一種治療胃脘痛的中藥複方製劑的質量控制方法

2023-07-27 03:53:31

專利名稱：一種治療胃脘痛的中藥複方製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥複方製劑的質量控制方法，特別是涉及一種治療胃脘痛的中藥 複方製劑的質量控制方法。
技術背景中藥複方製劑由於所含組分複雜，而且不同成分之間會互相影響，很難準確地對終 產品的質量進行控制，現有方法往往存在結果不穩定、不精確、靈敏度低等問題，進而 影響產品的質量。近年來由於延胡索臨床用藥量不斷增加，國內外市場需求量持續加太,加之延胡索 本身產量不高，市場上有許多混雜品及偽劣品，如夏天無一一罌粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens (Thunb. ) Pers.的乾燥塊莖；齒瓣延胡索——罌粟科植物齒瓣 延胡索C.turschaninovii Bess的乾燥塊莖等等，均含延胡索乙素，且顯微特徵接近， 但現有鑑別方法專屬性不夠強。肉桂甘溫助陽以補虛，辛熱散寒以止痛。由於肉桂俗名桂皮，使用中常見誤將調味 用的桂庫做肉桂藥用，兩者均含有桂皮醛，顯微特徵接近，且外觀相近，極易混淆。肉 桂為樟嵙植物肉桂Cinnamom咖cassia Presl的乾燥樹皮；桂皮為同屬植物天竺桂 C. japonicumSieb、陰香C. chingii Metc.等的樹皮，不做藥用，但現有鑑別方法專屬性 不夠強。因此有必要尋找專屬性強、色譜特徵明顯、陰性對照無幹擾、靈敏度高的可行 的鑑別方法。 發明內容本發明目的在於提供一種治療胃脘痛的中藥複方製劑的質量控制方法。 本發明目的是通過如下技術方案實現的。本發明所述的中藥複方製劑是由如下重量份的原料藥組成肉桂85-115重量份 延胡索65-85重量份牡蠣65-85重量份 小茴香30-45重量份砂仁20-30重量份 高良姜10-15重量份 白芍120-160重量份炙甘草85-115重量份。本發明中藥複方製劑原料藥優選如下重量份-肉桂100重量份 延胡索75重量份 牡蠣75重量份小茴香37. 5重量份 砂仁25重量份 髙良姜12. 5重量份白芍140重量份 炎甘草100重量份。取上述原料藥，按常規工藝，加入常規輔料製備成臨床可接受的任何一種劑型，如:散劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、或緩釋製劑、控釋製劑等。本發明中藥複方片劑的製備方法為以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮 成稠膏；其餘肉桂等六味粉碎成細粉，與上述稠膏混勻，乾燥，粉碎成細粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓製成片劑。每片重0.3g、 0.6g。 口服， 一次1.2g，一日3次， 日服用劑量3. 6g。本發明中藥複方不同製劑的日服用劑量或使用劑量是確定的，不同製劑的日服用劑 量或使用劑量中含相當生藥材量相同。本發明質量控制方法即以日用劑量為單位來稱取 檢測製劑。本發明所述中藥複方製劑的質量控制方法包括如下鑑別方法中的一種或幾種-A. 取本發明中藥複方製劑日用劑量的25/18，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml， 浸漬1小時，時時振搖，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液； 另取延胡索對照藥材0.62g，同法製成對照藥材溶液；再取延胡索乙素對照品，加乙醇制 成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗， 吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10ul、對照品溶液2ul，分別點於同一矽膠G薄層 板上，以體積比為2: 1.5—2的60 90。C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾， 置碘蒸氣中燻，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜 相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；B. 取本發明中藥複方製劑日用劑量的25/18,研細，加60 9(TC石油醚30ml，冷浸 l小時，時時振搖，濾過，濾液蒸至lml，作為供試品溶液；另取肉桂對照藥材0.85g， 同法製成對照藥材溶液；再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含lul的溶液，作為對 照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶 液各10ul、對照品溶液5nl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為15—20: 3 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液； 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜 相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點；C. 取本發明中藥複方製劑日用劑量的10/3，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時 時振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml 使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml溶解，離心，取上清液置於已處理好的重量規格為360mg的SEP-PAKCw小柱上， 用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml,作為供試品溶液；另取甘草對照藥材 0.5g，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供 試品溶液10ul、對照藥材溶液3ul，分別點於同一矽膠GF^薄層板上，以體積比為40 一50: 3—5: 12—20: 8 —12的正丁醇-濃氨水(即"濃氨溶液")-水-乙醇為展開劑，展 開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的 位置上，顯相同顏色的斑點。上述A鑑別方法優選體積比為2: 1.7的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑；B鑑 別方法優選體積比為17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開時溼度優先控制 在45% 65%範圍內；C鑑別方法優選體積比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇 為展開劑，展開時溫度優選20—30。C。所述鑑別方法A或B中矽膠G薄層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G為固定相，以 0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑製成規格100X200咖，厚度0. 25 0. 30,的手 鋪矽膠G薄層板；鑑別方法C中矽膠GF254薄層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G F254為固定相，以0.2 0.5X羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑製成規格100X200mm,厚度 0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G F254薄層板。本發明所述中藥複方製劑的質量控制方法還包括如下含量測定方法 照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八 垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動相；檢測波長為230nm; 理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求(即符 合中國藥典要求，分離度應不小於1.5);取8(TC乾燥至恆重的芍藥苷對照品10mg,精密 稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中， 加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶液；取本發明中藥複方製劑日用劑量的5/3，研細， 取細粉約日用劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定 重量，超聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇 補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置於已處理好的重量 規格為360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述 洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60%甲醇溶解並移至2ml量瓶 內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液 各10nl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本發明中藥複方製劑日服用劑量的1/6 含白芍按芍藥苷(C23H280u)計，不得少於0.45mg。現有技術中延胡索乙素的鑑別採用三氯甲垸為提取溶劑，其毒性較大，而本發明用 乙醚作為提取溶劑浸漬1小時，以此代替三氯甲烷的提取，降低了毒性，實驗結果表明 此前處理方法可行。現有技術中的展開劑為正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: 1),其中也使用了毒性較大的三氯甲烷。本發明採用石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開 劑，用碘燻後在紫外光燈(365nm)下檢視，實驗結果供試品色譜中，在與對照藥材及對 照品色譜相應位置上，顯相同顏色的螢光斑點，色譜特徵明顯；陰性對照無幹擾，靈敏度高，表明本發明方法可行。在甘草薄層色譜鑑別的質量研究中，由於本發明藥材組分較多，對色譜幹擾較大，所以將供試品溶液經d8預處理小柱淨化處理，以此減少其他組分和輔料的幹擾；將供試 品溶液點樣於矽膠GF瀏薄層板上，以正丁醇-濃氨水_水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開 劑，置紫外光燈(254nm)下檢視，結果供試品色譜中斑點清晰，背景幹擾小。實驗結果 表明本發明方法可行。在本發明肉桂鑑別試驗中，增加了肉桂對照藥材，以增強鑑別的專屬性。下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。 實驗例1 延胡索中延胡索乙素的薄層鑑別1. 樣品點樣量的選擇按說明書技術方案所述方法製備延胡索對照藥材溶液，分別取此溶液1、 2、 3、 4、 5、 10、 15、 20、 25、 30!il，點於同一自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G,青島海洋 化工廠製造，批號20050124,黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格200X200咖，厚 度0. 25 0. 30mm)上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出， 晾乾，置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nm)下檢視。結果在對照藥材色譜中，點樣量為 lOul時斑點清晰可見，故樣品點樣量確定為10yl。(見圖l)2. 專屬性試驗根據說明書所載技術方案配製不含延胡索的陰性樣品，取供試品5g、陰性樣品4. 3g、 對照藥材0.625g、對照品按說明書所述的方法分別配製成供試品溶液、陰性對照溶液、 對照藥材溶液、對照品溶液。分別取供試品溶液、陰性對照溶液、對照藥材溶液各10 u 1， 對照品溶液2ul，點於同一自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G，青島海洋化工廠 製造，批號20050124，黏合劑為0. 2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格100X200mm，厚度0. 25 0.30咖)上，以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾， 置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nm)下檢視。結果供試品色譜中，在與對照藥材及對照 品色譜相應位置上，顯相同顏色的螢光斑點；陰性對照品色譜在與對照藥材及對照品色譜相應位置上無相應的斑點，說明陰性對照無幹擾。(見圖2)3. 檢測靈敏度試驗取延胡索乙素對照品，加乙醇稀釋製成每lml含2. 5、 1. 5、 1. 0、 0. 5、 0. 25、 0. 05mg 的溶液，吸取上述專屬性試驗所述的各溶液2ul，分別點於同一自製手鋪矽膠G薄層板 上(固定相為矽膠G，青島海洋化工廠製造，批號20050124，黏合劑為0.2%羧甲基纖維 素鈉溶液，規格100X200咖，厚度0. 25 0. 30ram),以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nrn)下檢視。結果 在對照品色譜中，對照品濃度》0.5mg/nil斑點清晰。(見圖3)4. 耐用性試驗4.1薄層板選擇採用自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G,青島海洋化工廠制 造，批號20050124，黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格100X200ram，厚度0. 25 0.30mm)、青島海洋化工廠出品的預製矽膠G薄層板(規格100X200ram,厚度0. 20 0.25mm，批號060306)點樣。結果自製手鋪矽膠G薄層板優於預製矽膠G薄層板，斑 點分離度好。(見圖2、 4)4.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、延胡索乙素對照品、陰性對照 溶液點於自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G，青島海洋化工廠製造，批號20050124, 黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格100X200ram，厚度0. 25 0. 30mm)上，分置於 溫度為4 10°C、室溫條件下展開。結果表明在7 3(TC範圍內試驗，對鑑別無影響(室 溫見圖2、低溫見圖5)4.3展開溼度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、延胡索乙素對照品、陰性對照 溶液點於自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G，青島海洋化工廠製造，批號20050124， 黏合劑為0.296羧甲基纖維素鈉溶液，規格100X200鵬，厚度0. 25 0. 30mm)，分置於溼 度為75%、 30%條件下展開。結果表明在相對溼度30 75%之間試驗，對鑑別無明顯影 響。(低溼見圖6、高溼見圖7) 實驗例2 肉桂中桂皮醛的薄層鑑別1.專屬性試驗根據說明書所載技術方案配製不含肉桂的陰性樣品，取陰性樣品3.87g、對照藥材 0.85g、供試品5g、對照品25ul，按說明書所載技術方案的方法分別配製成陰性對照溶 液、對照藥材瀋液、供試品溶液、對照品溶液。分別取陰性對照溶液、對照藥材溶液、 供試品溶液各lOy l,對照品溶液5n l，分別點於同一矽膠G薄層板上(規格100X200咖， 厚度0. 20 0. 25ran，批號051212,青島海洋化工廠)，以石油醚(60 90t:)-乙酸乙酯(17:3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。結果供試品色譜中，在與 對照藥材及對照品色譜相應位置上，顯相同的橙紅色斑點；陰性對照品色譜在與對照藥 材及對照品色譜相應位置上無相應的斑點，說明陰性對照無幹擾。(見圖8)2. 檢測靈敏度試驗取桂皮醛對照品，加乙醇稀釋製成每lml含O. 1、 0.2、 0.6、 1.0、 1.4、 2ul的溶 液，吸取上述專屬性試驗中各溶液5 u 1 ，分別點於同一矽膠G薄層板上(規格100X 200mm, 厚度0. 20 0. 25mm，批號051212，青島海洋化工廠)，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。結果在對照品色譜中，對 照品濃度》0.2ixl/ml斑點清晰。(見圖9)3. 耐用性試驗3.1薄層板選擇採用青島海洋化工廠出品的預製矽膠G薄層板(規格100X200rara， 厚度0. 20 0. 25咖，批號060306)、自製手鋪矽膠G薄層板(固定相為矽膠G，青島海洋 化工廠製造，批號20050124,黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格100X200mm，厚 度0. 25 0. 30mm)點樣。結果兩種矽膠G薄層板的供試品色譜中，在與對照品色譜相 應位置上，均顯相同的橙紅色斑點，但是自製板中未見除主斑點外的其它斑點，而預製 板中主斑點清晰，其它斑點亦可分辨，說明預製板的分離度好。(見圖IO、 11)3.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、桂皮醛對照品、陰性對照溶液 點於青島海洋化工廠出品的預製矽膠G薄層板上(規格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批號060306)，分置於溫度為4 1(TC、室溫條件下展開。結果在低溫與室溫的矽膠G 薄層板供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，均顯相同的橙紅色斑點，且主斑點 與其它斑點的分離度好，無拖尾，比移值也相當，所以溫度對展開影響不大。(低溫見圖 11、室溫見圖12)3.3展開溼度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、桂皮醛對照品、陰性對照溶液 點於青島海洋化工廠出品的預製矽膠G薄層板上(規格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批號060306)，分置於溼度為75%、 20%條件下展開。結果RH20%、 75%條件下的供試品 色譜中，在與對照品色譜相應位置上，均顯相同的橙紅色斑點，低溼條件時主斑點稍有 拖尾，而高溼條件斑點拖尾嚴重，所以展開時應控制溼度在45% 65%範圍內，不宜過低 過高。(低溼見圖13、高溼見圖14) 實驗例3 甘草的鑑別1.專屬性試驗根據說明書所載技術方案配製不含甘草的陰性樣品，取供試品12g、陰性樣品9.3g、對照藥材0.5g按說明書所載技術方案的方法分別配製成供試品溶液、陰性對照溶液、對 照藥材溶液。分別取供試品溶液、陰性對照溶液各10ul、對照藥材溶液3wl，分別點 於同一自製矽膠GF2S4薄層板上(規格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm，批號20031010， 青島海洋化工廠)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出， 晾乾，置紫外光燈(254nm)下檢視。結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置 上，顯相同顏色的斑點；陰性對照品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上無相應的斑點， 說明陰性對照無幹擾。(見圖16)2. 檢測靈敏度取甘草對照藥材O. 5g，按說明書技術方案所載.方法配製成對照藥材溶液，分別取此 溶液0.2、 0.5、 1、 2.5、 5、 lOnl,分別點於同一自製矽膠GF瀏薄層板上(規格100X 200咖，厚度0. 25 0. 30mra,批號20031010，青島海洋化工廠)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254咖)下檢視。 結果在對照藥材色譜圖中，點樣量》0.5ul範圍斑點可見，點樣量》10ul範圍斑點清 晰。(見圖15)3. 耐用性試驗3.1薄層板選擇採用上海信誼華儀器廠出品的預製矽膠GF254薄層板(規格100X 200mm,厚度0. 20 0. 25mm，批號060221)、自製手鋪矽膠GF254薄層板(固定相為矽膠 GF254，青島海洋化工廠，批號20031010，黏合劑為0.2%羧甲基纖維素鈉溶液，規格100 X200rara，厚度0. 25 0. 30mm)點樣。結果兩種矽膠GF254薄層板的供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應位置上，均顯相同顏色的斑點，但是自製板中斑點較預製板淸晰， 分離度好。(見圖16、 17)3.2展開溫度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、陰性對照溶液點於自製矽膠 GF加薄層板上(固定相為矽膠GF254,青島海洋化工廠，批號20031010，黏合劑為0. 2%羧 甲基纖維素鈉溶液，規格100X200mm，厚度0. 25 0. 30咖)，分置於溫度為4 10卩、室 溫條件下展開。結果在低溫時供試品色譜的斑點模糊，分離度差，而室溫時供試品色 譜斑點清晰，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，所以展開時溫度控制 在20 30。C範圍內。(低溫見圖18、室溫見圖16)3.3展開溼度的考察取三批供試品溶液、對照藥材、陰性對照溶液點於自製矽膠 GF瀏薄層板上(固定相為矽膠GF254,青島海洋化工廠，批號20031010，黏合劑為0. 2%羧 甲基纖維素鈉溶液，規格100X200咖，厚度0.25 0.30mm)，分置於溼度為75%、 20%條 件下展開。結果朋20%、 75%條件下的供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，均顯相同顏色的斑點，分離度均較好，無拖尾。所以展開時溼度影響不大，在20%與75% 之間即可。(低溼見圖19、高溼見圖20) 實驗例4 甘草鑑別方法的篩選實驗1、 鑑別方法(薄層色譜法)取本品12g,研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加 熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次 20ml (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml溶解，離心，取上清液置於 已處理好的SEP-PAKCw(重量規格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃 縮至lml,作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0. 5g，同法製成對照藥材溶液。照薄層 色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照藥材溶液3yl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254rnn)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。2、 色譜條件的選擇2.1、 參照《中國藥典》2000年版一部甘草浸膏的薄層鑑別方法。取本品6g,研細，加水40ral溶解，用正丁醇振搖提取3次，每次20ml (必要時離 心)，合併正丁醇液，用水洗滌3次，每次20ml，正丁醇液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇 5ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草酸單銨鹽對照品，加甲醇製成每lml含2mg的溶 液，作為對照品溶液；另取甘草對照藥材0.5g,同法製成對照藥材溶液。另取缺甘草的 陰性對照品、甘草原藥材分別按上述方法配製成陰性對照溶液、甘草原藥材溶液。照薄 層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液各10iil，對 照藥材溶液、甘草原藥材溶液、對照品溶液各5pl，分別點於同一用1%氫氧化鈉溶液制 備的矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15: 1: 1: 2)為展開劑，展開， 取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105t:加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365nm) 下檢視。結果在供試品色譜中，甘草酸單銨鹽對照品可見非常淡的黃色螢光斑點，而且需 加熱30min以上，甘草原藥材及甘草對照藥材可見淡淡的甘草酸單銨鹽的黃色螢光斑點， 其他斑點均有拖尾，斑點不清楚；樣品拖尾非常嚴重，未見甘草酸銨鹽對照斑點；陰性 對照拖尾以至未見斑點，結果表明此方法不適用於本品。(見圖21)2.2、 自擬方法將供試品溶液經C,s預處理小柱淨化處理(具體方法見l中所述)，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，點樣於矽膠GF瀏薄層板上，結果經Cw預處理小 柱淨化處理後(具體方法見1中所述)，大大消除了處方中其它組分和輔料對甘草鑑別的 幹擾，供試品色譜中斑點清晰，背景幹擾小，所以選用此方法鑑別。(見圖22) 3、甘草對照藥材梯度試驗(薄層斑點與藥材量的關係)取按1所述方法配製的甘草對照藥材溶液(0.5g/ml) 0.2、 0.5、 1.0、 2.5、 5、 10 ul ，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，進行梯度試驗，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254nm)下檢視，結果在色譜 圖中，點樣量》0.5iil，即甘草量大於0. 25mg時斑點清晰(見圖23)。甘草對照點樣量(Pl)0.20.51.02.5510甘草對照藥材含量(mg)0. 100. 250. 501.252.55.0相當於片劑甘草藥材含量(mg)0， 401. 02. 05. 01020結論在對照藥材色譜圖中，點樣量》0.5nl (片劑甘草藥材含量》 l.Omg)時可見斑點；點樣量》10iil (片劑甘草藥材含量》 20mg)斑點清晰。4、固相提取小拄的選擇4. 1 SEP-PAKCw使用前後的比較取本品12g,按照1中所述方法操做至"合併正丁醇液，蒸乾"，殘渣加甲醇lml使 溶解，作為供試品溶液l;另取本品12g,按照1中所述方法製備供試品溶液、甘草對照 藥材溶液。分取上述三種溶液點於同一矽膠GF254薄層板上(其中供試品溶液點2個點)， 展開。結果色譜圖中，供試品溶液在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點； 供試品溶液l拖尾嚴重，未見斑點。表明使用SEP-PAKCw比不使用效果好。(見圖24)4. 2固相提取小柱不同型號、品牌的比較取本品按照上述1中方法處理，但是固相提取小柱分別使用A: WATER S印-Pak Classic C18 (360mg，批號WAT051910)、 B: Agilent ZORBAX SPE C18 (100mg, lml)、 C: 津楊C18固相提取小柱(500mg， 3ml，批號730013)，得供試品溶液A、 B、 C。結果色譜 圖中，供試品溶液A、 B在與對照藥材色譜相應位置上，均顯相同顏色的斑點，但是供試 品溶液A的斑點比供試品溶液B斑點顏色深，而供試品溶液C未見斑點。說明固相提取 小柱A比B提取效果好，固相提取小柱C提取效果最差，所以選擇固相提取小柱A。(見 圖25)5、 甘草酸單銨鹽對照品、甘草對照藥材在鑑別中的意義取甘草對照藥材、甘草酸單銨鹽對照品、樣品、陰性對照品(缺甘草)9.3g加甘草 酸單銨鹽2mg,按照1中所述方法製備成對照藥材溶液、甘草酸單銨鹽對照品溶液、樣品 供試品溶液、陰性+甘草酸單銨鹽對照溶液進行鑑別。結果在色譜圖中，樣品供試品溶液在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點；對照藥材溶液、樣品供試品溶液、 陰性+甘草酸單銨鹽對照溶液在與甘草酸單銨鹽對照品色譜相應位置上，均顯相同顏色的斑點，但是陰性+甘草酸單銨鹽對照溶液斑點與對照藥材的其他斑點沒有對應，陰性+甘 草酸單銨鹽對照溶液與樣品供試品溶液的斑點不完全一致，說明本品鑑別試驗中採用甘 草對照藥材比甘草酸單銨鹽對照品更具專屬性；對藥材鑑別有更現實的意義。說明本品 中含有甘草藥材。(見圖26)實驗例5 延胡索薄層色譜鑑別1、 鑑別方法-取本品5g，研細，加濃氨試液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時，時時振搖，濾過，濾 液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材0.625g，同法 製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每lml含lrag的溶液，作為對 照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶 液各10yl、對照品溶液2iU，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 90"C)-乙 酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光 斑點。2、 不同色譜條件的選擇2.1、 現有技術中延胡索的薄層色譜鑑別方法為取本品5g，研細，加濃氨試液2ml與三氯甲烷20ml，浸漬1小時，時時振搖，濾過， 濾液蒸乾，殘渣加乙醇3ml使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照 品，加乙醇製成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附 錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10!U、對照品溶液2ul，分別點於同一矽膠G薄層板上， 以正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: l)為展開劑，展開，取出，晾千，置碘蒸氣中燻，置 紫外光燈(365nm)下檢視。結果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的 黃色螢光斑點(因為邊緣效應，供試品中延胡索乙素的斑點比對照品的斑點略高)。(見 圖27)2.2、 自擬方法l取本品5g,研細，加濃氨試液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時，時時振搖，濾過，濾 液蒸乾，殘渣加乙醇lral使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材0.625g,同法 製成對照藥材濬液；再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每lml含lmg的鄉液，作為對 照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10ixl、對照品溶液2iU，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 90t:)-乙 酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以碘化鉍鉀試液。結果供試品色譜 中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點，但是色譜中斑點 小，特徵較少，所以也不宜使用。(見圖28) 2.3、自擬方法2我們在2. 2方法的基礎上進行改變，按1中的方法分別配製成供試品(5g)溶液(三 批)、延胡索乙素對照品溶液、對照藥材(0.625g)溶液、陰性對照溶液[陰性樣品(缺 元胡)4.3g]。分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7) 為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nm)下檢視。結果供試 品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的螢光斑點；陰性對照 品色譜在與對照藥材及對照品色譜相應位置上無相應的斑點，說明陰性對照無幹擾。色 譜特徵明顯，靈敏度高，所以選用此方法來鑑別延胡索(見圖29)3、延胡索乙素對照品、延胡索對照藥材在鑑別中的意義取缺延胡索陰性對照品4. 3g與延胡索乙素lmg置同一具塞三角瓶中，按照1中所述 方法製備成陰性+延胡索乙素對照溶液進行鑑別。結果在色譜圖中，樣品供試品溶液、陰 性+延胡索乙素對照溶液在與延胡索乙素對照品色譜相應位置上，均顯相同顏色的螢光斑 點；但是陰性+對照溶液與樣品供試品溶液的色譜不完全一致，說明本品鑑別試驗中採用 延胡索對照藥材延胡索乙素對照品更具專屬性；對藥材鑑別有更現實的意義。說明本品 中含有延胡索藥材。(見圖30) 實驗例6 肉桂薄層色譜鑑別1、 鑑別方法取本品5g,研細，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，濾液 蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對照藥材0.85g,同法製成對照藥材溶液。再取 桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含liil的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中 國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10w 1、對照品溶液5y 1， 分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開劑，展開， 取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置 上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點。2、 桂皮醛對照品、肉桂對照藥材在鑑別中的意義2. 1取桂皮醛對照品、陰性(缺肉桂)對照品3.87g加桂皮醛對照品lu 1、供試品、 陰性對照品，按照1中所述方法製備並進行鑑別。結果在色譜圖中，樣品供試品溶液、陰性+對照溶液在與桂皮醛對照品色譜相應位置上，均顯相同的橙紅色斑點；但是陰性+ 對照溶液與樣品供試品溶液的色譜不完全一致。(見圖31)2. 2取肉桂對照藥材0. 85g，肉桂藥材0. 85g，桂皮對照藥材0.85g，桂皮藥材0. 85g， 桂枝藥材0. 85g，桂皮醛對照品25 P 1，供試品5g分別按照1中所述方法製備成肉桂對 照藥材溶液，肉桂藥材溶液，桂皮對照藥材溶液，桂皮藥材溶液，桂皮醛對照品溶液， 供試品溶液，點樣。結果在色譜圖中，肉桂對照藥材、桂皮對照藥材在與桂皮醛對照品 色譜相應位置上，均顯相同的橙紅色斑點；而肉桂對照藥材斑點數目多於桂皮醛對照品； 肉桂對照藥材與桂皮對照藥材斑點不盡相同，可以區分鑑別；說明本品鑑別試驗中採用 肉桂對照藥材較桂皮醛對照品更具專屬性；對藥材鑑別有更現實的意義。供試品中含有 肉桂藥材(見圖32)。


圖1延胡索樣品點樣量選擇圖2.延胡索薄層鑑別專屬性試驗(自製板，室溫) 圖3延胡索薄層鑑別檢測靈敏度試驗(自製板) 圖4延胡索薄層鑑別(預製板，室溫) 圖5延胡索薄層鑑別(自製板，低溫) 圖6延胡索薄層鑑別(自製板，低溼度) 圖7延胡索薄層鑑別(自製板，高溼度) 圖8肉桂薄層鑑別專屬性試驗(青島板) 圖9肉桂薄層鑑別檢測靈敏度試驗圖10肉桂薄層鑑別(自製板，室溫)圖11肉桂薄層鑑別(預製板，室溫)圖l'2肉桂薄層鑑別(預製板，低溫)圖13肉桂薄層鑑別(預製板，低溼度)圖14肉桂薄層鑑別(預製板，高溼度)圖15甘草薄層鑑別檢測靈敏度試驗圖16甘草薄層鑑別(自製板，室溫)圖17甘草薄層鑑別(預製板，室溫)圖18甘草薄層鑑別(自製板,低溫)圖19甘草薄層鑑別(自製板，低溼度)圖20甘草薄層鑑別(自製板，高溼度)圖21甘草薄層鑑別(色譜條件的選擇)-圖22甘草薄層鑑別(自擬方法)圖23甘草對照藥材梯度薄層色譜24甘草薄層鑑別(SEP-PAKU使用前後的比較)圖2'5甘草薄層鑑別(固相提取小柱不同型號、品牌的比較)圖26甘草薄層鑑別(甘草酸單銨鹽對照品、甘草對照藥材在鑑別中的意義)圖27延胡索薄層鑑別(現有衛生部頒標準的方法)圖28延胡索薄層鑑別(自擬方法1)圖29延胡索薄層鑑別(自擬方法2)圖30延胡索薄層鑑別(延胡索乙素對照品、延胡索對照藥材在鑑別中的意義) 圖31肉桂薄層鑑別(桂皮醛對照品、肉桂對照藥材在鑑別中的意義) 圖32肉桂薄層鑑別(肉桂對照藥材、桂皮對照藥材、桂皮醛對照品的比較) 下述實施例均能實現上述實驗例的效果。 具體實聘方式實施例l: 本發明片劑(小片)肉桂U5g 延胡索70g 牡蠣80g 小茴香35g 砂仁28g 高良姜12g白芍145g炙甘草90g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮 成稠裔；其餘肉桂等六味粉碎成細粉，與上述稠膏混勻，乾燥，粉碎成細粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓製成2000片，每片0.3g,即得。口服， 一次四片， 一日三次。 實施例2:本發明片劑(大片)肉桂100g延胡索75g砂仁25g小茴香37. 5g牡蠣75g高良姜12. 5g白芍140g甘草(炙)100g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮 成稠膏；其餘肉桂等六味粉碎成細粉，與上述稠膏混勻，乾燥，粉碎成細粉，加入適量 輔料，混勻，制粒，壓製成片，每片0.6g，即得。口服， 一次二片， 一日三次。 實施例3:本發明顆粒劑肉桂85Kg 延胡索85Kg牡蠣65Kg小茴香45Kg 砂仁20Kg 高良姜15Kg白芍120Kg炙甘草115Kg。 按常規工藝加入適量輔料製備成顆粒劑。服用方法及日服用劑量開水衝服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 實施例4: 本發明丸劑肉桂U5Kg延胡索65Kg牡蠣85Kg 小茴香30Kg砂仁30Kg 高良姜10Kg 白芍160Kg炙甘草85Kg。 按常規工藝加入適量輔料製備成丸劑。服用方法及日服用劑量口服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 實施例5: 本發明膠囊劑肉桂90 Kg 延胡索80 Kg 牡蠣70 Kg 小茴香40 Kg砂仁22 Kg 高良姜14 Kg 白芍130 Kg 炙甘草110Kg。 按常規工藝加入適量輔料製備成膠囊劑。服用方法及日服用劑量口服，每粒0.3克， 一次四粒， 一日三次。 實施例6': 本發明控釋製劑肉桂110Kg 延胡索70Kg 牡蠣80Kg 小茴香35Kg 砂仁2服g 高良姜12Kg 白芍150Kg 炙甘草90Kg。 按常規工藝加入適量輔料製備成控釋製劑。服用方法及日服用劑量口服， 一日一到二次。同普通製劑日劑量。 實施例7: 本發明片劑的質量控制方法鑑別A.取本發明片劑5g，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時，時時振搖， 濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材0.62g， 同法製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每lml含lmg的溶液，作 為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥 材溶液各lOu 1、對照品溶液2u l，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 90'0-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾千，置碘蒸氣中燻，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光 斑點。B. 取本發明片劑5g，研細，加石油醚(60 90'C)30ml，冷浸1小時，時時振搖，濾 過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對照藥材0.85g,同法製成對照藥材溶 液。再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含lul的溶液，作為對照品溶液。照薄層色 譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10nl、對照品溶 液5ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)為展開 劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位軍上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上,顯相同的橙紅色斑點。C. 取本發明片劑12g，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，藥渣加 甲醇30ml，加熱回流l小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用正丁醇振搖提 取2次，每次20ral (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml溶解，離心， 取上清液置於已處理好的SEP-PAKC,8(重量規格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲 醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0. 5g，同法製成對照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液10ul、對照藥材 溶液3ul，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定。 色譜條件與系統適用性試驗用十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-水(28: 72)為 流動相；檢測波長為230nm;理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與相鄰 峰的分離度應符合要求。對照品溶液的製備取80'C乾燥至恆重的芍藥苷對照品約10mg,精密稱定，置10ml 量瓶中，'用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的製備取本發明片劑10片(每片重0. 6克)或20片(每片重0. 3克)， 精密稱定，研細，取細粉約lg,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25M乙醇50ml，密塞， 稱定重量，超聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25% 乙醇補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置於已處理好的 SEP-PAKU (重量規格360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上 述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60%甲醇錄解並移至2ml量 瓶內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。本品每片含白芍按芍藥苷(C23H2S0 )計，大片(每片重0.6克)不得少於 0.45mg;小片(每片重0.3克)不得少於0.22mg。 實施例8: 本發明顆粒劑的質量控制方法鑑別A. 取本發明顆粒劑日服用量的25/18，研細，加濃氨溶液2ral與乙醚30ml，浸漬1 小時，時時振搖，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取延 胡索對照藥材0.62g,同法製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每 lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取 供試品溶液、對照藥材溶液各10ul、對照品溶液2ul，分別點於同一矽膠G薄層板上, 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上， 顯相同顏色的螢光斑點。B. 取本發明顆粒劑日服用量的26/18，研細，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小 時，時時振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對照藥材0.85g,同 法製成對照藥材溶液。再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含lul的溶液，作為對照 品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液 各10ul、對照品溶液5ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸 乙酯(17; 3)為展開劑，展開，取出，晾千，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中， 在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上， 顯相同的橙紅色斑點。C. 取本發明顆粒劑日服用量的25/18，研細，加乙醚40ral，冷浸1小時，時時振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml 溶解，離心，取上清液置於已處理好的SEP-PAKd8(重量規格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0.5g，同法 製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液IO yl、對照藥材溶液3yl，分別點於同一矽膠GF股薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。上述鑑別方法A和B中所述的矽膠G薄層板均採用以矽膠G為固定相，以0. 2%羧甲 基纖維素鈉溶液為黏合劑製成的規格100X200mm,厚度0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G薄層板。鑑別方法C中矽膠GF254薄層板是以矽膠G F254為固定相，以0. 4%羧甲基纖維素鈉 溶液為黏合劑製成規格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G F瀏薄層板。 實施例9: 本發明丸劑的質量控制方法鑑別A. 取本發明丸劑日服用量的25/18，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ral，浸漬1小 時，時時振搖，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡 索對照藥材0.62g，同法製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每lml 含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供 試品溶液、對照藥材溶液各10nl、對照品溶液2nl，分別點於同一矽膠G薄層板上， 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上， 顯相同顏色的螢光斑點。B. 取本發明丸劑日服用量的25/18，研細，加石油醚(60 90。C)30ni1,冷浸1小時， 時時振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對照藥材0.85g，同法制 成對照藥材溶液。再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含liil的溶液，作為對照品溶 液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各IO wl、對照品溶液5ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯 (17: 3)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上，顯相 同的橙紅色斑點。C. 取本發明丸劑日服用量的25/18，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml 溶解，離心，取上清液置於已處理好的SEP-PAKCw(重量規格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0.5g，同法 製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液IO ul、對照藥材溶液3ul，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254mti)下檢視。供試 品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定。 色譜條件與系統適用性試驗用十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-水(28:72)為流動相；檢測波長為230nm;理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與 相鄰峰的分離度應符合要求。對照品溶液的製備取8(TC乾燥至恆重的芍藥苷對照品約10mg，精密稱定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的製備取取本發明中藥複方丸劑日用劑量的5/3，研細，取細粉約曰用 劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功 率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇補足減失的重量， 搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置於已處理好的SEP-PAKCw (重量規格 360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用1(m甲醇2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲 醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用6096甲醇溶解並移至2ml量瓶內，加60%甲醇至刻 度，搖勻，作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iil，注入液相色譜儀，測定， 計算，即得。本品每日服用劑量的l/6含白芍按芍藥苷(C2晶80u)計，不得少於0.45mg。 實施例10: 本發明膠囊劑的質量控制方法鑑別A. 取本發明膠囊劑日服用量的25/18，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1 小時，時時振搖，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取延 胡索對照藥材0.62g，同法製成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每 lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取 供試品溶液、對照藥材溶液各10nl、對照品溶液2ul，分別點於同一矽膠G薄層板上， 以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻， 置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上， 顯相同顏色的螢光斑點。B. 取本發明膠囊劑日服用量的25/18，研細，加石油醚(60 90t:)30m1,冷浸1小 時，時時振搖，濾過，濾液蒸至約lml，作為供試品溶液。另取肉桂對照藥材0.85g,同 法製成對照藥材溶液。再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含lul的溶液，作為對照 品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液 各10yl、對照品溶液5wl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸 乙酯(17:' 3)為展開劑，展開，溼度控制在45% 65%範圍內，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相詞顏色的斑點；在 於對照^色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點。C.取本發明膠囊劑日服用量的25/18，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖， 濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流l小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振搖提取2次，每次20ml (必要時離心)，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml 溶解，離心，取上清液置於已處理好的SEP-PAKCw(重量規格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0.5g，同法 製成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液IO Pl、對照藥材溶液3ul，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以正丁醇-濃氨水-水-乙醇 (50: 4: 16: IO)為展開劑,展開，展開溫度為20—30。C，取出，晾乾，置紫外光燈(254nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-水(28: 72)為流動相；檢測波長為230nm;理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與 相鄰峰的分離度應符合要求。對照品溶液的製備取80'C乾燥至恆重的芍藥苷對照品約10mg，精密稱定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻 度，搖勻，即得。供試品溶液的製備取取本發明中藥複方膠囊製劑日用劑量的5/3，研細，取細粉約 日用劑量的5/18,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超 聲(功率160W，頻率50Hz)處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙醇補足減失 的重量，.搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置於已處理好的SEP-PAKC18 (重 量規格360mg)小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼 用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60先甲醇溶解並移至2nd量瓶內，加60% 甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液相色譜儀，測定， 計算，即得。本品每日用劑量的l/6含白芍按芍藥苷(C23H280u)計，不得少於0.45mg。
權利要求
1. 一種由肉桂85-115重量份、延胡索65-85重量份、牡蠣65-85重量份、小茴香30-45重量份、砂仁20-30重量份、高良姜10-15重量份、白芍120-160重量份、炙甘草85-115重量份組成的中藥複方製劑的質量控制方法，其特徵在於該方法包括如下鑑別中的一種或幾種A.取所述中藥複方製劑日用劑量的25/18，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時，時時振搖，濾過，濾液蒸乾，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材0.62g，同法製成對照藥材溶液；再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μl、對照品溶液2μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為2∶1.5-2的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；B.取所述中藥複方製劑日用劑量的25/18，研細，加60～90℃石油醚30ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，濾液蒸至1ml，作為供試品溶液；另取肉桂對照藥材0.85g，同法製成對照藥材溶液；再取桂皮醛對照品，加乙醇製成每1ml含1μl的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10μl、對照品溶液5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為15-20∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以二硝基苯肼乙醇試液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點；C.取所述中藥複方製劑日用劑量的10/3，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml溶解，離心，取上清液置於已處理好的重量規格為360mg的SEP-PAKC18小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0.5g，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl、對照藥材溶液3μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為40-50∶3-5∶12-20∶8-12的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
2 、如權利要求1所述的質量控制方法，其特徵在於鑑別方法A釆用體積比為2: 1. 7 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯為展開劑；鑑別方法B採用體積比為17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為展開劑；C鑑別方法採用體積比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑。
3、 如權利要求1或2所述的質量控制方法，其特徵在於鑑別方法B展開相對溼度 在45% 65%範圍內；鑑別方法C展開溫度為20—30。C。
4、 如權利要求1或2所述的質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法A或B中矽 膠G薄層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G為固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉 溶液為黏合劑製成規格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G薄層板；鑑別方法 C中矽膠GF254薄層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G F254為固定相，以0. 2 0. 5% 羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑製成規格100X200咖，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G F254薄層板。
5、 如權利要求3所述的質量控制方法，其特徵在於所述鑑別方法A或B中矽膠G薄 層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G為固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液為 黏合劑製成規格100X200腿，厚度0. 25 0. 30mm的手鋪矽膠G薄層板；鑑別方法C中矽 膠GF254薄層板是市售的常規矽膠薄層板或以矽膠G F254為固定相，以0.2~0.5%羧甲 基纖維素鈉溶液為黏合劑製成規格100X200mra，厚度0. 25 0. 30mra的手鋪矽膠G F254 薄層板。
6、 如權利要求l、 2或5所述的質量控制方法，其特徵在於該方法還包括如下含量 測定照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為 填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動相；檢測波長為230nm;理論板數按芍藥苷峰 計算應不低於1500,芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求；取80'C乾燥至恆重的芍藥 苷對照品10mg,精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取 lml置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶液；取所述中藥複方製劑日 用劑量的5/3，精密稱定，研細，取中藥複方製劑細粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重章，用25%乙醇補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置於已處理好的重量規格為360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇 2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60%甲醇溶 解並移至2ml量瓶內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本發明中藥複方製劑日服用劑量的1/6含白芍按芍藥苷023仏80 計，不得少於0. 45mg。
7、 如權利要求3所述的質量控制方法，其特徵在於該方法還包括如下含量測定方法: 照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動相；檢測波長為 230nm;理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求; 取80'C乾燥至恆重的芍藥苷對照品10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀 釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶 液；取所述中藥複方製劑日用劑量的5/3，研細，取細粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重量，用25%乙醇補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置於已處理好的重量規格為360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇 2ml洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60%甲醇溶 解並移至2ml量瓶內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品 溶液與供試品溶液各10ixl,注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本發明中藥複方製劑日 服用劑量的1/6含白芍按芍藥苷(:2晶80 計，不得少於0. 45rag。
8、 如權利要求4所述的質量控制方法，其特徵在於該方法還包括如下含量測定 照高效液相色譜法(中國藥典一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑，以體積比為28: 72甲醇-水為流動相；檢測波長為 230nm;理論板數按芍藥苷峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求； 取80'C乾燥至恆重的芍藥苷對照品10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀 釋至刻度，搖勻，精密量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶 液；取所述中藥複方製劑日用劑量的5/3,研細，取細粉約日用劑量的5/18,精密稱定， 置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫， 稱定重量,用25%乙醇補足減失的重量，搖勻,離心,精密吸取上清液lml,加水10ml,置於 已處理好的重量規格為360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml 洗脫，棄去上述洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用60%甲醇溶解 並移至2ml量瓶內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品溶 液與供試品溶液各10lU，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本發明中藥複方製劑曰 服用劑M的1/6含白芍按芍藥苷C23H2s0n計，不得少於0. 45mg。
9、 如權利要求1所述的中藥複方片劑的質量控制方法，其特徵在於該方法包括如下鑑別和/或含量測定 鑑別方法A. 取片劑5g，研細，加濃氨溶液2ml與乙醚30ml，浸漬1小時，時時振搖，濾過， 濾液蒸乾，殘渣加乙醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材0.62g,同法 製成對照藥材溶液；再取延胡索乙素對照品，加乙醇製成每lml含lmg的溶液，作為對 照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10ul、對照品溶液2 Pl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為2: 1. 7的60 90'C石油醚-乙酸乙酯為 展開劑，展開，取出，晾乾，置碘蒸氣中燻，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中， 在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；B. 取片劑5g，研細，加60 90'C石油醚30ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，濾 液蒸至約lml，作為供試品溶液；另取肉桂對照藥材0.85g，同法製成對照藥材溶液；再 取桂皮醛對照品，加乙醇製成每lml含liil的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試 驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各10ul、對照品溶液5ul，分別點於同一矽膠G 薄層板上，以體積比為17: 3的60 90。C石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾， 噴以二硝基苯肼乙醇試液；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏 色的斑點；在於對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙紅色斑點；C. 取片劑12g，研細，加乙醚40ml，冷浸1小時，時時振搖，濾過，藥渣加甲醇30ml， 加熱回流l小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水20ml使溶解，用正丁醇振搖提取2次，每 次20ml，合併正丁醇液，蒸乾，殘渣加水10ml溶解，離心，取上清液置於已處理好的重 量規格360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用水和甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至lml， 作為供試品溶液；另取甘草對照藥材0.5g，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗， 吸取供試品溶液10ul、對照藥材溶液3nl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積 比為50: 4: 16: 10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm 紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定方法照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基矽烷鍵合矽膠為 填充劑，以體積比為28: 72的甲醇-水為流動相；檢測波長為230nm;理論板數按芍藥苷 峰計算應不低於1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求；取80'C乾燥至恆重的芍 藥苷對照品約10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密 量取lml置50ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得對照品溶液；取所述中藥複方制 劑日用劑量的5/3,研細，取細粉約日用劑量的5/18，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放至室溫，稱定重量，用25%乙 醇補足減失的重量，搖勻，離心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置於已處理好的重 量規格360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脫，再用10%甲醇2ml洗脫，棄去上述 洗脫液，繼用60%甲醇10ml洗脫，收集洗脫液，蒸乾，用6(m甲醇溶解並移至2ml量瓶 內，加60%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液 各10ul，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；片劑每片含白芍按芍藥苷(^280 計， 每片0. 6克不得少於0. 45mg;每片0. 3克不得少於0. 22mg。
10、如權利要求9所述的中藥複方片劑的質量控制方法，其特徵在於該中藥複方片 劑是由如下方法製備的白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小時，合併煎液，濾過， 濾液濃縮成稠膏；其餘肉桂等六味粉碎成細粉，與上述稠膏混勻，乾燥，粉碎成細粉， 加入適量輔料，混勻，制粒，壓製成片，每片0.3g或0.6g。
全文摘要
本發明公開了一種由肉桂、延胡索、牡蠣、小茴香、砂仁、高良姜、白芍等原料藥組成的中藥複方製劑的質量控制方法。該方法包括延胡索、肉桂、甘草的鑑別方法和白芍的含量測定方法。胡索鑑別方法以體積比為2∶1.7的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑；肉桂鑑別方法以體積比為17∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開時溼度優先控制在45％～65％範圍內；甘草鑑別方法以體積比為50∶4∶16∶10的正丁醇-濃氨水-水-乙醇為展開劑，展開時溫度優選20-30℃。該鑑別方法色譜特徵明顯；陰性對照無幹擾，靈敏度高，專屬性強。
文檔編號A61K35/56GK101244230SQ200710063999
公開日2008年8月20日 申請日期2007年2月16日 優先權日2007年2月16日
發明者劉鐵薇, 梁勇軍, 謝錦桃, 琴 陸 申請人:深圳市中聯製藥有限公司