三並環類間變性淋巴瘤激酶抑制劑的製作方法

2023-04-25 10:41:46 1

本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及三並環類間變性淋巴瘤激酶抑制劑、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，這些化合物的製備方法，含有這些化合物的藥物製劑和藥物組合物，以及該化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體在製備治療和/或預防由間變性淋巴瘤激酶介導的癌症相關疾病的藥物中的應用。

背景技術：

間變性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase，ALK)是受體酪氨酸激酶家族成員，可通過自身磷酸化募集下遊蛋白，進而表達特定的基因，調節細胞代謝和生長。間變性淋巴瘤激酶最早發現於間變性大細胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphoma，ALCL)中，後來發現在非小細胞肺癌(NSCLC)中亦有高表達。ALK在某些ALCL/NSCLC中的異常表達來源於不同的染色體易位。這些染色體易位均可產生相應的融合蛋白。對這些融合基因分析表明，它們都含有ALK基因3』端編碼胞內激酶區的基因序列，而與ALK融合的基因片段均含啟動子元件及編碼介導自身二聚化的序列，從而導致細胞內具有ALK激酶活性的融合蛋白高表達及過度激活，引起細胞的惡性轉化。所以，ALK胞內激酶區的活性及相應的信號傳導途徑是導致ALCL形成的重要分子機制。

因此，研發針對ALK的小分子抑制劑，可以有效的降低突變的ALK基因對下遊蛋白的影響，進而影響到腫瘤細胞侵襲、增殖等效應，最終影響腫瘤細胞的生長，起到抗腫瘤的作用。目前已經有輝瑞公司的克唑替尼(Crizotinib)成功上市，但已有大量臨床證明一代ALK抑制劑Crizotinib，容易產生耐藥性，因此，設計並篩選對Crizotinib產生耐藥的患者也有良好的療效的二代ALK抑制劑，具有顯著的臨床意義。

因此，通過化合物結構修飾尋找新的化合物結構，努力改善化合物的理化性質，提高成藥性，如提高化合物的生物利用度，來尋找對ALK突變有活性的小分子抑制劑，對於臨床上因ALK突變引起的疾病的治療，具有重要的意義。

技術實現要素：

本發明以開發針對ALK的小分子抑制劑為目標，發明了對治療和/或預防ALK介導的癌症相關疾病具有良好效果的三並環類間變性淋巴瘤激酶抑制劑。具體的技術方案為如下：

1.通式(Ⅰ)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體：

其中，

R1選自-COR5，-CO2R5，-CONRR5，-SOR5，-SO2R5、-S(O2)OR5或-SO2NRR5；

R2、R3、R、R5獨立地選自氫原子、C1-6烷基或3～8元碳環；

R4選自氫原子、滷素原子、氰基、硝基、氨基、羧基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、滷代C1-6烷基、羥基C1-6烷氧基、滷代C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基、(C1-6烷基)2氨基、氨基C1-6烷基或磺醯基C1-6烷基；

A環選自任選被1～3個Q1取代的3～8元環烷基或3～8元雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、滷代C1-6烷基、滷代C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C2-8烯基、C2-8炔基或3～8元雜環基；

B環選自任選被1～3個Q2取代的3～8元雜環基，或任選被1～3個Q2取代的5～14元雜芳基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、滷代C1-6烷基、滷代C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基、C2-8烯基、C2-8炔基或3～8元雜環基。

2.如技術方案1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

R1選自-CONRR5，-SO2R5或-SO2NRR5，

R、R5獨立地選自C1-6烷基；

R2、R3獨立地選自氫原子或C1-6烷基；

R4選自氫原子、滷素原子、氰基、硝基、氨基、羧基、C1-6烷氧基或C1-6烷基；

A環選自任選被1～2個Q1取代的4～7元環烷基或4～7元雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的5～6元雜環基，或任選被1～2個Q2取代的5～6元雜芳基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

3.如技術方案2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

R1選自-SO2R5或-SO2NRR5，

R、R5獨立地選自C1-6烷基；

R2、R3獨立地選自氫原子或C1-6烷基；

R4選自滷素原子；

A環選自任選被1～2個Q1取代的5～6元雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-4烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的5～6元雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-4烷基。

4.如技術方案3所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

R1選自-SO2R5，

R5獨立地選自C1-4烷基；

R2、R3獨立地選自氫原子或C1-4烷基；

R4選自滷素原子；

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-4烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的含1～2個N原子的5～6元雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-4烷基。

5.如技術方案3所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

R1選自-SO2R5,

R5獨立地選自甲基、乙基或異丙基；

R2、R3獨立地選自氫原子或甲基；

R4選自氯原子；

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、滷素原子或C1-4烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡咯烷基、二氫吡咯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基或1,4-二氧雜環己烷基，所述的取代基Q2選自甲基、乙基、正丙基、異丙基或正丁基。

6.如技術方案1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

R1選自-SO2R5或-SO2NRR5，

R、R5獨立地選自C1-6烷基；

R2、R3獨立地選自氫原子或C1-6烷基；

R4選自氫原子、滷素原子、氨基、C1-6烷氧基或C1-6烷基；

A環選自任選被1～2個Q1取代的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

7.如技術方案6所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

8.如技術方案7所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1～2個O和/或S原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的含1～2個N原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

9.如技術方案8所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1～2個O和/或S原子的5元飽和雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的含1～2個N原子的5元飽和雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

10.如技術方案8所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，其中，

A環選自任選被1～2個Q1取代的含1個O原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q1選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基；

B環選自任選被1～2個Q2取代的含1個N原子的5～6元飽和雜環基，所述的取代基Q2選自羥基、氨基、羧基、氰基、硝基、滷素原子或C1-6烷基。

本發明的部分化合物

發明詳述

本發明所述的「滷素原子」包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。

本發明所述的「C1-6烷基」表示直鏈或支鏈的含有1-6個碳原子的烷基，包括例如「C1-4烷基」、「C1-3烷基」等，具體實例包括但不限於：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。

本發明所述的「C2-8烯基」是指含有至少一個雙鍵的碳原子數為2-8的直鏈或支鏈或環狀的烯基，包括例如「C2-6烯基」、「C2-4烯基」、「C2-3烯基」、「C3-6環烯基」等，具體實例包括但不限於：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、1-辛烯基、3-辛烯基、4-辛烯基、1,3-丁二烯基、2,4-戊二烯基、1,4-己二烯基、2,4-己二烯基、1,5-庚二烯基、2,5-庚二烯基、2,6-辛二烯基、環戊烯基、1,3-環戊二烯基、環己烯基、1,4-環己二烯基、環庚烯基、1,4-環庚二烯基、環辛烯基等。

本發明所述的「C2-8炔基」是指含有三鍵的碳原子數為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如「C2-6炔基」、「C2-4炔基」、「C2-3炔基」等，具體實例包括但不限於：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-甲基-2-己炔基、5-甲基-2-己炔基、2-甲基-3-己炔基、5-甲基-3-己炔基、2-甲基-4-己炔基4-甲基-5-己炔基、2-辛炔基、3-辛炔基、4-辛炔基、4-甲基-2-庚炔基、5-甲基-3-庚炔基、6-甲基-3-庚炔基、2-甲基-4-庚炔基、2-甲基-5-庚炔基、3-甲基-6-庚炔基等。

本發明所述的「C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷基)2氨基、C1-6烷基硫基、C1-6烷基羰基、C1-6烷基羰基氧基」是指以C1-6烷基-O-、C1-6烷基-NH-、(C1-6烷基)2-N-、C1-6烷基-S-、C1-6烷基-C(O)-、C1-6烷基-C(O)-O-方式形成的基團，其中「C1-6烷基」的定義如前文所述。

本發明所述的「C1-4烷氧基、C1-4烷基氨基、(C1-4烷基)2氨基、C1-4烷基硫基、C1-4烷基羰基、C1-4烷基羰基氧基是指以C1-4烷基-O-、C1-4烷基-NH-、(C1-4烷基)2-N-、C1-4烷基-S-、C1-4烷基-C(O)-、C1-4烷基-C(O)-O-方式形成的基團，其中「C1-4烷基」的定義如前文所述。

本發明所述的「滷代C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、磺醯基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、滷代C1-6烷氧基、羥基C1-6烷氧基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基」是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個滷素原子、羥基、氨基、磺醯基、C1-6烷氧基分別取代C1-6烷基、C1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團。

本發明所述的「滷代C1-4烷基、羥基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、磺醯基C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、滷代C1-4烷氧基、羥基C1-4烷氧基、C1-4烷氧基C1-4烷氧基」是指一至多個， 例如1～4個、1～3個、1～2個滷素原子、羥基、氨基、磺醯基、C1-4烷氧基分別取代C1-4烷基、C1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團。

本發明所述的「3～8元環烷基」，是指3～8個碳原子的烷烴部分去除一個氫原子衍生的單環環狀烷基，包括例如「3～6元環烷基」、「4～7元環烷基」、「4～8元環烷基」、「4～6元環烷基」、「5～6元環烷基」等。其實例包括但不限於：環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環己烷基、環庚烷基、環辛烷基、甲基環丙烷基、二甲基環丙烷基、甲基環丁烷基、二甲基環丁烷基、甲基環戊烷基、二甲基環戊烷基、甲基環己烷基、二甲基環己烷基等。

本發明所述的「雜原子」是指N、O、C(O)、S、SO和/或SO2等，優選N、O、S，更優選N、O。

本發明所述的「3～8元雜環基」是指含有3～8個環原子、且含有至少一個雜原子(例如1、2、3、4或5個雜原子)的飽和或部分飽和的單環雜環化合物除去一個氫原子得到的基團，包括例如「3～7元雜環基」、「3～6元雜環基」、「4～7元雜環基」、「4～6元雜環基」、「5～6元雜環基」、「5～6元含氮雜環基」、「6元含氮雜環基」、「含1～2個N原子的5～6元雜環基」、「含1～2個N原子的5元雜環基」、「含1～2個O和/或S原子的5～6元雜環基」、「含1～2個O和/或S原子的5元雜環基」、「含1～2個O、S和/或N原子的5～6元飽和雜環基」、「含1～2個O和/或S原子的5～6元飽和雜環基」、「含1～2個N原子的5～6元飽和雜環基」、「含1～2個O和/或S原子的5元飽和雜環基」、「含1～2個N原子的5元飽和雜環基」、「含1個O原子的5～6元飽和雜環基」、「含1個N原子的5～6元飽和雜環基」等。具體實例包括但不僅限於：氮雜環丙烷基、2H-氮雜環丙烷基、二氮雜環丙烷基、3H-二氮雜環丙烯基、氮雜環丁烷基、1,4-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環戊烷基、1,4-二氧雜環己二烯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、2H-1,2-噁嗪基、6H-1,3-噁嗪基、4H-1,3-噻嗪基、6H-1,3-噻嗪基、2H-吡喃基、2H-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2H-吡喃基等。

「3～8元碳環」是指含有3～8個碳原子的飽和、部分飽和或不飽和的單環化合物。包括例如「3～7元碳環」、「3～6元碳環」、「4～7元碳環」、「4～6元碳環」、「5～6元碳環」等。具體實例包括但不僅限於：環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環己烷基、環庚烷基、環辛烷基、環戊烯基、1,3-環戊二烯基、環己烯基、1,4-環己二烯基、環庚烯基、1,4-環庚二烯基、環辛烯基、苯基等。優選「5～6元飽和或部分飽和的碳環」。

本發明還提供了上述化合物的製備方法，但不僅限於以下方法，反應方程式如下：

反應步驟：

步驟1 中間體1的製備

購買或經適當方法製備得到中間體1。

步驟2 中間體2的製備

中間體1溶於溶劑(例如甲醇)中，加入鈀碳，氫氣保護下25℃反應(例如15-25小時)，過濾，濃縮得到中間體2。

步驟3 中間體3的製備

將中間體2溶於適當溶劑(例如乙腈)，冷卻至0℃，加入N-溴代琥珀醯亞胺，室溫攪拌(例如0.5-1.5小時)，反應完畢，加水淬滅，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，濃縮，經純化(例如矽膠柱層析)得到中間體3。

步驟4 中間體4的製備

將中間體3溶於適當溶劑(例如N,N-二甲基甲醯胺)，加入氰化亞銅，150℃反應(例如1-3小時)，冷卻，倒入氨水中，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，濃縮，經純化(例如矽膠柱層析)得到中間體4。

步驟5 中間體5的製備

將中間體4溶於適當溶劑(例如甲醇)，加入氨水(10mL)和雷尼鎳，25℃反應(15-25小時)，過濾，濃縮，經適當方法得到中間體5。

步驟6 本發明通式(I)化合物的製備

將中間體5溶於適當溶劑(例如仲戊醇)，加入中間體6和對甲苯磺酸，120℃下攪拌(例 如10-30小時)。加入飽和碳酸氫鈉溶液，有機溶劑(例如乙酸乙酯)萃取，乾燥，濃縮，經適當方法(例如矽膠柱層析)得到本發明通式(I)化合物。

反應方程式中，R1、R2、R3、R4、A環和B環如前文所定義，X代表氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。

本發明式(I)化合物的「立體異構體」是指當式(I)化合物存在不對稱碳原子時，會產生對映異構體，當化合物存在碳碳雙鍵或環狀結構時，會產生順反異構體，當化合物存在酮或肟時，會產生互變異構體，所有式(I)化合物的對映異構體、非對映異構體、消旋異構體、順反異構體、互變異構體、幾何異構體、差向異構體及其混合物，均包括在本發明範圍中。

本發明的通式(I)所示的任一化合物合成得到的若是消旋體，所需要的對映體純的化合物可以通過手性拆分的方法得到：可以通過具有手性固定相的色譜法(像高壓製備液相色譜、超臨界流體色譜)。手性填料包括但不限於：Chiralcel OJ-H,Chiralpak AD-H，Chiralpak IA，Chiralpak AS-H。

本發明的通式(I)所示的任一化合物藥學上可接受的鹽是指由藥學上可接受的、非毒性鹼或酸製備的鹽，包括有機酸鹽、無機酸鹽、有機鹼鹽、無機鹼鹽。

有機酸鹽包括甲酸、乙酸、三氟乙酸鹽、苯磺酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富馬酸、葡糖酸、穀氨酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、粘酸、雙羥萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的鹽。

無機酸鹽包括氫溴酸、氫氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的鹽。

有機鹼鹽包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、環胺和鹼離子交換樹脂，選自甜菜鹼、咖啡因、膽鹼、N,N』-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、異丙基胺、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、普魯卡因、嘌呤、可可鹼、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。天然胺基酸鹽如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸等的鹽。

無機鹼鹽包括銨以及鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋇、鋁、鐵、酮、亞鐵、錳、二價錳等的鹽。

本發明式(I)化合物的「酯」是指，當式(I)化合物存在羧基時，可以與醇發生酯化反應而形成的酯，當式(I)化合物存在羥基時，可以有機酸、無機酸、有機酸鹽等發生酯化反應而形成的酯。酯在酸或者鹼存在的條件下，可以發生水解反應生成相應的 酸或醇。

通式(I)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯或其立體異構體可以是溶劑化物形式。若溶劑化物是水合物的情況下，水合作用可以在製備過程中完成或者可以利用原始無水產物的吸溼性逐漸進行。

本發明進一步要求保護包括上述的式(I)所示的任一化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，可以製成藥學上可接受的任一劑型。以口服、腸胃外、直腸或經肺給藥等方式施用於需要這種治療的患者。用於口服給藥時，可製成常規的固體製劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可製成口服液體製劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。製成口服製劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。用於腸胃外給藥時，可製成注射劑，包括注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。製成注射劑時，可採用現有製藥領域中的常規方法生產，配製注射劑時，可以不加入附加劑，也可根據藥物的性質加入適宜的附加劑。用於直腸給藥時，可製成栓劑等。用於經肺給藥時，可製成吸入劑或噴霧劑等。

本發明進一步要求保護包括上面所述的式(I)任一化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體與其它一種或多種抗腫瘤劑和免疫抑制劑的藥物組合物。所述的抗腫瘤劑和免疫抑制劑為抗代謝物，包括但不限於卡培他濱、吉西他濱、培美曲塞二鈉；為生長因子抑制劑，包括但不限於帕唑帕尼、伊馬替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼；為抗體，包括但不限於赫賽汀、貝伐單抗；為有絲分裂抑制劑，選自紫杉醇、長春瑞濱、多西他賽、多柔比星；為抗腫瘤激素類，選自來曲唑、他莫西芬、氟維司群、氟他胺、曲普瑞林；為烷化劑類，包括但不限於環磷醯胺、氮芥、馬法蘭、瘤可寧、卡莫司汀；為金屬鉑類，包括但不限於卡鉑、順鉑、奧沙利鉑；為免疫抑制類，包括但不限於依維莫司、西羅莫司、特癌適；為嘌呤類似物，包括但不限於6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、硫唑嘌呤；為抗生素類，包括但不限於菌素D、柔紅黴素、阿黴素、米託蒽醌、爭光黴素、普卡黴素；為鉑配合物，包括但不限於順鉑、卡波鉑；為腎上腺皮質抑制劑類，包括但不限於氨魯米特；為酶抑制劑，包括但不限於SAHA、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、羥基脲、羥喜樹鹼、拓撲特肯、拓撲替康、依立替康。

本發明還提供了本發明式(I)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體在製備治療和/或預防ALK介導的癌症相關疾病或增生性疾病的藥物中的應用，所述癌症相關的疾病包括但不限於腦瘤，肺癌，非小細胞性肺癌，鱗狀上皮細胞，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，頭頸癌，子宮頸癌，子宮內膜癌，結直腸癌，肝癌，腎癌，食管腺癌，食管鱗狀細胞癌，非霍奇金淋巴瘤，腦瘤，中樞神經系統腫瘤，即神 經膠質瘤，多形性膠質母細胞瘤，膠質肉瘤，前列腺癌，甲狀腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，組織細胞淋巴瘤，神經纖維瘤病，骨癌，皮膚癌，結腸癌，睪丸癌，小細胞肺癌，胃腸道間質瘤，前列腺腫瘤，肥大細胞腫瘤，多發性骨髓瘤，黑色素瘤，膠質瘤，膠質母細胞瘤，星形細胞瘤，神經母細胞瘤，肉瘤；增生性疾病，包括但不限於皮膚或前列腺的良性增生。

本發明化合物具有以下優點：

(1)本發明式(I)化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體具有優異的ALK抑制活性；

(2)本發明式(I)化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體顯示出良好的生物穩定性，作用更持久，生物利用度高；

(3)本發明化合物製備工藝簡單，藥品純度高，質量穩定，易於進行大規模工業生產。

以下通過體外酶學和細胞學抑制活性實驗進一步闡述本發明化合物有益效果，但不應將此理解為本發明化合物僅具有下列有益效果。

實驗例1本發明化合物的體外酶學活性實驗

供試品：本發明化合物1，其化學名稱和製備方法見化合物1的製備實施例。

對照藥ceritinib，自製(參考專利WO2008/073687A2化合物66的製備方法製備)。

下述中實驗的縮寫所代表的含義如下：

DMSO：二甲基亞碸

DTT：二硫蘇糖醇

ALK：間變性淋巴瘤激酶

HEPES：4-羥乙基哌嗪乙磺酸

Brij-35：十二烷基聚乙二醇醚

EDTA：乙二胺四乙酸

實驗方法：採用Caliper Mobility Shift方法進行ALK激酶的抑制活性測定

1.1倍激酶緩衝液配製：

分別取pH7.5的HEPES、濃度為30％的Brij-35、母液濃度為1M的MgCl2溶液、母液濃度為1M的DTT，加入超純水混勻，使HEPES的終濃度為50mM，Brij-35的終濃度為0.0015％，MgCl2的終濃度為10mM，DTT的終濃度為2mM。

2.終止液的配製

分別取母液濃度為4％的包被液Coating Reagent#3(Caliper儀器所使用的12-sipper chip中自帶包被液)、母液濃度為1000mM pH7.5的HEPES、母液濃度為0.5M的EDTA、母液濃 度為30％的Brij-35，加入超純水混勻，使Coating Reagent#3終濃度為0.2％，HEPES終濃度為100mM，EDTA終濃度為50mM，Brij-35終濃度為0.015％。

3.5倍供試品溶液配製：

供試品的DMSO儲備液配製：分別稱取化合物適量(具體稱樣量請見下表)，加入適量DMSO溶解，混勻，備用。

取供試品的DMSO儲備液，用DMSO稀釋製成濃度為50μM的溶液，作為母液。用DMSO將上述母液四倍逐級稀釋，然後每個濃度分別用1倍激酶緩衝液稀釋10倍，製成5倍供試品溶液。

4.各種其他試劑的配製

用1倍激酶緩衝液分別配製所需要的2.5倍ALK激酶溶液、2.5倍多肽溶液，備用。

5.酶學反應：

1)384孔板中相對應的孔中分別加入5μL配製好的5倍供試品溶液、10μL配製好的2.5倍激酶溶液，室溫孵育10分鐘。

2)相對應的孔中再分別加入10μL配製好的2.5倍多肽溶液，使測試物終濃度為1000nM、250nM、63nM、16nM、4nM、1nM、0.2nM、0.1nM、0.02nM、0.004nM。啟動酶反應，28℃孵育1小時。

6.酶學檢測：

每個相對應的孔中分別加入25μL終止液，終止反應。Caliper儀器讀取數據，並通過數據計算抑制率，

抑制率(％)＝(最大值-樣本值)/(最大值-最小值)×100，採用XLFIT軟體進行曲線擬合，得出IC50值。

最大值：不加測試物的陽性對照，最小值：不加酶的陰性對照。

實驗結果和結論：

表1 本發明化合物的體外酶學抑制活性

由表1可見，本發明化合物對ALK激酶具有良好的抑制活性，可用於治療與激酶相 關的疾病，特別是ALK激酶介導的病症或病況，具有顯著的臨床意義。

實驗例2本發明化合物的體外細胞活性實驗

供試品：本發明化合物1,其化學名稱和製備方法見化合物1的製備實施例。

對照藥Ceritinib，自製(參考專利WO2008/073687A2化合物66製備方法製備)。

下述中實驗的縮寫所代表的含義如下：

rpm：轉每分鐘

DMSO：二甲基亞碸

MTS：溴化噻唑藍四氮唑

RPMI1640：1640培養基(RPMI:Roswell Park Memorial Institute)

500×、1000×、10×其中的「×」：倍

實驗方法：

NCI-H3122細胞：

(1)培養基配製：

配製含2.5％的胎牛血清的RPMI1640培養基，備用。

(2)細胞培養：

在5％CO2、37℃條件的培養箱中，將NCI-H3122細胞置T25培養瓶中用「(1)」中配製好的培養基培養細胞至80％融合。

(3)接種細胞：

用胰酶消化細胞，1000rpm離心4min，去除上清液，用培養基重新混懸，調整細胞密度，取該細胞混懸液90μL接種到96孔板中，獲得最終細胞密度為：3000個細胞/孔；然後在5％CO2、37℃培養箱中培養24h。

(4)加入供試品：

(4.1)供試品溶液配製

對照藥溶液：稱取對照藥2.17mg，加入適量DMSO溶解並分別用DMSO梯度稀釋製成一系列濃度的母液(1000×對照藥溶液)，再分別用培養基稀釋該母液100倍得到10×對照藥溶液，分別取該溶液10μL，加入到96孔板相應的孔中，得到對照藥溶液最終濃度為：10μM、2.5μM、625nM、156nM、39nM、9.8nM、2.5nM、0.625nM。

化合物1溶液：稱取化合物8mg，加入適量DMSO溶解並分別用DMSO梯度稀釋製成一系列濃度的母液(1000×化合物1溶液)，再分別用培養基稀釋該母液100倍得到10×化合物1溶液，分別取該溶液10μL，加入到96孔板相應的孔中，得到化合物1溶液最終濃度為： 10μM、2.5μM、625nM、156nM、39nM、9.8nM、2.5nM、0.625nM。

(4.2)對照孔設置：

溶媒對照：0.1％DMSO。

空白對照：培養基，儀器調零。

(4.3)將96孔板放37℃、5％CO2培養箱中培養72h。

(5)檢測：

向96孔板的每個試驗孔中加入CCK-8試劑10μL，放回5％CO2、37℃培養箱中培養1h。設置酶標儀檢測波長450nm，讀取結果。

(6)IC50計算：細胞存活率(％)＝(樣本值－空白值)/(最大值－空白值)×100，採用Graph prism軟體進行曲線擬合，得出IC50值。

最大值：不加化合物只加溶媒的的細胞對照即溶媒對照，空白值：培養基空白對照。

實驗結果和結論：

表2 本發明化合物的細胞抑制活性

由表2可見，與對照藥相比，本發明化合物對細胞NCI-H3122具有更好的抑制活性，可用於治療ALK激酶介導的病症或病況，具有顯著的臨床意義。

具體實施方式

以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下實施例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。

實施例15-氯-N4-(2-異丙基磺醯基)苯基)-N2-(2,3,7,8-四氫-1H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-5-基)嘧啶-2,4-二胺的製備

(1)2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯的製備

將2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸(15g,0.091mol)溶於甲醇(800mL)中，加入濃硫酸(2mL)，65℃反應20小時，冷卻，加入碳酸氫鈉，濃縮，加水(200mL)稀釋，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得產物(15.8g,產率97.5％)。

(2)7-硝基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯的製備

將2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯(14g,78.6mmol)溶於乙酸酐(200mL)中，冷卻至0℃，滴加濃硝酸(質量分數65％,7mL,102.2mmol)，滴加完畢後升至室溫攪拌1小時，反應完倒入水(200mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(13g,產率74.3％)。

(3)7-氨基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯的製備

將7-硝基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯(10g,44.8mmol)溶於甲醇(300mL)中，加入鈀碳(1g)，氫氣氛圍下25℃反應20小時，過濾，濾液濃縮得產物(6g,產率69.4％)。

(4)7-氨基-4-溴-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯的製備

將7-氨基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯(5.4g,28mmol)溶於乙腈(100mL)中，冷卻至0℃，分批加入N-溴代琥珀醯亞胺(5.98g,33.6mmol)，加畢升至室溫攪拌1小時反應完全，倒入水(100mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)純化得產物(5g,產率65.6％)。

(5)7-氨基-4-氰基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯的製備

將7-氨基-4-溴-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯(4g,14.7mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(50mL)中，加入氰化亞銅(1.57g,17.6mmol)，150℃反應2小時，冷卻，倒入氨水(80mL)中，乙酸乙酯(150mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)純化得產物(1.4g,產率43.7％)。

(6)5-氨基-1,2,7,8-四氫-3H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-3-酮的製備

將7-氨基-4-氰基-2,3-二氫苯並呋喃-5-羧酸甲酯(0.4g,1.83mmol)溶於甲醇(100mL),加入氨水(10mL)和雷尼鎳(0.1g)，25℃反應20小時。過濾，濾液濃縮得產物(0.28g,產率80％)。

(7)叔丁基5-氨基-1,3,7,8-四氫-2H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-2-羧酸酯的製備

將5-氨基-1,2,7,8-四氫-3H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-3-酮(0.28g,1.47mmol)溶於四氫呋喃(20mL)中，0℃下滴加硼烷-二甲硫醚溶液(2mol/L,2.57mL,5.14mmol)，加完後65℃反應24小時。冷卻至0℃，滴加甲醇(5mL)淬滅反應，再加入4mol/L鹽酸(5mL)，65℃攪拌4小時。冷卻後旋轉蒸發除去溶劑，加水稀釋，加入氫氧化鈉溶液調至pH＝10，加入二碳酸二叔丁酯(416mg,1.91mmol)，室溫攪拌1小時，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產物(75mg,產率18.5％)。

(8)2,5-二氯-N-(2-(異丙基磺醯基)苯基)嘧啶-4-胺的製備

將2-(異丙基磺醯基)苯胺(1g,5mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(1.1g,6mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(30mL)中，加入氫化鈉(含量60％,0.4g,10mmol)，25℃下反應12小時。加水，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，有機相合併，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，真空濃縮，粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝25:1)得產物(0.8g,產率46％)。

(9)5-氯-N4-(2-異丙基磺醯基)苯基)-N2-(2,3,7,8-四氫-1H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-5-基)嘧啶-2,4-二胺的製備

將叔丁基5-氨基-1,3,7,8-四氫-2H-呋喃並[3,2-e]異吲哚-2-羧酸酯(70mg,0.25mmol)溶於仲戊醇(8mL)中，加入2,5-二氯-N-(2-(異丙基磺醯基)苯基)嘧啶-4-胺(104mg,0.3mmol)和對甲苯磺酸(86mg,0.5mmol)，120℃下攪拌20小時。旋轉蒸發除去溶劑，加飽和碳酸氫鈉溶液，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，無水硫酸鈉乾燥，真空濃縮，粗品經矽膠柱層析(二氯甲烷:甲醇:氨水＝10:1:0.1)得終產物(10mg,產率8.2％)。

分子式:C23H24ClN5O3S分子量:485.99LC-MS(m/z):486[M]+

1H-NMR(400MHz,MeOD-d4)δ:8.49(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.70-7.67(m,1H),7.39-7.35(m,1H),4.65(t,J＝8.6Hz,2H),4.53(s,2H),4.45(s,2H),3.26(t,J＝8.8Hz,2H),1.19(d,J＝6.8Hz,6H)。