一種穩定的含菠蘿蛋白酶的凝膠的製作方法
2023-05-01 21:17:11 1
一種穩定的含菠蘿蛋白酶的凝膠的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種穩定的含菠蘿蛋白酶的凝膠，含有作為活性成分的菠蘿蛋白酶和藥學上可接受的載體PLGA-PEG-PLGA，具有穩定性良好，使用方便，作用迅速的特點，同時具有抑菌作用，用於蛋白變性修復、抗炎、止痛、增加抗生素效果，屬於醫藥【技術領域】。
【專利說明】一種穩定的含菠蘿蛋白酶的凝膠
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種的含菠蘿蛋白酶的凝膠，具有在良好的穩定性，使用方便，作用迅速的特點，同時具有抑菌作用，用於蛋白變性修復、抗炎、止痛、增加抗生素效果，屬於醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]菠蘿蛋白酶(BiOmelain，簡稱菠蘿酶，亦稱為鳳梨酶或鳳梨酵素)是從菠蘿果莖、葉、皮提取出來，經精製、提純、濃縮、酶固定化、冷凍乾燥而得到的一種純天然植物蛋白酶。其外觀為淺灰色粉末狀，分子量為33000，等電點為9.55，最適pH值:6~8。溶於水，不溶於乙醇、氯仿和乙醚。屬糖蛋白。主要作用原理:使多肽類水解為低分子量的肽類。尚有水解醯胺基鍵和酯類的作用。主要的醫藥用途包括可抑制腫瘤細胞的生長；對心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心臟病發作和中風，緩解心絞痛症狀，緩和動脈收縮，加速纖維蛋白原的分解。能選擇性地除皮，使新皮移植得以儘早進行。動物實驗證明，菠蘿蛋白酶對鄰近的正常皮膚無不良影響。菠蘿蛋白酶在各種組織中能有效地治療炎症和水腫(包括血栓靜脈炎、骨骼肌損傷、血腫、口腔炎、糖尿病人潰瘍及運動損傷)。將菠蘿蛋白酶與各種抗生素(如四環素，阿莫西林等)聯用，能提高其療效。相關研究表明，它能促進抗生素在感染部位的傳輸，從而減少抗生素的用藥量。據推斷，對於抗癌藥物，也有類似的作用。此外，菠蘿蛋白酶能促進營養物質的吸收。另外，菠蘿蛋白酶還具有嫩膚、美白去斑的優異功效。基本作用原理:菠蘿蛋白酶可作用於人體皮膚上的老化角質層，促使其退化、分解、去除，促進皮膚新陳代謝，減少因日曬引起的皮膚色深現象。使皮膚保養呈現良好白嫩狀態。
[0003]在乾燥或低溼的環境下，菠蘿蛋白酶的失活發生在保存的前期，到後期趨於平穩，這是由於保存初期酶的溼度大於環境溼度，較高的水分賦予酶結構一定的柔性，酶活性中心的構象易發生變化。當酶與乾燥環境達到平衡後，酶的水分減少，酶活趨於穩定。同時，在高溼環境下，酶活一直下降，其原因除了高水分增加了酶結構的柔性外，更重要的是由於蛋白酶的自水解作用。
[0004]但是由於藥用菠蘿蛋白酶原料的對高溼和溫度敏感，在水溶液或水分較多的狀態下很快降解失活，使其提供的劑型僅限於膠囊、粉劑等，需要臨用前用溶劑調製，使用不便。
[0005]水凝膠是一種能夠在水中溶脹並保持大量水而又並不溶解的親水性聚合物，通過共價鍵、氫鍵或範德華力等作用相互交聯構成三維網狀結構。由於有大量的水分充斥於水凝膠聚合物網絡中，因此整個材料具有了流體的性質，這與機體組織(含有大量水溶液)非常相似，溼潤、柔軟的表面還有與組織的親和力大大減少了材料對機體組織的刺激，使得水凝膠的生物相容性比其他材料要好。另外，高分子水凝膠的網狀結構還可以保護藥物不被酶解或被胃酸破壞。根據水凝膠對外界刺激的響應情況可將其分為兩大類:傳統水凝膠(普通水凝膠)和智能水凝膠(環境敏感水凝膠)。前者對環境的變化不敏感，而後者對於外界微小的物理化學刺激，如溫度、電場、磁場、光、pH、離子強度和壓力等能夠感知、處理並產生應答，表現為體積、形態等的顯著變化。
[0006]溫敏水凝膠是一類響應溫度變化的智能材料，由親水性聚合物形成的網絡結構，當溫度超過低臨界溶液溫度(LCST)時，體系發生溶液-凝膠轉變；當溫度超過高臨界溶液溫度(UCST)時，體系發生凝膠-溶液轉變；反相溫敏凝膠材料的特徵是，低溫下為液態，高溫時轉變成固態或半固態的凝膠。其優越性能正是在於其相變的特性。在體外是液態，用於生物體或體表，在局部形成一定機械強度的凝膠，控制藥物緩慢釋放。由於在體外為不定型的液體，在給藥後可以隨給藥部位不同形成各種形狀，特別是用於局部的體表使用時，達到無死角給藥，而後形成均勻的附著凝膠層，更好的發揮藥效，並有一定的屏蔽作用。
[0007]由於菠蘿蛋白酶具有局部用藥的潛質，為得到一種菠蘿蛋白酶的局部用藥，本發明進行了有關研究，發現使用水凝膠製劑可以解決菠蘿蛋白酶在液體或半固體狀態下的穩定性問題，為此本發明提供了一種穩定性良好的，使用方便的菠蘿蛋白酶溫敏性凝膠製劑。無需調劑，可直接塗抹於病患部位，作用迅速。
【發明內容】
[0008]本發明所提供一種含菠蘿蛋白酶的水凝膠製劑，含有作為活性成分的菠蘿蛋白酶和藥學上可接受的載體；
[0009]本發明的水凝膠製劑，其中所述菠蘿蛋白酶為經過提純步驟獲得的精製蛋白水解酶。其水解酶活力為每克15-18萬單位；蛋白含量為16-20%。
[0010]其中所述精製蛋白水解酶的製備方法如下:
[0011]1.取一定量的外購菠蘿蛋白酶，加入15-20倍的pH6.0-7.2,0.02-0.05M的磷酸緩衝液浸提，4-10°C條件下磁力攪拌2-4小時，4000-10000轉/分離心10分鐘，收集上清液；或者用濾過法除去浸提液中的不溶性雜質；
[0012]2.收集的液體用45%飽和度的硫酸銨進行沉澱，沉澱後，離心去掉上清液；
`[0013]3.沉澱物再用蒸餾水透析脫鹽(1:100)，脫去硫酸銨，得濃縮液；
[0014]4.進一步進行冷凍乾燥得到精製菠蘿蛋白酶；或者濃縮液用冷丙酮沉澱，用冷凍離心機離心後，得到沉澱物，經自然低溫乾燥可得精製菠蘿蛋白酶；
[0015]本發明的水凝膠製劑，其中所述藥學上可接受的載體為LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例進行聚合反應得到的PLGA-PEG-PLGA，該載體在25°C下20%的共聚物水溶液粘度為6.9mm2/s。與50%的甘油溶液具有相同粘度，其在濃度為25%時發生膠凝的溫度為32°C，即在25°C下，可自由流動，在32°C條件下，體系發生溶液-凝膠轉變，本發明經過篩選發現該載體特別適合本發明的菠蘿蛋白酶製劑。
[0016]本發明所述PLGA-PEG-PLGA是一種三嵌段聚合物，由混旋丙交脂、乙交酯聚乙二醇1500經過聚合反應聚合而成。
[0017]本發明優選使用LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例進行聚合反應得到的PLGA-PEG-PLGA三嵌段聚合物，本發明的PLGA-PEG-PLGA三嵌段聚合物其製備方法如下:
[0018]1)稱量混旋丙交脂6份、乙交酯1份、聚乙二醇15003份；
[0019]2)將混旋丙交脂、乙交酯置於40°C烘箱中揮水2h，同時將聚乙二醇1500放於140°C烘箱中揮水2h ；
[0020]3)將揮水後的混旋丙交脂、乙交酯和聚乙二醇1500混與同一西林瓶中並加入催化劑異羊酸亞錫(0.1%，w/w)，真空封蓋後壓蓋；
[0021]4)將封蓋後的西林瓶放於140°C烘箱中使其反應12h，完畢後趁熱倒出，自然冷卻至室溫,4°C純化水溶解，全溶後加熱至70°C產生沉澱棄去水層，再加4°C純化水，重複操作3次，除去反應的單體化合物和低分子水溶性共聚物。
[0022]本發明的水凝膠製劑，製備方法如下:
[0023]取精製菠蘿蛋白酶適量，用水溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的水溶液中，在低於20°C條件下，攪拌溶解，補水到全量即得。
[0024]其中，精製菠蘿蛋白酶的用量為:10-30%，優選20%。
[0025]PLGA-PEG-PLGA 的用量為:10-30%，優選 20% 。
[0026]其餘為水。
[0027]溶解後，分裝，得到可商用的製劑。
[0028]由於PEG嵌段對蛋白酶的親和吸附作用，使其保持相對穩定的空間結構，增加了在高水分條件下的穩定性。
[0029]本發明的凝膠製劑，根據需要還可加入激動劑，所述激動劑選自:半胱氨酸、硫酸鎂、氧化鋅，其加入量根據各自的特點，加入適當的有效量即可。
[0030]其中半胱氨酸能夠啟動激動程序，二價的鎂離子和鋅離子，可以調高蛋白酶的活力效應。同時在作用於有滲出的炎症時，可以吸收局部的滲出液，有利於病部快速修復。
[0031]為此，本發明的水凝膠製劑，根據需要含有菠蘿蛋白酶，藥學上可接受的載體以及激動劑。
[0032]其中，精製菠蘿蛋白酶的用量為:10-30%，優選20%。
[0033]PLGA-PEG-PLGA 的用量為:10-30%，優選 20%。
[0034]激動劑的用量為:0.1-5%，
[0035]其餘為水。
[0036]含有菠蘿蛋白酶，藥學上可接受的載體以及激動劑的本發明水凝膠製劑其製備方法如下:
[0037]取精製菠蘿蛋白酶適量，用水溶解，加入激動劑溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的水溶液中，在低於20°C條件下，攪拌溶解，補水到全量即得。
[0038]本發明之所以選擇上述技術特徵的PLGA-PEG-PLGA是經過篩選獲得的，發明人經過篩選比較發現，只有上述技術特徵的PLGA-PEG-PLGA最適合本發明，篩選過程如下:
[0039]在有限的範圍內，採用不同的LA/GA比例以及不同的PEG投料量均可得到具備溫敏性質的水凝膠，所製備的水凝膠為淺黃色至無色的粘性膠體。在反應體系中，增加LA投料比例，所得材料的相變溫度降低；增加PEG的投料量，材料相變溫度降低；在1000~1500的範圍內，隨著PEG分子量增加，材料的相變溫度升高。按LA:GA:PEG1500=6:1:3的比例，在反應條件下可得到相變溫度32°C (20%水溶液)的水凝膠，產率約30% (以無水物計)。
[0040]本發明經過篩選剔除的水凝膠基質包括:卡波姆，羧甲基纖維素鈉，泊洛沙姆407，殼聚糖-甘油這些基質中，卡波姆和羧甲基纖維素鈉與菠蘿蛋白酶形成水凝膠後為半固體，不具備智能相變的特點，塗展性及與皮膚的附著力較差，且在後期穩定性考察過程中酶活力下降嚴重。以殼聚糖-甘油體系製備的溫敏性凝膠，在後期穩定性發現菠蘿蛋白酶酶活力下降顯著。[0041]泊洛沙姆407選取濃度為20%、30%、40%的濃度進行考察，在濃度大於20%時，有溫敏性凝膠的特性，就濃度越高，溶液粘度越大，膠凝溫度越低，從在20%濃度時不具備膠凝特性，到30%時膠凝溫度為約20°C，40%時的膠凝溫度約15°C ;即使在添加了鹽類及PEG等調整也未能得到理想膠凝溫度的基質，不符合我們作為外用製劑，，故未選用。最終尋找到了 LA:GA:PEG 1500=6:1:3製備的PLGA-PEG-PLGA作為本發明的凝膠基質。具有合適的相變溫度，即相變溫度為32°C的要求，以適合菠蘿蛋白酶。該凝膠基質在體外為不定型的液體，可以隨給藥部位不同形成各種形狀，特別用於局部的體表使用時，達到無死角給藥，給藥感受體溫作用後，形成均勻的附著凝膠層，更好的發揮藥效，並有一定的屏蔽作用。
[0042]本發明名詞術語的解釋:
[0043]菠蘿蛋白酶:是從菠蘿果莖、葉、皮提取出來，經精製、提純、濃縮、酶固定化、冷凍乾燥而得到的一種純天然植物蛋白酶。 [0044]酶活力:一定條件下(溫度，pH，底物濃度等)，酶催化某一化學反應的能力。其大小可用反應速度來表示。
[0045]精製蛋白水解酶:菠蘿蛋白酶經進一步水解精製得到的酶和蛋白含量更高的產品。
[0046]PLGA-PEG-PLGA:由混旋丙交脂，乙交酯，聚乙二醇1500經過聚合反應聚合而成的三嵌段聚合物。
[0047]PEG:聚乙二醇
[0048]LA:丙交酯，包括混旋丙交脂，D型或L型丙交酯。
[0049]GA:乙交酯
[0050]混旋丙交脂:D，L-3, 6- 二甲基-2，5_ 二酮_1，4_ 二氧雜環己烷，化學式:C6H804，外觀:無色透明片狀或針狀晶體純度(％)≥99.5熔點(°C):124~128含水量(％) 0.4重金屬含量(ppm): ( 5游離酸(mgNaOH/kg): ( 1灰份(％): ( 0.05,物理化學性質:易水解，易聚合，應低溫保存。
[0051]乙交酯:是白色片狀晶體，熔點為84°C，溶於乙酸乙酯。沸點330°C。通常經有兩種途徑製備得到，，第一種途徑是乙醇酸分子間相互反應酯化脫水生成較低分子量的聚乙醇酸，聚乙醇酸高溫裂解環化生成乙交酯。第二種途徑是利用滷代乙酸的金屬鹽如鉀脫除金屬滷化物生成乙交酯。乙交酯作為聚合單體，既可以均聚得到聚乙交酯，又可以和其他環狀單體開環共聚，得到無規共聚物或嵌段共聚物，
[0052]聚乙二醇1500:為環氧乙烷和水縮聚而成的混合物，分子式以H0(CH2CH20)nH表示，其中η代表氧乙烯基的平均數。性狀為白色蠟狀固體薄片或顆粒狀粉末；略有特臭。本品在水或乙醇中易溶，在乙醚中不溶。凝點本品的凝點(附錄VI D)為41~46°C。黏度取本品25.0g，置100ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，用毛細管內徑為0.8mm的平氏黏度計，依法測定(附錄VI G第一法)，在40°C時的運動黏度為3.0~4.0mm〈2>/S。
[0053]激動劑:影響酶的催化活性，能加速酶的催化作用的物質。
[0054]以下通過實驗數據進一步說明本發明的有益效果。
[0055]1、對創面的壞死組織去除實驗:
[0056]在大鼠燒傷試驗中，局部應用本發明的水凝膠製劑平均1.9天能完全清除創面，而對照組中膠原酶需要平均10.6天才有相似的效果。同時顯示用本發明的水凝膠製劑進行脫痂的，發生繼發感染為10%以下。
[0057]顯示使用本發明的水凝膠製劑治療燒傷，不會形成癍痕或者癍痕很小。
[0058]2、菠蘿蛋白酶修復軟組織的損傷
[0059]本發明的水凝膠製劑用於拳擊手的臉部瘀傷、眼眶、嘴唇、胸部和臂部等部位的血腫，每天給藥四次，連續4天或直至瘀傷消失，對照組的拳擊手給予安慰劑，在服用本發明的水凝膠製劑的拳擊手中58名瘀傷4天內完全消失，其餘的16名8-10天也完全恢復了。對照組中只有10人在4天內完全恢復，其餘的需要7-14天才恢復。
[0060]3、抗炎作用
[0061]16個口腔炎症病人一天用本發明的水凝膠製劑4次，3天後75%的病人只有輕微的炎症或炎症消失。而給予安慰劑的一組只有19%。
[0062]4、增加抗生素的抑菌效果
[0063]本發明的水凝膠製劑對諾氟沙星軟膏、金黴素軟膏、莫匹羅星乳膏、夫西地酸乳膏、紅黴素軟膏、新黴素軟膏均有協同作用。
[0064]5、淡化黃褐斑
[0065]對81例兩側面部斑塊面積大致相同的門診黃褐斑患者隨機分成2組，治療組在左面部外敷本發明的水凝膠製劑，每次噴塗後塗抹均勻，2次/d。對照組在右面部外用絲白祛斑軟膏，外塗患處，2次/d，療程12w。結果治療組與對照組的臨床療效相當，但治療組的治癒率和安全性優於對照組。說明本發明的水凝膠製劑治療黃褐斑有確切療效，其臨床治療效果與絲白祛斑軟膏相當，但治癒率和安全性優於絲白祛斑軟膏。
[0066]6、止痛`
[0067]對59名肌骨骼系統有鈍傷的病人進行觀察研究，在4個平行試驗中用本發明的水凝膠製劑可以明顯減輕水腫、靜止狀態疼痛、運動狀態疼痛及觸痛。
[0068]7、穩定性實驗
[0069]對實施例4-7的本發明的水凝膠製劑的穩定性酶活力進行考察，測定方法為FIP法，以藍蛋白為底物，經菠蘿蛋白酶水解後，採用紫外分光光度計測定水解酪氨酸的濃度，計算出酶活力，考察初始值為100%計算一段時間後的酶活保存率。結果見表:
[0070]
【權利要求】
1.一種含菠蘿蛋白酶的水凝膠製劑，含有作為活性成分的菠蘿蛋白酶和藥學上可接受的載體；其中所述菠蘿蛋白酶為經過提純步驟獲得的精製蛋白水解酶。其水解酶活力為每克15-18萬單位；蛋白含量為16-20% ;所述藥學上可接受的載體為PLGA-PEG-PLGA。
2.根據權利要求1的水凝膠製劑，其中所述精製蛋白水解酶的製備方法如下:1)取一定量的外購菠蘿蛋白酶，加入15-20倍的pH6.0-7.2,0.02-0.05M的磷酸緩衝液浸提，4-10°C條件下磁力攪拌2-4小時，4000-10000轉/分離心10分鐘，收集上清液；或者用濾過法除去浸提液中的不溶性雜質；2)收集的液體用45%飽和度的硫酸銨進行沉澱，沉澱後，離心去掉上清液；3)沉澱物再用蒸餾水透析脫鹽(1:100)，脫去硫酸銨，得濃縮液；4)進一步進行冷凍乾燥得到精製菠蘿蛋白酶；或者濃縮液用冷丙酮沉澱，用冷凍離心機離心後，得到沉澱物，經自然低溫乾燥可得精製菠蘿蛋白酶。
3.根據權利要求1的水凝膠製劑，其中所述PLGA-PEG-PLGA在25°C下20%的共聚物水溶液粘度為6.9mm2/s。與50%的甘油溶液具有相同粘度，其在濃度為25%時發生膠凝的溫度為32°C，即在25°C下，可自由流動，在32°C條件下，體系發生溶液-凝膠轉變；所述PLGA-PEG-PLGA是按LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例反應得到，其製備方法如下:1)稱量混旋丙交脂6份 、乙交酯1份、聚乙二醇15003份；2)將混旋丙交脂、乙交酯置於40°C烘箱中揮水2h，同時將聚乙二醇1500放於140°C烘箱中?車水2h ；3)將揮水後的混旋丙交脂、乙交酯和聚乙二醇1500混與同一西林瓶中並加入催化劑異羊酸亞錫(0.1%，w/w)，真空封蓋後壓蓋；4)將封蓋後的西林瓶放於140°C烘箱中使其反應12h，完畢後趁熱倒出，自然冷卻至室溫,4°C純化水溶解，全溶後加熱至70°C產生沉澱棄去水層，再加4°C純化水，重複操作3次，除去反應的單體化合物和低分子水溶性共聚物。
4.根據權利要求1的水凝膠製劑，根據需要還可加入激動劑，所述激動劑選自:半胱氨酸、硫酸鎂、氧化鋅；其中，精製菠蘿蛋白酶的用量為:10-30%，PLGA-PEG-PLGA的用量為:10-30%，激動劑的用量為:0.1-5%，其餘為水。
5.根據權利要求1的水凝膠製劑，其中，精製菠蘿蛋白酶的用量為:20%，PLGA-PEG-PLGA的用量為:20%，激動劑的用量為:0.1_5%，其餘為水。
6.根據權利要求1的水凝膠製劑的製備方法，步驟如下:取精製菠蘿蛋白酶，用水溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的水溶液中，根據需要還可加入激動劑，在低於20°C條件下，攪拌溶解，補水到全量即得。
7.根據權利要求6的製備方法，其中菠蘿蛋白酶的精製方法如下:1)取菠蘿蛋白酶，加入15倍的pH7.2，0.05M的磷酸緩衝液浸提，4_10°C條件下磁力攪拌4小時，10000轉/分離心10分鐘，收集上清液；或者用濾過法除去浸提液中的不溶性雜質；2)收集的液體用45%飽和度的硫酸銨進行沉澱，沉澱後，離心去掉上清液；3)沉澱物再用蒸餾水透析脫鹽(1:100)，脫去硫酸銨，得濃縮液，4)進一步進行冷凍乾燥得到精製菠蘿蛋白酶；或者濃縮液用冷丙酮沉澱，用冷凍離心機離心後，得到沉澱物，經自然低溫乾燥可得精製菠蘿蛋白酶。或1)取菠蘿蛋白酶，加入20倍的pH6.0，0.02M的磷酸緩衝液浸提，4_10°C條件下磁力攪拌2小時，4000轉/分離心10分鐘，收集上清液；或者用濾過法除去浸提液中的不溶性雜質；2)收集的液體用45%飽和度的硫酸銨進行沉澱，沉澱後，離心去掉上清液；3)沉澱物再用蒸餾水透析脫鹽(1:100)，脫去硫酸銨，得濃縮液，4)進一步進行冷凍乾燥得到精製菠蘿蛋白酶；或者濃縮液用冷丙酮沉澱，用冷凍離心機離心後，得到沉澱物，經自然低溫乾燥可得精製菠蘿蛋白酶。
8.根據權利要求6的製備方法，其中PLGA-PEG-PLGA的製備方法如下:1)稱量混旋丙交脂6g、乙交酯lg、聚乙二醇15003g；2)將混旋丙交脂、乙交酯置於40°C烘箱中揮水2h，同時將聚乙二醇1500放於140°C烘箱中?車水2h ；3)將揮水後的混旋丙交脂、乙交酯和聚乙二醇1500混與同一西林瓶中並加入催化劑異羊酸亞錫(0.1%，w/w)，真空封蓋後壓蓋；4)將封蓋後的西林瓶放於140°C烘箱中使其反應12h，完畢後趁熱倒出，自然冷卻至室溫,4°C純化水溶解，全 溶後加熱至70°C產生沉澱棄去水層，再加4 1:純化水，重複操作3次，除去反應的單體化合物和低分子水溶性共聚物。
9.根據權利要求6的製備方法，步驟如下:取精製菠蘿蛋白酶200g，用300ml水溶解，備用；在20-25 V條件下，取PLGA-PEG-PLGA200g,加水400g攪拌溶解；在低於20°C條件下，將精製菠蘿蛋白酶溶液加入到載體基質中，攪拌溶解，並加水定容至1000ml。
10.根據權利要求7的製備方法，步驟如下:取精製菠蘿蛋白酶100g，硫酸鎂lg，用少量水溶解，作為含藥溶液備用；在20-25°C條件下，取PLGA-PEG-PLGA200g，加水400g攪拌溶解；在低於20°C條件下，將含藥溶液加入到載體基質攪拌溶解，加水定容至1000ml ；或取精製菠蘿蛋白酶200g，氧化鋅50g，用300ml水溶解混懸，作為含藥溶液備用；在20-25°C條件下，取PLGA-PEG-PLGA200g，加水400g攪拌溶解；在低於20°C條件下，將含藥溶液加入到載體基質攪拌溶解，加水定容至1000ml ；或取精製菠蘿蛋白酶，半胱氨酸，用水溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的凝膠基質水溶液中，在低於20°C條件下，攪拌溶解，製成含菠蘿蛋白酶20%，半胱氨酸2%的溶液。
【文檔編號】A61P17/02GK103637978SQ201310686915
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月13日 優先權日:2013年12月13日
【發明者】尚麗霞 申請人:北京諾康達醫藥科技有限公司