抗癌劑導致的末梢神經障礙的預防或減輕劑的製作方法

2023-05-26 04:16:56

專利名稱：抗癌劑導致的末梢神經障礙的預防或減輕劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及痘菌病毒接種炎症組織提取物的新型醫藥用途，具體而言，涉及含有
痘菌病毒接種炎症組織提取物作為有效成分的由抗癌劑導致的末梢神經障礙的預防或減 輕劑。
背景技術：
目前，在癌症(惡性腫瘤)的治療中，適當地分別單獨使用或者並用外科手術、放 射線照射、化學療法。其中，在化學療法中所使用的抗癌劑(抗惡性腫瘤劑)是原本具有細 胞毒性、細胞障礙性的物質，不僅對癌(惡性腫瘤)細胞造成損害，對人類的正常細胞也造 成損害，從而產生副作用，因此，對患者給藥時，在儘可能預防或減輕這樣的副作用的同時 發揮充分的抗癌(抗惡性腫瘤)效果是非常重要的。 作為抗癌劑給藥所伴隨的副作用，可以列舉血液障礙、消化器官障礙、神經障礙， 但是，作為最近的趨勢，特別是急性或慢性的神經損害的問題正在增大。其原因在於發揮顯 著抗癌效果的新抗癌劑所產生的主要副作用以神經障礙的情況居多、最近成為治療重點的 多劑並用療法造成的影響、以及對血液障礙和消化器官障礙的副作用的改善趨勢。這樣，現 在以癌症的化學療法所伴隨的副作用為中心的神經障礙，由於神經細胞難以再生，一旦發 生則沒有有效的對策，從而呈現重病症狀或成為不可逆的障礙，因此在治療上成為重要的 問題。 抗癌劑給藥所伴隨的神經障礙，除了中樞神經系統、自律神經系統、末梢神經系統 以外，還有味覺等感覺器官。其中，發生頻率相對較高的問題有剌痛或燒灼樣痛等疼痛、四 肢末端的麻痺、灼熱感等知覺異常、對冷剌激過敏等知覺過敏、感覺消失、感覺麻痺和不協 調感等感覺異常、知覺性運動失調、肌肉無力等末梢神經系統的神經障礙。該抗癌劑給藥所 導致的末梢神經系統的病變主要是由軸索的變性引起的。軸索中的微管在細胞分裂時形成 紡錘體，在維持細胞器的配置和物質輸送等細胞的正常機能中發揮重要作用，但是紫杉醇、 多西紫杉醇等紫杉烷類藥劑、和長春新鹼、長春鹼、長春地辛、長春瑞濱等長春花鹼類藥劑 通過以微管為目標發揮作用來抑制惡性腫瘤細胞的增殖，因此對正常的神經細胞的微管也 造成傷害，從而引起神經障礙。另外，奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、奈達鉑等鉑製劑對神經細胞造 成直接損傷，結果繼發軸索障礙。 但是，抗癌劑導致的神經毒性仍然是研究進展甚微的領域，神經障礙的預防和對 症方法還沒有確立。因此，為了緩和麻痺症狀而使用甲鈷胺等維他命製劑和中藥牛車腎氣 丸，對疼痛使用抗抑鬱藥(鹽酸阿米替林)、抗癲癇藥(卡馬西平)、抗心律失常藥(鹽酸美 西律)和腎上腺皮質類固醇等，但是目前為止，仍然沒有確立根治或預防的方法，將藥劑終 止或減量給藥是控制住神經障礙的唯一確實的方法(但是，即使給藥終止後，神經障礙有 時也會持續或者惡化)。由於如上所述的現狀，臨床上強烈要求一種對由抗癌劑導致的神經 障礙有效的預防或減輕劑。 關於作為本發明藥劑的有效成分的痘菌病毒接種炎症組織提取物，公開有鎮痛作用、鎮靜作用、抗應激作用、抗過敏作用(參照專利文獻D、免疫促進作用、抗癌作用、肝 硬化抑制作用(參照專利文獻2)、對特發性血小板減少性紫癜的治療效果(參照專利文 獻3)、對帶狀皰疹後神經痛、腦水腫、痴呆、脊髓小腦變性症等的治療效果(參照專利文獻 4)、對雷諾綜合症、糖尿病性神經障礙、亞急性視神經脊髓病後遺症等的治療效果(參照專 利文獻5)、激肽釋放酶產生抑制作用、末梢循環障礙改善作用(參照專利文獻6)、骨萎縮 改善作用(參照專利文獻7)、對敗血症和內毒素性休克的治療有效的一氧化氮產生抑制作 用(參照專利文獻8)、對骨質疏鬆症的治療效果(參照專利文獻9)、基於Nef作用抑制作 用.和趨化因子產生抑制作用的愛滋病治療效果(專利文獻10、11)、對腦梗塞等缺血性疾 病的治療效果(專利文獻12)、對纖維肌痛症的治療效果(專利文獻13)、對感染症的治療 效果(專利文獻14)等。 特別是在專利文獻5中，記載了作為本發明藥劑的有效成分的痘菌病毒接種炎症 組織提取物改善由機體局部的血流障礙導致的陷入缺血狀態的組織和臟器的機能障礙所 伴隨產生的麻痺、疼痛、四肢冷感、知覺異常等症狀。但是，專利文獻5中公開的痘菌病毒接 種炎症組織提取物對麻痺、疼痛、四肢冷感、知覺異常等的改善作用是基於對血流障礙導致 的缺血狀態的血流改善作用的效果，如本發明這樣的由抗癌劑給藥的副作用(細胞損傷) 產生的末梢神經障礙的預防或減輕作用，是該提取物基於完全不同的發病機理對末梢神經 障礙的效果，是迄今為止仍然未知的知識。即，該提取物對起因於抗癌劑給藥導致的神經軸 索的微管障礙、神經軸索的脫髓鞘、對神經細胞的直接障礙等產生的末梢神經障礙的減輕
等有效仍然是未知的，至今也沒有這樣的醫藥用途相關的發表文章和報告。 專利文獻1 :日本特開昭53-101515號公報 專利文獻2 :日本特開昭55-87724號公報(第3、5、6頁) 專利文獻3 :日本特開平1-265028號公報(第1、2頁) 專利文獻4 :日本特開平1-319422號公報(第3、4頁) 專利文獻5 :日本特開平2-28119號公報(第3頁) 專利文獻6 :日本特開平7-97336號公報(第4頁) 專利文獻7 :日本特開平8-291077號公報 專利文獻8 :日本特開平10-194978號公報 專利文獻9 :日本特開平11-80005號公報(第2、3頁) 專利文獻10 :日本特開平11-139977號公報 專利文獻11 :日本特開2000-336034號公報(第2、3頁) 專利文獻12 :日本特開2000-16942號公報 專利文獻13 :國際公開W02004/039383號公報 專利文獻14 :日本特開2004-300146號公報

發明內容
本發明的目的在於提供一種對作為抗癌劑給藥時的副作用而產生的末梢神經障 礙的預防或減輕有效且安全性高的藥劑。 本發明的發明者進行了深入研究，結果發現，痘菌病毒接種炎症組織提取物對由 抗癌劑導致的末梢神經障礙顯示出優異的預防或減輕效果，從而完成了本發明。
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發明的效果 痘菌病毒接種炎症組織提取物具有預防或減輕由抗癌劑的給藥引起的末梢神經 障礙的優異的藥理作用。另外，含有該提取物作為有效成分的本發明的藥劑是副作用等問 題少的安全的藥劑，有用性極高。


圖1是以von Frey試驗研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由紫杉醇 給藥導致產生的知覺過敏的減輕作用的結果。 圖2是以丙酮試驗研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由紫杉醇給藥 導致產生的知覺異常的減輕作用的結果。 圖3是使用PC12細胞研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由紫杉醇誘 發的神經突起伸展阻礙的抑制作用的結果。 圖4是使用DRG細胞研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由紫杉醇誘發 的神經突起伸展阻礙的抑制作用的結果。 圖5是以von Frey試驗研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由奧沙利 鉑導致產生的知覺過敏的減輕作用的結果。 圖6是以冷板試驗研究本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物對由奧沙利鉑導 致產生的知覺過敏的減輕作用的結果。
具體實施例方式
本發明涉及含有痘菌病毒接種炎症組織提取物作為有效成分的、由抗癌劑導致的 末梢神經障礙的預防或減輕劑。本發明中的產生末梢神經障礙的抗癌劑，是特別對微管造 成損傷從而引起末梢神經障礙的抗癌劑。作為這樣的藥劑，能夠列舉紫杉醇、多西紫杉醇 等紫杉烷類藥劑，和長春新鹼、長春鹼、長春地辛、長春瑞濱等長春花鹼類藥劑。另外，作為 神經細胞的損傷引起軸索損傷從而導致末梢神經障礙的藥劑，可以列舉奧沙利鉑、卡鉑、順 鉬、奈達鉑等鉑製劑。作為這些抗癌劑導致的末梢神經障礙，有疼痛、麻痺、知覺異常、感覺 異常、知覺過敏等，因此，引起不能很好地握住物體、扣紐扣困難、步行障礙等運動失調和深 部腱反射降低等日常生活上的障礙。作為本發明藥劑的預防、改善對象的由抗癌劑導致的 末梢神經障礙，不僅包括使用一類抗癌劑的單劑療法產生的末梢神經障礙，還包括組合作 用機制不同的多個藥劑而給藥的多劑並用療法、和以使作用機制不同的藥劑能夠發揮最大 有效性的方式將藥劑的組合和給藥方式優化的生化調節(biochemical modulation)的療 法中產生的末梢神經障礙。 關於本發明的藥劑中使用的痘菌病毒接種炎症組織提取物，對於接種了痘菌病毒 的炎症組織中產生的生理活性物質、將該物質從病態組織中提取的方法以及它們的藥理活 性等，存在如上所述的各種報導(上述專利文獻1至14等)。 另外，作為市售的醫藥品，存在痘菌病毒接種家兔炎症皮膚提取液製劑。該製劑， 如醫療用醫用品集(2007年版，財團法人日本醫藥情報中心編輯發行)的2697-2699頁中 的記載，是含有從接種了痘菌病毒的家兔的炎症皮膚組織提取分離的非蛋白性的活性物質 的藥劑，確認適用於腰痛症、頸肩腕症候群、症狀性神經痛、肩周炎、變形性關節炎、皮膚病(溼疹、皮炎、蕁麻疹)伴有的瘙癢、過敏性鼻炎、亞急性視神經脊髓病後遺症的冷感_知覺異常-疼痛、帶狀皰疹後神經痛等，皮下、肌肉注射、靜脈注射用的注射劑以及片劑作為醫療用醫藥品取得製造認可，並在市場上銷售。 本發明的藥劑中所使用的痘菌病毒接種炎症組織提取物，是從上述那樣的痘菌病毒接種炎症組織提取的非蛋白性的機體功能調節物質，在上述的醫療藥日本醫藥品集中也得到刊載的痘菌病毒接種家兔炎症皮膚組織提取液製劑已經取得醫藥品製造認可並在市場上銷售，因而能夠獲得。另外，能夠將在上述專利文獻中記載的各種痘菌病毒接種炎症組織提取物作為本發明物質利用，它們的製造方法和優選的給藥量等也在文獻中得到說明。
本發明的藥劑中使用的痘菌病毒接種炎症組織提取物，能夠通過以下操作得到接種痘菌病毒，破碎發痘的炎症組織，添加提取溶劑，除去組織碎片之後，進行除蛋白處理，使其吸附在吸附劑中，接著洗脫有效成分。 痘菌病毒接種炎症組織提取物，例如，採用以下工序製造。 (a)接種痘菌病毒，採集發痘的兔、小鼠等的皮膚組織等，破碎發痘組織，加入水、苯酚水、生理食鹽水或加酚甘油水等提取溶劑後，過濾或離心分離，由此得到提取液(濾液或上清液)。 (b)將上述提取液調整為酸性的pH並加熱，進行除蛋白處理。接著，將除去蛋白的溶液調整為鹼性並加熱後，過濾或離心分離。
(c)將得到的濾液或上清液調整為酸性，使之吸附在活性碳、高嶺土等吸附劑上。
(d)在上述吸附劑中加入水等提取溶劑，調整為鹼性的pH，洗脫吸附成分，由此能夠得到痘菌病毒接種炎症組織提取物。此後，根據希望，也能夠適當將洗脫液在減壓下蒸發乾燥固體化或冷凍乾燥而得到幹固物。 作為用於接種痘菌病毒得到炎症組織的動物，可以使用兔、牛、馬、綿羊、山羊、猴、
大鼠、小鼠等痘菌病毒感染的各種動物，作為炎症組織，優選兔的發痘皮膚組織。 採取這些炎症組織並破碎，加入其1至5倍量的提取溶劑，製成乳濁液。作為提取
溶劑，可以使用蒸餾水、生理食鹽水、弱酸性至弱鹼性的緩衝液等，也可以適當添加甘油等
穩定劑、苯酚等殺菌-防腐劑、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂等鹽類等。此時，也可以通過冷凍融
解、超聲波、細胞膜溶解酶或表面活性劑等的處理破壞細胞組織而使提取容易進行。 將得到的乳狀提取液通過過濾或離心分離等除去組織碎片後，進行除蛋白處理。
除蛋白操作可以採用通常進行的公知方法實施，可以適用加熱處理、採用蛋白質變性劑，例如酸、鹼、尿素、胍、丙酮等有機溶劑等的處理、等電點沉澱、鹽析等方法。接著，採用除去不溶物的通常方法，例如，使用濾紙(纖維素、硝基纖維素等)、玻璃過濾器、硅藻土製品(Celite)、賽茨過濾板等的過濾、超濾、離心分離等，除去析出的不溶蛋白質。
使用鹽酸、硫酸、氫溴酸等酸，將這樣操作得到的含有有效成分的提取液調整為酸性，優選調整為pH3. 5至5. 5，進行向吸附劑吸附的操作。作為能夠使用的吸附劑，可以列舉活性碳、高嶺土等，向提取液中添加吸附劑並攪拌，或者使提取液通過填充有吸附劑的柱，從而能夠使有效成分吸附在該吸附劑上。當向提取液中添加吸附劑時，通過過濾或離心分離等除去溶液，能夠得到吸附了有效成分的吸附劑。 為了使有效成分從吸附劑中洗脫(脫離)，向上述吸附劑中加入洗脫溶劑，在室溫或適當加熱下或者在攪拌下洗脫，以過濾或離心分離等通常的方法除去吸附劑，從而能夠
6實現該洗脫。作為所使用的洗脫溶劑，可以使用鹼性溶劑，例如，調整為鹼性PH的水、甲醇、
乙醇、異丙醇等或者它們的適當的混合溶液，可以優選使用調整為PH9至12的水。 這樣操作而得到的提取物(洗脫液)能夠適當調製為作為製劑用原料和醫藥品制
劑優選的形態。例如，既可以將溶液的PH調整在中性附近製成製劑用原料，也可以通過濃
縮、稀釋來符合所希望的濃度。還可以作為注射用製劑而加入氯化鈉，調製與生理食鹽水等
張的溶液。另外，也可以通過將這些溶液濃縮幹固或冷凍乾燥而調製為能夠作為片劑等的
原料利用的固態物形態。 作為向患者給藥的方法，除口服給藥外，可以列舉皮下、肌肉內、靜脈內給藥等，給藥量可以根據痘菌病毒接種炎症組織提取物的種類適當設定。市售製劑認可的給藥量，根據上述的醫療用醫藥品集(2697頁)，作為醫療用醫藥品基本上表示為內服1日給藥16NU、注射劑l日給藥3.6至7. 2NU，但能夠根據疾病種類、重傷程度、患者個人差異、給藥方法、給藥期間等適當增減(NU:神經妥樂平單位。所謂神經妥樂平單位，是使用疼痛閾值比正常動物低的慢性應激動物SART應激小鼠，按照Randall-Selitto法進行試驗，得到的鎮痛效力的ED5。值所規定的單位。1NU為ED5。值為100mg/kg時的神經妥樂平片劑的鎮痛活性含有成分lmg所顯示的活性。) 以下，列舉痘菌病毒接種炎症組織提取物的製造方法的例子，以及該提取物的新的藥理作用，即抗癌劑導致的神經障礙的預防或減輕作用相關的藥理試驗的結果，但是本發明不受這些實施例的記載的任何限制。
實施例 實施例1 在健康的成熟家兔皮膚上接種痘菌病毒，剝出發痘的皮膚，將其破碎，加入苯酚水。接著，將其加壓過濾，以鹽酸將得到的濾液調整為pH5後，以90 IO(TC加熱處理30分鐘。過濾除蛋白後，以氫氧化鈉調整為pH9，再以90 IO(TC加熱處理15分鐘後過濾。以鹽酸將濾液調整為約PH4. 5，加入2%的活性碳，攪拌2小時後離心分離。向採集的活性碳中加水，以氫氧化鈉調整為PHIO，以6(TC攪拌1. 5小時後，離心分離過濾，得到上清液。再向採集的活性碳中加水，用氫氧化鈉調整為pHll，以6(TC攪拌1. 5小時後，離心分離，得到上清液。合併兩次得到的上清液，以鹽酸中和，得到痘菌病毒接種家兔炎症皮膚提取物。在以下的藥理試驗中，適當調整為適合實驗的濃度使用。
實施例2 在健康的成熟家兔皮膚上接種痘菌病毒使之感染後，無菌剝出發痘的皮膚，將其切碎後，加入加酚甘油水，以勻漿器磨碎成為乳狀。接著，將其過濾，以鹽酸將得到的濾液調整為弱酸性(pH4. 5 5. 5)後，以IO(TC加熱處理並過濾。以氫氧化鈉將濾液調整為弱鹼性(pH8. 5 10. 0)，再以IO(TC加熱處理後過濾。以鹽酸將濾液調整為約pH4. 5，加入約1. 5%的活性碳，攪拌1 5小時後過濾。向濾取的活性碳中加入水，以氫氧化鈉調整為pH9. 4 10，攪拌3 5小時後過濾，以鹽酸中和濾液。
實施例3 在健康的成熟家兔皮膚上接種痘菌病毒，使之活化後，無菌剝出活化的皮膚，將其切碎，加入水，以勻漿器磨碎成為乳狀物。接著，將其加壓過濾，以鹽酸將得到的濾液調整為pH5.0後，在流通蒸氣下以IO(TC加熱處理。過濾除蛋白後，以氫氧化鈉調整為pH9. l，再以 IO(TC加熱處理後過濾。以鹽酸將濾液調整為pH4. 1，加入2%的活性碳，攪拌2小時後過濾。 再向濾液中加入5. 5%的活性碳，攪拌2小時後過濾。向最初濾取的活性碳中加水，以氫氧 化鈉調整為pH9. 9，以6(TC攪拌1. 5小時後過濾。向最初的活性碳和其後的活性碳中加水， 以氫氧化鈉調整為PHIO. 9，以6(TC攪拌1. 5小時後過濾。合併濾液，以鹽酸中和後，以使用 分子量100的膜的電透析法進行脫鹽處理，在減壓下乾燥固化。 接著，列舉將上述實施例1中得到的本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物作為 被檢藥物使用的由抗癌劑導致的神經障礙的減輕作用相關的藥理試驗的結果的一個例子。 另外，在全部藥理試驗中，顯著性差異檢驗使用Tukey-Karmer法。
藥理試驗1 :對紫杉醇導致的大鼠末梢神經障礙的作用 研究本發明的提取物(實施例1製造的痘菌病毒接種家兔炎症皮膚提取物)對將 抗癌劑紫杉醇給藥時產生的由機械剌激引起的異常性疼痛(通常不引起疼痛的觸覺剌激 引起的劇痛)等知覺過敏以及低溫剌激時的知覺異常的效果。將本發明的提取物作為被檢 藥物向大鼠口服給藥，進行以下的實驗(von Frey test以及acetone test)。
(1)被檢藥物的給藥 作為實驗動物，使用7 8周齡的SD雄性大鼠，分成對照組、紫杉醇給藥組、紫杉 醇以及被檢藥物給藥組(紫杉醇+被檢藥物給藥組)三組。對紫杉醇給藥組，持續四周將 紫杉醇每周一次向腹腔內給藥(6mg/kg)，共計實施4次。對紫杉醇+被檢藥物給藥組，持續 四周將被檢藥物在紫杉醇即將給藥前、給藥1天後、給藥2天後每周三次口服給藥(200NU/ kg)，共計實施12次。另外，對對照組將紫杉醇給藥時的溶劑(聚氧乙烯蓖麻油乙醇= 1 : 1)同樣給藥。
(2)von Frey試驗 在以金屬網形成底部的籠子中，放入上述(1)中的三組大鼠，使其馴化1小時後， 使用2、4、6、8、10、15g強度的von Frey細絲，對後肢內側垂直地按壓細絲直至彎曲，靜止6 秒，左右各進行6次，測定迴避反應的次數。並且，測定在從給藥開始0、2、4、5、6周後進行。 以細絲強度(g)為x、迴避反應次數為y做成散點圖後，基於使用最小二乘法描繪的y = A/ (l+(e鄧(-BX (x-C)))的S形曲線，將相當於6次(50%)反應的細絲強度作為50%反應閾 值求出，測試被檢藥物對異常性疼痛的效果。 在圖1中表示上述試驗結果的一個例子。紫杉醇給藥組與對照組相比，50%反應
閾值顯著降低。在紫杉醇中並用本發明的提取物給藥的紫杉醇+被檢藥物給藥組顯示與對
照組同等程度的50%反應閾值，與紫杉醇給藥組相比顯著抑制50%反應閾值的降低。另
外，可以確認，紫杉醇+被檢藥物給藥組中，結束被檢藥物的給藥之後，也能持續維持對疼
痛閾值降低的抑制。從以上結果可以確認，本發明的提取物對紫杉醇導致的知覺過敏具有
優異的預防或改善作用。 (3)丙酮試驗(Acetone test) 在以金屬網形成底部的籠子中，放入上述(1)中的三組大鼠，使其馴化1小時後， 使用MicroSprayer(PENN-CENTURY公司生產)向後足以丙酮50 y L噴霧5秒鐘，利用丙酮 氣化時的冷卻作用付與冷剌激。觀察從噴霧開始40秒鐘內大鼠的迴避反應，記錄直至出現 反應的時間(潛伏時間)。左右各進行三次測試，求出平均值。
在圖2中表示上述試驗結果的一個例子。對丙酮的冷剌激，紫杉醇給藥組的潛伏 時間顯著縮短，但是紫杉醇+被檢藥物給藥組的潛伏時間恢復至與對照組基本相同的程 度。從以上結果可以確認，本發明的提取物對紫杉醇導致的知覺異常(對冷剌激的過敏)具 有優異的效果。另外，在熱剌激的試驗(Plantar test)中，未見紫杉醇給藥組導致的潛伏時 間的縮短，在紫杉醇+被檢藥物給藥組中，潛伏時間也與對照組和紫杉醇給藥組相同。在抗 癌劑導致的末梢神經障礙的症狀中，可以特徵性地列舉對冷剌激的過敏，本試驗(Acetone test)也反映了這種症狀，顯示本發明的提取物對由抗癌劑導致的知覺過敏的優異的預防 或改善作用。 藥理試驗2 :in vitro試驗體系中對紫杉醇導致的神經細胞變性的作用
以研究本發明的提取物對作為抗癌劑的紫杉醇處理引起的神經細胞變性的藥理 作用為目的，使用作為神經分化_突起伸展的模型細胞株的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞株 (PC12， Pheochromocytoma 12)以及脊髓後根神經節(dorsal root ganglia, DRG)的細胞
進行以下實驗。 (1)細胞的培養 對PC12細胞使用含有5%胎牛血清、10 %馬血清、100單位/ml青黴素-鏈黴素 (Gibco BRL公司生產)的RPMI1640培養基(MPBiomedicals公司生產)，在37°C 、5% C02 的孵箱中培養於80cm3培養瓶中。 另夕卜，DRG細胞從雄性Sprague-Dawley系大鼠中取出進行原代培養之後，將L4-5 的DRG 5節在膠原酶I (Funakoshi公司生產)以及分散酶I (三光純藥公司生產)中進行 處理，接種於24孔板上進行培養。並且，使用含有10%胎牛血清、100單位/ml青黴素-鏈 黴素(Gibco BRL公司生產)的Dulbecco' s modified Eagle' s培養基(DMEM培養基， MPBiomedicals公司生產)，在37°C、5% C02孵箱中進行培養。
(2)藥物的處理以及神經突起長度的測定 將PC12細胞以10000cell/we11接種於24孔板中，3小時後以福斯高林10yM進 行處理使突起伸展，24小時後進行藥物處理。另外，對DRG細胞培養一周，確認細胞的貼附 以及突起的伸展之後，進行藥物處理。另外，藥物為僅有紫杉醇10ng/mL的情況以及紫杉 醇10ng/mL並用各濃度的被檢藥物(0. 001、0. 003、0. 01、0. 03NU/mL)的情況分別進行處理。 藥物處理24小時以及96小時以後，更換為含有各規定濃度的藥物以及被檢藥物的新培養 基，168小時後以臺盼藍染色液染色區分死細胞，使用光學顯微鏡進行照相(X 200， 3視野/ 恥ll)。照相後，使用分析軟體Image J測定活細胞的突起長度。 在圖3和圖4中表示上述實驗結果的一個例子。在PC12細胞和DRG細胞的任一 種細胞中均可以確認，紫杉醇導致神經突起的伸展被阻礙，但是通過並用本發明的提取物 進行處理，可以濃度依賴性地顯著抑制突起伸展的阻礙。特別是由於在作為神經細胞的DRG 細胞中確認上述效果，暗示本發明的提取物對末梢神經障礙的減輕作用中，對神經突起伸 展障礙的抑制是其作用機制之一。 藥理試驗3 :對奧沙利鉑導致的大鼠末梢神經障礙的作用 採用與上述的藥理試驗1同樣的方法研究本發明的提取物(實施例1製造的痘菌 病毒接種家兔炎症皮膚提取物)對將作為鉑製劑的奧沙利鉑給藥時產生的機械剌激引起 的異常性疼痛等知覺過敏以及低溫剌激中的知覺異常的效果。奧沙利鉑也是最容易引起末梢神經障礙的藥劑，強烈期望有預防、改善本障礙的方法。
(1)被檢藥物的給藥 與藥理試驗1同樣地將大鼠分為對照組、奧沙利鉑給藥組、奧沙利鉑給藥組與被 檢藥物給藥組(奧沙利鉑+被檢藥物給藥組)三組。奧沙利鉑(100mg冷凍乾燥製劑)使 用5%的葡萄糖液溶解。對奧沙利鉑給藥組，持續四周每周2次將奧沙利鉑在連續的兩天中 向腹腔內給藥(4mg/kg)，共計實施8次。對奧沙利鉑+被檢藥物給藥組，將被檢藥物在奧沙 利鉑給藥開始日、第二天、第三天，每周三次口服給藥(200NU/kg)。被檢藥物在奧沙利鉑即 將給藥前給藥，持續4周，共計實施12次。另外，對對照物將奧沙利鉑給藥中的溶劑(5%葡 萄糖液)同樣給藥(lmL/kg)。
(2)von Frey試驗 與藥理試驗1(2)同樣操作，每周從奧沙利鉑給藥開始日至第六天進行von Frey 試驗，試驗被檢藥物對異常性疼痛的效果。 在圖5中表示上述試驗結果的一個例子(第二周)。在上述實驗的第二周，奧沙利 鉑給藥組與對照組相比，50%反應閾值顯著降低。與此相對，在奧沙利鉑中並用本發明的提 取物給藥的奧沙利鉑+被檢藥物給藥組顯示與對照組同等程度的50%反應閾值，與奧沙利 鉑給藥組相比顯著抑制50%反應閾值的降低。從以上結果可以確認本發明的提取物對奧沙 利鉑導致的知覺過敏具有優異的預防或改善作用。
(3)冷板試驗(Cold plate test) 從奧沙利鉑給藥開始日至第五天進行冷板試驗，檢測被檢藥物對低溫剌激時的 知覺異常的效果。試驗前一天將上述(1)的三組大鼠置於冷板(Hot/Cold plate Cat. No. 35100Ugo Basile Biological ResearchAparatus公司生產)30分鐘使其充分馴化。試 驗當日將大鼠置於設定於fC的冷板上，在150秒鐘期間觀察大鼠的行動，測定直至後腿回 避的反應時間(潛伏時間)。並且，為了使行動觀察排出試驗實施者的先入之見，使大鼠各 組的給藥藥物無法判斷地進行。試驗進行三次進行平均，求出平均值、標準誤差。多組之間 的比較，在單因素方差分析(oneiay AN0VA)後，將各組間的比較與其它藥理試驗同樣地使 用Tukey-Kramer法進行檢驗。檢驗使用Stat View (Abacus Conc印ts， Berkeley, CA， USA)， 以不足5% (p < 0. 05)的臨界值視為顯著性差異。 在圖6中表示上述試驗結果的一個例子(第二周)。在上述試驗的第二周，對冷板 的冷剌激，奧沙利鉑給藥組的潛伏時間顯著縮短，但是奧沙利鉑+被檢藥物給藥組的潛伏 時間恢復至與對照組基本相同的程度。從以上結果可以確認，本發明的提取物對奧沙利鉑 導致的知覺異常(對冷剌激的過敏)具有優異的效果。與紫杉醇同樣，奧沙利鉑導致的末 梢神經障礙的症狀中可以特徵性地列舉對冷剌激的過敏，與上述藥理試驗1(3)的丙酮試 驗的結果同樣，本試驗(冷板試驗)也反映了這種症狀，顯示本發明的提取物對抗癌劑導致 的知覺過敏的優異的預防或改善作用。
產業上的可利用性 如從上述的藥理試驗結果可以明確的那樣，本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取 物，在以紫杉醇和奧沙利鉑等抗癌劑的給藥產生的、機械剌激引起的異常性疼痛等知覺過 敏和低溫剌激時的知覺異常作為末梢神經障礙的指標而實施的大鼠口服給藥試驗中，可以 確認對末梢神經障礙具有優異的預防或減輕作用。另外，在紫杉醇誘發的神經突起伸展阻礙相關的in vitro試驗中，也顯示顯著的抑制作用。因此，本發明的痘菌病毒接種炎症組 織提取物對紫杉醇和奧沙利鉑等抗癌劑的給藥引起的末梢神經障礙是有效的。市售的痘菌 病毒接種家兔炎症皮膚提取液製劑可以常年使用，作為安全性非常高的藥劑被認可。這樣， 本發明的痘菌病毒接種炎症組織提取物作為對四肢末端的麻痺等知覺異常和疼痛等知覺 過敏等由抗癌劑導致的末梢神經系統的神經障礙的預防或減輕劑有效，是基本沒有副作用 且安全性極高、有用性很高的藥劑。
權利要求
一種抗癌劑導致的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於含有痘菌病毒接種炎症組織提取物作為有效成分。
2. 如權利要求1所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於抗癌劑是微管抑 製劑。
3. 如權利要求2所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於微管抑制劑是紫 杉烷類藥劑。
4. 如權利要求3所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於紫杉烷類藥劑是 紫杉醇或多西紫杉醇。
5. 如權利要求3所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於紫杉烷類藥劑是紫杉醇。
6. 如權利要求2所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於微管抑制劑是長 春花鹼類藥劑。
7. 如權利要求l所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於抗癌劑是鉑製劑。
8. 如權利要求7所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於鉑製劑是奧沙利 鉬、卡鉑、順鉑或奈達鉑。
9. 如權利要求7所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於鉑製劑是奧沙利鉑。
10. 如權利要求1 9中任一項所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於抗癌劑導致的末梢神經障礙是急性或慢性的疼痛、麻痺、知覺異常、知覺過敏或感覺異常。
11. 如權利要求1 10中任一項所述的製劑，其特徵在於炎症組織是兔子的皮膚組織。
12. 如權利要求1 11中任一項所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於 其為口服劑。
13. 如權利要求1 11中任一項所述的末梢神經障礙的預防或減輕劑，其特徵在於 其為注射劑。
全文摘要
本發明的目的在於，對作為抗癌劑給藥時的副作用而產生的末梢神經障礙的預防或減輕，提供一種有效且安全性高的藥劑。本發明涉及痘菌病毒接種炎症組織提取物的新型醫藥用途，涉及含有該提取物作為有效成分的末梢神經障礙的預防或減輕劑。將該提取物作為有效成分的本發明的藥劑，作為由抗癌劑給藥引起末梢神經障礙的預防或減輕劑，作為副作用小且安全性高的藥劑而有用性高。
文檔編號A61P25/02GK101790377SQ20088010431
公開日2010年7月28日 申請日期2008年8月28日 優先權日2007年8月31日
發明者伊藤善規, 大石了三, 江頭伸昭 申請人:國立大學法人九州大學;日本臟器製藥株式會社