遠程裝載略微水溶性藥物至脂質膜泡的製作方法

2023-05-19 04:08:06 2

相關申請的交叉引用本申請根據35u.s.c.§119(e)要求2014年8月4日提交的美國臨時申請號62/033,073的利益，為了所有的目的通過引用以其整體併入本文。發明背景本發明涉及藥物組合物、製備它們的方法和所得組合物在藥物治療中的用途的領域。藥物組合物包括裝載在脂質體膜泡的水性內部內的活性治療劑。相關技術描述製藥工業，在其尋找改善的藥物時，已經產生了許多有力的化合物，其略微可溶於使得可能有生命的無處不在的溶劑水中。這些新藥物的低水溶解度已經使得其難以在包括人的動物中遞送它們。這已經需要可溶解略微水溶性藥物以確保能夠在身體中遞送它們的藥物遞送系統。脂質體是膜泡結構，通常由捕獲水性核心的雙層膜的兩性分子比如磷脂組成。各種類型的脂質體的直徑和形態圖解在圖1中。藥物封裝在水性核心中或交錯在雙層膜中。當在身體中稀釋時，膜中交錯的藥物轉移離開脂質體。重要地，封裝在水性核心或在水性核心中以複合物保持的藥物明顯比雙層中的藥物保持更長。充分闡釋了藥物封裝在水性核心中的脂質體用於藥物遞送的應用(d.drummond等，j.pharm.sci.，(2008)97(11)：4696-4740，pmid10581328)。可使用用於在脂質體中封裝功能化合物，尤其藥物的各種裝載方法。例如，親水化合物可通過水化功能化合物和形成膜泡的脂質的混合物封裝在脂質體中。該技術稱為被動裝載。隨著納米顆粒形成，功能化合物封裝在脂質體中。可用的脂質膜泡(脂質體)產生方法滿足了封裝水溶性藥物的大部分應用(g.gregoriadis，ed.，liposometechnology，(2006)liposomepreparationandrelatedtechniques，3rded.)。但是，在脂質體的水性內部腔室中製造封裝略微水溶性的藥物(例如，水溶解度小於2mg/ml)的脂質膜泡非常困難(d.zucker等journalofcontrolledrelease(2009)139：73-80，pmid19508880)。被動裝載親脂和在較小程度上兩性分子功能化合物比親水功能化合物些許更有效，因為它們在脂質雙層和脂質體內(內部)水性介質中分開。但是，使用被動裝載，最終功能化合物與脂質比例以及封裝效率通常是低的。脂質體中藥物的濃度等於周圍流體的並且不捕獲在內部水性介質的藥物在封裝之後被衝洗掉。某些親水或兩性分子化合物可使用跨膜ph-或離子-梯度裝載至實施的脂質體(d.zucker等，journalofcontrolledrelease(2009)139：73-80)。該技術稱為主動或遠程裝載。容易主動裝載的化合物應能夠從可橫跨脂質體膜擴散的不帶電形式改變為不能這樣的帶電形式。典型地，通過將其添加至製備的脂質體懸液，以具有更低的外側/更高的內側ph-或離子-梯度，裝載功能化合物。經主動裝載，可實現高的功能化合物與脂質質量比和高的裝載效率(多達100％)。例子是抗癌藥物多柔比星、柔紅黴素和長春新鹼的主動裝載(p.r.cullis等，biochimicaetbiophysicaacta，(1997)1331：187-211，和其中的參考文獻)。僅僅認為疏水藥物能夠通過膜插入經一些被動裝載/裝配機制裝載至脂質體。wasan等在使用膠束將微溶性試劑轉移至脂質體雙層的說明(us2009/0028931)中聲稱「具有疏水性質的試劑可插入脂質雙層並且這可通過將試劑添加至實施的脂質體實現」。在藥物高於其溶解度界限並且為沉澱形式的條件下將微溶性藥物遠程裝載至脂質體是出人意料的事件。d.zucker等，journalofcontrolledrelease(2009)139：73-80聲稱「疏水的分子可聚集，並且這些聚集橫跨脂質體膜具有低的通透性。因此，當非極性/極性表面積比>2.31時(圖4)，藥物必須具有合理的溶解度，>1.9mm，以便實現高裝載，因為僅僅可溶性不帶電的分子可進入脂質體。」(d.zucker等，journalofcontrolledrelease(2009)139：73-80)。迄今為止，還未開發從沉澱用略微水溶性試劑主動裝載脂質體的水性核心的方法。附圖說明圖1圖解了各種類型的脂質體的直徑和形態。圖2.由包含硫酸鈉(淺陰影)或硫酸銨(深陰影)的hspc/chol/peg-dspe組成的脂質體製劑用卡非佐米以2的輸入藥物與脂質比使用下述條件溫育。從未封裝的藥物純化脂質體並且顯示脂質體中封裝的卡非佐米的量，表達為μg卡非佐米/μmol脂質。圖3是顯示捕獲試劑對卡非佐米的脂質體裝載的作用的條形圖。圖4是條形圖，顯示藥物引入對卡非佐米的脂質體裝載的作用的方法。圖5是線圖，顯示由在600nm下的光散射降低表明的卡非佐米從沉澱裝載。圖6是卡非佐米的hplc色譜圖，為從沉澱裝載至脂質體之前(上)，以及裝載至脂質體之後並且使用脂質體外溶液中回到沉澱的反向硫酸銨梯度從脂質體釋放(下)。圖7是顯示作為[dmso]函數的脂質體封裝效率的線圖。輸入藥物與脂質比例是200μg/μmol。圖8是顯示卡非佐米溶液的光散射作為dmso濃度的函數的線圖。卡非佐米的濃度是0.2mg/ml。圖9是顯示形成藥物沉澱和沉澱的脂質體裝載之間延遲時間作用的條形圖。圖10是顯示硫酸銨捕獲試劑濃度對從沉澱裝載的卡非佐米脂質體藥物載荷的作用的線圖。圖11是顯示硫酸銨捕獲試劑濃度對從沉澱的卡非佐米脂質體裝載效率作用的線圖。圖12是使用三乙基硫酸銨梯度將不溶解的卡非佐米沉澱裝載至脂質體的線圖。圖13是顯示通過遠程裝載將不溶解的卡非佐米沉澱轉移至脂質體的線圖。圖14是顯示當與作為sbcd複合物(abilify)的脂質體混合或當從原料dmso溶液直接稀釋至脂質體產生藥物懸液時比較阿立哌唑的脂質體裝載的條形圖。圖15是顯示藥物溶液(深色條)和脂質體藥物混合物(灰色條)在600nm的吸光度(散射)的條形圖。矩形指示其中當與脂質體溫育時測量到散射明顯下降的樣品，指示藥物裝載。圖16是顯示dfx在乙酸鈣脂質體中裝載效率的條形圖。圖17是顯示包含乙酸鈣作為捕獲試劑的脂質體中dfx裝載容量的圖。圖18是顯示包含不同乙酸鹽捕獲試劑的脂質體中dfx裝載容量的圖。圖19a-圖19b是紫杉醇、多西他賽和卡巴他賽的結構以及對它們的修飾的示例，所述修飾能夠使得裝載的紫杉烷從沉澱進入包含離子梯度的脂質體。發明概述在使用脂質體用於遞送功能化合物時，一般期望將脂質體裝載至高濃度，產生高的功能化合物與脂質質量比，因為這減少每次治療待施用的脂質體的量，以獲得需要的療效，所有的都因為脂質體中使用的數個脂質本身具有劑量限制性的毒性。裝載百分數也對成本效率具有重要性，因為差的裝載導致活性化合物的大量損失。在示例性實施方式中，本發明提供了脂質體，其包含封裝內部水性介質的脂質體脂質膜。內部水性介質包含捕獲試劑和略微水溶性治療劑之間的複合物的水溶液。在進一步示例性實施方式中，本發明提供了藥物製劑，其包含本發明的脂質體。製劑包括脂質體和藥學上可接受的稀釋劑或賦形劑。在各種實施方式中，藥物製劑為單位劑量形式，提供單位劑量的封裝在脂質體中的治療劑。在另一示例性實施方式中，本發明提供了製備本發明的脂質體的方法。在各種實施方式中，提供了用略微水溶性的試劑遠程裝載脂質體的方法。方法包括：a)溫育水性混合物，其包含：(i)脂質體懸液，其具有橫跨脂質體膜存在的質子和/或離子梯度；(ii)與微溶性藥物的水懸液，(iii)其中通過將藥物完全溶解在非質子溶劑或多元醇中並且將其稀釋為超過形成沉澱的藥物溶解度點的水溶液製備藥物懸液，其中溫育組合的脂質體藥物沉澱混合物一段時間響應質子/離子梯度產生積聚在脂質體內部的藥物。製備用於用試劑裝載脂質體的混合物，以使橫跨內部水性膜和外部水性介質之間的脂質體膜存在質子-和/或離子-梯度。溫育可為任何有用的時間段，但是優選地為足以使至少部分不溶解的藥物沉澱在質子和/或離子梯度的作用下積聚在內部水性介質中的時間段。在下面詳細說明中闡釋了其他實施方式、目的和優勢。優選實施方式詳述介紹在利用脂質體用於遞送功能化合物時，一般期望將脂質體裝載至高濃度，產生高的試劑-脂質質量比，因為這減少每次治療待施用的脂質體的量，以獲得需要的療效，所有的都因為脂質體中使用的數個脂質本身具有劑量限制的毒性。裝載百分數也對成本效率具有重要性，因為差的裝載導致在將試劑裝載至脂質體期間試劑的損失。本發明提供了脂質體封裝試劑，例如，略微水溶性的，製備這樣的脂質體的方法，包含這樣的脂質體的製劑和製備本發明的脂質體和製劑的方法。在示例性實施方式中，本發明提供了具有封裝水性腔室的膜的脂質體。製備脂質體使得橫跨內部水性腔室和外部水性介質之間的脂質體膜存在質子-和/或離子-梯度。試劑以下述濃度溶解在非質子溶劑中，所述濃度是當稀釋在脂質體懸液中時其在懸液中的溶解度超出並且試劑形成沉澱。一部分試劑沉澱使用存在橫跨內部水性腔室和外部水性介質之間脂質體膜的質子-和/或離子-梯度裝載至脂質體水性腔室。在一些實施方式中，基本上所有量的不溶解的試劑沉澱裝載至脂質體的水性腔室。在示例性實施方式中，至少約95％，至少約90％，至少約85％，至少約80％或至少約70％的不溶解的藥物沉澱裝載至脂質體的水性腔室。脂質體本文根據其通常的含義使用術語脂質體，指由雙層磷脂或任何類似的封裝內部水性介質的兩性脂質組成的顯微脂質膜泡。本發明的脂質體可以是單層膜泡比如小單層膜泡(suv)和大單層膜泡(luv)和多層膜泡(mlv)，尺寸通常從30nm至200nm改變。對本發明中的脂質體膜結構沒有具體限制。術語脂質體膜指分離內部水性介質與外部水性介質的雙層磷脂。本發明使用的示例性脂質體膜可由各種形成膜泡的脂質形成，通常包括雙脂族鏈脂質，比如磷脂、甘油二酯、雙脂族糖脂，單個脂質比如鞘磷脂和鞘糖脂、膽固醇和其衍生物和其組合。如本文定義，磷脂是兩性分子試劑，具有長鏈烷基鏈形成的疏水基團和包含磷酸鹽部分的親水基團。磷脂的基團包括磷脂酸、磷脂醯丙三醇、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、磷脂醯絲氨酸和其混合物。優選地，磷脂選自l,2-雙棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(dppc)、二肉豆蔻醯基-磷脂醯膽鹼(dmpc)、氫化大豆磷脂醯膽鹼(hspc)、大豆磷脂醯膽鹼(spc)、二肉豆蔻醯基磷脂醯甘油(dmpg)、二硬脂醯磷脂醯甘油(dspg)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(popc)、1,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(dopc)二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(dspc)、卵黃磷脂醯膽鹼(eypc)或氫化卵黃磷脂醯膽鹼(hepc)、固醇改性的脂質(sml)、陽離子脂質和反兩性脂質。根據本發明的脂質體膜可進一步包括離子載體，如奈及利亞菌素(nigericin)和a23187。在根據本發明的方法中，示例性脂質體相變溫度在-25℃和100℃之間，例如，在4℃和65℃之間。相變溫度是誘導組成脂質體的脂質物理狀態從有序的凝膠相變成無序的液晶相需要的溫度，所述凝膠相中烴鏈充分延伸並且緊密堆積，所述液晶相中烴鏈是隨機定向的和流動的。高於脂質體的相變溫度，脂質體膜的通透性增加。選擇其中脂質體總處在凝膠狀態的高轉變溫度，可提供非滲漏脂質體組合物，即在暴露於環境期間，保持內部水性介質中略微水溶性試劑的濃度。可選地，轉變溫度在所暴露環境的開始和結束溫度之間的脂質體提供當脂質體超過其轉變溫度時，釋放略微水溶性試劑的方式。因此，主動裝載技術的過程溫度通常高於脂質體相變溫度，以利於主動裝載過程。如本領域通常已知的，脂質體的相變溫度可受磷脂的選擇和添加類固醇如膽固醇、羊毛固醇、膽甾烷醇、豆甾醇、麥角固醇等參數的影響。因此，在本發明的實施方式中，提供根據任何前述的方法，其中脂質體包含以數個摩爾比選自不同磷脂和膽固醇的一個或多個組分，以便改變轉變、需要的過程溫度和血漿中脂質體穩定性。混合物中較少的膽固醇導致血漿中較不穩定的脂質體。本發明中使用的示例性磷脂組合物包括約10和約50mol％之間的類固醇類，優選地膽固醇。根據本發明，可通過現在已知的或隨後為製備脂質體開發的任何技術製備脂質體。例如，脂質體可通過製備多層脂質膜泡(mlvs)的常規的技術形成，即，通過將一個或多個選擇的脂質沉積在適當的容器的內側壁上通過將脂質溶解在氯仿中並且然後蒸發氯仿，和然後通過添加待封裝在容器中的水溶液，允許水溶液使脂質水合，和使所得脂質懸液漩渦或起渦流。該過程產生了包括期望脂質體的混合物。可選地，用於產生大單層脂質膜泡(luv)的技術，比如反相蒸發、注入法和去汙劑稀釋，可用於產生脂質體。產生脂質膜泡的這些和其他方法的綜述可見文本liposometechnology，volumei，gregorygregoriadised.，crcpress，bocaraton，fla.，(1984)，其通過引用併入本文。例如，包含脂質的顆粒可為下述形式：甾族脂質膜泡，穩定的多層脂質膜泡(splv)、單相膜泡(mpv)或脂質基質載體(lmc)。在mlv的情況下，如果期望，脂質體可進行多個(五個或更多個)冷凍-融化輪，以增強它們的捕獲體積和捕獲效率並且提供溶質更均勻層間分布。脂質體製備之後，任選地調整脂質體的尺寸，以實現期望的尺寸範圍和相對窄的脂質體尺寸的分布。約20-200納米的尺寸範圍使得脂質體懸液通過常規的過濾器，通常為0.22或0.4微米過濾器，過濾滅菌。如果脂質體的尺寸下降至約20-200納米，可以高通量基礎進行過濾器消毒方法。數個技術可用於調整脂質體的尺寸至期望的尺寸。通過浴或探針超聲法超聲脂質體懸液，產生連續尺寸下降至小單層膜泡，尺寸小於約50納米。勻化是另一方法，其依賴於剪切能使大脂質體片段化成更小的脂質體。在典型的勻化方法中，通過標準乳液勻化器使多層膜泡再循環，直到觀察到選擇的脂質體尺寸，通常在約50和500納米之間。在兩種方法中，可通過常規的雷射束顆粒尺寸測定，監測顆粒尺寸分布。通過小孔聚碳酸酯膜或不對稱的陶瓷膜擠出脂質體也是使脂質體尺寸降低至相對良好限定尺寸分布的有效方法。典型地，懸液通過膜循環一次或多次，直到實現期望的脂質體尺寸分布。可通過連續更小的孔膜擠出脂質體，以實現逐漸減小的脂質體尺寸。可選地，可使用微流體技術製備控制尺寸的脂質體，其中有機溶劑中，比如乙醇或乙醇-非質子溶劑混合物中的脂質與水性介質快速混合，從而在尺寸小於300微米和優選寬度小於150微米和高度50微米的微通道中有機溶劑/水比例小於30％。然後從脂質體通過透析去除有機溶劑。其他可用的調整尺寸的方法比如超聲法、溶劑蒸發或反相蒸發是本領域技術人員已知的。用於本發明各種實施方式的示例性脂質體的尺寸為約30納米至約40微米。本文提及的內部水性介質，通常是其中製備脂質體並且當形成脂質體時初始封裝的初始介質。根據本發明，新鮮製備的封裝初始水性介質的脂質體可直接用於主動裝載。但是，實施方式也設想其中脂質體製備之後脫水，例如用於儲存。在這樣的實施方式中，該方法可涉及直接添加脫水脂質體至用於產生跨膜梯度的外部水性介質。但是也可能首先在另一外部介質中使脂質體水合，如本領域技術人員理解的。任選地在減壓下使用標準冷凍乾燥裝置或等同裝置使脂質體脫水。在各種實施方式中，脂質體和它們的周圍介質冷凍在液氮中，然後脫水並且放置在減壓下。為了確保脂質體在脫水過程中倖存，而不損失大部分部分它們的內部包含物，通常採用一種或多種保護糖，以與脂質膜泡膜相互作用並且隨著去除系統中的水，保持它們完整。可使用各種糖，包括這樣的糖，如海藻糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖和葡聚糖。一般而言，已經發現二糖比單糖更好，二糖海藻糖和蔗糖是最有效的。也可使用其他更複雜的糖。例如，已經發現包括鏈黴素和雙氫鏈黴素的氨基糖苷類在脫水期間保護脂質體。典型地，包括一種或多種糖作為脂質膜泡的內部或外部介質的一部分。最優選地，糖包括在內部和外部介質中，從而它們可與脂質體膜的內側和外側表面相互作用。通過在脂質體形成過程期間添加糖或糖至封裝在脂質膜泡中的緩衝液實現包括在內部介質中。在這些實施方式中，在主動裝載過程中使用的外部介質，也應優選地包括一種或多種保護糖。如本領域技術人員一般理解，聚乙二醇(peg)-脂質綴合物已經廣泛用於改善脂質體-封裝功能化合物的循環次數，以避免或減少功能化合物從脂質體組合物過早滲漏並且避免身體免疫系統的脂質體的探測。將peg衍生的脂質附接至脂質體稱為聚乙二醇化。因此，在本發明的示例性實施方式中，脂質體是聚乙二醇化的脂質體。可通過溫育peg的活性衍生物與靶脂質體實現聚乙二醇化。適當的根據本發明的peg衍生的脂質，包括dspe-peg的綴合物，用下述之一官能化：羧酸、穀胱甘肽(gsh)、馬來醯亞胺(mal)、3-(2-吡啶基二硫)丙酸(pdp)、氟尿酸、疊氮化物、胺、生物素或葉酸，其中peg的分子量在2000和5000g/mol之間。其他適當的peg衍生的脂質是與神經醯胺綴合的mpeg，具有c8-或c16-尾，其中mpeg的分子量在750和5000道爾頓之間。仍其他適當的配體是用甘油磷脂質綴合的mpeg或官能化的peg，如l,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1,2-雙棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、l,2-二油醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)和l,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dspe)等。脂質體的聚乙二醇化是本領域技術人員通常已知的技術。在各種實施方式中，用dspe-peg-gsh綴合物(至多5mol％)和/或dspe-mpeg綴合物聚乙二醇化脂質體(其中peg的分子量通常在750-5000道爾頓之間，例如2000道爾頓)。本發明示例性聚乙二醇化的脂質體的磷脂組合物可包括至多5-20mol％的peg-脂質綴合物。此外，在某些實施方式中，將脂質體特異性靶向具體細胞類型、組織等的一個或多個部分併入膜。先前已經描述了使用各種靶向部分(例如，配體，受體和單克隆抗體)的脂質體的靶向。這樣部分的適當例子包括透明質酸，抗erbb家族抗體和抗體片段、脂蛋白脂肪酶(lpl)、[α]2-巨球蛋白([α]2m)、受體相關的蛋白質(rap)、乳鐵蛋白、去氨普酶，組織和尿激酶型血纖維蛋白溶酶原活化劑(tpa/upa)、血纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑(pai-i)、tpa/upa:pai-l複合物、黑素轉鐵蛋白(或p97)、血小板反應蛋白1和2、肝脂肪酶、因子vila/組織因子途徑抑制劑(tfpi)、因子villa、因子ixa、a[β]l-40、澱粉樣蛋白-[β]前體蛋白質(app)、ci抑制劑、補體c3、載脂蛋白e(apoe)、假單胞菌外毒素a、crm66、hiv-itat蛋白質、鼻病毒、基質金屬蛋白酶9(mmp-9)、mmp-13(膠原酶-3)、鞘脂活化劑蛋白質(sap)、妊娠帶蛋白、抗凝血酶iii、肝素輔因子ii、[α]l-抗胰蛋白酶、熱休克蛋白96(hsp-96)、血小板衍生生長因子(pdgf)、載脂蛋白j(apoj，或成簇蛋白)、結合apoj和apoe的a[β]、牛胰蛋白酶抑制劑、angiopep-2(tffyggsrgkrnnfkteey)、非常低密度脂蛋白(vldl)、運鐵蛋白、胰島素、瘦蛋白、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、凝集素、擬肽和/或人源化的單克隆抗體、對所述受體特異的單鏈鏈抗體或肽(例如，結合人運鐵蛋白受體的序列haiyprh和thrppmwspvwp，或抗人運鐵蛋白受體(tfr)單克隆抗體a24)、血紅蛋白、白喉毒素多肽鏈的非毒性部分、所有或一部分白喉毒素b鏈、白喉毒素crm197的所有或一部分無毒的突變體、載脂蛋白b、載脂蛋白e(例如，結合polysorb-80塗層之後)、維生素d-結合蛋白質、維生素a/視黃醇-結合蛋白質、維生素b12/鈷胺素血漿載體蛋白、穀胱甘肽和鈷胺傳遞蛋白-b12。靶向機制一般要求靶向試劑位於脂質體的表面上，使得靶向部分可用於與靶，例如，細胞表面受體的相互作用。在示例性實施方式中，製備脂質體，以包括在形成膜時併入膜的連接體部分。示例性連接體部分具有親脂部分，其牢固嵌入和錨定在膜中。示例性連接體部分也包括親水部分，其在脂質體的水性表面上是化學可用的。選擇親水部分從而其化學上適於和稍後添加的靶向試劑形成穩定的化學鍵。用於將靶向部分併入脂質體膜的技術一般是本領域已知的。略微水溶性試劑如上面指示，本發明提供了封裝略微水溶性試劑的脂質體。在本發明的背景下，術語『略微水溶性'意思是在水中不溶解或具有非常有限的溶解度，更尤其具有的水性溶解度小於2mg/ml，例如，小於1.9mg/ml，例如，水性溶解度小於lmg/ml。如本文所使用，水溶解度指溶解度測量在環境溫度下，其通常約20℃，且ph＝7。根據本發明的示例性實施方式，略微水溶性試劑是選自下述的治療劑：兩性黴素b化合物、蒽環類化合物、喜樹鹼化合物、長春花生物鹼、玫瑰樹鹼化合物、紫杉烷化合物、曼青黴素化合物、格爾德黴素化合物、吡唑並嘧啶化合物、基於肽的化合物比如卡非佐米、甾族化合物、任何前述的衍生物、任何前述的前藥和任何前述的類似物。水溶解度小於約2mg/ml的示例性小分子化合物，包括但不限於兩性黴素b、2'脫氧兩性黴素b、卡非佐米、伏立康唑、胺碘酮、齊拉西酮、阿立哌唑、伊馬替尼、拉帕替尼、環杷明、oprozomib、cur-61414、pf-05212384、pf-4691502、託西尼布、pf-477736、pf-337210、舒尼替尼、su14813、阿西替尼、ag014699、維利帕尼、mk-4827、abt-263、su11274、pha665752、克裡唑蒂尼、xl880、pf-04217903、xr5000、ag14361、維利帕尼、bosutunib、pd-0332991、pf-01367338、ag14361、nvp-adw742、nvp-auy922、nvp-laq824、nvp-tae684、nvp-lbh589、艾日布林、多柔比星、柔紅黴素、絲裂黴素c、表柔比星、吡柔比星、紅比黴素、癌黴素、n-乙醯基阿綴米辛、柔紅黴素苯腙、5-醯亞胺道諾黴素、n-乙醯基道諾黴素、daunoryline、米託蒽醌、喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、7-乙基喜樹鹼、7-乙基-10-羥基-喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-硝基喜樹鹼、10,11-亞甲基二氧喜樹鹼、9-氨基-10,11-亞甲基二氧喜樹鹼、9-氯-10,11-亞甲基二氧喜樹鹼、伊立替康、勒託替康、silatecan、(7-(4-甲基哌嗪亞甲基)-10,11-亞乙基二氧-20(s)-喜樹鹼、7-(4-甲基哌嗪亞甲基)-10,11-亞甲二氧基-20(s)-喜樹鹼、7-(2-n-異丙基氨基)乙基)-(20s)-喜樹鹼、ckd-602、長春新鹼、長春花鹼、長春瑞賓、長春氟寧、長春西汀、長春地辛、玫瑰樹鹼、6-3-氨丙基-玫瑰樹鹼、2-二乙氨乙基-玫瑰樹鹼銨、達替銨、瑞替利汀、紫杉醇、多西他賽、雙氯芬酸、丁哌卡因、17-二甲基氨基乙基氨基-17-脫甲氧格爾德黴素、西替利嗪、非索非那定、撲癇酮和其他兒茶酚胺、腎上腺素、(s)-2-(2,4-二羥基苯基)-4,5-二氫-4-甲基-4-噻唑甲酸(地夫立群)、(s)-4,5-二氫-2-(3-羥基-2-吡啶基)-4-甲基-4-噻唑甲酸(去鐵內鹽)、(s)-4,5-二氫-2-[2-羥基-4-(3,6,9,12-四氧三癸氧基)苯基]-4-甲基-4-噻唑甲酸、(s)-4,5-二氫-2-[2-羥基-4-(3,6-二氧庚氧基)苯基]-4-甲基-4-噻唑甲酸、(s)-4,5-二氫-2-[2-羥基-4-(3,6-二氧庚氧基)苯基]-4-甲基-4-噻唑甲酸乙酯、(s)-4,5-二氫-2-[2-羥基-3-(3,6,9-三氧癸氧基)]-4-甲基-4-噻唑甲酸、去氮雜去鐵內鹽(desazadesferrithiocinsalts)、2'-羥基修飾的紫杉醇、2'-羥基修飾的多西他賽、2'-羥基修飾的卡巴他賽和這些藥學化合物的前藥和衍生物和其混合物。示例性治療劑選自：抗組胺乙二胺衍生物、溴苯那敏、苯海拉明、抗原生動物藥物、喹諾酮、雙碘喹啉、脒化合物、噴他脒、驅蟲化合物、噻嘧啶、抗血吸蟲藥物、奧沙尼喹、抗真菌的三唑衍生物、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、抗菌頭孢菌素、螯合劑、去鐵胺、地拉羅司、去鐵酮、fbs0701、頭孢唑啉、頭孢尼西、頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢呋辛、抗菌劑β-內醯胺衍生物、氨曲南、頭孢三唑、頭孢西丁、紅黴素族的抗菌劑、紅黴素、阿奇黴素、克拉黴素、竹桃黴素、青黴素化合物、苄青黴素、苯氧基甲基青黴素、氯唑西林、二甲氧基苯青黴素、萘夫西林、苯唑西林、羧苄西林、四環素化合物、新生黴素、大觀黴素、萬古黴素；抗分歧桿菌藥物、氨基水楊酸、捲曲黴素、乙胺丁醇、異煙肼、吡嗪醯胺、利福布汀、利福平、氯法齊明、抗病毒的金剛烷化合物、金剛烷胺、金剛乙胺、奎尼丁化合物、奎寧、奎納克林、氯喹、羥化氯喹、伯氨喹啉、阿莫地喹、甲氟喹、抗菌劑、喹諾酮、環丙沙星、依諾沙星、洛美沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、磺醯胺；尿路抗菌劑、呋喃妥因、甲氧苄氨嘧啶；硝基咪唑類衍生物、甲硝唑、膽鹼季胺化合物、ambethinium、新斯的明、毒扁豆鹼、抗-阿爾茨海默病氨吖啶、他克林、抗帕金森藥物、苯扎託品、比哌立登、普環啶、苯海索、抗蕈毒鹼試劑、阿託品、莨菪鹼、東莨菪鹼、丙胺太林、腎上腺素能化合物、多巴胺、5-羥色胺、刺蝟基因抑制劑、沙丁胺醇、多巴酚丁胺、麻黃鹼、腎上腺素、去甲腎上腺素、異丙腎上腺素、間丙醇、沙美特羅、特布他林、5-羥色胺再攝入抑制劑、麥角胺衍生物、肌肉鬆弛劑、箭毒系列、中心作用肌肉鬆弛劑、巴氯芬、環苯扎林、丹曲林、尼古丁、尼古丁受體拮抗物、β-腎上腺素阻斷劑、acebutil、胺碘酮、苯並二氮雜化合物、地爾硫草、抗心律失常藥物、雙異丙吡胺、encaidine、局部麻醉化合物、普魯卡因、普魯卡因胺、移多卡因、氟卡胺、奎尼丁、ace抑制劑、卡託普利、依那普利、hsp90抑制劑、福辛普利、喹那普利、雷米普利；阿片劑衍生物、可待因、哌替啶、美沙酮、嗎啡、antilipidemic、氟伐他汀、吉非羅齊、hmg-coa抑制劑、普伐他汀、血壓過低藥物、可樂定、胍那苄、哌唑嗪、胍乙啶、granadril、肼苯噠嗪、非冠狀血管舒張劑、雙嘧達莫、乙醯膽鹼酯酶抑制劑、匹羅卡品、生物鹼、毒扁豆鹼、新斯的明、任何前述的衍生物、任何前述的前藥和任何前述的類似物。但是，試劑的列舉不旨在限制本發明的範圍。事實上，封裝在脂質體中的化合物可以是任何略微水溶性兩性弱鹼或兩性弱酸。如上述，其中略微水溶性試劑的實施方式不是藥學或醫學試劑的實施方式也包括在本發明內。典型地，在本發明的背景下，略微水溶性兩性弱鹼的辛醇-水分布係數(logd)在ph7下在-2.5和7.0之間和pka3。所述pka在水中測定。典型地，如前述中使用術語弱鹼和弱酸分別指在水中僅僅部分質子化或去質子化的化合物。可質子化的試劑的例子包括具有氨基基團可在酸性介質中質子化的化合物，和在中性介質中是兩性離子並且可也在酸性環境中質子化的的化合物。可去質子化的試劑的例子包括具有羧基的可在鹼性介質中去質子化的化合物，和其在中性介質中是兩性離子並且也可在鹼性環境中去質子化的化合物。術語兩性離子指可同時在不同原子上攜帶正電荷和負電荷的化合物。如在前述中使用，術語兩性的通常用於指具有親脂和親水部分的化合物。前述暗示化合物的水溶液是弱兩性酸或鹼，同時包括帶電的和不帶電形式的所述化合物。僅僅不帶電形式可能夠橫跨脂質體膜。當本發明使用的試劑包含相對鹼性或酸性官能時，這樣的化合物的鹽包括在本發明的範圍內。可通過使中性形式的這樣的化合物接觸足夠量期望的純淨的或適當惰性溶劑中酸或鹼獲得鹽。本發明相對酸性化合物的鹽的例子包括鈉、鉀、鈣、銨、有機氨基或鎂鹽，或類似的鹽。當本發明的化合物包含相對鹼性官能時，可通過使中性形式的這樣化合物接觸足夠量的期望的純淨的或適當惰性溶劑中的酸獲得酸性加成鹽。酸加成鹽的例子包括源自無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、單氫碳酸、磷酸、單氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、單氫硫酸、氫碘酸或亞磷酸等的那些，以及源自下述有機酸的鹽，如：乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富馬酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲磺酸等。也包括胺基酸的鹽，比如精氨酸鹽等，和有機酸的鹽，如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等(見，例如，berge等，journalofpharmaceuticalscience1977，66：1-19)。本發明的某些特定化合物包含允許化合物轉化成鹼或酸加成鹽的鹼性和酸性官能。優選地通過使鹽接觸鹼或酸並且通過常規方式分離親本化合物再生中性形式的化合物。親本形式的化合物與各種鹽形式的某些物理特性不同，比如在極性溶劑中的溶解度，但是為了本發明的目的，鹽以其他方式與化合物的親本形式等同。主動裝載主動裝載的方法涉及使用跨膜勢能。一般而言，本領域廣泛描述了主動裝載的原則。術語主動裝載和遠程-裝載是同義的並且交替使用。主動裝載期間，略微水溶性試劑的沉澱通過跨膜質子-或離子-梯度從外部水性介質橫跨脂質體膜轉移至內部水性介質。術語具體化合物的梯度，如本文所使用指橫跨脂質體膜從脂質體的外側(外部水性介質)至內側(內部水性介質)所述化合物濃度的不連續增加。為了產生濃度梯度，脂質體通常在第一液體、通常水相中生成，隨後替換或稀釋所述第一液相。稀釋或新的外部介質具有不同濃度帶電的物質或完全不同帶電的物質，從而產生離子-或質子-梯度。可通過各種技術實現置換外部介質，比如，通過使製備的脂質膜泡穿過已經用新介質平衡的凝膠過濾柱，例如，sephadex或瓊脂糖柱，或通過離心、透析或相關的技術。主動裝載至脂質體的效率取決於待裝載至複合物的化學特性和施加的梯度的類型和程度等。在本發明的實施方式中，提供了如任何前述限定的方法，其採用橫跨脂質體膜的梯度，其中梯度選自ph-梯度、硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽或乙酸鹽梯度、edta-離子梯度、銨鹽梯度、烷基化的鹽，例如甲基鹽、乙基鹽、丙基鹽和戊基鹽、銨鹽梯度、ca2+、cu2+、fe+2、mg2+、mn2+、zn2+、na+-、k+-梯度，使用或不使用離子載體，或其組合。現有技術已經廣泛描述了這些裝載技術。優選地，預形成的內部水性介質，即，未裝載的，脂質體包括所謂的主動裝載緩衝液，其包含水，並且取決於主動裝載期間採用的梯度的類型，可進一步包括硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽或乙酸鹽、銨鹽、烷基化的鹽，例如，甲基鹽、乙基鹽、丙基鹽和戊基鹽、銨鹽、ca2+、cu2+、fe+2、mg2+、mn2+、zn2+、na+和/或k+-鹽、edta離子鹽，和任選地ph-緩衝液，以維持ph梯度。鹽可以是聚合的，比如葡聚糖硫酸鹽，聚乙烯亞胺，聚醯胺樹狀聚合物、1.5羧酸末端形式的聚醯胺、多磷酸鹽、低分子量肝素或透明質酸。在示例性實施方式中，未裝載的脂質體的內部水性介質中鹽的濃度在1和1000mm之間。用於為主動裝載產生跨膜梯度的外部水性介質包括水、待裝載的略微水溶性試劑(一種或多種)的沉澱，和任選地蔗糖、調整滲透性的生理鹽水或一些其他試劑和/或螯合劑，如edta以幫助離子載體活性，更優選地蔗糖和/或edta。在示例性實施方式中，梯度選自下述的胺或金屬鹽：羧酸鹽、硫酸鹽或磷酸鹽或乙酸鹽。如本領域技術人員一般已知的，跨膜ph梯度(較低的內側ph，較高的外側ph)或陽離子乙酸鹽梯度可用於主動裝載兩性分子弱酸。兩性弱鹼也可使用硫酸銨或三乙胺硫酸鹽、三乙胺葡聚糖硫酸鹽或氯化銨-梯度主動裝載至脂質體。本發明中使用的羧化物包括但不限於羧酸鹽、檸檬酸鹽、二亞乙基三胺五乙酸鹽、苯六酸乙酸鹽、1,2,3,4-丁烷四羧化物、苯甲酸鹽、異酞酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、3,4-雙(羧甲基)環戊烷羧化物、羧酸代聚醯胺樹狀聚合物、苯三羧化物、苯四羧化物、抗壞血酸鹽、抗壞血酸磷酸鹽(ascorbatephosphate)、葡糖醛酸鹽和磺酸鹽。本發明中使用的硫酸鹽包括但不限於硫酸鹽、1,5-萘二磺酸鹽、葡聚糖硫酸鹽、磺酸丁基醚β環糊精、蔗糖八硫酸苯磺酸鹽、聚(4-苯乙烯磺酸鹽)順白藜蘆醇三硫酸鹽。本發明使用的磷酸鹽類包括但不限於磷酸鹽、抗壞血酸磷酸鹽、六偏磷酸鹽、磷酸鹽玻璃、多磷酸鹽、三磷酸鹽、三偏磷酸鹽、雙膦酸鹽、乙烷羥基雙膦酸鹽、肌醇六磷酸鹽。本發明中使用的示例性鹽包括羧酸鹽、硫酸鹽或磷酸鹽的混合物，包括但不限於2-羧基苯磺酸鹽、肌酸磷酸鹽、磷酸膽鹼、肉鹼磷酸鹽、羧基代聚醯胺。本發明使用的胺包括但不限於一元胺、聚胺、三甲基銨、三乙基銨，三丁基銨、二乙基甲基銨、二異丙基乙基銨、三異丙基銨、n-甲基嗎啉、n-乙基嗎啉、n-羥基乙基哌啶、n-甲基吡咯烷、n,n-二甲基哌嗪、異丙基乙基銨、異丙基甲基銨、二異丙基銨、叔丁基乙基銨、二環已基銨、質子化形式的嗎啉、吡啶、哌啶、吡咯烷、哌嗪、咪唑、叔丁基胺、2-氨基-2-甲基丙醇、2-氨基-2-甲基-丙二醇、三-(羥乙基)-氨基甲烷、二乙基-(2-羥乙基)胺，三-(羥甲基)-氨基甲烷四甲基銨鹽、四乙基銨、n-甲基葡糖胺和四丁基銨、聚乙烯亞胺和聚醯胺樹狀聚合物。取決於脂質膜泡膜的通透性，自發形成對應濃度梯度的完全跨膜潛能或通透性增強試劑，例如，質子離子載體可添加至介質。如果期望，可使用色譜或其他技術在完成裝載複合物之後從脂質體製劑去除通透性增強試劑。通常，主動裝載期間介質的溫度在約-25℃和約100℃之間，例如，約0℃和約70℃之間，例如，約4℃和65℃之間。定義為內部水相中略微水溶性試劑的封裝量除以外部水相中初始量乘以100％的封裝或裝載效率(例如，以試劑克數/磷脂摩爾數或藥物g數/總脂質g數測量)是至少10％，優選地至少50％，至少90％。在示例性實施方式中，本發明提供了將略微水溶性試劑裝載至脂質體的方法。示例性方法包括，在適於在所述脂質體中封裝所述略微水溶性試劑的條件下使所述脂質體的水懸液接觸所述試劑的水懸液，其中所述脂質體具有脂質膜封裝的內部水性環境，且所述脂質體的所述水懸液包括橫跨所述膜的選自下述的梯度：質子梯度、離子梯度和其組合，且其中所述條件適於所述略微水溶性試劑穿過所述膜並且在所述內部水性環境中濃縮，從而形成所述藥物製劑。在各種實施方式中，上述反應混合物被溫育選擇的時間段並且在溫育期間橫跨脂質體膜存在ph梯度、硫酸鹽梯度、磷酸鹽梯度、羧酸鹽梯度(檸檬酸鹽梯度、乙酸鹽梯度等)、edta離子梯度、銨鹽梯度、烷基化的銨鹽梯度、ca2+、cu2+、fe+2、mg2+、mn2+、zn2+、na+梯度、k+梯度或其組合。在本發明的示例性實施方式中，略微水溶性治療劑不共價連接至脂質體的組分，也不共價連接至用於形成本發明脂質體試劑製劑的ph或鹽梯度的任何組分。非質子溶劑在示例性實施方式中，略微水溶性試劑完全溶解在與水混溶的非質子溶劑中。試劑溶液以大於藥物試劑在脂質體懸浮或脂質體懸浮/非質子溶劑混合物中溶解度的濃度添加至水性脂質體懸液，因此形成沉澱。示例性非質子溶劑包括二甲亞碸、二噁烷、四氫呋喃、二甲基甲醯胺、乙腈、二甲基乙醯胺、環丁碸、γ丁內酯、吡咯烷酮、l-甲基-2-吡咯烷酮、甲基吡咯啉、乙二醇一甲基醚、二甘醇一甲基醚、peg400和聚乙二醇。略微水溶性試劑沉澱本發明描述了不溶解的沉澱的裝載。示例性的沉澱的概念為懸液中試劑的一些不溶解的部分。不溶解的部分定義為不溶解的一部分試劑，如下述任何所指示：任何朦朧外觀大於沒有該試劑的脂質體懸液的外觀，任何程度的增加在其中內容物不吸收光的波長下比如在600nm的光散射大於單獨脂質體懸液、通過在小於12,000rpm離心15min可分離(小球化)的任何部分的藥物，可通過0.2um過濾器過濾分離的任何部分的藥物試劑。試劑盒在示例性實施方式中，本發明提供了試劑盒，其包含本發明的脂質體或製劑的一個或多個組分和如何組合和使用組分和從組合產生的製劑的說明書。在各種實施方式中，試劑盒包含在一個容器中的略微水溶性試劑和在另一容器中的脂質體製劑。示例性脂質體製劑包括脂質膜外側和內側的鹽分布，以產生和/或維持離子梯度，比如本文所述的。也包括的是組合容器內容物的說明書，以產生本發明的脂質體或其製劑。在各種實施方式中，複合物和脂質體的量足夠配製單位劑量形式的複合試劑。在示例性實施方式中，一個容器包括脂質體或脂質體溶液，其用於將略微水溶性治療劑製劑的容器的至少部分內容物(例如，批准的治療劑)在施用至對象的護理點轉化成封裝治療劑的脂質體。在示例性實施方式中，容器的內容物足夠配製單位劑量形式的治療劑。在其中形成單位劑量形式的實施方式中，容器包括約1mg至約500mg的治療劑，例如，約1mg至約200mg，例如，約5mg至約100mg，例如，約10mg至約60mg。在示例性實施方式中，批准的治療劑是卡非佐米並且其在容器中存在的量是約40mg至約80mg，例如，約50mg至約70mg。在示例性實施方式中，存在的卡非佐米是約60mg。治療方法在一個方面中，本發明提供了治療對象，例如，人中增生性病症例如癌症的方法，所述方法包括以有效治療病症的量向對象施用包括本發明的藥物製劑的組合物，從而治療增生性病症。在一種實施方式中，與一個或多個另外抗癌劑，例如，化療劑，例如，本文所述的化療劑或化療劑的組合，以及輻射，施用藥物製劑。在一種實施方式中，癌症是本文所述的癌症。例如，癌症可以是膀胱癌(包括加速的和轉移膀胱癌)、乳腺癌(例如，雌激素受體陽性乳腺癌；雌激素受體陰性乳腺癌；her-2陽性乳腺癌；her-2陰性乳腺癌；孕酮受體陽性乳腺癌；孕酮受體陰性乳腺癌；雌激素受體陰性、her-2陰性和孕酮受體陰性乳腺癌(即，三陰性乳腺癌)；炎症乳腺癌)，結腸癌(包括結腸直腸癌)、腎癌(例如，過渡性細胞癌)、肝癌、肺癌(包括小細胞肺癌和非小細胞肺癌、肺腺癌和鱗狀的細胞癌症)、泌尿生殖道癌，例如，卵巢癌(包括輸卵管癌和腹膜癌)、宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、腎癌和輸尿管癌、淋巴腺系統癌、直腸癌、喉頭癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食道癌、胃癌、膽囊癌、甲狀腺癌、皮膚癌(包括鱗狀細胞癌)、腦癌(包括多形性成膠質母細胞瘤)、頭頸癌(例如，潛伏的原發性癌)，和軟組織癌(例如，卡波西氏肉瘤(例如，aids相關的卡波西氏肉瘤)、平滑肌肉瘤、血管肉瘤和組織細胞瘤)。在示例性實施方式中，癌症是多發性骨髓瘤或實體瘤。在一種實施方式中，本發明的藥物製劑包括作為略微水溶性治療劑的卡非佐米。在一個方面中，本公開描述了治療對象例如人中與炎症相關的疾病或病症的方法，例如，過敏反應或自身免疫性疾病，所述方法包括：以有效治療病症的量施用包含本發明藥物製劑的組合物至對象，從而治與炎症相關的療疾病或病症。在一種實施方式中，與鐵超負荷相關的疾病或病症例如在患者接受多個單位的輸血時發生，例如在地中海貧血、鐮刀型貧血、跌打損傷或骨髓移植後發生。鐵超負荷可以是局部的，例如可以在子宮內膜異位症中發生，這歸因於紅細胞外滲入局部組織，在那裡引起炎症性免疫應答。在一種實施方式中，與炎症相關的疾病或病症是本文所述的疾病或病症。例如，與炎症相關的疾病或病症可以是例如，多發性硬化、風溼性關節炎、銀屑病關節炎、退行性關節疾病、spondouloarthropathies、痛風性關節炎、系統性紅斑狼瘡、幼年關節炎、風溼性關節炎、骨關節炎、骨質疏鬆症、糖尿病(例如，胰島素依賴性糖尿病或幼年出現的糖尿病)、經期痙攣、囊性纖維化、炎性腸炎、過敏性腸綜合症、克羅恩病、粘液性結腸炎、潰瘍性結腸炎、胃炎、食管炎、胰腺炎、腹膜炎、阿爾茨海默氏疾病、休克、強直性脊柱炎、胃炎、結膜炎、胰腺炎(急性或慢性)、多器官損傷綜合症(例如，敗血症或創傷繼發的)、心肌梗死、動脈粥樣硬化、中風、再灌注損傷(例如，由於心肺轉流術或腎透析)、急性腎小球性腎炎、血管炎、熱損傷(即，曬傷)、壞死性小腸結腸炎、粒細胞輸血相關的綜合症、和/或斯耶格倫氏症候群。示例性皮膚炎症病況包括，例如，溼疹、遺傳過敏性皮炎、接觸性皮炎、蕁麻疹、硬皮病、牛皮癬，和具有急性炎症組分的皮膚病。在一些實施方式中，自身免疫性疾病是器官-組織自身免疫性疾病(例如，raynaud綜合症)、硬皮病、重症肌無力、移植排斥、內毒素休克、膿毒、牛皮癬、溼疹、皮炎、多發性硬化、自身免疫甲狀腺炎、葡萄膜炎、全身性紅斑狼瘡、阿狄森病、自身免疫性多腺疾病(也稱為自身免疫多腺綜合症)，或grave疾病。在另一實施方式中，本發明的藥物製劑或本文所述的方法可用於治療或預防變態反應和呼吸病況，包括哮喘、支氣管炎、肺的纖維化、過敏性鼻炎、氧毒性、氣腫、慢性支氣管炎、急性呼吸窘迫綜合症，和任何慢性阻塞性肺部疾病(copd)。本發明的藥物製劑、顆粒或組合物可用於治療慢性肝炎感染，包括B型肝炎和C型肝炎。在一個方面中，本公開描繪了治療對象例如人中心血管疾病例如心臟疾病的方法，所述方法包括以有效治療病症的量施用本發明的藥物製劑至對象，從而治療心血管疾病。在一種實施方式中，心血管疾病是本文所述的疾病或病症。例如，心血管疾病可以是心肌病或心肌炎；比如特發性心肌病，代謝心肌病，酒精性心肌病，藥物誘導的心肌病，缺血性心肌病，和高血壓心肌病。使用本發明的藥物製劑，本文所述的顆粒、組合物和方法也可治療或預防的是主要血管的動脈粥樣硬化病症(大血管疾病)比如主動脈、冠狀動脈、頸動脈、腦血管動脈、腎動脈、腸動脈、股動脈和膕動脈。可治療或預防的其他血管疾病包括與下述相關的那些：血小板聚集、視網膜小動脈、小球小動脈、神經滋養血管、心臟小動脈和相關的眼睛的毛細管床、腎、心臟和中樞和周圍神經系統。可用本發明的藥物製劑治療的仍其他病症包括再狹窄，例如，冠狀動脈介入後，和與異常水平的高密度和低密度膽固醇相關病症。在一種實施方式中，本發明的藥物製劑可施用至正在經歷或已經經歷血管成形術的對象。在一種實施方式中，本發明的藥物製劑、顆粒或組合物用施用至正在經歷或已經經歷具有支架植入的血管成形術的對象。在一些實施方式中，本發明的藥物製劑、顆粒或組合物可用作支架的支柱或支架的塗層。在一個方面中，本發明提供了治療對象例如人中與腎相關的疾病或病症例如腎病症的方法，所述方法包括：以有效治療病症的量施用本發明的藥物製劑至對象，從而治療與腎疾病相關的疾病或病症。在一種實施方式中，與腎相關的疾病或病症是本文所述的疾病或病症。例如，與腎相關的疾病或病症可以是例如急性腎衰竭、急性腎綜合症、鎮痛藥腎病、atheroembolic腎疾病、慢性腎衰竭、慢性腎炎、先天性腎病綜合症、晚期腎疾病、肺出血腎炎症候群、間質性腎炎、腎損傷、腎感染、腎損傷、腎結石、狼瘡腎炎、膜增生性gni、膜增生性gnii、膜性腎病、微小病變、壞死性腎小球性腎炎、成腎細胞瘤、腎兮質沉著症、腎源性尿崩症、腎變性病(腎病綜合症)、多囊性腎病，鏈球菌感染後腎小球腎炎、逆流腎病、腎動脈栓塞、腎動脈狹窄、腎乳頭狀壞死、i型腎管狀酸中毒、ii型腎管狀酸中毒、腎灌注不足、腎靜脈血栓形成。在一種實施方式中，所述疾病或障礙因微生物或病毒導致。這些病原體可以是病毒，例如hiv；真菌，例如麴黴菌病；細菌，例如葡萄球菌屬(staphylococcus)；原生生物，例如瘧疾；或多細胞病原體，例如schistosomyosis。「有效量」或「有效量的」指本發明的藥物製劑當單個或多個劑量施用至對象時有效處理細胞或治癒、減輕、緩解或改善病症的症狀的量。組合物的有效量可根據下述因素而改變：比如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重，和化合物在個體中引起期望應答的能力。有效量也是其中組合物的治療有益的超過任何有毒或有害作用的量。如本文所使用，術語「預防」或「預防的」，如在將試劑施用至對象的背景下使用，指使對象經歷下述方案，例如，施用本發明的藥物製劑使得相比在沒有該方案的情況下，病症的至少一種症狀的出現被延遲。如本文所使用，術語「對象」旨在包括人和非人動物。示例性人對象包括具有病症，例如，本文所述病症的人患者，或正常對象。術語「非人動物」包括所有的脊椎動物，例如，非哺乳動物(比如雞、兩棲動物、爬行動物)和哺乳動物，比如非人靈長類、家養的和/或農業用途的動物，例如，綿羊、狗、貓、母牛、豬等。如本文所使用，術語「治療(treat)」或「治療(treating)」具有病症的對象，指使對象進行方案，例如，施用本發明的藥物製劑使得病症的至少一種症狀被治癒、癒合、緩解、減緩、改變、補救、減輕或改善。治療包括施用有效減輕、緩解、改變、補救、減輕、改善或影響病症或病症症狀的量。治療可抑制病症症狀的劣化或惡化。提供下述實施例，以闡釋本發明的示例性實施方式並且不解釋為限制本發明的範圍。實施例實施例1通過遠程裝載捕獲的卡非佐米脂質體材料和方法通過將硫酸銨固體溶解至終濃度為250mm(500m當量的陰離子/l)製備硫酸銨溶液，不進行ph調節，以產生終ph為5.6。通過添加0.35g硫酸鈉至10ml去離子水製備硫酸鈉溶液(250mm)。通過擠出形成脂質體。在65℃下脂質溶解在乙醇中，濃度為500mmhspc(591mg/ml總脂質)並且加熱至65℃的9體積的捕獲試劑溶液添加至也在65℃的乙醇/脂質溶液。使混合物起漩渦並且轉移至10ml恆溫控制(65℃)lipex擠出機。通過經具有0.1um孔的聚碳酸酯膜擠出10次形成脂質體。在擠出之後，脂質體在冰上冷卻。通過在分子量截取為12,000-14,000的透析管道系統中透析純化脂質體形成跨膜電化學梯度。用5mmhepes，10％蔗糖ph6.5(在4℃下攪拌)，以大於樣品體積100倍體積透析樣品。2h之後改變透析液，在每12h之後再4次。測量脂質體溶液的電導率並且不能與透析介質區分，～40μs/cm。通過hplc測量膽固醇而測量脂質濃度，使用agilent1100hplc用和agilentzorbax5um，4.6x150mm，eclipsexdb-c8柱和流動相a＝0.1％tfa，b＝0.1％tfa/meoh，無梯度洗脫為99％b。流速是1.0ml/min，柱溫度是50℃，10μl注射和通過在205nm的吸光度檢測。膽固醇的保留時間是4.5min。通過動態光散射測量脂質體尺寸。卡非佐米(selleckchemicals)溶解在dmso中，濃度為10mg/ml。卡非佐米引入脂質體卡非佐米與hspc比例為100g藥物/molhspc(藥物與總脂質比例(wt/wt)為0.12)。用50mm檸檬酸鹽、10％蔗糖ph4.0稀釋脂質體，以增加體積至添加藥物之後終dmso濃度是2％的點。卡非佐米/dmso添加至稀釋的脂質體，其在室溫下混合然後轉移至65℃浴並且頭3min每30s起漩渦並且然後在30min的總加熱時間內每5min起漩渦。當添加藥物時所有的樣品非常濃，並且15min之後所有的都變透明(與沒有藥物添加的脂質體相同)。在加熱30min之後，所有的樣品放置在冰上15min。裝載的脂質體起漩渦並且100μl的樣品保持為「柱前」並且靜置轉移至微離心管並且在10,000rpm下旋轉5min。在sephadexg25柱上純化上清液，通過hplc收集和分析。在如為分析膽固醇描述的相同的系統上進行卡非佐米的hplc分析。流動相由a＝0.1％tfa、b＝0.1％tfa/meoh組成，以50％b開始梯度洗脫並且在13min內增加至83％b，7min平衡回至50％b。流速是1.0ml/min，柱溫度是30℃，10μl注射和通過在205nm的吸光度檢測。卡非佐米的保留時間是12.2min。通過hplc分析膽固醇測定脂質濃度。結果裝載包含250mm硫酸銨的脂質體當以100g藥物/mol的hspc脂質添加藥物(95.26±3.47％的效率)時，產生終藥物與脂質比例為95.26±3.47g藥物/mol的hspc脂質體和當以200g藥物/mol的hspc脂質添加藥物時(67.94±3.67％的效率)時，終藥物與脂質比例為136.9±7.35g藥物/mol的hspc脂質體(圖2)。這表明這些具體脂質體的裝載容量在100和200g藥物/mol磷脂之間。沒有用於遠程裝載的電化學梯度的包含250mm硫酸鈉的對照脂質體當以100和200g藥物/mol的hspc比例添加藥物時分別產生的終藥物裝載為33.28±0.79和29.01±0.79g藥物/mol的hspc。這表明低於100g藥物/mol的hspc裝載這些脂質體的容量是飽和的並且以該藥物輸入比例遠程裝載脂質體展示>3倍更高的裝載容量。藥物裝載容量對於硫酸鈉脂質體比硫酸銨脂質體的飽和至少3倍更低的比例，指示當遠程裝載沒有電化學梯度時，藥物分割進入脂質雙層，但是不與內部捕獲試劑形成鹽。圖5圖解了在用硫酸鈉脂質體的裝載過程之後仍存在沉澱，但是用硫酸銨脂質體沒有。結論具有相同脂質基質組成和尺寸，但是內部捕獲的硫酸組成不同的脂質體鹽的脂質體具有不同的裝載卡非佐米容量。能夠產生電化學梯度(硫酸銨)的脂質體在最佳條件下能夠裝載接近至100％的藥物並且能夠產生具有差裝載效率的梯度，提示遠程或主動裝載是卡非佐米併入脂質體的主要機制。實施例2比較脂質體捕獲試劑介紹在旨在作為鹽複合裝載藥物的離子溶液中形成用於遠程裝載的脂質體。捕獲試劑可與裝載藥物形成複合物並且該複合物的穩定性是指示脂質體藥物裝載能力、穩定性和藥物釋放速度的一個因素。通過評估卡非佐米裝載的效率進行比較不同的脂質體捕獲試劑。方法使用三個脂質體製劑，所有的摩爾比3hspc/2chol/0.15peg-dspe，每個具有不同的捕獲試劑：1.苯六酸；2.硫酸銨；和3.萘二磺酸。苯六酸(ma)溶解在水中並且用二乙胺滴定至終ph為5.5和濃度為83mm(500m當量的陰離子/l)。通過將硫酸銨固體溶解至終濃度為250mm(500m當量的陰離子/l)製備硫酸銨，不進行ph調節，以產生終ph為5.6。萘二磺酸(nds)溶解在水中並且用二乙胺滴定至終ph為8.0和濃度為250mm(500m當量的陰離子/l)。如何製備、純化和表徵脂質體的細節見實施例1，通過遠程裝載捕獲卡非佐米脂質體。表1.裝載卡非佐米的脂質體的尺寸為了保完全去除與卡非佐米一起添加的dmso，在分子量截取為12,000-14,000的透析管道系統中透析脂質體卡非佐米樣品。用5mmhepes，10％蔗糖ph6.5(在4℃下攪拌)，以大於樣品體積100倍體積透析樣品。2h之後改變透析液，然後在12h之後每次另外2次。再次如上述分析藥物和脂質濃度的卡非佐米脂質體。結果對於捕獲試劑為苯六酸、硫酸銨和萘二磺酸的脂質體，卡非佐米以100g藥物/mol的hspc脂質遠程裝載至脂質體的效率分別為37.4％±2.01％、97.0％±2.38％和95.1％±1.76％(圖3)。結論本文描述的發明確保可用包括苯六酸、硫酸銨和萘二磺酸的各種捕獲試劑產生的各種使用電化學梯度實現來自不溶解沉澱的卡非佐米遠程裝載至脂質。實施例3比較引入藥物的方法方法比較裝載程序期間用於添加藥物至脂質體的方法。裝載程序如上面實施例1描述的相同，不同之處是藥物作為固體粉末添加至脂質體裝載溶液，作為10mg/mldmso溶液快速和作為10mg/mldmso溶液緩慢。結果對於作為固體粉末添加的藥物，卡非佐米以100g藥物/mol的hspc脂質遠程裝載至脂質體的效率當加熱至65℃30和120min時分別是3.88％±0.053％和3.47％±0.030％。當快速添加藥物/dmso時，作為10mg/mldmso溶液的裝載藥物的效率是97.0％±2.38％和當藥物/dmso在1min內以5個遞增添加至脂質體溶液同時起渦流時是96.3％±1.09％。來自緩慢藥物添加的藥物/脂質體混合物比源自快速添加藥物的藥物/脂質體混合物更清澈。但是，在加熱至65℃，30min之後，兩個溶液都沒有可見的沉澱(或以10,000rpm，5min的離心沉澱)，其是由於所有的藥物裝載至脂質體，無論當添加藥物時是否形成沉澱(圖4)。實施例4在室溫下卡非佐米裝載至脂質體介紹在室溫下將藥物裝載至脂質體的能力有利於降低熱誘導的藥物降解，簡單地製造和允許床邊脂質體裝載。有效的運輸橫跨脂質體膜要求膜為流動相。這通過在裝載過程期間將脂質體加熱高於tm，用具有高相變溫度(tm)的飽和的磷脂，比如hspc(tm＝55℃)實現。加熱的可選方式是使用在室溫下為流動相的脂質。這些脂質的劣勢是它們在循環中不穩定並且產生快速藥物釋放。固醇改性的脂質併入新的脂質構建，其中膽固醇(甾醇)共價連接至磷酸頭基。已經證明了固醇改性的脂質使得甾醇在循環中與脂質雙層不可交換的。固醇改性的脂質在室溫下也是流動相，使得它們對於室溫裝載藥物至待用於體內遞送療法的脂質體是理想的。方法通過使用兩個脂質體製劑進行在室溫下裝載卡非佐米至脂質體，所述脂質體製劑由摩爾比95pchemspc/5peg-dspe的和另一摩爾比3popc/2chol/0.15peg-dspe的組成，每個包含250mm硫酸銨作為捕獲試劑。使用如實施例1中描述的程序、藥物/脂質體比例、ph下的緩衝液製備脂質體。在室溫下(20℃)攪拌脂質體並且卡非佐米作為10mg/mldmso溶液在1min內5個遞增添加，以產生渾濁溶液。在室溫下攪拌脂質體/藥物混合物總共30min，以產生透明溶液，相同外觀如添加藥物之前的脂質體溶液。結果以100g藥物/mol的pchemspc，卡非佐米遠程裝載至脂質體的效率是95.5％±1.23％。以187g藥物/mol的3popc/2chol/0.15peg-dspe，卡非佐米遠程裝載至脂質體的效率是100.52％±1.01％。結論本文描述的發明，不能通過直接將結晶形式的藥物添加至裝載溶液，將卡非佐米裝載至脂質體。藥物需要溶解在一些溶劑中，然後以高於藥物溶解度的濃度添加至裝載溶液。當將藥物添加至裝載溶液時形成的沉澱的脂質體裝載效率不依賴於在該情況下使用卡非佐米的添加。實施例5藥物沉澱裝載至脂質體，如通過在600nm的光散射測定。介紹脂質體裝載來自沉澱的藥物至脂質體的證據是所得藥物與脂質比例和隨著藥物沉澱轉移至脂質體，溶液的清澈。為了獲得從藥物沉澱的定量測量脂質體裝載，在裝載過程期間，在600nm下測量光散射。方法脂質體包含250mm硫酸銨作為捕獲試劑和250mm硫酸鈉作為不遠程裝載藥物的對照脂質體。製備脂質體不去使用實施例1中描述的程序裝載，不同之處是一次性聚苯乙烯試管用作反應容器。用uv/vis分光光度計在裝載過程期間測量在600nm處的光散射。結果/結論硫酸鈉脂質體在裝載程序期間不顯示沉澱的任何澄清，指示藥物不遠程裝載至脂質體。(見圖5)。硫酸銨脂質體有效裝載藥物，在15min內使得溶液澄清。實施例6確認從遠程裝載脂質體的藥物釋放介紹反相梯度用於嘗試從脂質體中釋放活性藥物。理論是如果藥物可從脂質體內以反相梯度釋放，則存在藥物釋放可能在體內發生的良好機會。方法如在實施例1中描述描述用卡非佐米裝載脂質體並且純化至去離子水。樣品分成兩個等分試樣。向第一等分試樣，添加濃縮的hepesph7.4和nacl，從而終濃度是5mmhepes、145mmnacl(hbs)。向第二等分試樣，添加濃縮的硫酸銨，從而終濃度是250mm。沒有初始觀察到明顯的物理改變。然後在65℃下加熱樣品30min。將樣品轉移至清潔eppendorf管並且10,000rpm離心5min，其後分開上清液和沉澱並且通過hplc試驗測試卡非佐米含量。釋放藥物的沉澱，殘留在上清液中封裝藥物的脂質體。如下計算釋放的％卡非佐米：結果溶液組合物％釋放的卡非佐米hepes緩衝生理鹽水10.6±0.28硫酸銨68.5±1.82表2.從脂質體的反相梯度引導的藥物釋放使用反相梯度的藥物釋放比從沒有反相梯度對照的藥物釋放大6.5倍(表2)。釋放藥物的hplc色譜圖與開始材料相同，指示沒有發生卡非佐米的降解(圖7)。卡非佐米的原料液的hplc保留時間是12.15min和從遠程裝載脂質體釋放的卡非佐米的保留時間是12.27min，如圖6中顯示。結論使用反相梯度從脂質體釋放卡非佐米，以產生如hplc分析指示的初始分子。實施例7作為dmso含量的函數的卡非佐米裝載介紹當添加至脂質體時，藥物的物理形式對於裝載效率是重要的，即，當作為乾燥粉末添加時，幾乎沒有觀察到裝載，但是使用非質子溶劑中的預溶解的溶液添加可導致高的捕獲效率。該研究研究非質子溶劑濃度對卡非佐米的藥物裝載效率的作用。方法包含硫酸銨的脂質體稀釋在50mm檸檬酸蔗糖(10％wt/wt)緩衝液ph4.0至1mm磷脂。添加各種量的dmso，從而當從10mg/mldmso的卡非佐米溶液添加200μg藥物時，終dmso濃度範圍是1-10％v/v。結果dmso對卡非佐米遠程裝載至脂質體的能力具有顯著影響。當缺少時，實際上無裝載。在濃度1％和之上，裝載效率範圍是74-94％，在更高的dmso濃度下觀察到更高的效率(圖7)。應當注意，在所有樣品中在開始裝載之前觀察到藥物沉澱，提示本文使用的dmso的濃度小於以使用的藥物濃度(0.2mg/ml)有效溶解卡非佐米需要的最小濃度。結論引入預溶解的卡非佐米對於有效的遠程裝載是必要的。但是，高於1％dmso，存在裝載效率相對小的改變，多達10％。實施例8作為dmso含量的函數的卡非佐米溶解度介紹在上述條件下，卡非佐米溶解在dmso中，然後稀釋在脂質體緩衝液溶液然後裝載。其然後就在遠程裝載之前沉澱。該研究設計為在室溫下和在脂質體裝載至由高tm脂質(65℃)組成的脂質體需要的溫度下測定有效溶解卡非佐米的dmso濃度。方法卡非佐米從dmso中的原料10mg/ml溶液添加至1ml的檸檬酸/dmso混合物，從而dmso的組分是2％、25％、50％、75％和100％。終藥物濃度是0.2mg/ml。製備溶液並且測量600nm處的光密度。600nm處的光密度是溶液中多少渾濁或多少散射材料(比如藥物沉澱)的良好測量，一般而言，沉澱越多，吸光度越高。從圖8，明顯的是在小於50％vol/vol(25℃)和25％vol/vol(65℃)的dmso濃度下，藥物以沉澱形式殘留。僅僅當dmso的濃度增加時，其的確在0.2mg/ml的濃度下有效溶解。為了測試25％dmso中脂質體的完整性，我們嘗試遠程裝載水溶性弱鹼藥物多柔比星和17-二甲基氨基乙基氨基-17-脫甲氧格爾德黴素(17-dmag)並且比較沒有dmso的相同裝載。我們發現不利影響裝載效率(表3)。結果在0.2mg/ml卡非佐米下，藥物沉澱和聚集足夠大產生在600nm處的光散射信號。隨著％dmso增加，信號降低並且指示藥物的溶解。我們觀察到>25％vol/voldmso對於以0.2mg/ml在65℃溫度下完全溶解藥物是必要的。藥物％dmso％與沒有dmso的對照相比的效率阿黴素2592.7±0.4317-dmag2573.1±1.4表3.比較在存在和沒有25％dmso的情況下，遠程裝載阿黴素和17-dmag至含硫酸銨的脂質體。結論使用10％v/v或更低的dmso進行之前的研究裝載卡非佐米，並且上面的光散射結果顯示大部分藥物在這些條件下是使用濃度的沉澱形式。添加足夠非質子溶劑至完全溶解的藥物(即大於25％dmso，在65℃下)對於兩性的弱鹼藥物的脂質體裝載具有不利影響，指示由例如內容物滲漏或電化學梯度消失造成的脂質體不穩定。在維持好的脂質體穩定性的條件下，我們沒有發現完全溶解卡非佐米的dmso濃度或可選地我們沒有發現藥物完全溶解並且同時脂質體未不利不穩定的使用dmso的條件。實施例9在形成藥物沉澱之後，對卡非佐米的脂質體裝載的延遲影響介紹該申請中描述的發明允許不溶解的藥物沉澱裝載至脂質體。實施例9評估了藥物沉澱的形成時間和起裝載至脂質體時間的作用。程序由實施例1中描述的相同組合物和方法製備脂質體。卡非佐米溶解在dmso，濃度為10mg/ml並且我們添加至2％(v/v)的終濃度至50mm檸檬酸鹽，10％蔗糖，ph3.5，不包含脂質體。當添加藥物至檸檬酸鹽緩衝液時，形成沉澱。在形成之後立即，1h延遲之後或12h延遲之後，將用於裝載的脂質體添加至包含藥物沉澱的溶液，並且然後將沉澱使用實施例1中描述的裝載條件裝載至脂質體。結果/結論形成藥物沉澱的之間和裝載沉澱的時間對卡非佐米的脂質體裝載程序的效率沒有明顯影響，即使如果延遲時間多達12h。實施例10脂質體藥物載荷對卡非佐米從沉澱裝載的效率的影響程序由如比較捕獲試劑中描述相同的組合物和方法製備脂質體，不同之處是捕獲試劑內部硫酸銨的濃度是250mm或500mm。卡非佐米溶解在dmso中，濃度為10mg/ml。卡非佐米引入脂質體，對於250mm硫酸銨作為捕獲試劑的脂質體，卡非佐米與hspc比例為91.8、167、251、338和433g藥物/molhspc和對於500mm硫酸銨作為捕獲試劑的脂質體，卡非佐米與hspc比例未451、546、639和759g藥物/molhspc。用50mm檸檬酸鹽、10％蔗糖ph4.0稀釋脂質體以使體積增加至添加藥物之後，終dmso濃度是10％的點。卡非佐米/dmso添加至稀釋的脂質體，其在室溫下混合，然後轉移至65℃浴並且對於頭3min每30s起漩渦，並且然後對於30min的總加熱時間每5min起漩渦。當添加藥物時，所有的樣品非常渾濁並且在15min之後都變清澈(與沒有添加藥物的脂質體相同)。在加熱30min之後，所有的樣品放置在冰上15min。如實施例1中描述純化和分析裝載的脂質體。結果/結論表4.硫酸銨捕獲試劑濃度對從卡非佐米的沉澱裝載的脂質體藥物載荷的影響隨著裝載溶液中藥物與脂質體輸入脂質比例增加，所得藥物載荷增加。在用於每個不同濃度的硫酸銨捕獲試劑的最低輸入比例下，效率最大。使用該實施例中描述的條件，卡非佐米可從不溶解的沉澱裝載至脂質體至終藥物載荷為469±4.9g藥物/molhspc(藥物/載體總脂質重量比為0.4)，效率為61.7±1.2％。實施例11使用三乙基硫酸銨梯度，將不溶解的卡非佐米裝載至脂質體介紹通常使用硫酸銨梯度實現遠程裝載藥物至脂質體。包括使用本文的例子卡非佐米的一些藥物分子具有環氧化物基團，其對於活性是必要的。這些藥物的環氧化物潛在地經受從用於硫酸銨遠程裝載的任何殘留氨氨解。在該實施例11中，硫酸銨用三乙基硫酸銨遠程裝載劑替換，以通過用非活性三乙胺置換來消除潛在的氨/環氧化物反應。方法通過使用如用遠程裝載卡非佐米脂質體捕獲中描述的相同組合物和程序製備脂質體，不同之處是50mm三乙基硫酸銨用作捕獲試劑。通過用三乙胺滴定1m硫酸至終ph為7.3和硫酸濃度為500mm製備三乙基硫酸銨。卡非佐米溶解在dmso中，濃度為10mg/ml。卡非佐米引入脂質體，卡非佐米與hspc比例為650g藥物/molhspc。用50mm檸檬酸鹽、10％蔗糖ph4.0稀釋脂質體，以使體積增加至在添加藥物之後終dmso濃度是10％的點。卡非佐米/dmso添加至稀釋的脂質體，起在室溫下混合，然後轉移至65℃浴並且頭3min每30s起漩渦並且然後每5min起漩渦。在裝載程序期間10、20、30和40min去除裝載混合物的樣品並且放置在冰上15min。使裝載脂質體起漩渦並且100μl的樣品保持為「柱前」並且靜置轉移至微離心管並且在10,000rpm下旋轉5min。在sephadexg25柱上純化上清液，通過hplc收集和分析。藥物沉澱小球溶解在dmso/meoh(10:1)中並且通過hplc分析。結果/結論使用三乙基硫酸銨梯度將不溶解的卡非佐米沉澱裝載至脂質體，產生與使用硫酸銨梯度產生的那些類似的脂質體(實施例1)。圖12圖解了對於到10min快速開始的脂質體裝載的時間依賴性。在30min實現了最大載荷是440±12.6g藥物/molhspc(效率為65.9±1.98％)。使用500mm三乙胺作為捕獲試劑，藥物與hspc比例為650g藥物/molhspc的該結果與使用500mm硫酸銨作為捕獲試劑的非常類似，藥物與hspc比例為639g藥物/molhspc，其產生的終藥物與脂質比例為440±10.2g藥物/molhspc(效率為68.7±4.80％)。脂質體外部上不溶解的藥物沉澱轉移(遠程裝載)至脂質體內部，如在裝載過程期間混合物中的沉澱量降低所指示。圖12顯示脂質體外沉澱最大的減少發生在0-10min之間，其對應如圖13中可見的將沉澱裝載至脂質體。實施例12從沉澱裝載另一微溶性藥物介紹另一藥物，阿立哌唑由磺丁基環糊精(sbcd)配製並且用於治療雙極性病症和精神分裂症(abilify，pfizer)。藥物非常不溶於水並且當添加至脂質體懸液時，立即觀察到精細沉澱。測試阿立哌唑是否在上面為卡非佐米闡釋的類似條件下遠程裝載。方法將包含250mm硫酸銨或250mm硫酸鈉的脂質體(hspc/chol/peg-dspe3/2/0.15mol/mol/mol)稀釋在1ml的50mm檸檬酸、10％(wt/wt)蔗糖，ph4.0至濃度為6mm磷脂。從dmso中15mg/ml的原料液添加0.3mg的阿立哌唑，從而終dmso濃度是2％(v/v)。在藥物添加至兩個脂質體樣品之後，立即觀察到精細沉澱。樣品在65℃下加熱30min，然後在冰上冷卻。通過0.2um聚醚碸注射器過濾器過濾樣品，以去除任何藥物沉澱，隨後在ph6.5的hbs平衡的sephadexg25柱上純化至去除任何可溶性超脂質體藥物。如上述收集和分析脂質和藥物的渾濁部分。結果表5.將阿立哌唑裝載至包含硫酸銨和硫酸鈉的脂質體的結果。發現包含硫酸銨的脂質體裝載約85％的藥物，而裝載至硫酸鈉脂質體小於2％，硫酸銨脂質體可獲得的能力裝載約50倍增加，以利於遠程裝載(表5)。阿立哌唑，當以sbcd複合物(來自藥學產品abilify)形式引入脂質體溶液時，在相同濃度和裝載條件下產生的裝載效率為68％(圖14)。結論這是可使用上述方法將差的可溶性藥物遠程裝載至脂質體的另一實施例，並且比如果藥物作為sbdc複合物引入，產生稍微更好的裝載。實施例13通過將來自稀釋各種藥物溶劑溶液製備的沉澱的微溶性藥物裝載至脂質體溶液該實施例描述了不良可溶性藥物遠程裝載至脂質體的技術，其開始將藥物溶解在起初當添加至脂質體的水溶液時形成藥物沉澱的增溶劑。在一些溫育時間響應電化學梯度藥物進入脂質體積聚在脂質體核心中。可使用的溶劑包括但不限於二甲亞碸、二噁烷、四氫呋喃、二甲基甲醯胺、乙腈、二甲基乙醯胺、環丁碸、γ丁內酯、吡咯烷酮、1-甲基-2-吡咯烷酮、甲基吡咯啉、乙二醇一甲基醚、二甘醇一甲基醚、聚乙二醇。方法阿立哌唑溶解在一系列溶劑中，指示低於4mg/ml。使用由在250mm硫酸銨中製備的hspc/chol/peg-dspe(3/2/0.15mol/mol/mol)組成的脂質體並且在hepes緩衝的蔗糖10％(wt/wt)(hbsucph6.5)中稀釋至6mm。通過緩慢添加每種溶劑同時起渦流，引入0.3mg的藥物。對於所有樣品，終溶劑濃度是7.5％。作為對照，從每個溶劑將藥物添加至相同體積的沒有脂質體的ph6.5的hbsuc。樣品在65℃下加熱30min，然後在冰上冷卻。在再次達到室溫之後，測量樣品在600nm處的吸光度(cary100biouv-vis分光計)並且值顯示在下方(圖15)。結果所有沒有脂質體的溶液變得非常渾濁或有粗糙的沉澱和沉降(尤其在甲醇和1-丁醇的情況下)。一些脂質體樣品也非常渾濁，但是一些澄清藥物沉澱與之前的結果一致，指示已經發生了藥物沉澱的藥物裝載(即在藥物初始溶解在dmso、1-4-甲基吡咯烷酮、二亞乙基單乙醚或聚乙二醇(mw400)的情況，見圖15。實施例14使用乙酸鹽梯度將地拉羅司的不溶解沉澱遠程裝載至脂質體將地拉羅司遠程裝載至包含乙酸鈣的脂質體表明乙酸鹽梯度對於裝載鐵螯合劑的用途。乙酸鈣梯度遠程裝載與硫酸銨遠程裝載的不同在於裝載的藥物分子必須具有羧酸(或異羥肟酸)而不是胺。已知地拉羅司具有顯著的腎毒性並且脂質體遞送是用於減輕腎毒性的技術。方法以如clerc和barenholtz1995(pmid8541297)的乙酸鹽裝載可溶性羧基螢光素和萘啶酸的相同方式使用乙酸鹽梯度進行遠程裝載地拉羅司不溶解的沉澱至脂質體。如實施例1中描述製備脂質體，但是在該情況下在ph8的120mm乙酸鈣的溶液中擠出脂質體。通過外部介質替換為ph6.0的120mm硫酸鈉形成乙酸鹽梯度。地拉羅司溶解在dmso中，濃度為10mg/ml並且添加至其形成沉澱的脂質體懸浮。通過加熱至65℃，1h使裝載至脂質體沉澱並且如實施例1中描述進行純化和分析。結果當從10mg/mldmso原料液稀釋至脂質體裝載懸液中1mg/ml的濃度時，由於其差的水溶解度(～0.038mg/ml)，地拉羅司形成沉澱。使用乙酸鈣梯度，以大於其裝載至包含硫酸鈉和沒有乙酸鹽梯度的對照脂質體的至少5倍的效率將不溶解的地拉羅司沉澱裝載至脂質體。將不溶解的地拉羅司沉澱遠程裝載至脂質體提供了乙酸鹽梯度從沉澱遠程裝載羧酸藥物的用途的例子。在該例子中，裝載的藥物是螯合劑，尤其是鐵螯合劑。相對對照脂質體，5倍更大裝載至具有乙酸鹽梯度的脂質體指示大部分地拉羅司被遠程裝載而不是插入脂質雙層中。實施例15介紹卡非佐米的脂質體遞送的一個目標是避免藥物降解和消除，其要求藥物保留在脂質體中。評估藥物在脂質體內駐留的一個技術，和因此從脂質體遞送獲得的好處是測量小鼠中藥物的藥物動力學。在脂質體中具有更大藥物駐留的穩定製劑在小鼠血漿中相比較不穩定的製劑或未封裝的藥物，產生較高濃度的非代謝藥物。材料和方法形成100nm由hspc/膽固醇/peg-dspe(60/40/5mol/mol/mol)和鞘磷脂/膽固醇/peg-dspe(55/45/2.8，mol/mol/mol)組成的脂質體，使用實施例1中描述的方法純化和藥物裝載卡非佐米。用於遠程裝載卡非佐米的捕獲試劑是三乙基葡聚糖硫酸銨(1.0mso4)或三乙基蔗糖八硫酸銨(1.0mso4)。通過正切流過濾，用緩衝液替換成ph6.5的hbs，純化藥物裝載脂質體。通過0.2um聚醚碸過濾器無菌過濾脂質體並且如實施例1中描述評估卡非佐米和脂質含量。計算藥物與脂質比例、藥物濃度和裝載效率並且結果顯示在表6中。結果表6.iv.施用脂質體製劑之後，小鼠血漿中的卡非佐米濃度。製劑#3與#2相同，不同之處是儲存在4℃下30天，然後pk分析另外，我們檢查了封裝在脂質體製劑中的卡非佐米在雄性cd1小鼠中的藥物動力學。經尾靜脈以5mg/kg卡非佐米使用3小鼠/製劑，通過iv彈丸注射對小鼠給藥。在4h，處死小鼠並且通過離心血液收穫血漿。0.1ml的血漿混合0.2ml甲醇，充分混合併且通過hplc如實施例1中描述測量卡非佐米濃度。結果顯示在表6中。儘管不嘗試區分血漿中非脂質體捕獲的和脂質體捕獲的藥物，如我們的分析測量總的藥物含量，我們假設大部分測量的卡非佐米是脂質體捕獲的，因為藥物在血流中非常快速地消除(t1/290％的裝載效率。包含硫酸鈉的脂質體產生3.3％的裝載效率，其指示dfx裝載至乙酸鈣脂質體不是被動的而是可描述為遠程裝載。dfx裝載結果顯示在表7中(圖16)。脂質組合物內部緩衝液dfx裝載效率3molpopc/0.5molchol120mm乙酸鈣94.8±1.46％3molhspc/0.5molchol120mm乙酸鈣92.5±0.33％3molhspc/0.5molchol120mm硫酸鈉3.3±0.14％表7.乙酸鈣脂質體2中的dfx的裝載效率結論遠程裝載地拉羅司的不溶解沉澱至脂質體提供了乙酸鹽梯度從沉澱遠程裝載羧酸藥物用途的例子。在該例子中，裝載的藥物是螯合劑，尤其是鐵螯合劑。相比對照脂質體28倍更大的裝載至具有乙酸鹽梯度的脂質體，指示大部分地拉羅司被遠程裝載而不是插入脂質雙層中。實施例17遠程裝載地拉羅司不溶解的沉澱至脂質體。評估藥物與脂質比例和乙酸鈣捕獲試劑濃度。介紹通過使用脂質體內部上不同濃度的乙酸鈣和不同dfx與脂質比例範圍的裝載，評估包含乙酸鈣的脂質體中dfx遠程裝載容量。方法使用實施例1中描述的擠出和純化方法製備脂質體。脂質組分是popc/膽固醇(3/0.5，mol/mol)。捕獲試劑由乙酸鈣120mm、250mm或500mm組成。將dmso中20mg/ml的dfx溶液在30秒內緩慢添加至脂質體溶液，同時起渦流，以在脂質體溶液中產生藥物沉澱。靶藥物與磷脂比例是100、200或300gdfx/mol磷脂。溶液在45℃下加熱30min並且然後在冰上冷卻。去除樣品，以測定輸入藥物與脂質比例，以殘留溶液在離心機中以12,000rpm離心5分鐘，以使任何未裝載的藥物成小球。從未裝載的藥物使用sephadexg25尺寸排除柱，用5mmhepes、145mmnacl在ph6.5下洗脫進一步純化上清液。通過hplc如實施例16中描述分析純化的脂質體的藥物和脂質含量。結果當將dmso中的藥物添加至包含乙酸鈣作為捕獲試劑的脂質體時，dfx在裝載之前形成沉澱。加熱之後，溶液澄清並且看上去如沒有藥物沉澱的脂質體。最大藥物裝載相比120mm乙酸鈣高於包含250和500mm乙酸鈣的脂質體。以200gdfx/mol磷脂的輸入，對於包含250mm乙酸鈣或500mm乙酸鈣的脂質體實現最大藥物裝載和效率。對於100gdfx/mol磷脂靶的裝載效率範圍對於所有三個濃度的內部乙酸鈣是99.2至103％。當靶藥物裝載增加至200gdfx/mol磷脂時，具有250或500mm內部乙酸鈣的脂質體的效率是至少兩倍大於具有120mm內部乙酸鈣濃度的脂質體。三個脂質體的容量在300gdfx/mol磷脂的輸入時過度，產生<24％的效率。結果顯示在圖17中。結論當遠程裝載至脂質體時，通過增加脂質體內側捕獲試劑的濃度可大大增加dfx的藥物載荷容量。該例子表明裝載容量依賴於乙酸鈣捕獲試劑濃度。該例子也表明dfx脂質體裝載可具有其中效率和藥物裝載都最大的最佳藥物與脂質比例。實現的藥物與脂質比例允許dfx使用耐受劑量的脂質施用至動物。實施例18遠程裝載地拉羅司不溶解的沉澱至脂質體。評估捕獲試劑。通過用在內部上不同的捕獲試劑和一系列不同dfx與脂質比例的裝載製備脂質體來評估dfx在包含乙酸鈣、乙酸鎂和乙酸鋅的脂質體中的遠程裝載容量。方法使用實施例1中描述的擠出和純化方法製備脂質體。脂質組分是popc/膽固醇(3/0.5，mol/mol)。捕獲試劑由120mm的乙酸鈣、乙酸鎂或乙酸鋅組成。在30秒內緩慢將dmso中20mg/ml的dfx溶液添加至脂質體溶液，同時起渦流，以在脂質體溶液中產生藥物沉澱。靶藥物與磷脂比例是100、150或200gdfx/mol磷脂。溶液在45℃下加熱30min並且然後在冰上冷卻。去除樣品，以測定輸入藥物與脂質比例並且殘留的溶液在離心機中以12,000rpm離心5分鐘，以使任何未裝載的藥物成小球。使用sephadexg25尺寸排除柱，用5mmhepes，145mmnacl在ph6.5下洗脫，從未裝載的藥物進一步純化上清液。通過hplc如實施例16中描述分析純化的脂質體的藥物和脂質含量。結果當將dmso中的藥物添加至脂質體時，在裝載之前dfx形成沉澱。加熱之後，包含具有乙酸鈣和乙酸鎂的脂質體的溶液比包含乙酸鋅作為捕獲試劑的脂質體變得更不渾濁。對於包含鎂的脂質體，最大藥物裝載最高，對於包含乙酸鈣的脂質體第二高，和包含乙酸鋅的脂質體產生最低的藥物載荷。對於100gdfx/mol磷脂的靶的裝載效率是5.3±0.07％，但使用乙酸鈣和或乙酸鎂的效率分別是97.6±0.41％和99.2±2.42％。結果顯示在圖18中。結論當遠程裝載至脂質體時，dfx的藥物載荷容量可取決於用於遠程裝載的乙酸鹽的具體金屬鹽。該例子表明了乙酸鎂相比乙酸鈣或乙酸鋅是對於dfx更好的捕獲試劑。實施例19兩性黴素b的不溶性沉澱遠程裝載至脂質體方法用在包含1.0m(so4)tea硫酸葡聚糖的2/0.6/2/0.3之比的hspc/dspg/chol/peg-dspe的脂質組合物製備脂質體。通過陰離子交換且然後通過對5mmhepes緩衝的10％(wt/wt)蔗糖ph6.5透析從未捕獲的tea硫酸葡聚糖中分離脂質體。該脂質體被交換至0.01nhcl、10％蔗糖ph2.0，然後載藥。將兩性黴素b以10mg/ml溶於dmso。在一種典型製備中，在室溫下向脂質體中滴加dmso兩性黴素b溶液，同時用渦旋混合器快速混合脂質體懸液。脂質體脂質的濃度為5umol(磷脂)/ml並且每ml脂質體加入0.1ml兩性黴素b溶液，使得最終兩性黴素b濃度約為1.0mg/mlamb，且最終dmso濃度約為10％(v/v)。通過調整製備中脂質體的量，測試不同的amb/pl之比，例如200、400、800g/mol。將樣品在65℃加熱15min。然後用冰冷卻30分鐘。然後使製劑通過pd10(sephadexg25)凝膠過濾柱，以便除去任何沉澱的未併入脂質體的兩性黴素b。另外將緩衝液交換成5mmhepes，144mmnaclph6.5，以便從脂質體兩性黴素b製劑中除去dmso。載藥的脂質體的直徑在200和400g藥物/摩爾脂質輸入比時未改變，且在800g藥物脂質比中適當大於約10％。通過如實施例1中所述的hplc方法分析純化的脂質體的藥物和脂質含量。結果將以96％的效率，在200g藥物/摩爾脂質、400g藥物/摩爾脂質的輸入比兩性黴素b下遠程裝載入脂質體，藥物約90％被封裝，得到360g兩性黴素b/摩爾脂質的純化的製劑。在800g藥物/摩爾脂質下，兩性黴素b約70％被封裝，得到560g兩性黴素b/摩爾脂質。全部這些值基本上均達約120g兩性黴素b/摩爾脂質的值，其包含在藥物產品中。最終的脂質體製劑易於濃縮，得到在5mmhepes，144mmnacl，ph7.4緩衝液中10mg/ml兩性黴素b濃度。結論當兩性黴素b遠程裝載入預先由沉澱的兩性黴素b形成的包含tea硫酸葡聚糖的脂質體中時，兩性黴素b的脂質體的藥物載荷能力極大地超出了可以通過傳統混合藥物與脂質成分且然後形成脂質體被裝載入脂質體膜的兩性黴素b的量。該實施例證實特別不溶性的化合物兩性黴素b可以從沉澱中遠程裝載，得到高濃度的脂質體封裝的兩性黴素b，而在某些情況下，預先使用兩性黴素b脂質製劑不能達到。實施例20紫杉烷衍生物2'琥珀醯卡巴他賽的不溶性沉澱遠程裝載入脂質體用於合成具有ph依賴性溶解度的略微可溶性的紫杉烷衍生物的方法為了充分利用沉澱裝載方法，有利地製備具有ph可調整溶解度的藥物，由此可以使用本申請中所述的各種遠程裝載試劑優化封裝和在體內正確的位置上釋放封裝的藥物。為了產生具有能夠裝載入脂質體的特性的略微可溶性的紫杉烷衍生物，我們通過本領域技術人員眾所周知的標準化學反應用包含羧酸、二甲基氨基或嗎啉代的部分在2'位上修飾了紫杉醇、多西他賽和卡巴他賽(圖19)。母體化合物示例在圖19的右手側，其中2'位表示為r基團。在母體化合物中，r基團是氫。r可以是琥珀酸酯、戊二酸酯、嗎啉代或琥珀醯二甲基氨基丙基醯胺、戊二醯二甲基氨基丙基醯胺、琥珀醯-2-(嗎啉代-4-基)乙醯胺或戊二醯-2-(嗎啉代-4-基)乙醯胺。卡巴他賽與琥珀酸酐或戊二酸酐在吡啶溶液中在室溫下反應將分別得到結晶琥珀醯和戊二醯一2'-加合物。易於通過結晶除去汙染的二酯類(約5％或以下)。該位置的選擇性與公布的結果一致，這表明對於醯化反應而言，2'-羥基的反應性遠高於7-羥基。通過使0.050g(0.060mmol)卡巴他賽的溶液與0.090g(0.076mmol)琥珀醯基酸酐在室溫下在3ml吡啶中反應3小時來合成2'-琥珀醯卡巴他賽。將該反應混合物真空蒸發至幹。用10ml水處理殘餘物，攪拌20min，過濾。將沉澱溶於丙酮，緩慢地加入水，採集細小晶體。使該晶體從氯仿/苯中重結晶，得到產物2'琥珀醯卡巴他賽。通過與3-(二甲基氨基)-l-丙基胺在cdi的存在下、使用乙腈作為溶劑偶聯將卡巴他賽的2'琥珀醯酯轉化成帶有連接至2'戊二酸的羧酸酯的鹼性基團的卡巴他賽。向充分攪拌的4g(4.1mmol)2'琥珀醯卡巴他賽在40ml乙腈中的溶液中加入0.88g(5.43mmol)cdi，將該混合物加熱至45℃5min。將該混合物冷卻至室溫後，加入0.47g(4.61mmol)3-(二甲基氨基)-1-丙基胺在3ml乙腈中的溶液，歷時20min期限。30min後，蒸發溶劑，用150ml水和40ml氯仿處理殘餘物。用150ml水將有機層洗滌5次，用k2co3乾燥，蒸發至得到3.6g(83％)油狀物。從二氯甲烷/乙酸乙酯中重結晶，得到約3.6g(83％)標題化合物。通過添加1當量的鹽酸製備鹽酸鹽，然後冷凍乾燥該水溶液。通過使卡巴他賽的2'戊二醯酯在的存在下、使用乙腈作為溶劑與2-(嗎啉-4-基)乙胺反應將卡巴他賽的2'琥珀醯酯轉化成嗎啉-4-基乙基醯胺。向充分攪拌的4g(4.1mmol)2'琥珀醯卡巴他賽在40ml乙腈中的溶液中加入0.88g(5.43mmol)cdi，將該混合物加熱至45℃5min。將該混合物冷卻至室溫後，加入0.6g(4.61mmol)2-(嗎啉-4-基)乙胺在3ml乙腈中的溶液，歷時20min期限。30min後，蒸發溶劑，用150ml水和40ml氯仿處理殘餘物。用150ml水將有機層洗滌5次，用k2co3乾燥，蒸發至得到3.6g標題化合物的油狀物。通過添加1當量的鹽酸製備鹽酸鹽。通過從二氯甲烷和乙酸乙酯的混合物中結晶分離到收率良好的琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺的hcl鹽。用於製備卡巴他賽的鹼性衍生物的可選方法為使(4-嗎啉基)丙酸與卡巴他賽通過在嗎啉基丙酸上的羧酸酯活化而反應。用水冰浴冷卻攪拌的在吡啶中的4-嗎啉基丙酸(約0.1g，0.5mm，1.2當量)在包含dbu的4ml吡啶(1.4ml，在50ml圓底燒瓶中約3當量)的溶液，然後加入2.0ml乙腈。加入卡巴他賽(0.3克，0.35mmol)。然後分部分加入2.5當量的(約1.8克)的1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亞胺，歷時30分鐘。攪拌該混懸液，將該冰冷的溶液冷卻至室溫。歷時24小時過程。用tlc(乙酸乙酯/己烷/甲醇/氫氧化銨：60/30/6/4：v/v)分析該反應混合物顯示，卡巴他賽在24小時過程中基本上反應。向該反應混合物中加入約4ml乙醇，通過用旋轉蒸發器減壓除去溶劑將物質濃縮至得到在油狀物。將該移植物溶於約8ml乙醇，再次濃縮。將乾燥的殘餘物溶於約6ml氯甲烷，上已經預先用乙酸乙酯/己烷/甲醇/氫氧化銨：60/30/2/4:v/v平衡的快速二氧化矽柱，用遞增的極性溶劑在乙酸乙酯/己烷/甲醇/氫氧化銨(60/30/2-10/4)中2-10％的甲醇洗脫。收集包含期望的物質的級分，濃縮。按照與上述合成類似的方式製備紫杉醇和多西他賽的衍生物，得到略微可溶性的紫杉烷衍生物，其溶解度可以通過改變脂質體溶液的ph得到調整，其中加入所述衍生物的無質子溶液。使用實施例1中所述的擠出和純化方法製備脂質體。脂質組成為popc/膽固醇(3/0.5，mol/mol)。捕獲試劑由120mm乙酸鋅或乙酸鎂組成。將未修飾的卡巴他賽或2'琥珀醯卡巴他賽在dmso中的20mg/ml溶液緩慢地加入到脂質體溶液中，歷時30秒，同時渦旋至在脂質體溶液中產生藥物沉澱。對於未修飾的卡巴他賽目標藥物與磷脂之比為100g/mol脂質，而對於琥珀醯卡巴他賽/mol磷脂，為100、150或200g。將該溶液在45℃加熱30min，然後用冰冷卻。取出樣品用於測定輸入藥物與脂質之比，將其餘溶液在離心機中以12,000rpm旋轉5分鐘，以便沉澱任何未裝載的藥物。使用sephadexg25尺寸排除柱從未裝載的藥物中進一步純化上清液，用5mmhepes，145mmnaclph6.5洗脫。如實施例16中所述通過hplc分析純化的脂質體的藥物和脂質含量。結果當將在dmso中的藥物添加到包含二價乙酸鹽緩衝液的脂質體中時，卡巴他賽和2'琥珀醯卡巴他賽形成白色沉澱，然後裝載。加熱後，包含脂質體的未修飾的卡巴他賽溶液的白色沉澱未改變。然而，在加熱含有乙酸鋅或乙酸鎂脂質體的2'-琥珀醯卡巴他賽溶液時，濁度基本上較低。對於包含乙酸鎂的脂質體，最大2'琥珀醯卡巴他賽載荷最高，而對於包含乙酸鋅的脂質體，2'琥珀醯卡巴他賽載荷第二高。在裝載2'琥珀醯卡巴他賽中，裝載效能大於85％。以100g卡巴他賽/mol磷脂加入的裝載未修飾卡巴他賽的效率在乙酸鈣和乙酸鎂脂質體中均極低。為了封裝琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺，用包含1.0m(so4)tea硫酸葡聚糖的2/0.6/2/0.3之比的hspc/dspg/chol/peg-dspe的脂質組合物製備脂質體。通過陰離子交換且然後通過對5mmhepes緩衝的10％(wt/wt)蔗糖ph6.5透析從未捕獲的tea硫酸葡聚糖中分離脂質體。將琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺以10mg/ml溶於dmso。在一種典型製備中，在室溫下向脂質體中滴加琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺的dmso溶液，同時用渦旋混合器快速混合脂質體懸液。脂質體脂質的濃度為5umol(磷脂)/ml並且每ml脂質體加入0.1ml琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺溶液，使得最終琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺濃度約為1.0mg/ml，且最終dmso濃度約為10％(v/v)。通過調整製備中脂質體的量，測試不同的琥珀醯卡巴他賽/pl的2'嗎啉-4-基乙基醯胺之比，例如200、400、800g/mol。為了測定未修飾的卡巴他賽是否被裝載入tea-硫酸葡聚糖脂質體，將卡巴他賽溶於dmso，如對琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺化合物所述加入到脂質體中。將該溶液在45℃加熱30min，然後用冰冷卻。取出樣品用於測定輸入藥物與脂質之比，將其餘溶液在離心機中以12,000rpm旋轉5分鐘，以便沉澱任何未裝載的藥物。使用用5mmhepes，145mmnaclph6.5洗脫的sephadexg25尺寸排除柱從未裝載的藥物中進一步純化上清液。如實施例16中所述通過hplc分析純化的脂質體的藥物和脂質含量。使用用於沉澱的類似方法，載荷2'嗎啉-丙基酯卡巴他賽(圖19)可以是裝載入包含tea-硫酸葡聚糖梯度的脂質體的沉澱。結果當加入到dmso溶液中的脂質體懸液、但沉澱在加熱時不變澄清時，未修飾的卡巴他賽形成白色渾濁沉澱。封裝的卡巴他賽低於添加的藥物的5％。當加入到在加熱時變澄清的脂質體中時，琥珀醯卡巴他賽的2'嗎啉-4-基乙基醯胺和卡巴他賽的2'嗎啉代丙基衍生物(圖19)形成白色渾濁沉澱。將沉澱以在200和400g藥物/摩爾脂質比例下大於90％的添加的藥物和在800g藥物/摩爾脂質比例下大於70％的添加的藥物裝載入tea-硫酸葡聚糖脂質體。結論可以將ph可滴定的紫杉烷衍生物從當將紫杉烷衍生物在無質子溶劑中加入到形成的脂質體中時形成的沉澱中遠程裝載入脂質體，所述形成的脂質體包含遠程裝載試劑，其中流動離子種類的濃度在脂質體內側大於外側。可以將在2'oh位上包含羧酸酯修飾的紫杉烷裝載入脂質體，該脂質體包含具有流動陰離子鹽的二價陽離子，例如乙酸鹽。在2'羥基上被修飾以包含可滴定的胺的紫杉烷可以被遠程裝載在脂質體中，該脂質體包含流動的陽離子、例如銨或三乙胺和不能滲透的陰離子、例如硫酸鹽或硫酸葡聚糖。因此，將不帶電荷的紫杉烷轉化成可滴定的紫杉烷允許紫杉烷以高效率從沉澱被裝載入脂質體，並且在將脂質體注入動物時保留在脂質體中。為了闡釋和描述的目的，已經呈現了本發明具體實施方式的前述說明。它們不旨在是窮舉的或講本發明限於公開的具體形式，並且顯而易見，在上述教導下，許多修飾和變型是可能的。選擇和描述實施方式，以便最佳闡釋本發明的原理和其實際應用，從而使得本領域技術人員最佳使用本發明和具有各種修飾的各種實施方式適合考慮的具體用途。期望本發明的範圍由所附的權利要求和它們的等同物限定。為了所有的目的，本文引用的所有的公開、專利和專利申請通過引用以它們的整體併入。當前第1頁12