一種c21甾體配糖體在製藥中的應用的製作方法

2023-05-30 04:19:01 1

專利名稱：一種c21甾體配糖體在製藥中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及C21甾體配糖體的新用途，尤其涉及在製藥領域中的用途。
背景技術：
抑鬱症屬情感性精神障礙性疾病，1999年世界衛生組織(WHO)估計發病率佔世界總人口的3％～5％。近年來抗抑鬱藥物的研究非常活躍。20世紀50年代就有了對抑鬱症狀有效的三環類抗抑鬱藥物(TCA)，但因缺乏選擇性而存在嚴重毒副作用，之後出現的單胺氧化酶抑制劑(MAO1)也因不可逆和無選擇性而在應用上受到限制。1988年美國禮來公司推出選擇性5-羥色胺(5-HT)重攝取抑制劑(SSR1)氟西汀(百憂解)，才使抑鬱症的治療有了進展。
隨著細胞分子藥理學研究的飛躍，對抗抑鬱機制的研究更加深入，對已有抗抑鬱藥物的認識和新藥篩選方向也更明確。近年開發的抗抑鬱藥物，包括氟西汀、氟伏沙明(nuvoxamine)、帕羅西汀(Pmoxetine)、舍曲林(sertraline)、齊美定(zimeldine)和曲唑酮(trazodone)、文拉法辛(venlafaxine)、瑞波西汀(reboxetine)、安非他酮(amfebufamone)、氯苯帕明(clomipramine)等，目前這類藥臨床應用最為廣泛，口服易吸收，與血漿蛋白結合率高，半衰期較長，顯效快且作用強，療效與TCA相似，但副作用明顯較低。但由於抗抑鬱藥物為長期服用，在保證其療效的前提下，副作用的大小直接決定了這個藥物能否在臨床上進行推廣。目前臨床上使用的抗抑鬱化學藥，雖然較當初的三環類抗抑鬱藥物有很大的改進，但仍然存在著副作用較大的缺點。即使是目前臨床首推的氟西汀，也有其誘發自殺傾向的報導。
C21甾體配糖體是一類重要的藥物。早在二十年代就曾發現C21甾體類成分並進行了化學成分的研究。該類化合物除從玄參科、毛莫科、夾竹桃科等植物中發現外，還以蘿藦科植物中存在更普遍。在蘿藦科植物中，研究較多的含有C21甾體化合物的植物有鵝絨藤屬、牛奶菜屑、肉珊瑚屬等，槓柳屬的一些植物亦含有較多的C21甾體化合物。這些屬的許多植物具有較大的應用價值。如鵝絨藤屬植物青陽參(Cynanchum otophyllum Schneid)、麗江牛皮消(C.likiangese)等的乳汁及根部作藥用，治療蛇傷、跌打、關節炎、脖瘤等。青陽參所含有的青陽參總苷在臨床上用以治療癲癇療效較好。白首烏(C.bungei)為滋補珍品，系山東泰山一帶四大名藥之一，具有明顯的免疫調節作用。隨著現代分離、分析方法的不斷發展，對鵝絨藤屬植物中的C21甾體配糖體的研究也不斷深入。其母體結構通式如下 其中R1為糖鏈取代基，糖鏈由不同數目的單糖基組合而成。常見的糖基為葡萄糖、鼠李糖、加拿大麻糖、地支糖等；R2為不同的醯基取代基，如乙醯基、對羥基苯甲醯基或3，4-二甲基-2-烯-戊醯基等。
通常，所述的單糖基為五碳糖或六碳糖基。

發明內容
本發明的目的是提供一種以天然植物為原料的C21甾體配糖體的新用途，即在製藥中的新應用。
實際上，本發明涉及C21甾體配糖體在製備治療或改善具有抑鬱狀態的精神障礙性疾病的藥物中的應用。
特別涉及C21甾體配糖體在製備治療或預防抑鬱症藥物中的應用。
本發明的目的通過下述技術方案予以實現。
採用蘿藦科鵝絨藤屬植物青陽參根莖(Cynanchum otophyllumSchneid)為原料，經粉碎成小於10目的顆粒，用75％～80％醇或酮溶劑提取2～3次，溶劑的每次加量以沒過原料面為宜，合併提取液並在50℃～80℃下加熱濃縮回收溶劑，至無明顯的溶劑氣味；濃縮液用水稀釋，濃縮液與水的重量比為1∶3～5，用石油醚或汽油萃取2～3次，水層再用氯仿或乙酸乙酯或甲酸乙酯萃取2～3次，合併所述的溶劑部分，回收溶劑，得到淺黃色粉末，即為青陽參總苷，其中主要成分為青陽參總甾體配糖體，含量為40～80％。
採用蘿藦科鵝絨藤屬植物昆明杯冠藤(C.willichii Weight)根莖為原料，經粉碎成小於10目的顆粒，用75％～80％醇或酮溶劑提取2～3次，溶劑的每次加量以沒過原料面為宜，合併提取液並在50℃～80℃下加熱濃縮回收溶劑，至無明顯的溶劑氣味；濃縮液用水分散，濃縮液與水的重量比為1∶3～5，用石油醚或汽油萃取2～3次，水層再用氯仿或乙酸乙酯或甲酸乙酯萃取2～3次，合併所述的溶劑部分，回收溶劑，得到淺黃色粉末，即為昆明杯冠藤總苷，其中主要成分為C21甾體配糖體含量為50～80％。
對青陽參總苷、杯冠藤總苷及其它來源的C21甾體配糖體為主成分的有效部位(簡稱總苷)進一步研究發現，總苷中配糖體的糖基部分，變化較多，但比較突出的特徵是，構成這些糖鏈的單個糖基，一般都含有2-去氧糖，如加拿大麻糖、地支糖等。將總苷用5％鹽酸水解，苷元相對簡單些，主要由具有類似骨架的C21甾體母核構成，取代基的差別導致了苷元的差別，主要的苷元結構為青陽參苷元(qingyangshengenin)和告達庭(caudatin)，其它結構苷元構成的配糖體含量都不高。總苷中，青陽參苷元的含量一般為2～20％，告達庭含量一般為2～30％，所以，總苷的苷元的特徵表現了總苷的基本特徵。
青陽參總苷或昆明杯冠藤總苷，經過反覆的柱層析，分離純化，得到構成總苷的不同的C21甾體配糖體單體化合物。雖然柱層析方法分離成本很高，但由於可以更加方便地進行質量控制，也是一種重要的製備相關後續產品的方法。
總苷或C21甾體配糖體單體化合物，添加藥學上可接受的輔助劑，可以製成膠囊、片劑、滴丸、口服液、顆粒劑、注射劑、粉針劑或凍乾粉針，用於藥物的製備。
有益效果C21甾體配糖體是一種天然來源的藥物原料，本發明的試驗結果表明，其毒副作用小，療效獨特，具有良好的抗抑鬱作用。且由於原料來源豐富，提取方法簡單易行，價格低，可為患者用藥提供了一種理想的選擇，預示著很好的藥用前景。


圖1為青陽參水解後的總苷元色譜圖。
其中色譜條件為色譜柱shim-pack VP-ODS(4.6×150mm，5μ)流動相(甲醇-水)梯度洗脫時間甲醇水0.0140％60％10.00 50％50％15.00 70％30％
25.0080％20％流速1ml/min檢測波長254nm酸水解方法青陽參總苷20mg，溶於10ml 5％甲醇鹽酸溶液中，加熱回流30分鐘。減壓濃縮，回收甲醇，加入5ml氯仿，溶解殘留物，水洗滌氯仿，至水層為中性。氯仿層蒸乾，除去氯仿，殘留物用5ml甲醇溶解，得總苷元溶液，HPLC檢測。
具體實施例方式
通過下面給出的具體的實施例和藥理試驗例可以進一步清楚地了解本發明。但它們不是對本發明內容的限定。
實施例1取青陽參根莖10kg，粉碎，80％乙醇提取三次，合併提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋，石油醚萃取三次，水層再氯仿萃取三次，合併氯仿部分。回收氯仿，得淺黃色粉末300克，得率為3.0％。所得淺黃色粉末為青陽參總苷，以青陽參苷元為對照品，參照藥品標準(WS3-B-2343-97)方法，測得總苷含量為72.5％。以HPLC方法測定總苷中主要苷元含量，結果為青陽參苷元含量為5.1％，告達庭含量為10.5％。
實施例2取昆明杯冠藤根莖10kg，粉碎，80％乙醇提取三次，合併提取液，濃縮回收溶劑。濃縮液用水稀釋，石油醚萃取三次，水層再氯仿萃取三次，合併氯仿部分。回收氯仿，得淺黃色粉末310克，得率為3.1％。所得淺黃色粉末為昆明杯冠藤總苷。以青陽參苷元為對照品，參照藥品標準(WS3-B-2343-97)方法，測得總苷含量為80.4％。以HPLC方法測定總苷中主要苷元含量，結果為總苷中青陽參苷元含量為6.0％，告達庭含量為15.2％。
實施例3取青陽參總苷50g，溶於甲醇200ml，加入200g 100目粒度的矽膠，攪拌均勻，將甲醇揮幹。取1000g 300～400目粒度的矽膠，按常規方法柱層析，洗脫系統為氯仿-甲醇(20∶1～5∶1)，梯度洗脫。收集洗脫液，得5部分，第3部分用反相矽膠反覆柱層析，甲醇∶水(60∶40)洗脫，得化合物1 1.2g，為青陽參苷甲。白色粉末，分子式為C56H86O16，分子量932。易溶於乙醇、甲醇、乙酸乙酯、氯仿。
實施例4將青陽參總苷100g、澱粉60g、糊精5g混和均勻，加入10％澱粉漿制軟材，用14目尼龍篩網制粒，60～70℃通風乾燥，16目篩整粒，加入硬脂酸鎂1.5g、羧甲基澱粉鈉5g混勻，壓製成1000片，包衣，即得所需的片劑，每片含青陽參總苷100mg。
實施例5取青陽參總苷100g，加入澱粉50g、硬脂酸鎂2g混勻，直接用全自動膠囊填充機填充成1000粒，拋光，即得所需的膠囊。每粒含青陽參總苷100mg。
實施例6取青陽參總苷15g，投入30g加入熔融的聚乙二醇6000中，攪拌至溶解，轉移至貯液瓶中，密閉並保溫在80～90℃，調節滴丸機液滴定量閥門，由上往下滴入10～15℃的液狀石蠟中，供制1000粒，將形成的滴丸瀝乾並擦除液狀石蠟，乾燥，即得所需的滴丸。每粒含青陽參總苷15mg。
實施例7取青陽參總苷20g，溶液蒸餾水500ml中，入蜂蜜100g、蔗糖10g、苯甲酸鈉2g，加熱至80℃～90℃，攪拌使溶解，保溫30min，濾過，濾液加水稀釋至1000ml，攪勻，灌封，每支10ml，滅菌，即得所需的口服液。
實施例8取青陽參總苷1份、糊精4份及乙醇適量，混勻，過10目篩製成顆粒，與60℃～70℃乾燥，整粒，分裝，即得所需的顆粒劑，每包重500mg。
實施例9取青陽參總苷25g，加注射用水適量溶解，加配置量的0.02％活性炭攪拌5～10min，濾過，濾液稀釋至5000ml，加氯化鈉調節滲透壓至等滲，調pH6.5～8.0，超濾，灌封成1000支，即得所需的注射劑，每支5ml含青陽參總苷25mg，肌肉注射用。
實施例10取青陽參總苷50g，加注射用水使溶解，加配製量的0.02％活性炭攪拌5～10min，濾過，濾液加水稀釋至1000ml，調pH6.5～8.0，超濾，噴霧乾燥，乾粉無菌分裝，即得所需的注射劑。每支25mg。肌肉注射用。
實施例11無菌條件下取青陽參總苷25g，置於無菌容器內，加注射用水1000ml，調節pH6.5～8.0，加配製量的0.02％活性炭攪拌5～10min，用無菌抽濾漏鬥過濾，再用滅菌垂熔漏鬥精濾或超濾，濾液檢驗合格後分裝於2ml安瓿中，低溫冷凍乾燥，無菌熔封，即得所需的粉針劑，每支含青陽參總苷25mg。臨用前加注射用水適量使之溶解，肌肉注射用。
藥理試驗例1——急性毒性試驗取小鼠120隻，每組10隻，灌胃給不同劑量的藥物，連續觀察7天，計數死亡小鼠。計算LD50，試驗結果見表1。
表1.急性毒性試驗結果劑量 死亡 存活LD50組別mg/kg(只) (只)mg/kgQYS 1002 8/10 2/10QYS 701 5/10 5/10688.1QYS 491 2/10 8/10
QYS3440/10 10/10KMBGT 1200 8/10 2/10KMBGT 8005/10 5/10 710.1KMBGT 5002/10 8/10KMBGT 3500/10 10/10Q-A3008/10 2/10Q-A2005/10 5/10 180.5Q-A1002/10 8/10Q-A50 0/10 10/10注LD50CALC2.0版軟體計算，「QYS」為青陽參總苷的簡稱、KMBGT為昆明杯冠藤總苷的簡稱，Q-A為青陽參苷甲的簡稱。
藥理試驗例2——小鼠強迫遊泳試驗玻璃缸，直徑14cm，高19cm，內放自來水，水深14cm，水溫26℃。小鼠置入缸內，遊15分鐘後取出，自然晾乾後，分為8組正常對照組、丙咪嗪組及QYS、KMBGT各自的20mg/kg、60mg/kg組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組，在遊泳後0、19和24小時後分別灌胃給藥三次，半小時後再次進行強迫遊泳，丙咪嗪組僅在第二次遊泳前30分鐘腹腔注射一次。用電子秒表記錄5分鐘內每隻小鼠的遊泳不動時間。試驗採用盲法，觀測者不知動物給藥情況。
試驗前24、5、0.5小時連續3次灌胃QYS、KMBGT、Q-A後，QYS、KMBGT各自的20mg、60mg及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組小鼠的強迫遊泳不動時間均縮短，其中QYS、KMBGT的60mg/kg組和Q-A的45mg組劑量效果最為顯著，與正常對照組比較具有統計學意義(P＜0.05)，且作用優於10mg/kg的丙咪嗪組。試驗結果如表2所示。
表2.QYS、KMBGT、Q-A組對小鼠強迫遊泳不動時間的影響(X±SE)組別 劑量(mg/kg)不動時間(秒)縮短率(％)正常對照 87.9±18.6丙咪嗪10 69.1±14.7 21.4QYS 20 58.7±15.3 33.2QYS 60 33.9±12.9* 61.5*KMBGT 20 60.5±12.6 31.2KMBGT 60 35.1±13.5* 60.1*Q-A 15 55.2±12.8 37.2Q-A 45 30.5±14.0 65.3*與對照組比*P＜0.05藥理試驗例3——小鼠懸尾試驗將動物隨機分為8組—正常對照組、丙咪嗪組、QYS、KMBGT各自的20mg/kg、60mg/kg組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組(通稱給藥組)。給藥組灌胃給藥4次，丙咪嗪ip給藥一次，30分鐘後，用膠布將小鼠在距尾尖1cm處固定，使其頭朝下，距地面50cm。小鼠懸尾6分鐘，記錄後4分鐘內不動時間。
給藥組灌服30分鐘後，QYS、KMBGT的20和60mg/kg劑量組及Q-A的15mg/kg、45mg/kg劑量組小鼠的懸尾不動時間減少，與正常對照組比較均有統計學意義，試驗結果見表3，表明能顯著縮短小鼠懸尾不動時間。
表3.QYS、KMBGT、Q-A對小鼠懸尾不動時間的影響(X±SE)組別劑量(mg/kg)不動時間(秒)縮短率(％)
正常對照 120.1±14.3丙咪嗪 1027.4±10.4***77.2QYS 2056.7±11.7** 52.8QYS 6061.8±16.7* 48.5KMBGT 20KMBGT 60Q-A 15Q-A 45與對照組比 *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001藥理試驗例4——小鼠自由活動試驗小鼠被灌胃不同劑量的QYS、KMBGT、Q-A組後30分鐘，依次放入小鼠自主活動箱，該儀器由計算機自動記錄動物活動次數，共有四個活動室，每次每箱放兩隻動物，記錄5分鐘內小鼠活動次數。試驗結果與正常組對比，一次性灌胃給QYS、KMBGT 20、60、180mg/kg，Q-A 15mg、45mg、100mg/kg後，小鼠自主活動數均無顯著差異，說明對動物無明顯興奮性，在藥理試驗例3、4中反應的結果是其抗抑鬱效果的表現。試驗結果見表4。
表4.QYS、KMBGT、Q-A對小鼠5分鐘內活動次數的影響(X±SD)組別 劑量(mg/kg)不動時間(秒)正常對照 200.5±53.8QYS20 228.5±68.5QYS60 226.8±58.6QYS180194.5±60.9
KMBGT20220.5±52.5KMBGT60225.5±55.0KMBGT180 205.5±60.5Q-A 15220.5±52.5Q-A 45220.5±52.5Q-A 100 220.5±52.5藥理試驗例5——利血平拮抗試驗取小鼠隨機分成12組，每組12隻。每鼠皮下注射利血平注射液3mg/kg，同時給予相應藥物，1.5小時後分別觀測上眼瞼下垂、運動不能的動物個數。其中上瞼下垂觀察30秒內眼瞼至少閉合一半的動物個數。運動不能將小鼠放入直徑7.5的圓形白紙中央，觀察15秒內仍呆在圈內的動物個數。試驗結果見表5。
表5.QYS、KMBGT、Q-A對利血平所致眼瞼下垂、運動不能作用的影響(x±s)劑量 眼瞼下垂對抗百分率 運動不能 對抗百分率組別mg/kg (只)(％) (只) (％)對照組 10/12 16.67 7/12 41.67丙咪嗪 103/1275.0** 10/1216.67阿米替林 702/1283.33**10/1216.67QYS405/1258.33* 6/12 50.0QYS208/1233.33 7/12 41.67QYS108/1233.33 11/128.33KMBGT 405/1258.33 6/12 50.0
KMBGT20 8/12 33.33 8/12 33.33KMBGT10 8/12 33.33 11/12 8.33Q-A 40 6/12 50.0* 6/12 50.0Q-A 20 8/12 33.33 7/12 41.67Q-A 10 8/12 33.33 10/12 16.67x2檢驗與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。n＝12在對抗利血平模型上，40mg/kg劑量出現明顯的對抗眼瞼下垂效應，表明QYS、KMBGT、Q-A的抗抑鬱作用機制與相關神經遞質有關。對運動不能的小鼠未表現出明顯的作用，陽性藥也未表現出明顯的效應。
權利要求
1.C21甾體配糖體在製備治療或改善具有抑鬱狀態的精神障礙性疾病的藥物中的應用。
2.C21甾體配糖體在製備治療或預防抑鬱症藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種C21甾體配糖體在製藥領域中的新用途。本發明通過深入系統的試驗證實C21甾體配糖體其毒副作用小，對具有抑鬱狀態的精神障礙性疾病，特別是對抑鬱症療效獨特。且由於原料來源豐富，提取方法簡單易行，價格低，可為患者用藥提供了一種理想的選擇，預示著很好的藥用前景。
文檔編號A61K31/704GK1634097SQ20041007955
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月9日 優先權日2004年11月9日
發明者楊慶雄, 金和鍇, 楊崇仁 申請人:雲南雲藥實驗室有限公司