用於篩選患者對於變應原的敏化狀態的貼片及其使用的製作方法

2023-04-30 02:16:51

專利名稱：用於篩選患者對於變應原的敏化狀態的貼片及其使用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種能將生物活性物質傳遞到表皮的新型貼片。其特別涉及一種貼片，所述貼片特別用於篩選患者對於變應原的敏化狀態。也涉及所述貼片的使用，特別用於篩選患者對於變應原的敏化狀態。
下面的描述中，所用的術語「生物活性物質」表示一種物質，其用於診斷，治療，化妝或預防(例如疫苗)等用途，以個體或聚集的微粒的形式出現。
本發明將更具體地描述變應原，也就是用於篩選患者對於給定變應原的敏化狀態的物質，這裡所述變應原也被認為是前述所定義的用於診斷目的的物質。
下面的描述中，術語「接觸變應原」是指當所述變應原向患者身體接觸時，直接接觸皮膚可引起反應，而保持一定距離則不會產生任何反應的任何變應原。在一定數量的自然或人造物品中發現有這種類型的變應原，當其與患者皮膚接觸時，產生「接觸」變態反應，引起皮膚局部不同現象的反應，例如皮疹，搔癢，出現小泡和溼疹。這種變應原已為本領域技術人員所熟悉，並且已經在文獻特別是在文獻US-A-4836217中有精確記載。已經知道多種接觸性變態反應，特別如對例如含於錶帶中的鎳和含於粘固劑中的鉻等金屬的變態反應，和對香味和對含於化妝品中的羊毛脂的變態反應，以及對例如含於某些藥物中的新黴素，黃素等活性物質的變態反應。
本發明不僅涉及接觸性變態反應，而且特別涉及所有具有下述變應性表現由於與變應原相接觸而不僅僅表現出皮膚反應，而且還包括與變應原的接觸地點有一定距離時所表現出來的例如過敏性休克，腹瀉，竇炎，哮喘，一般性溼疹，風疹等許多症狀。蟎，花粉，動物毛髮，來自不同的植物或動物的各種食物及物質確會引起變態反應。許多變應原涉及例如蟎、花粉、動物毛髮或羽毛等等，有時將它們稱作「呼吸性」變應原，它們引起鼻炎或哮喘類型的呼吸症狀。相類似地，落花生、雞蛋、乳及小麥等有時被稱為「食物」變應原，它們引起例如兒童慢性腹瀉，或如在吞咽落花生時所發生的過敏性休克等過敏性病變等消化性病症。膠乳過敏也已完全被了解，其會導致過敏症狀，導致病人的潛在危險。在文獻EP-A-107832中精確地列出了所述大多數變應原。
診斷變態反應的方法是基於在皮膚反應測驗之前的一系列實驗。與變應原相接觸的皮膚反應表現導致局部炎性皮膚反應，以中度紅斑的形式(炎性反應的第一臨床表現)，或以丘疹同時也顯示出現浮腫的形式(炎性反應的其它表現)。皮膚對於除了接觸變應原之外的變應原的反應可以通過免疫成分在血液中的恆定循環來解釋，通過呼吸或消化道進入人體的變應原使淋巴細胞致敏，對位於皮膚中的也是如此。
幾種皮膚測試現在已經用於檢測個體對於接觸性變應原及呼吸和食物變應原的敏化狀態。
其中，「針刺試驗(Prick Test)」已被特別熟知，所述試驗涉及所有能夠引起速髮型對於食物或呼吸變應原的皮膚反應的變應原。在這種試驗中，一種包含變應原的溶液沉積到皮膚上，然後使溶液通過針頭在皮膚表面扎針的方法使所述變應原與免疫元素接觸。針刺試驗的結果在真皮與變應原接觸後半小時後讀取。
換言之，如已經提及的那樣，這種試驗使檢測一種速髮型反應成為可能，所述反應通常是免疫球蛋白E依賴性的，也就是要利用E型免疫球蛋白的反應性。通過陽性對照組與陰性對照組比較來讀數，例如組織胺，以及利用生理鹽水或溶劑來稀釋變應原。針刺試驗的缺點是，首先，實際上針頭在皮膚上扎孔時會產生疼痛感，其次，特別是這種試驗僅僅反映速髮型反應。
現在，看來一定數量的變應性反應在幾小時至幾天的時間內以延遲或半延遲的方式發生。而且已注意到皮膚與變應原簡單接觸會引起全身反應的現象。因此可以由此推測變應原通過皮膚擴散，以與其引起延遲反應一樣來引起速髮型反應。
基於這種觀察，已建議將變應原沉積到打算要與皮膚長時間保持接觸的載體上，這樣使變應原進入皮膚並由此引起皮膚反應。已經開發出兩種主要類型的試驗且這兩種類型的試驗冠名以類屬性術語「貼片試驗」。
第一種公知的貼片為以FINN CHAMBERS為商標的產品。它包括有粘性載體，其上結合有直徑約為一釐米的小型金屬杯形器(cupule)。這些杯形器的深度為2到3毫米，這些杯形器接收在與杯形器相獨立的纖維素載體上沉積的已經過稀釋的變應原，這種混合物是由天然產品或變應原的混懸液即時製備的。纖維素載體放置在杯形器的底部，然後將杯形器貼到患者的皮膚上。試驗結果在48小時後讀取，在拿掉這些物品後，清洗皮膚並等待一段較短時間，大約為半個小時，以使杯形器邊緣對皮膚的壓力或粘合劑造成的具體局部現象消失。陽性反應包括在接觸點出現的紅斑，浮腫及斑疹。將其與陰性對照物(僅僅用水浸溼的纖維素載體)所引起的結果相比較。通常容易作出解釋，但反應卻很難精確計量。FINN CHAMBERS用於對無論接觸性變應原或其它變應原等各種類型的變應原進行試驗。具體地，即時製備的變應原/纖維素混合物可以包含例如食物以便尋找食物變態反應，也可以包含花粉以便尋找呼吸變態反應，或者包含染料或金屬以便尋找接觸變態反應。
雖然這種方法使利用無數種類的變應原成為可能，但它也有難於使用的缺點。特別是，由於一些情況可能出現一定數量的錯誤，例如●纖維素載體被置於適當位置後發生了移動；●數量太大的變應原混合物汙染了鄰近腔；●變應原的濃度太低而無法引起過敏反應；●由於所使用變應原的數量是可變的而不允許試驗被標準化。
此外，如果試驗用來檢測多種變應原，在解釋時有發生混亂的危險，這是由於以下事實所使用的變應原無法在粘性載體上精確定位。另外特別是，這種類型的試驗需要新鮮的或處於混懸液中的變應原，並且在試驗施加於皮膚之前，變應原必須即時溶解或分散於溶劑中。
總之，所需的所有操作使這種試驗具有隨機性，且將這種試驗限制用於擁有經過訓練的人員的專業部門內。因此，這種類型的試驗在常規使用中受到特別限制，特別限制於醫院。
按照類似於前面描述的FINN CHAMBERS的原理可製備稱為LEUKOTEST的貼片，其區別在於PVC腔室是被包含在粘性載體內的而不是與粘性載體相結合的，且PVC腔室包含不可移動的纖維素，但所述纖維素仍保持與杯形器相連接。
如上所述，使用現成的變應原即時準備試驗，所述變應原是新鮮的或在混懸液中。這比使用FINN CHAMBERS更容易，但它包括許多操作失誤的風險，因此要注意下列情況●缺乏對引進每個腔室內的變應原數量的控制；●缺乏用於塑料載體的變應原的屬性的指示；●並需要具有適合沉積到纖維型載體上的形式的變應原。
第二種公知類型的貼片為以TRUE TEST為商標的產品，在文獻US-A-4836217中有對其所進行的更詳細描述。TRUE TEST取消了引入變應原的金屬杯形器，以膠凝替代金屬杯形器，膠凝體被直接施用於膠粘帶上。僅包括接觸性變應原的變應原可以以不同的形態引入膠凝體中。這樣，如果變應原可溶解於包含在膠凝體中的溶劑中，那麼變應原就直接引入膠凝體中。另一方面，如果變應原是不溶的，就有必要將其儘可能均勻地直接分散在膠凝體中。這種類型貼片的主要缺點是，它需要能夠與變應原發生作用的纖維素載體或膠凝體，而且也沒有提供使有機來源的變應原保持其最初的致反應(reactogenic stateof origm)狀態的保障。
更具體地應用於變應原的情況，本發明提出要解決的第一個問題是提供一種貼片，所述貼片可以檢測所有變應原，另外還要保障使有機變應原保持在其致反應狀態。
本發明提出要解決的第二個問題是開發一種現成使用的貼片，也就是一種不需要即時製備變應原的貼片。
本發明提出要解決的第三個問題是提供一種貼片，所述貼片能夠容納且當其與皮膚接觸時可傳送給定數量的變應原，而且所述給定數量值對各個貼片是保持恆定的，這一點特別確保了試驗的可靠性和可重複性。
為了實現上述目的，本發明提供了一種貼片，其特徵在於具有靜電特性的載體形式，所述載體的周邊塗覆有粘性材料，載體的全部或部分非粘性表面直接覆蓋有至少一種微粒形式的生物活性物質，所述微粒由於靜力的作用而保持與載體非粘性表面相接觸。
在一個優選實施例中，生物活性物質為變應原的形式。
本發明的貼片因此可使用提純態或經轉化的微粒形態的變應原，這樣可應用於所有的變應原，而不論變應原在原始狀態下的黏稠度及其形態如何。而且純的、天然的、全部或分餾形式的變應原的使用，也就是保持在它們最初的致反應基因狀態，而不需附加任何膠凝體、溶劑或載體，不僅可以提供具有下述性能的貼片所述貼片不僅沒有改變變應原的保存狀態，而且除了在其使用之前對皮膚的準備工作之外就可以現成使用。
此外，在一優秀具體實施方案中，載體具有變應原標記部件，這樣就可使使用者在將其應用於皮膚或將貼片移開期間避免任何失誤。所述標記部件可以是在載體的背面列印標記的形式，當將貼片移去後在皮膚上會留下暫時性的圖案，所述部件或者以設置在載體的粘性部分上的自粘性片的形式出現，當將貼片移去時所述自粘性片會與載體分離開。
處於原始狀態的變應原的形態有三種可能的假設。在第一種假設中，天然的變應原呈粉末形態，也就是說，已經是單獨微粒的形態，這樣就無需轉換其形態(例如小麥粉)，除了有時可能需要減小微粒的尺寸。
在第二種假設中，變應原處於不同程度大小的固體形態。這種情況下，有必要將其縮小至獨立微粒，任選在轉化之後確保其不變性的情況下進行保存。例如，對落花生的食物變態反應情況中的花生就需要進行所述縮小處理。
在第三種假設中，天然變應原處於液態形式。例如乳也涉及一些食物變態反應就屬於這種處於液態的情況，在這種情況下必須將它們凍以獲得粉末形態。在一定情況下，需要僅使用試驗變應原中經過提純部分中的一部分。屬於這種情況的有例如雞蛋中清蛋白或者乳中的蛋白質部分，或者甚至僅從乳中提取的抗乳血清中的蛋白質。
在液態變應原的情況下，可以利用例如凍幹法(冷凍並在真空下升華)或者加熱及噴霧等公知技術獲得它們的粉末形態，關於這些技術的選擇，特別是微粉化程度，就留給本領域技術人員來作為所考慮變應原的物理化學特性的函數來進行評估選擇。
為了確保在其包裝中貼片的保存，特別是為了避免變應原在周圍空氣中發生改變微粒需要經過特殊處理，例如低壓凍幹法，加熱殺菌法，或者電離法，以及更具體地為本領域技術人員所公知的任何處理方法。無論包含哪種生物活性物質，貼片的製備和/或保存均是處於真空狀態下，在與載體相對的位置設置一個可剝離的且在將貼片用於皮膚之前要將其移去的標籤。
本發明的一個實質性特點是本發明的貼片包括具有靜電特性的載體。
在說明書的其它部分以及在權利要求書中，術語「靜電載體」指任何由能夠聚集並保存靜電荷以由此保持力的材料，通過採用特別是摩擦、加熱或者電離、或者其它為本領域技術人員所公知的任何技術而製成的載體。出現在載體表面的一側或另一側的電荷可以是正電荷或者負電荷，是正電荷還是負電荷取決於組成所述載體的材料以及使電荷出現所採用的方式。在所有的情況下，分布在載體表面上的正或負電荷在導體或非導體材料上產生吸引力；在恰當的情況下，在呈單獨或聚集微粒形態的變應原上產生吸引力。也可如此發生以便於是所述微粒被電離，然後在這些微粒與載體之間產生相同類型的靜電吸引力。因此，本發明所述貼片的一個優點在於允許精確測量變應原或更廣義的生物活性物質的表面質量(surface mass)，其中變應原或生物活性物質沉積且其表面質量在各批貼片之間保持恆定，其表面質量是下述因素的函數—首先，載體的選擇及其在其表面存儲電荷的能力；—變應原微粒的類型；—以及其次，在變應原在載體的非粘性表面上沉積階段期間微粒的流動。
實際上，可採用具有所需要的靜電特性的任何材料來作載體。特別是，載體由玻璃或者選自纖維素塑料(CA，CP)、聚氯乙稀(PVC)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯(polyacrylics)，特別是聚(甲基丙烯酸甲酯)(PMMA)、含氟聚合物(例如PTFE)等中的一種聚合體組成。此目錄絕不具有限制性。如果想要特別低變應原載體，則玻璃是優秀的。
因此，載體可以是剛性的或柔性的，可以是或可以不是親水的，可以是或可以不是半透明的，均取決於其組成的材料。在使用玻璃時，可通過將一片塑料結合到玻璃上而將載體製成不碎裂的。
在一個優選具體實施方案中，選擇了一種透明載體，這樣就可能在適當的情況下不必要移去貼片而直接觀察反應現象。
為了進一步改進對炎性反應的檢測，貼片在其粘性或非粘性表面上具有一個對由陽性反應引起的局部炎性反應期間皮膚的物理化學反應敏感的部件。所述部件例如可以是對局部在pH值方面所發生的變化敏感的顏色指示器。在這種情況下，這樣，就可設想一種便於解釋的獨立於局部反應的讀數系統。
為了恢復在載體表面的靜電力以便加強生物活性物質特別是變應原與載體之間在施用之前的結合，載體的背面覆蓋有可剝離的且在施用期間將其移去的標籤，所述標籤也可在黑暗中保存變應原。
由貼片限定區域內的皮膚分泌的汗液保證了貯藏在貼片中的變應原分子的輸送，與此相接觸的變應原分子負荷於汗液中。因此貼片的效果及其敏感度很大程度上以液體狀態的產生為條件，如果變應原處於溶液或懸浮液中，這樣就有助於其通過毛孔。因此，貼片一定要具有可以解決下面兩個問題的特點●防止汗液的蒸發，
●以及允許汗液的循環。
關於汗液蒸發的問題是這樣解決的首先，利用載體的不滲透性，其次，利用外圍粘性區域，所述外圍粘性區域形成密封連接且在皮膚和載體之間限定出一個密閉空間。
為了解決汗液循環的問題，有益的載體具有一個處於沒有塗覆粘性材料的區域內的凹穴(depression)以形成一空洞(hollow)。通過藉助熱或冷的條件來獲得凹穴，這就可將變應原沉積在空洞中，這樣所述變應原不壓迫皮膚也不改變相關區域的血液循環。凹穴也使變應原不與在貼片施用於皮膚之前將其移去的可剝離層相接觸成為可能。有益的是由空洞限定的區域維持在真空狀態。
換言之，以原始或改變的方式通過靜電力保持在載體上的變應原完全釋放進入所獲得的腔(cavity)中，且其與汗液相混合，所述汗液由於局部熱量的增加以及由此繼發的血液流動的增加而更加易於分泌出來。因此促進了變應原通過皮膚毛孔的滲透，血液流速增加也允許免疫活性成分的進入。在塑料載體被移去之後進行讀數，且可觀察充足的時間，以便於消除由粘性材料所引起的非特異性紅斑。
為了可以引發皮膚反應，微粒以取決於相關變應原的數量分布於載體上。如上所述，貼片的優點在於其提供有一個包含有給定數量變應原的部件，這使得貼片標準化成為可能。以乳為例子，微粒以0.001到1g/cm2之間的數量分布於載體上。
本發明也涉及一種包括多個上述貼片的貼片包，貼片包中的每個貼片包含有數量逐漸增加的變應原，這樣使在脫敏治療過程中增加變應原劑量成為可能。
採用在乾燥狀態下將微粒形態的變應原直接附著到載體上的方式還具有下面的優點首先，通過僅僅將所涉及的分子帶入以與皮膚相接觸，就可能避免可能干擾變應性過程或由此扭曲診斷的任何化學作用或任何反應。而且，微粒形態變應原的採用使將變應原保藏於適當的包裝內成為可能，這樣就不再需要進行即時製備。最後，微粒與皮膚所分泌汗液的接觸使之有可能獲得非常濃的溶液，以促進分子快速滲透通過表皮。
當然，本發明的貼片特別能篩選關於一給定變應原正如即將給出的幾種變應原的敏化狀態。在後面的例子中，載體具有多個有靜電特性，有益的是呈空洞形式的區域，其中各個區域覆蓋有不同的變應原，各個靜電區域被非靜電區域所分隔。
按照另外一個具體實施方式
，貼片在同一個區域內具有用於篩選患者相對於一系列給定變應原的敏化狀態的幾種變應原的混合物。這可能是有益的，例如，用於確定患者相對於一系列食物變應原的敏化狀態。在幾種變應原組合的情況下，或是排列在分隔的靜電載體上，或者混合在相同的載體上，變應原的選擇取決於與來源於文獻的數據相一致的大多數共同病變所涉及的變應原目錄。這種選擇這樣作出以便於形成適用於各個主要年齡段的各種病理學背景的特定組合。而且這些變應原的目錄能夠作為飲食習慣及貼片散發地的具體環境條件的函數而改變。在一定情況下，可以從衛生當局所發布的任何目錄中選擇變應原。
本發明也涉及上述貼片的使用，用於篩選患者相對於一變應原的敏化狀態，包括將貼片應用於皮膚上，然後在將其去掉之後，檢查是否出現皮膚反應。
在一個優選具體實施方案中，貼片被用於篩選患者對於食物變應原的敏化狀態，所述食物變應原含於選自乳，雞蛋，小麥及花生中選取的產品中。
在另外一具體實施方案中，貼片被用於篩選患者對於含於乳膠中的變應原的敏感性。
而且本發明貼片也用於患者對於一種或多種給定變應原的脫敏。在這種情況下，貼片施用於皮膚上給定時間，所述時間取決於被傳輸的變應原的數量。可以使用包含增加數量的貼片組。可以有益地預見貼片程式化地釋放變應原。
本發明貼片可以用於對接觸性變態反應的診斷，通過引入任何接觸變應原與皮膚接觸，而無需另外的膠凝體、吸取物(blotter)或溶劑。
為了獲得治療的(醫藥產品)或預防的(疫苗)或化妝的目的，其也可以用於處理任何生物活性物質。
本發明及由其產生的優點將清楚地通過隨後的以附圖為支持的實施例而得到顯示。
附

圖1是本發明一優選實施例的圖示。
附圖2是附圖1的斷面視圖。
實施例1圖1表示以附圖標記(1)表示的本發明貼片。按照第一個特徵，該貼片包含由醋酸纖維(2)製成的載體，塗覆有粘性材料的邊緣(3)。載體(2)背部自身還覆蓋有可剝離的標籤(4)。如該圖所示，變應原(5)以粉狀散布於醋酸纖維載體(2)的整個非粘性區域(6)上。
如圖2所示，醋酸纖維載體(2)在整個非粘性表面上具有一個單獨的微粒分布於其中的凹穴(7)。而且貼片具有可剝離的且面向醋酸載體和絕緣塗層(4)組合體的第二標籤(8)。當然這層可被剝離的薄片在貼片施用於所考慮區域時是要被移去的。
實施例2在此實施例中，將本發明的貼片效果與已有技術中的FINN CHAMBERS型貼片進行比較。
1.裝置與方法本發明貼片施用於15名兒童的背部。這些兒童顯現出可疑為對乳蛋白質(CMA)的變態反應跡象。
貼片具有兩個區域第一上部區域包括粘性載體，其上沉積有一片粉狀脫脂乳而不含任何其它與本發明中所述貼片相關的元素；下部區域包含粘性載體，其上沉積有一杯形器，杯形器的底部充滿有經稀釋的被纖維素載體上FINNCHAMBERS型貼片吸收的脫脂乳。
在移開粘接劑之後的48小時後讀取數據。紅斑或斑點反應的出現顯示為陽性。
2.結果使用雙重貼片對15名年齡為5周到11歲零3/12歲的兒童進行了對乳的變態反應的調查研究。在施用貼片48小時後對獲得的反應進行了評價。
所有兒童顯現出具有對RGO乳蛋白質可能的變態反應的臨床表現，耐傳統治療手段的(9例)，溼疹(6例)，嘔吐(2例)，慢性腹部疼痛(2例)，慢性腹瀉(3例)，未經解釋而顯示的疼痛(4例)，不舒服的常規感覺(1例)。
兩次試驗有3例呈陽性，有10例呈陰性，在一例中FINN CHAMBERS呈陽性而貼片呈陰性，相反地，在另一例中FINN CHAMBERS呈陰性而貼片呈陽性。
3.結論在這些被懷疑對乳蛋白質有食物變態反應的15名兒童中，本發明的貼片被證明與FINN CHAMBERS方法一樣靈敏。有兩例的結果是相矛盾的，不可能區別這兩種方法。
權利要求
1.一種貼片，其特徵在於其具有靜電特性的載體形式，所述載體的周邊塗覆有粘性材料，載體的全部或部分非粘性表面被直接覆蓋有至少一種微粒形態的生物活性物質，所述微粒由於靜電力的作用而保持與載體非粘性表面相接觸。
2.如權利要求1所述貼片，其特徵在於還具有與載體相對設置的可被剝離的標籤，要在將貼片施用到皮膚之前將所述標籤移去。
3.如前述任一權利要求所述貼片，其特徵在於載體由玻璃或者聚合物構成，其中所述聚合物選自纖維素塑料(CA，CP)，聚氯乙稀(PVC)，聚丙烯，聚苯乙烯，聚碳酸酯及聚丙烯酸酯。
4.如前述任一權利要求所述貼片，其特徵在於載體的背面覆蓋有可剝離的標籤。
5.如前述任一權利要求所述貼片，其特徵在於載體在沒有塗覆粘性材料的區域內具有形成空洞的凹穴。
6.如前述任一權利要求所述貼片，其特徵在於活性物質為變應原的形式。
7.如權利要求6所述貼片，其特徵在於所述變應原經凍幹法、加熱殺菌法或者電離處理。
8.如權利要求6或7所述貼片，其特徵在於變應原為經過提純的變應原部分的形式。
9.如權利要求6至8之一所述貼片，其特徵在於載體具有變應原標記部件，所述部件是在載體的背面列印標記的形式，當將貼片移去後在皮膚的表面上會留下暫時性的圖案，所述部件或者以設置在載體的粘性部分上的自粘性片的形式出現，當將貼片移去時所述自粘性片會與載體分離開。
10.如權利要求6至9之一所述貼片，其特徵在於在粘性區域或非粘性區域內具有對在由陽性反應引起的局部炎性反應階段皮膚所發生的物理化學反應敏感的部件。
11.如權利要求10所述貼片，其特徵在於所述部件為對局部在pH值方面的變化敏感的顏色指示器的形式。
12.如權利要求6至11之一所述貼片，其特徵在於載體具有幾個有靜電特性的區域，其中各個區域中覆蓋有不同的變應原，各個靜電區域被非靜電區域所分隔。
13.包含有多個如權利要求1至12中任一項所述貼片的貼片包，其特徵在於每個貼片包含有數量增加的變應原。
全文摘要
一種具有特徵為具有靜電特性的載體形式的貼片，載體周圍塗覆粘性材料，載體的全部或部分非粘性表面被直接覆蓋有至少一種微粒形式的生物活性物質，所述微粒由於靜電力的作用而保持與載體非粘性表面相接觸。
文檔編號A61K49/00GK1496239SQ02806323
公開日2004年5月12日 申請日期2002年3月6日 優先權日2001年3月13日
發明者C·杜邦, B·杜邦, P·－Y·瓦尼羅姆, S·本哈穆, P·－H·本哈穆, , C 杜邦, け竟 , ね唚崧弈 申請人:Dbv技術公司