血液分析中的微流體細胞分離的製作方法

2023-09-19 01:00:35 1

專利名稱：血液分析中的微流體細胞分離的製作方法
技術領域：
本發明涉及可以用來快速分析血液樣品存在的不同類型的細胞的方法並涉及可以用於實施這些方法的系統。
背景技術：
人血液由3個主要類型的細胞:紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)和血小板組成。WBC以結構和功能上不同的幾種形式存在並且可以劃分為嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞和巨噬細胞。這些細胞的異常水平與許多嚴重疾病如白血病、粒細胞缺乏症和AIDS相關。因此，檢測特定類型WBC的水平異常的能力具有重大的診斷意義。對於AIDS，尤其如此，其中患者具有比正常個體低得多的⑶4+T淋巴細胞水平。RBC通常比WBC更小，但是以大得多的量存在(見US2007/0160503)。因此通常有利的是在試圖對WBC類型的水平定量之前移除RBC。雖然可以通過離心實現RBC和WBC的粗略分離，但是這種方法在區分存在的WBC的類型方面無效。更特異的方法如流式細胞術和細胞分選法(Bauer, J.Chromatog.B, 722:55-69 (1999) ；Anderson 等人,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA93:8508-8511 (1996) ；Moore 等人，J.Biochem.Biophys.Methods37:1-2 (1998))可以使用，但是製備用於這些方法的樣品可能不適於自動化並且可能包括細胞裂解和可能干擾分析的物質的釋放。發明簡述本發明基於改造微流體分離法(尤其大小分離法)以分析血液樣品的不同類型的細胞的水平。所述方法具有快速檢驗樣品的白細胞水平的價值，其中所述白細胞水平提示癌症或AIDS的存在。這種方法學也可以用來監測AIDS患者以確定疾病是否正在進展。因為本項技術使用簡單並且始於自動化，所以它應當在臨床化學實驗室中和在篩查流程方面具有價值。用於進行分析的系統在其第一方面，本發明涉及一種用於分析血液樣品中存在的細胞類型的系統。該系統包括:a)反應室；b)能夠將紅細胞與白細胞分離的微流體裝置；c)與所述裝置處於流通連接的泵，所述泵能夠驅使流體流經所述裝置；d)分析儀，其與所述裝置的出口處於流通連接並且能夠進行已經分離的材料的光學或化學分析；和e)可以作為分析儀的部分或獨立於分析儀的數據輸出裝置。 反應室(上文的部件「a」)與微流體裝置處於流通連接並且必須具有至少一個開口或埠允許導入樣品(一般地是血液樣品)和試劑(一般是可檢測標記的優選地與特定類型WBC結合的抗體)。如本文所用的術語「流通連接」意指必須存在允許流體從系統的一個部分(例如，反應室)流動至系統的另一個部分(例如，微流體裝置)的途徑。一般，此途徑將由塑料或金屬管路提供。微流體裝置必須能夠將白細胞與紅細胞分離，並且下文更充分地提供對適用於此目的的裝置的描述。該裝置必須具有與反應室的至少一個出口埠或開口處於流通連接並且在操作期間從反應室接受血液樣品的至少一個入口埠或開口。還必須存在通常位於該裝置對側上的至少一個出口埠，材料可以經其離開。優選地存在至少兩個出口埠，安置其中之一以傳輸相對於全血樣品富含WBC的流體並且安置其中之一以傳輸含有RBC和血小板但含有相對少的WBC的流體。這些埠或開口可以任選地包括可以由操作該裝置的某個人打開或關閉的閥門。通常，反應室和微流體裝置將彼此獨立，但是在替代性設計中，反應室可以集成至裝置本身中。必需存在從裝置的入口埠或開口行至其出口埠或開口的至少一條微流體通道，並且正是在這條通道或這些通道內部進行材料的分離。如本文所用的術語「微流體通道」指具有IOnm至Imm範圍內的至少一個截面尺度的流體用途徑。最優選的微流體裝置是基於其大小分離細胞和其他材料的那些。篩分裝置(sizing device)可以通過在微流體通道內部產生空隙網絡的障礙物、柱或阻擋物陣列實現分離。當流體流經通道時，隨著它通過空隙網絡，流體分成主要通量組分和次要流量組分。這導致主要通量組分的平均方向非平行於流場的平均方向。應當如此安排微流體通道內部的障礙物，從而當血細胞通過此裝置時，白細胞總體上以一種通量組分的平均方向轉運，並且紅細胞總體上以另一種通量組分的平均方向轉運，從而根據大小分離細胞。該分析系統必須包括用於產生驅使材料經該裝置分離的力的手段。已經在本領域描述的產生這種力的任何方式可以用於此目的。因此，這個系統可以使用產生電力、電泳力、電滲力、離心力、重力、水動力、壓力梯度力或毛細力的裝置。最優選地，一個或多個泵將用來產生推動流體流動的水動力。泵必須與裝置上的入口或出口埠處於流通連接並且必須產生推動流體經過微流體通道的足夠的力。泵可以與裝置上的埠或開口直接連接或它可以間接地連接。例如，泵可以與反應室連接以產生由流通連接從反應室傳遞至裝置的力。微流體裝置上的至少一個出口埠或出口(尤其為傳輸富含WBC的流體所安置的埠或開口)必須與分析儀上的入口埠或開口處於流通連接，所述流通連接允許分析儀接受已經由裝置分離的材料用於光學或化學分析。可以使用的分析儀的類型的實例包括流式細胞儀、分光光度計、螢光檢測器和放射性活度計數器。這些實例中最優選螢光檢測器。一般而言，分析儀將獨立於微流體裝置，但是也可能集成分析儀作為裝置本身的部分。優選地，微流體裝置具有引向分析儀的至少一個埠或開口和引向收集器皿的第二埠或開口，所述收集器皿用於採集比WBC更小的RBC、血小板和其他材料。最後，用於分析細胞類型的系統必須具有用於列印或顯示來自分析儀的結果的數據輸出裝置。通常，這將是顯示光學或化學分析結果的計算機或印表機。數據輸出裝置可以獨立於分析儀或作為其部分。分析方法另一個方面，本發明涉及一種分析血液樣品以確定存在的不同細胞類型的量的方法。這種方法包括首先獲得測試血液樣品並且將它與一種或多種可檢測標記的抗體孵育，其中所述抗體a)很大程度上不與紅細胞結合和b)優選地與一種或多種靶白細胞結合。如本文所用的短語「很大程度上不與紅細胞結合」意指抗體對紅細胞的親和力比其對靶白細胞(即，設計由抗體檢測的WBC)的親和力低至少1000倍。優選地，親和力低至少10，000或100, 000倍。如本文所用的短語「優選地與一種或多種靶白細胞結合」意指抗體對一個特定類型白細胞的親和力比其對任何其他類型的親和力大至少100倍。例如，如果抗體設計成識別⑶4+T淋巴細胞，它將與這些細胞以比其對任何其他淋巴細胞或白細胞大至少100倍的親和力結合。優選大於1000或10，000的差異。如本文所用的短語「可檢測標記的抗體」意指抗體與可以使用標準實驗室技術檢測到的分子或化合物連接。例如，抗體可以與放射性同位素如125I或與螢光標籤如螢光素異硫氰酸酯(FITC)連接。最優選的可檢測標記物是藻紅蛋白(PE)。在足以允許抗體-細胞複合物形成的條件和時間實施血液和可檢測標記的抗體之間的孵育。接下來，使用微流體裝置，將形成的複合物與紅細胞並且與未結合的抗體分離。在一個優選實施方案中，將複合物從反應室泵送經過基於大小分離細胞的裝置。這一般將導致白細胞而非紅細胞和未結合的標記物在不同位置離開該裝置。將分離的白細胞收集並分析以確定存在的可檢測標記物的量。取決於所用標記物的類型，可以用流式細胞儀、分光光度計、放射性活度計數器、螢光檢測器或其他設備進行分析。在使用如上文所述的那種系統實施的自動化分析中，細胞將從微流體裝置的出口經過並且直接進入分析儀，即，將不存在單獨的收集步驟。例如，可以將螢光標記的複合物泵送至流式細胞儀中。來自分析儀的結果一般地將記錄於數據輸出裝置(即列印或顯示該結果的裝置)。往往，這種數據輸出裝置將是整合於分析儀的計算機或印表機。然而，數據輸出裝置可以獨立於分析儀。一般地，從測試樣品獲得的結果將與從一個或多個對照樣品獲得的結果比較。對照樣品可以是例如源自健康人並且將提供白細胞水平的「正常」範圍。測試樣品和對照樣品之間的比較將揭示一類T細胞是否異常升高或耗盡並且可以提示疾病的存在。雖然知曉細胞的正常範圍具有診斷價值，但是不一定對於每個分析法均需要採用獨立的對照樣品以便比較。例如，一個對照可以用於多種分析法或可以單純在測試結果和已知的正常範圍之間比較。在一個特別優選的實施方案中，分析方法使用優選地與淋巴細胞(優選地CD4+T淋巴細胞)結合的抗體以輔助確定某人是否患有AIDS。通常，200個或更少細胞/mm3的⑶4+T淋巴細胞水平將是存在AIDS的指示，而將大致500-1600個細胞/mm3的水平視為正常。在其中患者已經診斷為患有AIDS的情況下，可以進行定期分析以確定CD4+水平是否變化並因此確定疾病是否顯示正在進展或應答於療法。可選地，可以使用優選地與⑶8+T細胞結合的抗體並且這種方法可以充當癌症的診斷試驗。例如，異常升高水平的這些細胞可以表示存在腺癌；黑色素瘤；骨髓瘤；肉瘤；畸胎癌肉瘤和尤其白血病或淋巴瘤。受累的具體器官可以包括腎上腺、膀胱、骨、骨髓、腦、乳腺、子宮頸、膽囊、結腸、胃、心臟、腎、肝臟、肺、肌肉、胰腺、甲狀旁腺、前列腺、甲狀腺或子
古
口 ο這些分析法也應當用於其中特定白細胞或特定類別的白細胞的水平將預期變化的其他疾病。這將包括以下炎性疾病或病狀，出於本發明目的，所述炎性疾病或病狀包括動脈粥樣硬化、哮喘、自身免疫疾病(例如，狼瘡或多發性硬化)，炎性腸病(例如，Crohn病或潰瘍性結腸炎)、類風溼性關節炎、多種變態反應和移植排斥。例如，巨噬細胞或粒細胞水平的變化(例如，與來自健康個體或作為一個整體的群體中的對照樣品相比，試驗對象的血液中這些細胞的數目增加)可以提示疾病的存在。這種方法也可以用來比較兩種或更多種不同類型白細胞的水平，所述水平可能具有診斷價值或對檢查疾病的作用和疾病治療的研究者有價值。可以例如使用優選地與具有不同標記物的不同靶細胞結合的兩種或更多種抗體獲得比較。如本文所用的術語「不同標記物」意指當標記物在一起時，正在這種方法中使用的分析儀或多臺分析儀可以區分這些標記物。這種方法可以用來比較兩個不同類型細胞(例如，嗜中性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和樹枝狀細胞)的水平或用來比較單一類型內部具有更多特定特徵的細胞(例如，CD4+T細胞和CD8+T細胞)。此外，螢光激活的細胞分選法可以用來進一步分離從微流體裝置獲得的細胞類型，從而可以進行其他測試。使用如上文所述的多種區別性標記的抗體將允許確定不同類別的白細胞(例如，預期在應答於疾病存在時變化的白細胞和預期將不變化的白細胞)之間的比率。這將有助於控制因分析法變異性所致的特定白細胞水平變化。在這個方面特別有意義的是，使用寬泛度量白細胞水平的對CD45特異的抗體，連同對一個特定白細胞類型特異的抗體，例如，對⑶4+T細胞或⑶8+T細胞特異的抗體。例如，用於輔助鑑定AIDS患者的分析法可能使用以Cy3螢光染料標記的針對CD45特異的抗體，連同用Cy5螢光染料標記的針對CD4特異的抗體。CD4/CD45細胞(或CY5/CY3標記物)的比率隨後可以用來評估血液樣品，異常低的值提不存在AIDS。分析方法可以使用以下系統自動化，所述系統具有本文所述的部件:a)反應室；
b)能夠將紅細胞與白細胞分離的微流體裝置；c)與所述裝置處於流通連接的泵，所述泵能夠驅使流體流經所述裝置；d)分析儀，其與所述裝置的出口處於流通連接並且能夠進行已經分離的材料的光學或化學分析；和e)可以作為分析儀的部分或獨立於分析儀的數據輸出裝置。系統可以也包括獨立於反應室、微流體裝置、分析儀和數據輸出裝置的緩衝液儲器。附圖簡述

圖1:圖1是顯示分析系統的各種部件的示意圖。帶有對角線的部分是引入或引出某部件的埠或開口，所述埠或開口的每一個可以任選地包括閥門。該圖中的「A」代表其中可以組合血液樣品和標記抗體的反應室。如果需要，可以將反應室加熱和/或攪動以促進混合。將反應產物(一般包括抗體/抗原複合物)從反應室泵送至能夠將紅細胞與白細胞(優選地基於大小)分離的微流體裝置(D)中。本圖顯示反應室和微流體裝置作為分離的部件，也可能將反應室整合入微流體裝置中。「B」代表該圖中與反應室(A)並與緩衝液儲器(C)連接的泵。這些泵提供推動材料穿過該系統的力。一旦在微流體裝置上，使白細胞(WBCS)以引向分析儀(E)的出口的方向偏轉，在所述分析儀中確定結合的標記物的量。「F」是從分析儀提供結果的數據輸出裝置(本圖中描述為計算機監視器)。數據輸出裝置可以是分析儀的部分或獨立於分析儀。將血小板、紅細胞(RBCS)和其他材料導向獨立的收集器皿(G)。發明詳述本發明涉及用於分析血液樣品中細胞的系統並且涉及使用微流體裝置實施細胞分離的分析方法。除部件的布局和使用微流體裝置之外，構成分析系統的反應室、泵和分析儀是在臨床化學領域中標準的並且可以從多家製造商商業地購買。分析操作方案確定血液樣品內部不同細胞類型的量的分析法將或多或少地取決於具體目標變動。然而，其實質特徵如下。初始步驟包括採集血液，一般地在抗凝血藥如EDTA、肝素、檸檬酸鹽等存在的情況下進行。將抗凝的血液與一個或多個(通常一個)類型的白細胞特異性結合的因子混合。可以使用的結合因子的實例包括蛋白質、適配體、合成分子和最優選地包括與目的細胞上的表面標記(例如⑶4、⑶3、⑶8、⑶14、⑶19、表面蛋白、糖、脂類等)結合的抗體。結合因子必須是可檢測標記的，即，結合因子必須天然具有或經修飾以具有允許定量測定它的特徵。可以出於此目的而連接的標記物的實例包括螢光標記物、有色標記物、磁性標記物和放射性標記物。在混合後，將血液樣品和結合因子在足以允許複合物在可檢測標記的結合因子和它們特異性識別的細胞之間形成的條件和時間孵育。可以通過使用不同的標記結合因子和可以在標記物之間區分的檢測系統，從單個分析法中評估多個細胞類型。—旦複合物已經形成，使用微流體裝置(優選地，基於大小分離細胞的裝置)，將白細胞(包括與結合因子連接的那些)與紅細胞、血小板、血漿和未結合的標記物分開。使細胞通過該裝置也具有將它們轉移至生理緩衝液如磷酸鹽緩衝鹽水、Hank平衡鹽溶液中的作用。最後，分析回收的白細胞以確定它們含有的標記結合物的量。因為未結合的標記分子和起幹擾作用的紅細胞、血漿、血小板等大部分從白細胞中移除，與白細胞連接的標記結合物的量將直接與樣品中目的細胞的量相關。雖然不是優選的，但是可以在分析存在的標記物的量之前貯存分離的白細胞。由於檢測不需要分離後有活力或完整的細胞，因此樣品儲存依賴於所用的標記結合物的穩定性。這種分析方法的一個優點在於它易於自動化和處置大量血液樣品。由於AIDS的主要特徵是CD4+T淋巴細胞缺乏，因此這種方法特別良好地適於檢測或監測這種疾病。其他優點是可以分析小量血液樣品(例如，0.5或更少)，本方法允許快速移除可能干擾分析法的物質，並且基於大小分離是相對溫和的，允許可能回收完整細胞用於進一步研究。微流體裝置本領域中已經描述的能夠將紅細胞和白細胞分離的任何微流體裝置可以用於本發明。特別優選能夠基於大小實施分離的裝置。這類裝置包括在US5，837，115;US7, 150，812 ；US6, 685，841 ；US7, 318，902 ；7, 472，794 ;和 US7, 735，652 中描述的那些；所述全部文獻因而通過引用的方式完整併入。提供可能在產生和使用本發明裝置時有益的指導的其他參考文獻包括:US5, 427, 663 ；US7, 276，170 ；US6, 913, 697 ；US2006/0134599 ；US2007/0160503 ；US20050282293 ；US2006/0121624 ；US2005/0266433 ；US2007/0026381 ；US2007/0026414 ；US2007/0026417 ；US2007/0026415 ；US2007/0026413 ；US2007/0099207 ；US2007/0196820 ；US2007/0059680 ；US2007/0059718 ；US2007/005916 ；US2007/0059774；US2007/0059781 ；US2007/0059719 ；US2006/0223178 ；US2008/0124721 ；US2008/0090239 ；和US2008/0113358 ;所述全部文獻也通過引用的方式完整併入本文。在描述產生和使用裝置的多種參考文獻當中，US7，150，812提供特別好的指導和7，735，652具有特別意義，在於它特別涉及針對血液樣品進行分離的微流體裝置(在這個方面，還見US2007/0160503)並且描述防止裝置阻塞的方式(優選地也用於本文公開的方法中所用的裝置內)。『812專利描述了其中存在通道的優選裝置，其中所述通道具有相對於所施加以推動流體經過該裝置的力場的方向以非對稱方式布置的有序的障礙物陣列。這些障礙物形成空隙網絡，在流體流存在的情況下，所述空隙網絡產生這樣的場型(field pattern)，從而來自空隙的場通量不等地分成主要流量組分和次要流量組分。通過該裝置的大小相似的粒子通常將以相同的方向偏轉，即，偏轉至障礙物的相同側，而大小不同的粒子可以按不同的方向偏轉。因此，可以形成利用RBC和WBC的大小差異來實現其分離的障礙物陣列。根據US7, 735，652，US7, 150，812 和 Huang 等人，Science304:987-990 (2004)公開的確定性橫向位移的基本分離原理，一種方法在『652中稱作「折曲(bumping)」。位移可以在其中每行障礙物具有行移分數(row shift fraction) 1/3的陣列中完成,這產生3條相等的通量流線。小粒子停留於液流內部並且大粒子在每個障礙物處位移。『652中詳細討論關於這類裝置中分離的理論考慮。此外，該參考文獻描述通過提供替代途徑以防止阻塞或堵塞下遊而移除離散的巨大物體。
實施例當前的預示性實施例意在說明如何分析血液樣品以確定血液樣品是否從AIDS患
者獲得。在第一步驟中，將血液從患者收集於含有EDTA的真空採血管中(約1.8mg EDTA/ml血液)。50 μ I抗凝血液與20 μ I藻紅蛋白(PE)標記的抗⑶4抗體混合。混合物在室溫於黑暗下孵育15分鐘並且隨後與70 μ I脫氣的磷酸鹽緩衝鹽水(無鈣和鎂並含有1%牛血清白蛋白和2mM EDTA)混合。將140 μ I血細胞/抗體/緩衝液等分試樣施加至設計成通過大小分離血細胞的微流體分離裝置。使用脫氣的磷酸鹽緩衝鹽水作為運行緩衝液，推動樣品通過該裝置。隨著樣品運動穿過該裝置，白細胞移入運行緩衝液流中，剩餘的血液組分和未結合的標記結合物繼續穿過晶片進入廢物流中。隨後通過螢光激活和檢測分析所收集白細胞部分的ΡΕ。螢光水平直接反映存在的CD4+T細胞的量。本文中提到的全部參考文獻通過引用的方式完整併入。現在已經充分描述了本發明，本領域技術人員將理解，可以在寬大和等同的條件、參數等範圍內實施本發明而不影響本發明或其任何實施方案的精神或範圍。
權利要求
1.一種用於分析血液樣品中存在的細胞類型的系統，其包含: a)反應室，其具有允許血液樣品及可檢測標記的抗體導入的至少一個開口或埠和來自所述反應室的培養基可以經其流過的至少一個出口開口或埠 ； b)微流體裝置，其包含從所述反應室與所述出口埠或開口處於流通連接的至少一個入口埠或開口和從所述裝置離開的可以經其通過材料的至少一個出口埠或開口，其中所述裝置能夠將白細胞與紅細胞分離並且其中所述反應室獨立於或集成至所述微流體裝置中； c)至少一個泵，其與在所述裝置上的入口或出口埠以如此方式連接，以允許所述泵提供足以推動流體從所述裝置上的入口埠或開口至所述裝置上的出口埠或開口的力； d)分析儀，其包括與在所述微流體裝置上的出口埠或開口處於流通連接的入口埠或開口，其中所述分析儀能夠進行材料的光學或化學分析，所述材料從所述微流體裝置上的出口流至所述分析儀上的入口； e)用於列印或顯示來自所述分析儀的結果的數據輸出裝置。
2.根據權利要求1所述的裝置，其中所述反應室獨立於所述微流體裝置並且所述微流體裝置包括至少兩個出口埠或開口，其中至少一個出口或開口與所述分析儀處於流通連接並且至少埠或開口與獨立的收集器皿處於流通連接。
3.根據權利要求2所述的裝置，其中所述分析儀是流式細胞儀、分光光度計、螢光檢測器或放射性活度計數器。
4.根據權利要求2所述的裝置，其中所述分析儀是流式細胞儀並且所述微流體裝置的出口埠或開口位於所述裝置相對於入口埠或開口的對側上。
5.根據權利要求2所述的裝置，還包括獨立於所述反應室、微流體裝置、分析儀和數據輸出裝置的緩衝液儲器，其中所述緩衝液儲器與所述微流體裝置處於流通連接。
6.根據權利要求1-5中任一項所述的裝置，其中所述微流體裝置基於大小分離樣品。
7.根據權利要求6所述的裝置，其中所述微流體裝置包括具有空隙網絡的微流體通道，當流體經所述微流體通道流過時，來自空隙的所述流的通量不等地分成主要通量組分和次要流量組分。
8.一種分析血液樣品以確定存在的不同細胞類型的量的方法，包括: a)獲得測試血液樣品； b)將所述測試血液樣品與一種或多種可檢測標記的抗體孵育，其中: i)所述抗體很大程度上不與紅細胞結合； ii)所述抗體優選地與一種或多種靶白細胞結合； iii)所述孵育導致抗體-細胞複合物的形成； c)使用微流體裝置，將所述抗體-細胞複合物與所述紅細胞並且與未結合的抗體分離； d)將分離步驟c)中所獲得的分離的抗體-細胞複合物中可檢測標記物的量定量以確定存在的靶白細胞的量。
9.根據權利要求8所述的方法，其中還包括將步驟d)中所獲得的結果與來自一個或多個對照樣品的結果比較並且基於這種比較得出所述靶白細胞是異常高或低的結論。
10.根據權利要求9所述的方法，其中所述抗體優選地與淋巴細胞結合。
11.根據權利要求10所述的方法，其中與優選地與淋巴細胞結合的抗體分離的抗體與測試血液樣品孵育，所述分離的抗體優選地與選自以下的一種或多種靶細胞結合:嗜中性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜酸性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞和樹枝狀細胞，並且其中，所述分離的抗體具有與識別所述淋巴細胞的抗體上的可檢測標記物不同的可檢測標記物。
12.根據權利要求10或11所述的方法，其中所述淋巴細胞是T淋巴細胞。
13.根據權利要求11所述的方法，其中所述淋巴細胞是CD8+T淋巴細胞。
14.根據權利要求9所述的方法，其中所述血液樣品從作為試驗的部分的個體獲得，以確定所述個體是否患有AIDS，或從已知患有AIDS的患者獲得，以確定疾病是否正在進展。
15.根據權利要求14所述的方法，其中所述抗體優選地與CD4+T淋巴細胞結合。
16.根據權利要求15所述的方法，其中所述抗體用螢光標記物標記並且通過流式細胞術定量。
17.根據權利要求8所述的方法，還包括通過螢光激活的細胞分選法分離細胞。
18.根據權利要求8-17中任一項所述的方法，其中所述微流體裝置基於大小分離細胞。
19.根據權利要求8-18中任一項所述的方法，其中使用根據權利要求1所述的系統實施所述分析法並且使用0.25-0.5ml血液樣品。
20.根據權利要求19所述的方法，其中所述系統還包括獨立於所述反應室、微流體裝置、分析儀和數據輸出裝置的緩衝液儲器，其中所述液儲器與所述微流體裝置處於流通連接。
全文摘要
本發明涉及用於分析血液樣品以定量存在的白細胞類型的方法。此外，本發明包括可用於這些方法的設備。所述方法學的一個特徵是使用微流體裝置將白細胞與紅細胞分離。
文檔編號G01N35/08GK103119441SQ201180045595
公開日2013年5月22日 申請日期2011年8月12日 優先權日2010年8月15日
發明者H·海內克 申請人:Gpb科學有限責任公司