一種同時分析人基因組dna26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒及其使用方法和應用的製作方法
2023-11-04 06:14:17 2
一種同時分析人基因組dna 26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒及其使用方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種同時檢測人基因組DNA?26個基因座的五色螢光標記複合擴增系統；本發明將26個基因座分為4組，共涉及5種顏色的螢光標記；本發明的螢光標記複合擴增系統的靈敏度高，在DNA模板量為0.12ng的條件下，可檢出全部26個基因座；適用於血濾紙、FTA卡採集樣本的直接擴增。
【專利說明】—種同時分析人基因組DNA 26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒及其使用方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種26個基因座的螢光標記複合擴增檢驗系統，具體是涉及一種同時分析人基因組DNA26個基因座的五色螢光標記複合擴增系統，該系統可以應用於個體識別和親子鑑定。
【背景技術】
[0002]短串聯重複序列基因座(STR)是目前普遍應用的遺傳標記。90年代初STR基因座多態性的發現，特別是STR基因座具有片段小容易擴增，適宜於檢驗微量和降解檢材，而且各基因座的擴增條件相似而能夠複合擴增，因而具有靈敏、準確、快速、信息量大等優點。尤其是在建立DNA資料庫方面，STR複合擴增技術具有極大的優越性。因此美國FBI進行了大量研究，選擇了 13個STR基因座用於建立DNA資料庫——CODIS (Combined DNA IndexSystem):CSF1P0、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA, THOU TPOX, vWA。這些STR基因座通常被稱為13個核心基因座。
[0003]正因為STR所具備的優點和應用前景，法醫學界以及一些大的公司均投入大量的資金對其進行了開發性的研究。90年代中後期以美國ABI公司為代表的研發商建立起螢光複合擴增體系。目前最具代表性的是ABI(Applied Biosystems, USA)公司的Identifiler?和Promega (USA)公司的PowerPlex-16突光檢測試劑盒。這兩個試劑盒均包括上述13個核心基因座。
[0004]長期的DNA檢驗實踐表明，短串聯重複序列基因座的遺傳多態性在種族間存在一定的差異，各個基因座間差別也很大。在美國FBI推薦的13個核心基因座中，有部分基因座遺傳多態性不高，或是不同人群間差異較大。由此給DNA檢驗技術的應用及其效率帶來一定的影響。`[0005]隨著法醫DNA分型技術的發展，目前已經能對類似血痕、精斑、唾液斑、毛髮、骨骼等進行DNA分型；同時，隨著PCR技術的發展，多重複擴體系可檢測的基因座數量也越來越多。專利ZL200510096613.6公開了一種同時分析人基因組DNA的多個基因座的螢光標記複合擴增系統，其特徵在於:所述的15個基因座為:Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、Penta E、CSF1P0、vWA、FGA。該專利提供了對15個基因座的分型結果，為4色螢光檢測系統。2011102293253 —種同時分析人基因組DNA22個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒及其使用方法和應用，該專利公開了一種同時分析人基因組DNA22個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，所述的22個基因座為:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、D2S441、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1P0、Penta D、D10S1248、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性別基因座 Amelogenin。
[0006]我們對中國人群的短串聯重複序列基因座的遺傳多態性進行了深入的研究，並以此為依據開發新的短串聯重複序列基因座的複合擴增檢驗系統，特別是針對男性Y染色體部分丟失樣本，加入Y染色體長臂上的2個基因座DYS391和Y indel用以鑑別，以求在5色螢光檢測系統中，提供對包括Amelogenin在內的26個基因座的分型結果，是目前國內累計個體識別能力和累積非父排除率最高的試劑盒。
【發明內容】
[0007]本發明的目的之ー在於:提供ー種通過複合擴增26個基因座來進行個體識別和親子鑑定的螢光標記STR複合擴增檢驗系統。涉及檢測人基因組中具有多態性的遺傳標記。本發明特別涉及用聚合酶鏈式反應在ー個體系中同時擴增多個短串聯重複基因座。
[0008]為了實現本發明的目的，採用如下技術方案:
[0009]一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，所述的26個基因座為:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、Penta E、D2S441、TPOX、THOUD2S1338、CSF1P0、Penta D、D10S1248、D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Y indel、DYS391、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、性別基因座 Amelogenin ;其特徵在於:該
試劑盒包括26個基因座對應的引物如下:
[0010]
【權利要求】
1.一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，所述的26個基因座為:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、Penta E、D2S441、TPOX、THOUD2S1338、CSF1PO、Penta D、D10S1248、D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、DYS391、Y indel 及性別基因座 Amelogenin ;其特徵在於:該試劑盒包括26個基因座對應的引物如下:
2.根據權利要求1所述的ー種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，其特徵在於:26個基因座對應的引物的濃度為:
3.根據權利要求1或2所述的一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，其特徵在於所述的每個基因座對應的引物中至少有一個引物的5』端進行螢光染料標記。
4.根據權利要求3所述的一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，其特徵在於所述的螢光染料標記物為藍色螢光染料6-FAM、綠色螢光染料HEX、黃色螢光染料TAMRA和紅色螢光染料標記R0X，內標選用橙色螢光SIZ。
5.根據權利要求4所述的一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，其特徵在於將所述26個基因座分組，具體為:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656和Penta E為第一組，該組基因座對應的引物的螢光標記物為6-FAM、HEX、TEMRA 和 ROX 的任意ー種;D2S441、TP0X、THOl、D2S1338、CSF1P0、Penta D 和 D10S1248為第二組，該組基因座對應的引物的螢光標記物為與第一組不同的螢光染料標記物；D22S1045、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043 和 Y indel 為第三組，該組基因座對應的引物的螢光標記物為與第一組和第二組都不同的螢光染料標記物；DYS391、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA，以及性別基因座Amelogenin為第四組，該組基因座對應的引物的螢光標記物為與第一組、第二組和第三組都不同的螢光染料標記物；內標選用橙色螢光標記，螢光標記物為SIZ。
6.根據權利要求1-5任意一種所述的一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒，其特徵在於所述的試劑盒由如下組成:
7.一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒的使用方法，其特徵在於按如下步驟實現: A、擴增體系為:
8.根據權利要求7—種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒的使用方法，其特徵在於:電泳採用多道或單道毛細管電泳。
9.根據權利要求7—種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒的使用方法，其特徵在於:其中基因組DNA樣品來源於精斑、唾液斑、組織、血痕或血液。
10.一種同時分析人基因組DNA26個基因座的螢光標記複合擴增的試劑盒的應用，其特徵在於:該試劑盒用於個體識別、親子鑑定。
【文檔編號】C12Q1/68GK103451311SQ201310439926
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月24日 優先權日:2013年9月24日
【發明者】鄭衛國, 盧文翔, 杜蔚安, 盧青, 葛海鵬, 薛佳, 郭育林, 朱麗君 申請人:無錫中德美聯生物技術有限公司