一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法
2023-11-03 21:25:22 2
一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法，包括配方、混合料預備和凍幹工藝。本發明採用在凍幹工藝的真空冷凍升華乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結合水的共溶點以下來消除CRM197蛋白的聚集；在真空升溫解吸乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在降解點以下來消除Hib莢膜結構的降解，使b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑無需添加佐劑的技術方案，克服了現有技術存在蛋白聚集、結構降解、需加佐劑的問題與不足，使b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑，達到了消除蛋白聚集和結構降解，無需加佐劑的目的。
【專利說明】一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種疫苗凍幹製劑的製備方法，具體是指用於將b型流感嗜血桿菌結合疫苗製成凍幹製劑的一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法。
【背景技術】
[0002]b型流感嗜血桿菌結合疫苗，學名b型流感嗜血桿菌莢膜寡糖與CRM197蛋白結合物，又稱Hib-CRM197蛋白結合物，是一種用於預防兒童b型流感的疫苗；b型流感嗜血桿菌結合疫苗有凍幹製劑和液態製劑兩種劑型，這兩種劑型在多糖含量及分子大小與分布等質量指標上均保持一致；其中，凍幹製劑穩定性高，無需添加防腐劑，且能夠延長保存期和有效期。
[0003]b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑，簡稱b型凍幹疫苗；b型凍幹疫苗的品質取決於冷凍乾燥工藝曲線，簡稱凍幹工藝；現有技術的凍幹工藝使製備的b型凍幹疫苗中的CRM197蛋白存在聚集現象，以及Hib莢膜結構(核糖基核糖醇磷酸聚合物)存在降解現象，參閱圖3並對照圖1，使得b型凍幹疫苗的生物活性下降，為此需要在b型凍幹疫苗中添加佐劑以增強免疫受體的應答強度；然而，疫苗佐劑的負作用會因不同的生物受體而各異，而理想的疫苗應該無需添加佐劑；因此，現有技術存在蛋白聚集、結構降解、需加佐劑的問題與不足。
【發明內容】
[0004]針對上述現有技術存在的問題與不足，本發明採用在凍幹工藝的真空冷凍升華乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結合水的共溶點以下來消除CRM197蛋白的聚集；在真空升溫解吸乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在降解點以下來消除Hib莢膜結構的降解，使b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑無需添加佐劑的技術方案，提供一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法，旨在使b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑，達到消除蛋白聚集和結構降解，無需加佐劑的目的。
[0005]本發明的目的是這樣實現的:一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法，包括配方、混合料預備和凍幹工藝，其中，
[0006]所述的配方為，
[0007]原料:Hib_CRM197蛋白結合物原漿；
[0008]稀釋劑:注射用水；
[0009]凍幹保護劑:蔗糖，分析純；
[0010]所述的混合料預備為:室溫下，將所述配方中的原料置於中性硼矽玻璃質的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克/毫升，獲得稀料；之後，將所述凍幹保護劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉速100轉/分鐘，混合攪拌用時5分鐘，獲得含有凍幹保護劑的，混合料；之後，將所述混合料按0.5ml/瓶分裝於中性硼矽玻璃質注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用；
[0011]所述的凍幹工藝，包括預凍階段、升華乾燥階段、解吸乾燥階段；其中，
[0012]一、預凍階段:
[0013]將所述瓶裝料開口置於真空冷凍乾燥機中進行深冷預凍；冷阱溫度? -801，氣壓為一個大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45X:，用時2?3小時；
[0014]二、升華乾燥階段:
[0015]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中，
[0016]冷阱溫度? -801，真空度? 5？?分二步進行升華乾燥；
[0017]升華乾燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30X:，用時12小時；
[0018]升華乾燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-101:，用時8小時；
[0019]三、解吸乾燥階段:
[0020]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中，
[0021]冷阱溫度? -801，真空度? 5？?進行解吸乾燥；
[0022]瓶裝料溫度為15?201，用時10小時；
[0023]取出，封蓋，獲得無佐劑6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑製品。
[0024]有益效果
[0025]本發明製備的6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑製品，水分含量為1.89%，經八0細!'106 蛋白質層析儀檢測，參閱圖2並對照圖1，消除了蛋白聚集和結構降解現象，無需添加佐劑，因而稱為無佐劑6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑。
[0026]上述，本發明採用在凍幹工藝的真空冷凍升華乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在自由水與結合水的共溶點以下來消除￠^1197蛋白的聚集；在真空升溫解吸乾燥去除自由水的過程中，控制瓶裝料的溫度在降解點以下來消除11113莢膜結構的降解，使6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑無需添加佐劑的技術方案，克服了現有技術存在蛋白聚集、結構降解、需加佐劑的問題與不足，所提供的一種無佐劑6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法，使6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑，達到了消除蛋白聚集和結構降解，無需加佐劑的目的。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0027]讀圖說明:
[0028]圖1、圖2、圖3均為八1(1細!'11116 ？1118蛋白質層析儀的檢測圖譜，簡稱圖譜；其中，圖中曲線位於橫坐標60「附近稱為聚集吸收段，所述聚集吸收段對應的縱坐標峰值表示多糖大分子聚集的吸收量值；圖中曲線位於橫坐標120「附近稱為目標結合物吸收段，所述目標結合物吸收段對應的縱坐標峰值表示目標結合物的吸收量值；圖中曲線位於橫坐標18001附近稱為蔗糖吸收段，所述蔗糖吸收段對應的縱坐標峰值表示蔗糖吸收量值；
[0029]圖1是未稀釋未凍幹前的6型流感嗜血桿菌結合疫苗原液的圖譜，圖中顯示含有可忽略的蔗糖吸收量值；
[0030]圖2是本發明製備的6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑凍幹後的圖譜；圖中的多糖大分子聚集的吸收量值低於-9.7—11，與圖1對比，在可忽略範圍內；圖中可見添加的凍幹保護劑蔗糖的吸收量值；
[0031]圖3是現有技術製備的6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑凍幹後的圖譜；圖中的多糖大分子聚集的吸收量值高於-9.0—11，這表明(^1197蛋白發生了聚集，與圖1對比，超出了許可範圍；同時，目標結合物的吸收量值因多糖大分子聚集的吸收量值的增高而下降，低於-9.5^11 ；這表明目標結合物結構，與圖1對比，發生了超出許可範圍的降解，因而需要添加佐劑；此外，圖中可見添加的凍幹保護劑蔗糖的吸收量值。
實施例說明
[0032]以下通過具體實施例對本發明的一種無佐劑6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法作進一步詳細說明，所屬領域的技術人員可以參照實施例的配方及工藝方法製得無佐劑6型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑製品，但不應理解為對本發明的任何限制。
【具體實施方式】
[0033]
[0034]實施例
[0035]品名:無佐劑13型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑
[0036]配方:原料蛋白結合物原漿；
[0037]稀釋劑:注射用水；
[0038]凍幹保護劑:蔗糖，分析純；
[0039]製備
[0040]製備條件、
[0041]環境氣壓:一個大氣壓；環境溫度:室溫；
[0042]設施、設備:無菌室；中性硼矽玻璃質攪拌釜；中性硼矽玻璃質注射劑瓶；真空冷凍乾燥機
[0043]製備工藝:包括混合料預備、凍幹工藝；
[0044]混合料預備:
[0045]將所述配方中的原料置於中性硼矽玻璃質的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克丨毫升，獲得稀料；之後，將所述凍幹保護劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉速100轉/分鐘，混合攪拌用時5分鐘，獲得含有凍幹保護劑的，混合料；之後，將所述混合料按0.501/瓶分裝於中性硼矽玻璃質注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用；
[0046]凍幹工藝:
[0047]包括預凍階段、升華乾燥階段、解吸乾燥階段；
[0048]一、預凍階段:
[0049]將所述瓶裝料開口置於真空冷凍乾燥機中進行深冷預凍；冷阱溫度? -801，氣壓為一個大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45X:，用時2?3小時；
[0050]二、升華乾燥階段:
[0051]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中，
[0052]冷阱溫度? -801:，真空度? 5？^分二步進行升華乾燥；
[0053]升華乾燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30X:，用時12小時；
[0054]升華乾燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-101:，用時8小時；
[0055]三、解吸乾燥階段:
[0056]所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中，
[0057]冷阱溫度< -80°C，真空度< 5Pa，進行解吸乾燥；
[0058]瓶裝料溫度為15?20°C，用時10小時；
[0059]取出，封蓋，獲得無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑製品。
【權利要求】
1.一種無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑的製備方法，包括配方、混合料預備和凍幹工藝，其特徵在於: 所述的配方為， 原料:Hib-CRM197蛋白結合物原漿； 稀釋劑:注射用水； 凍幹保護劑:蔗糖，分析純； 所述的混合料預備為:室溫下，將所述配方中的原料置於中性硼矽玻璃質的攪拌釜中，用所述稀釋劑將所述原料攪拌稀釋至20?25微克/毫升，獲得稀料；之後，將所述凍幹保護劑按2.5毫克/毫升所述稀料的比例投入攪拌釜中攪拌混合，攪拌轉速100轉/分鐘，混合攪拌用時5分鐘，獲得含有凍幹保護劑的，混合料；之後，將所述混合料按0.5ml/瓶分裝於中性硼矽玻璃質注射劑瓶中，獲得瓶裝料，待用； 所述的凍幹工藝，包括預凍階段、升華乾燥階段、解吸乾燥階段；其中， 一、預凍階段: 將所述瓶裝料開口置於真空冷凍乾燥機中進行深冷預凍；冷阱溫度< -80°C，氣壓為一個大氣壓，瓶裝料溫度為-55?-45°C，用時2?3小時； 二、升華乾燥階段: 所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中， 冷阱溫度< _80°C，真空度< 5Pa，分二步進行升華乾燥； 升華乾燥步驟1:瓶裝料溫度為-35?-30°C，用時12小時； 升華乾燥步驟2:瓶裝料溫度為-20?-10°C，用時8小時； 三、解吸乾燥階段: 所述瓶裝料仍然留在真空冷凍乾燥機中， 冷阱溫度< _80°C，真空度< 5Pa，進行解吸乾燥； 瓶裝料溫度為15?20°C，用時10小時； 取出，封蓋，獲得無佐劑b型流感嗜血桿菌結合疫苗凍幹劑製品。
【文檔編號】F26B5/06GK104491854SQ201410817576
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月17日 優先權日:2014年12月17日
【發明者】朱康華, 王磊, 劉海昌, 焦澤武, 楊乾敏, 王德學, 楊廷潺, 朱夢丹 申請人:浙江衛信生物藥業有限公司