進行根治性手術治療仍然是首選的診斷治療方案。臨床上證實少部分腎肉瘤樣癌病例對細胞因子治療有一定效果，但屬於個案報導，尚未得到臨床實驗的證據。由於腎肉瘤樣癌中，肉瘤樣結構與上皮結構的混合比例直接影響了患者預後及系統治療，肉瘤樣結構佔的比例越高，患者預後越差，系統治療越困難。為了闡明腎肉瘤樣癌的遺傳特性，特別是肉瘤樣結構與上皮結構部分的相互作用在腎細胞癌惡性進展中發生的作用，從而指導臨床的系統治療，建立體外腎肉瘤樣癌細胞模型是必經之路也是當務之急。目前，ATCC尚未收錄任何有關腎肉瘤樣癌的細胞系，鑑於全世界人種的遺傳背景和生活條件的差異，腫瘤發病率和病死率也有所不同，對漢族人新鮮腎肉瘤樣癌細胞的培養及細胞系的建立是研究中國人腎癌轉移機制的重要步驟，具有切實的科學意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系。本發明應用體外細胞培養技術建立人腎肉瘤樣癌細胞系，採用細胞株作為實驗對象，分析腫瘤細胞的生長、轉移等生物學行為特點，為進一步研究漢族人腎細胞癌發生和轉移機制，為臨床預測、診斷及治療提供有效且穩定的細胞模型。
本發明提供一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，其保藏號為CCTCC C201130, 於2011年5月11日保藏於中國典型培養物保藏中心。本發明還提供了上述漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的製備方法，包括以下步驟本發明的RCC09HYF細胞取自一位漢族腎肉瘤樣癌患者的腎原位腫瘤組織。將切除的腫瘤組織放入盛有少量無血清DMEM培養基(含1000單位/ml青黴素，3 μ g/ml兩性黴素B)的細胞培養平皿中，剔除壞死組織、脂肪結締組織、血管等，隨後將可肉眼分辨的腫瘤組織塊於4°C下浸泡於無血清的DMEM培養基中。30min後，將組織塊用眼科剪剪成l_3mm3 的小塊，將組織塊隨同浸泡液轉移至離心管中，反覆搖晃清洗2-aiiin，1500轉/分，離心 IOmin0棄上清，重新加入DMEM培養基懸浮組織塊，反覆搖晃清洗2_;3min，1500轉/分，離心lOmin，棄上清。用Iml的DMEM完全培養基(DMEM培養基，10%胎牛血清，青黴素100單位/ml，鏈黴素100 μ g/ml)重懸組織塊，並接種到玻璃細胞培養瓶(IOOml)中。將培養瓶置於37°C ,5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中培養Mh。24h組織塊貼壁後補充加入DMEM完全培養基2-2. 5ml繼續培養。本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的具體製備方法如下1.原代培養無菌條件下，取行腎癌根治術患者的腎原位腫瘤組織(後病理鑑定為腎肉瘤樣癌)，放入盛有少量無血清DMEM培養基(含1000單位/ml青黴素，3 μ g/ml兩性黴素B)的細胞培養平皿中，剔除壞死組織、脂肪結締組織、血管等，隨後將可肉眼分辨的腫瘤組織塊於4°C下浸泡於無血清的DMEM培養基中。30min後，將組織塊用眼科剪剪成l_3mm3的小塊， 將組織塊隨同浸泡液轉移至離心管中，反覆搖晃清洗2-;3min，1500轉/分，離心lOmin。棄上清，重新加入DMEM培養基懸浮組織塊，反覆搖晃清洗2-aiiin，1500轉/分，離心lOmin， 棄上清。用Iml的DMEM完全培養基重懸組織塊，並接種到玻璃細胞培養瓶(IOOml)中。將培養瓶置於37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中培養Mh。24h組織塊貼壁後補充加入 DMEM完全培養基2-2. 5ml繼續培養。2.傳代當細胞從組織塊中爬出，並有85%以上融合的時候，進行細胞傳代。在超淨工作檯內，於無菌條件下，吸除培養瓶內培養液。用少量D-hanks液清洗培養瓶2次後，加入0. 25% 胰酶1ml，置37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中4-5min。待鏡下觀察大部分細胞的細胞質回縮、細胞間隙增大時(甚至看到有個別細胞漂浮起來)，加入DMEM完全培養基中和，反覆吹打貼壁的細胞，形成單細胞懸液。3.凍存與復甦凍存凍存前24h更換新鮮的DMEM完全培養基，使細胞處於指數生長期。在超淨工作檯內，於無菌條件下，吸除培養瓶內培養液。用D-hanks液清洗培養瓶2次後，加入 0. 25%胰酶1ml，置37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中4-5min。待鏡下觀察大部分細胞的細胞質回縮、細胞間隙增大時(甚至看到有個別細胞漂浮起來)，加入DMEM完全培養基細1，反覆吹吸貼壁的細胞，形成單細胞懸液。將細胞懸液收集至離心管中，室溫下1500rpm 離心IOmin收集培養細胞。棄上清，細胞沉澱用1.5ml凍存液懸浮，計數，調整至5 X IO6/ ml。移入凍存管，將凍存管口封嚴。貼上標籤，註明細胞種類、凍存日期、凍存者。凍存管置於-80°C 12h以上，次日移入液氮。復甦從液氮中取出凍存管、迅速置於37°C溫水中。待凍存管中的凍存物融化成液體後，將細胞懸液吸至離心管中，1500rpm離心lOmin，棄去上清液。沉澱加5ml DMEM完全培養基，吹打均勻至單細胞懸液(細胞濃度5 X 105/ml)，轉移至培養瓶中，置37°C，5% CO2, 95%溼度的(X)2培養箱中培養。目前中國典型培養物保藏中心保藏的是我們培養的第64代、69代RCC09HYF。本發明涉及到的培養液配方如下D-Hanks 液=NaCl 8. Og, KCl 0. 4g, Na2HPO4 12H20 0. 08g, KH2PO4 0. 06g, NaHCO3 0. !35g，l%酚紅anl，超純水溶解並定容至1000ml。121°C 30min滅菌，4°C保存。DMEM培養基Hyclone，hvitrogen (高糖，添加丙酮酸鈉及L-穀氨醯胺)。DMEM完全培養基DMEM培養基，10 %胎牛血清，青黴素100單位/ml，鏈黴素 100μ g/ml。凍存液(使用前現配)採用胎牛血清添加二甲基亞碸(DMSO)配製凍存液，其體積比 14-20 1。本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，能在體外長期生長和穩定傳代， 呈雙相分化特徵，由肉瘤樣結構和上皮樣結構(主要為透明細胞癌)，失去接觸抑制； RCC09HYF染色體為異倍體，染色體數目主要集中在55-68，染色體眾數為63，染色體的數目及結構均有畸變 』經歷12個月傳120代，群體倍增時間為18h，集落形成率為31% ；免疫組化分析 RCC09HYF 對應腫瘤，顯示 Vimentin、CD10、CAM、Ki67 呈強陽性，ABC、CACP、HMB、P53、 SMA陰性。本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，經體外原位動物模型致瘤實驗發現，動物體內成瘤速度較快，接種瘤體3-4周後，50%以上的裸鼠移植瘤充滿整個腹腔，惡液質，個別已存在肺轉移。凍存後復甦率達80%以上，復甦後的細胞生長狀態與原培養細胞一致。採用本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系細胞作為實驗對象，可以分析腫瘤細胞的生長特性，及腫瘤細胞的侵襲、轉移等相關惡性生物學行為及發生機制，為進一步研究漢族人腎肉瘤樣癌的發生及轉移，為臨床預測、診斷及治療提供有效且穩定的細胞模型。本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，為進行腎肉瘤樣癌的早期發現、有效治療篩選特異的標誌物和治療靶點。
圖1為RCC09HYF的12代細胞於光學顯微鏡下觀察QOO X)，細胞均呈貼壁生長， 培養早期細胞形態及其不規則，失去接觸抑制，呈雙相分化特徵(A)，細胞異質性明顯(B)， 部分細胞呈現肉瘤樣結構(藍色箭頭所指)，部分細胞呈現上皮樣結構——透明細胞癌(紅色箭頭所指)。圖2為RCC09HYF細胞生長曲線。圖3為RCC05HYF HE染色。細胞大，核膜、核仁輪廓明顯，核仁清晰，胞質少，核糖體顆粒豐富，大部分細胞雙核或多核，核質比例倒置。箭頭所指為細胞雙核的現象。 圖4為RCC05HYF對應的腫瘤組織HE染色分析。部分為肉瘤樣結構(A)，上皮樣結構主要以透明細胞癌為主(B)。圖5為RCC05HYF對應的腫瘤組織免疫組化分析顯示CAM、Vimentin、CD10、Ki67呈
強陽性。圖6為RCC05HYF染色體核型分析圖。從圖中可見，RCC05HYF細胞存在超二倍體情況，許多染色體均超過了 2條。
具體實施例方式下面結合本發明的實施例和附圖對本發明的實施作詳細說明，以下實施例是在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護範圍不限於下述的實施例。實施例1 漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的獲得1.原代培養無菌條件下，取行腎癌根治術患者的腎原位腫瘤組織(後病理鑑定為腎肉瘤樣癌)，放入盛有少量無血清DMEM培養基(含1000單位/ml青黴素，3 μ g/ml兩性黴素B)的細胞培養平皿中，剔除壞死組織、脂肪結締組織、血管等，隨後將可肉眼分辨的腫瘤組織塊於4°C下浸泡於無血清的DMEM培養基中。30min後，將組織塊用眼科剪剪成l_3mm3的小塊， 將組織塊隨同浸泡液轉移至離心管中，反覆搖晃清洗2-;3min，1500轉/分，離心lOmin。棄上清，重新加入DMEM培養基懸浮組織塊，反覆搖晃清洗2-aiiin，1500轉/分，離心lOmin， 棄上清。用Iml的DMEM完全培養基重懸組織塊，並接種到玻璃細胞培養瓶(IOOml)中。將培養瓶置於37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中培養Mh。24h組織塊貼壁後補充加入 DMEM完全培養基2-2. 5ml繼續培養。2.傳代當細胞從組織塊中爬出，並有85%以上融合的時候，進行細胞傳代。在超淨工作檯內，於無菌條件下，吸除培養瓶內培養液。用少量D-hanks液清洗培養瓶2次後，加入0. 25% 胰酶1ml，置37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中4-5min。待鏡下觀察大部分細胞的細胞質回縮、細胞間隙增大時(甚至看到有個別細胞漂浮起來)，加入DMEM完全培養基中和，反覆吹打貼壁的細胞，形成單細胞懸液。3.凍存與復甦凍存凍存前24h更換新鮮的DMEM完全培養基，使細胞處於指數生長期。在超淨工作檯內，於無菌條件下，吸除培養瓶內培養液。用D-Hanks液清洗培養瓶2次後，加入 0. 25%胰酶1ml，置37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中4-5min。待鏡下觀察大部分細胞的細胞質回縮、細胞間隙增大時(甚至看到有個別細胞漂浮起來)，加入DMEM完全培養基細1，反覆吹吸貼壁的細胞，形成單細胞懸液。將細胞懸液收集至離心管中，室溫下1500rpm 離心IOmin收集培養細胞。棄上清，細胞沉澱用1.5ml凍存液懸浮，計數，調整至5 X IO6/ ml。移入凍存管，將凍存管口封嚴。貼上標籤，註明細胞種類、凍存日期、凍存者。凍存管置於-80°C 12h以上，次日移入液氮。復甦從液氮中取出凍存管、迅速置於37°C溫水中。待凍存管中的凍存物融化成液體後，將細胞懸液吸至離心管中，1500rpm離心lOmin，棄去上清液。沉澱加5ml DMEM完全培養基，吹打均勻至單細胞懸液(細胞濃度5 X 105/ml)，轉移至培養瓶中，置37°C，5% CO2,95%溼度的(X)2培養箱中培養。本發明涉及到的培養液配方如下D-Hanks 液=NaCl 8. 0g, KCl 0. 4g, Na2HPO4 12H20 0. 08g, KH2PO4 0. 06g, NaHCO3 0. !35g，l%酚紅anl，超純水溶解並定容至1000ml。121°C 30min滅菌，4°C保存。DMEM培養基Hyclone，Invitrogen (高糖，添加丙酮酸鈉及L-穀氨醯胺)。DMEM完全培養基DMEM培養基，10 %胎牛血清，青黴素100單位/ml，鏈黴素 100μ g/ml。凍存液(使用前現配)採用胎牛血清添加二甲基亞碸(DMSO)配製凍存液，其體積比 14-20 1。實施例2 本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的生長及遺傳特性鑑定。1.細胞形態學觀察原代培養成功後，常規進行細胞傳代，能在體外長期生長和穩定傳代，經歷12個月傳120代。倒置顯微鏡鏡下觀察第12代O00X)，可見細胞均呈貼壁生長，培養早期細胞形態及其不規則，失去接觸抑制，呈雙相分化特徵(圖1-A)，細胞異質性明顯(圖1-B)，部分細胞呈現肉瘤樣結構(圖1-B，藍色箭頭所指)，部分細胞呈現上皮樣結構——透明細胞癌(圖1-B，紅色箭頭所指)。 2. RCC09HYF細胞生長曲線將5 X IO4個細胞接種到24孔板中，加2ml的1640完全培養基，共接種21個孔。 以後每隔一天消化3個孔並進行細胞計數。計算細胞數量的平均數和標準差，繪製細胞生長曲線(圖2)。從圖中可見細胞在第1-4天成對數生長，到第5天後達到平臺期，倍增時間為 18h。3. RCC05HYF HE 染色將處於對數生長期的RCC09HYF細胞取出後，PBS清洗，浸入95%酒精固定。PBS清洗後，採用蘇木素染液及伊紅染液染色，隨後梯度酒精脫色、固定、中性樹膠封片，顯微鏡觀察結果。鏡下觀察，細胞大，核膜、核仁輪廓明顯，核仁清晰，胞質少，核糖體顆粒豐富，大部分細胞雙核或多核，核質比例倒置。箭頭所指為細胞雙核的現象。4. RCC09HYF軟瓊脂克隆形成分析(以6孔板的單個孔為分析單位)首先製備下層瓊脂採用1.8%的瓊脂糖、2XDMEM、100XL-穀氨醯胺、100X青鏈黴素、胎牛血清等配製成終濃度為0. 6%的混合體系，待其凝固。將RCC09HYF細胞消化後，計數，製成5000/ml的細胞懸液。隨後製備上層瓊脂採用1.8%的瓊脂糖、2XDMEM、 100XL-穀氨醯胺、100X青鏈黴素、胎牛血清等配製成終濃度為0.3%的混合體系，並與 500 μ 1細胞懸液充分混合，立即傾注於下層瓊脂上，待其凝固後置C02培養箱中培養。15 天后MTT染色觀察計算集落形成率。鏡下觀察，隨機選擇10個視野，計算每個視野中的集落形成率=含有10個以上細胞數的克隆/接種細胞數X 100。經15天的培養，RCC09HYF 的克隆形成率為31%。5. RCC09HYF對應的腫瘤組織HE染色及免疫組化分析按照第二軍醫大學倫理委員會的規定，經患者知情同意後，取該患者腫瘤組織標本。常規4 μ m石蠟切片，貼在塗有切片粘合劑的乾淨載玻片上，58°C烤18小時，常規二甲苯脫蠟至水。一部分進行HE染色，鏡下觀察(圖4)，部分為肉瘤樣結構(圖4-A)，上皮樣結構主要以透明細胞癌為主(圖4-B)。另一部分進行免疫組化分析採用0. lmol/L PBS (PH =7.4)對脫蠟後的切片進行清洗。95°C抗原修復(AR) 10分鐘，自然冷卻，PBS清洗。一抗 (Vimentin、CD10、CAM、Ki67、ABC、CACP、HMB、P53、SMA) 4°C孵育過夜，PBS 清洗。0. 3% H202 抑制內源性過氧化物酶。二抗37°C孵育30分鐘，PBS清洗。0. 05%DAB+0. 03%H202顯色 8-12分鐘，自來水充分衝洗終止反應。蘇木素襯染30s，水洗，藍化(37°C ),0. 5%鹽酸乙醇分化，水洗藍化。常規樹脂封片。觀察陽性產物為棕黃色或呈棕褐色，背景為紫藍色。結果顯示Vimentin、CD10、CAM、Κ 67 呈強陽性(圖 5)，ABC、CACP、HMB、P53、SMA 陰性。6.染色體顯示和結構分析取處於指數生長期、80% -90%融合單層培養的細胞。加秋水仙素阻抑中期分裂， 使其在培養基中最終濃度為0. 04-0. 1 μ g/ml培養基，C02培養箱中繼續培養4小時。經過固定染色後，對30個處於分裂中期的細胞染色體進行計數，RCC09HYF細胞系染色體數目主要集中在55-68，染色體眾數為63，提示存在超二倍體的情況。同時採用R帶顯色法分析染色體結構(鄂徵主編，組織培養和分子細胞學技術，北京出版社，出版日期2001-1-1)。表1-2為RCC05HYF染色體核型分析結果。對30個處於分裂中期的細胞染色體進行分析，對異常情況進行計數，超過10個分裂相的異常情況如表1、表2所示第1號染色體存在缺失，檢出率為90. 0%。第7、9、10、11、12號染色體普遍存在超二倍體情況，檢出率分別為96. 7%U00%,83. 3%,96. 7%U00% ；第9、11、12號染色體同時存在結構異常， 檢出率分別為100^^56.7^^63.3 ^此外，第1、2號染色體普遍存在結構異常，del (1) (qter — p31 )，del (2) (pter — q33 )，檢出率均為 93. 3% (28/30)。表1 RCC09HYF細胞染色體數目異常分析(異常超過10個分裂相)
權利要求
1.漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，其保藏號為CCTCCC201130。
2.根據權利要求1所述的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的製備方法，包括以下步驟將切除的漢族腎肉瘤樣癌患者的腎原位腫瘤組織塊放入盛有少量無血清含1000單位 /ml青黴素和3 μ g/ml兩性黴素B的DMEM培養基的細胞培養平皿中，剔除壞死組織、脂肪結締組織和血管，將腫瘤組織塊於4°C下浸泡於無血清的DMEM培養基中；30分鐘後，將腫瘤組織塊用剪成l_3mm3的小塊，將腫瘤組織塊隨同浸泡液轉移至離心管中，反覆搖晃清洗2-3 分鐘，1500轉/分，離心10分鐘；棄上清，重新加入DMEM培養基懸浮組織塊，反覆搖晃清洗 2-3分鐘，1500轉/分，離心10分鐘，棄上清；用Iml的DMEM完全培養基重懸組織塊，並接種到玻璃細胞培養瓶中；將培養瓶置於37°C，5% C02，95%溼度的CO2培養箱中培養對小時；組織塊貼壁後補充加入DMEM完全培養基2-2. 5ml繼續培養；DMEM完全培養基的配方為 DMEM培養基，10%胎牛血清，青黴素100單位/ml，和鏈黴素100 μ g/ml。
3.根據權利要求2所述的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF的製備方法，具體步驟如下A、原代培養無菌條件下，取行腎癌根治術患者的腎原位腫瘤組織，放入盛有少量無血清含1000單位/ml青黴素和3 μ g/ml兩性黴素B的DMEM培養基的細胞培養平皿中，剔除壞死組織、脂肪結締組織、血管等，隨後將可肉眼分辨的腫瘤組織塊於4°C下浸泡於無血清的DMEM培養基中；30分鐘後，將組織塊用眼科剪剪成l-3mm3的小塊，將組織塊隨同浸泡液轉移至離心管中，反覆搖晃清洗2-3分鐘，1500轉/分，離心10分鐘；棄上清，重新加入DMEM培養基懸浮組織塊，反覆搖晃清洗2-3分鐘，1500轉/分，離心10分鐘，棄上清；用Iml的DMEM完全培養基重懸組織塊，並接種到玻璃細胞培養瓶中；將培養瓶置於37°C，5% C02，95%溼度的 CO2培養箱中培養M小時；對小時組織塊貼壁後補充加入DMEM完全培養基2-2. 5ml繼續培養；DMEM完全培養基的配方為DMEM培養基，10%胎牛血清，青黴素100單位/ml，和鏈黴素 100 μ g/ml ；B、傳代當細胞從組織塊中爬出，並有85%以上融合的時候，進行細胞傳代；在超淨工作檯內， 於無菌條件下，吸除培養瓶內培養液；用少量D-hanks液清洗培養瓶2次後，加入0. 25%胰酶1ml，置37°C，5% C02，95%溼度的(X)2培養箱中4_5分鐘；待鏡下觀察大部分細胞的細胞質回縮、細胞間隙增大時，加入DMEM完全培養基中和，反覆吹打貼壁的細胞，形成單細胞懸液；D-Hanks 液的配方為 NaCl 8. 0g, KCl 0. 4g, Na2HPO4 12H20 0. 08g, KH2PO4 0. 06g, NaHCO3 0. 35g，酚紅^il，超純水溶解並定容至1000ml，121°C 30min滅菌，4°C保存。
全文摘要
本發明屬微生物動物細胞系領域。腎肉瘤樣癌是腎臟惡性腫瘤的特殊類型，僅佔腎實質腫瘤的1.0％-8.0％，臨床少見，目前，ATCC尚未收錄任何有關腎肉瘤樣癌的細胞系。本發明提供一種漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，其保藏號為CCTCC C201130，本發明還提供了製備方法。本發明的漢族人腎肉瘤樣癌細胞系RCC09HYF，能在體外長期生長和穩定傳代，具有上皮樣細胞形態，失去接觸抑制；細胞為異倍體，染色體數目和結構畸變；免疫組化分析RCC09HYF對應的腫瘤組織，顯示Vimentin、CD10、CAM、Ki67呈強陽性，ABC、CACP、HMB、P53、SMA陰性；經體外原位動物模型致瘤實驗發現，動物體內成瘤速度較快，接種瘤體3-4周後，50％以上的裸鼠移植瘤充滿整個腹腔，惡液質，個別已存在肺轉移。本發明可為進一步研究漢族人腎肉瘤樣癌的發生和轉移機制，為臨床預測、診斷及治療提供有效且穩定的細胞模型。
文檔編號C12N5/09GK102286429SQ20111020255
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月20日 優先權日2011年7月20日
發明者關蔚, 常文軍, 曹廣文, 譚曉*, 韓一芳 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學