具心肌保護作用的黃芪有效組分製備方法與用途的製作方法
2023-10-06 19:55:49
專利名稱：具心肌保護作用的黃芪有效組分製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明屬中藥領域，涉及一種治療心血管疾病的中藥提取物，具體地說涉及從黃 芪中提取的有效組分及其製備方法與醫藥用途，該有效組分通過提取，矽膠柱中壓分離，制 備液相分離而獲得。
背景技術：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結構及環境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發生率也逐年增多，嚴重 威脅著人民的身心健康。天然產物中許多活性物質具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質，是發現、開發新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質是研究和發現新藥先導化學物，開發新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產物中提取 活性物質，用於開發成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產物中提取活 性物質，開發成具有抗心肌缺血作用，用於治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應用價值 和廣闊發展前景。黃芪為豆科植物蒙古黃芪及膜莢黃芪的乾燥根，是一種常用中藥，味甘、性溫，有 補氣昇陽、固表止汗、託毒排膿和生肌等功效。黃芪具有免疫調節作用，可使細胞的生理代 謝增強。近年來研究發現黃芪中含有的黃芪多糖、皂甙、黃酮等化合物具有較強的生物活 性。黃芪皂苷能通過擴張血管達到降壓目的，黃芪的總黃酮和總皂苷等成分具有顯著的抗 氧化活性，能抑制自由基的產生和清除體內過剩的自由基，故能有效地延緩衰老。因此，從黃芪中分離出有效組分，開發出治療心血管疾病的現代中藥具有重要的
眉、ο
發明內容
本發明的目的在於提供一種具有心肌保護作用的黃芪有效組分的製備方法，通過 以下步驟實現將黃芪藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，將提取液濃縮成浸膏， 並將其與矽膠進行拌樣，用正相矽膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫 劑，得洗脫液I，棄之，然後改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥 後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱， 流動相為水和乙腈，梯度洗脫。優選的，本發明的黃芪有效組分製備方法，包括下列步驟取黃芪藥材，將其粉碎 後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液。 將提取液濃縮成浸膏，用正相矽膠柱對其進行分離，首先用體積比為50:1的石油醚和乙酸 乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄之，然後改用體積比為10:1的氯仿和甲醇作為洗脫劑，得 洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後，用製備液相色譜繼續分離得到的樣品。製備色譜的分 離條件色譜柱為製備柱，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為85%的水，流動相B為15%的乙腈溶液；40min時，流動相A為5%的水，流動相B為95%的 乙腈溶液；50min時，流動相A為5%的水，流動相B為95%的乙腈溶液；流速為lOml/min， 柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在30. (Γ40. Omin時間段收集溶液，溶液濃縮乾燥 後得到有效組分。本發明的另一個目的是提供所述有效組分在製備治療和預防心血管疾病藥物中 的應用。經藥理實驗證明，本發明提供的黃芪有效組分對心肌細胞有保護作用。本發明的黃芪有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑 學上記載的製劑的製備方法製成製劑。所述的製劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、衝劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發明的有益效果為提供的製備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在 生產中更易於藥物的質量控制。根據本發明方法製備獲得的黃芪有效組分可在製備治療和 預防心血管疾病藥物中的應用。
具體實施例方式下面將結合實施例進一步詳細說明本發明的實質內容和有益效果，該實施例僅用 於說明本發明而非對本發明的限制。實施例一黃芪有效組分的製備
將黃芪藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，將提取液濃縮成浸膏，並將其與矽 膠進行拌樣，用正相矽膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液 I，棄之，然後改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用 製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱，流動相為水 和乙腈，梯度洗脫。實施例二黃芪有效組分的製備
取黃芪藥材，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取 2次，濾液合併得提取液。將提取液濃縮成浸膏，用正相矽膠柱對其進行分離，首先用體積比 為50:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄之，然後改用體積比為10:1的氯 仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後，用製備液相色譜繼續分離得 到的樣品。製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱ZORBAX SB C18； 21. 2mm χ 250mm, 7 μηι ，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下Omin，15%B ；40min, 95%B ；50min, 95%B ；流速為 lOml/min，柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在30. (Γ40. Omin時間段收集溶液，溶液 濃縮乾燥後得到有效組分。實施例三滴丸製劑的製備
取黃芪有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料後移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，製得滴丸400粒。實施例四凍乾粉針劑的製備
取黃芪有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻後，分裝400支，冷凍乾燥，即得。
實施例五黃芪組分的活性評價實驗
1.黃芪組分對H2O2損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養24 h後，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的黃芪組分孵育24 h，採用MTT法測定細 胞活力。結果表明，該組分對H2O2損傷心肌細胞的保護率為14.97%。2.黃芪組分對缺氧復氧損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養24 h後，在缺氧小室中培養6 h。 缺氧結束後，取出細胞培養板加入經無糖Hank』 s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的黃芪組分，在 正常培養條件下孵育6 h，取細胞培養上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結果表明，該組 分對缺氧復氧損傷的心肌細胞保護率為35. 06%。
權利要求
1.一種具心肌保護作用的黃芪有效組分的製備方法，其特徵在於，通過以下步驟實現 將黃芪藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，將提取液濃縮成浸膏，並將其與矽膠進 行拌樣，用正相矽膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄 之，然後改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得有效組分；用 製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱，流動相為水 和乙腈，梯度洗脫。
2.根據權利要求1所述的一種具心肌保護作用的黃芪有效組分的製備方法，其特徵在 於，其中乙酸乙酯和乙醇的體積比為1:0.纊1.2，石油醚和乙酸乙酯的體積比為47飛3:1， 氯仿和甲醇的體積比為纊13:1。
3.根據權利要求1所述的一種具心肌保護作用的黃芪有效組分製備方法，其特徵在 於，通過以下步驟實現取黃芪藥材，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加 熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液；將提取液濃縮成浸膏，用正相矽膠柱對其進 行分離，首先用體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄之，然後改 用體積比為10:1的氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後，用製備 液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱，流動相為水A和乙 腈B,梯度洗脫程序如下=Omin, 15%B ；40min,95%B ；50min,95%B ；流速為10ml/min,柱溫為 室溫；樣品經製備液相色譜分離，在30. (Γ40. Omin時間段收集溶液，溶液濃縮乾燥後得到 有效組分。
4.根據權利要求1或3所述方法獲得的黃芪有效組分在製備治療和預防心血管疾病藥 物中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於，所述藥物由黃芪有效組分加入藥劑學上 可接受的輔料，按照藥劑學上記載的製劑製備方法製成。
6.根據權利要求5所述的應用，其特徵在於，所述製劑包括液體製劑或固體製劑。
全文摘要
本發明提供一種具心肌保護作用的黃芪有效組分的製備方法。藥材通過加熱提取，濃縮，矽膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮乾燥，再用製備液相色譜繼續分離，收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。本發明提供的黃芪有效組分可在製備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發明方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易於藥物的質量控制。
文檔編號A61P9/00GK102133262SQ20111005903
公開日2011年7月27日 申請日期2011年3月13日 優先權日2011年3月13日
發明者王毅, 瞿海斌, 程翼宇, 葛志偉 申請人:浙江大學