癌症的靶向免疫治療的製作方法
2023-07-20 03:24:01
癌症的靶向免疫治療的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種針對腫瘤的靶向集團和免疫調節劑的偶聯複合物。此種複合物能在腫瘤微環境中激活針對腫瘤的免疫反應，特異性地殺傷腫瘤細胞，從而達到治療腫瘤的目的。
【專利說明】癌症的靶向免疫治療
[0001]發明背景:
[0002]治療性抗體在臨床上的應用已有二十多年的時間了，臨床應用的抗腫瘤抗體藥物現在已有十三種，包括 Rituxan(1997)，Herceptin(1998)，Mylotarg(2000)，Campath (2001)，Zeval in (2002), Bexxer (2003), Avastin (2004), Erbitux (2004)和Vectibix (2006) ；Arzerra (2009) ；Benlysta(2011) ；Yervoy (2011) ;Adcetris (2011)。革巴點主要集中在EGFR，Her2，CD20和VEGF四個分子上。
[0003]單純的治療性抗體的腫瘤細胞殺傷機制有三種(Scott AM，Wolchok JD, OldL1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012 Mar 22 ； 12 (4):278-87):1)抗體的直接作用即抗體使配體/受體信號的阻斷或激動活性、誘導凋亡、呈遞藥物。抗體的受體激動活性可產生直接腫瘤細胞殺傷作用，比如，有些抗體可結合到腫瘤細胞表面受體上，激活該受體，從而導致細胞凋亡(以線粒體為代表)。抗體也可以通過受體拮抗活性介導腫瘤細胞殺傷，比如，某些抗體可結合到細胞表面受體上，並阻斷二聚化、激酶激活和下遊信號，從而抑制增殖，促進凋亡。抗體結合到酶上可以導致中和作用、信號阻斷和細胞死亡。2)通過免疫介導的細胞殺傷機制包括補體依賴的細胞毒作用(complement-dependentcytotoxicity, CDC),抗體依賴細胞介導的細胞毒作用(antibody-dependent cellularcytotoxicity, ADCC)，T細胞功能調控等。免疫介導的腫瘤細胞殺傷可通過以下途徑來完成:誘導吞噬作用；補體激活；抗體依賴細胞介導的細胞毒作用；遺傳修飾的T細胞通過單鏈可變片段靶向腫瘤；通過抗體介導抗原交叉遞呈給樹突狀細胞激活T細胞；抑制T細胞抑制性受體，如細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(CTLA4)。其中抗體Fe部分的功能對於通過⑶C和ADCC介導的腫瘤細胞殺傷作用尤其重要。3)抗體對腫瘤血管和基質的特異性效應。通過對血管受體拮抗或配體捕獲誘導血管和基質細胞消融，包括:基質細胞的抑制作用；向基質細胞傳遞毒素；向脈管系統傳遞毒素。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibodytherapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar 22 ； 12 (4):278-87.)
[0004]單純治療性單抗藥物的推動了抗癌藥物的研究發展，但仍有些問題需要進一步研究解決。例如抗體的免疫原性，長`期使用的腫瘤靶點耐受，單純阻斷單一信號傳導通路的長期效果等等，總而言之，絕大部分的單純抗體都較難做到長期的，高效率的抑制和殺傷腫瘤細胞。
[0005]1964年《自然》雜誌提出了抗體-藥物偶聯(ADC)技術的新思路，這方面的技術在近年來有了突破性的進展。ADC是一種通過化學連接子(Iinkeri將強毒性藥物(Toxini與抗體共價連接起來。抗體識別癌細胞表面的抗原分子，由於細胞內吞ADC藥物的作用將其內吞至胞質內，在胞內特殊環境下，Linker水解後釋放的毒素來殺傷細胞。
[0006]Seattle Genetics 公司開發的這類藥物 Brentuximab Vedotin (商品名Adcetris)已通過了 FDA的上市批准。它是由monomethyl auristatin E (MMAE)這種人工合成的毒性抗癌藥和特異性靶向淋巴瘤細胞特異性的CD30分子的抗體偶聯而成，提高了殺滅腫瘤細胞的作用。
[0007]現在，有數十款這類ADC藥物正在開展臨床試驗,其中Genentech生物技術公司和ImmunoGen公司聯合開發的曲妥珠單抗與美登素偶聯成的，用於治療乳腺癌的藥物T-DMl已經進入了最後上市前準備。美登素是一種小分子毒素，可與微管蛋白結合，通過非還原的雙-馬來醯亞胺-丙二醇聯合體防止微管形成。而曲妥珠單抗可靶向作用於乳腺癌和胃癌人表皮生長因子受體2 (HER2)，是被批准用於HER2陽性的癌症的新藥，但曲妥珠單抗並非能夠促使所有的J1ER2陽性細胞凋亡。T-DMl結合了選擇性地靶向HER2受體的曲妥珠單抗與強效的細胞毒性劑maytansine而殺死腫瘤細胞。即T-DMl抗體與HER2受體結合，引起從偶聯物釋放的美登素細胞內化，進而殺死腫瘤細胞。T-DMl具有較好的整體療效和藥代動力學特性，並且毒性較低。
[0008]傳統的小分子化療藥物具有毒性強和藥代動力學的優勢，但在治療腫瘤過程中可能結合和影響其他生理靶點產生嚴重的副作用；抗體-藥物偶聯就是把具有優異臨床療效的靶向特異性抗體和小分子藥物的藥代動力學結合起來。抗體藥物偶聯物結構是具有靶向作用的單克隆抗體與具有特定藥理學特性的化合物結合。這種技術的要求是治療性抗體必須具有靶點結合特異性；必須與一個具有治療或其他功能作用的分子如細胞毒素偶聯，諸多因素影響這類抗體的作用如偶聯抗體的細胞內吞功能、偶聯穩定性、細胞毒素的釋放及殺傷性等。
[0009]目前常用的毒素分子主要包括微管蛋白抑制劑Auristatin類似物monomethylauristatin E, monomethyl auristatin F 和美登素。monomethyl auristatin E 是人工合成的微管聚合物抑制劑，能夠抑制微管聚集，幹擾腫瘤細胞有絲分裂和凋亡誘導作用(Naumovski L and Junutula JR.Glembatumumab vedotin, a conjugate ofan ant1-glycoprotein non-metastatic melanoma protein B mAb and monomethylauristatin E for the treatment of melanoma and breast cancer.Curr OpinMol Ther 2003 ； 12 (2):248-57.Francisco JA, Cerveny CG et al.cAClO-vcMMAE,an ant1-CD30-monomethyl auristatin E conjugate with potent and selectiveanti tumor activity.Blood 102(4): 1458-65) monomethyl auristatin F是一種抗有絲分裂的Auristatin衍生物，C末端具有帶電荷的苯基丙氨酸殘基，與未帶電荷的MMAE相t匕，它最小化細胞信號通·路的損傷，最小化細胞毒性。在大量CD30細胞株試驗中發現，mAb-maleimidocaproyl-繳氨酸-瓜氨酸-p-aminobenzyloxycarbony1-MMAF (mAb-Ll-MMAF)的毒性比單獨 MMAF 強 2200 倍以上(Doronina SO et al., Enhanced activity ofmonomethylauristatin F through monoclonal antibody delivery:effects of linkertechnology on efficacy and toxicity.Bioconjug Chem, 2006 ； 17 (I):pll4_24)。美登素也是一種能與微管蛋白結合小分子毒素，通過非還原的雙-馬來醯亞胺-丙二醇聯合體防止微管形成。
[0010]抗體-藥物偶聯具有直接和間接殺傷癌細胞的作用，這種抗體使配體/受體信號的阻斷或激動活性、誘導凋亡同時還可以將負載藥物直接或間接(例如藥物、毒素、小分子幹擾RNA或放射性同位素)呈遞或傳遞給腫瘤細胞。治療性偶聯抗體藥物就是利用抗體和偶聯藥物的雙重特性，一是結合功能，與靶分子特異性結合；二是抗體本身腫瘤細胞殺傷的效應功能，三是偶聯藥物的特定功效。目前的抗體-藥物偶聯藥物是局限在如何直接殺傷腫瘤細胞。但基於這種技術在抗體，連結分子，毒素分子，連結技術等方面的高要求，以及能夠帶到腫瘤微環境內的毒素分子有限，在實際臨床研究方面還存在著一定困難。[0011]本文引用的參考文獻不應視為承認是請求保護的本發明的現有技術。
[0012]發明概述[0013]本發明涉及一個用於治療腫瘤的具有靶向細胞功效以及細胞免疫調節功能的免疫治療分子，此免疫治療分子是具有靶向集團-連結分子-調節劑結構的偶聯複合物。此免疫治療分子在體內能達到殺傷腫瘤細胞同時更有效的激活腫瘤免疫和的作用。
[0014]本發明提供一種靶向免疫治療分子，其具有如下結構:靶向集團，連接集團，和免疫調節劑，其中靶向集團和免疫調節劑經連接集團連接在一起。
[0015]在一個實施方案中,所述靶向集團可特異性地結合腫瘤。
[0016]在一個實施方案中，所述靶向集團可特異性地結合腫瘤抗原。所述腫瘤抗原可選自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，CD70，或CD79。所述腫瘤抗原也可選自 Syndecan-1, Lewis, MUCl，MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
[0017]在一個實施方案中，所述靶向集團是抗體。所述抗體可以是單克隆抗體。所述單克隆抗體可以是人源化，或人源性單克隆抗體。在再一個實施方案中，所述靶向集團選自 Rituxan (rituximab,利妥昔單抗)，Herceptin (trastuzumab,曲妥珠單抗)，或Erbitux (cetuximab,西妥昔單抗)。
[0018]在一個實施方案中，所述革巴向集團選自a Fab, Fab』，F(ab' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linear antibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一個或多個 CDR 的抗體類似物(a small antibody mimetic comprising oneor more CDRs)。
[0019]在一個實施方案中，所述靶向集團選自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-lmimetics，CDCRGDCFCG (cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC (cyclic)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide, Vapreotide, Lanreotide,C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
[0020]在一個實施方案中，權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團是葉酸或其衍生物。
[0021 ] 在一個實施方案中，所述免疫調節劑是免疫激活劑。
[0022]在一個實施方案中，所述免疫調節劑是TLR配體。在一個實施方案中，所述免疫調節劑是下列 TLR 中至少一個的配體:TLR1，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或TLR9。在再一個實施方案中，權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑是TLR7和TLR8的配體。
[0023]在一個實施方案中，所述免疫調節劑選自Imiquimod, Resiquimod (R848),IM02134, IM0205, MGN-1703, MGN-1704, Agatolimod, SD-101, QAX-935, DIMS0150, PollinexQuattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101,聚肌胞苷酸(Poly 1: C), CpG 寡聚脫氧核苷酸，或幹擾素_b。
[0024]在Iv實施方案中，所述連接集團選自fe鏈，多妝鏈，二硫鍵鏈或硫釀鍵鏈。[0025]在一個實施方案中，所述連接集團是可被酶切的或非酶切位點的。
[0026]本發明還提供一種藥物組合物，其包含所述的免疫治療分子或其藥物學可接受的鹽以及一種或多種藥物學可接受的載體。
[0027]在一個實施方案中，所述的藥物組合物，還含有第二化學治療劑。所述的第二化學治療劑可選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環磷醯胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、替尼泊苷、依託泊苷、吉西他濱、epo th i I one、諾維本、喜樹鹼、柔紅黴素、放線菌素D、米託蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達比星。
[0028]本發明還提供一種一種治療細胞增生性疾病的方法，所述方法包括將治療有效量的如所述的免疫治療分子、或其藥物學可接受的鹽，與藥物學可接受的載體一起給藥於有此需要的對象，其中所述的細胞增生性疾病得到治療。
[0029]在一個實施方案中，所述的細胞增生性疾病為癌前期病變，或癌症。其中所述的癌症為肺癌、結腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓細胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌。
[0030]在一個實施方案中，所述的細胞增生性疾病為乳腺細胞增生性疾病。
[0031]在一個實施方案中，所述的乳腺細胞增生性疾病為乳腺癌前期病變。在再一個實施方案中，所述的乳腺癌前期病變選自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小葉癌。
[0032]在一個實施方案中，所述的乳腺細胞增生性疾病為乳腺癌。在再一個實施方案中，所述的乳腺癌為雌激素受體陰性乳腺癌。
[0033]在一個實施方案中，所述的治療分子、或其藥物學可接受的鹽與第二化學治療劑聯合給藥。在再一個實施方案中，所述的第二化學治療藥劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環磷醯胺、洛伐他汀、minos ine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、替尼泊苷、依託泊苷、吉西他濱、epothi1ne、諾維本、喜樹鹼、柔紅黴素、放線菌素D、米託蒽醌、安口丫啶、多柔比星、表柔比星或伊達比星。
[0034]在一個實施方案中，所述的癌症治療包括腫瘤尺寸的減小。
[0035]在一個實施方案中，所述的癌症為轉移癌。在再一個實施方案中，所述的癌症治療包括抑制轉移癌細胞的侵襲。
[0036]從本文提供的其它描述，包括不同實施例，本發明的其他特徵和優點將是顯而易見的。所提供的實施例舉例說明在實踐本發明中有用的不同組分和方法。實施例不限制請求保護的本發明。基於本公開內容，本領域技術人員可以鑑定和採用對於實踐本發明有用的其他組分和方法。
[0037]附圖簡述
[0038]圖1.Balb/c裸鼠注射4xl06腫瘤細胞建立癌症模型，每3天鼠尾靜脈注射給藥一次，對照組(n = 10)抗體 IgG 5mg/kg, Trastuzumab 抗體組(n = 10) 5mg/kg, R848 組(n =10) 30ug, Tra。stuzumab偶聯R848抗體組(n = 10) 5mg/kg,實驗為50天測定腫瘤體積為其中觀察項目之一。
[0039]發明詳述
[0040]樹突細胞是一類在免疫應答與免疫耐受中發揮重要作用的免疫細胞，其最突出的功能特點是在病毒刺激下產生大量的I型幹擾素，因此又被稱為是天然I型幹擾素生產細胞。
[0041]樹突狀細胞是迄今所知的功能最強的抗原提呈細胞。根據其表面分子標記，樹突狀細胞可以被分成二個亞型，漿細胞樣樹突細胞(plasmacytoid DC, pDC)和骨髓樣樹突細胞(myeloid DC，mDC)。通過大量產生I型幹擾素、細胞因子、趨化因子以及與其它細胞之間的相互作用等途徑，漿細胞樣樹突細胞廣泛地參與到機體的固有免疫和適應性免疫應答過程中，它可以調控NK、T、B等細胞參與免疫反應的強度、持續時間以及應答方式，從而在腫瘤、感染和自身免疫性疾病過程中均發揮十分重要的功能(Liu Y.T.1PC professionaltype I interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors.Annu Rev Immunol.2005 ;23:275-306.Gilliet M，Cao W,Liu Y.T.Plasmacytoid dendriticcells !sensing nucleic acids in viral infection and autoimmune diseases.Nat RevImmuno12008Aug ；8 (8):594-606)。
[0042]研究發現許多實體腫瘤如乳腺癌和頭，頸腫瘤，卵巢癌中有pDC的侵潤(Treilleux I，Blay JY，Bendriss-Vermare N et al.Dendritic cell infiltration andprognosis of early stage breast cancer.Clin Cancer Res 2004;10:7466-7474，Hartmann E，Wollenberg B，Rothenfusser S et al.1dentification and functionalanalysis of tumor—infiltrating plasmacytoid dendritic cells in head and neckcancer.Cancer Res 2003 ；63:6478-6487.Zou WP, Machelon V，Cou1mb-L^ Hermin A，etal.Stromal-derived factor-1 in human tumors recruits and alters the functionof plasmacytoid precursor dendritic cells.Nat Med 2001 ；7:1339-1346)而腫瘤細胞分泌的因子抑制的DC細胞的成熟(Gabrilovich DI，Corak J，Ciernik IF etal.Decreased antigen presentation by dendritic cells in patients with breastcancer.Clin Cancer Res 1997 ;3:483-490.Bell D，Chomarat P, Broyles D et al.1nbreast carcinoma tissue， immature dendritic cells reside within the tumor，whereas mature dendritic cel ls are located in peritumoral areas.J Exp Med1999 ；190:1417-1425.Menetrier-Caux C，Montmain G，Dieu MC et al.1nhibition ofthe differentiation of dendritic cells from CD34(+)progenitors by tumor cells:role of interleukin-6 and macrophage colony-stimulating factor.Bloodl998 ；92:4778-4791)。這些未成熟的DC細胞沒能起到調節免疫功能的作用。有證據表明Toll樣受體7激動劑Imiquimod，和Toll樣受體9激動劑CpG類藥物能夠剌激腫瘤周邊的pDC產生I型 IFN進而抑制腫瘤的發展。(Dummer R, Urosevic M, Kempf W et al.1miquimod in basalcell carcinoma:how does it work ? Br J Dermatol 2003 ；149:57-58.Miller RL,Gerster JF, Owens ML et al Imiquimod applied topically:a novel immune responsemodifier and new class of drug.1nt J ImmunopharmacoI 1999 ；21:1-14.HofmannMA, Kors C， Audring H et al Phase I evaluation of intralesionally injectedTLR9_agonist PF—3512676 in patients with basal cell carcinoma or metastaticmelanoma.J Immunother2008 ；31:520-527).[0043]本發明涉及一個用於治療腫瘤的具有靶向細胞功效以及細胞免疫調節功能的免疫治療分子，此免疫治療分子是具有靶向集團-連結分子-調節劑結構的偶聯複合物。此免疫治療分子在體內能達到激活腫瘤免疫和殺傷腫瘤細胞的作用。[0044]本發明提供一種靶向免疫治療分子，其具有如下結構:靶向集團，連接集團，和免疫調節劑，其中靶向集團和免疫調節劑經連接集團連接在一起。
[0045]1.革巴向集團
[0046]1.1.腫瘤靶點
[0047]腫瘤靶點是腫瘤細胞表面相對特異的受體或特定的基因表達蛋白以及相關的配體，可溶性蛋白等。針對該靶標的抗體或其他藥物特異性幹預調節腫瘤細胞生物學行為的信號通路直接或阻斷信號通路來抑制腫瘤細胞生長或促進其凋亡，迄今為止，已有幾十餘種分子靶點藥物被批准用於實體腫瘤或血液系統腫瘤的臨床研究及治療，另有數種分子靶向藥物用於血液系統腫瘤。目前非實體腫瘤如血液病腫瘤較常見的靶點為CD19，CD20，CD22, CD30, CD33, CD37, CD40, CD52, CD70, CD79 ;而在實體腫瘤中 Syndecan-1, Lewis,MUCl，EpCAM, Her I, Her2, Her3, MUC16, PSMA, Cripto, EphB2, EphA2, EphA3, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， folate receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, VEGF, VEGFR, MET, IGF1R, TNFR, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP,Tenascin。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat RevCancer.2012 Mar22 ；12(4):278-87.)
[0048]1.2.治療性抗體
[0049]臨床上成功的案 例如:Rituxan (Rituximab,利妥昔單抗)，是人鼠嵌合抗體,用來治療B細胞非霍奇金淋巴瘤。它作用在表達於B細胞表面的⑶20抗原，90%以上的B細胞非霍奇金淋巴瘤均有表達。Rituxan與⑶20結合通過⑶C和ADCC引發B細胞溶解，同時也可使藥物抵抗性的人體淋巴細胞對一些化療藥的細胞毒性敏感。
[0050]Herceptin(Trastuzumab,曲妥珠單抗)是人源化的單抗,作用在人表皮生長因子受體HER2的胞外區域，25%-30%的乳腺癌有表達。Herc印tin抗腫瘤作用認為是I)使HER2受體的表達下調，抑制HER2的胞內信號轉道通路，誘導細胞凋亡。2)與免疫機制有關，通過依賴抗體的ADCC和⑶C殺傷腫瘤細胞。
[0051]Erbitux(Cetuximab,西妥昔單抗)是人鼠嵌合抗體，作用在表皮生長因子受體(EGFR)。Erbitux與EGFR結合可抑制其信號轉道通路，影響細胞增殖、侵襲轉移以及血管生成。抑制EGFR信號轉道通路可增強化療藥物和放射治療的療效。
[0052]Avastin(Bevacizumab,貝伐單抗)是人源化的單抗,其作用祀點是血管皮生長因子(VEGF)。它與VEGF結合抑制VEGFR的信號轉導，結果導致抑制腫瘤的新血管生成。
[0053]1.3.其它抗體
[0054]目前在研發的針對腫瘤靶點的治療性抗體藥物有血液系統疾病腫瘤方面的抗⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，⑶40，⑶52，⑶70，⑶79單克隆抗體；有用於治療實體腫瘤的抗 Syndecan-1, Lewis, MUCl, MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin,Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4， Folate Receptor 1， BT-062, SLC44A4, Nectin-4, GD2,ED-B, FAP, GPNMB, gpA33, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascin 抗體等。(Scott AM, Wolchok JD, Old L1.Antibody therapy of cancer.Nat Rev Cancer.2012Mar22 ；12(4):278-87)
[0055]下表列舉了以腫瘤抗原分類的各種正在研發的治療性抗體:
[0056]1.4.抗體片段或變體[0057]下表列舉了可用於腫瘤抗原抗體結合的各種抗體形式以及正在研究的腫瘤靶
點
[0058]
抗體結構靶點列舉
scFvCC49, ERBB2, Ley
DiabodyLey and TAG-72
AffibodyERBB2
MinibodyCEA, ERBB2
Protein-FcAngiopoietin I, angiopoietin 2， VEGFRI, VEGFR2
Intact IgGCD20, CD33, EGFR, ERBB2, VEGF
IgE and IgMGM2
Drug conjugatesCD30, CD33 and ERBB2
Loaded nanoparticles A33, EGFR and transferrin
BispecificsCD19 - CD3, EPCAM - CD3，gplOO - CD3
[0059]可結合抗原的抗體片斷或衍生物:a Fab, Fab』，F(ab ' )2, single domainantibody, T and Abs dimer, Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linear antibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecific antibodyfragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g, SIP, SMIP,DART,或含有一個或多個 CDR 的抗體類似物(a small antibodymi metic comprising oneor more CDRs)。
[0060]1.5?其它可特異性結合腫瘤的分子
[0061]研究發現許多多肽類分子較特異性的作用在腫瘤血管方面和細胞表面激素受體上。如腫瘤血管方面的有VEGFR的ATWLPPR多肽片段，作用在CD36的Thrombospondin-1mimetics,在 Integrins avb 3and avb 5 的 ACDCRGDCFCG(cyclic)多妝和 SCH 221153片段，作用在 Aminop^tidase 上的 NCNGRC(cyclic)多肽；作用在 MMP_2and MMP-9 的CTTHWGFTLC和Lymphatic vessels的CGNKRTRGC多肽(LyP-1);在細胞表面激素受體上有 omatostatin receptors 的 Octreotide, Vapreotide 和 Lanreotide；Bombesin/GRPreceptor 的 C-3940 多妝，HRH 受體的 Decapeptyl, Lupron, Zoladex, Cetrorelix。
[0062]近年來，Folic acid的研究進展引人注目，葉酸是一種小分子維生素，是細胞分裂所必須的。腫瘤細胞分裂異常，其表面存在著高表達的葉酸受體(FR，Folatereceptor)以便捕捉足夠的葉酸來支持細胞分裂。
[0063]數據表明FR在腫瘤細胞的表達比正常細胞高出20-200倍以上，各種惡性腫瘤FR表達率分別是卵巢癌82 %，非小細胞肺癌66 %，腎癌64 %，結腸痛34 %，乳腺癌29 %，(Xia ff, Low PS.Late-targeted therapies for cancer.1 Med Chem.2010 ；14 ；53(19):6811-24)且與上皮腫瘤組織的惡性程度及轉移侵襲程度呈正相關。FA可以通過細胞表面的FR介導內吞作用將FA吞入胞內，而FA通過其羧基與藥物形成FA複合物進入細胞內仍然保持高度親和力，並在酸性條件下(PH值為5) FR與FA脫離，FA並將藥物釋放在細胞質內。
[0064]臨床上可以利用這個傳遞藥物系統來達到選擇性攻擊腫瘤細胞。葉酸分子量小，無免疫原性，穩定性強，合成價格低廉，重要的是與藥物或載體之間的化學鍵偶聯簡單易行，以FA為靶向分子構建藥物傳遞系統成為治療腫瘤的研究熱點之一。目前在臨床試驗階段的EC145 (FA化療藥物偶聯複合物)能有效的攻擊癌細胞(Pribble P and EdelmanMJ.EC145:a novel targeted agent for adenocarcinoma of the lung.Expert Opin.1nvestig.Drugs(2012) 21:755-761)。
[0065]2.免疫調節劑
[0066]2.1.TLR 配體
[0067]Toll like receptor (Toll樣受體，TLR)是樹突細胞重要的模式識別受體並在其分化和功能成熟中發揮重要作用，TLR通過識別細菌、蟲體、真菌和病毒等保守的病原相關分子模式(PAMP)而捕獲病原體，刺激樹突細胞分化和功能成熟。
[0068]到現在為止，一共有10個人類和13個鼠類TLR家族相繼被發現。它們在細胞內均有一定的分布。TLR1、2、4、5、6表達於細胞表面，TLR3、7、8、9存在於細胞的胞內體(endosome) 0它們均屬I型跨膜蛋白，由胞外區(550-980個胺基酸)、跨膜段和胞內區(約130個胺基酸)3部分組成。胞外區富含亮氨酸重複序列(LRR)，能識別病原體成分；胞內區有一個Toll/IL-lR(TIR)區域，是高度保守的蛋白質相互作用區，通過與轉接分子的相互作用轉導信號，是信號轉導的核心元件。
[0069]近年來以TLR為靶向藥物的研究也有突破性的進展，如通過TLR7MYD88信號途徑誘導IFNa、IL6和TNFa的生成來調`節免疫抗病毒、抗腫瘤藥物的TLR7/8靶向激動劑Imiquimod 和已通過臨床二期試驗的 Resiquimod(R848) (Hemmi H, Kaisho T, Takeuchi0, et al.Small antiviral compounds activate immune cells via the TLR7 Myd88dependent signaling pathway.Nat Immunol, 2002 ;3:196—200 ;Panter G, Kuznik A,Jerala R.Therapeutic applications of nucleic acids as ligands for Toll likereceptors.Curr Opin Mol Ther,2009 ；11:133-145.Kronenberger B, Zeuzem S.Currentand future treatment option for HCV, Ann Hepatol, 2009 ；8:103-112).針對 TLR9 革巴點的 M02134，IM0205, MGN-1703, MGN-1704, CpG-ODN 藥物 Agatolimod，SD-101, QAX-935,DIMS0150等；TLR4也是人們關注的靶點之一現在臨床研究藥物有單磷醯酯質A成分的Pollinex Quattro, 0M-174, Eritoran, TAK-242, N1-0101 等等
[0070]表中列舉了已報導的臨床前或臨床研究的能通過各種途徑激活TLR的分子以及其作用的TLR和臨床適應症
【權利要求】
1.一種靶向免疫治療分子，其具有如下結構:靶向集團，連接集團，和免疫調節劑，其中靶向集團和免疫調節劑經連接集團連接在一起。
2.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團可特異性或優先地結合腫瘤。
3.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團可特異性或優先地結合腫瘤抗原。
4.權利要求3的免疫治療分子，其中所述腫瘤抗原選自⑶19，⑶20，⑶22，⑶33，⑶37，CD40, CD52, CD70，或 CD79。
5.權利要求3的免疫治療分子,其中所述腫瘤抗原選自Syndecan-1,Lewis, MUCl,MUC16, PSMA, Cripto, EphA2, EphA3, EphB2, Av integrin, Mesothelin, TAG-72, CAIX，5T4，Folate Receptor 1，BT-062，SLC44A4, Nectin-4，GD2，ED-B，FAP，GPNMB,gpA33，MET，IGF1R,TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP，或 Tenascin。
6.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團是抗體。
7.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團是單克隆抗體。
8.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團是人源化，或人源性單克隆抗體。
9.權利要求1的免疫治療分子，其中所述祀向集團選自RituxanCrituximab,利妥昔單抗),Herceptin (trastuzumab,曲妥珠單抗)，或 Erbitux (cetuximab,西妥昔單抗)。
10.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團選自aFab, Fab』，F(ab/ )2,single domain antibody, T and Abs dimer,Fv, scFv, dsFv, ds-scFv, Fd,單域抗體(linearantibody),小分子抗體(minibody),雙特異抗體(diabody),雙特異抗體片斷(bispecificantibody fragment), bibody, tribody, sc-diabody, kappa (Iamda) body, BiTE, DVD-1g,SIP, SMIP，DART，或含有一個或多個⑶R的抗體類似物。
11.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團選自VEGFR的ATWLPPR多肽片段，Thrombospondin-1 mimetics, CDCRGDCFCG(cyclic)多肽，SCH 221153 片段，NCNGRC(eyelie)多肽，CTTHWGFTLC 多肽，CGNKRTRGC 多肽(LyP-1)，Octreotide,Vapreotide, Lanreotide, C-3940 多月太，Decapeptyl, Lupron, Zoladex,或 Cetrorelix0
12.權利要求1的免疫治療分子，其中所述靶向集團是葉酸或其衍生物。
13.權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑是免疫激活劑。
14.權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑是TLR配體，NodLile Receptor配體，RIG-1-Like Receptor 配體。。
15.權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑是下列TLR中至少一個的配體:TLRl，TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8，或 TLR9。
16.權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑是TLR7和TLR8的雙配體。
17.權利要求1的免疫治療分子，其中所述免疫調節劑選自Imiquimod，Resiquimod (R848)，IM02134,頂0205，MGN-1703，MGN-1704, Agatolimod, SD-101，QAX-935,DIMS0150, Pollinex Quattro, OM-174, Eritoran, TAK-242，N1-0101，聚肌胞苷酸(Poly1: C)，CpG寡聚脫氧核苷酸，和I型幹擾素，IL-12，IL-23，IL~1, IL-15。
18.權利要求1的免疫治療分子，其中所述連接集團選自腙鏈，多肽鏈，二硫鍵鏈或硫醚鍵鏈。
19.權利要求1的免疫治療分子，其中所述連接集團是可被酶切的或非酶切位點的。
20.一種藥物組合物，其包含權利要求1所述的治療分子或其藥物學可接受的鹽以及一種或多種藥物學可接受的載體。
21. 權利要求20所述的藥物組合物，其還含有第二化學治療劑。
22.權利要求21所述的藥物組合物，其中所述的第二化學治療劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環磷醯胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、替尼泊苷、依託泊苷、吉西他濱、印othilone、諾維本、喜樹鹼、柔紅黴素、放線菌素D、米託蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達比星。
23.一種治療細胞異常增殖的方法，所述方法包括將治療有效量的如權利要求1中所定義的治療分子、或其藥物學可接受的鹽，與藥物學可接受的載體一起給藥於有此需要的對象，其中所述的細胞異常增殖得到有效調節。
24.權利要求23所述的方法，其中所述的細胞異常增殖為癌前期病變。
25.權利要求23所述的方法，其中所述的細胞異常增殖為癌症。
26.權利要求25所述的方法，其中所述的癌症為肺癌、結腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、慢性髓細胞性白血病、黑素瘤或卵巢癌，黑素瘤或卵巢癌，皮膚、鼻竇、喉的乳頭狀瘤，子宮、皮膚、肺、鼻咽、陰莖、喉的乳頭狀癌。甲狀腺、乳腺、胃腸、肺、支氣管腺瘤，甲狀腺癌、胃癌，腎盂和膀胱的移行上皮癌，皮膚基底細胞癌，皮膚、舌、唇的血管肉瘤，骨肉瘤，顱內的星形細胞瘤和多形膠質母細胞瘤，惡性神經鞘瘤，成神經節細胞瘤，腦膜肉瘤，何杰金氏病，非何杰金氏病，白血病、絨毛上皮癌，惡性葡萄胎，多發骨髓瘤，以及惡性黑色素瘤等。
27.權利要求23所述的方法，其中所述的細胞異常增殖為乳腺細胞增生性疾病。
28.權利要求27所述的方法，其中所述的乳腺細胞異常增殖為乳腺癌前期病變。
29.權利要求28所述的方法，其中所述的乳腺癌前期病變選自乳腺非典型增生、原位管癌、和原位小葉癌。
30.權利要求27所述的方法，其中所述的乳腺細胞增生性疾病為乳腺癌。
31.權利要求30所述的方法，其中所述的乳腺癌為雌激素受體陰性乳腺癌。
32.權利要求23所述的方法，其中所述的治療分子、或其藥物學可接受的鹽與第二化學治療劑聯合給藥。
33.權利要求32所述的方法，其中所述的第二化學治療藥劑選自他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、來曲唑、imatanib、紫杉醇、環磷醯胺、洛伐他汀、minosine、吉西他濱、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、甲氨喋呤、多西他奇、戈舍瑞林、長春新鹼、長春鹼、諾考達唑、替尼泊苷、依託泊苷、吉西他濱、epothi 1ne、諾維本、喜樹鹼、柔紅黴素、放線菌素D、米託蒽醌、安吖啶、多柔比星、表柔比星或伊達比星。
34.權利要求23所述的方法，其中所述的癌症治療包括腫瘤尺寸的減小。
35.權利要求25所述的方法，其中所述的癌症為轉移癌。
36.權利要求25所述的方法，其中所述的癌症治療包括抑制轉移癌細胞的侵襲。
【文檔編號】A61K39/00GK103566377SQ201210248481
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月18日 優先權日:2012年7月18日
【發明者】李立新 申請人:上海博笛生物科技有限公司