鄰氨基苯甲醯胺和其作為vegf受體酪氨酸激酶抑制劑的用途的製作方法
2023-09-14 17:47:10
專利名稱：鄰氨基苯甲醯胺和其作為vegf受體酪氨酸激酶抑制劑的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的鄰氨基苯甲醯胺衍生物、其製備方法、其在治療人或動物體的方法中的應用、其單獨或與一種或多種其它藥學活性化合物組合用於治療特別是腫瘤性疾病如腫瘤疾病、視網膜病和年齡相關性黃斑變性中的用途；治療動物、特別是人的上述疾病的方法以及單獨或與一種或多種其它藥學活性化合物組合的上述化合物在製備用於治療腫瘤性疾病、視網膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物製品(藥物)中的用途。
已知某些疾病與血管生成失控有關，例如由眼部新血管化導致的疾病如視網膜病(包括糖尿病性視網膜病)、年齡相關性黃斑變性、銀屑病、成血管細胞瘤、血管瘤、動脈硬化、炎性疾病如類風溼性或風溼性炎性疾病，尤其是關節炎如類風溼性關節炎，或其它慢性炎性病症如慢性哮喘、動脈或移植後動脈粥樣硬化、子宮內膜異位和尤其是腫瘤性疾病，例如所謂的實體瘤和液體瘤(如白血病)。
在胚胎發育、正常生長過程中和多種病理異常和疾病中，在調控血管系統及其組分的生長和分化的網絡中心存在稱為「血管內皮生長因子」(VEGF)的血管生成因子及其細胞受體，血管生長因子是分子量為46千道爾頓的通過二硫鍵結合的二聚體糖蛋白(參見Breier，G.等人，Trends inCell Biology6，454-6)。
VEGF受體是跨膜受體酪氨酸激酶。已知有各種類型的VEGF受體，例如VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。
很多人腫瘤、特別是神經膠質瘤和癌，可表達高水平的VEGF及其受體。這已導致了如下假設腫瘤細胞釋放的VEGF可以以旁分泌方式刺激毛細血管的生長和腫瘤內皮的增殖，從而通過改善血液供應加速腫瘤的生長。從VEGF活性被抗體抑制的研究中已經獲得了VEGF在體內作為腫瘤血管生成因子的直接證據。
血管生成被視為那些生長超過約1-2毫米的最大直徑的腫瘤的絕對必要條件；達到此限，氧和營養物質可通過擴散供應至腫瘤細胞。
三種主要機制在抗腫瘤血管生成抑制劑的活性中發揮重要作用1)抑制血管、特別是毛細血管生長進入血管靜息(vascular-resting)腫瘤中，結果是由於凋亡和增殖之間達到平衡而沒有腫瘤淨生長；2)由於缺少出入腫瘤的血流而防止腫瘤細胞轉移；和3)抑制內皮細胞增殖，因此避免了由通常覆蓋血管內層的內皮細胞對周圍組織施加的旁分泌生長刺激作用。
在WO00/27820中述及了屬於鄰氨基苯甲醯胺類的化合物，據報導這些化合物可抑制VEGF受體酪氨酸激酶的活性、腫瘤的生長和VEGF-依賴性細胞增殖。
令人驚訝的是，現已發現下述式I的鄰氨基苯甲醯胺衍生物具有有利的藥理學特性並可抑制例如VEGF受體酪氨酸激酶的活性、腫瘤的生長和VEGF-依賴性細胞增殖。
式I的鄰氨基苯甲醯胺衍生物適合例如用於治療疾病，特別適用於在其治療和預防中對血管生成和/或VEGF受體酪氨酸激酶進行抑制表現出有益作用的疾病。
本發明涉及式I的鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物和互變異構體， 其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表全氟代低級烷基，且
X是O或S，以及上述鄰氨基苯甲醯胺、它們的N-氧化物和它們的互變異構體的鹽。
除非另外說明，上下文中所使用的一般術語在本公開內容中優選具有以下含義前綴「低級」表示具有最多7個且包括7個碳原子、尤其是最多4個且包括4個碳原子的基團，所述基團是直鏈或具有一個或多個分支的支鏈。
當複數形式用於化合物、鹽等時，也表示單個化合物、鹽等。
任何不對稱碳原子(例如在其中R9是低級烷基的式I化合物中的不對稱碳原子)可以以(R)-、(S)-或(R，S)-構型存在，優選以(R)-或(S)-構型存在。因此，化合物可以以異構體混合物或純異構體形式、優選以對映異構體純的非對映異構體形式存在。
本發明還涉及式I化合物的可能的互變異構體。在此所用的術語「互變異構體」特別涉及其中R1代表H且X是O或S的式I化合物，這些化合物若非全部也在一定程度上以如下所示的互變異構形式(I-互變異構體)存在，其中其它基團和符號具有本文所定義的含義。
(I-互變異構體)在優選實施方案中，烷基具有最多12個碳原子且特別地為低級烷基。
低級烷基優選為具有1且包括1至7且包括7個碳原子、優選1且包括1至4且包括4個碳原子的烷基，其為直鏈或支鏈；優選地，低級烷基是丁基如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、丙基如正丙基或異丙基、乙基或優選甲基。
在此所用的術語「全氟代低級烷基」意指其中所有的氫原子均被氟原子取代的低級烷基。
滷素特別地是氟、氯、溴或碘，特別是氟、氯或溴。
所述鹽是由具有鹼性氮原子的式I化合物優選與有機或無機酸以例如酸加成鹽、特別是可藥用鹽的形式生成。適宜的無機酸是例如氫滷酸如鹽酸、硫酸或磷酸。適宜的有機酸是例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二酸、乙醇酸、乳酸、富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、胺基酸如穀氨酸或天冬氨酸、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、環己烷羧酸、金剛烷羧酸、苯甲酸、水揚酸、4-氨基水揚酸、苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲-或乙-磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-，3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-環己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基氨基磺酸或其它有機質子酸如抗壞血酸。
對於分離或純化目的，也可能使用不可藥用的鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。對於治療用途，只能使用可藥用的鹽或游離化合物(適合時以藥物製劑的形式使用)，因此優選這些化合物。
鑑於游離形式的新化合物和其鹽形式、包括那些例如在新化合物純化或鑑別中可用作中間體的鹽之間的密切關係，上下文中任何對游離化合物的提及應理解為也同時提及相應的鹽為宜。
如上下文中所述，式I化合物和其N-氧化物具有重要的藥理學特性。
本發明的化合物作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效可證實如下抗VEGF-受體酪氨酸激酶活性試驗。使用Flt-1 VEGF-受體酪氨酸激酶進行該試驗。詳細過程如下室溫下，將30μl激酶(10ng Flt-1激酶結構域，Shibuya等人，Oncogene 5，519-24)的20mM Tris·HClpH 7.5溶液、3mM二氯化錳(MnCl2)、3mM氯化鎂(MgCl2)、10μM釩酸鈉、0.25mg/ml聚乙二醇(PEG)20000、1mM二硫蘇糖醇和3μg/μl聚(穀氨酸，酪氨酸)4∶1(Sigma，Buchs，瑞士)、8μM[33P]-ATP(0.2μCi)、1％二甲亞碸和0至100μM供試化合物一起溫育10分鐘。然後通過加入10μl 0.25M乙二胺四乙酸鹽(EDTA)pH 7終止反應。用多道分液器(LAB SYSTEMS，美國)將20μl等分試樣通過Millipore微滴過濾器歧管加至PVDF(＝聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，美國)上，並與真空連接。完全除去液體後，將膜在含有0.5％磷酸(H3PO4)的浴中連續洗滌4次並用乙醇洗滌一次，振搖下每次溫育10分鐘，然後置於Hewlett Packard TopCount Manifold中，加入10μl Microscint(β-閃爍計數液)後測定放射活性。通過對每種化合物在三個濃度(通常是0.01、0.1和1μmol)下的抑制百分比進行線性回歸分析確定IC50值。發現式I化合物的IC50值為0.001至1μM、優選0.001至0.1μM。
本發明化合物的抗腫瘤功效可在體內證實如下裸鼠異種移植模型中的體內活性將雌性BALB/c裸鼠(8-12周齡，Novartis Animal Farm，Sisseln，瑞士)置於無菌條件下，自由飲水和進食。通過給小鼠皮下注射腫瘤細胞(例如Du 145前列腺癌細胞系(ATCCNo.HTB 81，參見Cancer Research37，4049-58(1978))或通過在異氟烷(Forene，Abbott，瑞士)麻醉下用13號套針在小鼠的左肋皮下植入腫瘤碎片(約25mg)以誘發腫瘤。一旦腫瘤的平均體積達到100mm3就立即開始供試化合物治療。每周2至3次並在末次治療後24小時通過測定兩個垂直軸的長度測量腫瘤的生長。按照已公開的方法計算腫瘤體積(參見Evans等人，Brit.J.Cancer45，466-8)。將抗腫瘤功效確定為治療動物腫瘤體積的平均增加除以未治療動物(對照)腫瘤體積的平均增加再乘以100，表示為T/C％。將最小平均腫瘤體積與治療開始時的平均腫瘤體積相比報導腫瘤消退(以％給出)。供試化合物每日管飼施用。
或者，也可以以相同方式使用其它細胞系，例如-MCF-7乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 22；參見J.Natl.Cancer Inst.(Bethesda)51，1409-16)；-MDA-MB 468乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 132；參見In Vitro14，911-15)；-MDA-MB 231乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 26；參見J.Natl.CancerInst.(Bethesda)53，661-74)；-Colo 205結腸癌細胞系(ATCC No.CCL 222；參見Cancer Res.38，1345-55)；-HCT 116結腸癌細胞系(ATCC No.CCL 247；參見Cancer Res.41，1751-6)；-DU 145前列腺癌細胞系DU 145(ATCC No.HTB 81；參見Cancer Res.37，4049-58)；和-PC-3前列腺癌細胞系PC-3(ATCC No.CRL 1435；參見Cancer Res.40，524-34)。
用另一種體外細胞實驗可確證VEGF-誘發的KDR-受體自磷酸化抑制作用在6-孔細胞培養板上，將固定表達人VEGF受體(KDR)的轉染CHO細胞接種於完全培養基(含有10％胎牛血清＝FCS)中，並於37℃、5％CO2下培養直至呈約80％的融合。然後將供試化合物用培養基(無FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)稀釋並加至細胞中。(對照包含無供試化合物的培養基)。於37℃下培養2小時後，加入重組VEGF；VEGF的終濃度是20ng/ml。再於37℃下培養5分鐘後，將細胞用冰冷的PBS(磷酸鹽緩衝的鹽水)洗滌兩次並立即在每孔100μl的溶胞緩衝液中進行細胞溶解。然後將溶胞產物離心以除去細胞核，使用市售蛋白分析儀(BIORAD)測定上清液的蛋白濃度。之後，立即使用溶胞產物或必要時貯存於-20℃下。
用夾心ELISA法測定KDR-受體的磷酸化將針對KDR的單克隆抗體(例如Mab 1495.12.14；由H.Towbin製備)固定於黑色ELISA板(Packard的OptiPlateTMHTRF-96)上。然後洗板並用1％BSA的PBS溶液飽和剩餘的游離蛋白結合位點。然後，將細胞溶解物(每孔20μg蛋白)在這些板中於4℃下與和鹼性磷酸酯酶偶聯的抗磷酸酪氨酸抗體(得自TransductionLaboratories的PY20AP)一起培養過夜。然後(再次洗板並且)用發光AP底物(CDP-Star，即用，Emerald II，TROPIX)證明抗磷酸酪氨酸抗體與捕獲的磷酸化受體的結合。在Packard Top Count Microplate閃爍計數儀(Top Count)上測定發光。陽性對照(用VEGF激發)信號和陰性對照(不用VEGF激發)信號之差相當於VEGF-誘發的KDR受體磷酸化(＝100％)。計算供試物質的活性，以VEGF-誘發的KDR受體磷酸化的百分抑制率表示，其中誘發半數最大抑制作用的物質濃度定義為ED50(50％抑制的有效劑量)。
式I化合物或其N-氧化物也在不同程度上抑制其它由營養因子介導的參與信號轉導的酪氨酸激酶，例如Src家族的激酶，特別是c-Src激酶、Lck和Fyn；還有EGF家族的激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰島素樣生長因子受體激酶(IGF-1激酶)，特別是PDGF受體酪氨酸激酶家族的成員如PDGF受體激酶、CSF-1受體激酶、Kit受體激酶和VEGF-受體激酶；還有絲氨酸/蘇氨酸激酶，所有這些均在哺乳動物細胞、包括人細胞的生長調控和轉化中發揮作用。
基於這些研究，本發明的式I化合物特別地對依賴於蛋白激酶的病症、特別是增殖性疾病表現出治療功效。
式I化合物在治療炎性風溼性或類風溼性疾病例如關節炎中的有用性可證實如下用熟知的大鼠佐劑性關節炎模型(Pearson，Proc.Soc.Exp.Biol.91，95-101(1956))試驗式I化合物或其鹽的抗關節炎活性。可以用兩種不同的給藥方案治療佐劑性關節炎佐劑免疫化時開始給藥(預防給藥)；或自關節炎反應已經建立時的第15天給藥(治療給藥)。優選使用治療給藥方案。作為對比，在單獨的一組中施用環加氧酶-2抑制劑，如5-溴-2-(4-氟苯基)-3-[4-(甲基磺醯基)苯基]噻吩或雙氯芬酸。
具體而言，在雄性Wistar大鼠(每組5隻動物，重約200g，供自IffaCredo，法國)的尾根部i.d.(皮內)注射0.1ml含有0.6mg凍幹的熱滅活結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)的礦物油。從第15天至第22天用供試化合物(口服3、10或30mg/kg，每天一次)或賦形劑(水)治療大鼠(治療給藥方案)。實驗結束時，用千分尺測量跗關節腫脹。以用賦形劑治療的關節炎動物(0％抑制)和用賦形劑治療的正常動物(100％抑制)為參照，計算足腫脹抑制百分數。
基於這些研究，式I化合物驚人地適合用於治療炎性(尤其是風溼性或類風溼性)疾病。
基於其作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效，式I化合物主要抑制血管的生長，因此例如對許多與血管生成失控相關的疾病有效，尤其是眼部新血管化導致的疾病，尤其是視網膜病如糖尿病性視網膜病或年齡相關性黃斑變性、銀屑病、成血管細胞瘤如血管瘤、腎小球膜細胞增殖疾病如慢性或急性腎病，例如糖尿病性腎病、惡性腎硬化、血栓性微血管病症候群(thrombotic micro-angiopathy syndrome)或移植排斥，或尤其是炎性腎病如腎小球腎炎，尤其是腎小球膜增殖性腎小球腎炎、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎病、高血壓性腎硬化(hypertensive nephrosclerosis)、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性炎症、纖維化疾病(例如肝硬變)、糖尿病、子宮內膜異位、慢性哮喘、動脈或移植後動脈粥樣硬化、神經變性疾病以及尤其是腫瘤性疾病如白血病，尤其是急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病和慢性髓性白血病，和其它「液體腫瘤」，尤其是那些表達c-kit、KDR或flt-1的液體瘤，以及實體腫瘤，尤其是乳腺癌、結腸癌、肺癌(尤其是小細胞肺癌)、前列腺癌或卡波西氏肉瘤。式I化合物(或其N-氧化物)可抑制腫瘤生長，且尤其適於預防腫瘤的轉移性擴散和微小轉移灶的生長。
式I化合物可單獨施用或與一種或多種其它治療劑組合施用，可能的組合治療採取固定組合的形式，或者本發明化合物和一種或多種其它治療劑交錯施用或彼此獨立地施用，或者固定組合與一種或多種其它治療劑組合施用。此外，式I化合物還可以與化學治療、放射治療、免疫治療、外科手術或它們的組合聯合施用尤其對於腫瘤的治療。如上所述，在其它治療方案中，長期治療與輔助治療同樣是可能的。其它可能的治療是在腫瘤消退後維持病人的狀態，或甚至例如在具有罹患腫瘤危險的患者中進行化學預防治療。
用於可能的組合的治療劑尤其為一種或多種細胞抑制或細胞毒性化合物，例如選自下組的一種或幾種化療劑，其包括但不限於多胺生物合成抑制劑、蛋白激酶抑制劑—尤其是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶如蛋白激酶C抑制劑或酪氨酸蛋白激酶如表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑—、細胞因子、負生長調節劑如TGF-β或IFN-β、芳香酶抑制劑、SH2結構域與磷酸化蛋白相互作用抑制劑、抗雌激素劑、拓撲異構酶I抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、微管活性劑、烷基化劑、抗腫瘤抗代謝劑、鉑化合物、其它抗血管生成化合物、促黃體生成素釋放素激動劑、抗雄激素劑、雙膦酸類化合物和曲妥單抗(trastuzumab)。
對於下文提及的優選的式I化合物及其N-氧化物，可以合理地使用上文提及的通用定義的取代基定義，例如以便用更具體的定義或尤其是用具有優選特徵的定義代替更通用的定義。
此外，本發明涉及其中的基團和符號具有如上定義的含義的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽在製備用於治療視網膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產品中的用途。
此外，本發明涉及治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用對所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽，其中的基團和符號具有如上定義的含義。
此外，本發明涉及治療視網膜病或年齡相關性黃斑變性的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用對所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽，其中的基團和符號具有如上定義的含義。
本發明特別涉及式I化合物，其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，其N-氧化物或互變異構體，以及上述化合物、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
優選地，本發明特別涉及式I化合物，其中
R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，其互變異構體，以及上述化合物或其互變異構體的鹽。
更具體而言，優選以下式I化合物及其互變異構體2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺鹽酸鹽，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺，2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺，和2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲醯胺，或上述化合物或其互變異構體的鹽。
本發明的化合物可通過本身已知的方法製備，儘管所述方法至今尚未應用於本發明的新化合物，尤其使用特徵如下的方法為了合成其中R1代表低級烷基，其餘的符號R2和R3如式I化合物中所定義的式I化合物，在還原劑存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定義，與式III的羰基化合物反應， 其中X代表O或S且R1是低級烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能團被保護的形式存在，必要時和/或以鹽形式存在，條件是存在成鹽基團且鹽形式的反應是可能的；
其中式I化合物的被保護衍生物中的任何保護基團均被除去；並且如果需要，將可獲得的式I化合物轉化為另一種式I化合物或其N-氧化物，將游離的式I化合物轉化為鹽，將可獲得的式I化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式I化合物的異構體混合物拆分為單獨的異構體。
還原性烷基化詳述在以下更詳細的方法描述中，除非另外說明，R1、R2、R3和X如式I化合物中所定義。
式III的羰基化合物也可以以活性衍生物的形式存在；但是，優選游離的醛或酮。
式III化合物的活性衍生物為例如相應的亞硫酸氫鹽加合物或尤其是式III化合物與醇例如低級烷醇形成的半縮醛、縮醛、半縮酮或縮酮；或式III化合物與硫醇例如低級鏈烷硫化物形成的硫縮醛或硫縮酮。
還原性烷基化優選如下進行於常壓或0.1至10兆帕(Mpa)的壓力下、在催化劑存在下進行氫化，所述催化劑尤其是貴金屬催化劑如鉑或尤其是鈀，其優選鍵合於載體材料如碳上，或重金屬催化劑如阮內鎳，或者在適宜的酸、優選較弱的酸如低級鏈烷羧酸、尤其是乙酸或磺酸如對甲苯磺酸存在下，藉助複合氫化物進行還原，如硼氫化物，尤其是鹼金屬氰硼氫化物，例如氰基硼氫鈉；所述反應在有水或無水存在下、在常規溶劑中進行，例如醇如甲醇或乙醇，或醚例如環醚如四氫呋喃。
保護基如果式II或III化合物中有一個或多個其它官能團例如羧基、羥基、氨基或巰基由於不應參與反應而被保護或需要被保護，那麼這些保護基是肽化合物合成和頭孢菌素和青黴素以及核酸衍生物和糖的合成中通常使用的基團。
保護基團可以已經存在於前體中，應保護有關官能團不發生不必要的副反應如醯化、醚化、酯化、氧化、溶劑分解以及類似反應。保護基團的特徵在於它們例如在類似於生理條件的條件下易於除去，即沒有不期望的副反應，通常是通過溶劑分解、還原、光解或者還通過酶活性除去，且不出現於終產物中。專業人員知道或可容易地確定哪些保護基團適用於上下文中所提及的反應。
用所述保護基團對上述官能團進行保護、保護基團本身以及它們的除去反應在以下文獻中述及例如標準參考書如J.F.W.McOmie，「有機化學中的保護基」，Plenum出版社，倫敦和紐約1973；T.W.Greene，「有機合成中的保護基」，Wiley，紐約1981；「肽」，第3卷(編輯E.Gross和J.Meienhofer)，Academic出版社，倫敦和紐約1981；「Methoden derorganischen Chemie」(有機化學方法)，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，斯圖加特1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit，「Aminosuren、Peptide、Proteine」(胺基酸、肽、蛋白質)，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982；以及Jochen Lehmann，「Chemieder KohlenhydrateMonosaccharide und Derivate」(碳水化合物化學單糖及其衍生物)，Georg Thieme Verlag，斯圖加特1974。
其它方法步驟具有成鹽基團的式I化合物的鹽可以以本身已知的方法製備。因此，通過用酸或用適宜的陰離子交換試劑進行處理可獲得式I化合物的酸加成鹽。具有兩個酸分子的鹽(例如式I化合物的二滷化物)也可轉化為每個化合物具有一個酸分子的鹽(例如單滷化物)；這可以通過以下方法完成加熱至熔融，或例如在高真空、升高的溫度例如130至170℃下以固態形式進行加熱，從每分子式I化合物中消除1分子的酸。
鹽通常可轉化為游離化合物，例如通過用適宜的鹼性試劑處理，例如鹼金屬碳酸鹽、鹼金屬碳酸氫鹽或鹼金屬氫氧化物，通常是碳酸鉀或氫氧化鈉。
由式II與式III化合物反應得到的式I的鄰氨基苯甲醯胺，其中R1代表低級烷基且其餘的符號R2和R3如式I化合物中所定義，可按照以下方法進一步反應，得到其中R1代表H的式I的鄰氨基苯甲醯胺。在45℃至70℃的溫度下、在適宜的溶劑例如滷代烷烴如氯仿中，用碘化三甲基矽烷將其中R1代表低級烷基的式I的鄰氨基苯甲醯胺處理約20至35小時，任選隨後用甲醇處理。
一般方法條件在此所述的所有方法步驟均可在已知的反應條件下進行，優選在那些特別提及的條件下進行；不存在或通常存在優選對所用試劑呈惰性且能溶解它們的溶劑或稀釋劑；不存在或存在催化劑、縮合劑或中和劑，例如離子交換劑，通常是例如H+形式的陽離子交換劑，這取決於反應和/或反應物的類型；溫度為降低、正常或升高的溫度，例如-100℃至約190℃、優選約-80℃至約150℃，例如-80至-60℃下、室溫、-20至40℃或所用溶劑的沸點；壓力為大氣壓力下或在密閉容器中，其中有壓力為宜；和/或在惰性氣氛、例如在氬氣或氮氣下。
如果含有成鹽基團，所有起始化合物和過渡物均可以以鹽存在。在上述化合物的反應過程中也可以以鹽存在，只要反應不會因此受到幹擾即可。
除非在方法描述中另外指明，可從中選擇的適於所述反應的溶劑包括例如水；酯，通常是低級烷基-低級鏈烷酸酯，例如二乙基乙酸酯；醚，通常為脂肪族醚，例如二乙醚，或環醚，例如四氫呋喃；液體芳香族烴，通常是苯或甲苯；醇，通常是甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，通常是乙腈；滷代烴，通常是二氯甲烷；醯胺，通常是二甲基甲醯胺；鹼，通常是雜環氮鹼，例如吡啶；羧酸，通常是低級鏈烷羧酸，例如乙酸；羧酸酐，通常是低級鏈烷酸酐，例如乙酸酐；環狀、直鏈或支鏈烴，通常是環己烷、己烷或異戊烷，或這些溶劑的混合物，例如水溶液。上述溶劑混合物也可以用於例如色譜法或分配處理中。
式I化合物、包括它們的鹽也可以以水合物的形式獲得，或者它們的晶體可以包括例如結晶所用的溶劑(以溶劑合物存在)。
在優選實施方案中，根據實施例中定義的方法和方法步驟或其類似方法和方法步驟製備了式I化合物。
活性成分的劑量取決於多種因素，包括患者的類型、種屬、年齡、體重、性別和醫學狀況；待治療病症的嚴重性；施用途徑；患者的腎功能和肝功能以及所用的具體化合物。一般的內科醫生、臨床醫生或獸醫可容易地確定並開具預防、抵抗或抑制病症發展所需的有效量的藥物。為了在使藥物濃度處於可產生功效但無毒性的範圍內的過程中獲得最佳精度，需要掌握藥物在靶部位的動力學。這包括藥物的分布、平衡和消除因素。
本發明還涉及藥物組合物，其包含有效量的、尤其是治療以上提及的疾病之一有效量的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，以及適於局部、經腸例如口服或直腸或經胃腸外施用的、可為有機或無機、固體或液體的可藥用載體。
口服施用特別地使用片劑或明膠膠囊劑，其包含活性成分以及稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、甘露醇和/或甘油，和/或潤滑劑和/或聚乙二醇。片劑還可以包含粘合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉如玉米、小麥或米澱粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，並且如果需要還包含崩解劑，例如澱粉、瓊脂、藻酸或其鹽如海藻酸鈉，和/或泡騰混合物，或吸收劑、染料、矯味劑和甜味劑。也可能以胃腸外可施用的組合物形式或以輸液形式使用本發明的藥理學活性化合物。藥物組合物可以是無菌的和/或可包含賦形劑，例如防腐劑、穩定劑、潤溼劑和/或乳化劑、增溶劑、調節滲透壓的鹽和/或緩衝劑。本發明的藥物組合物，如果需要可包含其它藥理學活性物質，所述組合物可通過本身已知的方法製備，例如通過常規的混合、制粒、成型、溶解或凍幹方法製備，且可包含約1％至95％、尤其是約1％至約20％的活性成分。
此外，本發明涉及用於治療溫血動物、包括人的腫瘤的藥物組合物，其包含抗腫瘤有效劑量的上述式I化合物或所述化合物的可藥用鹽以及藥用載體。
另外，本發明提供了在治療人或動物體的方法中使用的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽。
本發明還涉及式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽的用途，用於製備用來治療腫瘤性疾病、視網膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產品。
除此之外，本發明還教導了治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用抗所述疾病有效量的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物或互變異構體的可藥用鹽。
起始原料新的起始原料和/或中間體及其製備方法也是本發明的主題。在優選實施方案中，使用了所述起始原料，並選擇了能夠獲得優選化合物的反應條件。
式III、IV和V的起始原料是已知的，其市售可得或可根據本領域已知的方法或類似方法合成。
例如，式II化合物可通過還原式IV的硝基化合物而製備， 其中R2和R3具有式I下所給出的含義。
還原優選在適宜的還原劑如氯化亞錫(II)或氫存在下、在適合的催化劑如阮內鎳(那麼優選在壓力如2至20巴下使用氫)或PtO2存在下，於適合的溶劑例如醇如甲醇中進行。反應溫度優選為0至80℃、尤其是15至30℃。
式IV的硝基化合物可通過使式VI的活化的酸衍生物，
其中Y是滷素或另一種適宜的離去基團，與式V的胺反應而獲得， 其中R2和R3如式I下所定義，例如在偶聯劑如二環己基碳二亞胺存在下、在0℃至50℃、優選室溫下進行。
所有其餘的起始原料均是已知的、能夠根據已知方法製備或市售可得；具體而言，它們可用實施例中所述的方法進行製備。
在起始原料的製備中，必要時應對不參與反應的現有官能團進行保護。優選的保護基、它們的引入和除去在「保護基」項下或實施例中述及。
所有其餘的起始原料均是已知的、能夠根據已知方法製備或市售可得；具體而言，它們可用實施例中所述的方法進行製備。
以下實施例用於闡述本發明，但不限制本發明的範圍。
溫度以攝氏度(℃)計。除非另外說明，反應均在室溫下進行。
實施例參比實施例12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(未作權利要求)在25℃下、30分鐘內，向攪拌著的乙酸(3.8mL)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士；7.80g，57mmol)和2-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲醯胺(步驟1.2；13.65g，38mmol)於甲醇(380mL)中的混合物中逐份加入氰基硼氫鈉(95％，8.80g，133mmol)。將混合物攪拌16小時。減壓下蒸除溶劑，得到的殘餘物用飽和碳酸氫鈉水溶液(500mL)處理並用二氯甲烷(3×150mL)萃取。將合併的萃取液乾燥(Na2SO4)、過濾，減壓下蒸除溶劑，得到的粗產物經矽膠柱色譜純化，用5％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫，並用乙醚-己烷重結晶，得到標題化合物，為米黃色結晶狀固體，m.p.101-103℃。
步驟1.12-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲醯胺在室溫下，將3-氨基-6-溴三氟甲苯(Fluka，Buchs，瑞士；24.0g，100mmol)的乙酸乙酯(240mL)溶液加入攪拌著的氫氧化鈉水溶液(1M，110mL)中。然後在30分鐘內向攪拌的溶液中滴加2-硝基苯甲醯氯(Fluka，Buchs，瑞士；14.5mL，110mmol)的乙酸乙酯(150mL)溶液進行處理。然後在環境溫度下將所得混合物攪拌30分鐘。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物，隨後將合併的萃取液依次用鹽酸(2M，2×100mL)、水(2×100mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100mL)和飽和氯化鈉水溶液(1×100mL)洗滌、乾燥(MgSO4)、過濾並於減壓下蒸除溶劑，得到的粗產物經乙酸乙酯-己烷重結晶純化，得到標題化合物，為米黃色結晶狀固體，m.p.157-158℃。
步驟1.22-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲醯胺在21℃、大氣壓下，將2-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲醯胺(中間體1a；32g，82mmol)的甲醇(1000mL)溶液用阮內鎳(6g)氫化。7小時後吸收了計算量的氫。過濾混合物並在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產物經乙醚-己烷重結晶純化，得到標題化合物，為無色結晶狀固體，m.p.142-144℃。
實施例22-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺鹽酸鹽通過類似於實施例1所述的方法、使用步驟2.2的中間體和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士)製得標題化合物；m.p.133-135℃。
步驟2.12-硝基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺類似於步驟1.1、使用3-(三氟甲基)苯胺(Aldrich，Buchs，瑞士)製得標題化合物；m.p.134-135℃。
步驟2.22-氨基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲醯胺類似於步驟1.2、使用2-硝基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(步驟2.1)製得標題化合物；m.p.132-133℃。
實施例32-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲醯胺通過類似於實施例1所述的方法、使用步驟3.2的中間體和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Aldrich，Buchs，瑞士)製得標題化合物；m.p.134-135℃。
步驟3.12-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺類似於步驟1.1、使用2-甲基-3-(三氟甲基)苯胺(Fluorochem，Derbyshire，英格蘭)製得標題化合物；m.p.188-189℃。
步驟3.22-氨基-N-[2-甲基-(3-三氟甲基)苯基]苯甲醯胺類似於步驟1.2、使用2-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(步驟3.1)製得標題化合物；m.p.128-129℃。
參比實施例42-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[4-丙炔基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(未作權利要求)在60℃、氬氣氛下，將2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(步驟4.1；1.10g，2.5mmol)和碘化三甲基矽烷(Fluka，Buchs，瑞士；1.0mL，7.5mmol)在氯仿(30mL)中的混合物攪拌16小時。冷卻混合物，然後用甲醇(2mL)處理並在室溫下攪拌10分鐘。減壓下蒸除溶劑，殘餘物用氨水溶液(5％，100mL)處理，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將合併的萃取液用飽和氯化鈉水溶液(50mL)洗滌、乾燥(MgSO4)、過濾並在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產物經矽膠柱色譜純化，用乙酸乙酯洗脫，用熱乙酸乙酯-己烷重結晶，得到標題化合物，為無色結晶狀固體；m.p.208-212℃。
步驟4.12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)-苯基]苯甲醯胺在25℃下，向攪拌著的2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(參比實施例1；3.98g，8.3mmol)的乾燥甲苯(200mL)溶液中通氬氣20分鐘。然後加入三丁基-1-丙炔基錫烷(80％，4.1g，9.96mmol)和四(三苯基膦)鈀(O)(260mg)，所得混合物在氬氣氛下於100℃加熱17小時。然後將混合物冷卻、用氫氧化鈉水溶液(0.1M，85mL)處理並通空氣2小時。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物。將有機相依次用水(2×40mL)和飽和氯化鈉水溶液(1×40mL)洗滌、乾燥(Na2SO4)、過濾並在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產物經矽膠柱色譜純化，用33％乙酸乙酯/己烷洗脫，用乙醚-己烷重結晶，得到標題化合物，為淺黃色結晶狀固體；m.p.123-124℃。
實施例52-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺通過類似於實施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(實施例2)製得標題化合物；m.p.171-172℃。
實施例62-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺通過類似於實施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺(實施例3)製得標題化合物；m.p.191-192℃。
實施例7軟膠囊劑如下製備5000粒軟明膠膠囊，每粒包含0.05g以上實施例提及的式I化合物之一作為活性成分組成活性成分 250gLauroglycol2升製備方法將粉狀活性成分混懸於Lauroglycol(月桂酸丙二醇酯，GattefosséS.A.，裡昂，法國)中並於溼法粉碎機中研磨，獲得約1至3μm的粒徑。然後用膠囊填充機將每份0.419g的混合物灌入軟明膠膠囊中。
權利要求
1.式I的鄰氨基苯甲醯胺， 其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表全氟代低級烷基，且X是O或S，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
2.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲醯胺，其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
3.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲醯胺，其中R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺或其互變異構體的鹽。
4.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲醯胺，其選自2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺鹽酸鹽，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺，2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲醯胺，和2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲醯胺，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
5.權利要求1至4的任一項的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽，其用於治療人或動物體的方法中。
6.式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體或所述化合物的可藥用鹽的用途，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義，用於製備用來治療腫瘤性疾病的藥物產品。
7.式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體或所述化合物的可藥用鹽的用途，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義，用於製備用來治療視網膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產品。
8.治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用有效對抗所述疾病量的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲醯胺、其N-氧化物或其互變異構體的可藥用鹽，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義。
9.藥物製劑，其包含權利要求1至4的任一項的式I的鄰氨基苯甲醯胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽或其水合物或溶劑合物，以及至少一種可藥用載體。
10.製備式I的鄰氨基苯甲醯胺的方法， 其中R1代表低級烷基且其餘的符號R2和R3如權利要求1所定義，其中在還原劑存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定義，與式III的羰基化合物反應， 其中X代表O或S且R1是低級烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能團被保護的形式存在，必要時和/或為鹽的形式，條件是存在成鹽基團且鹽形式的反應是可能的；其中式I化合物的被保護衍生物中的任何保護基均被除去；並且如果需要，將可獲得的式I化合物轉化為另一種式I化合物或其N-氧化物，將游離的式I化合物轉化為鹽，將可獲得的式I化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式I化合物的異構體混合物拆分成單獨的異構體。
全文摘要
本發明涉及式(I)的鄰氨基苯甲醯胺衍生物，其中R
文檔編號A61P15/00GK1585750SQ02822209
公開日2005年2月23日 申請日期2002年11月7日 優先權日2001年11月8日
發明者G·博爾德, P·菲雷, P·W·曼利 申請人:諾瓦提斯公司