一種紅曲製品及其在製備降血壓藥物中的應用的製作方法

2023-07-02 19:52:01

專利名稱：：一種紅曲製品及其在製備降血壓藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種紅曲發酵產物及其用途，尤其涉及-種紅曲製品及其在製備降血壓藥物中的應用。
背景技術：
：紅曲產品在我過已有上千年的歷史。"金元四大醫家"之一朱丹溪先生在《本草衍義補遺》中記載了紅曲甘、溫、無毒。主治消食活血，健脾暖胃，治赤白痢、下水谷、陳久者良。1979年日本農業大學遠滕章教授根據朱丹溪先生的中醫理論記載對紅曲具有活血功效的啟示，研究發現利用紅曲發酵後的產品對人體具有降血脂、降血壓、降血糖的功效；這引起了全世界醫學界的極大興趣和關注。近年來美國、日本、英國、泰國、韓國、比利時、法國、捷克和臺灣等國家和地區對紅曲的研究方興未艾。經現代醫學研究表明，紅曲的降血脂作用主要是洛伐它汀(Lovastation)降血壓的主要成分為Y_氨基丁酸(簡稱GABA)(Y—aminobutyricacid)及Glucosamine。除此以外，紅曲的發酵產物還有許多其它功能。如降低膽固醇，降血糖，抗菌防腐，治療血胺症，防止骨質疏鬆，預防老年痴呆症，動脈粥樣硬化引起的冠心病極其它心血管疾病等等，因此，紅曲的研究前景十分廣闊Y—氨基丁酸是由麩酸脫羧而成的一種天然非蛋白質，存在於哺乳動物的大腦、脊髓中的抑制性神經傳遞物質，對交感神經具有調節作用，因此作為紅曲酶的代謝產物有著降血壓的作用；自古以來，紅曲菌由於其含有Y—氨基丁酸(GABA)，常常被人們製成各種食品來起到降血壓保健作用，1987年Kohama等人從紅曲中分離出GABA及乙醯膽鹼具有降血壓之功效，現有技術中主要用紅曲菌來生產紅麯酒或紅曲醋，在生產紅麯酒或紅曲醋過程中產生的大量酒糟只能作為飼料，附加值極低。
發明內容本發明的目的在於提供一種紅曲製品，該紅曲製品以紅麯酒糟為原料，通過再次發酵製成，該紅曲製品不僅含有較高含量的Y—氨基丁酸，而且提高了本發明的上述技術問題是通過以下技術方案來實施的一種紅曲製品，其特徵在於該紅曲製品由下述方法製備而成，採用早秈米和紅麴黴菌種發酵製成紅曲，取紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻，發酵40200小時，烘乾，粉碎後消毒殺菌製成紅曲製品，其中紅麯酒糟、米皮、紅曲之間的重量比為1.02.0:0.51.5:0.080.15;其中上述三種原料和水的重量比為跳75150。在上述的紅曲製品中，所述的紅麴黴菌種為紅色紅麴黴菌株丹溪一l號、紅麴黴菌株丹溪一3號中的一種。紅色紅麴黴菌株丹溪一l號於2005年06月10日在中國微生物菌種保藏管理委員會保藏，保藏編號CGMCCNo.1405;本發明人已經單獨申請專利，申請號為200510061479.0;紅麴黴菌株丹溪一3號於2005年06月10日在中國微生物菌種保藏管理委員會保藏，保藏編號CGMCCNo.1407;本發明人已經單獨申請專利，申請號為200510061481.8。採用紅色紅麴黴菌株丹溪一l號進行發酵，產品的Y—氨基丁酸含量能夠達到8000mg/kg以上，採用紅麴黴菌株丹溪一3號進行發酵，產品的Y—氨基丁酸含量能夠達到4000mg/kg以上，因此，作為優選，本發明採用的紅麴黴菌種為紅色紅麴黴菌株丹溪一l號。水分含量的多少涉及到底物的濃度和紅曲的濃度，一般來講，當紅曲酶的濃度一定時，底物濃度決定著紅曲酶反應的速度，隨著底物的濃度增加而增加，當底物濃度達到一定值之後，反應速度就不會再增加，這時底物的濃度幾乎與反應速度無關。而當底物濃度充足時，如果其它條件不變，則酶反應速度在一定範圍內是隨著酶濃度的增加而增加；本發明製成功能性紅曲製品的原料是生產紅麯酒的附料一紅麯酒糟，紅麯酒糟中含有吡咯羧酸一麩酸的酸酐，紅麴黴菌種產GABA能力強，米皮中含有活性較強的GAD，二者共同作用於紅麯酒糟，使其經過二次發酵，提高了GABA的含量。本發明將紅麯酒糟、米皮、紅曲之間的重量比控制為L02.0:0.51.5:0.08~0.15;其中上述三種原料和水的重量比控制為100:75150;在一定的溫度和PH值條件下，可以使產品的Y一氨基丁酸含量達到4000rag/kg以上。在上述的紅曲製品中，所述的紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻後發酵時的溫度為3(TC5(TC，發酵時的PH值為46。Y—氨基丁酸是麩酸經穀氨酸脫羧酶(GAD)脫羧形成的代謝產物，任何一種酶對於溫度都相當敏感，GAD當然也不例外。溫度低則酶的催化作用就小，溫度升高則酶解速度就加快，但因為酶是一蛋白質，絕大多數酶在60。C時就會變性而失活。將本發明發酵時的溫度控制在3(TC5(TC，酶的催化作用最大，活力最強，酶促反應最快，最後產品的Y—氨基丁酸含量可達到4000mg/kg以上；酒糟中的麩酸以它的酸酐一一吡咯羧酸的形式存在的。在酸性條件下它易水解成麩酸，吡咯羧酸的水解是在酸性條件下進行的，因此在紅麯酒糟的二次發酵過程中控制PH值就顯得異常重要。這是其一；其二麩酸轉化成GABA是通過GAD的催化而進行的，而[H+]對酶的影響很大，酶對PH值和對溫度一樣，也相當敏感，同一種酶在不同PH值的條件下其活力是不同的。只有在最適PH條件下才會顯示其最強的活力，在吡咯羧酸與麩酸動態平衡條件下，GAD將麩酸脫羧生成GABA後，這種動態平衡就被打破，GABA生成後，麩酸的濃度就減小了。因此，水解反應就不斷向生成麩酸的方向進行。GABA的生成速度在同一溫度下取決於溶液中的PH值是多少，將本發明的PH值控制在為46範圍內GABA生成速度快，最終產品中GABA的含量可達到4000mg/kg以上，PH值太高或太低都會影響得率。作為優選，所述的紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻後發酵時間為100150小時。紅麯酒糟的發酵時間對GABA的得率有一定的影響，在發酵過程中GAD將麩酸脫羧生成GABA，隨著時間的增加而增加，但並不是無止境的。其一是隨著底物濃度的減少，在單位時間裡GABA的生成量將會逐步減少，最後停止。其二是紅麴黴菌中的脫氨酶在一定的條件下會使GABA脫氨生成丁烯酸，其三，胺基酸脫羧酶在一定的條件下也會催化相應的胺基酸脫羧而生成相應的胺，形成屍鹼，一元胺基酸脫羧生成一元胺，二元胺基酸脫羧生成二元胺，GABA是一元胺基酸，其脫羧後生成丙胺，紅麯酒糟發酵到一定時間後，GABA的含量有下降的趨勢，因此，掌握髮酵時間對GABA的得率相當重要，不然既浪費能源，又減產減收，得不償失。而本發明將發酵時間控制100150小時為最佳發酵時間，在一定的溫度和ra值控制條件下，最終得到的紅曲製品產品中GABA含量可達到4000mg/kg以上。本發明的另一個目的在於提供該紅曲製品在製備降血壓藥物中的應用，該紅曲製品中含有較高含量的GABA，人體的神經元細胞上有GABAa和GABAb兩種受體，其中GABAa受體接收GABA刺激後會抑制腎上腺素分泌兒萘酚胺，從而減弱交感神經的作用使血壓降低，此外GABA還具有活化腎功能的功能來促進血壓降低；由於普通的蔬菜、水果中的GABA含量甚微，因此無法用於製備降血壓藥物。在上述的的應用過程中，所述的紅曲製品中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克。在上述的的應用過程中，所述的紅曲製品為膠囊劑型，本發明的紅曲製品填於膠囊中就形成紅曲膠囊，採用紅曲膠囊不僅易於服用，而且攜帶方便。在上述的的應用過程中，所述的紅曲製品為丸劑，本發明的紅曲製品通過加入2%6%的明膠或豆膠後，在藥丸機中成型為紅曲丸劑。縱上所述本發明的紅曲製品具有以下優點-1、本發明利用Y—氨基丁酸較低的紅麯酒糟製成Y—氨基丁酸含量較高的紅曲製品，提高了紅麯酒糟的附加值；2、本發明的紅曲製品不僅對治療和預防高血壓可以取得意想不到的效果，而且具有輔助降血壓功能，記載動物實驗結果如下1材料和方法1.1實驗動物和檢測條件實驗用自發高血壓大鼠(S服)，雄性，清潔級，周齡10-12周，體重180—220克；實驗用SD大鼠，雄性，清潔級，體重180—220克，均由中科院上海實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號為SCXK(滬)2002-0010。實驗動物使用許可證號SYXK(浙)2005-0059。動物飼料由浙江省實驗動物中心提供，執行標準GB14924-2001。檢測環境條件，溫度範圍20-23°C，相對溼度範圍40-70%。大鼠試驗前在動物房環境中適應7天。1.2方法1.2.1劑量設計和配製實驗分自發高血壓大鼠(SHR)和正常SD大鼠試驗，S服大鼠設低、中、高三個劑量組，分別為5、10和30mg/kg體重，相當於人推薦量的5倍、10倍、30倍(人推薦量為60mg/日)，另設一個陰性對照組(H20)。正常大鼠設受試樣品高劑量組和陰性對照組(H20)。灌胃給樣品，灌胃容量按100mg/100g體重計。1.2.2實驗方法實驗前一周對受試動物採用尾脈搏法進行多次血壓測量，使其適應測壓環境。根據自發高血壓大鼠的基礎血壓值隨機分為3個劑量組和一個陰性對照組和溶劑對照組，每組10隻；根據正常SD大鼠的基礎血壓值隨機分為30mg/kg體重劑量組和一個陰性對照組，每組10隻，劑量組每天給予不同量受試物，陰性對照組給予水，經口給予4周，每周測量血壓、心率和稱體重1次。1.3實驗數據統計採用SPSS/PC11.5軟體包進行分析。2.結果2.1紅曲製品對自發高血壓大鼠體重的影響表1.紅曲製品對自發高血壓大鼠體重的影響(龍i5"Amg)tableseeoriginaldocumentpage8在整個試驗過程中，各組動物生長良好，活動正常。結果見表1，原始數據符合方差齊性要求(屍,ft05)，試驗各觀察期各劑量組體重和陰性對照組0120)比較差異均無顯著性(方差，"ft^)。2。2紅曲製品對自發高血壓大鼠血壓的影響表2.紅曲製品對自發高血壓大鼠血壓的影響(f±5%誦Hg)tableseeoriginaldocumentpage8陰性對照(H20)10201.3±9.2205.6±10.1201.4±9.8201.8±11.0201.1±10.3510201.7±1.4201.2±9.2199.7±8.9195.3±9.0200.6±8.71010201.4±9.6201.5±9.2196.6±9.9192.6±7.4188.3±8.8;3010201.9±10.199.3±10.1191.7±9.0180.9±9.7*A167.0±8.3*A,0.0040.5821.9557.94125.133p1.0000.6770.1180.0000.000。維.與微詹鋭餓#綴^;絲艦微仏熟A/YftM結果見表2，原始數據符合方差齊性要求(戶>"05")，與陰性對照組0120)比較，第3周高劑量組的血壓低於陰性對照組，差異均有顯著性(g澄驗，屍".第4周中、高劑量組的血壓均明顯低於陰性對照組，差異均有顯著性(G^t驗,，.粉。2.3紅曲製品對自發高血壓大鼠心率的影響表3.紅曲製品對自發高血壓大鼠心率的影響(fi幼，次/分)組別鼠數試驗前第l周第2周第3周第4周(mg/kg)(只)陰性對照(貼)10417.3±32.1417.9±18.3416.0±29.1415.2±20.0415.1±25.4510419.5±36.6419.3±29.6414.9±31.9415.3±20.8415.1±18.91010426.1±36.0418.8±29.3417.2±26.7414.4±20.9415.9±26.43010416.2±12.6418.2±21.3418.5±20.8417.1±22.8415.6±26.80.0180.0080.0120.0950.009tableseeoriginaldocumentpage10結果見表3，原始數據符合方差齊性要求(/^fttt)，試驗各觀察期各劑量組自發高血壓大鼠心率和陰性對照組(H20)相比差異均無顯著性(；^差分橋，亂2.4紅曲製品對正常SD大鼠體重的影響表4.紅曲製品對正常SD大鼠體重的影響(fi5^，mg)tableseeoriginaldocumentpage10在整個試驗過程中，動物生長良好，活動正常。結果見表4，原始數據符合方差齊性要求(屍,ft0^),試驗各觀察期30mg/kg劑量組大鼠體重和陰性對照組0120)比較差異均無顯著性(t檢驗，屍,ft^^)。2.5紅曲製品對正常SD大鼠血壓的影響表5.紅曲製品對正常SD大鼠血壓的影響(f土5P，mmHg)tableseeoriginaldocumentpage103010130.0±9.1130.0±8.7130.7±7.8130.4±9.2129.8±10.1t0.1510.2100.019—0.2480.0090.8820.8360.9850.8070.993結果見表5，原始數據符合方差齊性要求(屍,ft05),試驗各觀察期30mg/kg體重劑量組大鼠血壓和陰性對照組(H2〔))比較差異均無顯著性(t^^發，/^ft05)。2.6紅曲製品對正常SD大鼠心率的影響表6.紅曲製品對正常SD大鼠心率的影響(i"i諷次/分)組別鼠數試驗前第1周第2周第3周第4周(mg/kg)(只)陰性對照(H20)10376.7±22.8375.6±21.0374.3±18.0380.8±14.1378.1±14.03010378.5±19.5377.6±20.9375.6±19.1379.5±15.1377.8±16.2f-0,189-0.214-0.1570.1980.044p0.8520.8330.8770.8450.965結果見表6，原始數據符合方差齊性要求(P>d),試驗各觀察期30mg/kg體重劑量組大鼠心率和陰性對照組(H20)比較差異均無顯著性(t檢驗，P〉O.M)。具體實施方式下面通過具體實施例，對本發明的技術方案作進一步具體的說明；但本發明並不局限於這些實施例製造例1取丹溪一l號(紅色紅麴黴菌株丹溪一l號)菌種，在無菌條件下(無菌室或超淨工作檯)，用接種挑取少許菌種，轉接於已滅菌的固體麥芽糖瓊脂培養基培養皿中，置於培養箱內25"C土rC活化培養96小時。取出活化96小時的菌種，在無菌條件下，以同樣方式接入活化好的菌種到以滅菌的一級固體麥芽糖瓊脂培養基中，在25t:土rC培養96小時，即為丹溪一l號一級種子。採用500毫升玻璃三角瓶，裝入配製好的液體麥芽糖培養基100毫升，15磅滅菌30分鐘備用。取丹溪一l號一級種子，在無菌條件下，接種於裝有IOO毫升液體麥芽糖培養基500毫升玻璃三角瓶中，一級種子接種量為每個培養皿接五個三角瓶，至25t:土rC搖床培養96小時後，作為紅曲發酵二級種子液。製造例2取丹溪一3號(紅麴黴菌株丹溪一3號)菌種，在無菌條件下(無菌室或超淨工作檯)，用接種挑取少許菌種，轉接於已滅菌的固體麥芽糖瓊脂培養基培養皿中，置於培養箱內25t:土rC活化培養168小時。取出活化168小時的菌種，在無菌條件下，以同樣方式接入活化好的菌種到以滅菌的一級固體麥芽糖瓊脂培養基中，在25'C土rC培養168小時，即為丹溪一3號一級種子。採用500毫升玻璃三角瓶，裝入配製好的液體麥芽糖培養基100毫升，15磅滅菌30分鐘備用。取丹溪一3號--級種子，在無菌條件下，接種於裝有100毫升液體麥芽糖培養基500毫升玻璃三角瓶中，一級種子接種量為每個培養皿接五個三角瓶，至25t:土rC搖床培養168小時後，作為紅曲發酵二級種子液。實施例1採用早秈米製造例2和製造例3中作為二級種子液的丹溪1號菌種和丹溪3號菌種7重量份，發酵5天後，晾千成紅曲，取辣寥草5重量份榨成汁，取汁浸泡小麥3—10重量份，再發酵10—20天成曲，取糯米100重量份煮熟，加入紅曲和辣蓼草做成的曲，先初發酵，再發酵2個月，然後壓搾得到紅麯酒糟和罐裝得到紅麯酒；取早秈米加水潤料蒸熟，接著將上述製造例l中作為二級種子液的丹溪1號加入到早秈米飯中攪拌均勻發酵5天製成紅曲，將上述的紅曲晾乾備用；取紅麯酒糟、米皮加入紅曲，然後加入水混勻，，在溫度為4(TC，PH值為5.0的條件下發酵80小時在溫度為4(TC的條件下烘乾，然後粉碎後過100目的篩，得到顆粒的粒徑為100目，經殺毒滅菌後填充於規格為0.18克/粒的膠囊中製成紅曲膠囊；經檢測本發明的紅曲膠囊中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克；其中上述紅麯酒糟、米皮和紅曲的重量比為2.0:1.0:0.11;述三種原料和水的重量比為100:150。實施例2紅麯酒糟的製備過程同實施例1，將不再贅述；取早秈米加水潤料蒸熟，接著將上述製造例1中作為二級種子液的丹溪1號加入到早秈米飯中攪拌均勻發酵5天製成紅曲，將上述的紅曲晾千備用；取紅麯酒糟、米皮加入紅曲，然後加入水混勻，，在溫度為50°C，PH值為4.0的條件下發酵60小時在溫度為4CTC的條件下烘乾，然後粉碎後過100目的篩，得到顆粒的粒徑為100目，經殺毒滅菌後填充於規格為0.18克/粒的膠囊中製成紅曲膠囊；經檢測本發明的紅曲膠囊中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克；其中上述紅麯酒糟、米皮和紅曲的重量比為1.5:0.7:0.10;述三種原料和水的重量比為100:130。實施例3紅麯酒糟的製備過程同實施例1，將不再贅述；取早秈米加水潤料蒸熟，接著將上述製造例2中作為二級種子液的丹溪3號加入到早秈米飯中攪拌均勻發酵5天製成紅曲，將上述的紅曲晾乾備用；取紅麯酒糟、米皮加入紅曲，然後加入水混勻，，在溫度為30°C，PH值為6.0的條件下發酵100小時在溫度為4(TC的條件下烘乾，然後粉碎後過100目的篩，得到顆粒的粒徑為100目，經殺毒滅菌後填充於規格為0.18克/粒的膠囊中製成紅曲膠囊；經檢測本發明的紅曲膠囊中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克；其中上述紅麯酒糟、米皮和紅曲的重量比為1.0:1.2:0.08;述三種原料和水的重量比為100:100。實施例4紅麯酒糟的製備過程同實施例1，將不再贅述；取早秈米加水潤料蒸熟，接著將上述製造例1中作為二級種子液的丹溪1號加入早秈米飯中攪拌均勻發酵天製成紅曲，將上述的紅曲晾乾備用；取紅麯酒糟、米皮加入紅曲，然後加入水混勻，，在溫度為50°C，TO值為4.0的條件下發酵60小時在溫度為40°C的條件下烘乾，然後粉碎後過100目的篩，得到顆粒的粒徑為100目，經殺毒滅菌後加入2%6%的明膠在藥丸機(常州市金壇藍星機械廠製造)中壓延成型後形成紅曲丸劑；經檢測本發明的紅曲丸劑中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克;其中上述紅麯酒糟、米皮和紅曲的重量比為1.5:0.7:0.10;述三種原料和水的重量比為100:130。本發明紅曲膠囊/紅曲丸劑的服用方法為空腹，每天6粒。本發明紅曲膠囊的理化指標及微生物指標如下水分《10.0%細菌總數《8000個/g雜質《0.1%黴菌數《100個/g崩解時限《30分鐘大腸菌群《30個/100g本發明中所描述的具體實施例僅僅是對本發明作舉例說明。本發明所屬
技術領域：
的技術人員可以對所描述的具體實施例做各種各樣的修改或補充或採用類似的方式替代，但並不會偏離本發明說明書或者超越所附權利要求書所定義的範圍。儘管對本發明已作出了詳細的說明並引證了一些具體實例，但是對本領域熟練技術人員來說，只要不離開本發明的範圍可作各種變化或修正是顯然的。權利要求1、一種紅曲製品，其特徵在於該紅曲製品由下述方法製備而成，採用早秈米和紅麴黴菌種發酵製成紅曲，取紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻，發酵40～200小時，烘乾，粉碎後消毒殺菌製成紅曲製品，其中紅麯酒糟、米皮、紅曲之間的重量比為1.0～2.0∶0.5～1.5∶0.08～0.15；其中上述三種原料和水的重量比為100∶75～150。2、根據權利要求l所述的紅曲製品，所述的紅麴黴菌種為紅色紅麴黴菌株丹溪一1號、紅麴黴菌株丹溪一3號中的一種。3、根據權利要求1或2所述的紅曲製品，其特徵在於所述的紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻後發酵時的溫度控制為3(TC5(rC，發酵時的PH值控制為46。4、根據權利要求1或2所述的紅曲製品，其特徵在於所述的紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻後發酵時間為100150小時。5、根據權利要求3所述的紅曲製品，其特徵在於所述的紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻後發酵時間為100150小時。6、一種如權利要求1所述的紅曲製品在製備降血壓藥物中的應用。7、根據權利要求6所述的應用，其特徵在於所述的紅曲製品中Y—氨基丁酸的含量為400010000毫克/千克。8、根據權利要求6或7所述的應用，其特徵在於所述的紅曲製品為膠囊劑型。9、根據權利要求6或7所述的應用，其特徵在於所述的紅曲製品為丸劑。全文摘要本發明涉及一種紅曲製品及其在製備降血壓藥物中的應用；該紅曲製品由下述方法製備而成，採用早秈米和紅麴黴菌種發酵製成紅曲，取紅麯酒糟加入紅曲、米皮後，然後加入水混勻，發酵40～200小時，烘乾，粉碎後消毒殺菌製成紅曲製品，其中紅麯酒糟、米皮、紅曲之間的重量比為1.0～2.0∶0.5～1.5∶0.08～0.15；其中上述三種原料和水的重量比為100∶75～150。本發明利用γ-氨基丁酸較低的紅麯酒糟製成γ-氨基丁酸含量較高的紅曲製品，提高了紅麯酒糟的附加值；該紅曲製品不僅對治療和預防高血壓可以取得意想不到的效果，而且具有輔助降血壓功能。文檔編號A61P9/12GK101333500SQ20071006971公開日2008年12月31日申請日期2007年6月25日優先權日2007年6月25日發明者朱丹華,朱蘭琴,朱睦元,薛臨生,銘陳,陳繼承,陳豪鋒申請人:義烏市丹溪酒業有限公司