西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法
2023-11-10 03:28:52
西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法
【專利摘要】本發明公開了一種西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。本發明所提供雙孢蘑菇具體為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094，採自中國西藏林芝地區的野生菌株經過人工馴化後得到，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.8308。實驗證明，本發明所提供的西藏淡褐色雙孢蘑菇2094（CGMCC?No.8308）子實體蛋白質含量和粗纖維含量都較高，碳水化合物含量略低，子實體乙醇提取物具有較強的抗氧化能力。該菌株菌蓋主色為淡褐色，菌種播種後萌發較快，從接種到原基發生的時間相對較短。本發明開發了雙孢蘑菇新品種，對於保護該物種的種質資源、調整雙孢蘑菇品種結構、豐富我國野生雙孢蘑菇種質資源庫、推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良等具有重要意義。
【專利說明】西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。
【背景技術】
[0002]雙孢蘑燕[Agaricus bisporus (J.E.Lange) Imbach]是當今世界上栽培面積最廣、產量最多的全球性食用菌，也是我國最大宗的出口創匯食用菌之一。它以其豐富的營養、鮮美的口味和提高機體免疫力的作用，非常適合現代人的美食追求。由於雙孢蘑菇是歐美發達國家主要栽培與消費食用菌，所以發展雙孢蘑菇產業對於推動出口貿易也尤為重要。
[0003]雙孢蘑菇的人工栽培始於法國路易十四時代，隨後在歐洲和北美各國迅速推廣。20世紀20年代中期傳入中國。目前全世界有超過80個國家和地區栽培雙孢蘑菇，中國的雙孢蘑菇總產量位居世界前列。然而，目前我國雙孢蘑菇的主栽菌株來源比較單一，遺傳基礎狹窄，可能造成雙孢蘑菇菌種的抗逆性和對不良環境適應能力的降低，加速雙孢蘑菇菌種的退化，從而不利於雙孢蘑菇的栽培生產。
[0004]我國現有的雙孢蘑菇栽培種質大多是從國外引進的，白色品系居多，鮮有棕色品種，野生的雙孢蘑菇種植資源十分缺乏。因此，從我國境內採集得到野生雙孢蘑菇菌株，將有利於豐富我國野生雙孢蘑菇種質資源庫，推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良，具有極大的開發利用前景。
【發明內容】
[0005]本發明提供了一種西藏淡褐色雙孢蘑菇菌株及其子實體栽培方法。
[0006]本發明提供的西藏淡褐色雙孢蘑菇新菌株是從西藏林芝採集到野生菌新鮮標本，經組織分離培養和馴化而成。該菌株被命名為「雙孢蘑菇2094」，並保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號)，保藏編號為CGMCC N0.8308。
[0007]所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)在作為親本進行雜交育種中的應用也屬於本發明的保護範圍。
[0008]栽培所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)得到的子實體也屬於本發明的保護範圍。
[0009]培養所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)得到的菌絲體也屬於本發明的保護範圍。
[0010]本發明所提供的所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)子實體的栽培方法，可包括如下步驟:
[0011](I)母種製備:將所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)接種到母種培養基上(一般為試管斜面)，220C - 280C (如24 - 26°C)避光培養，培養至菌絲長滿培養基，得到的菌絲體作為母種；
[0012]其中，接種量為每20cm2表面積的所述母種培養基中接入0.2cmX0.2cm面積大小的所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)的菌絲。
[0013](2)原種製備:將步驟(1)所得的母種轉接到原種培養基上，22°C -28 °C (如24 - 26°C)避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%,培養至菌絲長滿培養基，得到原種；
[0014]其中，接種量為每500mL體積的所述原種培養基中接入3 - 5個0.5cmX0.5cm面積大小的所述母種的菌種塊。
[0015](3)栽培種製備:將步驟(2)所得的原種轉接到栽培種培養基上，22°C -28°C (如24 - 26°C)避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%,培養至菌絲長滿培養基，得到栽培種；
[0016]其中，接種量為每IOOmL體積的所述栽培種培養基中接入ImL體積的所述原種。
[0017](4)接種及發菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，22 °C - 28 °C (如24 - 26°C)避光培養，空氣相對溼度為65% - 75% ；
[0018]其中，接種量為每平米栽培面積的所述栽培料接入700 -1OOOmL所述栽培種。
[0019](5)覆土:步驟(4)培養的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，開始在所述栽培料的料面上覆土，220C - 280C (如24 - 26°C )避光培養，空氣相對溼度為70% - 75%，每天通風I次維持空氣中二氧化碳相對濃度0.1% - 0.5% (體積分數)；
[0020]所述覆土具體為:向所述栽培料上覆蓋一層厚度為3-3.5cm的土壤-麥殼混合物；所述土壤-麥殼混合物按照Im3 土壤(生黃土或菜園土)摻入25kg麥殼(新鮮無黴變的麥殼)的量混合而成；所述土壤-麥殼混合物的pH為8 - 8.5,溼度為40% - 50%(即土壤-麥殼混合物中水分的質量分數為40 - 50%)；
[0021](6)出菇管理:步驟(5)培養的菌絲生長到土層表面時，補一層細土，轉移至晝夜溫差為6 -1O0C (白天溫度為18 - 25°C，夜晚溫度為10 - 15°C)，光照強度為500 - 800Lux,空氣相對溼度為85% - 95%，每天通風2 - 3次使二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數)的條件下培養3 - 5天；
[0022](7)出菇:轉移至環境溫度為12°C - 20°C，空氣相對溼度為75% - 90%, 二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數)的條件下培養得到子實體。
[0023]在上述方法中，所述母種培養基可為加富PDA培養基、麩皮浸汁培養基或糞草浸汁培養基；
[0024]每升所述加富PDA培養基按照如下方法配製得到:將馬鈴薯150g、麩皮(小麥外皮)50g放入1000mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BI 10mg，加熱使之完全溶化，再加水補足至1000mL，滅菌30min，獲得IL所述加富PDA培養基。
[0025]每升所述麩皮浸汁培養基按照如下方法配製得到:將麩皮100g放入900mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂 20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BI 10mg，加熱使之完全溶化，再加水補足至1000mL,獲得IL所述麩皮浸汁培養基；
[0026]每升所述糞草浸汁培養基按照如下方法配製得到:將幹糞草100g放入900mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BI 10mg，加熱使之完全溶化，再加水補足至1000mL,獲得IL所述麩皮浸汁培養基。其中，所述幹糞草按照如下方法製備獲得:將水、牛糞、秸杆按照質量配比為6:2:1的比例混合後，堆制發酵10天，期間每隔3天翻堆一次，外料內翻，上料下翻，翻堆3次，然後曬乾粉碎過篩(篩孔徑0.5cmX0.5cm),即得到所述幹糞草。其中，牛糞和秸杆的質量按照乾重計算。[0027]在上述方法中，所述原種培養基和所述栽培種培養基均由青稞、幹糞草(發酵後的幹糞草)、石膏粉、生石灰和水混合而成；所述青稞、所述幹糞草、所述石膏粉和所述生石灰的質量(乾重)配比為85:12:2:1 ;所述水在所述原種培養基和所述載體種培養基中的質量百分含量均為65%。
[0028]其中，所述幹糞草按照如下方法製備獲得:將水、牛糞、秸杆按照質量配比為6:2:I的比例混合後，堆制發酵10天，期間每隔3天翻堆一次，外料內翻，上料下翻，翻堆3次，然後曬乾粉碎過篩(篩孔徑0.5cmX0.5cm),即得到所述幹糞草。其中，牛糞和秸杆的質量按照
乾重計算。
[0029]進一步，所述栽培料可由如下栽培原料經二次發酵後得到:所述栽培原料由秸杆(如小麥秸杆和/或青稞秸杆)、動物糞便(如幹牛糞和/或雞糞)、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5)、動物；所述秸杆、所述動物糞便、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為60:35:1:0.5:2:0.5:2。
[0030]在本發明中，所述栽培原料具體為如下(al) - (a5)中任一種:
[0031](al)栽培原料1:由小麥秸杆、幹牛糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸杆、所述幹牛糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為60:35:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0032](a2)栽培原料2:由小麥秸杆、青稞秸杆、幹牛糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，pH7.5-8.0 ;所述小麥秸杆、所述青稞秸杆、所述幹牛糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為30:30:35:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0033](a3)栽培原料3:由小麥秸杆、青稞秸杆、幹牛糞、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸杆、所述青稞秸杆、所述幹牛糞、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為 30:30:15:20:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0034](a4)栽培原料4:由小麥秸杆、青稞秸杆、幹牛糞、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，PH7.5-8.0 ;所述小麥秸杆、所述青稞秸杆、所述幹牛糞、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為 30:30:25:10:1:0.5:2:0.5:2 ；
[0035](a5)栽培原料5:由小麥秸杆、青稞秸杆、雞糞、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成，pH7.5-8.0 ;所述小麥秸杆、所述青稞秸杆、所述雞糞、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量(乾重)配比為30:30:35:1:0.5:2:0.5:2o
[0036]在本發明中，所述二次發酵分為前發酵和後發酵。所述前發酵為:向所述栽培原料加水至水分質量含量為65% - 70%,堆制發酵，監測堆體溫度，只要堆體溫度達到70°C以上後開始下降時進行一次翻堆，經過3 - 4次翻堆後，完成所述前發酵。所述後發酵為:將經過所述前發酵的栽培料進行再次發酵，將堆體溫度人工升至60°C並保持10h，然後將堆體溫度人工降至50°C保持3 - 4d，自然降溫一天後，再將堆體溫度人工降至常溫(25°C)，完成所述後發酵，所述二次發酵即告結束。[0037]更加具體的，在本發明的一個實施例中，所述前發酵是將所述栽培原料用水進行預溼(至其含水量約為68%)、混勻後，堆制發酵，建堆規格為高1.0 - 1.2m，寬1.8-2.2m，在堆體長度方向每隔Im左右在堆體垂直插入直徑IOcm木桿造通氣孔，監測堆體溫度，只要堆體溫度達到70°C以上開始下降時就進行一次翻堆，翻堆4次後，完成所述前發酵。所述後發酵是將經過前發酵的培養料進行再次發酵，採用人工通蒸汽輔助升溫使發酵的料溫達到60°C左右並保持IOh左右，再通過調節通入蒸汽量，使菇房中層溫度在50°C左右保持3 - 4d(可根據培養料一次發酵腐熟程度靈活掌握)，即可停火自然降溫一天後，適當通風使菇房內溫度降至40°C，之後打開全部風口通風，降至常溫進行培養料整床，二次發酵即告結束。經過所述二次發酵的栽培原料應無氨味，無糞臭味，可以看到料面明顯的白色放線菌層。
[0038]進一步，將經過所述二次發酵的栽培原料的含水量要調整到65% (質量分數)，pH值調整到7.0 - 7.5，即得到所述栽培料。
[0039]在所述方法中，栽培方式具體可為層架栽培。
[0040]所述層架栽培為:層架規格為3 _ 5層，層聞0.6m,覽1.5m,底層距尚地面0.3m(長度依據需要而定)；所述栽培料平鋪於每層床架進行栽培出菇。
[0041]所述子實體在食品加工中的應用也屬於本發明的保護範圍。
[0042]本發明所提供的所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)是採自中國西藏林芝地區的野生菌株經過人工馴化後得到的。實驗證明，所述西藏淡褐色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)子實體的蛋白質含量和粗纖維含量都較高，而碳水化合物含量略低。該菌株菌蓋主色為淡褐色，菌種播種後萌發較快，從接種到原基發生的時間相對較短。本發明開發了雙孢蘑菇新品種，對於保護該物種的種質資源、調整雙孢蘑菇品種結構、豐富我國野生雙孢蘑菇種質資源庫、推進雙孢蘑菇菌種的選育和改良等具有重要意義。
[0043]保藏說明
[0044]建議分類命名:雙孢蘑菇
[0045]拉丁名:(Agaricusbisporus)
[0046]參椐的生物材料:2094
[0047]保藏機構:中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0048]保藏機構簡稱:CGMCC
[0049]地址:北京市朝陽區北辰西路I號院3號
[0050]保藏日期:2013年10月14日
[0051]保藏中心登記入 冊編號:CGMCC N0.8308
【專利附圖】
【附圖說明】
[0052]圖1為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)菌株試管菌種(母種)。
[0053]圖2為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)在麩皮浸汁培養基(左邊)和糞草浸汁培養基(右邊)平板培養7天後菌絲的生長狀況。
[0054]圖3為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)菌株的栽培種(709為原始採
集編號)。
[0055]圖4為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)菌株播種15天後2094菌株的發菌情況。[0056]圖5為西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)菌株子實體出菇。
【具體實施方式】
[0057]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0058]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0059]雙孢蘑菇As2796:在本發明中作為西藏淺棕色雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8307)的對照品種。As2796為國內廣泛栽培的雙孢蘑菇雜交種，由福建省輕工業研究所(現為福建省農業科學院食用菌研究所)以荷蘭的菌株02和來自法國的菌株8213作親本，通過雜交篩選而獲得的品種。現今，As2796在我國已大面積推廣，成為我國栽培量最大的雙孢蘑菇品種(王澤生，蘑菇雜交株As2796的種性與栽培技術要點。食用菌，1993.5:8 ;王澤生，曾偉，雙孢蘑菇雜交菌株As2796家系的分子遺傳研究。菌物系統，2001.20(2):233 - 237)。
[0060]實施例1、西藏淡褐色雙孢蘑菇2094的獲得及分類鑑定
[0061]本發明菌株(記作2094)是從西藏自治區林芝採集到野生雙孢蘑菇新鮮標本，經組織分離、培養和馴化而成。通過對其子實體及菌絲體形態特徵的觀察，結合細胞核rDNA-1TS測序，對該菌株進行分類鑑定。
[0062]一、形態學特性
[0063]1、菌絲體形態特性 [0064]本發明菌株2094的菌絲濃密旺盛，前期潔白，培養一段時間略帶淺褐色。如圖1、圖2所示。
[0065]2、子實體形態特性
[0066]本發明菌株2094的子實體形態如圖5所示。子實體大小中等，菌蓋寬4 - 8cm，初半球形，後逐漸平展，淡褐色，菌蓋邊緣均勻分布0.1 -0.2cm細小近白色鱗片。菌肉白色，厚，傷後略變淡紅色，具蘑菇特有的氣味。菌褶粉紅色，後變褐色至黑褐色，密，窄，離生，不等長。菌柄長2.5 - 4cm，粗1.5 - 3.5cm,白色，光滑，具絲光，近圓柱形，內部鬆軟或中實。菌環單層，白色，膜質，生菌柄中部，易脫落。孢子印深褐色。孢子褐色，橢圓形，光滑。
[0067]通過上述形態學鑑定,將本發明菌株2094初步判斷為蘑燕屬(Agaricus)的物種。
[0068]二、分子生物學特性
[0069]rDNA-1TS 序列作為條形碼(Schoch, C.L.et al.Nuclear ribosomal internaltranscribed spacer(ITS)region as a universal DNA barcode marker for Fung1.Proceedings of the National Academy of Sciences, 2012.109:6241 - 6246),廣泛用於真菌物種鑑定。本發明對採集的野生雙孢蘑菇子實體，分離得到的本發明菌株2094及其栽培形成的子實體進行DNA提取和rDNA-1TS擴增測序，其測序結果表明三者具有相同的rDNA-1TS序列，如序列表中序列I所示。該序列與GenBank中經過研究定名為雙孢蘑燕(六8&1'；[(3118 bisporus)的 rDNA-1TS 序列，如 AF465403 (Callac, P.et al.A novelhomothallic variety of Agaricus bisporus comprises rare tetrasporic isolatesfrom Europe.Mycologia, 2003.95:222 - 231.)> AF432886 (Challen, M.P.et al.Aphylogenetic reconstruction and emendation of Agaricus section Duploannulatae.Mycologia, 2003.95:61 - 73.)和 JN234841、JN234843 (Avin, F.A.et al.Molecularclassification and phylogenetic relationships of selected edible Basidiomycetesspecies.Molecular biology reports, 2012.39:7355-7364.)進行比對分析，僅有一個喊基的差異，其同源相似性接近100%。
[0070]鑑於上述形態特徵及rDNA-1TS序列的分類鑑定研究，確定本發明菌株2094為雙孢蘑燕(Agaricus bisporus),隸屬於擔子菌門(Basidiomycota)、蘑燕綱(八區&1'；[(301115^6七68)、蘑燕目(△8&1'；^3168)、蘑燕科(六831'；^30636)、蘑燕屬(Agaricus)。該菌株已保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:北京市朝陽區北辰西路I號院3號)，保藏編號為CGMCC N0.8308。
[0071]實施例2、西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)子實體的人工栽培
[0072]一、栽培流程
[0073]西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)的栽培流程具體如下:母種製備一原種製備一栽培種製備一接種及發菌一覆土一出燕管理一出燕一米收。
[0074]( U母種的製備:將組織分離得到的西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)的稀疏菌絲，接種到母種培養基上，其接種量為每20cm2表面積的母種培養基中接入0.2cmX0.2cm面積大小的菌絲,一定溫度下避光培養,培養至菌絲長滿培養基,得到的菌絲體作為母種。
[0075](2)原種的製備:將步驟(1)所得的母種轉接到原種培養基上，其接種量為每500mL體積的原種培養基中均勻接入3 - 5個0.5cmX0.5cm面積大小的母種的菌種塊,一定溫度下避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%,培養至菌絲長滿培養基，得到原種。
[0076](3)栽培種的製備:將步驟(2)所得的原種轉接到栽培種培養基上，其接種量為菌種與培養基體積比1:100，一定溫度下避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%,培養至菌絲長滿培養基，得到栽培種。
[0077](4)接種及發菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，其接入比例為每平米栽培面積的所述栽培料接入700 -1OOOmL所述栽培種，一定溫度下避光培養，空氣相對溼度為65% - 75%。
[0078](5)覆土:步驟(4)培養的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，向所述栽培料上覆蓋一層厚度為3-3.5cm的土壤-麥殼混合物，一定溫度下避光培養，空氣相對溼度為70% - 75%，每天通風I次使空氣中二氧化碳相對濃度0.1% - 0.5% (體積分數)；
[0079]所述土壤-麥殼混合物按照Im3 土壤(生黃土或菜園土)摻入25kg麥殼(新鮮無黴變的麥殼)的量混合而成；所述土壤-麥殼混合物的pH為8 - 8.5,溼度為40% - 50% (即土壤-麥殼混合物中水分的質量分數為40 - 50%)。
[0080](6)出菇管理:步驟(5)培養的菌絲生長到土層表面時，補一層細土，開始降溫，維持晝夜6 - 10°C的溫差刺激(白天溫度為18 - 25°C，夜晚溫度為10 - 15°C)，以及光照強度為500 - 800Lux、的弱光刺激，空氣相對溼度為85% - 95%，每天通風2-3次使二氧化碳相對濃度下降至0.05% - 0.15% (體積分數)，培養3 - 5天。
[0081](7)出菇:發現大量蘑菇原基後，轉移至環境溫度為12°C _20°C，空氣相對溼度為75% - 90%, 二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15% (體積分數)的條件下培養。
[0082](8)採收:待子實體長至八成熟，菌蓋尚未完全展開，即可採收第一潮菇。採摘後進行清理殘留菇根、補土菇穴，待菌絲恢復後重新上述操作進行出菇，採收下一潮菇。
[0083]二、條件優化[0084]本發明的發明人分別對栽培過程中的如下因素進行了優化:培養溫度、母種培養基、原種培養基、栽培種平培養基和栽培料。
[0085]1、培養溫度的確定
[0086]將組織分離得到的西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)的稀疏菌絲，通過打孔的方式，按照直徑為0.5cm的接種塊量，接種於PDA培養基(配方見下文)上，放在不同的溫度(22 °C、24°C、26 °C、28 °C )下避光培養，培養過程中測定菌絲的生長速度，並觀察菌絲的生長情況。
[0087]其中，菌絲平均生長速度測定:培養2 - 3d後，記錄菌絲位置(A)，3 - 5d後記錄菌絲位置(B)，用直尺測量A與B之間的距離，除以兩位置之間的天數即為菌絲的日平均生長速度。
[0088]實驗重複三次，定量數據結果取平均值。
[0089]結果如表1所示，可見西藏淡褐色雙孢蘑菇2094 (CGMCC N0.8308)在24°C條件下，菌絲生長速度較快，菌絲較粗壯。
[0090]表1不同溫度下菌絲生長速度的測定結果(單位:cm/d)
[0091]
【權利要求】
1.雙孢蘑菇2094，它在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為 CGMCC N0.8308。
2.權利要求1所述雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)在作為親本進行雜交育種中的應用。
3.栽培權利要求1所述雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)得到的子實體。
4.培養權利要求1所述雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)得到的菌絲體。
5.權利要求3所述子實體的栽培方法，包括如下步驟: (1)母種製備:將權利要求1所述雙孢蘑菇2094(CGMCC N0.8308)接種到母種培養基上，22°C _28°C避光培養，培養至菌絲長滿培養基，得到的菌絲體作為母種； (2)原種製備:將步驟(1)所得的母種轉接到原種培養基上，22°C_28°C避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%，培養至菌絲長滿培養基，得到原種； (3)栽培種製備:將步驟(2)所得的原種轉接到栽培種培養基上，22°C- 28°C避光培養，空氣相對溼度為60% - 70%,培養至菌絲長滿培養基，得到栽培種； (4)接種及發菌:將步驟(3)所得的栽培種接入栽培料，22°C- 28°C避光培養，空氣相對溼度為65% - 75% ； (5)覆土:步驟(4)培養的菌絲長至所述栽培料厚度的3/4時，開始在所述栽培料的料面上覆土，220C - 26°C避光培養，空氣相對溼度為70% - 75% ； (6)出菇管理:步驟(5)的菌絲生長到土層表面時，轉移至晝夜溫差為6- 10°C，光照強度為200 -1OOOLux,空氣相對溼度為85% - 95%的條件下培養3 - 5天； (7)出菇:轉移至環境溫度為12°C- 20°C，空氣相對溼度為75% - 90%,空氣中二氧化碳相對濃度為0.05% - 0.15%的條件下培養得到子實體。
6.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於:所述母種培養基為加富PDA培養基、麩皮浸汁培養基或糞草浸汁培養基； 每升所述加富PDA培養基按照如下方法配製得到:將馬鈴薯150g、麩皮50g放入1000mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BllOmg，再加水補足至1000mL,獲得IL所述加富PDA培養基； 每升所述麩皮浸汁培養基按照如下方法配製得到:將麩皮100g放入900mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BllOmg，再加水補足至1000mL,獲得1L所述麩皮浸汁培養基； 每升所述糞草浸汁培養基按照如下方法配製得到:將幹糞草100g放入900mL水中煮沸lOmin，取濾液加入瓊脂20g、蔗糖或葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素BllOmg，再加水補足至1000mL,獲得1L所述麩皮浸汁培養基。
7.根據權利要求5或6所述的方法，其特徵在於:所述原種培養基和所述栽培種培養基均由青稞、幹糞草、石膏粉、生石灰和水混合而成；所述青稞、所述幹糞草、所述石膏粉和所述生石灰的質量配比為85:12:2:1 ;所述水在所述原種培養基和所述栽培種培養基中的質量百分含量均為65%。
8.根據權利要求5- 7中任一所述的方法，其特徵在於:所述栽培料由栽培原料經二次發酵後得到；所述栽培原料由秸杆、動物糞便、過磷酸鈣、碳酸氫銨、石膏粉、尿素和生石灰混合而成；所述秸杆、所述動物糞便、所述過磷酸鈣、所述碳酸氫銨、所述石膏粉、所述尿素和所述生石灰的質量配比為60:35:1:0.5:2:0.5:2。
9.權利要求3所述子實體在食品加工中的應用。
【文檔編號】A01G1/04GK103875453SQ201410120515
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月27日 優先權日:2014年3月27日
【發明者】姚一建, 李斌斌, 蔣思萍, 魏鐵錚, 徐愛國, 王曉亮, 張祖堂, 普布多吉 申請人:中國科學院微生物研究所