商陸莖節快速繁殖的方法
2023-10-17 20:22:29 1
專利名稱：商陸莖節快速繁殖的方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養領域，具體涉及一種利用植物器官直接誘導其形成完整植株 的快速繁殖植物的方法。
背景技術：
商陸是具有多種功能的多年生草本植物。隨著商陸的深入應用，人們對商陸的認識和研 究已經到達分子水平,希望通過分子生物學方法來定向改良商陸的性狀，以獲取更大利益。例 如通過轉基因降低或去除其毒性、篩選抗病毒高產植株和色素高產植株等。然而，無論是 植物的轉基因研究還是篩選某種代謝產物的高產植株都是以此種植物的快速繁殖為基礎的。
目前，國內外植物的快速繁殖多採用組織培養和細胞培養的方法來實現，以組織培養應 用更多。但是有關商陸通過組織培養來快速繁殖的研究則鳳毛麟角。雖然有人試圖通過莖尖 繁殖來到達快繁的目的，但是對於一株植物來說莖尖數量終歸用限，很難達到短時間內大規 模快速繁殖的目的。也有人想通過培養愈傷組織誘導分化來進行商陸的快繁，但最終沒有取 得成功。
發明內容
為了解決商陸快速繁殖這一技術問題，本發明提供一種商陸快繁方法。此方法能快速有 效的誘導商陸莖節腋芽的形成，然後誘導腋芽生根，並最終形成一個完整的商陸植株。
本發明所依據的原理是植物細胞具有全能性即任何具有完整細胞核的植物細胞，都 擁有形成一個完整植珠所必須的全部遺傳信息和發育成完整植株的能力。這就是植物組織 培養的基本原理，而快速繁殖則是植物組織培養中的一種方式，即利用植物的某種器官直 接或間接誘導其發芽和生根，並最終形成一個完整的植株。
本發明所採用的技術方案是用商陸無菌苗的莖節作為外植體，將其接種在腋芽分化 增殖培養基上誘導發芽和增殖，然後將長到一定高度的分化芽切下插入生根培養基進行誘 導生根，待根系發達後，進行煉苗和移栽，進而獲得完整的商陸植株。上述方法中所說的腋芽分化增殖培養基成分如下-基本培養基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L; 蔗糖20g/L;
瓊脂7g/L。
上述方法中所說的生根培養基成分如下 基本培養基為MS或1/2MS;
激素為IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
本發明建立了商陸快速繁殖的方法，大大縮短了商陸繁殖的時間，改變了傳統的繁殖 方式。填補了沒有關於商陸快繁研究的空白。
具體實施例方式
在本發明中所使用的術語，除非有另外說明， 一般具有本領域普通技術人員通常理解的 含義。
下面結合具體的實施例，並參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，這些實施例只 是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的範圍。
在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。所用 試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同 試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。
實施例
按如下成分配製主要培養基
初始培養基
基本培養基為MS; 蔗糖20g/L;
4瓊脂7g/L。 腋芽分化增殖培養基
基本培養基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。 生根培養基
基本培養基為MS或1/2MS;
激素為IBA: 0 1.0mg/L;
蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
上述培養基用lmol/L的NaOH或HCl調至pH為5.8，高壓滅菌(15鎊，12rC，20min)。
各種激素採用過濾滅菌，在培養基高壓滅菌後加入。
1、 種子的表面消毒和無菌苗的培養
取成熟飽滿的商陸種子，在流水中衝洗3h，然後在濃硫酸中浸泡15min,然後用無菌 水衝洗5 8次，最後接種到初始培養基(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂)上。於26士rC下暗 培養1W，然後轉入26士rC， 2000LUX光照培養，光/暗周期為16hr/8hr， 2W後獲得商陸
無菌實生苗。
2、 商陸莖節腋芽增殖的誘導
待商陸成苗後,在超靜工作檯中切取莖節部分大約0.5cm作為外植體，將其接種於腋芽分 化增殖培養基(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.5mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA)上，於溫度為26 士rC，光照強度為2000LUX培養,光/暗周期為16hr/8hr培養一個月，統計腋芽增殖情況。
3、 商陸腋芽生根的誘導
當腋芽生長到1 2cm高的時候，將芽切下，接種到生根培養基上(MS+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂+0.2mg/LIBA)誘導腋芽生根。然後將其置於溫度為26± 1'C ，光照強度為2000LUX 培養，光/暗周期為16hr/8hr培養一個月，統計腋芽的生根情況。
4、 商陸的煉苗培養
當將商陸分化苗培養到10cm高，根系發達後，逐步將培養瓶的蓋子打開對其進行煉苗 培養。煉苗大約需要3 5天。
5、 商陸分化苗的移栽
當煉苗完成後，將小苗從培養瓶中取出，洗去根部殘留的培養基，然後將生根的分化 苗移栽到含有培養土的花缽中。缽外套上透光性好的塑料薄膜以保證溼度，然後將其置於 組培箱中按培養分化苗的條件進行培養。 一周後，去除塑料薄膜，並把小商陸植株置於溫 室中培養。此時植株可正常生長發育，完成了整個生長過程。
6、數據處理以及統計方法
(1) 腋芽分化率(％)=(分化的外植體數/外植體總數^100%
(2) 腋芽增殖倍數=外植體分化出的腋芽數/外植體總數
(3) 生根頻率(％)=(生根的分化苗數/分化苗總數)400%
(4) 平均根數=分化苗總根數/生根的分化苗數
通過數據統計處理，我們得到結果，採用上述方法處理我們成功的誘導了莖節腋芽的 分化和增殖，誘導一個月後的腋芽分化率可達到100%，芽增殖倍數為2.4。而誘導生根的 狀況更佳，通過上述培養基的誘導生根，2W後分化芽開始生根， 一個月後根生長成熟。統 計結果為其根的誘導率可達100%，根系發達，平均根數為4。在此根系發達的基礎上進行 煉苗和移栽都進行的非常順利，最終我們成功的完成了商陸分化苗的整個生長過程。
權利要求
1、一種商陸莖節快速繁殖的方法，其特徵在於，是用商陸無菌苗的莖節作為外植體，將其接種在腋芽分化增殖培養基上誘導發芽和增殖，然後將長到一定高度的分化芽切下插入生根培養基進行誘導生根，待根系發達後，進行煉苗和移栽，進而獲得完整的商陸植株。
2、 根據權利要求1所說的商陸莖節快速繁殖的方法，其特徵在於，其中所說的腋芽分 化增殖培養基成分如下基本培養基為MS、 1/2MS、 B5、 H或LS; 激素為6-BA: 0.5 2.0mg/L， IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
3、 根據權利要求1所說的商陸莖節快速繁殖的方法，其特徵在於，其中所說的生根培 養基成分如下基本培養基為MS或1/2MS;激素為IBA: 0 1.0mg/L;蔗糖20g/L; 瓊脂7g/L。
全文摘要
本發明涉及植物組織培養領域，具體涉及一種商陸莖節快速繁殖的方法。本發明用商陸無菌苗的莖節作為外植體，將其接種在腋芽分化增殖培養基上誘導發芽和增殖，然後將長到一定高度的分化芽切下插入生根培養基進行誘導生根，待根系發達後，進行煉苗和移栽，進而獲得完整的商陸植株，完成了商陸的整個生長過程。本發明建立了商陸快速繁殖的方法，大大縮短了商陸繁殖的時間，改變了傳統的繁殖方式。填補了沒有關於商陸快繁研究的空白。
文檔編號C12N5/04GK101438678SQ20081024323
公開日2009年5月27日 申請日期2008年12月26日 優先權日2008年12月26日
發明者鄭鐵松, 靜 陳 申請人:南京師範大學