一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法
2023-05-21 11:07:56 6
專利名稱：一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法
技術領域：
本發明涉及屬於中藥製備技術領域，尤其涉及一種中藥有效成分的提取純化方法，特別是涉及一種熊總膽酸的提取純化方法，具體涉及一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法。
背景技術：
熊膽是一種貴重中藥材。熊膽粉為熊科動物黑熊(Selenarctos Thibetanus Cuvier)經膽囊手術引流膽汁得到的乾燥品，採用天然熊膽汁或人工引流熊膽汁經乾燥製備而成。為了保護動物資源，現在大多用熊膽粉作為熊膽的替代品。熊膽粉具有清熱、利膽、平肝、強心、鎮驚、明目殺蟲功效。
熊膽粉含有膽汁酸類、膽色素類、胺基酸類等多種成分，其中膽汁酸類為其主要有效成分，有清熱解毒、止咳化痰、利膽作用，多以牛磺酸或甘氨酸的結合物形式存在，水解後可得到多種游離膽汁酸，如熊去氧膽酸(UDCA)、鵝去氧膽酸(CDCA)、膽酸、去氧膽酸等，其中熊去氧膽酸含量最高，鵝去氧膽酸次之。此外，熊膽粉還含有水溶性蛋白質、胺基酸、無機鹽等成分，這些成分無生理活性，僅起營養作用，也是產生吸潮的主要原因。另外，熊膽粉還含有脂溶性膽汁素，包括膽紅素、膽黃素、膽固醇、脂肪、甾體類物質等成分，是腥味和黑色的來源，其生理活性也不強。因此，熊膽粉中的有效成分主要為以熊去氧膽酸為主的總膽酸，後兩類成分因具有腥味，服後易產生噁心反胃的副作用而希望被除去。
參見圖1，目前現有技術中，從熊膽粉中製備以熊去氧膽酸為主的熊總膽酸多採用直接水解法，其步驟包括加水溶解、加鹼水解、加酸酸化、沉澱、醋酸乙酯提取得提取液，提取液再經過無水硫酸鈉脫水，濃縮、冷藏、結晶、乾燥等步驟得到熊總膽酸。由於水解前未經過除雜，導致在水解後進一步純化中由於雜質較多(如色素類、脂肪類、雜蛋白、氨其酸等)使純化效果不理想，最終結晶物收率低(8％左右)，總膽酸的純度低(85％左右)。
綜上所述，由於上述技術中存在的缺點，致使熊膽粉尚有待開發，其藥效暫時未能得到充分發揮，且其副作用無法除去而使其應用受到限制。因此，有必要探索一種新的提取純化方法，使這一珍貴藥材充分發揮其作用。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在於提供一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法，以解決提取物得率和純度低的問題。
為了解決上述技術問題，本發明可以通過以下技術方案來實現本發明提供一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法，該方法的反應式如下 其具體包括鹼水解步驟、酸化步驟、提取步驟、濃縮步驟、結晶步驟；其特徵在於，在鹼水解步驟前增加一淨化步驟，以除去蛋白質、脂肪、胺基酸、糖類、部分色素、無機鹽等雜質；其淨化步驟是取熊膽粉，加水並加熱水解，水解液冷卻至常溫後過濾，過濾液通過大孔樹脂柱，並水洗至流出液無色，棄去水洗液，再用醇溶液洗脫，收集醇洗脫液，回收醇溶液至無醇味得熊膽粉稠膏。
本發明方法的特點為，熊膽粉的水溶液先通過大孔樹脂柱吸附富集，水洗除去蛋白質、脂肪、胺基酸、糖類、部分色素、無機鹽等雜質，再用醇洗下結合態的膽汁酸，所得到結合態的膽汁酸純度很高，再用鹼水解時，易水解完全、徹底，結晶時雜質幹擾小，易於結晶析出，提高收率和含量，經驗證其收率13％以上，總膽酸含量達95％以上。
圖1為現有技術熊總膽酸製備工藝流程圖。
圖2為本發明高含量熊總膽酸製備工藝流程圖。
具體實施例方式
一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法，該方法的反應式如下
參見圖2，該方法具體步驟如下1、淨化步驟取熊膽粉，加水並加熱水解，水解液冷卻至常溫後過濾，過濾液通過大孔樹脂柱，並水洗至流出液無色，棄去水洗液，再用醇溶液洗脫，收集醇洗脫液，回收醇溶液至無醇味得熊膽粉稠膏。
3、鹼水解步驟取熊膽粉稠膏加水稀釋，稀釋液加入藥液量10wt％-20wt％的固體鹼，攪拌溶解，並在加熱水解後冷卻至常溫得水解液；4、酸化步驟所述水解液用酸調節PH值至酸性，得酸化液，過濾酸化液，得沉澱物；將沉澱物水洗至中性，低溫乾燥得乾燥物；5、提取步驟乾燥物置提取器中，加入醋酸乙酯，加熱回流提取，過濾提取液，其不溶物再加入醋酸乙酯提取，合併兩次醋酸乙酯提取液；6、濃縮步驟所得醋酸乙酯提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌均勻，放置脫水，濾過，濾液回收醋酸乙酯冷卻至常溫得濃縮物；7、結晶步驟將濃縮物至0-10℃環境下冷藏至結晶完全析出，所得結晶物在80℃以下乾燥，即得熊總膽酸。
在本發明的方法中，其淨化步驟主要是除去蛋白質、脂肪、胺基酸、糖類、部分色素、無機鹽等雜質。在淨化步驟中，一般都是採用純化水、蒸餾水或注射用水來溶解熊膽粉，這主要是為了符合臨床用藥安全的需要。溶解時的用水量，主要是從濾液通過大孔樹脂柱的速度來考慮，一般來說加水量為熊膽粉8wt-15wt倍量，其具體的用水量的選擇，對於本領域技術人員來說，是比較容易進行選擇的。為了提高溶解的速度，一般來說，在溶解的過程中，要加熱，加熱的溫度為60～90℃，這樣也可以提高溶解的速度。
在淨化步驟中，過濾液通過大孔樹脂柱時，一般是先用水洗脫，再用醇溶液洗脫，用水洗脫主要是洗去雜質，用醇溶液洗脫主要是回收熊膽粉。在用水洗脫時，用水量為柱床體積的2wt-5wt倍量，當然也可以減少或增加用水量，只要一直洗至流出液無色即可。選用的大孔樹脂柱可以為多種型號，大孔樹脂柱型號不同對收率和總膽酸含量有所影響。如選用D101型大孔樹脂柱(5.5×30cm)，其收率14％，總膽酸含量97.3％。選用AB-8型大孔樹脂，其收率13.2％，總膽酸含量為95.5％。選用HPD100型大孔樹脂，其收率14.6％，總膽酸含量為98.0％。
在淨化步驟中，醇溶液一般選用低碳醇溶液，如乙醇、丙醇、丁醇等，只要醇溶液不影響到熊膽粉且能完全溶解熊膽粉即可。但最好用乙醇，因為這樣最經濟。採用乙醇洗脫時用量一般為柱床體積的2wt-5wt倍量，乙醇溶液的濃度為50％-80％，當然也可以使用比較高濃度的乙醇溶液，如80％以上的乙醇溶液。而採用醇溶液主要是得到結合態的膽汁酸純度很高。
在本發明的方法中，其鹼水解步驟主要是使熊膽粉稠膏能水解完全和徹底。在鹼水解步驟中，先用純化水、蒸餾水或注射用水來溶解熊膽粉，將熊膽粉稠膏溶解稀釋。溶解稀釋後，再加入固體鹼進行水解。固體鹼一般選用固體氫氧化鈉，當然也可以選用別的固體鹼，只要選用鹼能夠對熊膽粉起到水解作用並符合製藥要求且不對熊總膽酸有傷害即可。選用的固體氫氧化鈉用量一般為藥液量10wt％-20wt％。鹼加入後，應該攪拌溶解充分。然後在加熱狀態下進行水解，水解過程中加熱溫度為100-125℃，水解時間為10-20小時，加熱溫度和水解時間的優化方案為100-110℃，16-20小時。至於具體的加熱溫度和水解時間的選擇對於本領域技術人員來說是比較容易選擇的。
水解完全後，冷卻至常溫後，進入到酸化步驟。在酸化步驟中，一般是採用鹽酸來調節水解液的PH值至酸性，當然也可以用別的酸來調節，只要選用酸符合製藥要求且不對熊總膽酸有傷害即可。在調節時，PH值一般在1-2之間。
在酸化步驟中，低溫乾燥的方法為本領域的常規技術，在此不作詳細描述。
在提取步驟中，為了能吸附乾燥物中的雜質和脫色，要在提取器加入吸附劑，一般來說，吸附劑選用活性炭比較合適。當然也可以選用別的吸附劑。活性炭的用量為乾燥物的5wt％-15wt％。
提取時，一般要經過兩次提取，第一次提取的醋酸乙酯用量為乾燥物的4wt-6wt倍量。第二次提取的醋酸乙酯用量為不溶物的3wt-5wt倍量。第一次提取的加熱溫度為60-90℃，提取時間為1-2小時。第二次提取的時間為0.5-1小時。其中兩次提取時的醋酸乙酯用量和提取時間的具體值的選擇，對於本領域技術人員來說是非常容易就能選擇的。
在濃縮步驟中，無水硫酸鈉的用量醋酸乙酯提取液的1wt％-5wt％。脫水時間一般在12小時以上，濾液回收醋酸乙酯時，至乾燥物的2wt-4wt倍量即可，以便獲得比較好的效益。
以下通過實施例進一步說明本發明，但應理解，這些實施例只是示例性的，本發明並不局限此。
實施例1稱取熊膽粉500g，加12倍量純化水，稍加熱，攪拌使溶解，放涼，濾過，濾液通過D101型大孔樹脂柱(5.5×30cm)，用柱床體積4倍量的水約3000ml洗至流出液近無色，棄去水洗液，再用柱床體積4倍量70％乙醇3000ml洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇至無醇味，稠膏加水至熊膽粉8倍量4000ml，加入藥液量15％的固體氫氧化鈉600g，攪拌溶解，於110℃加熱回流水解16小時，放涼，水解液用鹽酸調節pH值1.5，濾過，取沉澱物，用水洗至中性，60℃乾燥，得200g。將乾燥物加入20g活性炭，再加5倍量的醋酸乙酯1000ml，加熱回流提取1.5小時，濾取藥液，不溶物再加4倍量醋酸乙酯提取40min，濾取藥液，棄藥渣；合併兩次提取液，得1500ml，加入30g無水硫酸鈉，充分攪拌，放置48小時脫水，濾過，濾液回收醋酸乙酯至600ml，放涼，冷藏(5℃)3天至結晶析出完全，60℃減壓乾燥，得70g，收率14％，總膽酸含量97.3％。
實施例2同實施例1，只是將D101型大孔樹脂換成AB-8型大孔樹脂，得66g，收率13.2％，總膽酸含量為95.5％。
實施例3同實施例1，只是將AB-8型大孔樹脂換成HPD100型大孔樹脂，得73g，收率14.6％，總膽酸含量為98.0％。
以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特徵和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和範圍的前提下本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明範圍內。本發明要求保護範圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
權利要求
1.一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法，包括鹼水解步驟、酸化步驟、提取步驟、濃縮步驟、結晶步驟；其特徵在於，在鹼水解步驟前增加一淨化步驟。
2.根據權利要求1所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述淨化步驟是取熊膽粉，加水並加熱水解，水解液冷卻至常溫後過濾，過濾液通過大孔樹脂柱，並水洗至流出液無色，棄去水洗液，再用醇溶液洗脫，收集醇洗脫液，回收醇溶液至無醇味得熊膽粉稠膏。
3.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所採用的水為純化水、蒸餾水或注射用水。
4.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，溶解時的用水量為熊膽粉8wt-15wt倍量。
5.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，溶解時加熱的溫度為60～90℃。
6.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，在用水洗脫時，用水量為柱床體積的2wt-5wt倍量。
7.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述醇溶液為乙醇溶液。
8.根據權利要求7所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述乙醇洗脫時用量為柱床體積的2wt-5wt倍量。
9.根據權利要求8所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述乙醇溶液的濃度為50％-80％。
10.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述大孔樹脂柱為D101型大孔樹脂柱。
11.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述大孔樹脂柱為AB-8型大孔樹脂。
12.根據權利要求2所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述大孔樹脂柱為HPD100型大孔樹脂。
13.根據權利要求1所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述鹼水解步驟是取熊膽粉稠膏加水稀釋，稀釋液加入藥液量10wt％-20wt％的固體鹼，攪拌溶解，並在加熱水解後冷卻至常溫得水解液。
14.根據權利要求13所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所用水為純化水、蒸餾水或注射用水。
15.根據權利要求13所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述固體鹼為固體氫氧化鈉。
16.根據權利要求15所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，選用的固體氫氧化鈉用量一般為藥液量10wt％-20wt％。
17.根據權利要求13所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述加熱溫度為100-125℃，水解時間為10-20小時。
18.根據權利要求13所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述加熱溫度為加熱溫度為100-110℃，水解時間為16-20小時。
19.根據權利要求1所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述酸化步驟是將水解液用酸調節PH值至酸性，得酸化液，過濾酸化液，得沉澱物；將沉澱物水洗至中性，低溫乾燥得乾燥物。
20.根據權利要求19所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述酸採用鹽酸。
21.根據權利要求19所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述PH值在1-2之間。
22.根據權利要求1所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述提取步驟是將乾燥物置提取器中，加入醋酸乙酯，加熱回流提取，過濾提取液，其不溶物再加入醋酸乙酯提取，合併兩次醋酸乙酯提取液。
23.根據權利要求22所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，在所述提取器加入吸附劑。
24.根據權利要求23所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述吸附劑選用活性炭。
25.根據權利要求24所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述活性炭的用量為乾燥物的5wt％-15wt％。
26.根據權利要求22所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，第一次提取的醋酸乙酯用量為乾燥物的4wt-6wt倍量。
27.根據權利要求22所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，第二次提取的醋酸乙酯用量為不溶物的3wt-5wt倍量。
28.根據權利要求22所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，第一次提取的加熱溫度為60-90℃，提取時間為1-2小時。
29.根據權利要求22所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，第二次提取的時間為0.5-1小時。
30.根據權利要求1所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述濃縮步驟是將所得醋酸乙酯提取液，加入無水硫酸鈉，攪拌均勻，放置脫水，濾過，濾液回收醋酸乙酯冷卻至常溫得濃縮物。
31.根據權利要求30所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述無水硫酸鈉的用量醋酸乙酯提取液的1wt％5wt％。
32.根據權利要求30所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述脫水時間一般在12小時以上。
33.根據權利要求30所述的從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法；其特徵在於，所述濾液回收醋酸乙酯至乾燥物的2wt-4wt倍量。
全文摘要
一種從熊膽粉中提取純化熊總膽酸的方法，包括鹼水解、酸化、提取、濃縮、結晶等步驟；其特徵在於，在鹼水解步驟前增加一淨化步驟，其淨化步驟是取熊膽粉，加水並加熱水解，水解液冷卻至常溫後過濾，過濾液通過大孔樹脂柱，並水洗至流出液無色，棄去水洗液，再用醇溶液洗脫，收集醇洗脫液，回收醇溶液至無醇味得熊膽粉稠膏。本發明的特點為將熊膽粉的水溶液先通過大孔樹脂柱吸附富集，水洗除去蛋白質、脂肪、胺基酸、糖類、部分色素、無機鹽等雜質，再用醇洗下結合態的膽汁酸，所得到結合態的膽汁酸純度很高，再用鹼水解時，易水解完全、徹底，結晶時雜質幹擾小，易於結晶析出，提高收率和含量，經驗證其收率13％以上，總膽酸含量達95％以上。
文檔編號C07J75/00GK101085801SQ200610027330
公開日2007年12月12日 申請日期2006年6月6日 優先權日2006年6月6日
發明者薛東升 申請人:上海凱寶藥業有限公司