膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物的製作方法

2023-12-03 00:41:36

專利名稱：膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測類風溼關節炎抗體的組合物，尤其涉及一種膠體金側向層 析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，實現對類風溼關節炎免疫抗體的快速、準確檢 測。
背景技術：
臨床上自身免疫疾病主要有系統性紅斑狼瘡、類風溼關節炎、乾燥症候群、皮 肌炎、多發性肌炎、系統(多發)性硬化症、硬皮病等，這些疾病曾被命名為「結締組織 病」，後來國外和國內均將它們歸為風溼性疾病。類風溼關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種較常見的以慢性多關節炎症為主
要表現的系統性自身免疫疾病，其病程長，多反覆，且會造成組織不可逆的損傷，而給 患者造成很大痛苦。該病的發病率在世界範圍內為0.5-1%，中國的發病率約為0.36%。 患者發病年齡多在20 50歲，女性多於男性，男女之比為1 3。最近流行病學統計， 類風溼關節炎有逐年增加的趨勢，其突出的早期臨床表現為對稱性關節紅腫熱痛、常見 四肢小關節、指間近端關節腫脹、掌指、腕、肘和踝等關節腫痛及活動困難、晨間關節 僵硬、午後逐漸減輕、關節外症狀約有20%患者可出現皮下結節；長久不愈的晚期症狀 則有不同程度的關節畸形和強直，以及關節功能喪失等現象，還會損傷臟器和多組織器 官，造成骨頭缺血性壞死，對人體消耗大，致殘率高。類風溼關節炎的病因至今尚不十分清楚，且早期臨床表現也不典型。在 國內外臨床實踐中，該疾病的常用診斷工具是美國風溼學學會(American College of Rheumatology, ACR)在 1987 年制定的類風溼分類標準(Arthritis Rheum 1988，31， 315-324)，該標準更依賴於類風溼關節炎所表現出的臨床病症。但是，在該疾病早 期，這些臨床指標通常是不易操作的。因此，目前普遍認為這一標準不能較好適應於 早期類風溼關節炎的診斷(Arthritis Rheum 2001，44，2485-91 ； Neth J Med 2002, 60， 383-388)。而目前使用的治療類風溼關節炎的方法主要是採用消炎方法，這種方法 雖能使得關節腫脹(swelling)和侵蝕(erosive)的程度得以減慢，卻無法使疾病得到治 愈。當前人們共同的觀點認為，在該疾病早期採用多種方法治療能得到最佳的治療效果 (Autoimmunity Reviews 2006, 6，37-41)。由此，具有高專一性(Specificity)和高靈敏度 (Sensitivity)的血清學檢測標記對於類風溼關節炎在骨關節遭受損傷之前的早期診斷就顯 得尤為必要(ClinApplied Immunol Rev 2004，4，239-262)。研究發現一些自身免疫抗體雖然與類風溼關節炎疾病相聯繫，如抗 calpastatin 抗體(Proc Natl Acad Sci USA 1995，92，7267-7271)、抗中性粒細胞胞質 抗 體(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies, ANCA) (Int Arch Allergy Immunol 1996, 109, 201-206)、核抗原抗體(anti-nuclear antigens, ANA) (Scand J Rheumatol 1986, 15，185-192)、抗 II 型膠原抗體(anti-collagen type II) (J Immunol Methods 2001，247， 191-203)和抗葡萄糖 6 磷酸異構酶(anti-glucose-6_phosphate isomerase, anti-GPI) (Nat1mmunol 2001, 2，746-753)等也都能在患有其它自身免疫疾病的病人中，甚至於在健康 個體中檢測出來(Clin Applied Immunol Rev 2004，4，239-262)。其中的某些抗體雖然 能應用於風溼性疾病的識別，而且篩選這些抗體也有助於疾病監測和預測，但由於其對 類風溼關節炎缺乏專一性，這些抗體中的絕大多數都很少應用於類風溼關節炎早期診斷 (Clinica ChimicaActa 2004，350，17-34)。對於類風溼關節炎早期診斷的理想標記(Marker)應當至少滿足4個標準(1)高 靈敏度，能檢測的病人達到高百分比；(2)高專一性，儘可能地限制錯誤陽性結果的發 生；(3)能適用於早期診斷；(4)能預見到某些病人會發展成侵蝕性疾病(erosive disease) (Autoimmunity Reviews 2006，6，37-41; MEDICINE 2006，34，441-444)。類風溼因子(rheumatoid factor，RF)抗體作為血清學檢測方法應用於ACR標 準中，被公認為是IgG分子上Fc結構域的直接抗體。雖然其檢測靈敏度範圍可以達到 60-80%,但其對於類風溼關節炎的專一性也比較一般，為60%。此外，RF同樣可以在 其它患有自身免疫疾病的病人中、患有感染性疾病的病人中以及3-5%健康人群中(其中 10-30% 的老年人)檢測到(AnnRheumDis 2003，62，261-263)。抗BiP(p68)抗體，抗Sa抗體和抗環狀胍氨酸化蛋白抗體(APF、AKA、抗 filaggrin和抗CCP)則對類風溼關節炎有更高的專一性。64%的類風溼關節炎病人能產 生直接針對BiP的抗體，還有報導稱其對該疾病具有高度的專一性，但目前沒有數據支 持BiP在預測類風溼關節炎方面具有作用，而且這些報導的BiP抗體還需要等待進一步通 過獨立的臨床研究加以確認(Clinica Chimica Acta 2004，350，17-34)。抗Sa抗體是源 自於人脾臟和胎盤的提取物當中，分子量為50kDa的蛋白(Internal Medicine 2005，44， 1122-1126)。另有研究揭示Sa抗原對於類風溼關節炎的專一性可以高達92-99%，但其 靈敏度則顯得一般，僅為 30-40% (J Rheumatol 1994，21，1027-33 ； J Rheumatol 1999, 26， 7-13)。抗核周因子(antiperinuclear factor, APF)首次披露於1964年。經研究這些自身 免疫抗體對類風溼關節炎具有專一性，並能通過以人頰黏膜細胞為抗原底物的免疫螢光 法間接測得(AnnRheumDis 1964，23，302-305)。1979年研究者描述了一種類風溼關節炎專一性角質蛋白抗體，它能直接抑 制角質層上皮細胞角質化，並將這類抗體的名稱暫定為抗角質蛋白抗體(anti-keratin andtibody, AKA) (BMJ 1979，2，97-99)。之後的研究證實，雖然 AKA 和 APF 的 發現是互相獨立的，但是兩者所直接對應的抗原是一致的(J.Clin.Invest 1995，95， 2672-2679)。許多研究進一步表明AKA和APF具有許多共同的特性，它們均對於RA 患者表現出高度的專一性(Internal Medicine 2005，44，llM-ll26)。Filaggrin (filament aggregating protein)是一種互相交聯的角蛋白絲狀體，作用是形成非常堅固的細胞骨架結 構，其也是 AKA 和 APF 的常見抗原(Clin Applied 1mmunol Rev 2004，4，239-262)。其 中，APF 的目標抗原為 profilaggrin，而 AKA 的抗原為 filaggrin (J Clin Invest 1995，95， 2672-2679)。雖然AKA和APF對於類風溼關節炎具有專一性，但其缺陷也很突出。這兩種 抗體的檢測靈敏度嚴重依賴於filaggrin的純化方法。實踐中，由於難以分離得到純的且 胍基含量具有可重複性的抗原，再加上其檢測手段不簡便，以及螢光免疫檢測過程需要耗費較大的工作量，從而使得實驗室間難以形成標準化，導致AKA和APF沒有成為類風 溼關節炎檢測的主流方法(ClinApplied Immunol Rev 2004，4，239-262)。基於filaggrin和profilaggrin是AKA和APF抗體靶點的知識，人們合成了含 有瓜氨酸的多肽以檢測類風溼關節炎血清中AKA和APF抗體的活性。由於瓜氨酸不 是基本胺基酸而無法在蛋白質翻譯中加入，因此通常的方法是通過肽精氨酸脫亞胺酶 (peptidylargnine deiminine, PAD, EC3.5.3.15)催化精氨酸殘基脫氨基得到。根據這些 事實，一些從filaggrin序列中衍生出來的精氨酸側鏈經修飾的，尤其是含有瓜氨酸的多肽 被合成出來，並用於類風溼關節炎抗體的體外檢測(US6,858,438)。在用酶聯免疫吸附 (Enzyme-Linked immunosorbent Assay, ELISA)方法檢測實驗中，這一方法合成的含有瓜 氨酸直線性多肽能從類風溼關節炎患者血清中檢測出抗瓜氨酸肽抗體，在保持高專一性 (大於90%)的情況下，還大大提高了檢測的靈敏度(達到63%)。實驗還證明，只有 含瓜氨酸的多肽才能實現該反應，若將多肽中的瓜氨酸用其它胺基酸代替則完全沒有反 應發生。這些結果表明，瓜氨酸部分是決定能被AKA和APF抗體識別的抗原決定因子 (J Clin Invest 1998, 101，273-281)。其它研究者發現將含有瓜氨酸的直線性多肽通過二硫鍵(S-S鍵)形成環形結構 的方式能模擬類似β-轉角結構，從而模仿最初抗原決定簇的轉角結構，並可增加 多肽-抗體的親和力(FASEBJ 1995，9，37-42; Mol Immunol 1985，22，1255-1264)。 由此，一種環狀肽被人工合成出來，其將filaggrin主要表位上的兩個絲氨酸換成半胱氨 酸後，再由二硫鍵環化形成，即第一代環瓜氨酸肽(the first generation cyclic citrallinated peptide, CCP1) (Internal Medicine 2005, 44，1122-1126)。研究者將一條由 19 個氨基 酸殘基組成的瓜氨酸肽中兩個絲氨酸替換為半胱氨酸形成與β-轉角具有相似結構的二 硫鍵，得到人工合成CCP，並將CCPl與直線肽的檢測結果作了比較。結果顯示，採用 CCPl為抗原的多肽用ELISA法檢測RA患者的抗CCP抗體，靈敏度較用直線性瓜氨酸 肽為抗原有顯著提高，分別為68%和49%，二者專一性相似(Arthritis Rheum2000，43， 155-163)。穆榮等人在266例RA患者和186例對照者血清中檢測RF和AKA抗體、 APF和抗CCP抗體的方式，評估了抗聚絲蛋白抗體群(anti-filaggrin antibodies，AFAs)與 RF聯合檢測的意義。由於AKA和APF的敏感性太低，臨床上以RF和抗CCP抗體的 聯合測定更為實用(北京大學學報(醫學版)2005，37，894)。研究還發現，通過檢測 抗CCP抗體還能作為類風溼關節炎早期病人一項重要指標，為這類人群的早期防治提供 參考(JIndia Rheumatol Assoc 2004，12，143-146)，其還能預測侵蝕性疾病(Clin Applied Immunol Rev 2004, 4，239-262)。在含有不同瓜氨酸多肽的反應模式中，類風溼關節炎血清檢測表現出巨大的可 變性。類風溼關節炎患者的血清/血漿中除了 filaggrin精氨酸殘基被瓜氨酸化外，Sa抗 原、膠原蛋白(I和II型)、組蛋白、髓磷脂鹼蛋白、纖維連接蛋白等也出現瓜氨酸化，並 產生抗CCP抗體。深入研究表明，瓜氨酸化的自身抗原中並非所有精氨酸脫氨基轉化為 瓜氨酸；已瓜氨酸化的瓜氨酸也不完全參與形成抗原表位，即產生抗CCP抗體。綜上， 抗瓜氨酸抗體的產生與瓜氨酸密切相關，並且瓜氨酸的側翼序列對抗瓜氨酸抗體的產生 起重要作用，這一事實暗示著瓜氨酸殘基的周邊胺基酸對於抗原表位(antigen episode)具 有重要作用，以及抗瓜氨酸化蛋白(如AKA和APF抗體)活性是多克隆反應(JClinInvest 1998, 101，273-281)。基於filaggrin的屬性，它被認為是模擬瓜氨酸抗原表位的 天然庫藏(ClinAppliedImmunolRev 2004，4，239-262)。第二代CCP(CCP2)檢測方法產生於2002年，通過將含有瓜氨酸的多肽庫與類 風溼關節炎血清篩選得到與filaggrin無關的第二代CCP，其具有更有利於抗體檢測的表位 (Report on the 5th Dresden symposium on autoantibodies.Lengerich, Germany Pabst Science Publishers ； 2000.ρ.140_145)。將CCPl和CCP2經同一組病人測試後表明，CCP2不僅保 持了較高專一性(96%)，而且其分析靈敏度也有顯著的提高(Ann.Rheum.Dis.2005，64， 1510-2)。許多研究者在最近5年的研究證明，抗含瓜氨酸多肽的測試的靈敏度具有較高 的可變性，範圍在 40%_94% (Clin.Exp Rheumatol.2005, 23 (Suppl39), 569-276 ； Ann. Rheum.Dis.2006, 65，845-851)。CCP2在類風溼關節炎自身免疫抗體體外檢測中得到應 用說明了在該領域的檢測抗原的篩選並不需要僅僅依賴filaggrin，也說明與filaggrin不同 的結合表位能更有利於體外檢測。Bizzaro N 等人(Clin Chem 2007，53，1527-1533)和 Lutteri L 等人(Clinica ChimicaActa 2007，386，76-81)分別針對現在市場上使用的第二代和第三代CCP試劑盒 (Kit)進行了比較，結果發現，伊諾瓦診斷(Inova Diagnostics)公司開發的三種檢測方法 中，其CCP3試劑盒與使用CCP2為抗原的方法相比僅僅略有改善，各自的靈敏度分別為 67%和64%。相反地，用於抗IgG的CCP3.0與即能檢測IgG又能檢測IgA的CCP3.1的 檢測方法相比後發現，兩者竟然沒有絲毫差別。可見，同時檢測IgG和IgA抗體的方法 並沒有象看上去那樣有顯著改進。他們的結論是由於測試的診斷試劑盒靈敏度可能與胍 基化精氨酸殘基的位置和數量有關，而專一性則可能受到蛋白質或雜多肽序列的影響， 因此，對此二者而言，抗原的種類顯得更為重要。兩者綜合考慮，實驗數據表明抗原的 製備是決定測定方法優劣的最重要的可變因素。Lutteri L 等人(Clinica ChimicaActa 2007，386，76-81)的研究還發現了抗 CCP
的另一個價值，他們指出，IgM-RF是最靈敏的標記，能在77.9%的類風溼關節炎患者中 發現。必須注意的是，作為ACR標準中的RF，其類風溼關節炎診斷中靈敏度不能直接 與那些沒有包括在診斷標準中的其它方法相比較。IgM-RF被認為在疾病專一性方面略 有欠缺。使用IgM-RF檢測類風溼關節炎患者，其中有13-19%的人為RF陰性，與之相 比，當這些患者使用抗CCP方法檢測時均為陽性。類風溼關節炎的遺傳因素會影響瓜氨酸化蛋白的出現和產生，也會影響針對 這些修飾蛋白的抗體產物(ClinicaChimicaActa 2004，350，17-34)。一系列相關研究 表明，類風溼關節炎與某些HLA-DR等位基因有密切聯繫，尤其是HLA_DRB1*0401 和HLA-DRBl*0404(Cell 1996，85，307-310)。 與相應的含有精氨酸的多肽相比， 將多肽瓜氨酸化就能與HLA_DRB1*0401和HLA_DRB1*0404兩種「袋形」抗原更好 地結合(J India Rheumatol Assoc 2004，12，143-146)。 在不同地區的人群中，這些等 位基因也略有不同。DRB1*0401主要出現在北歐和北美地區的人群中，有證據表明 該基因與類風溼關節炎所導致的「特大關節」表徵(extraarticular manifestations)有聯 系，在 DRB1*0401/DRB1*0404 雜合基因型中尤為突出。DRB1*0403、DRB 1*0406 和 DRB1*0407與DRB1*0401、*0404或*0101基因組合後會增加類風溼關節炎病情的發展 可能。DRB1*0404與DRB1*0408隻要存在於白色人種中。DRB1*0405很少在北歐人群中，但在亞洲和環地中海沿岸國家的人群中極其普遍。DRB1*0101主要存在於北歐 和北美人群中。美洲印第安人群中則為DRB1*1402和*1406(Hum Immuno 2000, 61， 1254-1261)。雖然這些與類風溼關節炎相關的基因在各地區人群中各有不同，但研究發 現在DRBl的第三高度可變區(HV3)具有共享表位(shared epitope，SE)，在70-74位氨 基酸殘基都為 QKRAA、QRRAA 或 RRRAA (Clinica ChimicaActa 2004，350，17-34)。將一群有幾個共享表位基因型的類風溼關節炎患者與具有抗CCP2抗體的患者比 較研究表明，一種共享表位等位基因與抗CCP2抗體的產生具有密切的內在聯繫(Arthritis Rheum 2000, 50，2113-21; Arthritis Res Ther 2004，6，R303-308)。經證實，這一關聯 是由於MHC分子共享表位β鏈的70-74位胺基酸殘基(Q/R，K/R，R，Α，Α)形成 第4個錨定袋(Ρ4)，其與電中性或負電荷胺基酸具有高度親和性(JImmun0 2003，171， 538-541)。當帶正電荷精氨酸在PAD酶作用下轉換成電中性的瓜氨酸後，得到的翻譯 後修飾蛋白/多肽親和力遠遠大於精氨酸與P4的親和力，並能夠激活CD4+T細胞，這些
「瓜氨酸特異T細胞」可有助於抗瓜氨酸蛋白(多肽)抗體的產生(JImmun0 2003，171， 538-541 ； Arthritis Rheum 1987，30，1205-1213 ； Rheum Dis Clin North Am 1992，18， 741-759； Arthritis Rheum 2005, 52，1063-1068)。這些結果表明具有共享表位的 DBRl 等位基因能激活類風溼關節炎患者自身免疫反應。綜合目前的研究結果，抗CCP抗體對RA具有較高的專一性，能將RA與其它 與RA相似的疾病相區分，這類抗體存在於絕大多數的病人體內，在疾病的早期就能檢測 到，有助於對疾病的預測，能通過簡單的方式加以檢測(JlndiaRheumatolAssoc 2004， 12， 143-146)。將CCP肽用於類風溼關節炎的體外ELISA檢測已得到廣泛研究，也有諸多商業 化的檢測試劑盒。單次ELISA檢測通常需要較大的樣本數，檢測所用的時間也較長，其 檢測過程還需要專業的人員進行操作，對醫療機構的依賴度較大，從而不利於普通病患 對病程的自助監測。

發明內容
本發明的目的在於提供一種膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合 物，包括CCP肽組合物、與CCP肽共價或非共價結合的高分子聚合物和側向層析檢測介 質，實現對類風溼關節炎免疫抗體的快速、準確體外檢測。CCP肽是一種由5-50個胺基酸通過醯胺鍵互相連接，且在不相鄰的兩個氨基 酸側鏈之間通過共價鍵形成的環形結構有機分子。胺基酸為分子結構中同時含有氨基 和羧基的有機化合物，選自於甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨 酸、色氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸、天冬醯胺、穀氨酸、賴氨酸、穀氨醯胺、甲 硫氨酸、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸和脯氨酸。CCP肽的序列如美國專利 申請 2006/0039924A1、中國發明專利申請 02133648.2、02824647.0、200410093354.1、 200510044046.4和文獻J.Clin.Invest. 1998，273-281中所記載的多肽。在所述CCP肽序列 當中至少有一個精氨酸側鏈被修飾，修飾的精氨酸側鏈具有式I所示的結構，
式 I
權利要求
1.一種膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，包括CCP肽組合物、 高分子聚合物和側向層析檢測介質；其中，CCP肽組合物包含CCP肽I和CCP肽II，且 CCP肽I和CCP肽II與高分子聚合物共價或非共價結合形成CCP肽聚合物，高分子聚合 物通過共價鍵或非共價鍵結合於所述側向層析檢測介質上；所述的CCP肽I從N端至C端包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe-Xaa3 _Xaa4_ Arg-Gly-Arg_Xaa5 _Xaa6 _Xaa7 _Xaa8-Cys-Gly,其中，Xaal 為 His 或 Ala ； Xaa2 為 Gln 或 Arg ； Xaa3 為 Arg 或 Gln ； Xaa4 為 Phe 或 Met ； Xaa5 為 Ser 或 Arg ； Xaa6 為 Arg 或 Leu ； Xaa7 為 Ala 或 Ile ； Xaa8 為 Ala 或 Arg, 其中至少有兩個精氨酸側鏈被修飾；所述的CCP肽II從N端至C端包含如下胺基酸序列His-Gln-Cys-Xaal-Xaa2-Phe -Xaa3 _Xaa4-Arg-Hi s-Arg_Xaa5 _Xaa6 _Xaa7 _Xaa8-Cys-Gly,其中，Xaal 為 His 或 Ala ； Xaa2 為 Gln 或 Arg ； Xaa3 為 Arg 或 Gln ； Xaa4 為 Phe 或 Met ； Xaa5 為 Ser 或 Arg ； Xaa6 為 Arg 或 Leu ； Xaa7 為 Ala 或 Ile ； Xaa8 為 Ala 或 Arg, 其中至少有兩個精氨酸側鏈被修飾。
2.根據權利要求1所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特 徵在於所述精氨酸側鏈被修飾，修飾的精氨酸側鏈具有式I所示的結構，
3.根據權利要求1所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特 徵在於所述精氨酸側鏈被修飾後，成為瓜氨酸殘基。
4.根據權利要求1所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特 徵在於所述CCP肽I選自於SEQ ID No 1-118任意一種；所述CCP肽II選自於SEQ ID No: 1-118任意一種，且CCP肽I與CCP肽II的序列不相同。
5.根據權利要求1所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特 徵在於所述CCP肽I為SEQ ID No 1 ；所述CCP肽II為SEQID No 118。
6.根據權利要求1所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特 徵在於所述CCP肽I與所述CCP肽組合物的摩爾比比值為0.1-0.9。
7.—種膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，包括CCP肽組合物、 高分子聚合物和側向層析檢測介質；CCP肽組合物與高分子聚合物共價結合形成的CCP 肽聚合物共價或非共價地結合於側向層析檢測介質上；其中，所述CCP肽組合物包含 SEQ ID No 1 和 SEQ ID No 118 ；所述 SEQ ID No 1 與所述 SEQ IDNo 118 的摩爾 比為1 1。
8.—種膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，包括CCP肽組合物、 高分子聚合物和側向層析檢測介質；CCP肽組合物與高分子聚合物非共價結合形成的 CCP肽聚合物共價或非共價地結合於側向層析檢測介質上；其中，所述CCP肽組合物包 含 SEQ ID No: 1 和 SEQ ID No: 118 ；所述 SEQ ID No 1 與所述 SEQ ID No 118 的摩 爾比為1 1。
9.根據權利要求1-7之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合 物，其特徵在於所述CCP肽與高分子聚合物之間的共價鍵選自於醯胺鍵、尿鍵、酯鍵、 硫醚鍵、腙鍵、肟鍵或二硫鍵。
10.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特徵在於所述側向層析檢測介質上結合的CCP肽聚合物含量為100ng-500yg/2cm 。
11.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，其特徵在於所述側向層析檢測介質上結合的CCP肽聚合物含量為Iyg-IOOyg/cm 。
12.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合 物，其特徵在於所述側向層析檢測介質上結合的CCP肽聚合物含量為1 μ g-50 μ g/cm2。
13.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合 物，其特徵在於所述高分子聚合物分子量大於2,OOODa。
14.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組 合物，其特徵在於所述高分子聚合物選自於牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋 白、雞卵清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、分叉型聚合物、聚賴氨酸、聚乙二醇、親和素或抗 體。
15.根據權利要求1-8之一所述的膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合 物，其特徵在於所述側向層析檢測介質上還結合有增強劑銀鹽。
全文摘要
一種膠體金側向層析檢測類風溼關節炎免疫抗體的組合物，包括CCP肽組合物、高分子聚合物和側向層析檢測介質，高分子聚合物通過共價或非共價形式結合於側向層析檢測介質上。其中，CCP肽組合物包含CCP肽I和CCP肽II，且與高分子聚合物共價或非共價結合，所述CCP肽I與所述CCP肽組合物的摩爾比比值為0-1。該組合物不僅能夠在15分鐘內實現類風溼關節炎免疫抗體的快速體外檢測，而且便於患者自助診斷，並為及時了解病情發展提供參考。
文檔編號C07K7/08GK102023219SQ200910196059
公開日2011年4月20日 申請日期2009年9月22日 優先權日2009年9月22日
發明者朱紹榮 申請人:上海榮盛生物藥業有限公司