一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑及其製備工藝的製作方法

2023-07-14 02:19:56

專利名稱：：一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑及其製備工藝的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種抗體複合製劑，具體涉及一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑，及其製備方法。
背景技術：
：雞新城疫病是養雞業的大敵。目前應用於防治雞新城疫病的抗感染藥品有抗生素、化學合成藥品、中藥及其製劑、高免卵黃抗體和其他抗感染生物製劑。(—)抗生素這類抗感染藥物主要是由細菌、真菌、放線菌等微生物所產生的代謝物，以及人工仿製合成或半合成的抗生物質。它們對病原微生物的抑制或殺滅作用強，抗菌譜廣，療效好，主要是輔助治療雞新城疫病的細菌性繼發感染。但是，它們藥殘大，可以通過食源性汙染，引起人類疾病。(二)化學合成藥品這類抗感染藥物主要包括磺胺類、喹諾酮類、呋喃類等。它們抗菌譜廣，性質穩定，療效確切，使用簡便，也是用於輔助治療雞新城疫病的細菌性繼發感染，但是具有毒副作用大，易殘留於體內，造成肝、腎等組織不可逆的損害(詳見中國藥典)；還有病毒靈、金剛烷胺等，雖然可以治療雞新城疫病，但是造成了食源性藥殘，影響了此類藥物在人醫中的應用。以上兩類藥物除了上述缺點外，它們共同的弊端還有幹擾機體正常菌群，破壞機體微生態平衡，導致微生物菌群失調移位，造成二重感染和其它病變；再者，大劑量反覆使用都可以導致耐藥性，降低治療效果，使其抗感染的敏感率下降至10-15%，並誘生出高致病性菌株。(三)中藥及其製劑中藥屬天然藥物，具有無害優勢的特點，扶正祛邪、整體調整和無耐藥性，是抗菌素和化學合成藥品無法比擬的，可以有效地治療雞新城疫病。但是，目前市場上有許多抗感染的中藥製劑如板蘭根衝劑、穿心蓮注射液等。雖然這些藥物抗菌譜廣，但存在藥效慢、作用弱、用量大、質量難以穩定以至使用不方便等因素。(四)疫苗預防雞新城疫病雖然可以進行疫苗預防，但是在緊急感染的情況下疫苗就顯得無濟於事了。(五)高免卵黃抗體製劑這類抗感染藥物來自特製的雞卵黃抗體。它們作用速度快，療效準確，特異性強，但由於只針對雞新城疫病毒，對混合感染和繼發感染無效，有時不得不用上述三類藥物輔助治療；其次，目前多數卵黃抗體是直接製品即原始高免卵黃製品也稱粗製高免卵黃抗體(比如養殖企業自己按姜豔芬，王亞萍，潘瑞等抗禽流感、新城疫、法氏囊三聯高免卵黃抗體的研製及應用，甘肅農業大學學報，2004，39(1)，p57的方法製備)，內含許多非藥物成分比如卵黃中的脂肪和微粒蛋白，它們影響卵黃抗體的吸收，有的還帶有別的疾病傳染源；再者，目前有個別卵黃抗體產品即使採用了提取濃縮工藝，大部分也是水劑，屬於自製精製高免卵黃抗體(比如養殖企業自己按王洪新、劉學賢、穆海波、呂曉娟，雞新城疫卵黃抗體IgY的分離提純研究，中國家禽，2003，25(19)，pll-14的方法製備的卵黃抗體等)，它們必須低溫保存，在貯運和使用過程中很容易變性失活，失去醫療價值。因此，這些抗感染製劑在藥品市場上難以操作而失去了商品價值的意義。(六)其他抗感染的生物因子製劑比如幹擾素、細胞因子等，由於價格昂貴，很難被臨床廣泛接受，至於在雞新城疫病的治療中就更難推行。基於上述技術背景，本發明針對雞新城疫病提出一種卵黃抗體複合製劑，克服了現有技術中抗感染藥品存在的諸多缺陷。
發明內容本發明的目的在於提出一種雞新城疫卵黃抗體複合製劑，克服已有技術中的缺點，在降低成本和耐藥性的前提下，有效提高了疫病的防治效果，而且不會對人產生食源性汙染和藥物殘留。本發明的另一個目的還在於提供一種所述複合製劑的製備方法，進一步降低生產成本、提高生產效率。本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的提供一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑，它由以下重量份數的原料製備而成(1)抗雞新城疫病毒卵黃抗體10.0-99.5;(2)中藥多糖0.5-20.0;所述的中藥多糖提取自下列重量份的中藥中的一種或兩種以上的組合物板藍根10-50、沙參50-100、丹參50-80、茯苳30-50。所述複合製劑還可以進一步包含常規蛋白保護劑1.0-10.0;所述的蛋白保護劑，按重量份計，優選脫脂奶粉1.0-6.0或乳糖1.0-3.0中的一種或兩種的混合物。所述的抗雞新城疫病病毒卵黃抗體可以是現有技術中經過雞新城疫病疫苗多次強化免疫的蛋雞生產的高免雞蛋中提純製備的現有產品，提純製備方法可以是現有技術中任何可實現提純目的的方法。為了進一步提高卵黃抗體的收率、降低生產成本，本發明的抗雞新城疫病病毒卵黃抗體優選按照以下方法製得(1)按照常規方法製取抗雞新城疫病病毒高免雞蛋，可以包括以下步驟(l.l)無特定病原體蛋雞在潔淨養殖場隔離飼養；(1.2)對蛋雞進行3次免疫，每次給每隻雞注射雞新城疫疫苗，注射量分別為0.5ml、1.5ml和2.0ml，每次間隔一周時間；(1.3)完成第3次免疫21天後，收集雞蛋，對卵黃中的卵黃抗體進行免疫學檢測，雞新城疫的卵黃抗體血凝抑制效價達到1:512以上的雞蛋為雞新城疫病毒高免雞蛋，收集貯存在iet:條件下備用；如果檢測上述指標不達標，可以重新進行第3次免疫，直至檢測合格。(2)抗雞新城疫病毒卵黃抗體的提純(2.1)將步驟(1)得到的抗雞新城疫病毒的高免雞蛋進行消毒，打碎雞蛋並分離出卵黃；(2.2)在(2.1)步分離出的卵黃中加入卵黃重量11倍的無菌去離子水，並調整pH值至6.00，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置48小時之後，通過虹吸抽取一次上清；後再將沉澱物用無菌去離子水稀釋8倍，並調整pH值至6.0，然後攪拌5分鐘，在fC的條件下靜置24小時之後，通過虹吸抽取二次上清；合併兩次上清，經吸附過濾除去內毒素，獲得除毒上清液備用；其中，所述pH值的調整可以使用0.1NHCl或0.1NNaOH完成；所述吸附過濾可以使用活性炭完成，也可以用已知的任何方法完成；(2.3)將(2.2)步得到的除毒上清液除去上清中的卵黃微粒等雜質；再將濾過液除去低分子雜質，並將截留物濃縮為稠液，即為抗雞新城疫病毒卵黃抗體；其中，所述除去上清中的卵黃微粒等雜質可以通過經1000KD濾膜過濾或經10000轉/分離心10分鐘完成；所述濾過液除去低分子雜質可以通過經30100KD濾膜過濾完成。所述的多糖的提取方法可以是任意現有方法，優選按照以下方法提取得到a.將所述的中藥原料切碎、洗淨後，用冷水浸泡2小時至藥心充分浸透，再加入原料重量12倍的水，加熱至沸騰後在9(TC的情況下，通過熱回流濃縮工藝煎煮180分鐘同時濃縮得到濃縮藥液；b.將步驟a製備的濃縮藥液通過10000轉/分離心20分鐘，棄去沉澱物，獲得上清液並經負壓濃縮，使其形成乾物質為25%的濃縮藥液；c.將步驟b得到的濃縮藥液加4-8倍體積量95X的乙醇，靜置過夜，棄去乙醇上清液，沉澱物除去乙醇，然後加水溶解並通過100KD濾膜過濾，除去雜蛋白、內毒素等大分子雜質，收集濾過液再通過1KD納濾膜過濾，除去有機小分子和無機分子及離子等雜質，被截留的物質稀釋後逆向水流透析24小時；取出濃縮液，加5倍體積量99%乙醇沉澱，攪拌，靜置過夜，3000-5000轉/分離心20分鐘；沉澱物除去乙醇並經過噴霧乾燥，即得到本發明所使用的中藥多糖。本發明還提供一種所述的複合製劑的製備方法，包括以下步驟1)按照常規方法製取抗雞新城疫病病毒高免雞蛋；2)將步驟l)得到的抗雞新城疫病病毒的高免雞蛋進行消毒，打碎雞蛋並分離出卵黃，然後在其中加入卵黃重量ll倍的無菌去離子水，並調整pH值至6.00，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置48小時之後，通過虹吸抽取一次上清；後再將沉澱物用無菌去離子水稀釋8倍，並調整pH值至6.0，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置24小時之後，通過虹吸抽取二次上清；合併兩次上清，經吸附過濾除去內毒素，獲得除毒上清液，過濾除去上清中的卵黃微粒等雜質，再將濾過液除去低分子雜質，並將截留物通過超濾濃縮為稠液，獲得抗雞新城疫病病毒卵黃抗體；3)將步驟2)得到的抗雞新城疫病毒卵黃抗體、提取自所述中藥的中藥多糖按照所述的重量份比例混合溶於無菌去離子水中，使每毫升溶液中雞新城疫的卵黃抗體血凝抑制效價21:2048;4)將步驟3)得到的溶液分裝於西林瓶進行常規冷凍乾燥，並通過Co6°照射殺滅微生物，即得到本發明所述的雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑。其中步驟2)所述的pH值的調整優選使用0.1NHC1或O.lNNaOH完成。步驟2)所述的吸附過濾優選使用活性炭完成。步驟2)所述的除去上清中的卵黃微粒等雜質優選經1000KD濾膜過濾或經10000轉/分離心10分鐘完成；所述濾過液除去低分子雜質優選經30100KD濾膜過濾完成。步驟4)所述的冷凍乾燥優選將溶液分裝於西林瓶後置於真空冷凍乾燥機中，預冷至-4(TC，然後在-4(TC下冷凍乾燥2-8小時，而後每小時升溫3t:左右，經12-18小時的真空乾燥升溫至25t:，然後加蓋、密封，在25t:環境中保持3-5小時。目前在卵黃抗體提純方面，現有技術分為卵黃抗體的分離純化、提取純化兩個步驟。第一步卵黃抗體分離純化上，有聚乙二醇(PEG)法、硫酸葡聚糖(DS)法、氯仿提法、天然膠天然膠如卡拉膠(CAR)和黃原膠(XAN)法、辛酸(CA)法、水稀釋(WD)法、超臨界氣體提取(SFE)法等；第二步卵黃抗體提取純化上，有超濾法、硫酸銨沉澱法、硫酸鈉沉澱法、聚乙二醇(PEG)沉澱法、冷乙醇兩步沉澱法、聯合沉澱法等。綜合上述兩步作為生產綠色食品的藥品來看，水稀釋(WD)法聯合超濾法是最有價值卵黃抗體提純方法，因為該聯合方法不存在任何外源汙染。但是在大批量生產中，靠重力自然沉澱卵黃微粒達到回收抗體上清目的，而現有技術的水稀釋(WD)法在短時間內得不到足量的抗體上清液，因此影響了抗體的回收率。本發明從生產實際出發，對現有的水稀釋(WD)法聯合超濾法的卵黃抗體提純技術做了進一步改進，提高了卵黃抗體回收率，進而提出了上述複合製劑的製備方法，在保證藥品療效的基礎上達到了進一步提高生產率、降低成本的目的。與現有技術相比，本發明的複合製劑具有以下有益效果l)具有更為全面、有效的防治效果在中醫免疫工程學的指導下，本發明採用現代免疫工程技術和現代中藥製劑的頂尖理化工藝，將抗雞新城疫病毒卵黃抗體的特異免疫性和多糖的非特異免疫性以及它們對機體自身抗病能力的調理作用相結合，複合製成凍幹劑型。因此，本發明的複合製劑既可以抵抗原發病原——雞新城疫病毒感染，又可以激發自身免疫力和整體抗病的功能；既標本兼治，又快速持久。因此本發明的複合製劑相對現有技術中的單純的抗體製劑和中藥製劑，具有更全面、更有效、更迅速的防治效果。具體的防治效果可參見以下臨床試驗實驗1.雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑臨床應用效果受試病雞情況受試病雞是確診患有新城疫病毒感染的14-84日齡的雛雞和育成雞，沒有品種限制。疾病診斷標準以病雞腺胃乳頭出血，肌胃角質膜下出血，小腸有島嶼狀出血壞死為主要特徵，兼下列任意兩項症狀1、病雞雞冠紫紅髮黑，體溫升高，呼吸困難，甩頭流鼻涕；2、歪脖點頭，翅下垂腿麻痺，拉黃綠色稀便；73、全身漿膜出血，盲腸淋巴結出血，直腸出血。實驗觀察方法將14368隻確診雞新城疫病毒感染的育雛雞分為四組A組——本發明複合製劑治療組，按本發明實施例1提供的方法製備抗體製劑；B組——卵黃抗體提取凍幹製品治療組，按"王洪新、劉學賢、穆海波、呂曉娟，雞新城疫卵黃抗體IgY的分離提純研究，中國家禽，2003，25(19)，pll-14"提供的方法製備抗體製劑；C組——粗製卵黃抗體治療組；按"姜豔芬，王亞萍，潘瑞等抗禽流感、新城疫、法氏囊三聯高免卵黃抗體的研製及應用，甘肅農業大學學報，2004，39(1)，p57"提供的方法製備抗體製劑；D組——未治療組，不做任何處理。然後，A-C組分別使用相應製劑進行治療，方法是每隻病雞每日肌注l羽份，連續用藥3日。每羽份的雞新城疫(NEO的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價1:512。[ooes]治癒評價標準1、腺胃乳頭出血、肌胃角質膜下出血、小腸有島嶼狀出血壞死、全身漿膜出血、盲腸淋巴結出血、直腸出血等出血病變消失；2、雞冠光澤紅亮，呼吸困難和甩頭流鼻涕等症狀消失；3、歪脖點頭和翅下垂腿麻痺等神經症狀消失。實驗觀察結果實驗結果證明使用本發明製劑後對雞新城疫的治癒率92.1%，而精製高免卵黃抗對雞新城疫的治癒率84.6%，粗製高免卵黃抗體對雞新城疫的治癒率77.5%。通過應用生物統計學分別對三個實驗組治癒率進行兩兩t檢驗，充分表明它們相互之間都存在極顯著差異(11>2.58，p<0.01)，因此證明了本製劑的治療效果優於其它製劑。實驗結果見表1。.表1.本發明的複合製劑與現有技術相比的臨床應用效果tableseeoriginaldocumentpage8注表中"""均表示與同指標的其他組數據比較具有高度顯著性差異。2)抗體得到有效保護，促進藥效穩定發揮在現代分子生物學、現代分子免疫學和中醫學相結合的基礎上，利用分子間氫鍵結構理論，把抗雞新城疫病毒卵黃抗體和多糖等成分混合後經過真空冷凍乾燥，使多糖等成分通過氫鍵在抗雞新城疫病毒卵黃抗體外圍形成多維網絡空間氫鍵結構假性水化膜，從而研製成了一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑。多糖等成分是富含羥基的6/10頁一類物質，它們相互間可以構建多維網絡空間氫鍵結構，在抗雞新城疫病毒卵黃抗體表面形成假性水化膜。它的存在提高了抗雞新城疫病毒卵黃抗體抵抗高溫、紫外線等誘導變性，直接保護了抗雞新城疫病毒卵黃抗體分子的外表結構、構象與功能，因此本發明的複合製劑中的卵黃抗體不易失活，能夠更加充分有效地發揮抗感染功效。具體效果參見以下實驗實驗2.雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑耐熱存儲效果為了鑑定本發明製劑的耐熱特性我們做了本實驗。將本發明實施例1的製劑(A)、現有技術中的卵黃抗體提取凍幹製品(B)和粗製卵黃抗體(C)置於37t:環境中，分別保存1周、2周、3周、l月、6月、12月、24月、36月、48月後，用ND-HI測定法，分別測定雞新城疫(ND)的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價，結果見表2。表2.不同保存時間每羽份雞新城疫的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價劍劑保存時間1周2周3周1月6月12月24月36月48月Ai:5i21:5121:5121:5121:5121:5121:5121:5121:256B1:5121:5121:5121:5121:5121:1281:64—c1:5121:5121:5121:641:32——-由上表得知，本發明實施例1的製劑有很強的抗熱性能，在37的t:環境中保存36月本類產品每羽份的雞新城疫(ND)的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價為1:512，而精製高免卵黃抗體在此環境中只能存儲6個月，粗製高免卵黃抗體也只能存儲3周。所以，本發明製劑具有抗熱存儲、方便運輸和使用的特性，這就克服了目前別的同類產品的缺陷。3)其他目前，在雞養殖領域，國家頒布了禁用病毒靈、金剛烷胺等抗病毒藥後，養殖業的病毒病成了制約養殖發展的瓶頸。而本發明的複合製劑中不含有抗生素或化學合成藥物，因此不會使雞產生耐藥性，也不會對人產生藥殘汙染；而相對於細胞因子、幹擾素等製劑，本發明的複合製劑具有成本低、使用方便等多種優勢。4)本發明的製備方法在保證複合製劑的治療效果的前提下，能夠進一步降低生產成本、提高生產效率。本發明的製備方法中，採用了新的卵黃抗體提純工藝，即改進了現有技術中的水稀釋(WD)法聯合超濾法。現有技術用無菌去離子水將高免卵黃液稀釋710倍，並用0.1NHCl或0.1NNaOH溶液調整pH值至5.2，在4°C的條件下靜置6小時；而本發明方法用無菌去離子水將高免卵黃液稀釋11倍，並用O.lNHCl或O.INNaOH溶液調整pH值至6.00，在4t:的條件下靜置48小時。實踐證明，在大批量生產中靠重力自然沉澱情況下，同一環境裡前者抗體得率比後者少25-35%。因此，本發明的製備方法能夠在保證複合製劑的治療效果的前提下，能夠進一步降低生產成本、提高生產效率。具體實施例方式下面通過具體實施例來進一步說明本發明的內容。實施例1.多味中藥多糖型雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑l.成分抗雞新城疫病毒卵黃抗體99.5公斤中藥多糖0.5公斤所述中藥多糖提取自以下重量份的中藥材組合物板藍根IO、沙參50、丹參50和茯苓30。2.製備(1)、製備抗雞新城疫病毒的高免雞蛋。(l.l)無特定病原體蛋雞在潔淨養殖場隔離飼養；(1.2)對蛋雞進行3次免疫，每次給每隻雞注射雞新城疫疫苗，注射量分別為0.5ml、1.5ml和2.0ml，每次間隔一周時間；(1.3)完成第3次免疫21天後，收集雞蛋，對卵黃中的卵黃抗體進行免疫學檢測，雞新城疫的卵黃抗體血凝抑制效價達到1:512以上的雞蛋為雞新城疫病毒高免雞蛋，收集貯存在iet:條件下備用；如果檢測上述指標不達標，可以重新進行第3次免疫，直至檢測合格。(2)抗雞新城疫病毒卵黃抗體的提純(2.1)將步驟(1)得到的抗雞新城疫病毒的高免雞蛋進行消毒，打碎雞蛋並分離出卵黃；(2.2)在(2.1)步分離出的卵黃中加入卵黃重量11倍的無菌去離子水，並使用0.1NHCl或0.1NNaOH調整pH值至6.00，然後攪拌5分鐘，在4°C的條件下靜置48小時之後，通過虹吸抽取一次上清；後再將沉澱物用無菌去離子水稀釋8倍，並使用0.1NHC1或0.1NNaOH調整pH值至6.0，然後攪拌5分鐘，在4°C的條件下靜置24小時之後，通過虹吸抽取二次上清；合併兩次上清，經活性炭吸附過濾除去內毒素，獲得除毒上清液備用；(2.3)將(2.2)步得到的除毒上清液經1000KD濾膜過濾或經10000轉/分離心10分鐘除去上清中的卵黃微粒等雜質；再將濾過液經30100KD濾膜過濾除去低分子雜質，並將截留物濃縮為稠液，即為抗雞新城疫病毒卵黃抗體；(3)製備多糖(3.1)將板藍根、沙參、丹參和茯苓按照板藍根10份、沙參50份、丹參50份、茯苓30份的重量比取料、切碎、洗淨後混合，用冷水浸泡2小時至藥心充分浸透，再加入原料重量的12倍的水，加熱至沸騰後在9(TC的情況下，在熱回流濃縮工藝下煎煮180分鐘同時濃縮得到濃縮藥液。(3.2)將步驟(3.1)製備的濃縮藥液通過10000轉/分離心20分鐘，棄去沉澱物，獲得上清液並經負壓濃縮，使其形成乾物質為25%的濃縮藥液；(3.3)將步驟(3.2)得到的濃縮藥液加4-8倍體積量95%的乙醇，靜置過夜，棄去乙醇上清液，沉澱物除去乙醇，然後加水溶解並通過100KD濾膜過濾，除去雜蛋白、內毒素等大分子雜質，收集濾過液再通過1KD納濾膜過濾，除去有機小分子和無機分子及離子等雜質，被截留的物質稀釋後逆向水流透析24小時；取出濃縮液，加5倍體積量99%乙醇沉澱，攪拌，靜置過夜，3000-5000轉/分離心20分鐘；沉澱物除去乙醇並經過噴霧乾燥，即得到本發明所使用的中藥多糖。(4)多味中藥多糖型雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑的合成將99.5公斤步驟(2)製備的卵黃抗體和0.5公斤步驟(3)製備的多糖混合溶於無菌去離子水中，使每毫升溶液中雞新城疫(ND)的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價為21:2048，然後分裝於西林瓶，置於真空冷凍乾燥機中乾燥。真空冷凍條件1、預冷至-4(TC;2、在-4(TC下冷凍乾燥2-8小時，而後每小時升溫3"左右，經12-18小時的真空乾燥至25t:;3、加蓋，密封，在25t:環境中保持3-5小時。最後經Co6°照射殺滅微生物，即為成品。3.質量標準性狀本品為淡黃色，呈較緻密的團塊。無菌檢驗按《中國獸藥典》進行，應無菌生長。支原體檢驗按《中國獸藥典》進行，應無支原體生長。外源病毒檢驗按《中國獸藥典》進行，應符合規定。安全檢驗用14日齡SPF雞5隻，各肌肉注射10羽份，觀察14天，應全部健活，注射部位沒有炎性反應。效力檢驗取3-6周齡的健康易感雞30隻，隨機分成3組，每組10隻。第l組為健康對照組，不注射任何藥物，單獨隔離飼養。第2、3組每隻雞分別肌肉注射ND北京強毒株105ELD5。。24小時後，第2組每隻肌肉注射本品1羽份進行被動免疫治療；第3組注射生理鹽水。觀測每組發病、死亡情況至第14日。判定結果第l組試驗期間雞應全部健活。第3組為攻毒對照組，應於攻毒後24-48小時發病，48小時後開始死亡，72小時全部發病，14日內全部死亡。第2組為早期感染治療組，注射本製劑後24-48小時開始恢復正常，觀測結束至少存活9隻，判為合格。效價測定供試樣品卵黃抗體的製備精密量取製劑稀釋液1羽份，進行雞新城疫(ND)的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價測定。雞新城疫(ND)的卵黃抗體血凝抑制(HI)效價應為21:512。作用和用途用於早期緊急預防和治療雞新城疫病。用法和用量1、預防用量25日齡以下的每隻l羽份，25-35日齡1.5羽份，35-45日齡2羽份，45日齡以上2.5-4羽份。必要時可重複注射2-3次。2、治療劑量35日齡以下每隻2.0羽份，35日齡以上每隻2.5-3.0羽份；病情嚴重時，可加倍用量，也可1日1次，連用23日。注意事項11l.用本品被動免疫後，5天內不得進行雞新城疫弱毒活疫苗的免疫。2.本品切勿高溫加熱使用，用生理鹽水稀釋後立即使用。3.本品口服無效。4.本品可與獸用抗生素混合注射。貯存與有效期2-『C或室溫保存；有效期36個月。實施例2.三味中藥多糖型雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑l.成分抗雞新城疫病毒卵黃抗體65公斤；中藥多糖6公斤；乳糖10公斤；2.製備卵黃抗體和多糖的製備方法同實施例1，只是多糖的提取來源變為以下重量份的中藥原料板藍根10份、沙參20份、茯苓10份；複合製劑的合成過程和方法同實施例1，只是在合成原料變為抗雞新城疫病毒卵黃抗體65公斤、多糖6公斤和乳糖10公斤。3.質量標準同實施例l。實施例3.兩味中藥多糖型雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑l.成分抗雞新城疫病毒卵黃抗體40公斤；多糖20公斤；脫脂奶粉6公斤；2.製備:卵黃抗體和多糖的製備方法同實施例1，只是多糖的提取來源變為以下重量份的中藥原料茯苓10份、丹參30份；複合製劑的合成過程和方法同實施例1，只是在合成原料變為抗雞新城疫病毒卵黃抗體40公斤、多糖20公斤和脫脂奶粉6公斤。3.質量標準同實施例l。實施例4.單味中藥多糖型雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑l.成分抗雞新城疫病毒卵黃抗體10公斤；多糖5公斤；脫脂奶粉l公斤；乳糖l公斤；2.製備卵黃抗體和多糖的製備方法同實施例1，只是多糖的提取來源變為沙參；複合製劑的合成過程和方法同實施例1，只是在合成原料變為抗雞新城疫病毒卵黃抗體10公斤、多糖5公斤、脫脂奶粉1公斤和乳糖1公斤。3.質量標準同實施例l。權利要求一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑，其特徵在於，它由以下重量份數的組分組成(1)抗雞新城疫病毒卵黃抗體10.0-99.5；(2)中藥多糖0.5-20.0；所述的中藥多糖提取自下列重量份的中藥中的一種或兩種以上的組合物板藍根10-50、沙參50-100、丹參50-80、茯苓30-50。2.權利要求1所述的複合製劑，其特徵在於進一步包含常規蛋白保護劑1.0-10.0重量份。3.權利要求2所述的複合製劑，其特徵在於所述的蛋白保護劑，按重量份計，是脫脂奶粉1.0-6.0或乳糖1.0-3.0中的一種或兩種的混合物。4.權利要求1所述的複合製劑，其特徵在於，所述的抗雞新城疫病毒卵黃抗體是按照以下方法製得的(1)按照常規方法製取抗雞新城疫病毒高免雞蛋；(2)抗雞新城疫病毒卵黃抗體的提純(2.1)將步驟(1)得到的抗雞新城疫病毒的高免雞蛋進行消毒，打碎雞蛋並分離出卵黃；(2.2)在(2.1)步分離出的卵黃中加入卵黃重量11倍的無菌去離子水，並調整pH值至6.00，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置48小時之後，通過虹吸抽取一次上清；後再將沉澱物用無菌去離子水稀釋8倍，並調整pH值至6.0，然後攪拌5分鐘，在fC的條件下靜置24小時之後，通過虹吸抽取二次上清；合併兩次上清，經吸附過濾除去內毒素，獲得除毒上清液備用；(2.3)將(2.2)步得到的除毒上清液除去上清中的卵黃微粒等雜質；再將濾過液除去低分子雜質，並將截留物通過超濾濃縮為稠液，即為抗雞新城疫病毒卵黃抗體。5.權利要求1所述的複合製劑，其特徵在於，所述的多糖是按照以下方法提取得到的a.將所述的中藥原料切碎、洗淨後，用冷水浸泡2小時至藥心充分浸透，再加入原料重量12倍的水，加熱至沸騰後在9(TC的情況下，通過熱回流濃縮工藝煎煮180分鐘同時濃縮得到濃縮藥液；b.將步驟a製備的濃縮藥液通過10000轉/分離心20分鐘，棄去沉澱物，獲得上清液並經負壓濃縮，使其形成乾物質為25%的濃縮藥液；c.將步驟b得到的濃縮藥液加4-8倍體積量95X的乙醇，靜置過夜，棄去乙醇上清液，沉澱物除去乙醇，然後加水溶解並通過100KD濾膜過濾，除去雜蛋白、內毒素等大分子雜質，收集濾過液再通過1KD納濾膜過濾，除去有機小分子和無機分子及離子等雜質，被截留的物質稀釋後逆向水流透析24小時；取出濃縮液，加5倍體積量99%乙醇沉澱，攪拌，靜置過夜，3000-5000轉/分離心20分鐘；沉澱物除去乙醇並經過噴霧乾燥，即得到本發明所使用的中藥多糖。6.權利要求1所述的複合製劑的製備方法，包括以下步驟1)按照常規方法製取抗雞新城疫病病毒高免雞蛋；2)將步驟l)得到的抗雞新城疫病病毒的高免雞蛋進行消毒，打碎雞蛋並分離出卵黃，然後在其中加入卵黃重量ll倍的無菌去離子水，並調整pH值至6.00，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置48小時之後，通過虹吸抽取一次上清；後再將沉澱物用無菌去離子水稀釋8倍，並調整pH值至6.0，然後攪拌5分鐘，在4t:的條件下靜置24小時之後，通過虹吸抽取二次上清；合併兩次上清，經吸附過濾除去內毒素，獲得除毒上清液，過濾除去上清中的卵黃微粒等雜質，再將濾過液除去低分子雜質，並將截留物通過超濾濃縮為稠液，獲得抗雞新城疫病病毒卵黃抗體；3)將步驟2)製得的抗雞新城疫病毒卵黃抗體、提取自所述中藥的中藥多糖按照所述的重量份比例混合溶於無菌去離子水中，使每毫升溶液中雞新城疫的卵黃抗體血凝抑制效價21:2048;4)將步驟3)得到的溶液分裝於西林瓶進行常規冷凍乾燥，並通過Co6°照射殺滅微生物，即得到本發明所述的雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑。7.權利要求6所述的製備方法，其特徵在於步驟2)所述的pH值的調整使用0.1NHCl或0.1NNaOH完成。8.權利要求6所述的製備方法，其特徵在於步驟2)所述的吸附過濾使用活性炭完成。9.權利要求6所述的製備方法，其特徵在於步驟2)所述的除去上清中的卵黃微粒等雜質是經1000KD濾膜過濾或經10000轉/分離心10分鐘完成；所述濾過液除去低分子雜質是經30100KD濾膜過濾完成。10.權利要求5所述的製備方法，其特徵在於步驟2)所述的冷凍乾燥是將溶液分裝於西林瓶後置於真空冷凍乾燥機中，預冷至-4(TC，然後在-4(TC下冷凍乾燥2-8小時，而後每小時升溫3。C左右，經12-18小時的真空乾燥升溫至25。C，然後加蓋、密封，在25"環境中保持3-5小時。全文摘要本發明提供一種雞新城疫濃縮凍幹卵黃抗體複合製劑，它含有以下重量份數的組分抗雞新城疫病毒卵黃抗體10.0-99.5；中藥多糖0.5-20.0。本製劑在中醫免疫工程學的指導下，將抗雞新城疫病毒卵黃抗體和多糖等成分相結合製成的凍幹製劑，供雞新城疫病的臨床使用，它既針對雞新城疫病毒感染起到治療作用，又激發了機體免疫力及抗病功能，同時本製劑中的多糖組分對卵黃抗體起到強有力的保護作用。文檔編號A61P37/00GK101690813SQ20091018091公開日2010年4月7日申請日期2009年10月21日優先權日2009年10月21日發明者張勇飛,李尚波,武潔梅,胥桂華,苗玉和,趙冰申請人:遼寧益康生物製品有限公司;張勇飛