一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法
2023-12-03 05:12:01 1
專利名稱：一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法
技術領域：
本發明屬於海洋生物資源綜合加工技術領域，具體涉及一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法。
背景技術：
.悔荀iLaminariajaponica)是我國歷代本草中明確記載具有「減肥、消腫」功能的一種重要的 海洋資源，迄今已有1500多年的食用與藥用歷史。目前，海帶的人工養殖量很大，我國各沿海地區均有養殖，產量位居世界首位。藥效學研究表明，海帶富含多糖、維生素、牛磺酸、甘露醇等多種功能性成分，其中多糖已被證明是其發揮降血脂、抗氧化、降血壓、降血糖、抗輻射和抗腫瘤功能的主要活性成分，在醫藥、食品、化妝品、農業等方面具有廣闊的應用前景。海帶多糖主要存在於海帶細胞間和細胞內，由多種不同分子量的多糖組分構成，且不同分子量多糖組分的化學結構、理化性質和藥理活性差異很大。不同多糖結構與活性的構效關係研究表明，多糖結構決定了其理化性質，並由此決定了其藥理活性的有效發揮。因此，在多糖的提取分離純化過程中，宜根據理化性質和藥理活性的差異，採取相應的多糖製備方法。近年來，雖然國內外學者已經對海帶多糖的提取分離純化進行了研究， 並取得了一定進展，但針對多糖的特定藥理活性，採取何種多糖製備方法的研究很少報導。
發明內容
針對上述問題，本發明提供一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法。本發明方法的具體操作步驟如下
(1)海帶的洗滌將鮮海帶用自來水浸泡3天，每3小時換一次水並清洗；
(2)海帶的水分脫除將上述洗乾淨的海帶乾燥處理，得幹海帶；
(3)海帶粉的製備將幹海帶置於G— 125型膠體磨中進行粉碎，過200目篩，得乾燥的海帶粉；
(4)多糖提取按重量體積比1:50向乾燥的海帶粉中加入蒸餾水，超聲功率為600W條件下進行超聲處理10 min，得海帶粉和水的混合液A ;再將混合液A置於磁力攪拌器上，轉速2000 rpm、溫度60 °C條件下，攪拌提取3小時，得提取混合液B ;將提取混合液B進行離心，收集上清液，得海帶多糖提取液；
(5)褐藻酸鹽的去除用濃度為I.5 M的鹽酸溶液調節海帶多糖提取液的pH值為I. 2， 得海帶多糖提取液C，將海帶多糖提取液C在轉速12000 r/min下離心20 min，收集上清液 D ;離心所得沉澱為褐藻酸鹽，棄去；
(6)蛋白的脫除先向上清液D中加入胰蛋白酶，得混合液E，混合液E中胰蛋白酶的終濃度為5 U/mL ;將混合液E置於磁力攪拌器上，在轉速1500 rpm、溫度60 1條件下，反應3 小時，得混合液F ;按體積比I: 10將混合液F與化學脫蛋白試劑充分混合，得混合液G，將混合液G在轉速12000 r/min下離心20 min,收集上清液H ;所述化學脫蛋白試劑由氯仿和正丁醇按體積比I :4混合均勻；(7)多糖的沉澱將上清液H進行減壓濃縮，得濃縮液I ;向濃縮液I中加入無水乙醇， 按體積比使乙醇終濃度達到40%，靜置12小時，離心，得沉澱①和上清液J ;向上清液J中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到60%，靜置12小時，離心，得沉澱②和上清液K ； 向上清液K中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到80%，靜置12小時，離心，得沉澱 ③和上清液L ;將沉澱①、沉澱②和沉澱③分別用30mL蒸餾水溶解，經冷凍濃縮乾燥得多糖組分A、多糖組分B和多糖組分C ;經活體動物實驗分析，多糖組分A和多糖組分B能顯著抑制低密度脂蛋白受體缺陷型(LDL r+)小鼠動脈內膜脂質沉積，與模型組相比，其抑制率分別達到75%和87%，表明通過該種方法製備的海帶多糖具有較強的抗動脈粥樣硬化活性， 多糖組分C未見明顯的抗動脈粥樣硬化活性。所述步驟(2)將上述洗乾淨的海帶放置於通風乾燥箱，在溫度40°C下連續乾燥48 小時。本發明的有益技術效果體現在以下方面
1.本發明提出的抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法，其提取溶劑是蒸餾水，改變了傳統工藝中採用酸液或鹼液進行提取，大大降低了生產過程中酸液或鹼液對設備的腐蝕及對環境造成的汙染；
2.按本發明方法製備的海帶多糖組分A和多糖組分B具有很強的抗動脈粥樣硬化活性，與模型組相比，多糖組分A和多糖組分B對LDL r+小鼠動脈內膜脂質沉積的抑制率分別高達75%和87%，提示水溶性海帶多糖是海帶發揮抗動脈粥樣硬化活性的物質基礎。
具體實施例方式下面結合具體的實施例，對本發明作進一步地說明。
實施例步驟I :海帶的洗滌將鮮海帶用自來水浸泡3天，每3小時換一次水並清洗。步驟2 :海帶的水分脫除將上述洗乾淨的海帶放置於通風乾燥箱，在溫度40°C下連續乾燥48小時。步驟3 :海帶粉的製備將上述乾燥的海帶置於G - 125型膠體磨中進行粉碎，得粒徑< 200目的海帶粉。步驟4 :多糖提取重量體積比1:50向上述製備的乾燥海帶粉中加入蒸餾水，得海帶粉和蒸餾水得混合液，將海帶粉和蒸餾水的混合液在超聲功率為600W的條件下進行超聲處理10 min，得海帶粉和水的混合液A ;將海帶粉和水的混合液A放置於磁力攪拌器上， 在轉速為2000 rpm、溫度為60 1條件下攪拌提取3小時，得提取混合液B ;將提取混合液B 在12000 rpm下離心20 min,收集上清液,得海帶多糖提取液。步驟5 :褐藻酸鹽的去除用濃度為I. 5 M的鹽酸溶液調節海帶多糖提取液的pH 值至I. 2，得海帶多糖提取液C，將海帶多糖提取液C在12000 r/min下離心20 min，收集上清液D。離心所得沉澱為褐藻酸鹽，棄去。步驟6 :蛋白的脫除先向上清液D中加入終濃度為5 U/mL的胰蛋白酶，得混合液 E ;將混合液E放置於磁力攪拌器上，在轉速1500 rpm、溫度60 °C下攪拌反應3小時，得混合液F ;將混合液F與化學脫蛋白試劑按體積比I: 10的比例充分混合，得混合液G，將混合液G在12000 r/min下離心20 min,收集上清液H。步驟7 :多糖的沉澱將上清液H進行減壓濃縮，得濃縮液I ;向濃縮液I中加入無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到40%，靜置12小時，離心，得沉澱①和上清液J ;向上清液J中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到60%，靜置12小時，離心，得沉澱②和上清液K ；向上清液K中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到80 %，靜置12小時，離心， 得沉澱③和上清液L ;將沉澱①、沉澱②和沉澱③分別用30 mL蒸餾水溶解，經冷凍濃縮乾燥得多糖組分A、多糖組分B和多糖組分C ;經活體動物實驗分析，多糖組分A和多糖組分B 能顯著抑制低密度脂蛋白受 體缺陷型(LDL τ+、小鼠動脈內膜脂質沉積，與模型組相比，其抑制率分別達到75%和87%，表明通過該種方法製備的海帶多糖具有較強的抗動脈粥樣硬化活性。 多糖組分C未見明顯的抗動脈粥樣硬化活性。
權利要求
1.一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法，其特徵在於按下述步驟進行(1)海帶的洗滌將鮮海帶用自來水浸泡3天，每3小時換一次水並清洗；(2)海帶的水分脫除將上述洗乾淨的海帶乾燥處理，得幹海帶；(3)海帶粉的製備將幹海帶置於G— 125型膠體磨中進行粉碎，過200目篩，得乾燥的海帶粉；(4)多糖提取按重量體積比1:50向乾燥的海帶粉中加入蒸餾水，超聲功率為600W條件下進行超聲處理10 min，得海帶粉和水的混合液A ;再將混合液A置於磁力攪拌器上，轉速2000 rpm、溫度60 °C條件下，攪拌提取3小時，得提取混合液B ;將提取混合液B進行離心，收集上清液，得海帶多糖提取液；(5)褐藻酸鹽的去除用濃度為I.5 M的鹽酸溶液調節海帶多糖提取液的pH值為I. 2， 得海帶多糖提取液C，將海帶多糖提取液C在轉速12000 r/min下離心20 min，收集上清液 D ;離心所得沉澱為褐藻酸鹽，棄去；(6)蛋白的脫除先向上清液D中加入胰蛋白酶，得混合液E，混合液E中胰蛋白酶的終濃度為5 U/mL ;將混合液E置於磁力攪拌器上，在轉速1500 rpm、溫度60 1條件下，反應3 小時，得混合液F ;按體積比I: 10將混合液F與化學脫蛋白試劑充分混合，得混合液G，將混合液G在轉速12000 r/min下離心20 min,收集上清液H ;所述化學脫蛋白試劑由氯仿和正丁醇按體積比I :4混合均勻；(7)多糖的沉澱將上清液H進行減壓濃縮，得濃縮液I;向濃縮液I中加入無水乙醇， 按體積比使乙醇終濃度達到40%，靜置12小時，離心，得沉澱①和上清液J ;向上清液J中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到60%，靜置12小時，離心，得沉澱②和上清液K ； 向上清液K中補加無水乙醇，按體積比使乙醇終濃度達到80%，靜置12小時，離心，得沉澱 ③和上清液L ;將沉澱①、沉澱②和沉澱③分別用30mL蒸餾水溶解，經冷凍濃縮乾燥得多糖組分A、多糖組分B和多糖組分C ;經活體動物實驗分析，多糖組分A和多糖組分B能顯著抑制低密度脂蛋白受體缺陷型小鼠動脈內膜脂質沉積，與模型組相比，其抑制率分別達到 75%和87%，表明通過該種方法製備的海帶多糖具有較強的抗動脈粥樣硬化活性，多糖組分C未見明顯的抗動脈粥樣硬化活性。
2.根據權利要求I所述的抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法，其特徵在於所述步驟(2)將上述洗乾淨的海帶放置於通風乾燥箱，在溫度40°C下連續乾燥48小時。
全文摘要
本發明涉及一種抗動脈粥樣硬化活性海帶多糖的製備方法。具體的操作步驟如下1.海帶的洗滌，2.海帶的水分脫除，3.海帶粉的製備，4.多糖提取，5.褐藻酸鹽的去除，6.蛋白的脫除，7.多糖的沉澱。本發明的提取溶劑是蒸餾水，改變了傳統工藝中採用酸液或鹼液進行提取，大大降低了生產過程中酸液或鹼液對設備的腐蝕及對環境造成的汙染；本發明方法製備的海帶多糖組分A和多糖組分B具有很強的抗動脈粥樣硬化活性，與模型組相比，多糖組分A和多糖組分B對低密度脂蛋白受體缺陷型小鼠動脈內膜脂質沉積的抑制率分別高達75％和87％，提示水溶性海帶多糖是海帶發揮抗動脈粥樣硬化活性的物質基礎。
文檔編號A61P9/10GK102690367SQ201210217169
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月28日 優先權日2012年6月28日
發明者崔紹華, 楊雪飛, 查學強, 潘利華, 王軍輝, 羅建平, 錢鑫萍 申請人:合肥工業大學