系統性紅斑狼瘡(sle)的診斷的製作方法

2023-12-08 18:29:56

專利名稱：系統性紅斑狼瘡(sle)的診斷的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於診斷受試者的系統性紅斑狼瘡(SLE)的方法和試劑盒。尤其是，本發明涉及可用於診斷受試者的SLE的特異性抗體譜(specific antibody profile)。
背景技術：
系統性紅斑狼瘡(SLE )是自體免疫病因學(auto immune etiology)的炎症性紊亂，主要發生在年輕女性中。SLE能影響許多的身體器官系統，包括腎、皮膚、關節、神經系統、漿膜、血細胞和脈管。雖然不清楚SLE的具體誘因，但許多因素與疾病的發展有關，包括基因、種族、激素和環境因素。SLE病程通常是慢性的、復發性的和無法預測的。未經治療的SLE能夠致命，因為其從攻擊皮膚和關節發展到內臟，包括肺、心和腎，因此進行SLE發展的早期和準確診斷和 /或風險評估是尤其關鍵的。SLE主要出現一系列的發作(flare-ups)，伴隨輕微或沒有疾病現象的間隔時期。由尿中的蛋白量測定的腎損害是與SLE的致病性有關的損害最嚴重的區域之一,並佔該疾病的死亡率和發病率的至少50%。SLE的特點是在血液中產生異常的自身抗體。在不同患者中已發現超過100種的不同的自身分子(self-molecules)與自身抗體(autoantibodies)結合(Sherer et al.,2004, Semin. Arthritis. Rheum. 34:501-37),形成在血液中循環並最終沉積在組織中的免疫複合物。這些免疫複合物沉積引發慢性炎症，並最終引起組織損傷。自身抗體還有直接的致病作用，促發溶血性貧血和血小板減少。通常,可以基於由美國風溼病學會(ACR)定義的^ 個標準(criteria)來診斷SLE。這些標準包括面頰疹、盤狀紅斑、光過敏、口腔潰瘍、關節炎、漿膜炎、腎功能異常、神經疾病(neurologic disorder)、血液疾病(hematologic disorder)(例如白細胞減少症、淋巴球減少症、溶血性貧血或血小板減少)、免疫學疾病和抗核抗體(ANA) (Tan etal.，1997，Arthritis Rheum 1997,40:1725)。如果達到4^一個標準中的至少四個，可以臨床診斷受試者患有SLE。然而，即使在出現少於四個標準時，SLE仍然是可能的。儘管針對dsDNA、磷脂以及Sm蛋白的抗核抗體和自身抗體是用於診斷SLE的十一個標準之一 (Tan et al. , 1997, Arthritis Rheum 1997，40:1725),但經診斷患有 SLE 的許多患者卻缺乏這些自身抗體,特別是在他們處於臨床緩解(clinical remission)時。臨床治療複雜的自身免疫性疾病(如SLE)的最艱巨的挑戰之一是患者的疾病的準確和早期鑑別。此外，沒有鑑別出使臨床醫師或其他人能夠準確地確定SLE的病理生理表現、臨床活動、對治療的響應或預後的可靠性診斷標記。杭原晶片抗原微陣列最近被開發成用於高通量鑑定免疫響應的工具(Robinson etal. , 2002, Nat Med 8，295-301)，並且已用於在疫苗接種和自身免疫疾病中分析免疫響應(Robinson et al. , 2002;Robinson et al. , 2003, Nat Biotechnol. 21，1033-9;Quintanaet al. , 2004;Kanter et al.，2006，Nat Med 12,138-43)。已假設，在健康和疾病中，多反應性的模式可能比單個抗原-抗體關係更具啟迪作用(Quintana et al. , 2006, Lupus15，428-30),如先前對老鼠(Quintana et al. , 2004; Quintana et al. , 2001, J Autoimmun17，191-7et al. , 2007, J Clin Invest 117，712-8;Quintana et al. , 2003, JAutoimmun 21,65-75)的自體免疫組(repertoires)的分析。因此，自身抗體組有提供對疾病的發病機制的新理解和用作疾病過程的免疫生物標記(Cohen，2007，Nat RevImmunol. 7, 569-74)的潛力。本發明一些發明人的PCT公開No. WO 02/08755，涉及用於聚集(cluster)而由此鑑定出與來自需要診斷疾病或監控治療的患者受試者的血清中未確定的免疫球蛋白有反應性的預定義的抗原。755公開內容披露了抗原陣列的應用，其用於確定與來自患有各種疾病的受試者中的血清的免疫球蛋白有反應性的抗原。進一步地公開了診斷方法和可用於這些方法的系統，採用以下步驟聚集多種抗原的抗原子集合，所述抗原子集合與來自存在免疫系統損傷並患有疾病的多個患者的多種抗體有反應性，然後將受試者的這些抗體與獲得的聚集簇(cluster)結合或分開。
對於本發明的一些發明人，美國專利公開NO. 2005/0260770公開了抗原陣列系統以及其診斷應用。該申請提供診斷受試者中的免疫疾病，尤其是I型糖尿病，或對此病的易患性的方法，包括確定該受試者的免疫球蛋白與抗原探針集合的每種抗原探針特異性結合的能力。對於本發明的一些發明人，PCT公開No. WO 10/128506涉及鑑定個體中的心血管疾病的發展的方法，用於鑑別個體中急性心肌梗塞(AMI)過程的發展。現有技術中沒有公開可以特異、可靠、準確、並有辨別力地診斷SLE的分析方法。這樣有辨別力的分析在鑑定患者中SLE的存在或確定對發展該疾病的易患性(敏感性)以及設計(定製，tailoring)對於每個患者的適當治療方法中將是高度有價值的。對於可用於診斷受試者的SLE的改進的診斷方法和試劑盒仍然存在需求。

發明內容
本發明提供用於診斷受試者的系統性紅斑狼瘡(SLE)的方法和試劑盒、用於實施這樣的診斷的抗原探針陣列、以及用於生成這樣的陣列的抗原探針集合(antigen probesets)。本發明部分基於在利用抗原陣列測試SLE患者的抗體反應性時獲得的意外結果。該分析導致鑑別出獨特的自身抗體反應性模式。意外地，獨特的自身抗體模式持續獨立於疾病活動性，並且還存在於有長期臨床緩解的受試者中(例如有腎臟緩解的受試者)。有利地，反應性模式顯著地顯示出對SLE的高靈敏度和高特異性。而且，過後發現存在SLE抗體模式的健康對照受試者發展為臨床SLE。因此，本發明提供與SLE有關的獨特抗原自身抗體反應性模式。儘管確定若干單個抗原(例如透明質酸)足以獨立地充分診斷SLE，這些抗原的特定組合(在本文下面表I中詳細說明)在識別SLE患者和對照受試者中比單獨每種抗原更準確和可靠。表I-區別SLE和健康對照的抗原
權利要求
1.一種診斷受試者中的系統性紅斑狼瘡(SLE)的方法，所述方法包括 (i)測定從所述受試者獲得的樣品中的IgG和IgM抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性IGFBP1、CD99、透明質酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、心磷脂、膠原III、膠原 IV、肌動蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、HRP、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT，從而確定所述樣品對所述多種抗原的反應性模式；以及 (ii)將所述樣品的反應性模式與對照反應性模式進行比較； 其中，從所述受試者獲得的所述樣品的反應性模式與對照樣品的反應性模式相比的顯著性差異是所述受試者患有SLE的指徵。
2.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少三種抗原。
3.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少四種抗原。
4.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少五種抗原。
5.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少六種抗原。
6.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少七種抗原。
7.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原包括至少八種抗原。
8.根據權利要求I所述的方法，其中，所述多種抗原由IGFBP1、CD99、透明質酸、EBV,ssDNA、dsDNA、MP0、心磷脂和膠原III組成。
9.根據權利要求I所述的方法，包括測定所述樣品中的多種IgG抗體和多種IgM抗體對所述多種抗原的反應性。
10.根據權利要求I所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中的IgG抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性透明質酸、BMP4、EBV、ssDNA、dsDNA、F50、HGF和 HSP60pl8。
11.根據權利要求10所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中的IgG抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性透明質酸、EBV、ssDNA和dsDNA。
12.根據權利要求10-11中任一項所述的方法，其中，從所述受試者獲得的所述樣品的反應性模式與對照樣品的反應性模式相比的顯著上調是所述受試者患有SLE的指徵。
13.根據權利要求I所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中IgM抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性⑶99、IGFBPU MP0、心磷脂、膠原III、膠原IV、肌動蛋白、CMV、辣根過氧化物、RV、S100A4、CITEDl和Π1ΙΤ。
14.根據權利要求13所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中IgM抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性⑶99、IGFBPl、MP0、心磷脂和膠原III。
15.根據權利要求13所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中IgM抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性⑶99、IGFBPUMPO和心磷脂。
16.根據權利要求13-15中任一項所述的方法，其中，從所述受試者獲得的所述樣品的反應性模式與對照樣品的反應性模式相比的顯著下調是所述受試者患有SLE的指徵。
17.根據權利要求13所述的方法，包括測定從所述受試者獲得的樣品中IgM抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的反應性CD99、MP0和膠原III。
18.根據權利要求17所述的方法，其中，從所述受試者獲得的所述樣品的反應性模式與對照樣品的反應性模式相比的顯著下調是所述受試者患有腎緩解中的SLE的指徵。
19.一種在受試者中診斷SLE的方法，所述方法包括(i)測定從所述受試者獲得的樣品中的抗體對選自由以下所組成的組中的多種抗原的發應性IGFBP1、⑶99、透明質酸、MPO、和膠原III，從而確定所述樣品對所述多種抗原的反應性模式，以及 (ii)將所述樣品的反應性模式與對照反應性模式進行比較，其中，從所述受試者獲得的所述樣品的反應性模式與所述對照反應性模式相比的顯著性差異是所述受試者患有SLE的指徵。
20.根據權利要求19所述的方法，其中，測定樣品中的抗體的反應性包括測定所述樣品中的I gG和I gM抗體的反應性。
21.根據權利要求19所述的方法，其中，所述多種抗原進一步包括選自dsDNA、ssDNA、EBV和心磷脂中的至少一種抗原。
22.根據權利要求I或19中任一項所述的方法，其中，所述樣品是血清樣品。
23.根據權利要求I或19中任一項所述的方法，其中，所述對照選自由來自至少一個健康個體的樣品、來自一組健康個體的一組對照樣品、以及來自對照個體的儲存的成組數據所組成的組。
24.根據權利要求I或19中任一項所述的方法，進一步包括在測定所述樣品中抗體的反應性之前以1:10稀釋所述樣品。
25.根據權利要求I或19中任一項所述的方法，其中，所述多種抗原以抗原陣列的形式使用。
26.一種用於診斷受試者的SLE的試劑盒，包括選自由以下所組成的組中的多種抗原IGFBP1、CD99、透明質酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MP0、心磷脂、膠原III、膠原IV、肌動蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、辣根過氧化物、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 ΠΠΤ。
27.根據權利要求26所述的試劑盒，其中，所述試劑盒是抗原陣列的形式。
28.根據權利要求26所述的試劑盒，進一步包括用於測定樣品中抗體對所述多種抗原的反應性的裝置。
29.根據權利要求26所述的試劑盒，進一步包括用於比較不同樣品中抗體對所述多種抗原的反應性模式的裝置。
30.一種抗原探針集合，包括選自由以下所組成的組中的多種抗原探針IGFBP1、CD99、透明質酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、心磷脂、膠原III、膠原IV、肌動蛋白、BMP4、CMV,F50、HGF、HRP、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT。
31.一種包括任何權利要求30所述的抗原探針集合的製品。
32.抗原探針集合在製備用於診斷SLE的診斷組合物中的應用，所述抗原探針集合包括選自由以下所組成的組中的多種抗原IGFBP1、⑶99、透明質酸、EBV、ssDNA、dsDNA、MPO、IGFBP1、心磷脂、膠原III、膠原IV、肌動蛋白、BMP4、CMV、F50、HGF、辣根過氧化物、HSP60pl8、RV、S100A4、CITEDl 和 FHIT0
33.根據權利要求32所述的應用，其中所述診斷組合物用於測定樣品中抗體的反應性，從而確定所述樣品對所述多種抗原的反應性模式，其中所述樣品的反應性模式與對照樣品的反應性模式相比的顯著性差異是SLE的指徵。
全文摘要
本發明涉及用於診斷受試者的系統性紅斑狼瘡(SLE)的方法和試劑盒。尤其是，本發明涉及可用於診斷受試者的SLE的特異性抗體譜。
文檔編號G01N33/564GK102762983SQ201180009356
公開日2012年10月31日 申請日期2011年2月13日 優先權日2010年2月12日
發明者伊倫·R·柯亨, 伊泰·法塔爾, 艾坦·多馬尼, 諾姆·申塔爾 申請人:特爾汗什莫爾醫學基礎設施研究和服務公司, 耶達研究及發展有限公司