乳製品中核苷酸含量的測定方法
2023-12-10 07:58:57
乳製品中核苷酸含量的測定方法
【專利摘要】一種乳製品中核苷酸含量的測定方法，屬於食品添加劑及其檢測方法領域。所述乳製品中核苷酸含量的測定方法,包括以下步驟：(1)配製GMP、UMP、GMP、IMP、AMP濃度各為1mg/ml的儲備液；然後配製成濃度各為10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量為10μl，通過液相色譜儀測定其峰高並計算回歸方程。(2)稱取10.0g的樣品，用20ml溫水溶解後放入超聲波浴中震蕩10min取出，轉入50ml容量瓶中，加入醋酸沉澱蛋白，定容後混勻用濾紙過濾後再通過濾膜過濾，通過高效液相色譜儀測定其峰高。(3)根據標準曲線方程和試樣的峰高值，得到乳製品中核苷酸含量。本發明所述方法採用液相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中核苷酸含量方法，該法操作簡便，其測定精密度和準確度能滿足乳製品分析要求。可作為常規檢測方法應用。
【專利說明】乳製品中核苷酸含量的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種乳製品中核苷酸含量的測定方法，屬於食品添加劑及其檢測方法 領域。
【背景技術】
[0002] 核苷酸是構成核酸的成分，目前在乳製品中主要用於嬰幼兒配方奶粉中。作為 添加劑添加的核苷酸主要有五種-胞嘧啶核苷（CMP)、脲嘧啶核苷（UMP)、腺嘌呤核苷 (AMP)、鳥嘌呤核苷（GMP)、次黃嘌呤核苷（MP)。另外還可以加入到飲料、焙烤食品以及各 種主、副食品和飲品中。核苷酸的主要生理功能是廣泛參與人體的能量代謝、蛋白質合成， 具有提高各種酶的活性、活化細胞功能、促進抗體形成、增強免疫功能的作用。對人體來說 有很好的保健作用，它們可促進神經細胞的生長發育，是與"神經生長因子"有關或者可以 作為神經生長物質利用的營養成分。促進鐵質吸收及影響脂質代謝，改變腸道菌叢及提供 腸道黏膜完整所需的營養，達到提升免疫功能的效果。一些臨床上的研究發現，添加核苷酸 的嬰兒配方奶粉，可減少腹瀉的發生及促進較小胎兒的生長發育。
[0003] 牛奶中一般不含有核苷酸，在目前實施的嬰幼兒配方奶粉國家標準中未規定這項 指標；但根據核苷酸對嬰幼兒的特殊功效，許多企業特別是國外獨資或合資和我國大型乳 品企業的標準中都作為重要指標，為此必須儘快研究制定適用於乳製品的檢測方法。目前 報導的檢測方法主要有微生物法、紫外分光光度法、高效液相色譜法等，但大部分都是針對 核苷酸添加劑所制定的方法，對於像乳製品類成分複雜的樣品尚無適宜的方法。
【發明內容】
[0004] 本發明旨在提供一種簡便、快速、準確的乳製品中核苷酸含量的測定方法。
[0005] 本發明所述的乳製品中核苷酸含量的測定方法，包括以下步驟： (1)標準曲線製作： 標準溶液的配製：配製GMP、UMP、GMP、IMP、AMP濃度各為lmg/ml的儲備液；然後配 製成濃度各為10. 0、20. 0、30. 0、40. 0、50. 0 μ g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別為 10 μ 1，通過高效液相色譜儀測定其峰高並計算回歸方程及相關係數。
[0006] (2)試樣測定： 準確稱取10. Og的樣品，用20ml溫水溶解後放入超聲波浴中震蕩IOmin取出，轉入 50ml容量瓶中，加入5ml 10%的醋酸沉澱蛋白，定容後混勻用濾紙過濾後再通過0. 45 μ m濾 膜過濾，通過高效液相色譜儀測定其峰高。
[0007] (3)計算： 根據標準曲線方程和試樣的峰高值，可得到乳製品中各種核苷酸的含量。
[0008] 優選的，本發明所述的高效液相色譜儀的色譜條件是：迪馬C18柱，5μπι 4. 6*200mm ;柱溫25°C ;流動相流速為I. Oml/min ;紫外檢測器波長254nm。
[0009] 更優選的，本發明所述的流動相包括兩種，第一種為O.Olmol/L的磷酸二氫鉀 960ml+0. lmol/L的磷酸氫二鉀40mL的混合液，第二種為乙腈：0· Olmol/L的磷酸二氫鉀 +0. 005mol/L的磷酸氫二鉀+lmmol/L的C16H36BrN混合液為5 :95的混合液。
[0010] 本發明所述的第一種流動相主要用於測定GMP、MP、AMP ;第二種流動相主要用於 測定CMP、UMP。如果測定核苷酸添加劑，由於不受乳製品成份的幹擾，可只採用第一種流動 相，即可一次性測定出五種組分的核苷酸含量。
[0011] 經測定，本發明所述的測定方法此方法標準曲線線性好，濃度與峰高間呈正相關， 相關性好，可用於外標法進行定量測定。此方法回收率與精密度試驗結果較好，回收率在 92-97%，平均為94. 6%，樣品重複測定8次的變異係數為1. 79%。
[0012] 本發明所述的測定方法採用高效液相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中核苷酸含量 是一較理想的方法，該法操作簡便，易於掌握，其測定精密度和準確度能滿足乳製品分析的 要求。因此，可作為常規檢測方法應用。
【具體實施方式】
[0013] 實施例一： (1)標準溶液的配製：配製GMP、UMP、GMP、IMP、AMP濃度各為lmg/ml的儲備液；然後 配製成濃度各為10. 0、20. 0、30. 0、40. 0、50. 0 μ g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別 為10 μ 1，通過高效液相色譜儀在迪馬C18柱、5 μ m 4. 6*200mm、柱溫25°C、流動相流速為 I. Oml/min、紫外檢測器波長254nm、流動相為0· Olmol/L的磷酸二氫鉀960ml+0. lmol/L的 磷酸氫二鉀40mL的混合液的條件下，測得峰高與濃度的關係曲線及相關係數。
[0014] 從而得到峰高-濃度的關係曲線如表-1所示。
[0015] 表-1標準曲線
【權利要求】
1. 乳製品中核苷酸含量的測定方法，包括以下步驟： (1)標準曲線製作： 標準溶液的配製：配製GMP、UMP、GMP、IMP、AMP濃度各為lmg/ml的儲備液；然後配 製成濃度各為10. 0、20. 0、30. 0、40. 0、50. 0 y g/ml的系列標準濃度的溶液，進樣量分別為 10 Ul，通過高效液相色譜儀測定其峰高並計算回歸方程及相關係數； (2)試樣測定： 準確稱取10. 〇g的樣品，用20ml溫水溶解後放入超聲波浴中震蕩lOmin取出，轉入 50ml容量瓶中，加入5ml 10%的醋酸沉澱蛋白，定容後混勻用濾紙過濾後再通過0. 45 iim濾 膜過濾，通過高效液相色譜儀測定其峰高； (3)計算： 根據標準曲線方程和試樣的峰高值，可得到乳製品中各種核苷酸的含量。
2. 如權利要求1所述的乳製品中核苷酸含量的測定方法，其特徵在於所述的高效液 相色譜儀的色譜條件是：迪馬C18柱，5iim 4. 6*200mm ;柱溫25°C ;流動相流速為1. 0ml/ min ;紫外檢測器波長254nm。
3. 如權利要求1或2所述的乳製品中核苷酸含量的測定方法，其特徵在於所述的流 動相包括兩種，第一種為〇? 〇lmol/L的磷酸二氫鉀960ml+0. lmol/L的磷酸氫二鉀40mL的 混合液，第二種為乙腈：〇? 01m〇l/L的磷酸二氫鉀+0? 005mol/L的磷酸氫二鉀+lmmol/L的 C16H36BrN混合液為5 :95的混合液。
【文檔編號】G01N30/02GK104391051SQ201410576919
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月24日 優先權日:2014年10月24日
【發明者】李勇, 劉文斌 申請人:西安瑩樸生物科技股份有限公司