一種從丹參中快速分離紫草酸單體的方法
2023-10-28 22:52:32 1
專利名稱：一種從丹參中快速分離紫草酸單體的方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥化學單體的製備方法，尤其是一種從中藥材丹參中快速分離高純度紫草酸單體的方法，屬中藥分離純化技術領域。
背景技術：
丹參為唇形科(Lamiaceae)鼠尾草屬(Salvia)植物丹參(Salviamiltiorrhiza Bge.)的乾燥根及根莖。性味苦，微寒，歸心、肝經。活血調經，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩,養血安神。用於月經不調，心煩失眠。紫草酸(lithospermic acid),分子式為C27H22O12, 由於其在丹參中的含量很少，因此所需藥材量大，分離時間較長，且很難獲得其高純度單體。
如CN200510122346. X公開了一種丹參有效組分，製劑及其製備方法與用途。在有效組分中，以重量百分比計，紫草酸的含量為2. 8-4. 2%，丹酚酸B的含量為91. 8-94. 2%，丹酚酸E的含量為O. 8-2. 2%。該丹參有效組分的製備方法包括下列步驟將丹參藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，並將其與矽膠進行拌樣， 用正相矽膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為流動相，得洗脫液I，棄之，然後改換氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品，即得。其紫草酸含量較低，增加了製備分離難度，得率低。
由此，目前國內關於紫草酸分離純化的文獻報導很少，高效製備液相色譜用於紫草酸單體的分離純化屬首次。發明內容
本發明旨在克服現有技術的缺陷，提供一種從丹參中快速分離高純度紫草酸單體的方法。該方法簡便易行、消耗 溶劑少、得率高，產品純度能夠達到98%以上，安全無毒、環保，適合工業化生產。
為實現上述發明目的，本發明採用的技術方案如下一種從紫草酸中快速分離紫草酸單體的方法，其特徵在於按如下工藝步驟進行A.原料提取將丹參藥材粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，按照kg/L的質量體積比加入8-10倍量的體積分數為30-40%的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫後的丹酚酸B水溶液以每小時2-5倍柱體積的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附，然後用2-4倍量柱體積的的水洗脫雜質，再用 1-3倍量柱體積的體積分數為50-60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液,濃縮回收乙醇， 濃縮液待下一步水解處理；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度3 5%的氫氧化鈉水溶液調pH至If12，靜置 2(T30min，待丹酚酸B水解成紫草酸,然後再以體積分數5-10%的鹽酸水溶液將水解液pH 調至中性；D.高效製備液相分離先用薄層矽膠過濾水解液，然後用孔徑O. 45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效製備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數30-40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段製備溶液；所述流動相的流速根據色譜柱內徑大小進行確定，內徑50mm的流速為60ml/min，內徑 80mm的流速為140ml/min,內徑IOOmm的流速為250ml/min,內徑200mm的流速為800ml/mirio
E.產品回收將步驟D所得製備溶液減壓回收乙腈，剩餘水溶液_50°C冷凍成冰， 然後-50°C冷凍乾燥得紫草酸單體。
步驟B所述大孔吸附樹脂選自DlOl型或AB-8型。
本發明的優點在於1、通過步驟A對所述丹參藥材的粉碎、回流提取及濃縮，充分保證了藥材中紫草酸和丹酚酸B等水溶性成分的有效提取。
2、通過步驟B以大孔吸附樹脂在相應條件下富集丹酚酸B，確保了色素等雜質與丹酚酸B的有效分離，起到了很好的除雜作用。
3、通過步驟C在相應控制條件下對丹酚酸B進行水解，從而大幅度提高了紫草酸的含量，並為製備分離創造了有利條件。
4、採用製備型高效液相色譜系統對紫草酸單體進行分離，通過最適宜的前處理方法和色譜條件等，達到良好的分離效果，並且紫外檢測器在線監測，針對性收集紫草酸單體，目標明確，避免了常規柱層析和先分離後檢測造成的資源浪費。
5、採用製備型高效液相色譜分離過程直觀，目標性強，對產品的質量易於控制，產品純度可達到98%以上。
6、步驟少，耗時短，操作簡便，得率高，工藝穩定可靠，重現性好，適合工業化生產。
7、溶劑消耗少，製備液相色譜分離步驟中的溶劑都可回收再利用。
8、溶劑毒性小，所用的有機溶劑乙腈、乙醇等，環境汙染小。
9、由於高效液相色譜對樣品溶液的純度、色澤、酸鹼度等要求均較高，通過提取水解等簡單處理得到的提取液不能直接作為樣品溶液進入高效液相色譜系統，因此若在進行高效液相色譜分離前，不按照本發明方法步驟進行提取、大孔吸附樹脂富集、水解，則有可能達不到良好的分離效果，還可能對高效液相色譜系統的色譜柱等配件產生難以逆轉的影響，縮短其使用周期；而色譜柱等液相色譜的相關配件成本通常較高，其使用周期的縮短顯然將造成最終產品的生產成本大大提高；因而，對進入高效液相色譜的樣品溶液要求較高， 其前處理過程非常重要。
10、由於丹參藥材中除含有丹酚酸外，還含有丹參酮、丹參素等非常複雜的成分， 其中紫草酸單體成分含量較低，大部分以丹酚酸形式存在，要獲得可直接進入高效液相色譜系統的樣品，需要先進行提取、富集及水解處理。針對丹參藥材中存在的各種成分的理化性質，本發明方法通過前述步驟A、B、C的順序搭配，以及適當的參數組合，可有效提取出丹酚酸B，並將丹酚酸B水解轉化為紫草酸，同時除去大量雜質，獲得可以進入製備型高效液相色譜系統的樣品溶液，不至對高效液相色譜系統造成很大的影響，儘量延長其使用周期， 節約生產成本。
11、在高效液相色譜分離過程中，色譜條件的選擇非常重要，它對樣品溶液中各物質的出峰順序、峰形、分離效果等起著決定性的作用；本發明通過大量的試驗研究及對比分析，確定了如上所述的各色譜條件，使樣品溶液中各物質的出峰時間、峰形、分離效果等最佳化，有利於紫草酸單體得到充分有效的分離。
圖1為本發明實施例1步驟C製備分離在線監測圖譜圖2為本發明實施例1製得的紫草酸單體的HPLC分析圖譜具體實施方式
實施例1一種從丹參中快速分離紫草酸的方法，按如下工藝步驟進行A.原料提取將IOkg丹參粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，加入90L體積分數為30% 的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫後的丹酚酸B水溶液以每小時4倍柱體積的速度通過活化好的DlOl型大孔吸附樹脂柱進行吸附，樹脂床體積約8L，然後用25L的水洗脫雜質，再用20L體積分數為60%的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至8L左右；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度為3%的氫氧化鈉水溶液調pH至12，靜置20min， 待丹酚酸B水解成紫草酸，然後再以體積分數5%的鹽酸水溶液將水解液pH調至中性；D.高效製備液相分離先用薄層矽膠過濾水解液，然後用孔徑O.45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效製備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段製備溶液；E.產品回收步驟D所得製備溶液減壓回收乙腈，剩餘水溶液-50°C冷凍成冰，然後--50°C冷凍乾燥得紫草酸單體。
所得紫草酸單體重12g，經HPLC分析純度為98. 7%。
實施例2一種從丹參中快速分離紫草酸的方法，按如下工藝步驟進行A.原料提取將20kg丹參粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，加入180L體積分數為30% 的乙醇溶液，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫後的丹酚酸B水溶液以每小時5倍柱體積的的速度通過活化好的AB-8型大孔吸附樹脂柱進行吸附，樹脂床體積約15L，然後用60L體積水洗脫雜質，再用40L體積分數為50%的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至15L左右；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度為3%的氫氧化鈉水溶液調pH至11，靜置30min， 待丹酚酸B水解成紫草酸，然後再以體積分數10%鹽酸水溶液將水解液pH調至中性；D.高效製備液相分離先用薄層矽膠過濾水解液 然後用孔徑O.45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效製備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數30%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段製備溶液；E.產品回收步驟D所得製備溶液減壓回收乙腈，剩餘水溶液-50°C冷凍成冰，然後-50°C冷凍乾燥得紫草酸單體。
所得紫草酸單體重25g，經HPLC分析純度為98. 6%。
實施例3一種從丹參中快速分離紫草酸的方法，按如下工藝步驟進行A.原料提取將30kg丹參粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，加入300L體積分數為35% 的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫後的丹酚酸B水溶液以每小時2倍柱體積的的速度通過活化好的DlOl型大孔吸附樹脂柱進行吸附，樹脂床體積約25L，然後用50L的水洗脫雜質，再用25L體積分數為55%的乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液，濃縮至8L左右；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度為4%的氫氧化鈉水溶液調pH至12，靜置25min ， 待丹酚酸B水解成紫草酸，然後再以體積分數8%的鹽酸水溶液將水解液pH調至中性；D.高效製備液相分離先用薄層矽膠過濾水解液，然後用孔徑O.45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效製備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數35%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段製備溶液；E.產品回收步驟D所得製備溶液減壓回收乙腈，剩餘水溶液-50°C冷凍成冰，然後-50°C冷凍乾燥得紫草酸單體。
所得紫草酸單體重37g，經HPLC分析純度為98. 5%。
權利要求
1.一種丹參中快速分離紫草酸單體的方法，其特徵在於按如下工藝步驟進行A.原料提取將丹參藥材粉碎成2-4mm粗粉投入提取罐中，按照kg/L的質量體積比加入8-10倍量的體積分數為30-40%的乙醇溶液提取丹酚酸B，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濃縮回收乙醇，水溶液冷卻至室溫；B.大孔吸附樹脂富集將冷卻至室溫後的丹酚酸B水溶液以每小時2-5倍柱體積的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附，然後用2-4倍量柱體積的的水洗脫雜質，再用 1-3倍量柱體積的體積分數為50-60%乙醇溶液洗脫目標物質，收集洗脫液,濃縮回收乙醇， 濃縮液待下一步水解處理；C.水解向濃縮液液中緩緩加入濃度3 5%的氫氧化鈉水溶液調pH至If12，靜置 2(T30min，待丹酚酸B水解成紫草酸,然後再以體積分數5-10%的鹽酸水溶液將水解液pH 調至中性；D.高效製備液相分離先用薄層矽膠過濾水解液，然後用孔徑O.45 μ m的微孔濾膜過濾，上高效製備液相色譜柱分離，色譜柱填料為C18填料，流動相為體積分數30-40%的乙腈水溶液，檢測波長286nm，紫外檢測器在線監測，針對性收集目標化合物色譜峰段製備溶液；E.產品回收將步驟D所得製備溶液減壓回收乙腈，剩餘水溶液_50°C冷凍成冰，然後-50°C冷凍乾燥得紫草酸單體。
2.根據權利要求1所述的從丹參中快速分離紫草酸單體的方法，其特徵在於步驟B 所述大孔吸附樹脂選自DlOl型或AB-8型。
3.根據權利要求1所述的從丹參中快速分離紫草酸單體的方法，其特徵在於步驟B 所述流動相的流速根據色譜柱內徑大小進行確定，內徑50mm的流速為·60ml/min,內徑80mm 的流速為140ml/min,內徑IOOmm的流速為250ml/min,內徑200mm的流速為800ml/min。
全文摘要
本發明公開了一種從丹參中快速分離紫草酸單體的方法，屬中藥分離純化技術領域。該方法按如下工藝步驟進行A.原料提取以30-40%的乙醇溶液回流提取3次，每次2小時；B.大孔樹脂富集提取液以2-5倍柱體積每小時的速度通過活化好的大孔吸附樹脂柱進行吸附；C.水解以氫氧化鈉水溶液調pH11-12，放置20-30min水解；D.高效製備液相分離色譜柱填料為C18，流動相為30-40%的乙腈溶液，檢測波長286nm；E.產品回收製備液濃縮至小體積水液冷凍乾燥，得純度98%以上紫草酸單體。本發明方法簡易快速，溶劑消耗少，產量大，得率高，經濟環保，適合工業化生產，具有較高的經濟價值和學術價值。
文檔編號C07D307/84GK102993143SQ20121057785
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月27日 優先權日2012年12月27日
發明者文煥松, 夏柯, 李啟發, 郭建華, 劉丁 申請人:成都普思生物科技有限公司