金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法

2023-10-10 03:08:54

專利名稱：金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，屬於對藥材進行質量控制的技術領域。
背景技術：
金鐵鎖(Psammosilene tunicoides),為石竹科金鐵鎖屬植物金鐵鎖的乾燥根，以根入藥。主要分布在貴州、雲南、四川、西藏等中國西南地區，是我國西南地區特有的單屬種植物，也是貴州民間常用中草藥，現已作為稀有瀕危物種列於《中國植物紅皮書》中，屬國家二級保護植物。金鐵鎖具有散瘀定痛、止血及消癰排膿之功效，用於跌打損傷、風溼痛、胃氣痛、創傷出血等的治療。根據文獻報導，金鐵鎖藥材在鎮痛、抗炎、抑菌及調節免疫功能等方面均具有顯著性效果，且發現金鐵鎖中主要的化學成分為三萜皂苷類和環肽類化合物。但是目前，還沒有關於金鐵鎖藥材質量控制方法研究的文獻報導。雖然金鐵鎖被收載於《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版 中，但在該標準中既無薄層色譜鑑別項，也無含量測定項；而且在《中國藥典》2010年版中也只有對照藥材的薄層鑑別項。而如果沒有嚴密的質量標準和科學的檢測手段，就難以有效地控制其內在質量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國際醫藥市場的要求，因而可能會嚴重製約我國中藥行業的發展。因此，加強中藥材質量控制研究是中藥規範化、標準化的關鍵問題，只有對中藥材進行科學的質量控制，才能保證中藥質量，實現中藥材的「安全、有效、穩定、可控」。

發明內容
本發明的目的在於，提供一種金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法。本發明通過對金鐵鎖中具有生物活性的入血化學成分尿囊素的含量進行定量研究，完善了金鐵鎖藥材的質量檢測標準，使金鐵鎖藥材的質量檢測方法更為科學、合理。本發明是這樣構成的:一種金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，即以尿囊素對照品為對照，以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動相的高效液相色譜法。具體的含量測定方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測定:色譜條件與系統適用性試驗:以氨基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動相；流速為0.5 2mL.mirT1 ;柱溫為30 5(TC ;檢測波長為21(T240nm ；理論板數應不低於3000 ；對照品溶液的製備:精密稱取尿囊素對照品，加109^50%乙醇製成每ImL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得；供試品溶液的製備:取金鐵鎖藥材粉末0.5飛g，精密稱定，置於具塞錐形瓶或三角瓶中，加入10% 50%乙醇l(T40mL，稱定重量，超聲提取l(T60min，用10% 50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各f 10 U L，注入高效液相色譜儀，測定，即得。優選的含量測定方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測定:色譜條件與系統適用性試驗:以氨基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動相；流速為ImL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測波長為220nm ;理論板數應不低於3000 ；對照品溶液的製備:精密稱取尿囊素對照品，加20%乙醇製成每ImL含0.05
0.30mg尿囊素的溶液，即得；供試品溶液的製備:取金鐵鎖藥材粉末2g，精密稱定，置於具塞錐形瓶或三角瓶中，加入20%乙醇30mL，稱定重量，超聲提取40min，用20%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 U L，注入高效液相色譜儀，測定，即得。金鐵鎖(Psammosilene tunicoides)藥材收載於《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中，但在該標準中既無金鐵鎖藥材的薄層色譜鑑別項，也無含量測定項，同時在《中國藥典》2010年版中也只有金鐵鎖的對照藥材的薄層鑑別項，因此為了更有效的控制金鐵鎖藥材的質量，本發明人對其質量檢測方法進行了專門研究。通過查閱國內外文 獻資料發現:金鐵鎖藥材質量控制方法方面的研究文獻報導很少，為此，發明人對金鐵鎖的入血化學成分進行了研究，確定了金鐵鎖的生物活性成分尿囊素屬於入血化學成分；在確定入血化學成分的基礎上，再對金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法進行了試驗研究。以下是本發明人對金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法進行試驗研究的過程:一、金鐵鎖藥材入血化學成分的確定本發明人對有關金鐵鎖藥材的文獻進行了大量的研究，而且根據發明人所在課題組前期對金鐵鎖展開的化學成分研究發現，尿囊素為金鐵鎖藥材中的生物活性成分，因此選取金鐵鎖藥材的尿囊素為指標進行了入血試驗研究:取金鐵鎖藥材幹燥、粉碎後，用l(T50mL的10% 40%食用乙醇提取兩次；合併提取液，減壓濃縮回收溶劑後得金鐵鎖提取物。取適量金鐵鎖提取物用水溶解，配成濃度為20mg -mr1的水溶液；取金鐵鎖提取物水溶液2 4mL，對重量為180 220g的大鼠灌胃給藥，分別在10min、30min、60min及120min對大鼠進行採血；將血液離心後取上層血眾,用乙腈或甲醇沉澱蛋白，渦旋混勻後離心，將上層清液置於氮吹儀上吹乾；取適量吹乾物，加入乙腈-水=93:7 (體積比)溶液進行溶解、離心，作為供試品溶液；空白血漿按照同樣的方法進行處理；取尿囊素對照品製成對照品溶液。高效液相色譜條件為:以氨基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動相；流速為ImL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測波長為220nm ;理論板數應不低於3000。測定結果如

圖1 圖6所示，從圖1 圖6可以看出，尿囊素為金鐵鎖藥材中的一種入血化學成分。
二、金鐵鎖藥材中尿囊素的含量測定方法的研究1.儀器與試藥:Ultimate300高效液相色譜儀，其包括四元泵、在線脫氣機、自動進樣器、二極體陣列檢測器和柱溫箱；十萬分之一電子天平(由梅特勒-託利多儀器上海有限公司提供)；KQ5200E型超聲波清洗(由昆明市超聲儀器有限公司提供)；色譜乙腈、水(重蒸水，臨用前製備)、無水乙醇、尿囊素對照品(由中國藥品生物製品檢定所提供)和金鐵鎖藥材(採自6個不同產地)。2.色譜條件的選擇發明人在進行尿囊素色譜條件的選擇時，尤其對色譜柱及流動相系統進行了選擇。根據實驗確定尿囊素的色譜條件為:Z0RBAX NH2 (4.6 X 150mm, 5 um)色譜柱，乙腈-水(93: 7)為流動相，流速為ImL mirT1，檢測波長為220nm。選擇條件見表I。表I尿囊素色譜條件的選擇
權利要求
1.一種金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，其特徵在於，所述含量測定方法是以尿囊素對照品為對照，以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動相的高效液相色譜法。
2.根據權利要求1所述的金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，其特徵在於，具體方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測定: 色譜條件與系統適用性試驗:以氨基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈或甲醇:水=60~100:0 40為流動相；流速為0.5 2mL*min-1 ;柱溫為30~50°C ;檢測波長為21 0~240nm ;理論板數應不低於3000 ； 對照品溶液的製備:精密稱取尿囊素對照品，加10%~50%乙醇製成每1mL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得； 供試品溶液的製備:取金鐵鎖藥材粉末0.5~5g，精密稱定，置於具塞錐形瓶或三角瓶中，加入10% 50%乙醇l0~40mL，稱定重量，超聲提取l0~60min，用10% 50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1~1Ou L，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
3.根據權利要求2所述的金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，其特徵在於，具體方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測定: 色譜條件與系統適用性試驗:以氨基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動相；流速為1mL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測波長為220nm ;理論板數應不低於3000 ； 對照品溶液的製備:精密稱取尿囊素對照品，加20%乙醇製成每1mL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得； 供試品溶液的製備:取金鐵鎖藥材粉末2g，精密稱定，置於具塞錐形瓶或三角瓶中，力口A 20%乙醇30mL，稱定重量，超聲提取40min，用20%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各L，注入高效液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
本發明公開了一種金鐵鎖藥材中入血化學成分尿囊素的含量測定方法，所述方法即以尿囊素對照品為對照，以乙腈或甲醇水=60～1000～40為流動相的高效液相色譜法。本發明選擇金鐵鎖藥材中的入血化學成分——尿囊素為指標進行含量測定，該測定方法精密度高、重現性好、穩定性好、回收率高，測定結果準確，可有效控制金鐵鎖藥材的質量，從而確保其臨床用藥的安全、有效。
文檔編號G01N30/02GK103115976SQ20131003099
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月25日 優先權日2013年1月25日
發明者周欣, 龔小見, 陳華國, 趙超, 趙楊 申請人:貴州師範大學