甜味劑的製作方法

2023-06-18 04:21:56

專利名稱：：甜味劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及甜P未劑、以及被用作甜P未劑的成分的添加劑，所述添加劑用於改善甜味物質的實體感(術亍v—感)、改善甜味物質特有的苦味。
背景技術：
：近年來，高甜度甜味劑(highsweetnesssweetener)因其高倍率的甜度，而作為甜味劑在以減肥食品為代表的眾多食品領域得到了廣泛應用。尤其是在消費量龐大的飲料、點心領域，各種高甜度甜味劑越來越多地被用於熱量去除或無熱量等的所謂低熱量型、無糖型食品。其中，作為所使用的典型高甜度甜味劑，可列舉阿斯巴甜(aspartame)(APM)、三氯蔗糖(sucralose)、安賽蜜(asesulfameK)(Ace-K)、紐甜(neotame)、N-[N-[3-(3-羥基-4-曱氧基苯基)丙基]-a-天冬氨醯基]-L-苯丙氨酸l-曱酯(以下簡稱為"ANS卯0r)、糖精(saccharin)、甜菊糖(stevia)、甘草甜素(glycyrrhizin)、奇甜蛋白(thaumatin)、應樂果甜蛋白(monellin)等。可是，對於消費者而言，由於常年以來已經適應了在傳統食品中一直採用的砂糖、果葡糖漿(glucosefructosesyrup)等的甜味，大多情況下對於上述高甜度甜味劑的甜味品質並不滿意。例如，APM雖然具有香味增強效果以及減弱共存物質的苦味、澀味(astringency)等的效杲，但另一方面也可以列舉出後甜味強度(後味中甜味的強度)的問題以及耐熱性等保存穩定性的問題。三氯蔗糖雖具有高度穩定性，但也可以列舉出香味受到抑制的問題以及後味中甜味過膩等的問題。Ace-K雖具有高度穩定性，但由於存在中味到後甜味過膩(持續至後味中的過膩的甜味)的問題、尤其是苦味、澀味較強的問題，導致其在大多情況下要與其它高甜度甜味劑組合使用。作為迄今為止用於改善上述高甜度甜味劑的甜味品質的技術，已知有將上述高甜度甜味劑互相組合使用的方法(專利文獻1)。此外，已公開了將上述高甜度甜味劑與其它甜味劑、例如海藻糖或赤蘚醇組合使用的方法(專利文獻2);或與a-葡糖基化甜菊提取物組合使用的方法(專利文獻3);或與食物纖維組合使用的方法(專利文獻4)。但是，至今仍未達到能夠使已適應了砂糖、果葡糖漿的甜味品質的消費者滿意的程度。另一方面，4丐受體也稱為4丐感應受體(CalciumSensingReceptor:CaSR)，其被歸類於C類七次跨膜型受體(G蛋白質偶聯受體；GPCR)，是由1078個胺基酸組成的受體。這類鈣受體的基因的克隆已於1993年被公開(非專利文獻1)，已知在4丐等的激活下，這類4丐受體可通過提高胞內鈣水平等來引起多種細胞響應。人《丐受體的基因序列被登記為GenBank登錄號NM—000388，並且在動物間是非常保守的。上述4丐受體可能對生物體內機能起促進作用，也可能起抑制作用。因此，目前，可根據病情不同分別將利用了對鈣受體激活作用的治療劑和利用了抑制劑作用的治療劑用於神經疾病、肝臟疾病、心血管疾病、消化器官疾病及其它疾病中。例如，在曱狀旁腺中，鈣受體可起到感知血中鈣水平的升高、抑制曱狀旁腺激素(PTH)分泌、進而修正血中鈣水平的作用。由此，可期待使用鈣受體激活劑來達到降低血中鈣濃度的效果。實際上，下述事實已被闡明在將4丐受體激活劑用於血液透析患者的繼發性曱狀旁腺功能亢進症的治療時，可以在鈣水平或磷水平不升高的情況下使PTH水平降低。由於鈣受體的功能分析主要圍繞體內鈣平衡進行，因此，迄今為止的應用研究也是以與鈣調節相關的骨代謝性疾病為中心展開的。但是，根據基因表達分析等的結果可知，4丐受體廣泛分布於除曱狀旁腺及腎臟以外的活體內(非專利文獻2、3)，其與多種生物體機能、疾病的病因相關的可能性已被提出。例如，據推測，鈣受體與肝臟、心臟、肺、消化道、淋巴細胞、料、利用RT-PCR的分析確認到了鈣受體在生物體中的眾多組織中的表達。基於上述背景，目前，鈣受體的激活劑及抑制劑的應用價值得到了迅速提此外，作為4丐受體激活劑，除了鈣以外，還報導了釓等陽離子、聚精氨酸等鹼性肽、精胺等多胺、苯丙氨酸等胺基酸等(非專利文獻4)。非專利文獻5中報導了低分子肽即穀胱甘肽(，Glu-Cys-Gly)為CaSR激活劑，但完全沒有提及CaSR與味覺感受相關聯的可能性。然而，尚不清楚具有特定結構的胺基酸或肽作為鉀受體激活劑的有用性。此外，儘管像阿斯巴甜這樣呈現甜味的肽衍生物是已知的，但具有鈣受體激活作用的胺基酸或肽可改善甜味物質的甜味品質的事實尚屬未知。需要說明的是，有關ANS9801被記載於專利文獻5中；有關紐甜被記載於專利文獻6中。專利文獻1:日本特開2005-304440專利文獻2:日本特開2002-51723專利文獻3:日本特開2002-34501專利文獻4:日本特開2004-41118專利文獻5:美國專利第6548096號專利文獻6:國際公開第WO/39979號非專利文獻1非專利文獻2非專利文獻3非專利文獻4非專利文獻5Nature,1993,Vol.366(6455),p.575-580J.Endocrinol.,2000,Vol.165(2)，p.173-177Eur.J.Pharmacol.,2002,Vol.447(2-3),p.271-278CellCalcium,2004,Vol.35(3)，p.209-216J.Biol.Chem.，2006，Vol.281(13),p.8864-8870
發明內容發明要解決的問題本發明的目的在於l)提供一種甜味品質、尤其是實體感及苦味得以改善的甜味劑，特別提供一種甜味品質、尤其是實體感及苦味得以改善的高甜度甜味劑；以及2)提供一種被用作甜味劑的成分的、用來改善甜味物質的實體感或甜味物質特有的苦味的添加劑。解決問題的方法
技術領域：
：本發明人在探索鈣受體的激活劑的過程中發現了多種可作為具有鈣受體激活作用的化合物的胺基酸及肽，並發現，這些胺基酸及肽可改善高甜度甜味劑的甜味品質，並由此完成了本發明。即，本發明的要點如下所述。(1)一種甜味劑，其包含甜味物質和具有鈣受體激活作用的化合物。(2)根據(l)所述的甜味劑，所述化合物為選自下組中的l種或2種以上的胺基酸或肽Y-Glu-X-Gly(X代表胺基酸或胺基酸衍生物)、y-Glu-Val-Y(Y代表胺基酸或胺基酸衍生物)、Y-Glu-Ala、y-Glu-Gly、，Glu-Cys、y-Glu-Met、y-Glu-Thr、y-Glu-Val、y-Glu-Orn、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、y-Glu-Met(O)、y-Gl葉Glu-Val、y-Glu-Val-NH2、y-Glu-Val-ol、y-Glu-Ser、y-Glu-Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu-Leu、y-Glu-Ile、Y-Glu-t-Leu及y-Glu-Cys(S-Me)。(3)根據(2)所述的甜味劑，其中，所述X為Cys(SNO)、Cys(S-烯丙基)、Gly、Cys(S-Me)、Abu、tLeu、Cle、Alb、Pen或Ser，所述Y為Gly、Val、Glu、Lys、Phe、Ser、Pro、Arg、Asp、Met、Thr、His、Orn、Asn、Cys、Gln、GlyA或LacA。(4)根據(2)或(3)所述的甜味劑，其中，所述胺基酸或肽選自y-Glu-Val-Gly及y-Glu-Abu-Gly。(5)根據(1)(4)中任一項所述的甜味劑，其中，甜味物質為選自下組中的l種或2種以上阿斯巴甜、三氯蔗糖、安賽蜜、紐甜、ANS9801、糖精、甜菊糖、甘草甜素、奇甜蛋白、莫納甜(monatin)以及應樂果甜蛋白。(6)—種添加劑，其可被添加到甜味物質中以改善甜p木物質的實體感，該添加劑包含具有4丐受體激活作用的化合物。(7)—種添加劑，其可被添加到甜味物質中以改善甜味物質的苦味，該添加劑包含具有釣受體激活作用的化合物。圖1為示出4丐對鈣受體的作用的圖。向非洲爪蛙(Xenopuslaevis)卵母細胞中微量注射了人鈣受體cRNA。並記錄了在添加任意濃度的氯化釣溶液時細胞內流過的響應電流的值。以胞內電流的最大值作為響應電流值。並確認到在微量注射了蒸餾水(作為對照)的卵母細胞中未觀察到響應。圖2為示出L型胺基酸對鈣受體的作用的圖。向非洲爪蛙印母細胞中微量注射了人鈣受體cRNA。並記錄了在添加10mM的L型胺基酸溶液時細胞內流過的響應電流的值。以月包內電流的最大值作為響應電流值。並確認到在微量注射了蒸餾水(作為對照)的卵母細胞中未觀察到響應。圖3為示出D型胺基酸對鈣受體的作用的圖。向非洲爪蛙卵母細胞中微量注射了人4丐受體cRNA。並記錄了在添加10mM的D型胺基酸溶液時細胞內流過的響應電流的值。以胞內電流的最大值作為響應電流值。並確認到在微量注射了蒸鎦水(作為對照)的卵母細胞中未觀察到響應。圖4為示出肽對4丐受體的作用的圖。向非洲爪蛙卵母細胞中微量注射了人4丐受體cRNA。並記錄了在添加任意濃度的肽溶液時細胞內流過的響應電流的值。以胞內電流的最大值作為響應電流值。在微量注射了蒸餾水(作為對照)的卵母細胞中未觀察到響應。圖5為表示甜味物質的實體感強弱的示意圖。發明的具體實施例方式以下對本發明進行具體說明。本發明涉及包含甜味物質和具有鈣受體激活作用的化合物的甜味劑，優選為包含甜味物質和胺基酸或肽的甜味劑。此外，本發明的另一實施方加劑是包含具有鈣受體激活作用的化合物的添加劑。另外，作為本發明的另一實施方式，涉及添加了下述添加劑而得到的甜味劑，所述添加劑包含具有鈣受體激活作用的化合物。首先，針對具有鈣受體激活作用的胺基酸或肽進行說明。本發明人等發現具有鈣受體激活作用的胺基酸或肽可賦予食品以kokumi。並發現，這類胺基酸或肽可以改善甜味物質的實體感(bodytaste)或苦味(bitterness)。這裡，所述的"kokumi，，是指無法用下述5種基本味道(fivebasictastes)表示的口未道，所述5種基本。木道是用甜^木(sweettaste)、鹹p木(saltytaste)、酸p木(sourtaste)、苦p木(bittertaste)、鮮p木(umami)表示的p木道；所述的"kokumi"亦指不僅增強基本味道，還增強下述基本味道的邊緣味道(marginaltaste)的味道，所述基本味道的邊緣味道包括醇厚感(thickness)、充盈感(growth)(滿口感(mouthfulness))、糹帛延感(continuity)和協調感(harmony)等。另一方面，本發明中的所述甜味物質的"實體感"是指，在食用甜味物質時，主要在前味到中味具有協調感、濃鬱感(richness)。所述實體感的改善是指實體感得到了強化。味覺會隨著食用後的時間經過而變化，自食用剛結束開始，依次稱為前p未(initialtaste)、中p未(middletaste)及後口未(aftertaste)。上述均為相對概念，典型的前味、中味及後味分別為食用後02秒之間、34秒之間、以及5秒後所感覺到的味道。圖5表示針對實體感的示意圖，縱軸代表味道的強度、橫軸代表食用後經過的時間。不過，該圖為示意圖，表示的並非絕對數值。本說明書中的所述"鈣受體"是指被稱為鈣感應受體或CalciumSensingReceptor(CaSR)的、屬於C類七次跨膜型受體(7回膜貫通型受容體(D夕，7C)的受體。本說明書中的所述"鈣受體激活劑"是指與上述鈣受體結合併激活4丐受體的物質。此外，本說明書中的所述"激活鈣受體"是指在鈣受體上結合配體，激活鳥嘌呤核苷酸結合蛋白質，並傳導信號。此外，將鈣受體傳導所述信號稱為"鈣受體活性"。本說明書中，構成各胺基酸以及各肽的胺基酸在沒有特殊限定的情況下均是L體。具有鈣受體激活作用的化合物具有鉤受體激活作用的化合物只要具有改善甜味物質的甜味品質的效果即可，可以是胺基酸、肽或它們的衍生物，或各種低分子化合物。此外，也可以是經篩選而得的新型化合物。例如，可通過使4丐受體與測試物質反應，並檢測4丐受體活性來獲取。對於由上述方法獲得的化合物，優選確認到它們具有改善甜味物質、尤其是高甜度甜味物質的甜味品質的效果。以下，對篩選具有鈣受體激活作用的化合物的方法進行具體例示，但所述篩選方法不限於下述步驟。1)向用於測定4丐受體活性的鈣受體活性測定體系中添加測試物質，來測定鈣受體活性。2)對添加測試物質時的釣受體活性和不添加測試物質時的鈣受體活性進4亍比車交。3)選擇添加測試物質時顯示高鈣受體刺激活性的測試物質。可使用例如下述測定體系來測定4丐受體活性所述測定體系是採用了表達4丐受體的細胞的測定體系。所述細胞可以是內源性表達鈣受體的細胞，也可以是引入了外源鈣受體基因的重組細胞。作為所述鈣受體活性測定體系，只要是在將對鈣受體顯示特異性的胞外配體(激活劑)添加至上述表達鈣受體的細胞中時可檢測到激活劑與鈣受體的結合(反應)、或可響應於激活劑與4丐受體的結合(反應)將可檢測的信號傳導至細胞內的測定體系，則可以無活性時，可以判定該測試物質具有鈣受體刺激活性，且為一種可改善甜味物質的甜味品質的物質。另一方面，改善甜味物質的甜味品質的效果可通過由人進行味覺測試等方法來確認。此外，對於用作測試物質的胺基酸及肽沒有特殊限制，作為肽，優選使用由210個胺基酸殘基組成的肽或其衍生物，更優選使用由2或3個胺基酸殘基組成的肽或其衍生物。此外，肽的N末端側的胺基酸殘基優選為Y-穀氨酸。對於上述鈣受體的來源沒有特殊限制，除了上述人鈣受體以外，還可以列舉出來自包括小鼠、大鼠、犬等在內的動物的鈣受體。如上所述，鈣受體活性可採用表達4丐受體或其片段的活細胞、表達釣受體或其片段的細胞膜、含有鉤受體或其片段的蛋白質的體外系統等來確認。以下示出使用活細胞的一個實例，但鈣受體活性的確認不受該實例的限制。4丐受體可以在非洲爪蛙卵母細胞、倉鼠卵巢細胞、及人胎腎臟細胞等培養細胞中表達。所述表達可通過下述方法實現將鈣受體基因克隆至攜帶有外源基因的質粒中，導入所得的質粒或以該質粒為模板獲得的cRNA。為了檢測反應，可採用電生理學的方法或細胞內鈣水平提高的螢光指示劑。首先，基於對鈣或特異性激活劑的響應來確認鈣受體的表達。使用的是可在5mM左右的鉤濃度下觀察到胞內電流的卵母細胞或可在5mM左右的釣濃度下觀察到焚光指示劑的螢光的培養細胞。改變4丐濃度以測定其濃度依賴性。然後，將肽等測試物質配製成lpMlmM左右的濃度，並將其添加到卵母細胞或培養細胞中，來測定上述肽等測試物質的4丐受體活性。作為本發明中使用的化合物(以下也記作"本發明的化合物")，可列舉具有鈣受體激活作用的各種胺基酸、肽或它們的衍生物，或各種低分子化合物(以下，簡稱為"胺基酸""肽，，時，有些情況下也分別指下述含義，所述含義包含胺基酸及胺基酸衍生物、肽及肽衍生物中的任一種)。作為本發明中使用的具有鈣受體激活作用的胺基酸或肽，只要是當與甜味物質同時食用時，具有改善甜味物質的實體感和/或苦味的效果的胺基酸或肽即可。作為這類胺基酸或肽，可列舉例如y-Glu-X-Gly(X代表胺基酸或胺基酸衍[化學式4]生物)、Y-Glu-Val-Y(Y代表胺基酸或胺基酸衍生物)、y-Glu-Ala、y-Glu-Gly、y-Glu-Cys、y-Glu-Met、y-Glu-Thr、y-Glu-Val、，Glu-Orn、Asp陽Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、Y國Glu陽Met(O)、y-Glu個Glu-Val、y-Glu-Val-NH2、Y-Glu-Val-ol、y-Glu畫Ser、丫-Glu隱Tau、Y-Glu-Cys(S-Me)(O)、Y-Glu-Leu、y-Glu-Ile、y-Glu-t-Leu及y-Glu-Cys(S-Me)(以下也稱其為本發明的肽等)。在本發明中，這些肽等可以使用l種，也可以2種以上組合使用。此外，肽也可以是具有Y-Glu-X-OCH(Z)C02H結構的肽衍生物。其中，式中的X代表胺基酸或胺基酸衍生物，Z代表H(氫原子)或CH"曱基)。此外，肽也可以是上述式y-Glu-Val-Y中的Y為GlyA或LacA的化合物。作為具體實例，優選列舉Y-Glu-Val-GlyA、y-Glu-tLeu-GlyA、y-Glu-Abu-GlyA、Y-Glu-Val-LacA、，Glu隱tLeu-LacA、y-Glu-Abu陽LacA等。其中，所述GlyA代表羥基乙酸，所述LacA代表丁酸。丁酸可以是S體或R體中的任一種，優選為S體。上述化合物的結構式如下所示。0CH，formulaseeoriginaldocumentpage10H3C,CH。formulaseeoriginaldocumentpage10formulaseeoriginaldocumentpage11其中，所述的胺基酸還包括Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Cys、Met、Asn、Gln、Pro、Hyp、t-Leu等中性胺基酸，Asp、Glu等酸性胺基酸，Lys、Arg、His等鹼性胺基酸，Phe、Tyr、Trp等芳香族胺基酸，或高絲氨酸、瓜氨酸、鳥氨酸、oc-氨基丁酸、正纈氨酸、正亮氨酸、牛磺酸等。此外，還可以是叔亮氨酸、環亮氨酸、a-氨基異丁酸、L-青黴胺(L-^二、乂小7$乂)等非天然(不構成蛋白質)胺基酸。其中，在肽Y-Glu-X-Gly中，X可以是上述胺基酸或其衍生物中的任一種，但優選為Cys以外的胺基酸或其彩亍生物。本說明書中的胺基酸殘基的縮寫代表下述胺基酸。(1)Gly:甘氨酸(2)Ala:丙氨酸(3)Val:纈氨酸(4)Leu:亮氨酸(5)lie:異亮氨酸(6)Met:曱石克氨酸H3CCH，:7)Phe:苯丙氨酸:8)Tyn酪氨酸:9)Tip:色氨酸10)His:組氨酸11)Lys:賴氨酸J2)Arg:精氨酸13)Sen絲氨酸14)Thr:蘇氨酸15)Asp:天冬氨酸16)Glu:穀氨酸17)Asn:天冬醯胺18)Gin:穀氨醯胺19)Cys:半胱氨酸20)Pro:脯氨酸21)Om:鳥氨酸22)Sar:肌氨酸23)Cit:瓜氨酸24)N-Val:正纈氨酸25)N-Leu:正亮氨酸26)Abu:a-氨基丁酸27)丁au:牛磺酸28)Hyp:羥脯氨酸29)t-Leu:叔亮氨酸30)Cle:環亮氨酸31)Aib:a-氨基異丁632)Pen:L-青黴胺(pei此外，所述的胺基酸衍生物是指上述胺基酸的各種衍生物，例如，可列舉稀有胺基酸、非天然胺基酸、氨基醇、或胺基酸側鏈被各種取代基取代而得的胺基酸衍生物，其中，所述胺基酸側鏈為末端羰基、氨基、半胱氨酸的巰基等。作為取代基，可列舉烷基、醯基、羥基、氨基、烷基氨基、硝基、磺醯基及各種保護基等，包括例如Arg(N02):N-y-硝基精氨酸、Cys(SNO):S-硝基半胱氨酸、Cys(S-Me):S-曱基半胱氨酸、Cys(S-烯丙基)S-烯丙基半胱氨酸、Val-NH2:纈氨醯胺、Val-ol:纈氨醇(2-氨基-3-曱基-l-丁醇)等。需要說明的是，在本說明書中，y-Glu-Cys(SNO)-Gly具有下述結構式，上述式Y-Glu-Met(O)和Y-Glu-Cys(S-Me)(O)中的(O)代表亞碸結構。y-Glu中的(力表示穀氨酸通過其Y位羧基與其它胺基酸相鍵合。NH7OS-Nitrosoglutathione(GNSO)S-亞硝基穀胱甘肽Y-Glu-X-Gly(X代表胺基酸或胺基酸衍生物)、Y-Glu-Val-Y(Y代表胺基酸或胺基酸衍生物)、Y-Glu-Ala、y-Glu-Gly、y-Glu-Cys、y-Glu-Met、y-Glu-Thr、y-Glu-Val、Y-Glu-Orn、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、y-Glu-Met(O)、Y-Glu-y-Glu-Val、y-Glu-Val-NH2、，GIu-Val-ol、Y-Glu-Ser、y-GIu-Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu-Leu、y-Glu-He、Y-Glu-t-Leu及y-Glu-Cys(S-Me)改善甜味物質的實體感及苦味。因此，可將Y-Glu-X-Gly(X代表胺基酸或胺基酸衍生物)、Y-Glu-Val-Y(Y代表胺基酸或胺基酸衍生物)、y-Glu-Ala、y-Glu-Gly、y-Glu-Cys、y-Glu-Met、y-Glu-Thr、Y-Glu曙Val、，Glu-Orn、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、y-Glu-Met(O)、y-Gl葉Glu-Val、y-Glu-Val-NH2、y-Glu-Val-ol、Y-Glu-Ser、y-Glu-Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu-Leu、y-Glu-Ile、y-Glu-t-Leu及，Glu-Cys(S-Me)(以下也稱為用於本發明的肽或胺基酸)用作添加至甜味物質中、以改善甜味物質的實體感及苦味的添加劑。用於本發明的化合物可獨立使用，也可以將任意2種或3種以上混合使用。在上述化合物中，優選具有下迷結構式的化合物Y-Glu-X-Gly(X為Cys(SNO)、Cys(S畫烯丙基)、Gly、Cys(S-Me)、Abu、t隱Leu、Cle、Aib、Pen或Ser)、或y-Glu-Val-Y(Y為Gly、Val、Glu、Lys、Phe、Ser、Pro、Arg、Asp、Met、Thr、His、Orn、Asn、Cys、Gln、GlyA或LacA)。在這些化合物中，優選的化合物為y-Glu-Val-Gly和y-Glu-Abu-Gly。上述用於本發明的化合物若存在市售產品，則可以使用其市售品。此外，對於肽，可適當採用下述公知方法獲得，所述公知方法為(l)化學合成方法、或(2)利用酶反應合成的方法等。由於在本發明所使用的肽中含有的胺基酸殘基數較少，僅為23個殘基，因而採用化學合成方法較為簡便。進行化學合成時，利用肽合成儀進行該寡肽的合成或半合成。作為化學合成方法，可列舉例如肽固相合成法。由上述方法合成得到的肽可通過常規方法，例如離子交換色語法、反相高速液相色譜法、親和層析法等進行純化。所述肽固相合成法、以及隨後進行的肽純化是本
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中熟知的方法。此外，在本發明中使用的肽還可以通過酶反應來製備。例如，可以採用國際乂>開WO2004/011653號小冊子中記載的方法。即，可以採用下述方法來製備本發明中使用的肽使一個胺基酸或二肽的羧基末端被酯化或醯胺化了的胺基酸或二肽與氨基處於游離狀態的胺基酸(例如，羧基被保護的胺基酸)在肽合成酶的存在下反應，並對生成的二肽或三肽進行純化。作為肽合成酶，可列舉出具有合成肽的能力的微生物的培養物、由該培養物分離得到的微生物菌體、或該微生物的菌體處理物、或由該微生物得到的肽合成酶。需要說明的是，除了上述利用酶的合成方法及化學合成法以外，本發明中使用的肽還可能存在於蔬菜、水果等植物、酵母等微生物、酵母提取液等中。天然存在的情況下，也可以從上述物質中提取後使用。此外，也可以使用含有大量本發明的肽的級分(畫分)，而無須將其分離出來使用。作為在本發明中使用的低分子化合物，可列舉出西那卡塞(Cinacalcet,擬鈣劑)((R)-N-。-C3-(三氟曱基)苯基)丙基)-l-(l-萘基)乙胺)及其類似化合物。作為西那卡塞的類似化合物，可列舉以下述化學式(l)表示的化合物((R)-N-[(4-乙氧基-3_曱基苯基)曱基]-l-(l-萘基)乙胺》或以化學式(2)表示的化合物((R)-N-(3-苯基丙-2-烯基)-l-(3-曱氧基苯基)乙胺)等。這些化合物可利用例如美國專利第6211244號公報中記載的公知方法合成得到。此外，也可以使用市售產品。[化學式8](1)本發明中使用的化合物還包括鹽形式的化合物。當本發明的肽及胺基酸可形成鹽形式時，其鹽只要是藥理學可接受的鹽即可，可列舉例如下述由分子式中的羧基等酸性基團形成的鹽銨鹽，與鈉、鉀等鹼金屬形成的鹽，與鈣、鎂等鹼土金屬形成的鹽，鋁鹽，鋅鹽，與三乙胺、乙醇胺、嗎啉、吡咯烷、哌啶、哌。秦、二環己胺等有機胺形成的鹽，與精氨酸、賴氨酸等鹼性胺基酸形成的鹽。而當分子式中存在鹼性基團時，可列舉下述由鹼性基團形成的鹽與鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫溴酸等無機酸形成的鹽，與乙酸、檸檬酸、笨甲酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、琥珀酸、鞣酸、丁酸、羥千基苯曱酸(hibenzoicacid)、樸酸、庚酸、癸酸、8-氯茶鹼酸(teoclicacid)、水楊酸、乳酸、草酸、扁桃酸、蘋果酸等有機羧酸形成的鹽，與曱磺酸、苯磺酸、對曱苯磺酸等有機磺酸形成的鹽。<2〉本發明的添加劑及甜味劑用於本發明的化合物、優選肽和胺基酸可用作添加至甜味物質中的添加劑，用來改善甜味物質的實體感。此外，用於本發明的肽和胺基酸可用作添加至甜味物質中的添加劑，用來改善甜味物質的苦味。所述化合物可以僅使用1種，也可以使用2種以上的混合物。此外，可通過將用於本發明的化合物與甜味物質混合來組成甜味劑。本發明的添加劑可以僅由例如選自上述用於本發明的化合物中的1種或2種以上組成，也可以進一步添加任意其它具有改善甜味劑的甜味品質作用的化合物或各種添加物等來組成本發明的添加劑。添加到甜味物質中的添加劑的量只要可以改善甜味物質的甜味品質、特別是實體感，則沒有特殊限制，具體可以是例如，對應於單位重量的高甜度甜味劑，本發明的化合物的量為0.000001重量％99.9999重量％，優選為0.00001重量％99.999重量％，更優選為0.0001重量°/。~99.99重量°/0左右。需要說明的是，上述記載的是相對於每單位重量高甜度甜味劑的混合比例，而作為本發明的化合物在食品或飲料中的使用量，為1重量ppb(partperbillion)99.9重量％，優選為10重量ppb10重量％,更優選為1重量ppm1重量％左右。本發明的甜味劑中含有甜味物質和用於本發明的化合物。所述化合物可以僅使用l種，也可以使用2種以上的混合物。作為甜味物質，優選高甜度甜味劑，具體可列舉例如阿斯巴甜、三氯蔗糖、安賽蜜、紐甜、ANS9801、糖精、甜菊糖、甘草甜素、奇甜蛋白、莫納甜(monatin)、應樂果甜蛋白等。其中，優選阿斯巴甜、三氯蔗糖、安賽蜜。甜味物質可以僅使用1種，也可以使用2種以上的混合物。已知可通過將多種甜味物質混合來改善各甜味物質的實體感。在這種情況下，也可以通過組合使用用於本發明的肽或胺基酸來進一步改善實體感。作為甜味物質的優選組合，可列舉從阿斯巴甜、三氯蔗糖及安賽蜜中任選2種的組合、或這3種的組合。另外，作為優選組合的實例，可列舉阿斯巴甜與yGlu-Val-Gly的組合，所述YGlu-Val-Gly被認為可在本發明中顯示優異效果。作為具體的重量比，可以是相對於阿斯巴甜每100重量份，按照0.1500重量份的比例混合。當然，這只不過是混合實例之一，並不局限於上述比例。當然，本發明的甜味劑也可以進一步與蔗糖、葡萄糖、果糖及糖醇類(赤蘚醇、麥芽糖醇等)等常規甜味劑混合。作為本發明的甜味劑的形式，可以是粉末、顆粒、液體等，對其物性沒有限制。實施例以下，結合實施例對本發明進行更加詳細的說明，但本發明的範圍不受這些實施例的限制。〔參考例1〕4丐受體基因(cRNA)的製備鈣受體基因的製備按下述方式進行。基於在NCBI登記的DNA序列(鈣受體NM—000388)製備了用於PCR的合成寡聚DNA(正向引物(SEQIDNO:l)和反向引物(SEQIDNO:2))。以來自於人腎臟的cDNA(Clontech公司製造)作為材料，使用所述引物及PfuultraDNAPolymerase(Stratagene公司製造)在下述條件下進行了PCR。在94。C下反應3分鐘後，將94。C下30秒、55。C下30秒、72。C下2分鐘的反應循環重複進行35次，然後，再使反應在72。C下進行7分鐘。通過進行瓊脂糖電泳、再用DNA染色劑染色後進行紫外線照射來檢測經過PCR是否實現了擴增。並通過與同時進行了電泳的大小已知的DNA標準物進行比較來確認PCR產物的鏈長。利用限制酶EcoRV(Takara公司製造)切割質粒載體pBR322。使用LigationKit(Promega公司製造)將經過PCR擴增得到的基因片段連接在上述質粒的切割部位。利用該反應溶液轉化大腸桿菌DH5a菌抹，並選擇出攜帶克隆有PCR擴增產物的質粒的轉化體。通過DNA鹼基序列分析確認了PCR擴增產物。以該重組質粒為模板、使用cRNA製備試劑盒(Ambion公司)製備了鈣受體基因的cRNA。〔參考例2〕各種樣品的製備作為L型胺基酸樣品，分別使用了23種特級胺基酸丙氨酸、精氨酸、天冬醯胺、天冬氨酸、半胱氨酸、穀氨醯胺、穀氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、曱硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、鳥氨酸、牛磺酸(上述均來自味之素林式會社)、羥脯氨酸(NakaraiTesque抹式會社)。D-Cys、D-Trp(NakaraiTesque株式會社)及氯化釣，使用了特級品。此外，作為肽樣品，使用了Y-Glu-Cys-Gly(SigmaAldrichJapan林式會社)、Y-Glu-Cys(SNO)-Gly(林式會社同仁化學研究所)、y-Glu-Ala(BachemFeinchemikalienAG)、丫-Glu-Gly(BachemFeinchemikalienAG)、■y-Glu-Cys(SigmaAldrichJapan林式會社)、y-Glu-Met(BachemFeinchemikalienAG)、y-Glu-Abu-Gly(Abu:a-氨基丁酸，BachemFeinchemikalienAG)、Y-Glu-Thr(國產化學株式會社)、Y-Glu-Val(國產化學林式會社)、y-Glu-Leu(委託合成產品)、Y-Glu-Ile(委託合成產品)、Y-Glu-Om(國產化學抹式會社)、Asp-Gly(委託合成產品)、Cys-Gly(委託合成產品)、Cys-Met(委託合成產品)、Glu-Cys(委託合成產品)、Gly-Cys(委託合成產品)、Leu-Asp(委託合成產品)、Y-Glu-Val-Val(委託合成產品)、Y-Glu-Val-Glu(委託合成產品)、y-Glu-Val-Lys(委託合成產品)、y-Glu-y-Glu-Val(委託合成產品)、Y-Glu-Gly-Gly(委託合成產品)、y-Glu-Val-Phe(委託合成產品)、y-Glu-Val-Ser(委託合成產品)、y-Glu-Val-Pro(委託合成產品)、Glu-Val-Arg(委託合成產品)、y-Glu-Val-Asp(委託合成產品)、Y-Glu-Val-Met(委託合成產品)、y-Glu-Val-Thr(委託合成產品)、y-Glu-Val-His(委託合成產品)、y-Glu-Val-Asn(委託合成產品)、Y-Glu-Val-Gln(委託合成產品)、y-Glu-Val-Cys(委託合成產品)、Y-Glu-Val-Om(委託合成產品)、y-Glu-Ser-Gly(委託合成產品)。穀氨醯胺、半胱氨酸在使用時製備，其它樣品製備後在-20。C下保存。肽使用了純度在90%以上的樣品。僅Y-Glu-Cys使用了純度在80%以上的樣品。將各樣品溶解後，利用NaOH、HCl將pH值顯示酸性、鹼性的樣品溶液調節至中性附近。作為胺基酸、肽的溶解液、用於製備非洲爪蛙卵母細胞的溶液、用於培養卯母細胞的溶液，使用了具有下述組成的溶液96mMNaCl、2mMKCl、lmMMgCl2、1.8mMCaCl2、5mMHepes、pH7.2。〔參考例3〕丫-Glu-Val-Gly的合成將Boc-Val-OH(8.69g,40.0mmol)和Gly陽OBzl.HC1(8.07g，40.0mmol)溶解在二氯曱烷(100ml)中，並在0。C下保存該溶液。向該溶液中添加三乙胺(6.13ml，44.0mmol)、HOBt(l-羥基苯並三唑，6.74g,44.0mmol)及WSC.HCl(l-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(l-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideHydrochloride),8.44g,44.0mmol)，並在室溫下攪拌過夜。對反應液進行減壓濃縮後，將殘餘物溶解在乙酸乙酯(200ml)中。利用水(50ml)、5%杆檬酸水溶液(50mlx2次)、飽和食鹽水(50ml)、5。/。碳酸氫鈉水溶液(50mlx2次)、飽和食鹽水(50ml)對溶液進行清洗。用無水硫酸鎂乾燥有機層，過濾除去硫酸鎂，並對濾液進行減壓濃縮。用乙酸乙酯-正己烷對殘餘物進行重結晶，從而獲得了Boc-Val-Gly-OBzl(13.2g，36.2mmol)的白色晶體。將Boc-Val-Gly-OBz1(5.47g,15.0mmol)添加到4N-HCl/二噁烷溶液(40ml)中，在室溫下攪拌50分鐘。進行減壓濃縮除去二噁烷後，向殘餘物中添加正己烷(30ml)並進行減壓濃縮。重複該操作3次，從而定量地獲得了H-Val-Gly-OBzl'HCl。將上述H-Val-Gly-OBzl.HCl和Z-Glu-OBz1(5.57g，15.0mmol)溶解在二氯甲烷(50ml)中，並在0。C下保存該溶液。向該溶液中添加三乙胺(2.30ml，16.5mmo1)、HOBt(l-羥基苯並三唑，2.53g,16,5mmol)及WSC.HCl(l-乙基-(3-二曱基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，3.16g，16.5mmo1)，並在室溫下攪拌兩天。對反應液進行減壓濃縮後，將殘餘物溶解在經過加熱的乙酸乙酯(1500ml)中。利用水(200ml)、5%檸檬酸水溶液(200mlx2次)、飽和食鹽水(150ml)、5%碳酸氬鈉水溶液(200mlx2次)、飽和食鹽水(150ml)對溶液進行了清洗。用無水硫酸鎂乾燥有機層，過濾除去硫酸鎂，並對濾液進行減壓濃縮。過濾析出的晶體，並進行減壓乾燥，從而獲得了Z-Glu(Val-Gly-OBzl)-OBzl的白色晶體(6.51g,10.5mmol)。將上述Z-Glu(Val-Gly-OBzl)-OBz1(6.20g,10.03mmol)懸浮在乙醇(200ml)中，並添加10。/。的載鈀碳(八，^夕厶炭素)(1.50g)，在氫氣氣體氛圍中、55。C下進行了5小時還原反應。在此期間，緩慢添加總量達IOOml的水。用桐山漏鬥進行過濾除去催化劑，並對濾液進行減壓濃縮直至達到原濾液的一半量。進一步用膜濾器過濾反應液，並對濾液進行減壓濃縮。將殘餘物溶解在少量水中之後，加入乙醇以使晶體析出，過濾收集晶體，並對該晶體進行減壓乾燥，從而獲得了y-Glu-Val-GIy的白色粉末(2.85g,9.40mmol)。ESI-MS:(M+H)+=304.1.'H-NMR(400MHz，D20)5(ppm):0.87(3H,d，J=6.8Hz),0.88(3H，d，J=6.8Hz)，1.99-2.09(3H,m),2.38-2.51(2H,m),3.72(1H，t，J=6.35Hz),3.86(1H,d，J=17.8Hz)，3.80(1H,d，J=17.8Hz),4.07(1H，d，J=6.8Hz).〔參考例4〕Y-Glu-Cys(S-Me)-Gly的合成[Cys(S-Me):S-曱基半胱氨酸]將還原型穀胱甘肽(15.0g,48.8mmol)添加到水(45ml)中，在向水溶液中鼓入氮氣的同時，少量多次地添加氫氧化鈉(4.52g，2.2當量，107mmol)。添加碘代曱烷(4.56ml，1.5當量，73mmol)後，進行密閉，在室溫下進行了2小時攪拌。利用濃鹽酸將反應液的pH值調節至23，並添加乙醇(150ml),在冷藏室(冷蔵庫)中保存過夜。由於油狀物質發生了分離，因而去除上清液。將殘餘的油狀物質溶解於水中並緩緩添加乙醇時，油狀物質析出並伴有部分結晶，因此，再次去除上清液。將殘餘物溶解在水(300ml)中，使其吸附在填充有離子交換樹脂(Dowexl-acetate，400ml)的柱中並進行水洗後，用1N的乙酸水溶液進行洗脫。對洗脫液進行減壓濃縮後，利用水-乙醇使其再沉澱，從而獲得了Y-Glu-Cys(S-Me)-Gly的白色粉末(5.08g,15.8mmo1)。FAB-MS:(M+H)+=322.'H-NMR(權MHz,D20)S(ppm):2.14(3H,s)，2.15-2.22(2H,m)，2.50-2.58(2H，m)，2.86(1H，dd，J=9.0Hz,J=14.0Hz)，3.03(1H，dd，J=5.0Hz，J=14.0Hz)，3.84(1H,t，J=6.5Hz)，3,99(2H,s),4.59(1H,dd,J=5.0Hz,J=9.0Hz).〔參考例5〕其它肽的合成基於參考例3及參考例4的方法合成了y-Glu-Met(O)、y-Glu-Val-NH2、y-Glu-Val-ol、y-Glu-Ser、？Glu-Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu-t-Leu、Y-Glu-Cys(S-烯丙基)-Gly、Y-Glu-Cys(S-Me)。〔參考例6〕對鈣受體激活作用的評價為了評價鈣受體的激活作用，採用了Ca濃度離子依賴性CI離子電流測定法，其中，該方法使用了非洲爪蛙卵母細胞表達系統。在向表達鈣受體的非洲爪蛙卵母細胞中添加各種激活劑時，細胞內的Ca離子增加。之後，Ca濃度離子依賴性Cl通道開啟，胞內電流值作為離子電流發生變化。通過測定該胞內電流值的變化，可獲知鈣受體的激活作用存在與否。具體而言，在剖開非洲爪蛙腹部並取出卯塊(卵塊)後，通過使用1%的膠原酶溶液在20。C下進行2小時處理而得到了各個卵母細胞。在利用微玻璃毛細管向每個卵母細胞中導入l|ug/|La受體cRNA50nl或滅菌水50nl後，在18。C下培養了23天。進行培養時，使用了通過向記載在參考例2中的溶液中添加2mM丙酮酸、1OU/ml青黴素及1Opg/ml鏈黴素而得到的溶液。在培養之後，將測試溶液添加到導入了cRNA的卯母細胞中或導入了滅菌水的卵母細胞中。使用放大器Geneclamp500(Axon公司製造)及記錄用軟體AxoScope9.0(Axon公司製造)進行了電生理學測定。利用雙電極膜電壓箝位法(2電極膜電位固定法)將卵母細胞的膜電壓箝位在-70mV,並測定了Ca濃度離子依賴性CI離子介導的胞內電流。將胞內電流的最大值視為響應電流值。〔參考例7〕對鈣的釣受體激活作用的評價採用記載在參考例6中的方法評價了4丐對4丐受體的激活作用。即，製備導入了4丐受體cRNA或滅菌水的卵母細胞後，利用雙電極膜電壓箝位法將膜電壓箝位在-70mV。向經過膜電壓箝位的卵母細胞中添加鈣(2mM、5mM、10mM、20mM)，測定了Ca濃度離子依賴性Cl響應電流。結果如圖l所示。由該結果可確認，導入到卵母細胞中的鈣受體cRNA實現了功能性表達。此外，由於導入了水的卵母細胞即使對高濃度的鈣也無響應，因而可確認卵母細胞本身沒有表達釣受體。〔參考例8〕對L型胺基酸的鈣受體激活作用的評價採用記載在參考例6中的方法評價了L型胺基酸對鈣受體的激活作用。即，製備導入了鈣受體cRNA或滅菌水的卵母細胞後，利用雙電極膜電壓箝位法將膜電壓箝位在-70mV。向經過膜電壓箝位的卯母細胞中添加丙氨酸(10mM)、精氨酸(10mM)、天冬醯胺(10mM)、天冬氨酸(10mM)、半胱氨酸(10mM)、穀氨醯胺(10mM)、穀氨酸(10mM)、甘氨酸(10mM)、組氨酸(10mM)、異亮氨酸(10mM)、亮氨酸(10mM)、賴氨酸(10mM)、曱硫氨酸(10mM)、苯丙氨酸(10mM)、脯氨酸(10mM)、絲氨酸(10mM)、蘇氨酸(10mM)、色氨酸(10mM)、酪氨酸(10mM)、纈氨酸(10mM)、鳥氨酸(10mM)、牛磺酸(10mM)、或羥脯氨酸(10mM),測定了Ca濃度離子依賴性Cl響應電流。結果如圖2所示。由該結果可知，半胱氨酸、組氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸對鈣受體具有顯著的激活作用。並且，對於上述胺基酸，其激活作用在ProcNatlAcadSciUSA.2000Apr25;97(9):4814-9中有所報導。〔參考例9〕對D-半胱氨酸的鈣受體激活作用的評價採用記載在參考例6中的方法評價了D-半胱氨酸對4丐受體的激活作用。即，製備導入了鈣受體cRNA或滅菌水的卵母細胞後，利用雙電極膜電壓箝位法將膜電壓箝位在-70mV。向經過膜電壓箝位的卵母細胞中添加D-半胱氨酸(10mM)、L-半胱氨酸(10mM)、D-色氨酸(10mM)或L-色氨酸(10mM)，測定了Ca濃度離子依賴性Cl響應電流。結果如圖3所示。由該結果可知，D-半胱氨酸對鈣受體具有顯著的激活作用。〔參考例10〕對肽的鈣受體激活作用的評價採用記載在參考例6中的方法評價了肽對4丐受體的激活作用。即，製備導入了鈣受體cRNA或滅菌水的卵母細胞後，利用雙電極膜電壓箝位法將膜電壓箝位在-70mV。向經過膜電壓箝位的卵母細胞中添加Y-Glu-Cys-Gly(50)uM)、y-Glu-Cys(SNO)-GIy(50|iiM)、y-Glu-Ala(50jiM)、Y-Glu-Gly(500)iM)、Y-Glu-Cys(50|LiM)、丫-Glu-Met(500iaM)、y-Glu-Thr(50faM)、Y-Glu-Val(50(iM)、y-Glu-Om(500(^M)、Asp-Gly(lmM)、Cys-Gly(lmM)、Cys-Met(lmM)、Ghi-Cys(50pM)、Gly-Cys(500pM)、Leu-Asp(lmM)，測定了Ca濃度離子依賴性Cl響應電流。結果如圖4所示。由該結果可知，上述肽對4丐受體具有激活作用。〔參考例11〕對肽的釣受體激活作用的評價按照與參考例IO相同的方法評價了肽對鉀受體的激活作用。向經過膜電壓箝位的卵母細胞中分別以1000|liM、300jiM、lOO(iiM、30(iM、10|liM、3pM、ljiM、0.3pM、O.l(aM添加表1所示的各種肽，測定了Ca濃度離子依賴性Cl響應電流。將能夠檢測到電流的最低濃度作為活性示於表1中。由該結果可知，上述的32種肽對4丐受體具有激活作用。tableseeoriginaldocumentpage23Thr、His、Orn、Asn、Cys或Gln)、y-Glu-Ala、y畫Glu-Gly、y-Glu-Cys、y-Glu-Met、Y-Glu-Thr、y-Glu-Val、y-Glu-Om、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、y-Glu畫Met(O)、y隱Gl葉Glu-Val、y-Glu-Val-NH2、Y-Glu-Val-ol、y-Glu-Ser、y-Glu畫Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu-Leu、y-Glu-Ile、Y-Glu-t-Leu及Y-Glu隱Cys(S-Me)。按照下述方法進行了感官評價試驗。向含有穀氨酸鈉(0.05g/dl)、肌普一磷酸(0.05g/dl)、氯化4丐(lmM)的蒸餾水中分別以0.2g/dl混合下述樣品蒜氨酸(alliin:S-烯丙基-半胱氨酸亞碸，作為賦予kokumi的活性的對照)、Y-Glu-Cys-Gly、？Glu-Cys、Y-Glu-Ala、或y-Glu-Val,並對此時各樣品是否具有賦予kokumi的活性做出判斷。其中，對於樣品溶解後呈酸性的樣品，利用NaOH將pH調節至6.87.2後進行^f吏用。結果如表2所示。鈣受體激活劑l武予kokumi的活性4丐受體激活劑賦予kokumi的活性YGlu-Cys-Gly+■yGlu-Cys+■yGlu-Ala+"YGlu-Val+〔參考例13〕用於本發明的肽的賦予kokumi的活性針對確認了鈣受體激活作用的肽，利用定量感官評價試驗研究了它們賦予kokumi的活性的強度。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。向含有穀氨酸鈉(0.05g/dl)、肌苷一磷酸(0.05g/dl)、氯化鈉(0.5g/dl)的蒸餾水分別以O.lg/dl混合下述樣品Y-Glu-Cys-Gly(穀胱甘肽)、y-Glu-Ala、y-Glu-Met、或，Glu-Val，並對此時各樣品的賦予kokumi的活性的強度進行了測定。其中，對於樣品溶解後呈酸性的樣品，利用NaOH將pH調節至6.87.2後使用。另外，由於已知穀胱甘肽可為食品賦予kokumi，因此將其用於比較對照。在感官評分中，以對照樣品為0分、添加了穀胱甘肽的樣品為3分、並以n=3進行了實驗，結果如表3所示。其中，所謂的"前中味，，是前味和中味的合併。[表3]tableseeoriginaldocumentpage25〔參考例14〕用於本發明的肽的賦予kokumi的活性針對確認了鈣受體激活作用的肽，利用定量感官評價試驗研究了它們賦予kokumi的活性的強度。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。向含有穀氨酸鈉(0.05g/dl)、肌苷一磷酸(0.05g/dl)、氯化鈉(0.5g/dl)的蒸餾水中分別以0.1g/dl、或根據需要以0.01g/dl混合下述樣品y-Glu-Cys-Gly(穀胱甘肽)、y-Glu-Cys、y-Glu-Val、或Y-Glu-Val-Gly,並對此時各樣品的賦予kokumi的活性的強度進行了測定。其中，對於樣品溶解後呈酸性的樣品，利用NaOH將pH調節至6.87.2後使用。在感官評分中，以對照樣品為O分、添加了穀胱甘肽的樣品為3分、並以n-5進行了實驗，結果如表4所示。tableseeoriginaldocumentpage25tableseeoriginaldocumentpage26*不可測定賦予kokumi的活性過強而無法通過感官評價來測定〔參考例15〕用於本發明的肽的賦予kokumi的活性針對確認了4丐受體激活作用的肽，利用定量感官評價試驗研究了它們賦予kokumi的活性的強度。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。向含有穀氨酸鈉(0.05g/dl)、肌苦一磷酸(0.05g/dl)、氯化鈉(0.5g/dl)的蒸餾水中分別以O.lg/dl或O.Olg/dl混合下述樣品Y-Glu-Cys-Gly(穀胱甘肽)、y-Glu-Abu-Gly、或y-Glu-Val-Gly,並對此時各樣品的賦予kokumi的活性的強度進行了測定。其中，對於樣品溶解後呈酸性的樣品，利用NaOH將pH調節至6.87.2後使用。在感官評分中，以對照樣品為0分、添加了穀胱甘肽的樣品為3分、並以n=12進行了實驗，結果如表5所示。tableseeoriginaldocumentpage26〔實施例1〕用於本發明的化合物對甜味的活性(I)針對確認了4丐受體激活作用和賦予kokumi的活性的肽，利用定量感官評價試驗考察了它們對於典型的高甜度甜味劑的活性(改善實體感、改善苦味)。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。使用下述溶液作為各甜味劑的標準液。對下述各標準液的濃度進行調節，使它們的甜度基本達到同等程度。i)蔗糖(5g/dl)ii)APM(0.025g/dl)iii)三氯蔗糖(0.008g/dl)iv)Ace-K(0.025g/dl)其中，參照蔗糖對肽類相對於各高甜度甜味劑的添加效果進行了評價。向含有各甜味劑的蒸餾水中分別混合下述樣品Y-Glu-Cys-Gly(穀胱甘肽)、Y-Glu-Val-Gly或Y-Glu-Abu-Gly,使它們的濃度分別達到0.0001~lg/dl，並對此時各樣品對甜味的實體感改善和苦味改善的程度進行了測定。其中，對於樣品溶解後相對於未添加樣品的標準液呈酸性的樣品，利用NaOH將其pH調節至相對於標準液的pH為pH±0.2的範圍後使用。按照下述方式針對實體感改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水，未添加穀胱甘肽和/或本發明的肽的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n=12進行了實驗。當得分高於0分時，表示具有實體感改善效果。另一方面，按照下述方式針對苦味改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水，未添加穀胱甘肽和/或本發明的肽的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-l分、稍強時1分、強時2分，以n二12進行了實驗。當得分低於0分時，表示具有苦味改善效果。作為評價結果，在上述寬添加濃度範圍內顯示了活性，典型濃度下的結果如表68所示。由表6、7、8所示的結果可知本發明的肽類在濃度低於穀胱甘肽的濃度時，都可以確認到實體感提高效果。此外，還確認到本發明的肽對苦味的改善效果。綜合而言，通過添加肽類，可使實體感提高、苦味降低，從而感覺到與蔗糖相似的甜味品質。tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28〔實施例2〕用於本發明的化合物對甜味的活性(II)針對確認了鈣受體激活作用和賦予kokumi的活性的肽，利用定量感官評價試驗考察了它們對於高甜度甜味劑的典型組合產品的效果(改善實體感、改善苦味)。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。使用下述溶液作為各甜味劑的組合標準液。對下述各標準液的濃度進行調節，使它們的甜度基本達到同等程度。i)蔑糖(5g/dl)ii)APM(0.02g/dl)+Ace-K(0.005g/dl)[甜度比為APM:Ace-K=8:2]iii)三氯蔗糖(0.0058g/dl)+Ace-K(0.0075g/dl)[甜度比為三氯蔗糖Ace-K=7:3]iv)APM(0.0125g/dl)+三氯蔗糖(0.0042g/dl)[甜度比為APM:三氯蔗糖=1:1]v)APM(O.0125g/dl)+三氯蔗糖(0.0021g/dl)+Ace畫K(0.0063g/dl)[甜度比為APM:三氯蔗糖Ace-K=2:l:l]其中，參照蔗糖對添加肽類對於各高甜度甜味劑的效果進行了評價。向含有上述各甜味劑的蒸餾水中分別混合下述樣品Y-Glu-Cys-Gly(穀胱甘肽)、Y-Glu-Val-Gly或y-Glu-Abu-Gly，使它們的濃度分別達到0.0001lg/dl，並對此時各樣品對甜味的實體感改善和苦p未改善的程度進行了測定。參照蔗糖對肽類對於各高甜度甜味劑的添加效果進行了評價。其中，對於樣品溶解後相對於未添加樣品的標準液呈酸性的樣品，利用NaOH將其pH調節至相對於標準液的pH為pH±0.2的範圍後使用。按照下述方式針對實體感改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加穀胱甘肽和/或本發明的肽的情況)為0分、並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-l分、稍強時1分、強時2分，以n=12進行了實驗。當得分高於O分時，表示具有實體感改善效果。另一方面，按照下述方式針對苦味改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加穀胱甘肽和/或本發明的肽的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-l分、稍強時1分、強時2分，以n二12進行了實驗。當得分低於0分時，表示具有苦味改善效果。作為評價結果，在上述寬添加濃度範圍內顯示了活性，典型濃度下的結果如表912所示。由表9~12所示的結果可知本發明的肽類在濃度低於穀胱甘肽的濃度時，都可以確認到實體感提高效果。此外，還確認到本發明的肽對苦味的改善效果。綜合而言，通過添加肽類，可使實體感提高、苦味降低，從而感覺到與蔗糖相似的甜味品質。tableseeoriginaldocumentpage29tableseeoriginaldocumentpage30tableseeoriginaldocumentpage31用NaOH將其pH調節至相對於標準液的pH為pH±0.2的範圍後^^用。按照下述方式針對實體感改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分、並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n42進行了實驗。當得分高於O分時，表示具有實體感改善效果。另一方面，按照下述方式針對苦味改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n=12進行了實驗。當得分低於0分時，表示具有苦味改善效果。作為評價結果，在上述寬添加濃度範圍內顯示了活性，典型濃度下的結果如表1315所示。由表13~15所示的結果可知Y-Glu-Val-Gly在與西那卡塞的濃度水平相當時，即可確認到實體感提高效果。此外，還確認到本發明的樣品對苦味的改善效果。綜合而言，通過添加樣品，可使實體感提高、苦味降低，從而感覺到與蔗糖相似的甜味品質。樣品ii)APM濃度(g/dl)味感味道特徵實體感苦味對照-00-丫Glu-Val-Gly0細10.5-0.2後面殘留的甜味得到抑制，快速消失。丫Glu-Val-Gly0.0011.3-0.5後面殘留的甜味得到抑制，快速消失。西那卡塞0細10.8-0.2後面殘留的甜味得到抑制。從中味到後味具有充盈感(滿口感)。西那卡塞0.0011.5-0.5後面殘留的甜味得到抑制。從中味到後味具有充盈感(滿口感)。[表14]樣品iii)三氯蔗糖濃度(g/dl)味感味道特徵實體感苦味對照-00-yGlu-Val-Gly0扁10.7-0.1前味和後味的突出甜味協調。yGlu-Val陽Gly0.0011.3-0.2前味和後味的突出甜味協調。tableseeoriginaldocumentpage33西那卡塞，使它們的濃度分別達到0.0001~lg/dl,並對此時各樣品對甜味的實體感改善和苦味改善的程度進行了測定。參照蔗糖對樣品相對於各高甜度甜味劑的添加效果進行了評價。其中，對於樣品溶解後相對於未添加樣品的標準液呈酸性的樣品，利用NaOH將其pH調節至相對於標準液的pH為pH±0.2的範圍後使用。按照下述方式針對實體感改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分、並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n=12進行了實驗。當得分高於0分時，表示具有實體感改善效果。另一方面，按照下述方式針對苦味改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n-12進行了實驗。當得分低於0分時，表示具有苦味改善效果。作為評價結果，在上述添加濃度的寬範圍內顯示了活性，典型濃度下的結果如表1619所示。由表1619所示的結果可知，Glu-Val-Gly在與西那卡塞的濃度水平相當時，即可確認到實體感提高效果。此外，還確認到本發明的樣品對苦味的改善效果。綜合而言，通過添加樣品，可使實體感提高、苦味降低，從而感覺到與蔗糖相似的甜味品質。tableseeoriginaldocumentpage34tableseeoriginaldocumentpage34tableseeoriginaldocumentpage35〔實施例5〕用於本發明的化合物在使用了高甜度甜味劑的液態酸奶(drinkyogurt)中的活性針對確認了4丐受體激活作用和賦予kokumi的活性的肽、以及已知具有鈣受體激活作用的西那卡塞(Cinacalcet)，利用定量感官評價試驗考察了它們在使用了典型的高甜度甜味劑的液態酸奶中的活性(改善實體感、改善苦味)。按照下述方法進行了定量感官評價試驗。使用下述溶液作為使用了各甜味劑的液態酸奶的標準液。對下述各標準液的濃度進行調節，使它們的甜度基本達到同等程度。i)蔗糖(5g/dl)ii)APM(0.025g/dl)其中，參照蔗糖對添加樣品對於各高甜度甜味劑的效果進行了評價。向含有各甜味劑的液態酸奶中分別混合下述樣品Y-Glu-Val-Gly或西那卡塞，使它們的濃度分別達到0.0001~lg/dl，並對此時各樣品對甜味的實體感改善和苦味改善的程度進行了測定。其中，對於樣品溶解後相對於未添加樣品的標準液呈酸性的樣品，利用NaOH將其pH調節至相對於標準液的pH為pH±0.2的範圍後使用。按照下述方式針對實體感改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分、並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n=12進行了實驗。當得分高於0分時，表示具有實體感改善效果。另一方面，按照下述方式針對苦味改善效果進行了感官評價以對照樣品(僅添加蒸餾水、未添加樣品的情況)為0分，並以相對於對照樣品，弱時-2分、稍弱時-1分、稍強時1分、強時2分，以n-12進行了實驗。當得分低於0分時，表示具有苦味改善效果。作為評價結果，在上述寬添加濃度範圍內顯示了活性，典型濃度下的結果如表20所示。由表20所示的結果可知Y-Glu-Val-Gly在與西那卡塞的濃度水平相當時，即確認到實體感提高效果。此外，還確認到本發明的樣品對苦味的改善效果。綜合而言，通過添加樣品，可使實體感提高、苦味降低，從而感覺到與蔗糖相似的甜味品質。[表20]tableseeoriginaldocumentpage37工業實用性通過在甜味劑、尤其是阿斯巴甜等高甜度甜味劑中組合使用具有鈣受體激活作用的化合物、優選胺基酸或肽，可使阿斯巴甜等高甜度甜味劑的實體感及苦味得以改善。進而，甜味的實體感及苦味得到了改善的本發明的甜味劑可以在以飲料、冰點心等為代表的整個食品領域得到廣泛應用。另外，具有鈣受體激活作用的化合物可作為一種能夠改善甜味劑、尤其是高甜度甜味劑的實體感、苦味的添加劑得以廣泛應用。權利要求1.一種甜味劑，其包含甜味物質和具有鈣受體激活作用的化合物。2.根據權利要求1所述的甜味劑，其中，所述化合物為選自下組中的1種或2種以上的胺基酸或肽y-Glu-X-Gly、y-Glu-Val-Y、y-Glu-Ala、y-Glu-Gly、Y-Glu-Cys、y-Glu-Met、y-Glu-Thr、丫-Glu畫Val、y-Glu-Om、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D畫Cys、丫陽Glu-Met(O)、y-Glu卞Glu-Val、Y-Glu-Val-NH2、y-Glu-Val-ol、y-Glu-Ser、y-Glu-Tau、y-Glu-Cys(S-Me)(O)、y-Glu隱Leu、y-Glu-Ile、Y-Glu-t匿Leu及y畫Glu-Cys(S-Me),所述X代表胺基酸或胺基酸衍生物，所述Y代表胺基酸或胺基酸衍生物。3.根據權利要求2所述的甜味劑，其中，所述X為Cys(SNO)、Cys(S-烯丙基)、Gly、Cys(S-Me)、Abu、t-Leu、Cle、Aib、Pen或Ser，所述Y為Gly、Val、Glu、Lys、Phe、Ser、Pro、Arg、Asp、Met、Thr、His、Om、Asn、Cys、Gln、GlyA或LacA。4.根據權利要求2或3所述的甜味劑，其中，所述化合物選自y-Glu-Val-Gly和Y-Glu-Abu-Gly。5.根據權利要求14中任一項所述的甜味劑，其中，甜味物質為選自下組中的l種或2種以上阿斯巴甜、三氯蔗糖、安賽蜜、紐甜、N-[N-[3-(3-羥基—4-曱氧基苯基)丙基]-a-天冬氨醯基]-L-苯丙氨酸l-曱基酯、糖精、甜菊糖、甘草甜素、奇甜蛋白以及應樂果甜蛋白。6.—種用來添加到甜味物質中以改善甜味物質的實體感的添加劑，該添加劑中包含具有釣受體激活作用的化合物。7.—種用來添加到甜味物質中以改善甜味物質的苦味的添加劑，該添加劑中包含具有鈣受體激活作用的化合物。全文摘要本發明通過將阿斯巴甜、三氯蔗糖、安賽蜜等甜味物質和γ-Glu-X-Gly(X代表胺基酸或胺基酸衍生物)、γ-Glu-Val-Y(Y代表胺基酸或胺基酸衍生物)、γ-Glu-Ala、γ-Glu-Gly、γ-Glu-Cys、γ-Glu-Met、γ-Glu-Thr、γ-Glu-Val、γ-Glu-Orn、Asp-Gly、Cys-Gly、Cys-Met、Glu-Cys、Gly-Cys、Leu-Asp、D-Cys、γ-Glu-Met(O)、γ-Glu-γ-Glu-Val、γ-Glu-Val-NH2、γ-Glu-Val-ol、γ-Glu-Ser、γ-Glu-Tau、γ-Glu-Cys(S-Me)(O)、γ-Glu-Leu、γ-Glu-Ile、γ-Glu-t-Leu及γ-Glu-Cys(S-Me)等具有鈣受體激活作用的胺基酸或肽等混合來改善甜味劑的實體感。文檔編號A23L1/22GK101677610SQ20088001529公開日2010年3月24日申請日期2008年5月1日優先權日2007年5月8日發明者宮村直宏,江藤讓,脊黑勝也,長崎浩明申請人:味之素株式會社