金櫻根中金櫻根皂苷d和e的提取與純化方法
2023-10-29 23:50:52 2
專利名稱：金櫻根中金櫻根皂苷d和e的提取與純化方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥材對照品製備方法，具體是一種金櫻根中金櫻根皂苷D和E 的提取與純化方法。
背景技術：
2008年我國首次把中藥標準物質研究列入國家科技計劃，建立我國中藥材標準物質、中藥材物質標準、中藥材標準分析方法技術規範和國際上通行的中藥標準是實現中藥現代化的關鍵。金櫻子主要分布在長江以南，其果實金櫻子為藥典收載品種，具固精、止帶功效；其根即金櫻根，為兩廣習用藥材，有固澀、殺蟲療效，主治尿道和婦科炎症。金櫻根支撐著我國70億元中藥產業，為廣西著名三金片和金雞膠囊的君藥，也是婦科千金片和王老吉重要配伍藥材。但目前為止，尚未見有金櫻根對照品金櫻根D和E的提取製備與純化方法的相關報導。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種高效率、低成本中藥材對照品金櫻根D和 E的提取製備與純化方法。本發明以如下技術方案解決上述技術問題本發明金櫻根中金櫻根皂苷D和E的提取與純化方法，包括以下步驟(1)稱取金櫻根藥材粉末(過50目篩)，按每10公斤粉末加入100L體積濃度為 70-85 %的乙醇液超聲提取，然後浸泡一個月，過濾，濾液合併濃縮至無醇味，加水溶解後， 再用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸乾，得藥膏；(2)用甲醇溶解後，加入100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目的矽膠裝柱， 上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份，點板，採用顯色劑為體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾，得浸膏；(3)再加入100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份，點板，採用的顯色劑是體積濃劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得浸膏；(4)用甲醇溶解後，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現五個明顯斑點，稱取100 200目矽膠拌樣，取200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 5 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份， 點板，採用的顯色劑是體積濃度為10 %的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，
得浸膏；(5)用甲醇溶解後，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現2個明顯的斑點，稱取100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 8 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收
3集餾份，等出現目標斑點，其中目標斑點較純析出晶體記為①，出現另一斑點較純洗出晶體記為②，分別把①和②重結晶，得到相應的單體，分別命名為金櫻根D和E。在步驟(2)中，100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟(1)得到的藥膏的0. 6 0. 85倍和15倍；在步驟(3)中，100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟⑵得到的浸膏的1倍和12-18倍；在步驟(4)中，100 200目矽膠和 200 300目矽膠的用量分別是步驟(3)得到的浸膏的1倍和16-18倍；在步驟(5)中， 100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟(4)得到的浸膏的1倍和10倍。採用本發明方法可製取中藥材對照品金櫻根D和E，而且效率高、成本低。
圖1是本發明方法得到的金櫻根皂苷D和E的結構圖。
具體實施例方式以下通過具體實施例對本發明的技術方案作進一步說明。實施例1稱取10公斤金櫻根藥材粉末(50目)，加入100L體積濃度為70%乙醇液超聲提取，浸泡一個月，過濾，濾液合併濃縮至無醇味，加水溶解後，直接用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸乾，稱取80g的藥膏；用甲醇溶解後，加入50gl00 200目的矽膠拌樣，稱取1200g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份每瓶500mL，點板，採用的顯色劑為體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，18 70瓶出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾，得45g浸膏；加入45g的100 200目的矽膠拌樣，稱取800g的200 300目矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾標斑點，合併濃縮蒸乾，得IOg浸膏；用甲醇溶解，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0. 08 的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現五個明顯斑點(含目標斑點)，稱取IOg 100 200目矽膠拌樣，取180g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 5 0. 04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶50mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，70 120瓶出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得2. 5g浸膏；用甲醇溶解，點板， 採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現2個明顯的斑點， 稱取2. 5g 100 200目的矽膠拌樣，稱取25g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 8 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶25mL，55 130 瓶出現目標斑點，其中67 95瓶目標斑點較純析出晶體記為①，130 170瓶出現另一斑點，其中141 157瓶斑點較純洗出晶體記為②。分別把①和②重結晶，得到相應的單體， 分別命名為金櫻根D和E。實施例2稱取20公斤金櫻根藥材粉末(50目)，加入200L體積濃度為80 %的乙醇液超聲提取，浸泡一個月，過濾，濾液合併濃縮至無醇味，加水溶解後，直接用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸乾，稱取IOOg的藥膏；用甲醇溶解後加入75gl00 200目的矽膠拌樣，稱取1500g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份每瓶500mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10 %的濃硫酸乙醇液，18 70瓶出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾，得^g浸膏；加入55g的100 200目的矽膠拌樣，稱取850g的200 300目矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份每瓶 250mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，27 77瓶出現目標斑點， 合併濃縮蒸乾，得12g浸膏；用甲醇溶解，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現五個明顯斑點(含目標斑點)，稱取12g 100 200目矽膠拌樣，取200g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 5 0. 04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶50mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為的10% 濃硫酸乙醇液，70 120瓶出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得3g浸膏；用甲醇溶解，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現2個明顯的斑點，稱取3g 100 200目的矽膠拌樣，稱取30g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 8 0. 04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶25mL，55 130瓶出現目標斑點，其中67 95瓶目標斑點較純析出晶體記為①，130 170瓶出現另一斑點， 其中141 157瓶斑點較純洗出晶體記為②。分別把①和②重結晶，得到相應的單體，分別命名為金櫻根D和E。實施例3稱取30公斤金櫻根藥材粉末(50目)，加入300L體積濃度為85%的乙醇液超聲提取，浸泡一個月，過濾，濾液合併濃縮至無醇味，加水溶解，直接用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸乾，稱取120g藥膏；用甲醇溶解後加入IOOglOO 200目的矽膠拌樣，稱取1800g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份每瓶500mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10 %的濃硫酸乙醇液，18 70瓶出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾，得80g浸膏，加入80g的100 200目的矽膠拌樣，稱取IOOOg的200 300目矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份每瓶 250mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，27 77瓶出現目標斑點， 合併濃縮蒸乾，得15g浸膏；用甲醇溶解，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現五個明顯斑點(含目標斑點)，稱取15g 100 200目矽膠拌樣，取250g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 5 0. 04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶50mL，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，70 120瓶出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得3. 5g浸膏；用甲醇溶解，點板， 採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現2個明顯的斑點， 稱取3. 5g 100 200目的矽膠拌樣，稱取35g 200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 8 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，每瓶25mL，55 130 瓶出現目標斑點，其中67 95瓶目標斑點較純析出晶體記為①，130 170瓶出現另一斑點，其中141 157瓶斑點較純洗出晶體記為②。分別把①和②重結晶，得到相應的單體， 分別命名為金櫻根D和E。以下為純度檢測學和結構鑑定實驗資料
金櫻根皂苷D和E的純度檢查 對照品的TLC的檢查取金櫻根皂苷D、E對照品，加甲醇製成每Iml含Im g的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄V B)試驗，對照品溶液5 μ L，另取金櫻根甲醇提取溶液10 μ L、分別點在同矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-甲酸(體積比為5 1 1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以香草醛-硫酸液顯色，結果顯示金櫻根皂苷D、金櫻根皂苷E的斑點是單一斑點，同時也證明金櫻根藥材中含有這兩種成分。面積歸一化法純度檢查(HPLC)色譜條件色譜柱迪馬C18 6mm X 250mm, 5 μ m)，流動相A相為甲醇-乙腈(4 1)，B相為0.05%磷酸水，梯度洗脫00-70% A， 0-30min, 20% A, 31_35min)檢測波長為 250nm,柱溫為 34°C，流速為 0. 9ml/min。結果，金櫻根皂苷D和金櫻根皂苷E的HPLC純度(面積歸一化法純度)均大於98. 5%。結構鑑定化合物1 :LC_MS :m/z 651 [M+H+]·Table 1, and 13C-NMR Data (pyridine, 600MHz) for Compound 權利要求
1.金櫻根中金櫻根皂苷D和E的提取與純化方法，其特徵在於，包括以下步驟(1)稱取金櫻根藥材粉末，按每10公斤粉末加入100L體積濃度為70-85%的乙醇液超聲提取，然後浸泡一個月，過濾，濾液合併濃縮至無醇味，加水溶解後，再用乙酸乙酯萃取， 萃取液蒸乾，得藥膏；(2)用甲醇溶解後，加入100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目的矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份，點板，採用的顯色劑為體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾，得浸膏；(3)再加入100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目矽膠裝柱，上樣，採用的展開劑是體積比為2 1的石油醚-丙酮溶液，收集餾份，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10% 的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得浸膏；⑷用甲醇溶解後，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現五個明顯斑點，稱取100 200目矽膠拌樣，取200 300目的矽膠裝柱，上樣， 採用的洗脫劑是體積比為1 5 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，點板，採用的顯色劑是體積濃度為10%的濃硫酸乙醇液，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾，得浸膏；(5)用甲醇溶解後，點板，採用的展開劑是體積比為1 8 0.08的氯仿-甲醇-甲酸溶液，出現2個明顯的斑點，稱取100 200目的矽膠拌樣，稱取200 300目的矽膠裝柱， 上樣，採用的洗脫劑是體積比為1 8 0.04的氯仿-乙酸乙酯-甲酸溶液，收集餾份，等出現目標斑點，其中目標斑點較純析出晶體記為①，出現另一斑點較純洗出晶體記為②，分別把①和②重結晶，得到相應的單體，分別命名為金櫻根D和E。
2.根據權利要求1所述金櫻根中金櫻根皂苷D和E的提取與純化方法，其特徵在於， 在步驟(2)中，100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟(1)得到的藥膏的 0. 6 0. 85倍和15倍；在步驟(3)中，100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟⑵得到的浸膏的1倍和12-18倍；在步驟⑷中，100 200目矽膠和200 300 目矽膠的用量分別是步驟⑶得到的浸膏的1倍和16-18倍；在步驟(5)中，100 200目矽膠和200 300目矽膠的用量分別是步驟(4)得到的浸膏的1倍和10倍。
全文摘要
本發明公開了金櫻根中金櫻根皂苷D和E的提取與純化方法，包括以下步驟(1)將金櫻根藥材粉末經乙醇液超聲提取，浸泡，過濾，再用乙酸乙酯萃取；(2)甲醇溶解，矽膠拌樣，矽膠裝柱，上樣，點板，等出現目標斑點點板，合併濃縮蒸乾；(3)矽膠拌樣，矽膠裝柱，上樣，點板，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾；(4)甲醇溶解，點板，矽膠拌樣，矽膠裝柱，上樣，點板，等出現目標斑點，合併濃縮蒸乾；(5)甲醇溶解，點板，矽膠拌樣，矽膠裝柱，上樣，等出現目標斑點，其中目標斑點較純析出晶體記為①，出現另一斑點較純洗出晶體記為②，分別把①和②重結晶，得到相應的單體，分別命名為金櫻根D和E。本發明方法製取金櫻根D和E，效率高、成本低。
文檔編號C07J63/00GK102584929SQ201110452518
公開日2012年7月18日 申請日期2011年12月29日 優先權日2011年12月29日
發明者周小雷, 王碩, 繆劍華, 莫單丹, 袁經權, 龔小妹 申請人:廣西壯族自治區藥用植物園