幹細胞篩選系統、其製備方法及幹細胞的篩選方法
2023-05-30 15:55:21 1
專利名稱：幹細胞篩選系統、其製備方法及幹細胞的篩選方法
技術領域：
本發明屬於幹細胞篩選技術領域，尤其涉及一種幹細胞篩選系統、其製備方法及幹細胞的篩選方法。
背景技術：
間充質幹細胞(mesenchymal stem cells, MSC)是來源於中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體幹細胞，廣泛存在於人體結締組織和器官間質中。間充質幹細胞具有高分化性能，在不同的誘導條件下能分化成成熟的間質細胞，如成骨細胞、成軟骨細胞、脂肪細胞、肌腱細胞、網狀細胞、血管內皮細胞等。作為進行組織工程研究的重要種子細胞，間充質幹細胞在骨及軟骨組織損傷的修復、肌肉組織退行性疾病、冠心病等疾病的治療方面具有良好的應用前景。現有技術公開了多種間充質幹細胞的篩選方法，如密度梯度離心法、全血貼壁法、 流式分選法和免疫磁珠篩選法等，其中，篩選軟骨幹細胞的方法主要有流式分選法、免疫磁珠篩選法和瓊脂糖篩選法。瓊脂糖篩選法主要包括以下步驟將含有一定細胞量的DEME/ F12培養液與等體積的2%低熔點瓊脂糖充分混合，使細胞在瓊脂糖篩選系統中成為單細胞狀態；瓊脂糖的濃度達到後，將篩選系統在4°C下靜置IOmin凝固；然後加入DEME/ F12培養液，於溫箱中培養3周 6周；最後在倒置顯微鏡下提取細胞克隆團，即可得到軟骨幹細胞。瓊脂糖篩選法不僅操作過程繁瑣、篩選時間長，而且需要嚴格控制篩選條件，即便嚴格控制篩選條件，由於需要在倒置顯微鏡下提取細胞克隆團，在提取過程中軟骨幹細胞易受汙染、純度較低。流式分選法是通過流式細胞分選儀進行幹細胞篩選的方法，免疫磁珠篩選法是根據免疫學原理，利用包備有抗體的磁珠與幹細胞表面的特殊標誌特異結合後，通過一定強度磁場時被滯留而分選的方法，流式分選法和免疫磁珠篩選法能夠簡化篩選步驟，提高篩選效率，但是，由於軟骨幹細胞缺乏特異性的標誌物，採用流式分選法和免疫磁珠篩選法進行篩選得到的幹細胞純度較低；而且流式分選法和免疫磁珠篩選法需要的細胞量大，不利於篩選組織塊較小的組織。另外，流式分選法和免疫磁珠篩選法需要特定設備儀器和抗體試劑，篩選成本較高。
發明內容
有鑑於此，本發明要解決的技術問題在於提供一種幹細胞篩選系統、其製備方法及幹細胞的篩選方法，本發明提供的篩選方法無需特定儀器設備和抗體試劑，流程簡單、操作簡便，得到的幹細胞純度高。本發明提供了一種幹細胞篩選系統，包括固體支持物；塗布在所述固體支持物上的纖維連接蛋白和牛血清白蛋白。本發明還提供了一種上述技術方案所述的幹細胞篩選系統的製備方法，包括以下步驟將纖維連接蛋白與緩衝溶液混合，得到纖維連接蛋白溶液；將所述纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物中進行孵育，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物；向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物中加入牛血清白蛋白，得到幹細胞篩選系統。優選的，所述纖維連接蛋白溶液的濃度為5 μ g/mL 20μ g/mL。優選的，所述孵育的溫度為0°C 5°C，所述孵育的時間為IOh以上。本發明還提供了一種幹細胞的篩選方法，包括以下步驟a)提供軟骨終板細胞重懸液；b)將所述軟骨終板細胞重懸液加入到權利要求1 5任意一項所述的幹細胞篩選系統中進行孵育，得到幹細胞。優選的，所述步驟b)中，所述軟骨終板細胞終濃度為200個細胞/cm2 600個細胞 /cm2。優選的，所述步驟b)中，所述孵育的溫度為35°C 38°C，所述孵育的時間為 5min 30mino優選的，所述步驟a)具體包括al)用膠原酶將軟骨終板進行消化，離心後得到軟骨終板細胞團；a2)用DMEM/F12培養液對所述軟骨終板細胞團進行重懸，得到軟骨終板細胞重懸液。優選的，還包括對所述幹細胞進行擴大培養。優選的，採用含有5wt% 20wt%胎牛血清的DMEM/F12培養液對所述幹細胞進行擴大培養。與現有技術相比，本發明將纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物上進行孵育，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物；向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物加入牛血清白蛋白後，得到幹細胞篩選系統；將軟骨終板細胞重懸液加入到所述幹細胞篩選系統中進行孵育，即可篩選、分離得到幹細胞。本發明提供的幹細胞篩選系統中包括纖維連接蛋白，纖維連接蛋白能夠增加幹細胞貼壁能力，從而將幹細胞與其他細胞分離。本發明提供的篩選方法無需使用大型儀器設備，無需進行相關抗體的標記，流程簡單、操作簡便、成本較低。本發明提供的篩選方法進行幹細胞篩選後，無需進行離心、漂洗等後處理，減少了幹細胞受到汙染的可能性。另外，通過本發明提供的方法進行篩選後得到的未貼壁細胞懸液還可以繼續篩選，從而避免細胞浪費，適於組織取材少、細胞需要量大的幹細胞的篩選。實驗表明，採用本發明提供的篩選方法對軟骨終板幹細胞進行篩選後，將得到的幹細胞擴大培養2周後，幹細胞標誌物FGFR3的含量由5%上升至40% ；幹細胞標誌物 ⑶105的含量由5%上升至85% ；幹細胞標誌物STR0-1的含量由7%上升至95%。
圖1為經過篩選系統篩選後擴大培養2周的細胞形成的克隆團；
圖2為經過本篩選系統篩選後擴大培養2周的細胞呈纖維細胞樣平行排列生長；圖3為本發明實施例軟骨終板細胞重懸液在篩選前成雜亂樣無規則貼壁生長；圖4為篩選前FGFR3的表達量；圖5為篩選後FGFR3的表達量圖6為篩選前⑶105的表達量；圖7為篩選後⑶105的表達量；圖8為篩選前STR0-1的表達量；圖9為篩選後STR0-1的表達量；圖10為篩選前後幹細胞表面標記物的百分含量柱狀圖；圖11為本發明實施例提供的幹細胞的成骨誘導結果；圖12為本發明實施例提供的幹細胞的成脂誘導結果；圖13為本發明實施例提供的幹細胞的成脂誘導油紅染色結果；圖14為本發明實施例提供的幹細胞的成軟骨誘導結果；圖15為本發明實施例提供的幹細胞的成軟骨誘導後形成的軟骨基質。
具體實施例方式本發明提供了一種幹細胞篩選系統，包括固體支持物；塗布在所述固體支持物上的纖維連接蛋白和牛血清白蛋白。本發明還提供了上述技術方案所述的幹細胞篩選系統的製備方法，包括以下步驟將纖維連接蛋白與緩衝溶液混合，得到纖維連接蛋白溶液；將所述纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物中進行孵育，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物；向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物中加入牛血清白蛋白，得到幹細胞篩選系統。纖維連接蛋白是一種大分子糖蛋白，具有多種生物活性，廣泛存在於動物組織和組織液中。本發明對所述纖維連接蛋白沒有特殊限制，可以為從市場上購得的人纖維連接蛋白。 首先將纖維連接蛋白與緩衝溶液混合，得到纖維連接蛋白溶液。在本發明中，所述緩衝溶液優選為含有lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化鈣、濃度為lmol/L的磷酸鹽緩衝溶液。所述纖維連接蛋白溶液的濃度優選為5 μ g/mL 20 μ g/mL,更優選為10 μ g/mL 15μ g/mL。本領域技術人員可以根據所要篩選的幹細胞的特點選取合適的纖維連接蛋白溶液濃度，濃度越大，篩選需要的時間越短，但是篩選得到的幹細胞純度會受到影響。
得到纖維連接蛋白溶液後，將其過濾消毒後加入到固體支持物中進行孵育。在孵育過程中，纖維連接蛋白能夠粘附在固體支持物表面。在本發明中，所述固體支持物可以為玻璃或者塑料材質的培養瓶、培養皿等。所述纖維連接蛋白在所述固體支持物表面進行孵育的溫度優選為0°c 5°C，更優選為4°C ；所述孵育的時間優選為IOh以上，更優選為 12h 24h。
孵育完成後，除去所述固體支持物中的溶液後，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物。除掉的溶液中含有纖維連接蛋白，將該溶液回收後可以反覆利用，能夠節約試劑、 降低成本。向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物中加入牛血清白蛋白，牛血清白蛋白將纖維連接蛋白的非特異性結合位點阻斷後，即可得到幹細胞篩選系統。本發明優選向所述固體支持物中加入牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的濃度優選為0. 5% 3%。在本發明提供的幹細胞篩選系統中，纖維連接蛋白塗布於所述固體支持物上，牛血清白蛋白將纖維連接蛋白的非特異性結合位點阻斷，使所述幹細胞篩選系統篩選得到的幹細胞純度更好。本發明還提供了一種幹細胞的篩選方法，包括以下步驟a)提供軟骨終板細胞重懸液；b)將所述軟骨終板細胞重懸液加入到權利要求1 5任意一項所述的幹細胞篩選系統中進行孵育，得到幹細胞。本發明採用上述技術方案提供的篩選系統對軟骨終板細胞重懸液進行篩選，得到幹細胞。按照本發明，所述軟骨終板細胞重懸液優選按照以下方法製備用膠原酶將軟骨終板進行消化，離心後得到軟骨終板細胞團；用DMEM/F12培養液對所述軟骨終板細胞團進行重懸，得到軟骨終板細胞重懸液。本發明採用臨床獲取的退變的椎間盤軟骨終板，首先用0. 01mol/L的PBS清洗， 將其裁剪為碎塊，所述碎塊優選為Imm3 ；然後用膠原酶將所述軟骨終板碎塊進行消化，將得到的消化液過濾、離心後得到軟骨終板細胞團。本發明優選以II型膠原酶對所述軟骨終板進行消化，進行消化的溫度優選為35°C 38°C，時間優選為IOh Mh ；本發明優選以150 目 250目的篩網對所述消化液進行過濾以減少細胞粘連；本發明優選以800轉/IOmin 1200轉/IOmin的轉速對經過過濾後的消化液進行離心，棄去上清液後，得到軟骨終板細胞團。採用DMEM/F12培養液對所述軟骨終板細胞進行重懸，得到軟骨終板細胞重懸液。 本發明優選採用不含血清的DMEM/F12培養液對所述軟骨終板細胞進行重懸。得到軟骨終板細胞重懸液後，將所述軟骨終板細胞重懸液加入到上述技術方案所述的幹細胞篩選系統中進行孵育，所述軟骨終板細胞重懸液中的幹細胞在纖維連接蛋白的作用下貼壁，從而實現與其他細胞的分離。按照本發明，將所述軟骨終板細胞重懸液加入到所述幹細胞篩選系統中厚，所述軟骨終板細胞的終濃度優選為200個細胞/cm2 600個細胞/cm2，更優選為250個細胞/ cm2 550個細胞/cm2，最優選為300個細胞/cm2 500個細胞/cm2。按照本發明，所述軟骨終板細胞重懸液在所述幹細胞篩選系統中進行孵育的溫度優選為35°C 38°C，更優選為37°C ；時間優選為5min 30min，更優選為IOmin 25min。 在進行孵育的過程中，根據細胞特點以及所需要的幹細胞純度要求，可以在倒置顯微鏡下觀察細胞貼壁情況，從而調整合適的孵育時間。實驗表明，孵育時間短，貼壁的幹細胞純度較高，時間長時，貼壁的幹細胞純度會下降。軟骨終板細胞重懸液在所述篩選系統中進行孵育的過程中，幹細胞在纖維連接蛋
6白的作用下貼壁，從而實現與其他細胞的分離。孵育完畢後，除去篩選系統中的液體後，即可得到幹細胞。在本發明中，除掉的液體為未貼壁細胞的懸液，可將所述懸液加入到所述幹細胞篩選系統中再次篩選，減少細胞浪費。得到幹細胞後，本發明優選還包括對所述幹細胞進行擴大培養，即將所述幹細胞置於培養液中進行培養。本發明優選採用含有5wt% 20wt%胎牛血清的DMEM/F12培養液對所述幹細胞進行擴大培養，所述擴大培養的溫度優選為35°C 38°C，更優選為37°C。擴大培養兩周後，對得到的幹細胞進行鑑定和分析，結果表明，本發明提供的篩選方法篩選得到的幹細胞能夠形成克隆團，且細胞呈纖維細胞樣平行排列生長；採用流式分選法對所述擴大培養兩周後的幹細胞進行分析，結果表明，幹細胞標誌物FGFR3的含量由5%上升至40%;幹細胞標誌物⑶105的含量由5%上升至85% ；幹細胞標誌物STR0-1的含量由7%上升至95% ；對所述擴大培養兩周後的幹細胞分別進行成骨誘導、成脂誘導和成軟骨誘導，結果表明，所述幹細胞能夠形成鈣結節，也能夠形成脂滴和軟骨基質，說明本發明篩選得到了幹細胞。與現有技術相比，本發明將纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物上進行孵育，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物；向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物加入牛血清白蛋白後，得到幹細胞篩選系統；將軟骨終板細胞重懸液加入到所述幹細胞篩選系統中進行孵育，即可篩選、分離得到幹細胞。本發明提供的幹細胞篩選系統中包括纖維連接蛋白，纖維連接蛋白能夠增加幹細胞貼壁能力，從而將幹細胞與其他細胞分離。本發明提供的篩選方法無需使用大型儀器設備，無需進行相關抗體的標記，流程簡單、操作簡便、成本較低。本發明提供的篩選方法進行幹細胞篩選後，無需進行離心、漂洗等後處理，減少了幹細胞收到汙染的可能性。另外，通過本發明提供的方法進行篩選後得到的未貼壁細胞懸液還可以繼續篩選，從而避免細胞浪費，適於組織取材少、細胞需要量大的幹細胞的篩選。為了進一步說明本發明，以下結合實施例對本發明提供的幹細胞篩選系統、其製備方法及幹細胞的篩選方法進行詳細描述。以下各實施例中所用原料均為從市場上購得。實施例1用含有ImMMgCljn ImMCaCl2的0. 1M/L磷酸鹽緩衝液(PBS)稀釋人纖維連接蛋白， 得到10 μ g/mL的纖維連接蛋白溶液，過濾消毒後於-20°C保存；篩選前一天，將所述纖維連接蛋白溶液解凍後加入到細胞培養瓶中，均勻覆蓋細胞培養瓶底，4°C過夜孵育；篩選當天， 將細胞培養瓶內的纖維連接蛋白溶液回收後，加入的牛血清白蛋白(BSA)溶液再次覆蓋細胞培養瓶，常溫放置5min，得到幹細胞篩選系統。實施例2將臨床獲取的退變的椎間盤軟骨終板用0. 01M/L的PBS清洗3次後剪成Imm3大小的碎塊，用0. 2% II型膠原酶37°C下過夜進行消化；用200目的篩網將得到的消化液過濾， 1000轉/IOmin離心後，棄去上清液，得到軟骨終板細胞團；用不含血清的DMEM/F12培養液將所述軟骨終板細胞團進行重懸，得到軟骨終板細胞重懸液；將所述軟骨終板細胞懸液加入到實施例1製備的篩選系統中，每25cm2培養瓶中放置IO4個細胞，於37°C 5% CO2溫箱中孵育IOmin ；回收細胞培養瓶中的液體，然後向所述細胞培養瓶中加入含有10%胎牛血清的DMEM/F12培養液，於37°C 5% CO2溫箱中擴大培養 2周，得到幹細胞。對所述擴大培養2周後得到的細胞進行顯微觀察，結果參見圖1、圖2和圖3，圖1 為經過篩選系統篩選後擴大培養2周的細胞形成的克隆團，由圖1可知，該細胞克隆團中細胞形態比較均一，呈纖維細胞樣；圖2為經過篩選系統篩選後擴大培養2周的細胞呈纖維細胞樣平行排列生長，由圖2可知，該細胞呈纖維細胞樣平行排列生長，並呈現漩渦狀，細胞的形態大小比較規則；圖3為軟骨終板細胞重懸液在篩選前呈雜亂樣無規則貼壁生長，由圖3可知，篩選前，軟骨終板細胞呈雜亂樣無規則貼壁生長，貼壁細胞呈現多種形態，如纖維細胞樣、多角形、短棒型等。由圖1、圖2和圖3可知，篩選前，細胞呈雜亂樣貼壁生長，並且未形成克隆團；蹄選後的細胞擴大培養後形成了克隆團，並且細胞呈纖維細胞樣平行排列生長。採用流式細胞儀(FACS)檢測幹細胞表面標記物表達量，結果參見圖4、圖5、圖6、 圖7、圖8、圖9和圖10，圖4為篩選前FGFR3的表達量，其中，曲線41為同型對照，曲線42 為FGFR3標記的陽性細胞百分數；圖5為篩選後FGFR3的表達量，其中，曲線51為同型對照， 曲線52為FGFR標記的陽性細胞百分數；圖6為篩選前⑶105的表達量，其中，曲線61為同型對照，曲線62為⑶105標記的陽性細胞百分數；圖7為篩選後⑶105的表達量，其中， 曲線71為同型對照，曲線72為CD105標記的陽性細胞百分數；圖8為篩選前STR0-1的表達量，其中，曲線81為同型對照，曲線82為STR0-1標記的陽性細胞百分數；圖9為篩選後 STR0-1的表達量，其中，曲線91為同型對照，曲線92為STR0-1標記的陽性細胞百分數；圖 10為篩選前後幹細胞表面標記物的百分含量柱狀圖，其中，101為篩選前FGFR3的含量，102 為篩選後FGFR3的含量，103為篩選前⑶105的含量，104為篩選後⑶105的含量，105為篩選前STR0-1的含量，106為篩選後STR0-1的含量。由圖4、圖5、圖6、圖7、圖8、圖9和圖10可知，採用本發明提供的方法進行篩選後，幹細胞表面標記物百分含量有明顯提高，說明本發明提供的方法篩選得到了幹細胞。將擴大培養兩周後的幹細胞在成骨誘導液中誘導21天，所述成骨誘導液包括 10 %胎牛血清、10nmol/L地塞米松、IOmmol β -甘油磷酸和0. ImmolL-抗壞血酸-2-磷酸酯；在進行誘導過程中，每周換液2次，3周後進行茜素紅染色，結果參見圖11，圖11為本發明實施例提供的幹細胞的成骨誘導結果，由圖11可見塊狀礦化結節，該礦化結節可被茜素紅染色為紅色結節。可見，所述擴大培養兩周後的幹細胞在成骨誘導液中誘導21天後形成了紅染的礦化結節，即該細胞可成功誘導成骨。將擴大培養兩周後的幹細胞在成脂誘導液中誘導72h，所述成脂誘導液包括 10 μ g/mL胰島素、1 μ mol地塞米松、500 μ moIIBMX和IOOmol吲哚美辛，然後在維持液中誘導Mh，所述維持液為含有10%胎牛血清和 ομ g/mL胰島素的DMEM/F12培養液；處理周期循環3次，最後在維持液中培養至3周，然後在倒置顯微鏡下觀察脂滴形成情況，結果參見圖12，圖12為本發明實施例提供的幹細胞的成脂誘導結果，其中的球形空泡為幹細胞經成脂誘導後形成的脂肪滴；對得到的培養物進行油紅0染色，結果參見圖13，圖13為本發明實施例提供的幹細胞的成脂誘導油紅染色結果，由圖13可知，經過成脂誘導後形成的球形空泡可被染成紅色。由圖12和圖13可知，所述擴大培養兩周後的幹細胞經過成脂誘導後， 細胞內有脂滴形成，即該細胞可成功誘導成脂。
採用micromass法進行成軟骨誘導，具體操作如下將幹細胞重懸，得到IO7個細胞/mL的幹細胞重懸液；將50 μ L幹細胞重懸液在培養皿中心靜置池，然後加入到成軟骨誘導液中誘導21天，所述成軟骨誘導液含有lOng/mLTGF-β 3、10_7mol/L地塞米松、50μ g/ mL抗壞血酸、40μ g/mL脯氨酸、100μ g/mL丙酮酸和1 100dilutedITS+Premix的低糖 DMEM ；在誘導過程中，每周換液兩次，三周後進行阿利新藍染色，結果參見圖14和圖15，圖 14為本發明實施例提供的幹細胞的成軟骨誘導結果，在成軟骨誘導過程中，細胞逐漸聚集呈球形，並脫離培養皿壁，呈漂浮生長，且外觀有光澤，經過阿新藍染色後可被染成藍色；圖 15為本發明實施例提供的幹細胞的成軟骨誘導後形成的軟骨基質，其可被阿新藍染色。由圖14和圖15可知，所述擴大培養兩周後的幹細胞在成軟骨誘導液中誘導21天後，細胞呈球形離壁漂浮生長並有軟骨基質形成，即該細胞可成功誘導成軟骨。由圖11、圖12、圖13、圖14和圖15可知，本發明提供的篩選方法得到的幹細胞經過擴大培養後能夠誘導成骨、誘導成脂、誘導成軟骨，說明通過本發明提供的方法篩選得到了幹細胞。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對於本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。
權利要求
1.一種幹細胞篩選系統，包括 固體支持物；塗布在所述固體支持物上的纖維連接蛋白和牛血清白蛋白。
2.權利要求1所述的幹細胞篩選系統的製備方法，包括以下步驟 將纖維連接蛋白與緩衝溶液混合，得到纖維連接蛋白溶液；將所述纖維連接蛋白溶液加入到固體支持物中進行孵育，得到塗布有纖維連接蛋白的固體支持物；向所述塗布有纖維連接蛋白的固體支持物中加入牛血清白蛋白，得到幹細胞篩選系統。
3.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述纖維連接蛋白溶液的濃度為 5 μ g/mL 20 μ g/mL。
4.根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於，所述孵育的溫度為0°C 5°C，所述孵育的時間為IOh以上。
5.一種幹細胞的篩選方法，包括以下步驟a)提供軟骨終板細胞重懸液；b)將所述軟骨終板細胞重懸液加入到權利要求1 5任意一項所述的幹細胞篩選系統中進行孵育，得到幹細胞。
6.根據權利要求5所述的篩選方法，其特徵在於，所述步驟b)中，所述軟骨終板細胞終濃度為200個細胞/cm2 600個細胞/cm2。
7.根據權利要求5所述的篩選方法，其特徵在於，所述步驟b)中，所述孵育的溫度為 35°C 38°C，所述孵育的時間為5min 30min。
8.根據權利要求5所述的篩選方法，其特徵在於，所述步驟a)具體包括 al)用膠原酶將軟骨終板進行消化，離心後得到軟骨終板細胞團；a2)用DMEM/F12培養液對所述軟骨終板細胞團進行重懸，得到軟骨終板細胞重懸液。
9.根據權利要求5所述的篩選方法，其特徵在於，還包括 對所述幹細胞進行擴大培養。
10.根據權利要求9所述的篩選方法，其特徵在於，採用含有5wt% 20wt%胎牛血清的DMEM/F12培養液對所述幹細胞進行擴大培養。
全文摘要
本發明提供了一種幹細胞篩選系統，包括固體支持物；塗布在所述固體支持物上的纖維連接蛋白和牛血清白蛋白。本發明還提供了一種上述技術方案所述的幹細胞篩選系統的製備方法。本發明還提供了一種幹細胞的篩選方法，包括以下步驟a)提供軟骨終板細胞重懸液；b)將所述軟骨終板細胞重懸液加入到上述技術方案所述的幹細胞篩選系統中進行孵育，得到幹細胞。本發明提供的篩選方法無需使用大型儀器設備，無需進行相關抗體的標記，流程簡單、操作簡便、成本較低。本發明提供的篩選方法進行幹細胞篩選後，無需進行離心、漂洗等後處理，減少了幹細胞受到汙染的可能性。
文檔編號C12M1/00GK102212460SQ201110106899
公開日2011年10月12日 申請日期2011年4月27日 優先權日2011年4月27日
發明者劉蘭濤, 周躍, 李長青, 熊承傑, 黃博 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院