肉毒桿菌納米乳液的製作方法

2023-05-22 08:25:01 3

肉毒桿菌納米乳液的製作方法
【專利摘要】本文所述的實施方案涉及包含肉毒桿菌毒素的納米乳液。在一個實施方案中，該納米乳液通過高壓微流化製備並包含完全在10至300納米之間的粒度分布。本發明所設想的納米乳液可用於化妝品和肌肉攣縮症狀的醫學治療。例如，肉毒桿菌毒素可以放鬆面部肌肉以使皮膚皺紋變平且較不明顯。此外，本發明設想了可以在個人家中私下自給藥而無需醫務監督的化妝製品。
【專利說明】肉毒桿菌納米乳液
[0001]本申請是申請號200680052147.9、申請日2006年12月I日、發明名稱「肉毒桿菌納米乳液」的中國專利申請的分案申請。
[0002]相關申請
[0003]本申請涉及並依據35USC119(e)要求2005年12月I日提交的USSN60/741, 139(『139申請)的優先權；『139申請的所有內容經此引用併入本文。
【技術領域】
[0004]本發明提供了含有肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物(例如納米乳液)。 【背景技術】
[0005]肉毒桿菌已經在化妝皮膚學中用於治療各種皮膚狀況和失調症。例如，已經使用肉毒桿菌治療皺紋(例如運動過度的面部線條)、頸闊肌帶、肩頸紋(d6collet6 bands)、多汗症和某些神經肌肉失調症。通常，肉毒桿菌毒素通過注入相關部位來遞送(即注入對皺紋或紋路形成負責的相關肌肉群；注入含汗腺的皮膚；等等)。
[0006]不幸地，遞送肉毒桿菌毒素的現有策略產生許多不利影響。例如，不當注射技術會破壞組織和/或會將肉毒桿菌毒素送入非預期和/或不合意的位置。在眼周區域，眼瞼和眉毛下垂是重要的不利影響。還會發生疼痛、血腫、瘀斑和青腫。
[0007]儘管已經開發出可以使某些副作用最小化的技術(例如在注射前將皮膚冷卻以減少疼痛、血腫、瘀斑和青腫)，仍然需要開發出用於遞送肉毒桿菌毒素的改進的系統和/或製劑。

【發明內容】

[0008]本發明提供了含有肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物(例如納米乳液)。這類組合物可用在例如多種化妝和醫療用途中。在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物可用於撫平皺紋。在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物用於治療多汗症。在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物用於治療肌肉攣縮和/或活動過度。本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物的其它用途在本文中作出描述和/或是本領域技術人員顯而易見的。
[0009]在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物通過暴露在高剪切力下來製備；在一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物通過微流化來製備；在一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物通過高壓均化來製備。
[0010]本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物可以通過任何可用的方式給藥，包括但不限於，經皮和注射(例如靜脈內、皮下或肌內注射)。本發明包括下述發現，即某些肉毒桿菌毒素納米粒子組合物可以在不改變或變動皮膚結構的情況下經皮遞送。例如，不需要研磨劑或侵蝕或損害表皮層的試劑來實現本發明的肉毒桿菌毒素的經皮遞送。因此，在許多實施方案中，在不會明顯刺激皮膚的情況下實現肉毒桿菌毒素的經皮遞送。[0011 ] 根據本發明，經皮遞送可以以多種方式實現。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物包含在乳霜中以便通過將乳霜施加到皮膚上來將肉毒桿菌毒素給藥至對象。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物包含在經皮貼膏中以使肉毒桿菌毒素從貼膏給藥至對象。
[0012]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物是含有具有最大和最小直徑的粒子群的乳液，其中最大和最小直徑之差不超過大約600，550，500，450，400，350，300，250，200，150，100，90，80，70，60，50 或更少納米。
[0013]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於大約 600, 550，500，450，400，350，300，250，200，150，130，120，115，110，100，90，80納米或更小的直徑。
[0014]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在大約10至大約600納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子具有在大約10-300，10-200, 10-150, 10-130, 10-120,10-115，10-110，10-100或10-90納米範圍內的直徑。
[0015]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於大約300，250，200，150，130，120或115，110，100或90納米的平均粒度。在一些實施方案中，平均粒度為大約10-300，50-250，60-200，65-150，70-130納米範圍內。在一些實施方案中，平均粒度為大約80-110納米。在一些實施方案中，平均粒度為大約90-100納米。
[0016]在一些實施方案中，本發明的組合物內的大部分粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於指定尺寸或 在指定範圍內的直徑。在一些實施方案中，大部分是指該組合物中的粒子的多於 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%，99.8%, 99.9% 或更多。
[0017]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物基本不含直徑大於大約120納米的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在大約30至大約115納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，該組合物中的大多數粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在此範圍內的直徑；在一些實施方案中，這類組合物基本不含直徑大於大約115納米的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在大約30至大約70納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，這類組合物中的大多數粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在此範圍內的直徑；在一些實施方案中，該組合物基本不含直徑大於大約70納米的粒子。
[0018]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物具有至少兩個截然不同的粒子群。例如，在一些這類實施方案中，本發明的納米粒子組合物中的大部分粒子具有在大約30-70納米範圍內的直徑，而第二群粒子具有在70-120納米範圍內的直徑。在一些這類實施方案中，該組合物不被直徑大於120納米的粒子汙染。
[0019]在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素部分或完全存在於本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物中的納米粒子中；在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素吸附在本發明的肉毒桿菌組合物中的納米粒子表面上；在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素與納米粒子和分散介質之間的界面結合。在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素在納米粒子組合物內的兩個或更多個這些位置中被發現。
[0020]在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌毒素選自A型、B型、C1型、C2型、D型、F型和G型。在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素作為分離的蛋白質存在；在一些實施方案中，肉毒桿菌毒素作為蛋白質絡合物的一部分存在。
[0021 ] 本申請參考各種專利公開，它們均經此引用併入本文。
[0022]定義[0023]磨損:本文所用的術語「磨損」是指改變、分解、去除或破壞皮膚表層的任何方式。在一些實施方案中，磨損是指改變、分解、去除或破壞皮膚表層的機械方式。在一些實施方案中，磨損是指改變、分解、去除或破壞皮膚表層的化學方式。為給出幾個實例，如去角質劑、細粒(例如鎂或鋁粒子)、酸(例如α-羥基酸或羥基酸)、醇之類的試劑可能造成磨損。一般而言，滲透增強劑，如Donovan(例如美國公開2004/009180和2005/175636，和PCT公開W004/06954)和Graham (例如美國專利6，939，852和美國公開2006/093624)等所述的那些預計造成磨損。當然，本領域普通技術人員會認識到，特定試劑可能在以某種濃度存在或與一種或多種其他試劑聯用時造成磨損，但可能在不同的情況下不造成磨損。因此，特定材料是否是「研磨劑」取決於具體情況。磨損可以由本領域普通技術人員例如通過觀察皮膚發紅或刺激和/或顯示角質層的改變、分解、去除或侵蝕的皮膚組織學檢查來評估。
[0024]給藥:本文所用的術語「給藥「是指向對象遞送本發明的納米粒子組合物，不限於任何特定途徑，而是指醫療團體認為適當的任何途徑。例如，本發明考慮了包括但不限於經皮、肌內或皮下的遞送或給藥途徑。在本發明的某些實施方案中，給藥是經皮的。
[0025]生物活性劑:本文所用的短語「生物活性劑」是指在生物系統和/或有機體中具有活性的任何物質。例如，在向有機體給藥時對該有機體具有生物效應的物質被視為生物活性。在具體實施方案中，當蛋白質或多肽是生物活性的時，共享蛋白質或多肽的至少一種生物活性的該蛋白質或多肽的部分通常被稱作「生物活性」部分。肉毒桿菌毒素是根據本發明的生物活性劑。
[0026]肉毒桿菌納米粒子組合物:本文所用的術語「肉毒桿菌納米粒子組合物」是指其中至少一個納米粒子包括肉毒桿菌毒素的任何納米粒子組合物。肉毒桿菌毒素可以存在於納米粒子內，納米粒子表面上和/或限定納米粒子的膠束膜內。
[0027]肉毒桿菌毒素:本文所用的術語「肉毒桿菌毒素」是指由梭形芽孢肉毒桿菌(Clostridium botulinum)製成的任何神經毒素。除非另行指明，該術語包括保持適當活性(例如肌肉鬆弛活性)的這類神經毒素的片段或部分(例如輕鏈和/或重鏈)。本文所用的短語「肉毒桿菌毒素」包括肉毒桿菌毒素血清型A、B、C、D、E、F和G。本文所用的肉毒桿菌毒素還包括肉毒桿菌毒素絡合物(即例如，300、600和900kD絡合物)以及純化的(即例如分離的)肉毒桿菌毒素(即例如大約150kD)。「純化的肉毒桿菌毒素」是指與其它蛋白質(包括用於肉毒桿菌毒素絡合物的蛋白質)分離或基本分離的肉毒桿菌毒素。純化的毒素可以高於95%純度，且優選高於99%純度。本領域普通技術人員會認識到，本發明不限於肉毒桿菌毒素的任何具體來源。例如，根據本發明使用的肉毒桿菌毒素可以從梭形芽孢肉毒桿菌中分離，可以化學合成，可以重組製造(即在宿主細胞或除梭形芽孢肉毒桿菌外的有機體中)，等
坐寸ο[0028]藥妝品:本文所用的術語「藥妝品」是指既有化妝又有藥物性質的任何試劑(例如過氧化苯甲醯或視黃醇)。藥妝品通常可外用以改進絡合或整體物理外觀。藥妝品可作為包括但不限於乳霜、油、泡沫、噴劑、液體等的組合物應用。為給出幾個實例，類胡蘿蔔素、酚化合物和/或水溶性抗氧化劑可充當藥妝品。
[0029]化妝製劑:術語「化妝製劑」在本文中用於表示含有一種或多種具有化妝性質的試劑的局部施用組合物。為給出幾個實例，化妝製劑可以是皮膚軟化劑、營養洗劑型乳液、清潔洗劑、清潔霜、皮膚乳、潤膚洗劑、按摩霜、潤膚霜、化妝基料、唇膏、面膜或面部凝膠、清潔製劑，例如香波、漂洗劑、沐浴液、潤發劑、或肥皂，和/或皮膚病學組合物，例如洗劑、油膏、凝膠、乳霜、貼膏和/或噴劑。
[0030]乳霜:術語「乳霜」是指通常配製成施加到皮膚上的可塗開組合物。乳霜通常含有油和/或脂肪酸基基質。根據本發明配製的乳霜可以含有納米粒子並在局部給藥時能夠基本完全滲透(例如這類納米粒子完全滲透)皮膚。這類乳霜也可以充當併入的材料(例如用於肉毒桿菌毒素)的載體。
[0031]分散介質:本文所用的術語「分散介質」是指液體介質，粒子(例如納米粒子)分散在其中。一般而言，在合併至少兩種不混溶材料時形成分散體。「水包油」分散體是油性粒子分散在水性分散介質中的分散體。「油包水」分散體是水性粒子分散在油性分散介質中的分散體。本領域普通技術人員會認識到，分散體可以由任何兩種不混溶介質形成並且不嚴格限於水性和油性介質的組合。術語「分散介質」因此廣泛適用於任何分散介質，儘管其通常是指「水性」和「油性」類別。
[0032]包封的:術語「包封的」(也稱作「包封」)在本文中用於表示包封體完全被另一材料包圍。為給出一個實例，可以將生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)包封在本發明的乳液的納米粒子內。這種包封可以例如在納米粒子組合物(例如納米乳液)形成過程中,例如在微流化過程中實現。
[0033]與...聯合:本文所用的短語「與...聯合」遞送是指兩種或更多材料的共遞送。特別地，根據本發明，該短語在本文中用於表示生物活性劑與本發明的納米粒子和/或納米粒子組合物一起遞送。當物質或試劑與納米粒子和/或納米粒子組合物結合；被納米粒子包封或完全包圍；與納米粒子界面結合；和/或吸附到納米粒子外表面上時，該物質或試劑與納米粒子聯合遞送。要與納米粒子和/或納米粒子組合物聯合遞送的物質或試劑可以共價連接到納米粒子和/或納米粒子組合物上或不這樣。要與納米粒子和/或納米粒子組合物聯合遞送的物質或試劑可以通過吸附力連接到納米粒子和/或納米粒子組合物上或不這樣。在本發明的許多實施方案中，與納米粒子或納米粒子組合物聯合遞送的生物活性劑是肉毒桿菌毒素。
[0034]微流化:術語「微流化」在本文中通常用於描述已暴露在高剪切力下的組合物。在本發明的一些實施方案中，該組合物通過已知為「微流化器」的儀器或裝置處理。但是，在其最廣泛意義上，該術語包含已藉助任何方式暴露在高剪切力下的任何組合物。例如，可以通過空化或通過高壓均化來施加高剪切力。或者或另外，高剪切力可以通過暴露在高壓，例如大約15，OOOpsi下來施加。在一些實施方案中，這類高壓在大約18,000至大約26, OOOpsi的範圍內；在一些實施方案中，其在大約20，000至25，OOOpsi的範圍內。如文中
所述，高剪切力可以通過穿過如Micro'fluidizer?.處理機(Microfluidics Corporation/MFIC Corporation)的儀器或其他類似設備來施加。Microfluidizer?處理機通過將產
品經由 微通道加速至高速以減小尺寸至納米範圍來提供高壓和所產生的高剪切速率。將流體一分為二並高速(50-300m/S範圍)推過典型尺寸為大約75微米的微通道。在流體離開微通道時，其形成射流，其與來自相對的微通道的射流碰撞。在通道內，流體承受量級高於傳統技術的高剪切(多達107l/s)。射流碰撞造成亞微米級混合。因此，高剪切和衝擊在
MicrofluidizerR_技術中造成粒度降低和微相流的混合。在本發明的一些實施方案中，樣
品通過在高剪切力下暴露少於大約10分鐘來「微流化」。在一些實施方案中，該時段少於大約9，8，7，6，5，4，3，2或I分鐘。在一些實施方案中，該時段在大約1_2分鐘或更低的範圍內；在一些實施方案中，該時段為大約30秒。在本發明的一些實施方案中，樣品通過單次暴露在高剪切力下來「微流化」;這種實施方案在此被稱作「單程」微流化。
[0035]納米乳液:乳液傳統上在本領域中被定義為「由使用或不使用乳化劑分散在通常為液滴大於膠體尺寸的不混溶液體中的液體構成的體系」Medline Plus Online MedicalDictionary, Merriam Webster (2005)。術語〃納米乳液〃在本文中用於表示至少一些液滴(或粒子)具有納米級直徑的乳液。如本領域普通技術人員理解的那樣，納米乳液的特徵在於，液滴或粒子比微乳液液滴或粒子小一千倍。
[0036]納米粒子:本文所用的術語「納米粒子」是指直徑小於1000納米(nm)的任何粒子。在一些實施方案中，納米粒子具有如National Science Foundation定義的小於300納米的直徑。在一些實施方案中，納米粒子具有如the National Institutes of Health定義的小於100納米的直徑。本領域普通技術人員會認識到，本文所用的術語「納米粒子」描述了在分散體或乳液中的分散的相。
[0037]納米粒子組合物:本文所用的術語「納米粒子組合物」是指包括至少一個納米粒子的任何組合物。在一些實施方案中，納米粒子組合物是納米粒子的均勻集合。本文所述的納米粒子組合物通常是乳液或分散體。在一些實施方案中，納米粒子組合物是穩定的。在一些實施方案中，納米粒子組合物包括要與納米粒子聯合遞送的一種或多種生物活性劑。在一些實施方案中，納米粒子組合物是納米乳液。本領域普通技術人員會認識到，納米粒子組合物可以根據任何可用方式製備，包括例如化學或機械方式。在本發明的一些實施方案中，納米粒子組合物通過對樣品施以微流化來製備。在本發明的一些實施方案中，納米粒子組合物在不使用有毒溶劑的情況下製備和/或基本不含有毒溶劑。
[0038]不被汙染:術語「不被汙染」在本文中用於表示納米粒子組合物時與「基本不含」同義，並描述了含有不多於大約50%所列材料的納米粒子組合物。例如，如果納米粒子組合物被說成「基本不含」直徑超出所列範圍的粒子，則該組合物中不多於大約50%的粒子具有超出此範圍的直徑。在一些實施方案中，不多於25%的粒子超出此範圍。在一些實施方案中，不多於 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%或更少的粒子具有超出所列範圍的直徑。
[0039]可藥用:本文所用的術語「可藥用」是指在健全醫療鑑定的範圍內適用於與人類和動物組織接觸而沒有過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症的與合理的益處/風險比率相稱的試劑。
[0040]預混物:本文所用的術語「預混物」是指隨後用於產生納米粒子組合物或根據本發明的組分的任何組合。例如，預混物是經受高剪切力時產生本發明的納米粒子的成分的任何集合。在一些實施方案中，預混物是在經受高剪切力時產生納米粒子組合物，例如均勻納米粒子組合物的成分的集合。預混物通常含有液體分散介質和足以在分散介質內產生納米粒子的其它組分。根據本發明，肉毒桿菌毒素也可以包括在預混物中。該預混物也可以含有一種或多種表面活性劑和/或其它試劑。在一些實施方案中，預混物構成溶液。在預混物包括肉毒桿菌毒素和/或另一生物活性劑的一些具體實施方案中，在對預混物施加高剪切力之前肉毒桿菌毒素(和/或其它生物活性劑)在溶液中。
[0041]不顯療效:本文所用的術語「不顯療效」是指不響應醫療從業者通常觀察到的生物活性劑或藥物組合物遞送後的預期臨床效力的任何對象。
[0042]自給藥:本文所用的術語「自給藥」是指對象不需要醫務監督就能夠向自身給藥組合物的情況。在本發明的一些實施方案中，自給藥可以在診所外進行。為給出一個實例，在本發明的一些實施方案中，對象可以在自己家中施用化妝面霜。
[0043]小分子:一般而言，「小分子」在本領域中被理解為是指尺寸小於大約5千道爾頓(Kd)的有機分子。在一些實施方案中，小分子小於大約3Kd、2Kd或lKd。在一些實施方案中，小分子小於大約800道爾頓(D)，600D, 500D, 400D, 300D, 200D或100D。在一些實施方案中，小分子是非聚合的。在一些實施方案中，小分子不是蛋白質、肽或胺基酸。在一些實施方案中，小分子不是核酸或核苷。在一些實施方案中，小分子不是糖或多糖。
[0044]穩定的:術語「穩定的」在本文中用於納米粒子組合物時，是指該組合物在一段時間內保持其物理結構的一個或多個方面(例如尺寸範圍和/或粒子分布)。在本發明的一些實施方案中，穩定的納米粒子組合物是平均粒度、最大粒度、粒度範圍和/或粒度分布(即高於指定粒度和/或超出指定粒度範圍的粒子的百分比)保持一段時間的粒子組合物。在一些實施方案中，該時段為至少大約I小時；在一些實施方案中，該時段為大約5小時，10小時，一⑴天，一⑴周，兩⑵周，一⑴個月，兩⑵個月，三⑶個月，四⑷個月，五(5)個月，六(6)個月，八(8)個月，十(10)個月，十二(12)個月，二十四(24)個月，或更久。在一些實施方案中，該時段在大約一(I)天至二十四(24)個月，兩(2)周至十二(12)個月，兩(2)個月至五(5)個月等的範圍內。例如，如果納米乳液粒子群經過長時間儲存、溫度變化和/或PH變化且該粒子群中大部分納米粒子保持在指定範圍(例如大約10-120納米)內的直徑，該納米乳液是穩定的。對於一些這樣的粒子群，大部分是多於大約50%，60%，70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9% 或更多。在本發明的一些實施方案中，當納米粒子組合物包含肉毒桿菌毒素和/或至少一種其它生物活性劑時，如果生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)在該組合物中的濃度在指定條件組合下保持指定時長，則該納米粒子組合物被視為穩定。
[0045]對象:本文所用的術語「對象」是指可將本發明的納米粒子組合物遞送或給予其的任何動物。例如，對象可以是人、狗、貓、牛、豬、馬、小鼠、大鼠、沙鼠、倉鼠等等。在本發明的許多實施方案中，對象是人。
[0046]症狀減輕:根據本發明，當特定疾病、失調症或狀況的一個或多個症狀的量級(例如強度)或頻率減輕時 ，「症狀減輕」。為清楚起見，特定症狀發作的延遲被視為降低症狀頻率的一種形式。為給出幾個實例，當所涉狀況是面部皺紋時，當所選區域中一個或多個皺紋的深度和/或嚴重性降低時，該狀況的症狀減輕。當所涉狀況是肌肉攣縮時，當肌肉變得較不緊張且更加鬆弛時，症狀減輕。本發明不僅限於症狀消除的情況。本發明具體考慮了減輕(儘管沒有完全消除)一個或多個症狀(和/或由此「改善」對象的狀況)的治療。
[0047]治療有效量:本文所用的術語「治療有效量」是指在對患有或易患一種疾病、失調症和/或狀況的個體給藥時足以治療該疾病、失調症和/或狀況的量。本領域普通技術人員會認識到，術語「治療有效量」實際上不要求在特定個體中實現成功的治療。相反，治療有效量可以是在施用或遞送給相當大量需要這種治療的對象時提供特定的所需藥理學響應的量。要明確理解的是，特定對象可能實際上對「治療有效量」不顯療效。為給出一個實例，不顯療效的對象可能具有低生物利用率以致不能獲得臨床效力。在一些實施方案中，治療有效量可能是指在一個或多個特定組織中測得的量。
[0048]有毒溶劑:本文所用的術語「有毒溶劑」是指可能改變、分解、去除或破壞動物組織的任何物質。本領域普通技術人員會理解的是，動物組織可以包括活細胞、死細胞、細胞外基質、細胞連接點、生物分子等。為給出幾個實例，有毒溶劑包括二甲亞碸、二甲基乙醯胺、二甲基甲醯胺、氯仿、四甲基甲醯胺、丙酮、乙酸酯和鏈烷。
[0049]治療:本文所用的術語「治療」是指部分或完全減輕、改善、緩和、抑制特定疾病、失調症和/或狀況(例如面部皺紋)的一種或多種症狀或特徵，延緩其發作、降低其嚴重程度和/或降低其發作率的生物活性劑的任何給藥。這類治療可用於沒有表現出相關疾病、失調症和/或狀況的對象和/或僅表現出該疾病、失調症和/或狀況的早期徵兆的對象。或者或另外，這類治療可用於表現出相關疾病、失調症和/或狀況的一種或多種確認徵兆的對象。
[0050]均勻的:術語「均勻的」在本文中用於表示納米粒子組合物時，是指其中單個納米粒子具有指定粒徑尺寸範圍的納米粒子組合物。例如，在一些實施方案中，均勻的納米粒子組合物是其中最小直徑與最大直徑差不超過大約600，550，500, 450，400, 350，300, 250，200，150, 100,90,80, 70, 60, 50或更少納米的粒子組合物。在一些實施方案中，本發明的均勻肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於大約600，550，500,450,400，350，300，250，200，150，130，120，115，110，100，90，80 納米或更小的直徑。在一些實施方案中，本發明的均勻肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在大約10至大約600納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，本發明的均勻肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子具有在大約10-300，10-200, 10-150, 10-130, 10-120, 10-115, I0-110，10-100或10-90納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有低於大約300，250，200, 150，130，120或115，110，100或90納米的平均粒度。在一些實施方案中，平均粒度在大約10-300，50-250，60-200，65-150，70-130納米的範圍內。在一些實施方案中，平均粒度為大約80-110納米。在一些實施方案中，平均粒度為大約90-100納米。在一些實施方案中，本發明的均勻納米粒子組合物內的大部分粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有低於指定尺寸或在指定範圍內的直徑。在一些實施方案中，大部分是指組合物中粒子的多於50%，60%, 70%, 75%,80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9% 或更多。在本發明的一些實施方案中，均勻的納米粒子組合物通過樣品的微流化獲得。
[0051]附圖簡述
[0052]圖1顯示了微流化的肉毒桿菌毒素納米乳液的粒徑分布的一個實施方案。
[0053]圖2顯示了均化的肉毒桿菌毒素微乳液的粒徑分布的一個實施方案。[0054]圖3顯示了在包含肉毒桿菌納米粒子組合物的本發明的組合物的局部給藥之前(A組)和兩周後(B組)後嘗試眉毛的最大升高的患者。
【具體實施方式】
[0055]某些優選實施方案描述
[0056]本發明涉及可用於化妝和醫學治療的肉毒桿菌毒素納米乳液組合物。本發明尤其提供了用於製造包含肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物的系統，並進一步提供了在各種情況中使用這類組合物的方法。在一個實施方案中，醫學治療減緩肌肉攣縮和/或過度活動；在另一實施方案中，醫學治療減緩多汗症。在一個實施方案中，化妝治療撫平皮膚皺紋。在一個實施方案中，肉毒桿菌毒素納米乳液通過微流化製備。肉毒桿菌毒素納米乳液的給藥可以通過包括但不限於肌內注射或經皮局部給藥的方法進行。
[0057]肉毒桿菌毒素生物學
[0058]肉毒桿菌毒素(BTX) BTX在自然中由厭氧的革蘭氏陽性細菌梭形芽孢肉毒桿菌生成並且是有效的多肽神經毒素。最顯著地，BTX在人類和動物中造成被稱作肉毒桿菌中毒的神經麻痺性疾病。BTX可以明顯未被佔用地(untenanted)透過腸道內襯並侵襲外周運動神經元。肉毒桿菌毒素中毒的症狀可以從行走、吞咽和交談困難進行到呼吸肌肉的麻痺，和死亡。
[0059]BTX-A是人類已知的最致命的天然生物試劑。對於市售BTX-A，雌性SwissWebster小鼠(18-20克)中的LD5tl為大約50皮克；該量被定義為I單位BTX-A。在摩爾基礎上，BTX-A比白喉致命大約18億倍，比氰化鈉致命大約6億倍，比眼鏡蛇毒素致命大約3千萬倍，並且比霍亂致命大約一千二百萬倍(Singh等人編輯，"Critical Aspectsof Bacterial Protein Toxins^Natural Toxins II,第 63-84 頁,Plenum Press, NewYork, 1996)。
[0060]肉毒桿菌毒素的不同血清型所影響的動物物種和所引發的麻痺嚴重性和持續時間不同。例如，已經確定，如通過在大鼠中產生的麻痺速度測得，BTX-A比BTX-B更有效500倍。另外，BTX-B經確定在480U/kg的劑量下在靈長動物中無毒，這是BTX-A的靈長動物LD5tl的大約12倍。此外，已知的是，肉毒桿菌毒素B型在肌內注射時具有更短的活性持續時間並且在相同劑量水平下也不如BTX-A有效。
[0061]肉毒桿菌毒素明顯以高親和力結合到類膽鹼能的運動神經元上，移向神經元中並阻斷乙醯膽鹼的釋放。
[0062]肉毒桿菌毒素已經在臨床情況中用於治療某些神經肌肉失調症。特別地，BTX-A已經被美國食品藥品管理局批准用於治療瞼痙攣、斜視和偏側面肌痙攣。非A型肉毒桿菌毒素血清型明顯具有比BTX-A低的效力和/或更短的活性持續時間。外周肌肉內BTX-A的臨床效果通常在注射一周內看出。從BTX-A的單次肌內注射起，症狀緩解的典型持續時間平均為大約3個月。
[0063]儘管所有肉毒桿菌毒素血清型明顯抑制神經遞質乙醯膽鹼在神經肌肉連接點的釋放，它們通過影響不同的神經分泌蛋白質和/或在不同位置裂解這些蛋白質來實現這一點。例如，A和E型肉毒桿菌均裂解25千道爾頓(kD)的突觸相關蛋白(SNAP-25)，但它們靶向該蛋白質內的不同胺基酸序列。B、D、F和G型肉毒桿菌毒素作用於囊泡相關蛋白(VAMP，也稱作小突觸囊泡蛋白(synaptobrevin)),其中各血清型在不同位置裂解蛋白質。最後,Ci型肉毒桿菌毒素已經顯示裂解突觸融合蛋白和SNAP-25。作用機制中的這些差異可能影響各種肉毒桿菌毒素血清型的相對效力和/或作用持續時間。明顯地，已知的是，胰島B細胞的胞質溶膠含有至少SNAP-25 (Biochem Jl; 339 (ptl): 159-65 (1999年4月))和小突觸囊泡蛋白(Mov Disordl995 年 5 月;10(3):376)。
[0064]對於所有七種已知肉毒桿菌毒素血清型，肉毒桿菌毒素蛋白質分子的分子量為大約150kD。有趣地，梭形芽孢桿菌以包含150kD肉毒桿菌毒素蛋白質分子以及相聯非毒素蛋白質的絡合物的形式釋放出肉毒桿菌毒素。因此，梭形芽孢桿菌可以以900kD、500kD和360kD形式產生BTX-A絡合物。B和C1型肉毒桿菌毒素明顯作為僅500kD絡合物產生。D型肉毒桿菌毒素作為300kD和500kD絡合物產生。最後，E和F型肉毒桿菌毒素作為僅大約300kD絡合物產生。
[0065]BTX絡合物(即分子量大於大約150kD的那些組合物)被認為含有非毒素凝血素蛋白質和非毒素和非毒性的非凝血素蛋白質。在攝取毒素時，這兩種非毒素蛋白質(與肉毒桿菌毒素分子一起構成相關神經毒素絡合物)可用於為肉毒桿菌毒素分子提供抗變性穩定性和抗消化酸作用。另外，較大的(大於大約150kD分子量)肉毒桿菌毒素絡合物可能造成肉毒桿菌毒素離開肉毒 桿菌毒素絡合物肌內注射位置的較慢擴散速率。
[0066]BTX蛋白質或BTX絡合物可以根據本發明使用。實際上，本領域普通技術人員會認識到，可以如本文所述使用保持適當活性的BTX蛋白質或絡合物的任何部分或片段。
[0067]體外研究已經表明，肉毒桿菌毒素抑制了鉀陽離子引發的乙醯膽鹼和去甲腎上腺素從腦幹組織的原細胞培養物中釋放出來。另外，已經報導，肉毒桿菌毒素抑制了甘氨酸和穀氨酸鹽在脊髓神經元的原始培養中的誘發釋放，並且在大腦突觸體製品中，肉毒桿菌毒素抑制了神經遞質乙醯膽鹼、多巴胺、去甲腎上腺素、CGRP和穀氨酸鹽各自的釋放。
[0068]如上所述，肉毒桿菌毒素來源對本發明不重要。但是，為了完整性，我們指出，對於某些肉毒桿菌毒素製品，容易獲得各種來源，包括商業來源。
[0069]例如，BTX或BTX絡合物可以通過在發酵器中建立並培養梭形芽孢肉毒桿菌培養物，然後根據已知程序收取並提純發酵後的混合物來獲得。所有肉毒桿菌毒素血清型最初作為無活性單鏈蛋白質合成，其必須被蛋白酶裂解或切斷以變成刺激神經的。產生肉毒桿菌毒素血清型A和G的菌株具有內源蛋白酶，並因此可以主要以其活性形式從細菌培養物中回收血清型A和G。相反，肉毒桿菌毒素血清型Q、D和E通過非蛋白水解菌株合成並因此在從培養物中回收時通常是非活化的。血清型B和F由蛋白水解和非蛋白水解菌株製成並因此可以以活性或非活性形式回收。但是，甚至產生例如，BTX-A血清型的蛋白水解菌株通常僅裂解所產生的一部分毒素。切斷(nicked)與未切斷(unnicked)分子的確切比例可以取決於培養長度和培養物的溫度。因此，一定百分比的例如BTX-A毒素的任何製品可能是非活性的。非活性肉毒桿菌毒素分子在臨床製品中的存在有助於製品的總蛋白質載量，其在一些市售肉毒桿菌毒素製劑中與提高的抗原性相關，而不影響其臨床效力。
[0070]聞質量結晶A型肉毒桿菌毒素可以由具有> 3xl07U/mg, A260/A278小於0.60和在凝膠電泳中明顯的譜帶圖案的特徵的梭形芽孢肉毒桿菌的HallA菌株製造。已知的Schantz方法可用於獲得包括A型的結晶肉毒桿菌毒素(Shantz等人，1992，Microbiol.Rev., 56:80)。[0071]通常，肉毒桿菌毒素絡合物可以通過在合適的培養基中培養梭形芽孢肉毒桿菌(例如A型)來從厭氧發酵中分離和提純。在分離出非毒素蛋白質後，可以使用已知方法獲得純肉毒桿菌毒素，例如具有大約150kD分子量和1-2x108LD5tlUAig或更大的特定效力的純化肉毒桿菌毒素A型；具有大約156kD分子量和l-2X108LD5(lU/mg或更大的特定效力的純化肉毒桿菌毒素B型；具有大約155kD分子量和l-2xl07LD5QU/mg或更大的特定效力的純化肉毒桿菌毒素F型。
[0072]或者或另外，已製成並純化的肉毒桿菌毒素和毒素絡合物可獲自例如，ListBiological Laboratories, Inc.，Campbell，Calif.;the Centre for AppliedMicrobiology and Research, Porton Down，IL K.; Wako (Osaka,日本)以及獲自 SigmaChemicals of St Louis，Mo。
[0073]純肉毒桿菌毒素在作為游離溶液給藥時如此不穩定以致其通常不用於製備藥物組合物。此外，肉毒桿菌毒素絡合物，例如毒素A型絡合物也容易由於表面變性、熱和鹼性條件而變性。在一些情況下，滅活的毒素形成類毒素蛋白質，其可能是免疫原的。所得抗體會使患者對毒素注射不顯療效。
[0074]在一些實施方案中，本發明提供了肉毒桿菌毒素納米粒子組合物(例如納米乳液)，其中肉毒桿菌毒素在與目前給藥的游離溶液相比具有改進的穩定性。也就是說，在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物中存在的肉毒桿菌毒素至少部分被保護以防至少一種不利條件，例如熱、鹼性條件、酸性條件、降解酶、宿主有機體抗體，等等。或者或另外，本發明的納米粒子組合物中存在的肉毒桿菌毒素可能表現出比肉毒桿菌毒素在游離溶液中的在其它方面相當的製品低的表面變性。為給出一個具體實例，本發明的微流化納米乳液內的50皮克肉毒桿菌毒素被保護以防可能造成表面變性的某些不利條件等。
[0075]實際上，本發 明的一個方面包括識別可通過併入納米粒子組合物中來穩定化的肉毒桿菌毒素。本領域普通技術人員容易認識到，根據本發明的這一方面的納米粒子組合物可以通過任何可用的方式製備。
[0076]本發明還提供了肉毒桿菌毒素納米粒子組合物(例如納米乳液)，其中肉毒桿菌毒素與目前給藥的游離溶液相比具有改進的滲透皮膚的能力。例如，包含在本發明的微流化納米乳液中的肉毒桿菌毒素與這類游離溶液相比具有改進的透膜性質。在一個實施方案中，給藥與細胞內積聚之間的最小化時間產生具有改進的效力和降低的副作用的給藥方法。
[0077]此外，如本文所示，本發明提供了肉毒桿菌毒素納米粒子組合物，肉毒桿菌毒素可從中穿過皮膚而不需要改變或分解皮膚結構。例如，生物活性劑的商業可用的經皮給藥技術傳統上要求至少皮膚外層的化學、物理、電或其它分解。這類分解會造成刺激、不合意的醫療副作用和/或不想要的審美後果。本發明提供了在用於皮膚時不會顯著刺激皮膚和/或侵蝕角質層並允許肉毒桿菌毒素滲透皮膚以產生其生物作用的肉毒桿菌毒素納米粒子組合物。
[0078]至於蛋白質，一般而言，可以通過三種空間構型的變化來影響肉毒桿菌毒素(其是細胞內肽酶)的生物活性。因此，熱、各種化學品、表面拉伸和表面乾燥法可以使A型肉毒桿菌毒素去毒。另外，已知的是，將通過已知培養、發酵和提純獲得的毒素絡合物稀釋至用於藥物組合物製劑的低得多的毒素濃度會造成毒素的迅速去毒，除非存在合適的穩定劑。毒素從毫克量稀釋成每毫升含有若干納克的溶液由於在這樣大的稀釋時特定毒性的迅速損失而構成顯著困難。由於毒素可能在含毒素的藥物組合物配製後數月或數年使用，毒素的溶液製品必須與穩定劑，例如白蛋白一起配製。
[0079]如上所述，本發明提供了肉毒桿菌毒素的穩定製品。儘管本發明的製劑本身可能給予額外穩定性，但在本發明的一些實施方案中，考慮使用附加穩定劑。例如，在一些實施方案中，與肉毒桿菌毒素一起使用至少一種附加蛋白質。在一些實施方案中，這種附加蛋白質包含白蛋白。在一些實施方案中，這種附加蛋白質包含一種或多種在肉毒桿菌毒素絡合物中天然發現的蛋白質。實際上，在本發明的一些實施方案中，使用完整的肉毒桿菌毒素絡合物。在一些這樣的實施方案中，也使用白蛋白。因此，在一些實施方案中，本發明提供了含白蛋白的肉毒桿菌微流化納米乳液。
[0080]在本發明的一些實施方案中，所用肉毒桿菌毒素是BOTOX1匕BOTOXk由以無菌真空乾燥形式包裝的純化肉毒桿菌毒素A型絡合物、白蛋白和氯化鈉構成。
[0081]BOTOX -中存在的A型肉毒桿菌毒素由在含有N-Z胺和酵母提取物的培養基
中生長的梭形芽孢肉毒桿菌的Hall菌株的培養物製成。肉毒桿菌毒素A型絡合物通過一系列酸沉澱從培養溶液中提純成由活性高分子量毒素蛋白質和相聯凝血素蛋白質構成的結晶絡合物。結晶絡合物再溶於含鹽水和白蛋白的溶液並無菌過濾(0.2微米)，然後真空乾燥。BOTOX_R_可以在肌內注射之前與無菌的未防腐(non-preserved)鹽水一起重構。 每小瓶BOTOXli以無防腐劑的無菌的真空乾燥形式含有大約100單位⑶的梭狀芽孢肉毒桿菌毒素A型純化神經毒素絡合物、0.5毫克人血清白蛋白和0.9毫克氯化鈉。
[0082]目前，B0TOX(R)通常與0.9%氯化鈉一起重構以通過注射給藥。由於鼓泡或類似
的劇烈攪拌會使Β0Τ0Χ?變性，通常將稀釋劑注入小瓶。作為游離溶液的BOTOX?:被推薦在重構後四小時內給藥。此外，在重構和注射之間，進一步推薦將重構的BOTOXs儲存在冰箱(即例如2°C至8°C之間)中。重構的BOTOXk無色透明並且不含微粒物。
[0083]已經報導，BOTOX '已經在如下臨床情況中使用:
[0084](I)每次肌內注射大約75-125單位的BOTOX? (多肌肉)以治療宮頸肌張力障礙；
[0085](2)每次肌內注射5-10單位的Β0Τ0Χ?以治療眉間紋路(眉溝)(5單位肌內注入降眉間肌，10單位肌內注入各個皺眉肌)；
[0086](3)通過恥骨直腸肌的intrasphincter注射大約30-80單位的Β0Τ0Χ?以治療便秘；
[0087](4)每肌肉大約1-5單位的肌內注射BOTOX*以通過注射上眼瞼的側瞼板前輪匝肌和下眼瞼的側瞼板前輪匝肌來治療瞼痙攣；
[0088](5)為了治療斜視，眼外肌用大約1-5單位的BOTOXk肌內注射，注射量隨要注射的肌肉大小和所需肌肉麻痺程度(即所需屈光度校正量)而變。[0089](6)為了治療中風後的上肢痙攣，如下將BOTOX?肌內注入五個不同的上肢屈肌:
[0090](a)指深屈肌-J.5U 至 30U
[0091](b)指淺屈肌:7.5U 至 30U
[0092](c)尺側腕屈肌:10U至40U
[0093](d)橈側腕屈肌:15U至60U
[0094](e )肱二頭肌:50U 至 200U
[0095]五個指定肌肉各自已經在相同治療期中注射，以使患者在各治療期通過肌內注射接受90U至360U的上肢屈肌BOTOX?;
[0096](7)為了治療偏頭痛，25U的BOTOX?的顱骨膜注射(對稱注入眉間肌、額肌和顳肌)與賦形劑相比已經如通過偏頭痛頻率、最大嚴重程度、相關嘔吐和在25U注射後三個月內的急性藥物應用的降低的測量值所測得的那樣表現出作為偏頭痛預防性療法的顯著益處。
[0097]本發明表明(參見，例如實施例4和5)含有BOTOX#的本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物在併入施加到皮膚上以經皮遞送毒素的乳霜中時，實現與過去注射含有大致相同的BOTOXv'的肉毒桿菌毒素溶液時觀察到的那些相當的生物學結果(即皺紋減少)。
[0098]A型肉毒桿菌毒素的 正面臨床響應已經引起對其它肉毒桿菌毒素血清型的興趣。
已經進行兩種市售A型肉毒桿菌製品(BOTOXiWD DYSPORT?)和B和F型肉毒桿菌
毒素製品(均獲自Wako Chemicals,日本)的研究以確定局部肌肉弱化效力、安全性和抗原潛力。將肉毒桿菌毒素製品注入右腓腸肌頭部(0.5至200.0單位/千克)並使用小鼠腳趾外展評分檢定法(digit abduction scoring assay) (DAS)評估肌肉弱化。由劑量響應曲線計算ED5tl值。
[0099]肌內注射另一些小鼠以測定LD5tl劑量。作為LD5(i/ED5(i計算治療指數。各組小鼠接受BOTOX? (5.0至10.0單位/千克)或肉毒桿菌毒素B型(50.0至400.0單位/千克)的後肢注射，並測試肌肉弱化和增加的水消耗量，後者是口腔乾燥的公認模型。通過在兔子中每月肌內注射(1.5或6.5納克/千克B型肉毒桿菌毒素或0.15納克/千克BOTOX(R))，評估抗原潛力。對於所有血清型，最高肌肉弱化和持續時間是劑量相關的。
[0100]DASED5。值(單位/千克)如下:BOTOXw: 6.7, DYSPORT ': 24.7，B型肉毒杆
菌毒素:27.0至244.0，F型肉毒桿菌毒素:4.3。BOTOX* H有比B型肉毒桿菌毒素或F
型肉毒桿菌毒素長的作用持續時間。治療指數值如下:BOTOX_1;_: 10.5，DYSPORTr:
6.3，B型肉毒桿菌毒素:3.2。在注射B型肉毒桿菌毒素的小鼠中，水消耗量大於注射BOTOXr的小鼠，儘管B型肉毒桿菌毒素在弱化肌肉方面較不有效。在注射四個月後，2/4 (用1.5納克/千克治療)和4/4 (用6.5納克/千克治療)的兔子對B型肉毒桿菌毒素產生抗體。在單獨研究中，0/9的BOTOX?治療的兔子表現出對A型肉毒桿菌毒素的抗體。DAS結果表明A型肉毒桿菌毒素的相對峰效力等於F型肉毒桿菌毒素，且F型肉毒桿菌毒素大於B型肉毒桿菌毒素。對於作用持續時間，A型肉毒桿菌毒素大於B型肉毒桿菌毒素，且B型肉毒桿菌毒素作用持續時間大於F型肉毒桿菌毒素。如治療指數值所示，兩種
市售A型肉毒桿菌毒素製品(BOTOX_K, DYSPORTw )不同。在B型肉毒桿菌毒素後
肢注射後觀察到的增加的水消耗量性能表明，臨床上顯著量的這種血清型進入鼠科動物系統循環。結果也表明，為了實現與A型肉毒桿菌毒素相當的效力，必須提高所檢查的其它血
清型的劑量。但是，提高的劑量可能會損害安全性。此外，在兔子中，B型比BOTOX g
具抗原性，這可能由於為實現B型肉毒桿菌毒素有效劑量而注射的更高蛋白質載量。Eur JNeuro16 (Suppl4):S3-S10(1999)。
[0101]如本文所述，本發明考慮了任何血清型的肉毒桿菌毒素的用途。本領域普通技術人員能夠容易評估特定血清型對特定用途的適當性，並根據本文的教導，能夠製備含有這類肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物。因此，本發明提供了含有任何血清型的肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物，包括僅含肉毒桿菌毒素蛋白質的組合物，和含有一種或其它蛋白質的組合物。在一些實施方案中，這類其它蛋白質包含白蛋白或由白蛋白構成；在一些實施方案中，使用肉毒桿菌毒素絡合物。
[0102]可以根據本發明使用的肉毒桿菌毒素的市售來源包括，但不限於，
BOTOX' DYSPORT r (與人血清白蛋白和乳糖的梭形芽孢肉毒桿菌A型毒
素凝血素絡合物；Ispen L imited, Berkshire U.K.)和 / 或 MY0BL0C_k' (由 B 型
肉毒桿菌毒素、人血清白蛋白、琥珀酸鈉和氯化鈉構成的可注射溶液，pH5.6, ElanPharmaceuticals, Dublin, Ireland)等。
[0103]納米粒子糹目合物
[0104]如本文所述，本發明尤其提供了如下組合物，該納米粒子組合物包括含有肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物。
[0105]一般而言，納米粒子組合物是包括至少一個納米粒子的任何組合物。肉毒桿菌納米粒子組合物是含有肉毒桿菌毒素的納米粒子組合物。肉毒桿菌毒素可以被一個或多個納米粒子包封或完全包圍；與納米粒子界面結合；和/或吸附到一個或多個納米粒子外表面上。肉毒桿菌毒素可以共價連接到納米粒子和/或納米粒子組合物上或不這樣；肉毒桿菌毒素可以通過吸附力連接到納米粒子和/或納米粒子組合物上或不這樣。
[0106]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物具有納米粒子的均勻集合。例如，在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物中納米粒子的最小直徑和最大直徑之差不超過大約 600，550，500，450，400，350，300，250，200，150，100，90，80，70，60，50 或更少納米。
[0107]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於大約 600, 550，500，450，400，350，300，250，200，150，130，120，115，110，100，90，80納米或更小的直徑。
[0108]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有在大約10至大約600納米範圍內的直徑。在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子具有在大約10-300，10-200, 10-150, 10-130, 10-120,10-115，10-110，10-100或10-90納米範圍內的直徑。[0109]在一些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物內的粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於大約300，250，200，150，130，120或115，110，100或90納米的平均粒度。在一些實施方案中，平均粒度為大約10-300，50-250，60-200，65-150，70-130納米。在一些實施方案中，平均粒度為大約80-110納米。在一些實施方案中，平均粒度為大約90-100納米。
[0110]在一些實施方案中，本發明的組合物內的大部分粒子(例如含肉毒桿菌毒素的粒子)具有小於指定尺寸或在指定範圍內的直徑。在一些實施方案中，大部分是指該組合物中的粒子的多於 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%，99.8%, 99.9% 或更多。
[0111]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物基本不含直徑超過120納米的粒子。具體而言，在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物中少於50%的納米粒子具有超過120納米的直徑。在一些實施方案中，少於25%的粒子具有超過120納米的直徑。在一些實施方案中，少於 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%，2%, 1%, 0.5%或更少的粒子具有超過120納米的直徑。此外，在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物中的納米粒子具有在10-120納米範圍內的直徑。
[0112]Z電勢是剪切面上電勢的測量 值。剪切面是將結合到固體表面(例如本發明的納米粒子的表面)上並表現出彈性特性的液體薄層與表現出正常粘性的剩餘液體(例如液體分散介質)分離的虛曲面。在一些實施方案中，本發明的納米粒子具有_50mV至+50mV的Z電勢。在一些實施方案中，本發明的納米粒子具有_25mV至+25mV的Z電勢。在一些實施方案中，本發明的納米粒子具有-1OmV至+IOmV的Z電勢。
[0113]本發明的納米粒子組合物通常是乳液或分散體。在一些實施方案中，組合物是「水包油」分散體(即油性粒子分散在水性分散介質內的分散體)；在一些實施方案中，組合物是「油包水」分散體(即水性粒子分散在油性分散介質內的分散體)。
[0114]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物不需要有毒溶劑。相反，在組合物中引發納米粒子形成的許多傳統策略採用有毒(通常有機)溶劑。在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物不需要聚合物。相反，製備含納米粒子結構的組合物的許多傳統策略需要聚合物。
[0115]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物具有比其它納米粒子組合物更好的組織吸收和/或更好的生物相容性。例如，在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物具有比不均勻的、採用一種或多種有毒(例如有機)溶劑和/或採用一種或多種聚合物的納米粒子組合物更好的組織吸收和/或更好的生物相容性。
[0116]在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物(例如肉毒桿菌納米粒子組合物)是穩定的。在本發明的一些實施方案中，穩定的納米粒子組合物是平均粒度、最大粒度、粒度範圍和/或粒度分布(即高於指定粒度和/或超出指定粒度範圍的粒子的百分比)保持一段時間的粒子。在一些實施方案中，該時段為至少大約I小時；在一些實施方案中，該時段為大約5小時，10小時，一⑴天，一⑴周，兩⑵周，一⑴個月，兩⑵個月，三⑶個月，四(4)個月，五(5)個月，六(6)個月，八(8)個月，十(10)個月，十二(12)個月，二十四
(24)個月，或更久。在一些實施方案中，該時段在大約一(I)天至二十四(24)個月，兩(2)周至十二(12)個月，兩(2)個月至五(5)個月等的範圍內。例如，如果納米乳液粒子群經過長時間儲存、溫度變化和/或PH變化且該粒子群中大部分納米粒子保持在指定範圍(例如大約10-120納米)內的直徑，該納米粒子組合物是穩定的。對於一些這樣的粒子群，大部分是多於大約 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 9
9.9%或更多。在本發明的一些實施方案中，當納米粒子組合物包含肉毒桿菌毒素和/或至少一種其它生物活性劑時，如果生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)在該組合物中的濃度在指定條件組合下保持指定時長，則該納米粒子組合物被視為穩定。
[0117]如本文所述，本發明的納米粒子組合物可用於各種醫療、化妝和營養保健用途中。這類組合物可通過任何可用途徑遞送給對象，包括但不限於，注射、口服、經皮遞送等。在某些實施方案中，組合物通過注射來遞送。在某些實施方案中，組合物經皮遞送。
[0118]應該指出的是，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物可容易地與已描述的其它含肉毒桿菌毒素的組合物相區分。例如，Donovan已經描述了將肉毒桿菌毒素併入脂囊泡以經皮遞送的製品(美國公開2004/0009180)。這類囊泡也要求包含增強劑，例如醇，以促進肉毒桿菌毒素透過皮膚吸收。Donovan也描述了併入傳遞體中的神經毒素，該傳遞體是含有脂質和膜軟化劑的可變形載體(Hofer等人，2000, World J.Surg.,24:1187;和美國專利6，165，SOOXDonovan具體描述了包含肉毒桿菌毒素的磷脂醯膽鹼+膽酸鈉脂質體的製備。
[0119]Suvanprakorn等人也已經描述了脂質體包封的材料在離散的大珠粒中的懸浮液；據說可包封的字面上(literally)數百化合物之一是」BOTOX_K」(美國公開2004/0224012)。所考慮的製造這些多層囊泡脂質體的方法包括凍幹/復水和有機溶液脫水/水性復水。製造脂質體的這些傳統方法預計產生微粒尺寸的囊泡。
[0120]製造納米粒子組合物的方法
[0121]一般而言，本發明的納米粒子組合物(例如肉毒桿菌納米粒子組合物)可以通過任何可用方法製備。在一些實施方案中，納米粒子組合物通過化學方式製備。但是，化學方式通常要求有毒(通常有機)溶劑；在一些實施方案中，納米粒子組合物根據本發明不採用這類溶劑製備。
[0122]在本發明的某些實施方案中，納米粒子組合物通過製備預混物並對該預混物施以高剪切力來製備。本文所用的術語「剪切力」是指與材料平面平行的力，而非與材料平面垂直的力。
[0123]可以使用本領域中已知的任何方法產生高剪切力。在一些實施方案中，使用空化產生高剪切力。根據本發明，機械能(即高剪切力)的使用可以替代或最大限度降低使用昂貴和/或有毒化學溶劑的任何要求；可以提高納米粒子集合的速度，可以提高在組分的特定混合物中產生的納米粒子的收率，和/或可以極大降低製備納米乳液組合物的總成本。此外，在將如生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)的試劑併入本發明的納米粒子組合物的那些實施方案中，高剪切力的使用與形成納米粒子的傳統方法相比可以提高納米粒子的負載能力。在傳統方法中，納米粒子表面內或表面上的試劑載量通常依賴於試劑向納米粒子內部和/或向納米粒子表面的擴散。根據本發明，高剪切力的使用可以實現納米粒子組合物中更小粒子(例如平均)的製造和/或更窄粒度分布。
[0124]在一些實施方 案中，通過暴露在高壓下，例如通過在例如大約15，OOOpsi下的高壓下的連續湍流來實現高剪切力。在一些實施方案中，這類高壓在大約18，000至大約
26,OOOpsi的範圍內；在一些實施方案中，其在大約20，000至25，OOOpsi的範圍內。[0125]在一些實施方案中，高剪切力或高壓可以通過空化或通過高壓均化來施加。
[0126]在一些實施方案中，高剪切力可以通過穿過如Microfluidizer'處理機
(Microfluidics Corporation/MFIC Corporation)的儀器或其他類似設備來施加。
Microiluidizer'處理機通過將產品經由微通道加速至高速以減小尺寸至納米範圍來提
供高壓力和所產生的高剪切速率。將流體一分為二並高速(50-300m/s範圍)推過典型尺寸為大約75微米的微通道。在流體離開微通道時，其形成射流，其與來自相對的微通道的射流碰撞。在通道內，流體承受量級高於傳統技術的高剪切(多達107l/s)。射流碰撞造成亞
微米級混合。因此，高剪切和衝擊在Microfluidize產技術中造成粒度降低和微相流的混
[0127]更通常地，微流化器可以是為單作用增強器泵提供動力的任何設備。增強器泵將液壓增強至所選水平，這又對產物流施以壓力。隨著泵運行通過其壓力衝程，其以恆定壓力驅使產品通過相互作用室。在相互作用室內特別設計了固定幾何結構的微通道，產物流經由該通道加速至高速，產生高剪切和衝擊力，這在高速產物流撞擊自身和撞擊耐磨表面時可產生均勻的納米粒子組合物(例如納米乳液)。
[0128]在增強器泵完成其壓力衝程時，其反向並吸入新的產品量。在吸取衝程結束時，其又反向並在恆定壓力下驅除產品，由此重複該過程。
[0129]在離開相互作用室時，產品流經機載換熱器，其將產品調節至所需溫度。此時，產品可以再循環通過該系統以進一步加工或向外引導到該方法的下一步驟(美國專利4，533，254 ;和 4，908，154)。
[0130]在本發明的一些實施方案中，樣品通過在高剪切力下暴露少於大約10分鐘來「微流化」。在一些實施方案中，該時段少於大約9，8，7，6，5，4，3，2或I分鐘。在一些實施方案中，該時段在大約1-2分鐘或更低的範圍內；在一些實施方案中，該時段為大約30秒。
[0131]在本發明的一些實施方案中，樣品通過單次暴露在高剪切力下來「微流化」;這種實施方案在此被稱作「單程」微流化。
[0132]本發明包括確認對預混物施以高剪切力可以產生納米粒子組合物，並特別可產生均勻的納米粒子組合物。
[0133]一般而言，通過施加高剪切力製備本發明的納米粒子組合物用的預混物預計含有至少兩種不混溶材料，其中之一構成分散介質(即粒子(例如納米粒子)在該液體介質中分散在最終納米粒子組合物中)。「水包油」分散體是油性粒子分散在水性分散介質中的分散體。「油包水」分散體是水性粒子分散在油性分散介質中的分散體。本領域普通技術人員會認識到，分散體可以由任何兩種不混溶介質形成，並且不嚴格限於水性和油性介質的組合。術語「分散介質」因此廣泛適用於任何分散介質，儘管其通常是指「水性」和「油性」類別。
[0134]因此，在本發明的一些實施方案中，預混物含有水性分散介質和以納米粒子形式分散在該分散介質中的油性介質；在本發明的一些實施方案中，預混物含有油性分散介質和以納米粒子形式分散在油性分散介質中的水性介質。
[0135]本領域普通技術人員充分知道可根據本發明用作分散介質或要分散的介質的合適的水性介質。這類水性介質的代表包括,例如,水、鹽水溶液(包括磷酸鹽緩衝鹽水)、注射用水、短鏈醇、5%葡萄糖、林格氏溶液(乳酸鹽化林格氏注射液，乳酸鹽化林格氏+ 5%葡萄糖注射液，醯化林格氏注射液)、Normosol-M, Isolyte E和類似物，及其組合。
[0136]本領域普通技術人員也充分知道可根據本發明用作分散介質或要分散的介質的合適的油性介質。這類油性介質的代表包括，例如，飽和和不飽和杏仁、杏核、鱷梨、巴西棕櫚、佛手柑、黑加侖籽油(black current seed)、琉璃苣、刺檜、甘菊、卡諾拉、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻子、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、海索草、荷荷巴、夏威夷核果、醒目燻衣草、燻衣草、檸檬、山雞椒、澳洲堅果、錦葵、芒果籽、白芒花籽(meadowfoam seed)、紹油、肉豆蘧、橄欖、橙子、羅非魚(orange roughy)、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、S粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、乳木果油、有機娃、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿(tsubaki)、香根草、胡桃、和麥芽油；硬脂酸丁酯；甘油三辛酸酯；甘油三癸酸酯；環狀聚二甲基矽氧烷；癸二酸二乙酯；聚二甲基矽氧烷360 ;肉豆蘧酸異丙酯；礦物油；辛基十二烷醇；油醇；矽油；及其組合。
[0137]除了這兩種不混溶介質外，本發明的預混物可以包括，例如一種或多種生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)和/或一種或多種表面活性劑或乳化劑。合適的表面活性劑或乳化劑包括，但不限於，磷酸甘油酯；磷脂醯膽鹼；二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC) ;二油基磷脂醯乙醇胺(DOPE) ;二油基氧基丙基三乙銨(DOTMA) ;二油醯基磷脂醯膽鹼；膽固醇；膽固醇酯；二醯基甘油；二醯基甘油琥珀酸酯；二磷脂醯甘油(DPPG);己烷癸醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG);聚氧乙烯-9-十二烷基醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸醯胺；三油酸失水山梨糖醇酯(斯盤85)甘膽酸酯；單月桂酸失水山梨糖醇酯(斯盤20);聚山梨酯20 (吐溫-20);聚山梨酯60 (吐溫-60);聚山梨酯65 (吐溫-65);聚山梨酯80 (吐溫-80);聚山梨酯85 (吐溫-85);聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；失水山梨糖醇脂肪酸酯，例如三油酸失水山梨糖醇酯；卵磷脂?』溶血卵磷脂；磷脂醯絲氨酸；磷脂醯肌醇；鞘磷脂；磷脂醯乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；聯十六烷基磷酸酯；二棕櫚醯基磷脂醯甘油；硬脂醯胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕櫚酸乙醯酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蘧酸異丙酯；四丁酚醛?』聚(乙二醇)5000-磷脂醯乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑性質的合成和/或天然洗滌劑；脫氧膽酸鹽；環糊精；離液鹽；離子配對劑；及其組合。表面活性劑組分可以是不同表面活性劑的混合物。這些表面活性劑可以從天然來源中提取和純化，或可以在實驗室中合成製備。在優選實施方案中，表面活性劑可購得。
[0138]在本發明的一些實施方案中，最終納米粒子組合物中存在的所有組分均存在於預混物中並經受高剪切力以產生納米粒子組合物。在本發明的一些實施方案中，最終納米粒子組合物中存在的一種或多種組分不在預混物中或以比最終納米粒子組合物中少的量存在於預混物中。也就是說，在本發明的一些實施方案中，在對預混物施以高剪切力後將一種或多種材料添加到納米粒子組合物中。
[0139]在本發明的某些實施方案中，預混物在施加剪切力之前以溶液形式製備。特別地，對於包括至少一種生物活性劑(例如肉毒桿菌毒素)的納米粒子組合物，通常最好在施加高剪切力之前將生物活性劑溶解在預混物中。由此，在許多實施方案中，生物活性劑可溶解在至少一種介質中(或組合預混物中所用的介質)。在本發明的一些實施方案中，這類溶解要求加熱；在另一些實施方案中，不要求加熱。[0140]在本發明的一些實施方案中，預混物組分可以在施加高剪切力之前集合成粒子。至少一些這類粒子可以是微粒或甚至納米粒子。在一些實施方案中，本發明的納米粒子組合物由預混物製成，其中預混物選自懸浮液或微乳液。但是，在一些實施方案中，在施加高剪切力前，在預混物中不形成粒子結構。
[0141] 在本發明的某些實施方案中，選擇或調節預混物組分的相對量以產生具有所需特性的納米粒子。在一些實施方案中，預混物包含比率為0.5-10的油和表面活性劑。在一些實施方案中，油與表面活性劑的比率為大約0.5:1，1:1，2:1，3:1，4:1，5:1，6:1，7:1，8:1，9:1或10:1。在一些實施方案中，表面活性劑與油的比率為大約0.5:1, 1:1,2:1,3:1,4:1,5:1，6:1，7:1，8:1，9:1或10:1。在一些實施方案中，預混物包含比率為0.5_2的油和表面活性劑。在一些實施方案中，油與表面活性劑的比率為大約0.5:1，1:1或2:1。在一些實施方案中，表面活性劑與油的比率為大約0.5: 1，1:1或2:1。在某些實施方案中，油與表面活性劑的比率為大約1:1。
[0142]在一些實施方案中，預混物中油的百分比為0%_30%。在一些實施方案中，預混物中油的百分比為 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%或30%。在一些實施方案中，油的百分比為大
約8%。在一些實施方案中，油的百分比為大約5%。
[0143]在一些實施方案中，預混物中表面活性劑的百分比為0%_30%。在一些實施方案中，預混物中表面活性劑的百分比為 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%,16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29% 或 30%。在一些實施方案中,表面活性劑的百分比為大約8%。在一些實施方案中,表面活性劑的百分比為大約5%。
[0144]在一些實施方案中，納米粒子組合物不含多於一種油。在一些實施方案中，納米粒子組合物可以包含兩種或更多的油。在一些實施方案中，納米粒子組合物不含多於一種表面活性劑。在一些實施方案中，納米粒子組合物可以包含兩種或更多表面活性劑。
[0145]在一些實施方案中，納米粒子組合物基本由水、油、表面活性劑和肉毒桿菌毒素構成。在一些實施方案中，納米粒子組合物基本由水、油、表面活性劑、至少一種肉毒桿菌毒素和至少一種用於製造和/或保存納米粒子組合物的物質(例如蛋白質、鹽，等等)構成。
[0146]在一些實施方案中，納米粒子組合物由水、油、表面活性劑和肉毒桿菌毒素構成。在一些實施方案中，納米粒子組合物由水、油、表面活性劑、至少一種肉毒桿菌毒素和至少一種用於製造和/或保存納米粒子組合物的物質(例如蛋白質、鹽，等等)構成。
[0147]納米粒子組合物的給藥方法
[0148]本發明提供了為各種用途，包括化妝、營養保健和醫療用途而遞送納米粒子組合物(例如肉毒桿菌納米粒子組合物)的方法。這類納米粒子組合物可能包括一種或多種生物活性劑。在許多實施方案中，納米粒子組合物包括肉毒桿菌毒素。
[0149]在一些實施方案中，本發明考慮了遞送本發明的納米粒子組合物的方法，包括但不限於，經皮、肌內或皮下給藥途徑。這些給藥途徑特別有利於要發揮局部作用的製劑(例如某些肉毒桿菌毒素納米粒子組合物)。但是，製劑成分的隨後組織吸收不總是可預測的。
[0150]在本發明的一些實施方案中，本發明的製劑可以例如使用脂質基載體包封以例如利於進入細胞。但是，脂質基載體效力可能取決於i)脂質組成(即例如分子尺寸和電荷);
ii)組合物和包含的任何生物活性劑或其它實體的結構(例如分子尺寸和PH電離化)；和iii)對象的總體健康狀況。本發明考慮了與包含脂質基載體的均勻微流化納米乳液相關的組合物和方法，由此改進藥妝品(即例如肉毒桿菌毒素)的生物利用率。
[0151]本發明具體提供了用於治療各種失調症、疾病或狀況的肉毒桿菌毒素，特別是肉毒桿菌毒素納米粒子組合物的給藥方法。肉毒桿菌毒素的外周注射(即肌內或皮下)或局部施加的經皮給藥的臨床效果通常在一周內看出。A型肉毒桿菌毒素從單次肌內注射起的症狀緩解(即例如鬆弛肌肉麻痺)的典型持續時間可以為最多四個月或更久；在本發明的肉毒桿菌毒素的經皮給藥後的臨床效果持續時間可以為最多四個月或更久，這取決於各對象和/或本發明的肉毒桿菌納米粒子製品的特定製劑的特性。
[0152]本領域普通技術人員會認識到，肉毒桿菌毒素目前幾乎完全通過注射，特別是通過液體鹽水溶液的注射來給藥，通常由凍幹的製品重構。
[0153]如本文所述，這類製品中的肉毒桿菌毒素尤其容易發生造成蛋白質損失和/或蛋白質活性損失的不穩定性。這類不穩定性被懷疑是蛋白質變性、降解、二聚和/或聚合的結果。已知具有肉毒桿菌穩定化作用的最常見製劑是人白蛋白。最近論述了人源白蛋白的可能的免疫學後果(美國公開2005/0238667)。該公開提出，重組白蛋白、糖基穩定劑和抗氧化胺基酸可能產生與原生白蛋白製品相比具有改進的效力的肉毒桿菌毒素。
[0154]同樣如上文所述BOTOXk'(以無菌真空乾燥形式包裝的純化梭狀芽孢肉毒杆
菌毒素A型絡合物、人血清白蛋白、和氯化鈉)目前使用無防腐劑的無菌普通鹽水(0.9%氯化鈉，注射級)重構以注射。具體而言，標準注射規程包括在適當尺寸的注射器中吸取適當
量的稀釋劑。由於鼓泡或類似的劇烈攪拌使BOTOXv變性，溫和地將稀釋劑注入含指定量凍幹BOTOX?的小瓶中。出於無菌原因，標準注射規程包括在重構後4小時內施用BOTOXw:水溶液。
[0155]儘管與可購得的肉毒桿菌毒素製品相關的問題(包括穩定性問題、無菌性問題等)是公知的，但是僅開發出極少的改進位劑。此外，注射仍然是用於遞送肉毒桿菌毒素的標準方法，儘管侵入技術不受歡迎，患者不適，等等。
[0156]本發明提供了改進的肉毒桿菌毒素組合物(例如肉毒桿菌毒素納米粒子組合物)並進一步提供遞送肉毒桿菌毒素的改進方法。特別地，本發明提供了(通過任何可用途徑)遞送肉毒桿菌納米粒子組合物的方法，並進一步提供了通過非注射途徑遞送肉毒桿菌毒素的方法。
[0157]—般而言，本發明的肉毒桿菌納米乳液組合物可以通過任何可獲得的方式給藥，包括但不限於，腸道外、口服、經皮、經口腔、經眼、經鞘、經直腸等。但是，在某些實施方案中，該組合物通過注射給藥；在一些實施方案中通過皮下注射，在一些實施方案中通過肌內注射，在一些實施方案中通過靜脈注射，等等。在某些實施方案中，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物經皮給藥。
[0158]在某些實施方案中，本發明提供了肉毒桿菌毒素的經皮給藥方法。人皮膚包括真皮和表皮。表皮具有幾層組織，即角質層、透明層、顆粒層(stratum granulosum)、棘層,和基底層(從皮膚外層向內依次識別)。
[0159]角質層構成籠統而言藥品和具體而言假設肉毒桿菌毒素的經皮遞送中的最顯著障礙。角質層通常為約10-15微米厚，並且其由以幾層排列的平坦的角質化細胞(角化細胞)構成。角化細胞之間的細胞間距被脂質結構填充，並可以在物質滲透皮膚中發揮重要作用(Bauerova 等人，2001，European Journal of Drug Metabolism andPharmacokinetics, 26:85)。
[0160]角質層下方的其餘表皮為大約150微米厚。真皮為大約1-2毫米厚並位於表皮下方。真皮受到各種毛細管以及神經元過程的刺激。
[0161]藥物的經皮給藥通常是試圖在沒有與注射和口服相關的不合意後果的情況下提供藥品的替代給藥途徑的研究對象。例如，針通常造成局部疼痛，並且可能使接受注射的患者接觸血液傳染病。口服通常由於患者胃部的極酸環境而承受藥品的差生物利用率。
[0162]已經力圖通過提供非侵入給藥來開發某些藥物的經皮給藥技術以試圖克服這些缺點。為了減輕對患者皮膚的損害，經皮給藥通常是合意的。因此，藥品的經皮給藥可以減輕或消除與注射相關的疼痛，降低血液汙染的可能性，且藥物一經系統併入即改進其生物利用率。
[0163]傳統上，藥品經皮給藥中的嘗試集中於提高角質層的滲透性。一些嘗試包括使用提高分子透過皮膚的滲透性的化學增強劑。一些嘗試包括使用機械裝置以繞過或消除部分角質層。此外，嘗試包括使用超聲或電離子透入法以促進藥物滲透皮膚。在大多數情況下，目標是藥劑，通常小分子透過皮膚，通常以使試劑可以通入真皮中的毛細管床，在此試劑可以系統進入對象以實現治療效果。
[0164]儘管小分子是經皮給藥技術的主要焦點，重要的是指出，大分子，例如多肽，和蛋白質絡合物，看起來也 能夠經皮給藥。大約48kD的促紅細胞生成素也已經藉助超聲成功經皮給藥(Mitragotri 等人，1995，Science, 269:850;和美國專利 5，814，599 和 6，002,961)。
[0165]本發明尤其提供不要求使用研磨劑或其它破壞劑(化學、機械、電、磁等)的肉毒桿菌毒素經皮給藥法。本發明人已經令人驚訝地發現，在沒有可滲透或破壞角質層的進一步步驟的情況下，包含在本發明的納米粒子組合物中的肉毒桿菌毒素有效地經皮遞送。本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物對於此類試劑或步驟的使用，在本發明的所有實施方案中不必排除，但是也並不需要。
[0166]本發明因此提供了通過本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物的局部施用來給藥肉毒桿菌毒素的方法。在一些實施方案中，將本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物直接施加到皮膚上並經表皮層吸收。在一些實施方案中，肉毒桿菌納米粒子組合物可以在不使用化學或機械皮膚滲透增強劑或造成磨損的其它試劑的情況下滲透皮膚表層，包括角質層、皮膚毛孔和/或皮腺。
[0167]本領域普通技術人員會認識到，局部給藥的本發明的組合物可包括化妝製劑，例如皮膚軟化劑、營養洗劑型乳液、清潔洗劑、清潔霜、皮膚乳、潤膚洗劑、按摩霜、潤膚霜、化妝基料、唇膏、面膜或面部凝膠、清潔製劑，例如香波、漂洗劑、沐浴液、潤發劑、或肥皂，或皮膚病學組合物，例如洗劑、油膏、凝膠、乳霜、貼膏或噴劑。
[0168]局部給藥用的本發明的組合物可以配製和/或給藥以使大約10_3U/kg至10U/kg的肉毒桿菌毒素透過患者皮膚。在一些實施方案中，該組合物配製和/或給藥以使大約10_2U/kg至大約lU/kg經皮透過患者皮膚。在一些實施方案中，該組合物配製和/或給藥以使大約IQ-1UAg至大約lU/kg透過患者皮膚。在一些實施方案中，該組合物配製和/或給藥以使大約0.1單位至大約5單位透過患者皮膚到皮下祀位。
[0169]本領域普通技術人員會認識到，單位在本文中是指在生物學上或在生物活性上與肉毒桿菌毒素的商業製造商指定的單位相當的單位。
[0170]根據本發明給藥的肉毒桿菌毒素的治療效果可以持續得與注射溶液的效果一樣長。這類注射溶液的效果可以持續最多大約4個月。此外，可以保留肉毒桿菌毒素以使其緩慢釋放的合成聚合物載體的使用可以延長該效果最多大約5年(美國專利6，312，708)。
[0171]在一個實施方案中，本發明提供了肉毒桿菌毒素的局部製劑，其避免潛在併發症，包括但不限於，全身毒性或肉毒桿菌中毒。在一個實施方案中，在最低的副作用風險下，肉毒桿菌毒素(包括A，B, C，D，E，F或G型)的劑量可以為低至大約I單位至高達大約20，000單位。特定劑量可能隨要治療的狀況和所用的治療方案而變。例如，皮下活動過度肌肉的治療可能要求肉毒桿菌毒素的高的經皮劑量(例如1000單位至20，000單位)。與此相比，神經炎症或活動過度汗腺的治療可能要求肉毒桿菌毒素的相對較小的經皮劑量(例如大約I單位至大約1,000單位)。[0172]本發明的一個實施方案考慮了經皮遞送給人類患者的包含穩定化肉毒桿菌毒素的藥物組合物。肉毒桿菌毒素可以選自A，B, C1, D, E，F和G型肉毒桿菌毒素、分離和/或純化(即大約150kD)的肉毒桿菌毒素，以及原生或重組製成的肉毒桿菌毒素。該組合物可以包含大約I單位至大約20，000單位的肉毒桿菌毒素，且該組合物可以包含足以實現持續I個月至5年的治療效果的肉毒桿菌毒素量。
[0173]在一些實施方案中，本發明提供了能使肉毒桿菌毒素滲透對象皮膚而不會以顯著量滲透血管的肉毒桿菌毒素(例如肉毒桿菌納米粒子組合物)局部製劑。例如，在本發明的一些實施方案中，在施加本發明的局部和/或經皮製品時，藥物組合物中存在的少於大約25%或甚至少於大約5%的肉毒桿菌毒素滲入血管。
[0174]本領域普通技術人員會認識到，實現肉毒桿菌毒素的經皮給藥的本發明的組合物可以包含在如貼膏之類的器具中。
[0175]各種經皮貼膏結構是本領域中已知的；本領域普通技術人員會認識到本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物可以容易地併入多種這樣的結構中。在一些實施方案中，經皮貼膏可以進一步包含多個從施加到皮膚上的貼膏一面上延伸的針頭，其中這些針頭從貼膏上延伸以穿透皮膚角質層。在一些實施方案中，針頭不破裂血管。
[0176]在本發明的一些實施方案中，肉毒桿菌毒素(例如肉毒桿菌納米粒子組合物)可以在貼膏中的儲庫(depot)中提供以致施加到貼膏上的壓力造成將肉毒桿菌毒素導出貼膏(任選透過針頭)並透過角質層。
[0177]在本發明的一些實施方案中，經皮貼膏包括粘合劑。粘性貼膏的一些實例是公知的(例如，參見美國專利 Des.296，006; 6, 010，715; 5，591，767; 5, 008，110; 5，683，712; 5，948，433;和5，965，154)。粘性貼膏通常以具有施加到個人皮膚上的粘性層，用於容納藥劑的儲庫或儲器，和防止藥物漏出儲庫的外表面為特徵。貼膏的外表面通常是非粘性的。
[0178]根據本發明，將神經毒素併入貼膏以使神經毒素保持穩定更長時間。例如，神經毒素可以存在於本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物中。或者或另外，神經毒素可以併入聚合基質中，該基質使神經毒素穩定化並允許神經毒素從基質和貼膏中擴散出。神經毒素也可以併入貼膏的粘性層中以使貼膏一旦施加到皮膚上，神經毒素可以透皮擴散。在一個實施方案中，粘性層可以熱活化，其中大約37°C的溫度使粘合劑緩慢液化，以致神經毒素透皮擴散。粘合劑在低於37°C下儲存時可以保持粘性，並且一旦施加到皮膚上，粘合劑喪失其液化時的粘性。一旦貼膏不再粘貼到皮膚上，毒素的給藥完成。
[0179]本領域普通技術人員會認識到，經皮貼膏是可用於施用本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物的器具的一個實例。為給出一些其它實例，可以使用能夠施加該組合物而不用首先將該組合物施加到手指(這可能造成手指的不合意麻痺)上的器具。合適的器具包括刮刀、藥籤，無針頭的注射器，和粘性貼膏。刮刀或藥籤或類似物的使用可能要求將該器具插入含該組合物的容器。使用注射器可以通過使該注射器充滿組合物來實現。該組合物隨後用刮刀或藥籤局部鋪開，或可以從注射器中推出到個人皮膚上。
[0180]在本發明的許多實施方案中，可能理想的是將肉毒桿菌毒素的遞送僅限於預期遞送區域。在一些實施方案中，這類受限遞送可以通過在能夠將該組合物施加到皮膚上的靶位上而不會將該組合物施加到皮膚的非靶位區域上的施加器具中使用本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物來實現。明確地，為此可以使用經皮貼膏。或者或另外，如果肉毒桿菌毒素要局部施加到僅所選區域，可以覆蓋或預處理其它區域或以其它方式防止其暴露。
[0181]肉毒桿菌毒素的治療用途
[0182]如本文所述，本發明的許多實施方案包括在納米粒子組合物的情況下向對象遞送肉毒桿菌毒素。這類遞送可用於各種情況，特別包括某些化妝和醫療用途。下面更詳細論述某些這樣的用途。
[0183]化妝用途
[0184]肉毒桿菌毒素A (BTXA)已經成為化妝皮膚學中廣泛使用的藥物。在化妝用途中觀察到的BTXA的副作用對患者依從性具有顯著影響。目前，因為BTXA通過注射給藥，這需要受過訓練的人員，且因為用於防止BTXA的副作用的主要工具是專業知識和技術，BTXA由醫療人員和在臨床情況中給藥。正確注射技術的使用是必須的，因為大多數不想要的效果是由不正確的技術引起的。對於醫生選擇最佳劑量、時間和技術，人體解剖知識(即，例如，面部和面外(extrafacial)肌肉)是重要的。
[0185]BTXA的目前給藥程序的最常見副作用是疼痛和血腫。例如，當BTXA溶液通過注射給藥至眼周區域時，眼瞼和眉毛下垂是常見的副作用。也可能在上和下面部和在面外位置發生疼痛、血腫、瘀斑和青腫。其它可能的副作用包括，但不限於，頭疼和可能的與伴隨藥物的相互作用。已經建議通過實施適當的稀釋、儲存和注射技術以及小心排除患者的任何禁忌症來避免大多數不想要的副作用。可以通過在BTXA注射之前和之後冷卻皮膚來防止疼痛、血腫、瘀斑和青腫。上眼瞼下垂可以使用阿可樂定或苯腎上腺素滴眼液(Wollina等人，2005, Am.J.Clin.Dermatol, 6:141)部分校正。然而，目前的策略保留了顯著的副作用。
[0186]相反，本發明提供了以使副作用最小化的方式安全有效地施用肉毒桿菌毒素的方法和組合物。在一個實施方案中，本發明考慮了作為包含納米粒子組合物，例如微流化納米乳液的局部遞送組合物的肉毒桿菌給藥方法。在一個實施方案中，該組合物作為乳霜、油膏、油、泡沫、噴劑或凝膠配製。
[0187]本領域普通技術人員會認識到，本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物可以與多種化妝可接受介質一起配製在化妝製品中，例如液體、乳霜、乳液、凝膠、增稠洗劑或粉劑；它們可以含有水以及任何化妝可接受的溶劑，特別是單醇，例如具有I至8個碳原子的鏈烷醇(例如乙醇、異丙醇、苄醇和苯基乙醇),多醇,例如烷撐二醇(例如甘油、乙二醇和丙二醇),和二醇醚，例如單-、二-和三-乙二醇單烷基醚，例如乙二醇單甲醚和二乙二醇單甲醚，它們單獨或在混合物中使用。這類組分可以例如以總組合物重量的最多高達70重量％的比例存在。
[0188]包括本發明的肉毒桿菌納米粒子組合物的化妝製品可以含有至少一種填料，尤其用以獲得無光澤產品，這是油性皮膚的個體尤其需要的。術語「填料」是指單獨或結合使用的在室溫和大氣壓下為固體的任何粒子，其不與該組合物的各種成分化學反應並且不溶於這些成分，即使使這些成分達到高於室溫的溫度，尤其是達到其軟化點或其熔點。這類惰性填料通常具有至少高於170°C，更好高於200°C的熔點。
[0189]填料可以是吸收劑或非吸收劑，即特別能夠吸收組合物的油以及皮膚分泌的生物物質。在一些實施方案中，填料是微粒並具有0.01至150微米，優選0.5至120微米，更好I至80微米的表觀直徑。表觀直徑相當於元素粒子沿其最小維度(薄層的厚度)內切的圓的直徑。皺紋的治療
[0190]涉及前額、眉間、rhytids和/或眶周區域的面部皺紋是常見的審美問題並且被認為與下方的面部肌肉系統的過度活動相關。例如，眉間皺紋的產生至少部分與下方降眉間肌、皺眉肌和輪匝肌的活動相關。面部紋路被認為是成問題的，因為它們產生變老的外表。在一些情況下，它們也會被誤解為是負面情緒(例如憤怒、焦慮、悲傷)、疲勞或壓力的表現。
[0191]近年來，肉毒桿菌毒素溶液的注射已經成為治療機能亢進面部紋路的最流行療法之一。在注射後，該毒素用於麻痺或弱化面部模擬肌。這顯著減輕或消除皺紋的外觀。Sadick NS., 〃The cosmetic use of botulinum toxin type B in the upper face〃ClinDermatol.22(I):29-33( 2004)。
[0192]肉毒桿菌毒素溶液的最初化妝用途是用於治療前額皺眉紋(Carruthers等人，1992, J.Dermatol.Surg Oncol, 18:17)。也已經指出，將BTX溶液注入頸闊肌使嘴部上提(Brandt等人，1998，Dermatol.Surg., 24:1232)。也已經將BTX溶液注入下巴位置以治療突出頦裙(Carruthers 等人，"Cosmetic Uses of Botulinum A Exotoxin, 〃第 325-48頁,Advances in Dermatology, James 等人編輯,Mosby-Yearbook, Chicago, 1997)。
[0193]本發明提供了用於治療面部皺紋和/或不好看的面部表情(例如由於下方面部肌肉組織的過度活動)的納米粒子組合物。當然，與面部皺紋和/或表情的治療相關的原理和/或組合物同樣可用於由身體其它地方的肌肉活性引起的不合意的紋路或皺紋(例如頸紋等等)。在一些實施方案中，用於治療皺紋的本發明的納米粒子組合物包含一種或多種神經麻痺毒素；在一些實施方案中，這類毒素能夠阻斷面部肌肉活動；在一些實施方案中，這類毒素包含肉毒桿菌毒素(BTX)。在一些實施方案中，本發明考慮將微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於面部皺紋。
[0194]最近已經建議，通過經由反覆注射來長期使用A型肉毒桿菌毒素治療，可以延遲面部皺紋和/或紋路的出現(Binder, 2006, Arch.Facial Plast.Surg., 8:426)。但是,反覆注射對患者而言是疼痛的，並且存在可能引起副作用(例如下垂)的注射非計劃肌肉群的風險。在一些實施方案中，在長時間內將肉毒桿菌納米乳液施加到面部和/或頸部以延遲面部(或頸部)紋路或皺紋的出現。在一些實施方案中，在長期時間內將肉毒桿菌納米乳液以定期間隔施加到面部和/或頸部以延遲面部紋路或皺紋的出現。在一些實施方案中，在多於6個月的時期內，將肉毒桿菌毒素以定期間隔施加到面部和/或頸部以延遲面部紋路或皺紋的出現。在一些實施方案中，在多於I年的時期內，將肉毒桿菌毒素以定期間隔施加到面部和/或頸部以延遲面部紋路或皺紋的出現。在一些實施方案中，在多於5年的時期內，將肉毒桿菌毒素以定期間隔施加到面部和/或頸部以延遲面部紋路或皺紋的出現。在一些實施方案中，在多於10年的時期內，將肉毒桿菌毒素以定期間隔施加到面部和/或頸部以延遲面部紋路或皺紋的出現。
[0195]運動過度面部紋路
[0196]已經在機能亢進面部紋路的處理中評測B型肉毒桿菌毒素(BTX-B)的注射。例如，在皺眉肌、輪匝肌或額肌中用400至800單位BTX-B治療24名患者。可以使用WrinkleImprovement Score (WIS)和 Rated Numeric Kinetic Line Scale (RNKLS)評測面部紋路改進。一個研究報導，在72小時內開始出現效果。對於所有位置，WIS和RNKLS在治療後在統計上更好，該效果持續8周。一般而言，患者在WIS上表現出適度改善(級別2)和在RNKLS 上表現出 2 點改善(Ramirez 等人,2002, Otolaryngol.Head Neck Surg., 126:459)。
[0197]在一些實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用到運動過度的面部紋路上。在一些實施方案中，本發明考慮在皺紋形成之前將肉毒桿菌納米粒子組合物施用到通常產生皺紋的面部區域上。重複這種施用預計可以延遲皺紋的出現和/或減輕可能最終產生的強度或嚴重程度(Binder，2006, Arch.Facila Plast.Surg., 8:426)。
[0198]頸闊肌帶
[0199]頸闊肌是位於剛好在屬於面部肌肉群的淺筋膜下的頸部各側上的寬的薄的肌肉層，其受面部神經支配，並將下唇和嘴角拉向側面和下方並在運動時有效地擴張頸部並上拉其皮膚。
[0200]肉毒桿菌毒素Z的注射已經被報導用於治療下垂的肥大頸闊肌肌肉帶(B卩，通常被稱作衰老頸(aging neck))。基於頸橫行紋、頸闊肌帶和皮膚鬆弛的分級系統(I至IV)可以將變形程度分類並用作肉毒桿菌推薦劑量的指導。例如，II型是指輕度頸橫行紋；薄的輕度頸闊肌鬆弛；和輕度皮膚鬆弛；ΙΠ型是指中度頸橫行紋；厚的中度頸闊肌鬆弛；和中度皮膚鬆弛(Matarasso 等人,1999, Plast.Reconstr.Surg, 103:645)。
[0201]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化毒桿菌毒素納米乳液施用到頸闊肌帶上。
[0202]醫療用途
[0203]神經肌肉失調症
[0204]細菌梭形芽孢肉毒桿菌製成的BTX在以尚不致命劑量給藥時可逆麻痺條紋肌。BTX已經用於治療涉及肌肉痙攣和/或攣縮的許多神經肌肉失調症和症狀，包括各種形式的麻痺、面部攣縮、肌張力障礙、偏側面肌痙攣、震顫、僵直(例如由多發性硬化造成)、眶後肌和各種其它眼科症狀(Carruthers 等人，1996, J Am.Acad.Dermatol, 34:788)。
[0205]面部麻痺
[0206]已經報導，將BTX注入患者面部一側上的肌肉群已用於治療面部聯帶運動和由面部神經麻痺引起的垂直不對稱(Armstrong等人,1996, Clin.0tolaryngol.,21:15)。在後一程序中，與口腔相關的提口角肌、顴大肌、rizorius和降口角肌以及與患者面部正常側上的眼睛相關的各種肌肉均作為一組治療以作用於患者面部的整個垂直對稱性以補償面部未治療側上的神經麻痺的作用。
[0207]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於痙攣面部肌肉。
[0208]瞼痙攣
[0209]響應反覆和節奏性眼瞼肌肉攣縮來診斷瞼痙攣(B卩，也稱作眼瞼痙攣)。在一些情況下，眼瞼可以反覆關閉(或幾乎關閉)和再打開。這種狀況的開始通常由於疲勞、壓力和/或咖啡因。但是，一旦痙攣開始，它們可以斷斷續續持續幾天。
[0210]在眼瞼完全關閉的情況下，更嚴重的攣縮是可能的。眼睛表面(角膜)或眼瞼內的襯膜(結膜)的發炎會引起這種加劇的狀況。這種形式的眼瞼顫搐持續更久，通常非常不舒月艮，並且也會造成眼瞼完全關閉。
[0211]瞼痙攣的症狀包括但不限於，眼瞼(通常上眼瞼)的反覆不受控顫搐或痙攣、光敏感性或視覺模糊。
[0212]在一些實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於眼瞼肌肉。
[0213]腦麻痺
[0214]腦麻痺包括以運動損失或其它神經機能的損失為特徵的一類失調症。這些失調症由胎兒發育過程中或大致出生時出現的腦損傷引起。腦麻痺可以由大腦(腦的最大部分，其與更高的智力、感覺和隨意肌活動相關)損傷引起。
[0215]大腦損傷會在非常不同的區域中造成神經機能損失。CP的典型發現是可能影響單肢、身體一側(疫攣性偏癱)、兩腿(疫攣性雙癱)或兩臂和兩腿(痙攣性四肢癱瘓)的僵直狀態(增加的肌肉緊張)。此外，這些可能是運動的部分或完全損失(麻痺)、感覺異常、和聽力和視力缺陷。說話異常是常見的並可能突發。
[0216]CP患者中的智力機能可能從極聰明、正常到嚴重智力障礙。在2歲之前症狀通常明顯，並在嚴重情況下可能早到3個月時出現。腦麻痺是非進行類型的腦病(腦損傷)和由不會惡化的疾病直接造成的症狀。
[0217]腦麻痺的分類包括痙攣型、運動障礙型、運動失調型和混合型。痙攣型腦麻痺構成大約50%的情況。運動障礙型(指痙病)腦麻痺影響大約20%。其包括異常活動(扭轉、抽搐或其它活動)的發生。運動失調型腦麻痺包括震顫、不穩步態、共濟損失，和異常活動。其影響大約10%。其餘20%被分類成混合型，包括上述症狀的任何組合。
[0218]腦麻痺的症狀包括但不限於，癲癇、肌肉攣縮、吸允或進食困難、不規則呼吸、運動技巧的延遲發育，例如伸手、坐、滾、爬、走、運動發育遲緩、智力遲鈍、說話異常(發音困難)、視力異常、聽力異常、僵直狀態、漸進關節攣縮、有限運動範圍，或釘形牙。
[0219]肉毒桿菌毒素通過減輕畸形、促進機能、改進運動控制和縮短的肌肉的伸長來有效治療腦麻痺和其它張力亢進的兒童。對於病灶性張力亢進的兒童，肉毒桿菌毒素提供了顯著但暫時的可重複變化，其影響復原。研究迅速得出毒素對損傷和機能限制的積極作用。仍要測定肉毒桿菌毒素的長期使用和該毒素在小兒張力亢進失調症患者的整個壽命中起到的作用(Gaebler-Spira 等人,2003, Phys.Med.Rehabil.Clin.N.Am., 14:703)。
[0220]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於表現出張力亢進症狀的患者。在一個實施方案中，張力亢進包括腦麻痺。在一個實施方案中，患者是兒童。
[0221]斜視
[0222]斜視涉及一個眼睛與另一眼睛相比的偏位並且也被稱作交叉眼、內斜視、外斜視、斜眼或角膜白斑。斜視被認為由眼睛之間的協調欠缺引起。因此，眼睛看向不同方向並且不能同時聚焦在單點上。
[0223]在兒童斜視的大多數情況下，原因不明。在多於一半的這些情況下，在出生時或出生後不久存在問題(先天斜視)。當兩個眼睛沒有聚焦在相同圖像上時，大腦可能學會忽視來自一個眼睛的輸入信息。如果使其繼續，被大腦忽視的眼睛不再很好地看見。這種視力損失被稱作弱視，並且通常與斜視相關。
[0224]成人的後天斜視可以由眼眶或腦的損傷引起，包括封閉性腦損傷和中風。糖尿病患者通常具有循環損失，這造成後天麻痺性斜視。由任何原因引起的一個眼睛的視力損失通常造成眼睛逐漸向外轉(外斜視)。由於成人大腦已經針對視力得以開發，在成人斜視的情況下沒有發生與弱視相關的問題，其中大腦忽視來自一個眼睛的輸入信息。
[0225]斜視的症狀包括，但不限於，出現交叉的眼睛，不能對準相同方向的眼睛，不協調的眼睛運動、復視或僅一個眼睛的透視力損失的視力。
[0226]已經報導了在後天內斜視的患者中肉毒桿菌療法的長期結果。在遠景研究中記錄68個患有後天內斜視的兒童(年齡範圍，8-64個月)。在兩個內直肌中注射肉毒桿菌毒素A。在最後注射後，在I和2周；3、6和12個月；和每年評測運動和感覺情況。
[0227]在自最後注射起4.8年的平均追蹤期後，在一次注射的36個兒童(52.9%)中獲得運動成功，在兩次和三次注射後分別升至48 (70.6%)和60 (88.2%)個兒童。48個(70.6%)患者具有至少周邊融合(I類雙眼視(binocularity))和32個(47.1%)具有至少400秒弧的體視銳度(2類雙眼視)。較高的遠視、較不嚴重的弱視和較小的內斜視角度是運動成功的最佳預測值。極低弱視和有利的運動校準與更好的雙眼視結果相關聯。
[0228]肉毒桿菌毒素可能是後天內斜視的有效的長期治療法。其尤其可用於具有高遠視、極低弱視和小的內斜視偏位的兒童(Tejedor等人,2001, InvestigativeOphthalmology and Visual Science,42:2542)。
[0229]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於表現出斜視症狀的患者。在一個實施方案中，患者是兒童。
[0230]肌張力障礙
[0231]肌張力障礙是包括不隨意的緩慢和扭轉運動的醫療狀況。不受控或緩慢的運動是指肌肉緊張的受損(通常在大的肌肉群)，造成頭部、肢翼、軀幹或頸部(即頸部肌張力障礙)的緩慢的不隨意攣縮。肌肉的緩慢彎曲扭轉運動(指痙病)或持續肌肉攣縮(肌張力障礙)可能由許多狀況引起，包括腦麻痺、腦炎，藥物副作用、肝腦病和亨廷頓氏舞蹈病。異常運動可能在睡眠過程中減輕或消失，但其由於情緒壓力而惡化。這些運動可能表現出異常和有時怪異的姿勢。
[0232]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於表現出肌張力障礙症狀的患者。
[0233]前列腺增生[0234]肉毒桿菌毒素注射可能在患有良性前列腺增生的男性中有效。在隨機的安慰劑控制研究中記錄30名患有良性前列腺增生的男性。在基線評測後，各參與者接受4毫升注入前列腺的溶液。對照組中的患者接受鹽水溶液，且治療組中的患者接受200U肉毒桿菌毒素A。通過比較症狀分數、血清前列腺特異性抗原濃度、前列腺體積、排洩後(postvoid)殘留尿量和最高尿流速來評測各組的結果。[0235]在2個月後，治療組中的13名患者和對照組中的3名患者具有主觀症狀緩解(P=0.0007)。在接受肉毒桿菌毒素的患者中，症狀分數與基線值相比降低65%，且血清前列腺特異性抗原濃度從基線降低51%。在接受鹽水的患者中，症狀分數和血清前列腺特異性抗原濃度與基線值和I個月值相比沒有顯著變化。追蹤期平均為19.6+/-3.8個月(Maria等人,2003, Urology62:259)。
[0236]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於表現出前列腺增生症狀的患者。
[0237]多汗症
[0238]多汗症是人過度且不可預測地出汗的醫療狀況。多汗症患者即使在溫度涼爽時和他們靜止時也會出汗。出汗有助於身體保持涼爽並且完全天然。人在溫暖溫度中、在他們運動時或由於使他們緊張、憤怒、窘迫或害怕的情況而更加出汗。
[0239]但是，在沒有這類引發機制的情況下發生過度出汗。多汗症患者似乎具有活動過度的汗腺。不受控的出汗會造成身體和情緒的明顯不適。在過度出汗影響手、腳和腋窩時，其被稱作原發性或病灶性多汗症。原發性多汗症影響2%-3%的人口，而少於40%的具有該狀況的患者尋求醫學建議。在大多數原發性多汗症的情況中，找不到成因。其似乎在家族中出現。如果由於另一醫學狀況而發生出汗，其被稱作繼發性多汗症。出汗可能在全身，或其可以局限於一個區域。造成繼發性多汗症的狀況包括但不限於，肢端肥大症、甲狀腺機能亢進、葡萄糖控制失調症、嗜鉻細胞瘤、類癌瘤症候群、癌症、結核病、感染、絕經、脊髓損傷、中風、帕金森症、心臟病或肺病、藥物濫用或焦慮狀況。多汗症的原發性症狀是潮溼。
[0240]A型肉毒桿菌毒素(BOTOX15)由FDA在2004年批准用於治療嚴重的腋下出汗，被稱作原發性腋下多汗症的狀況。注入腋下的小劑量的純化肉毒桿菌毒素暫時阻斷刺激出汗的神經。副作用包括注射位置疼痛和流感類疼痛。用於手掌出汗的BOTOXw*造成溫和但暫時的虛弱和強烈的疼痛。
[0241]在一個實施方案中，本發明考慮將肉毒桿菌納米粒子組合物，例如微流化肉毒桿菌毒素納米乳液施用於表現出多汗症症狀的患者。
[0242]實施例
[0243]下列實施例僅用於提供本發明考慮的具體實施方案的例證。這些實施例無論如何都不是限制性的。
[0244]實施例1:肉毒桿菌納米乳液製劑
[0245]此實施例構成通過微流化製成的包含肉毒桿菌毒素(即例如，BOTOXv')的納米
乳液的一個實施方案。
[0246]微流化製品如下製造:
[0247]1.將5克大豆油和5克吐溫80混合，按需要加熱(通常不要求)以使該混合物乳化。
[0248]2.將包含在人白蛋白基質(Allergan, Irvine CA)中的100單位的BOTOX」添
加到100毫升去離子水/蒸餾水中並攪拌至均勻混合。
[0249]3.將步驟I製品添加到步驟2製品中並攪拌至均勻混合。
[0250]4.將製品均化I分鐘(參見表1和圖1中的所得粒子分布)。
[0251]5.使用Microfluidizer#處理機進行在24，OOOpsi下的單程微流化程序。
[0252]使用能夠篩選大約0.6納米-6000納米的粒子的Malvern Nano S粒度篩選機評測所得納米乳液的粒度。ΒΟ』Τ?Χ_?<_納米乳液製品具有兩個粒度峰，其具有95.33納米的平均粒度(表2和圖2)。
[0253]表1:均化的BOTOX_￥微乳液的粒度分布
[0254]
【權利要求】
1.包含粒子群的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約300納米的直徑，且其中所述納米乳液包含至少一種肉毒桿菌毒素。
2.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約250納米的直徑範圍。
3.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約200納米的直徑範圍。
4.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約150納米的直徑範圍。
5.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約120納米的直徑範圍。
6.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約100納米的直徑範圍。
7.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子具有大約10至大約50納米的直徑範圍。
8.權利要求1的納米乳液，其 中該粒子群基本不含直徑超過300納米的粒子。
9.權利要求1的納米乳液，其中少於50%的粒子具有超過300納米的直徑。
10.權利要求1的納米乳液，其中少於25%的粒子具有超過300納米的直徑。
11.權利要求1的納米乳液，其中少於10%的粒子具有超過300納米的直徑。
12.權利要求1的納米乳液，其中少於5%的粒子具有超過300納米的直徑。
13.權利要求1的納米乳液，其中少1%的粒子具有超過300納米的直徑。
14.權利要求1的納米乳液，其中該粒子群基本不含直徑超過200納米的粒子。
15.權利要求1的納米乳液，其中少於50%的粒子具有超過200納米的直徑。
16.權利要求1的納米乳液，其中少於25%的粒子具有超過200納米的直徑。
17.權利要求1的納米乳液，其中少於10%的粒子具有超過200納米的直徑。
18.權利要求1的納米乳液，其中少於5%的粒子具有超過200納米的直徑。
19.權利要求1的納米乳液，其中少於1%的粒子具有超過200納米的直徑。
20.權利要求1的納米乳液，其中該粒子群基本不含直徑超過120納米的粒子。
21.權利要求1的納米乳液，其中少於50%的粒子具有超過120納米的直徑。
22.權利要求1的納米乳液，其中少於25%的粒子具有超過120納米的直徑。
23.權利要求1的納米乳液，其中少於10%的粒子具有超過120納米的直徑。
24.權利要求1的納米乳液，其中少於5%的粒子具有超過120納米的直徑。
25.權利要求1的納米乳液，其中少於1%的粒子具有超過120納米的直徑。
26.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約600納米。
27.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約500納米。
28.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約400納米。
29.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約300納米。
30.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約200納米。
31.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約100納米。
32.權利要求1的納米乳液，其中最小粒徑與最大粒徑之差不超過大約50納米。
33.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有300納米的平均直徑。
34.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有200納米的平均直徑。
35.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有150納米的平均直徑。
36.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有100納米的平均直徑。
37.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有75納米的平均直徑。
38.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有50納米的平均直徑。
39.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有100-300納米的平均直徑。
40.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有50-250納米的平均直徑。
41.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有60-200納米的平均直徑。
42.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有65-150納米的平均直徑。
43.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有70-130納米的平均直徑。
44.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有80-110納米的平均直徑。
45.權利要求1的納米乳液，其中粒子具有90-100納米的平均直徑。
46.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液基本不含毒性溶劑。
47.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含少於50%的毒性溶劑。
48.權利要求1的納 米乳液，其中納米乳液包含少於25%的毒性溶劑。
49.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含少於10%的毒性溶劑。
50.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含少於5%的毒性溶劑。
51.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含少於1%的毒性溶劑。
52.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液是穩定的。
53.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少I天。
54.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少2周。
55.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少2個月。
56.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少5個月。
57.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少12個月。
58.權利要求1的納米乳液，其中大部分粒子穩定至少24個月。
59.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過暴露在高剪切力下來產生。
60.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高剪切力下暴露少於10分鐘來產生。
61.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高剪切力下暴露少於2分鐘來產生。
62.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高剪切力下暴露少於I分鐘來產生。
63.權利要求1的納米乳液,其中納米乳液通過在高剪切力下暴露少於30秒來產生。
64.權利要求1的納米乳液,其中納米乳液通過暴露在高於3，OOOpsi的壓力下來產生。
65.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過暴露在高於10，OOOpsi的壓力下來產生。
66.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過暴露在高於18，OOOpsi的壓力下來產生。
67.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過暴露在高於24，OOOpsi的壓力下來產生。
68.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過微流化產生。
69.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高於3，OOOpsi的壓力下微流化來產生。
70.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高於10，OOOpsi的壓力下微流化來產生。
71.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高於18，OOOpsi的壓力下微流化來產生。
72.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過在高於24，OOOpsi的壓力下微流化來產生。
73.權利要求68-72任一項的納米乳液，其中微流化是單程微流化。
74.權利要求1的納米乳液,其中納米乳液通過空化來產生。
75.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液通過高壓均化來產生。
76.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素包封在粒子內。
77.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素吸附在粒子表面上。
78.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素與粒子界面結合。
79.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素選自A型、B型、C1型、C2型、D型、F型和G型。
80.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素是A型肉毒桿菌毒素。
81.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素是肉毒桿菌毒素絡合物。
82.權利要求81的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素絡合物包含非毒素凝血素蛋白質和非毒性非凝血素蛋白質。
83.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素包含在白蛋白基質內。
84.權利要求83的納米乳液，其中白蛋白是人白蛋白。
85.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素是純化的肉毒桿菌毒素蛋白質或其片段。
86.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素與其它蛋白質分離或基本分離。
87.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素與非毒素蛋白質分離或基本分離。
88.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素與梭形芽孢肉毒桿菌分離。
89.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素由化學合成。
90.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素經重組製造。
91.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液可以滲透皮膚而不改變或變動皮膚。
92.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液可以在不使用皮膚滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚。
93.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液可以在不使用皮膚滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚表層。
94.權利要求93的納米乳液，其中皮膚表層是角質層的表面。
95.權利要求93的納米乳液，其中皮膚表層包括皮膚毛孔。
96.權利要求93的納米乳液，其中皮膚表層包括皮腺。
97.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液可以在不使用化學滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚。
98.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液可以在不使用機械滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚。
99.權利要求1的納米乳液，其中粒子可以滲透皮膚而不改變或變動皮膚。
100.權利要求1的納米乳液，其中粒子可以在不使用皮膚滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚。
101.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素可以滲透皮膚而不改變或變動皮膚。
102.權利要求1的納米乳液，其中肉毒桿菌毒素可以在不使用皮膚滲透增強劑或研磨劑的情況下滲透皮膚。
103.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含油。
104.權利要求103的納米乳液，其中油選自杏仁、杏核、鱷梨、巴西棕櫚、佛手柑、黑加侖籽油、琉璃苣、刺檜、甘菊、卡諾拉、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻子、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、海索草、肉豆蘧酸異丙酯、荷荷巴、夏威夷核果、醒目燻衣草、燻衣草、檸檬、山雞椒、澳洲堅果、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂油、肉豆蘧、橄欖、橙子、羅非魚、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、乳木果油、有機娃、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿、香根草、胡桃、和麥芽油及其組合。
105.權利要求103的納米乳液，其中油是大豆油。
106.權利要求103的納米乳液，其中油選自硬脂酸丁酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、環狀聚二甲基矽氧烷、癸二酸二乙酯、聚二甲基矽氧烷360、肉豆蘧酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、矽油；及其組合。
107.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液不含多於一種的油。
108.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含表面活性劑。
109.權利要求108的納米乳液，其中表面活性劑是非離子型洗滌劑。
110.權利要求108的納米乳液，其中表面活性劑選自磷酸甘油酯；磷脂醯膽鹼；二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC) ;二油基磷脂醯乙醇胺(DOPE) ;二油基氧基丙基三乙銨(DOTMA) ;二油醯基磷脂醯膽鹼；膽固醇；膽固醇酯；二醯基甘油；二醯基甘油琥珀酸酯；二磷脂醯甘油(DPPG);己烷癸醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG);聚氧乙烯-9-十二烷基醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸醯胺；三油酸失水山梨糖醇酯(斯盤85)甘膽酸酯；單月桂酸失水山梨糖醇酯(斯盤20);聚山梨酯20 (吐溫-20);聚山梨酯60 (吐溫-60);聚山梨酯65 (吐溫-65);聚山梨酯80 (吐溫-80);聚山梨酯85(吐溫-85);聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；失水山梨糖醇脂肪酸酯，例如三油酸失水山梨糖醇酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂醯絲氨酸；磷脂醯肌醇；鞘磷脂；磷脂醯乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；聯十六烷基磷酸酯；二棕櫚醯基磷脂醯甘油；硬脂醯胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕櫚酸乙醯酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蘧酸異丙酯；四丁酚醛；聚(乙二醇)5000-磷脂醯乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑性質的合成和/或天然洗滌劑；脫氧膽酸鹽；環糊精；離液鹽；離子配對劑；及其組合。
111.權利要求108的納米乳液，其中表面活性劑是吐溫80。
112.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液不含超過一種的表面活性劑。
113.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含油和表面活性劑。
114.權利要求113的納米乳液，其中油和表面活性劑以0.5-2.0的比率存在。
115.權利要求113的納米乳液，其中油和表面活性劑以0.5-1.5的比率存在。
116.權利要求113的納米乳液，其中油和表面活性劑以0.5-1.0的比率存在。
117.權利要求113的納米乳液，其中油和表面活性劑以1.0-2.0的比率存在。
118.權利要求113的納米乳液，其中油和表面活性劑以1.5-2.0的比率存在。
119.權利要求113的納米乳液，其中油在納米乳液中的百分比為1%_30%。
120.權利要求113的納米乳液，其中油在納米乳液中的百分比為1%_20%。
121.權利要求113的納米乳液，其中油在納米乳液中的百分比為1%_10%。
122.權利要求113的納米乳液，其中油在納米乳液中的百分比為大約8%。
123.權利要求113的納米乳液，其中油在納米乳液中的百分比為大約5%。
124.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑在納米乳液中的百分比為1%_30%的範圍。
125.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑在納米乳液中的百分比為1%_20%的範圍。
126.權利要求113的納米乳液， 其中表面活性劑在納米乳液中的百分比為1%_10%的範圍。
127.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑在納米乳液中的百分比為大約8%。
128.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑在納米乳液中的百分比為大約5%。
129.權利要求113的納米乳液，其中油選自杏仁、杏核、鱷梨、巴西棕櫚、佛手柑、黑加侖籽油、琉璃苣、刺檜、甘菊、卡諾拉、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻子、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、海索草、肉豆蘧酸異丙酯、荷荷巴、夏威夷核果、醒目燻衣草、燻衣草、檸檬、山雞椒、澳洲堅果、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂油、肉豆蘧、橄欖、橙子、羅非魚、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、乳木果油、有機娃、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿、香根草、胡桃、和麥芽油及其組合。
130.權利要求113的納米乳液，其中油是大豆油。
131.權利要求113的納米乳液，其中油選自硬脂酸丁酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、環狀聚二甲基矽氧烷、癸二酸二乙酯、聚二甲基矽氧烷360、肉豆蘧酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、矽油；及其組合。
132.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑是非離子型洗滌劑。
133.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑選自磷酸甘油酯；磷脂醯膽鹼；二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC) ;二油基磷脂醯乙醇胺(DOPE) ;二油基氧基丙基三乙銨(DOTMA) ;二油醯基磷脂醯膽鹼；膽固醇；膽固醇酯；二醯基甘油；二醯基甘油琥珀酸酯；二磷脂醯甘油(DPPG);己烷癸醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG);聚氧乙烯-9-十二烷基醚；表面活性脂肪酸，例如棕櫚酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸單甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸醯胺；三油酸失水山梨糖醇酯(斯盤85)甘膽酸酯；單月桂酸失水山梨糖醇酯(斯盤20);聚山梨酯20 (吐溫-20);聚山梨酯60 (吐溫-60);聚山梨酯65 (吐溫-65);聚山梨酯80 (吐溫-80);聚山梨酯85(吐溫-85);聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；失水山梨糖醇脂肪酸酯，例如三油酸失水山梨糖醇酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂醯絲氨酸；磷脂醯肌醇；鞘磷脂；磷脂醯乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；聯十六烷基磷酸酯；二棕櫚醯基磷脂醯甘油；硬脂醯胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕櫚酸乙醯酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷基酯；肉豆蘧酸異丙酯；四丁酚醛?』聚(乙二醇)5000-磷脂醯乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑性質的合成和/或天然洗滌劑；脫氧膽酸鹽；環糊精；離液鹽；離子配對劑；及其組合。
134.權利要求113的納米乳液，其中表面活性劑是吐溫80。
135.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含分散在水性分散介質內的油性粒子。
136.權利要求135的納米乳液，其中水性分散介質選自水、鹽水溶液、磷酸鹽緩衝鹽水、短鏈醇、5%葡萄糖、林格氏溶液、乳酸鹽化林格氏注射液、乳酸鹽化林格氏+ 5%葡萄糖注射液、醯化林格氏注射液、Normosol-M、Isolyte E,及其組合。
137.權利要求135的納米乳液，其中水性分散介質是水。
138.權利要求135的納米乳液，其中油性粒子包含選自杏仁、杏核、鱷梨、巴西棕櫚、佛手柑、黑加侖籽油、琉璃苣、刺檜、甘菊、卡諾拉、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻子、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、海索草、肉豆蘧酸異丙酯、荷荷巴、夏威夷核果、醒目燻衣草、燻衣草、檸檬、山雞椒、澳洲堅果、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂油、肉豆蘧、橄欖、橙子、羅非魚、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、乳木果油、有機娃、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿、香根草、胡桃或麥芽油的油。
139.權利要求135的納米乳液，其中油性粒子包含大豆油。
140.權利要求135的納米乳液，其中油性粒子包含選自硬脂酸丁酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、環狀聚二甲基矽氧烷、癸二酸二乙酯；聚二甲基矽氧烷360、肉豆蘧酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、矽油及其組合的油。
141.權利要求1的納米乳液，其中納米乳液包含分散在油性分散介質中的水性粒子。
142.權利要求141的納米乳液，其中水性粒子包含選自水、鹽水溶液、磷酸鹽緩衝鹽水、短鏈醇、5%葡萄糖、林格氏溶液、乳酸鹽化林格氏注射液、乳酸鹽化林格氏+ 5%葡萄糖注射液、醯化林格氏注射液或Normosol-M、Isolyte E的水性物質。
143.權利要求141的納米乳液，其中水性粒子包含水。
144.權利要求141的納米乳液，其中油性分散介質選自杏仁、杏核、鱷梨、巴西棕櫚、佛手柑、黑加侖籽油、琉璃苣、刺檜、甘菊、卡諾拉、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻子、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、海索草、肉豆蘧酸異丙酯、荷荷巴、夏威夷核果、醒目燻衣草、燻衣草、檸檬、山雞椒、澳洲堅果、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂油、肉豆蘧、橄欖、橙子、羅非魚、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、乳木果油、有機娃、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿、香根草、胡桃和麥芽油，及其組合。
145.權利要求141的納米乳液，其中油性分散介質是大豆油。
146.權利要求141的納米乳液，其中油選自硬脂酸丁酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯、環狀聚二甲基矽氧烷、癸二酸二乙酯；聚二甲基矽氧烷360、肉豆蘧酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、矽油及其組合。
147.包含直徑為大約10至大約300納米的粒子群的納米乳液，其中所述納米乳液包含至少一種肉毒桿菌毒素，且其中該肉毒桿菌毒素是包含與非毒素蛋白質結合的肉毒桿菌毒素的絡合物的一部分。
148.包含直徑為大約10至大約300納米的粒子群的納米乳液，其中該納米乳液通過暴露在高剪切力下來產生；其中該納米乳液包含至少一種肉毒桿菌毒素、至少一種油、和至少一種非離子型洗滌劑；且其中肉毒桿菌毒素包含在人白蛋白基質內。
149.納米乳液，包含: 直徑為大約10至大約300納米的粒子群； 至少一種肉毒桿菌毒素； 至少一種油；和 不超過一種表面活性劑； 其中該納米乳液通過暴露在高剪切力下來產生。
150.包含權利要求1、21、31或41任一納米乳液的藥物組合物。
151.權利要求150的組合物，其中該組合物選自乳霜、洗劑、凝膠、油膏、噴劑、粉劑、潤膚劑及其組合。
152.權利要求150的組合物，其中該組合物是乳霜。
153.將肉毒桿菌毒素經皮給藥至對象的方法，包括下列步驟: Ca)提供包含肉毒桿菌毒素的組合物；和 (b)將該組合物施用於對象皮膚。
154.權利要求153的方法，其中該組合物使用粘性貼膏經皮給藥。
155.權利要求153的方法，其中該組合物使用抹刀經皮給藥。
156.權利要求153的方法，其中該組合物使用藥籤經皮給藥。
157.權利要求153的方法，其中該組合物使用不帶針頭的注射器經皮給藥。
158.權利要求153的方法，其中該組合物使用戴手套的手指經皮給藥。
159.權利要求153的方法，其中該組合物使用未受保護的手指經皮給藥。
160.權利要求153的方法，其中該組合物使用能夠將組合物施加到皮膚上的靶位而不將組合物施加到皮膚的非靶位的裝置來經皮給藥。
161.權利要求153的方法，其中所有肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
162.權利要求153的方法，其中至少99%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
163.權利要求153的方法，其中至少95%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
164.權利要求153的方法，其中至少90%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
165.權利要求153的方法，其中至少75%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
166.權利要求153的方法，其中至少50%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
167.權利要求153的方法，其中至少25%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
168.權利要求153的方法，其中至少10%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
169.權利要求153的方法，其中至少1%的肉毒桿菌毒素滲透皮膚。
170.權利要求153的方法，其中該組合物被給藥以治療皺紋、面部紋路和/或頸紋。
171.權利要求170的方法，其中皺紋、面部紋路和/或頸紋選自運動過度的面部紋路、面部皺紋、頸闊肌帶、肩頸紋及其組合。
172.權利要求171的方法，其中面部皺紋涉及前額區域、眉間區域、額肌區域、顳肌區域、rhytids區域或眼眶周區域。
173.權利要求153的方法，其中該組合物被給藥以治療多汗症。
174.將肉毒桿菌毒素經皮給藥至對象的方法，包括下列步驟 (a)提供: (i )對象；(ii)包含權利要求1、21、31或41任一項的納米乳液的組合物；和 (b)將該組合物施用於對象皮膚。
175.治療皺紋、面部紋路和/或頸紋的方法，包括下列步驟: (a)提供: (i)表現出皺紋、面部紋路和/或頸紋症狀的對象； (ii)包含權利要求1、21、31或41任一項的納米乳液的組合物；和 (b)將該組合物施用於對象皮膚以便減輕症狀。
176.延遲皺紋、面部紋路和/或頸紋的出現的方法，包括下列步驟: (a)提供: (i)沒有表現出皺紋、面部紋路和/或頸紋症狀的對象； (ii)包含權利要求1、21、31或41任一項的納米乳液的組合物；和 (b)將該組合物施用於對象皮膚以便延遲症狀出現。
177.製造納米乳液的方法，包括下列步驟: (a)提供預混物，其包含: ⑴油； (ii)表面活性劑；和 (iii)水相；和 (b)在獲得權利要求1、21、31或41任一項的納米粒子組合物的條件下，對預混物施以高剪切力或高壓均化一段時間。
178.權利要求177的方法，其中該預混物包含肉毒桿菌毒素。
179.製造納米乳液的方法，包括下列步驟: (a)提供預混物，其包含: ⑴油； (ii)表面活性劑；和 (iii)水相； (b)形成包含預混物的溶液；和 (c)在獲得權利要求1、21、31或41任一項的納米粒子組合物的條件下，對預混物施以高剪切力或高壓均化一段時間。
180.製造納米乳液的方法，包括下列步驟: (a)提供預混物，其包含: (iv)油； (V)表面活性劑； (vi)水相；和 (vii)肉毒桿菌毒素； (b)形成包含預混物的溶液；和 (c)在獲得權利要求1、21、31或41任一項的納米粒子組合物的條件下，對該溶液施以高剪切力或高壓均化一段時間； 其中油和表面活性劑以0.5-2.0 (按重量計)的比率存在；且其中通過微流化產生高剪切力。
【文檔編號】B82Y5/00GK103919690SQ201410072019
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2006年12月1日 優先權日:2005年12月1日
【發明者】J.埃德爾森, R.尼科洛西 申請人:麻薩諸塞州洛厄爾大學