一種奈達鉑凍乾粉針劑的雜質檢測方法

2023-11-06 08:55:12

專利名稱：一種奈達鉑凍乾粉針劑的雜質檢測方法
技術領域：
本發明涉及奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，更具體的說是通過高效液相色譜法檢測奈達鉬凍乾粉針劑生產過程中或者是最終成品中雜質的方法。
背景技術：
奈達鉬屬抗腫瘤藥，於1995年6月首次獲準上市，用於治療頭頸部腫瘤、小細胞和 非小細胞肺癌、食道癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、子宮頸癌。奈達鉬(Nedaplatin)的毒性譜 與順鉬不同，其劑量限制性毒性為骨髓抑制所致的血小板減少。但其腎毒性和胃腸道副反 應與順鉬比較有所降低，無交叉耐藥性，選擇性釋放藥物及良好的可溶性等優點。臨床試驗 中發現奈達鉬對廣泛實體瘤有效，對頭頸部腫瘤40%以上的有效率，優於順鉬，對食道癌有 效率大於50%，較順鉬高約20%，對子宮頸癌也有40%以上的有效率，為這些腫瘤患者提供了 新的有效的臨床選擇。奈達鉬凍乾粉針劑中活性成分峰在傳統的色譜檢驗系統中保留時間很短，雜質很 難分開，且色譜檢驗系統穩定性差，流動相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素的輕微變化就會對 於檢測結果產生很大影響，甚至不能適用於相關雜質的檢出。同時，傳統的色譜檢驗系統需 要較長的平衡時間，而且對傳統的色譜柱損傷很大，耗費成本較大，必須摸索出一種合理的 色譜系統，制訂出簡便、快速、穩定的雜質檢驗方法，以便有效地控制本品質量。CN200910094394. 0公開了鉬類抗癌藥物順鉬、奧沙利鉬、奈達鉬等涉及產生碘化 銀沉澱鉬配合物製備過程中銀的控制方法，沒有對上述技術缺陷的改進建議。CN200710020343. 4公開了一種含銀量極低的奈達鉬的製備方法，沒有對上述技術 缺陷的改進建議。CN200710020326. 0公開了一種奈達鉬凍乾粉針劑的製備方法，其中採用的色譜檢 驗系統中保留時間較短，雜質分離不理想，色譜檢驗系統穩定性不佳，流動相、溶劑、柱溫及 色譜柱等因素對於檢測結果影響較大。CN200710022407. 4公開了一種精製奈達鉬的方法，沒有對上述技術缺陷的改進建 議。CN200810058604. 6 及 CN200910094048. 2 公開了抗腫瘤藥物奈達鉬 C2H8N2O3Pt 的 製備方法，沒有對上述技術缺陷的改進建議。《無機化學學報》2009年8期1375 1378頁報導了奈達鉬的新合成方法、晶體結 構和熱穩定性，沒有對上述技術缺陷的改進建議。《藥物分析雜誌》2008年1期131 133頁報導了用RP—HPLC法測定注射用奈達 鉬含量及有關物質的方法，其中採用的色譜檢驗系統中保留時間較短(4min左右)，雜質分 離不夠理想，由於添加了較多量的枸櫞酸，色譜檢驗系統需要較長的平衡時間，且穩定性不 佳，流動相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素對於檢測結果影響較大。《中國醫藥工業雜誌》2000年31卷10期457 458頁報導了奈達鉬的HPLC測定 法，以高效液相色譜法測定奈達鉬的含量。採用SpherisorbNH2柱，以40mmol/L磷酸二氫鉀一乙腈(8:2)為流動相，檢測波長為210nm。奈達鉬的保留時間雖有延長，但奈達鉬與有 關物質(即雜質)僅能初步分離，雜質檢出個數較少，存在有害雜質未檢出可能給患者臨床 用藥安全帶來的隱患。另外，使用了成本更高的NH2柱，同時以較高濃度的鹽溶液作為流動 相，色譜檢驗系統需要很長的平衡時間，該流動相而且對NH2柱損傷很大，耗費成本較大。《BiomedicalResearchonTraceElements》1993 年 4 (2)期中 49 50 頁 《HPLC/ICP-AESmethodforthesimultaneousdeterminationofcis-diammine(glycolato) platinumanditsmetaboliteinurine))中報導了採用電感耦合等離子體原子發射光譜法測 定順鉬及其代謝物的方法，沒有對上述技術缺陷的改進建議。現有公知技術均沒有對以上缺陷提出改善的建議。

發明內容
本發明的目的是針對以上不足之處提供一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，通過該方法可以延長奈達鉬凍乾粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗系統中的保留時間，將雜 質更好的分開，減小流動相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對於檢測結果的影響，縮短色 譜檢驗系統平衡時間，提高色譜柱的耐用性，從而在降低檢測成本的同時可以簡便、快速、 穩定的檢測奈達鉬原料中的雜質，以便有效地控制產品質量，避免了有害雜質未檢出可能 給患者臨床用藥安全帶來的隱患。奈達鉬的化學名稱為(Z) —二氨(羥基乙酸-01，-02，)鉬，結構式為
分子式=C2H8N2O3Pt 分子量303. 18。本發明通過高效液相色譜法檢測奈達鉬凍乾粉針劑中的雜質，採用辛烷基矽烷鍵 合矽膠為填充劑，可以延長奈達鉬凍乾粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗系統中的保留時 間，將雜質更好的分開。流動相對實驗結果中雜質的分離度及峰形有很大影響，在傳統色譜檢驗系統中， 流動相比例或PH值的輕微變化就會對於檢測結果產生很大影響，甚至不能適用於相關雜 質的檢出。經發明人研究實驗，發現以水與乙腈或甲醇的混合物(體積比例為60 40 99 1)為流動相檢測奈達鉬凍乾粉針劑的雜質效果很好。更進一步的研究實驗發現，當水與乙 腈或甲醇混合物的體積比例為70 30 99 1)為流動相效果更好，在流動相中加入二乙胺 或三乙胺可以提高雜質的分離度並改善峰形，且以添加流動相總體積0. 005% 0. 量 的二乙胺或三乙胺為佳。採用這樣的色譜條件，流動相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對 於檢測結果的影響極小，色譜檢驗系統平衡時間被大大縮短，同時提高了色譜柱的耐用性， 在降低檢測成本的同時可以簡便、快速、穩定的檢測奈達鉬凍乾粉針劑中的雜質。奈達鉬溶液穩定性較差，採用傳統色譜檢驗系統，不論是採用水還是流動相作為 溶劑，隨著放置時間的延長雜質明顯增加，即便是在2 8°C的低溫條件下保存也是如此， 另外，奈達鉬凍乾粉針劑中使用了右旋糖酐作為骨架劑，右旋糖酐是一定分子量範圍內的混合聚合物，在色譜檢測系統中表現為多個雜峰，且不同批次的右旋糖酐出峰位置及大小 差異較大，很難與奈達鉬凍乾粉針劑的主峰及雜質峰分開，為了保證檢測結果的準確性，經 發明人研究實驗，發現採用本發明的水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L 的磷酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成適當濃度的奈達鉬溶液，具體的就 是含奈達鉬濃度為0. 5 2mg/ml的溶液，過濾並置2 8°C條件下避光保存，由於濾除了不 溶於該混合溶劑的輔料，可以很好的消除骨架劑右旋糖酐對雜質檢測的幹擾，同時顯著提 高了其穩定性，雜質無明顯增加，這給大量樣品的連續檢測提供了方便，比如可以採用可以 控制樣品溫度的自動進樣液相色譜系統，從而實現無人值守下的大量樣品連續進樣。本發明提供的一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，具體如下
1)採用高效液相色譜法，其色譜條件為以辛烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相為 添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物，水與乙腈或甲醇的體積比例為60 : 40 99 :1，二乙胺或三乙胺的添加量是水與乙腈或甲醇混合物總體積的0.005% 0. 1%； 檢測波長為205 222nm ；柱溫為20 45°C ；流動相流速為0. 5 2. Oml/min ；
2)樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0.05mol/L的磷酸 調節pH至5. 6)將樣品配製成為含奈達鉬0. 5 2mg/ml的溶液，過濾並置2 8°C條件下 避光保存；
3)測定將5μ L 20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述流動相水與乙腈或甲醇的體積比例 為 70 30 99 :1。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述流動相添加了水與乙腈或甲醇混合 物總體積0. 01% 0. 的二乙胺或三乙胺。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述檢測波長為210 222nm。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述檢測波長為220nm。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述柱溫為30 45°C。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述柱溫為40°C。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述流動相流速為0. 8 1. 2ml/min。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，所述流動相流速為1. Oml/min。一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製為含奈達 鉬lmg/ml的溶液，過濾並置2 8°C條件下避光保存。本發明一種奈達鉬凍乾粉針劑的雜質檢測方法，通過該方法可以延長奈達鉬凍幹 粉針劑中活性成分峰在色譜檢驗系統中的保留時間，很好的消除骨架劑右旋糖酐對對雜質 檢測的幹擾，可以將雜質更好的分開，減小流動相、溶劑、柱溫及色譜柱等因素變化對於檢 測結果的影響，縮短色譜檢驗系統平衡時間，提高色譜柱的耐用性，從而在降低檢測成本的 同時可以簡便、快速、穩定的檢測奈達鉬凍乾粉針劑中的雜質，以便有效地控制產品質量， 避免了有害雜質未檢出可能給患者臨床用藥安全帶來的隱患。


圖1 按照實施例1進行奈達鉬凍乾粉針劑雜質檢測的高效液相色譜圖。
具體實施例方式下面通過實施例來進一步說明本發明。應該正確理解的是本發明的實施例僅僅是用於說明本發明而給出，而不是對本發明的限制，所以，在本發明的方法前提下對本發明 的簡單改進均屬本發明要求保護的範圍。以下實施例中檢測所用奈達鉬凍乾粉針劑樣品均由江蘇奧賽康藥業有限公司提 供，批號為20080501S。實施例1
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比80 :20)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的二乙胺；
柱溫:45°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，色譜圖見圖 1。檢測結果表明各項雜質分離良好。實施例2
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比90 10)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的三乙胺； 柱溫:40°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測波長210nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例3
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比70 30)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的二乙胺； 柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ；檢測波長205nm。
樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬2mg/ml的溶液，過濾並置 2 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例4
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比70 30)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的三乙胺； 柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測波長222nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬2mg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例5:
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比65 35)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的三乙胺； 柱溫:35°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例6
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比60 40)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的二乙胺； 柱溫:45°C ； 流速1. 2ml/min ；檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0.05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 6 °C條件下避光保存；
測定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例7
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比80 :20)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的三乙胺；
柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測波長222nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬1. 5mg/ml的溶液，過濾並置 4°C條件下避光保存；
測定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例8
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比60 :40)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的二乙胺；
柱溫:45°C ； 流速1. 2ml/min ； 檢測波長210nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬2mg/ml的溶液，過濾並置 6 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例9
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比80 20)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的二乙胺； 柱溫:20V ； 流速0. 5ml/min ；檢測波長215nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例10
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比99 :1)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 01% 的三乙胺；
柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例11
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比70 30)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的二乙胺； 柱溫:45°C ； 流速2. Oml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 4°C條件下避光保存；
測定將5μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例12
儀器SHIMADZULC-10AT高效 液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比80 20)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的三乙胺； 柱溫:40°C ； 流速2. Oml/min ；檢測波長222nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬0. 8mg/ml的溶液，過濾並置 4°C條件下避光保存；
測定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例13
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_甲醇(體積比60 40)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0.01%的三乙胺； 柱溫:25°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 6 °C條件下避光保存；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例14
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比85 15)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 05%的二乙胺； 柱溫:20°C ； 流速0. 5ml/min ； 檢測波長222nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬0. 8mg/ml的溶液，過濾並置 6 °C條件下避光保存；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例I5
儀器SHIMADZULC-20AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水_乙腈(體積比60 :40)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積0. 1% 的三乙胺；
柱溫:30°C ； 流速0. 5ml/min ；檢測波長215nm。
樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節PH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬0. 5mg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例16
儀器SHIMADZULC-10AT高效液相色譜儀； 色譜柱辛烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm, 5 μ m)；
流動相以水-甲醇(體積比99 1)配製混合物，在混合物中添加混合物總體積 0. 005%的二乙胺； 柱溫:30°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑(體積比為50:50，並用0. 05mol/L的磷 酸調節pH至5. 6)將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬lmg/ml的溶液，過濾並置 8 °C條件下避光保存；
測定將10 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測結果表 明各項雜質分離良好。實施例17
CN200710020326. O提供的奈達鉬雜質檢測方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀； 色譜柱十八烷基矽烷鍵合矽膠柱(4. 6 X 250mm，5 μ m)；
流動相以甲醇一 O.Olmol/L枸櫞酸溶液(體積比30:70)(用三乙胺調節pH值至6.0) 為流動相；
柱溫:40°C ； 流速1. Oml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用流動相將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬Img/ ml的溶液；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測中發現 奈達鉬保留時間較短，雜質分離不理想，色譜檢驗系統穩定性不佳，流動相、溶劑、柱溫及色 譜柱等因素對於檢測結果影響較大。實施例I8
《藥物分析雜誌》2008年1期131 133頁提供的用RP—HPLC法測定奈達鉬雜質的方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀；
色譜柱Shim-packCLC-0DS 不鏽鋼柱(4. 6 X 150mm，5 μ m)；
流動相以甲醇一 O.Olmol/L枸櫞酸溶液(體積比30:70)(用三乙胺調節pH值至6.0)為流動相；
柱溫:30°C ； 流速0. 7ml/min ； 檢測波長220nm。樣品溶液的配製採用流動相將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬Img/ ml的溶液；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測中發現 奈達鉬保留時間較短(4min左右)，雜質分離不夠理想，由於添加了較多量的枸櫞酸，色譜檢 驗系統需要較長的平衡時間，平衡需要2個小時，且穩定性不佳，流動相、溶劑、柱溫及色譜 柱等因素對於檢測結果影響較大。
實施例19
《中國醫藥工業雜誌》2000年31卷10期457 458提供的測定奈達鉬雜質的方法。儀器SHIMADZULC_10AT高效液相色譜儀； 色譜柱:SpherisorbNH2 柱(4.0X300mm，10ym)；
流動相以40mmol/L磷酸二氫鉀一乙腈(體積比8:2)為流動相； 柱溫:30°C ； 流速0. 8ml/min ； 檢測波長210nm。樣品溶液的配製採用流動相將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉬 20 μ g/ml的溶液；
測定將20 μ L的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析，檢測中發現 奈達鉬的保留時間雖有延長，但奈達鉬與有關物質(即雜質)僅能初步分離，雜質檢出個數 較少，色譜檢驗系統需要很長的平衡時間，平衡需要3個小時，該流動相而且對ΝΗ2柱損傷 很大，耗費成本較大。實施例20
實施例1 實施例20檢測結果比較，見表1。表1實施例1 實施例20檢測結果比較表^ttfftl 親迖桕扉留 雜.橫幢出個 ^jff5fiti,, *大《個雜 色《.舉統平
從表1可以看出，本發明的技術方案(實施例1 16)較現有技術(實施例17 19)保 留時間更長，從而更利於雜質的分離，在雜質檢出個數和檢出量的穩定性上具有明顯優勢。 從試驗過程的時間統計來看，本發明的技術方案(實施例1 16)較現有技術(實施例17 19)色譜系統平衡時間短很多，更有利於快速穩定檢測樣品。
權利要求
一種奈達鉑凍乾粉針劑的雜質檢測方法，具體如下1)採用高效液相色譜法，其色譜條件為以辛烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相為添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物，水與乙腈或甲醇的體積比例為6040～991， 二乙胺或三乙胺的添加量是水與乙腈或甲醇混合物總體積的0.005％～0.1％；檢測波長為205～222nm；柱溫為20～45℃；流動相流速為0.5～2.0ml/min；2)樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑將奈達鉑凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉑0.5～2mg/ml的溶液，過濾並置2～8℃條件下避光保存，水與甲醇混合溶劑的體積比例為50:50，並用0.05mol/L的磷酸調節pH至5.6；3)測定將5μL～20μL的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述流動相水與乙腈或甲醇的體積比例為 70 30 99 :1。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述流動相添加了混合物總體積0.01% 0. 的二乙胺或三乙胺。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於檢測波長為210 222nm。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於檢測波長為220nm。
6.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於柱溫為30 45°C。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於柱溫為40°C。
8.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於流動相流速為0.8 1. 2ml/min。
9.根據權利要求8所述的方法，其特徵在於流動相流速為1.Oml/min。
10.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於將奈達鉬凍乾粉針劑樣品配製為含奈達 鉬lmg/ml的溶液，過濾並置2 8°C條件下避光保存。
全文摘要
本發明涉及的是一種奈達鉑凍乾粉針劑的雜質檢測方法，具體為1)採用高效液相色譜法，以辛烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相為添加了二乙胺或三乙胺的水與乙腈或甲醇的混合物；檢測波長為205～222nm；柱溫為20～45℃；流動相流速為0.5～2.0ml/min；2)樣品溶液的配製採用水與甲醇混合溶劑將奈達鉑凍乾粉針劑樣品配製成為含奈達鉑0.5～2mg/ml的溶液；3)測定將5μL～20μL的樣品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖並進行分析。本發明很好的消除了骨架劑右旋糖酐對雜質檢測的幹擾，並且在降低成本的同時可以簡便、快速、穩定的檢測奈達鉑凍乾粉針劑中的雜質。
文檔編號G01N30/06GK101865894SQ20101021108
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月28日 優先權日2010年6月28日
發明者葉東, 張建義, 戴豔, 王長斌, 趙小偉 申請人:江蘇奧賽康藥業有限公司