一種花生抗氧化肽的製備工藝的製作方法

2023-11-11 07:41:02

專利名稱：一種花生抗氧化肽的製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及花生抗氧化肽的製備工藝，屬於食品蛋白加工領域。
背景技術：
人的衰老和許多疾病與自由基有關，食品在儲運過程中易發生脂質氧化變質，因此，需要抗氧化劑來清除自由基和抑制脂質過氧化。由於合成抗氧化劑對人體健康存在潛在危害，於是，人們逐漸把目光轉向天然抗氧化劑。抗氧化肽具有清除各種自由基，抑制脂肪氧合酶活力和抑制脂質過氧化鏈式反應等抗氧化功效，能在一定程度上消除機體內多種生理功能障礙，延緩機體衰老，減少各種老年性疾病發生，且可以阻止食品氧化變質，提高食品穩定性和延長食品貯藏期。因此，抗氧化肽成為近年來食品科學、營養學和預防醫學等學科的研究熱點之一。花生為豆科植物花生的種子，是世界上主要油料資源之一。花生蛋白質含量為 25 36%，是一種營養價值較高的植物蛋白，其生物價為58，含18種胺基酸，包括8種必需胺基酸。因此，酶解花生蛋白製備抗氧化肽的研究及其產品開發可以充分利用花生蛋白資源，拓展花生精深加工的領域。儘管一些研究者對花生蛋白源的抗氧化肽進行了一定研究，但是多數集中在由花生蛋白粉先製備花生分離蛋白，再由分離蛋白經酶水解製備花生抗氧化肽。這樣不但增加了操作步驟，而且由於鹼提酸沉法製備花生分離蛋白過程中引入了過多的酸鹼，使得花生蛋白易變性，且增加了後續分離、純化花生抗氧化肽的成本。本發明擬採用Viscozyme L，在其最適合水解花生蛋白粉工藝條件下，預先酶解花生蛋白粉，可以分解細胞壁、降解碳水化合物類，使花生蛋白質充分暴露於溶液中，有利於後續蛋白酶酶解，提高酶解效率，降低成本，為花生抗氧化肽的開發利用提供新的途徑和理論基礎。

發明內容
本發明的目的是提供具有較好功能性質和抗氧化活性的花生抗氧化肽的製備工藝。為達到上述目的，本發明採用以下步驟
低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，攪拌均勻，超聲波中分散溶解，得到花生蛋白粉懸浮液；調節花生蛋白粉懸浮液的PH值，加入複合植物水解酶Viscozyme L，在恆溫水浴振蕩器中酶解，得到酶解液；調節酶解液的PH值，加入蛋白酶，在恆溫水浴振蕩器中酶解，滅酶，立即冷卻到室溫，離心，冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。具體來說，所述的方法如下
(1)低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，攪拌均勻，超聲波中分散溶解，得到花生蛋白粉懸浮液；
(2)調節花生蛋白粉懸浮液的pH值，加入複合植物水解酶ViscozymeL，在恆溫水浴振蕩器中酶解，得到酶解液；(3)調節酶解液的pH值，加入蛋白酶，在恆溫水浴振蕩器中酶解，滅酶，立即冷卻到室溫，離心，冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。優選地，步驟(1)所述的低變性脫脂花生蛋白粉與蒸餾水的質量與體積比例為 1:10 1:20，超聲波功率為300w，超聲波頻率為^kHz,溫度為45°C，時間為30min。優選地，步驟(2)所述的調節花生蛋白粉懸浮液的pH值所用的溶液為濃度 0. 5mol/L的鹽酸溶液，pH值調節至5. 0，WAViscozyme L量為l(Tl2FBG/g花生蛋白粉(FBG為Viscozyme L的酶活單位)，恆溫水浴振蕩器的溫度為45°C，旋轉式振蕩速度為 150r/min，酶解時間為2h。優選地，步驟(3)所述的調節花生蛋白粉Viscozyme L酶解液的pH值所用的溶液為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液，pH值調節至8. (Γ8. 5，蛋白酶為Alcalase (鹼性蛋白酶)、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶以3:1.2:0.8比例混合的複合酶，蛋白酶的加入量為4500U/g花生蛋白粉(U為蛋白酶的酶活單位)，恆溫水浴振蕩器的溫度為5(T60°C，旋轉式振蕩速度為 150r/min，酶解時間為9(Tl20min。滅酶的水浴溫度為100°C，滅酶時間為20min，離心條件為 10°C，5000r/min 轉速離心 15min。花生抗氧化肽產品具有較好的抗氧化活性，如清除DPPH自由基、清除羥自由基、 清除超氧陰離子自由基、鐵還原力、鉬還原力、鐵離子螯合力、銅離子螯合力、抑制亞油酸過氧化能力、抗脂質體過氧化能力等。因此，它可以作為一種功能食品用於延緩機體衰老，預防「三高」疾病的發生，同時，也可以作為一種天然抗氧化劑用在食品工業中，防止食品因脂肪氧化而變質，提高食品貨架期內的品質穩定性。此外，花生抗氧化肽產品還具有較好的功能性質，如乳化性、乳化穩定性、起泡性、泡沫穩定性、溶解性、吸水性、吸油性等。在食品加工過程中，它能賦予食品特有的加工特性，使終產品具有特殊的功能性質。花生抗氧化肽的製備為開發利用花生蛋白資源提供新的途徑和理論基礎。
具體實施例方式實施例1
低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，加入的比例為1:10 (g/mL)，用玻璃棒攪拌均勻，在超聲波萃取儀中，在超聲波功率300w，超聲波頻率^kHz,溫度45°C的條件下，超聲波分散溶解30min，得到低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液；用濃度為0. 5mol/L的鹽酸溶液調節低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液的PH值至5. 0，加入複合植物水解酶Viscozyme L，加入量為10. 5FBG/g花生餅粕粉(FBG為Viscozyme L的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為45°C，恆溫酶解池，得到花生蛋白粉Viscozyme L酶解液；用濃度為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液調節花生蛋白粉Viscozyme L酶解液的pH值至 8. 2，加入Alcalase (鹼性蛋白酶)、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶以3:1. 2:0. 8比例混合的複合酶4500U/g花生餅粕粉(U為蛋白酶的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為55°C，恆溫酶解Mmin，酶解反應結束後，將酶解液放入100°C 恆溫水浴中，滅酶20min，立即冷卻到室溫，得到花生蛋白粉蛋白酶酶解液，在10°C條件下， 以5000r/min轉速離心15min，取上清液冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。該抗氧化肽的抗氧化活性如下清除DPPH自由基的IC5tl值為10. 33mg/mL,清除羥自由基的IC5tl值為4. 59mg/mL, 清除超氧陰離子自由基的IC5tl值為6. 98mg/mL，鐵還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為8. 37mg/mL，鉬還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為7. Ilmg/ mL,鐵離子螯合力的IC5tl值為6. 47mg/mL,銅離子螯合力的IC5tl值為4. 58mg/mL,抑制亞油酸過氧化能力的IC5tl值為5. 34mg/mL抑制脂質過氧化能力的IC5tl值為5. 95mg/mL。功能性質如下乳化活性指數(EAI)為378. 48X 103m2/g，乳化穩定性指數(ESI)為39. 53min，起泡性為95. 46%，起泡穩定性為81. 23%，溶解度為99. 78%，吸水性2. 56g/g，吸油性2. 04g/g。實施例2
低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，加入的比例為1:15 (g/mL)，用玻璃棒攪拌均勻，在超聲波萃取儀中，在超聲波功率300w，超聲波頻率^kHz,溫度45°C的條件下，超聲波分散溶解30min，得到低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液；用濃度為0. 5mol/L的鹽酸溶液調節低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液的PH值至5. 0，加入複合植物水解酶Viscozyme L，加入量為11. 5FBG/g花生餅粕粉(FBG為Viscozyme L的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為45°C，恆溫酶解池，得到花生蛋白粉Viscozyme L 酶解液；用濃度為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液調節花生蛋白粉Viscozyme L酶解液的pH值至8. 45，加入Alcalase (鹼性蛋白酶)、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶以3:1.2:0.8比例混合的複合酶4500U/g花生餅粕粉(U為蛋白酶的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為58. 5°C，恆溫酶解102min，酶解反應結束後，將酶解液放入100°C恆溫水浴中，滅酶20min，立即冷卻到室溫，得到花生蛋白粉蛋白酶酶解液，在10°C 條件下，以5000r/min轉速離心15min，取上清液冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。該抗氧化肽的抗氧化活性如下清除DPPH自由基的IC5tl值為7. 36mg/mL,清除羥自由基的IC5tl值為 2. 89mg/mL,清除超氧陰離子自由基的IC5tl值為4. 66mg/mL,鐵還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為5. 12mg/mL，鉬還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為3. ^mg/mL，鐵離子螯合力的IC5tl值為4. 21mg/mL，銅離子螯合力的IC5tl值為1. 63mg/ mL，抑制亞油酸過氧化能力的IC5tl值為2. 77mg/mL抑制脂質過氧化能力的IC5tl值為2. 15mg/ mL。功能性質如下乳化活性指數(EAI)為390. 12X 103m2/g，乳化穩定性指數(ESI)為 40. 05min,起泡性為96. 25%，起泡穩定性為82. 34%，溶解度為99. 58%，吸水性3. 09g/g,吸油性 2. 69g/g。實施例3
低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，加入的比例為1:20 (g/mL)，用玻璃棒攪拌均勻，在超聲波萃取儀中，在超聲波功率300w，超聲波頻率^kHz,溫度45°C的條件下，超聲波分散溶解30min，得到低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液；用濃度為0. 5mol/L的鹽酸溶液調節低變性脫脂花生蛋白粉懸浮液的PH值至5. 0，加入複合植物水解酶Viscozyme L，加入量為10. 8FBG/g花生餅粕粉(FBG為Viscozyme L的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為45°C，恆溫酶解池，得到花生蛋白粉Viscozyme L酶解液；用濃度為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液調節花生蛋白粉Viscozyme L酶解液的pH值至 8. 36，加入Alcalase (鹼性蛋白酶)、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶以3 1. 20. 8比例混合的複合酶4500U/g花生餅粕粉(U為蛋白酶的酶活單位)，在恆溫水浴振蕩器中，以旋轉式振蕩方式，速度為150r/min，溫度為53°C，恆溫酶解lHmin，酶解反應結束後，將酶解液放入100°C 恆溫水浴中，滅酶20min，立即冷卻到室溫，得到花生蛋白粉蛋白酶酶解液，在10°C條件下， 以5000r/min轉速離心15min，取上清液冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。該抗氧化肽的抗氧化活性如下清除DPPH自由基的IC50值為5. 21mg/mL，清除羥自由基的IC50值為2. 80mg/mL, 清除超氧陰離子自由基的IC5tl值為3. 25mg/mL，鐵還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為4. 12mg/mL，鉬還原力的吸光值為0. 5時所需花生抗氧化肽的濃度為2. 09mg/ mL，鐵離子螯合力的IC5tl值為2. 5%ig/mL，銅離子螯合力的IC5tl值為1. 8%ig/mL，抑制亞油酸過氧化能力的IC5tl值為1. 91mg/mL抑制脂質過氧化能力的IC5tl值為1. 58mg/mL。功能性質如下乳化活性指數(EAI)為374. 37X 103m2/g，乳化穩定性指數(ESI)為37. 96min，起泡性為97. 42%，起泡穩定性為83. 04%,溶解度為99. 66%，吸水性3. 36g/g，吸油性3. 25g/g。
權利要求
1.一種花生抗氧化肽的製備工藝，包括以下步驟(1)低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，攪拌均勻，超聲波中分散溶解，得到花生蛋白粉懸浮液；(2)調節花生蛋白粉懸浮液的pH值，加入複合植物水解酶ViscozymeL，在恆溫水浴振蕩器中酶解，得到酶解液；(3)調節酶解液的pH值至8.(Γ8. 5，加入鹼性蛋白酶、木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶以 3 1. 2 0. 8比例混合的複合酶，在恆溫水浴振蕩器中酶解，滅酶，立即冷卻到室溫，離心，冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。
2.根據權利要求1所述的花生抗氧化肽的製備工藝，其特徵在於，步驟(1)所述的低變性脫脂花生蛋白粉與蒸餾水的質量與體積比例為l:l(Tl:20，超聲波功率為300w，超聲波頻率為^kHz,溫度為45°C，時間為30min。
3.根據權利要求1所述的花生抗氧化肽的製備工藝，其特徵在於，步驟(2)所述的調節花生蛋白粉懸浮液的PH值所用的溶液為濃度0. 5mol/L的鹽酸溶液，pH值調節至5.0，加入 Viscozyme L量為l(Tl2FBG/g花生蛋白粉，恆溫水浴振蕩器的溫度為45°C，旋轉式振蕩速度為150r/min，酶解時間為濁。
4.根據權利要求1所述的花生抗氧化肽的製備工藝，其特徵在於，步驟(3)所述的調節花生蛋白粉Viscozyme L酶解液的pH值所用的溶液為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液，蛋白酶的加入量為4500U/g花生蛋白粉，恆溫水浴振蕩器的溫度為5(T60°C，旋轉式振蕩速度為 150r/min，酶解時間為9(Tl20min;滅酶的水浴溫度為100°C，滅酶時間為20min，離心條件為 10°C，5000r/min 轉速離心 15min。
全文摘要
本發明公開了一種花生抗氧化肽的製備工藝，包括以下步驟低變性脫脂花生蛋白粉中加入蒸餾水，攪拌均勻，超聲波中分散溶解，得到花生蛋白粉懸浮液；調節花生蛋白粉懸浮液的pH值，加入複合植物水解酶ViscozymeL，在恆溫水浴振蕩器中酶解，得到酶解液；調節酶解液的pH值，加入蛋白酶，在恆溫水浴振蕩器中酶解，滅酶，立即冷卻到室溫，離心，冷凍乾燥得到花生抗氧化肽。以本發明製得的花生抗氧化肽產品具有較好的乳化性、乳化穩定性、起泡性、泡沫穩定性、溶解性、吸水性、吸油性等功能性質和清除自由基、還原力、螯合金屬離子能力、抑制脂質過氧化能力等抗氧化活性，適合工業化生產。
文檔編號A23J3/34GK102232465SQ20111023373
公開日2011年11月9日 申請日期2011年8月16日 優先權日2011年8月16日
發明者於麗娜, 孫杰, 張會翠, 張初署, 朱鳳, 楊慶利, 畢傑 申請人:山東省花生研究所