用於局部遞送治療劑的藥物遞送系統以及其用途的製作方法

2024-04-15 04:58:05

1.本公開涉及用於局部遞送治療劑的藥物遞送系統和方法以及用於使用此類藥物遞送系統治療疾病的方法。
背景技術：
：：2.大多數治療劑通過口服/gi吸收或全身注射全身性地遞送到身體。這些遞送途徑方便並且適合於治療全身性疾病。然而，許多疾病是局部病症。儘管全身性地施用的治療劑可以有效治療這些病症，但這些治療劑也可以靶向可能導致副作用或不良反應的其它組織或結合位點。為了減少全身副作用，局部施用的藥物遞送系統是期望的。將治療劑遞送到期望的位點不像口服或通過注射服用藥物那樣容易。因此，一種長期、持續釋放的用於局部遞送藥物的藥物遞送系統是醫生和患者接受此類產品的必要條件。此外，在向受試者施用藥物後，治療劑在遞送位點處維持有效濃度的釋放曲線可能顯著影響治療劑的有效性。因此，治療劑在身體內特定靶組織或位點處的藥物遞送代表了製藥行業中的長期挑戰。3.已經開發了許多藥物遞送系統以提供具有組織特異性或所期望釋放曲線的受控藥物遞送。最常見的局部藥物遞送系統是使用可生物降解聚合物來控制治療劑的釋放速率。這些藥物遞送系統通過生物聚合物侵蝕和藥物分子擴散兩者釋放藥物。這種複雜的釋放控制給藥物產品製造和質量控制帶來了巨大挑戰。因此，仍然需要開發在治療劑釋放受控並且副作用減少的情況下可以將治療劑局部遞送到特定組織的藥物遞送系統。4.成功的局部藥物遞送系統有三個關鍵特性：在遞送位點處維持遞送系統的能力；以期望速率和曲線釋放治療劑的能力；以及使用治療劑治療局部病症的能力。本公開提供了一種不同的方法來實現用於局部藥物遞送系統的這些關鍵特性。即，生物聚合物，由於其大分子尺寸而將藥物遞送系統保持在遞送位點處；治療劑，其從上市產品中選擇，或其活性已被後期臨床研究證明；以及與所述生物聚合物和所述治療劑共價結合的連接子，其在化學上不穩定並且在降解時以期望速率向特定遞送位點和特定疾病釋放治療劑。技術實現要素：5.一方面，本公開提供了一種用於以受控速率局部遞送治療劑的藥物遞送系統，所述藥物遞送系統包括：6.生物聚合物，所述生物聚合物至少包括第一結合基團bg1，所述第一結合基團bg1選自由以下組成的組：羥基、羧基、氨基以及其組合；7.治療劑，所述治療劑至少包括第二結合基團bg2，所述第二結合基團bg2選自由以下組成的組：羥基、羧基、氨基、醯胺基、胺基以及其組合；以及8.連接子，所述連接子將所述生物聚合物與所述治療劑共價連接並且能夠將所述治療劑保留在施用位置；9.其中所述連接子包括式(i)的結構：[0010][0011]其中[0012]u通過bg1與所述生物聚合物連接，使得選自酯或醯胺的至少一個鍵被形成，並且u選自由以下組成的組：直接鍵、-n(r1)-、-o-、-c(＝o)-和其中是含氮雜環基，所述含氮雜環基任選地包括選自n、o或s的一個或多個另外的雜原子；[0013]a選自直接鍵、烷基和-(ch2ch2o)m-，其中所述烷基任選地被一個或多個ra基團取代；[0014]b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-o-環烷基、-o-雜環基、-o-芳基、-o-雜芳基，其中烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每一個任選地被一個或多個rb基團取代；[0015]c選自直接鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)n(r2)-、-n(r2)c(＝o)-、-[ch2nhc(＝o)]n-、-[nhc(＝o)ch2]n-和-nh(ch2)pc(＝o)-；[0016]d選自直接鍵、烷基和芳基，其中所述烷基任選地被一個或多個rc基團取代；[0017]v通過bg2與所述治療劑連接，使得選自由以下組成的組的至少一個鍵被形成：醯胺、脲、硫脲、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氨基磷酸酯、氮雜-縮醛以及其組合，並且v選自由以下組成的組：直接鍵、-c(＝o)-、-n(r2)c(＝o)-、-n(r2)c(s)-、-oc(＝o)-、-oc(＝s)-、-oc(＝o)och2-、-c(＝o)och2-、-n(r2)c(＝o)och2-、-op(＝o)(oph)-和-n(r2)p(＝o)(oph)-；[0018]r1和r2獨立地選自氫、烷基、烯基和炔基；[0019]ra、rb和rc獨立地選自滷素、羥基、氨基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、-c(＝o)ore和＝nh；[0020]m為0至4的整數；[0021]n為1至4的整數；並且[0022]p為1至4的整數。[0023]在一些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統中的所述連接子包括式(ia)至(im)的結構：[0024][0025][0026]其中，[0027]u和v如權利要求1中所定義；[0028]m選自由以下組成的組：環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中每一個任選地被一個或多個rb基團取代；並且[0029]q、r、s、t、u和v獨立地是0至4的整數。[0030]在一些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統中的生物聚合物選自由以下組成的組：透明質酸、殼聚糖、甲殼素、軟骨素或其衍生物。[0031]在一些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統中的治療劑選自由以下組成的組：抗炎藥、janus激酶(jak)抑制劑、血管內皮生長因子(vegf)抑制劑、抗癌藥物和可能具有嚴重全身毒性的任何藥物。[0032]另一方面，本公開提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本文所提供的藥物遞送系統以及藥學上可接受的賦形劑。[0033]另一方面，本公開提供了一種治療有需要的受試者的病症的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的藥物遞送系統或藥物組合物。具體實施方式[0034]現在將詳細參考本公開的某些實施方式，在所附結構和式中展示了所述實施方式的實例。雖然將結合所列舉的實施方式描述本公開，但應理解，所述實施方式不旨在將本公開限於那些實施方式。相反，本公開旨在涵蓋所有替代方案、修改和等效物，所述替代方案、修改和等效物可以包括在如權利要求書所定義的本公開的範圍內。本領域技術人員將認識到可以在實踐本公開時使用的與本文所描述的方法和材料類似或等效的許多方法和材料。本公開決不限於所描述的方法和材料。在所併入的參考文獻和類似材料中的一個或多個(包括但不限於所定義的術語、術語用法、所描述的技術等)與本技術不同或相矛盾的情況下，以本公開為準。本公開中所引用的所有參考文獻、專利、專利申請均據此通過引用全文併入。[0035]應理解，為清楚起見而在單獨實施方式的上下文中描述的本公開的某些特徵也可以在單個實施方式中組合提供。相反，為簡潔起見而在單個實施方式的上下文中描述的本公開的各種特徵也可以單獨提供或以任何合適的子組合提供。必須指出，除非上下文另外明確指示，否則如在說明書和所附權利要求書中所使用的，單數形式「一種(a或an)」和「所述(the)」包括其複數形式。[0036]定義[0037]下文更詳細地描述了具體官能團和化學術語的定義。出於本公開的目的，化學元素是根據元素周期表(periodictableoftheelements),cas版,《物理和化學手冊(handbookofchemistryandphysics)》,第75版,內封面來標識的，並且具體的官能團總體上是如本文所描述那樣定義的。另外，有機化學的一般原理以及特定的功能部分和反應性描述於以下文獻中：《有機化學(organicchemistr)》,thomassorrell,第2版,索薩利託科學書籍出版社(universitysciencebooks,sausalito),2006；smith和march,《三月先進有機化學(march'sadvancedorganicchemistry)》,第6版,紐約的約翰威利父子出版公司(johnwileysons,inc.,newyork),2007；larock,《複雜有機轉換(comprehensiveorganictransformations)》,第3版,紐約vch出版社有限公司(vchpublishers,inc.,newyork),2018；carruthers,《一些現代有機合成方法(somemodernmethodsoforganicsynthesis)》,第4版,劍橋的劍橋大學出版社(cambridgeuniversitypress,cambridge),2004；上述文獻中的每個文獻的全部內容通過引用併入本文。[0038]在本公開的各處，描述了連接取代基。尤其希望的是，每個連接取代基都包括連接取代基的正向形式和反向形式兩者。例如，-nr(cr'r」)-包括-nr(cr'r」)-和-(cr'r」)nr-兩者。在結構明確需要連接基團的情況下，針對所述基團所列的馬庫什變量(markushvariable)被理解為連接基團。例如，如果結構需要連接基團且所述變量的馬庫什組定義列出「烷基」，則應理解「烷基」表示連接亞烷基。[0039]在顯示與取代基連接的鍵與連接環中兩個原子的鍵交叉時，此類取代基可以與環中的任何原子鍵合。在列出取代基，但未指定此類取代基通過哪個原子與給定式的化合物的剩餘部分鍵合時，此取代基可以通過此式中的任何原子鍵合。取代基和/或變量的組合是允許的，但僅在此類組合產生穩定化合物時才允許。[0040]在任何變量(例如，ri)在化合物的任何成分或式中出現多於一次時，其在每次出現時的定義獨立於其在其它每次出現時的定義。因此，例如，如果顯示基團被0至2個ri部分取代，則所述基團可以任選地被至多兩個ri部分取代，並且ri在每次出現時各自獨立地選自ri的定義。而且，取代基和/或變量的組合是允許的，但僅在此類組合產生穩定化合物時才允許。[0041]如本文所使用的，術語「ci-j」指示碳原子數量的範圍，其中i和j是整數，並且碳原子數量的範圍包括端點(即，i和j)和其間的每個整數點，並且其中j大於i。例如，c1-6指示一至六個碳原子的範圍，包括一個碳原子、兩個碳原子、三個碳原子、四個碳原子、五個碳原子和六個碳原子。在一些實施方式中，術語「c1-12」指示1至12個碳原子，尤其是1至10個碳原子，尤其是1至8個碳原子，尤其是1至6個碳原子，尤其是1至5個碳原子，尤其是1至4個碳原子，尤其是1至3個碳原子或尤其是1至2個碳原子。[0042]如本文所使用的，術語「烷基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指可以任選地獨立地被一個或多個下文所描述的取代基取代的飽和直鏈或支鏈烴基。術語「ci-j烷基」是指具有i至j個碳原子的烷基。在一些實施方式中，烷基含有1至10個碳原子。在一些實施方式中，烷基含有1至9個碳原子。在一些實施方式中，烷基含有1至8個碳原子、1至7個碳原子、1至6個碳原子、1至5個碳原子、1至4個碳原子、1至3個碳原子或1至2個碳原子。「c1-10烷基」的實例包括但不限於甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。「c1-6烷基」的實例為甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3-二甲基-2-丁基等。[0043]如本文所使用的，術語「烯基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指可以任選地獨立地被一個或多個本文所描述的取代基取代的具有至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈烴基並且包括具有「順式」取向和「反式」取向或可替代地「e」取向和「z」取向的基團。在一些實施方式中，烯基含有2至12個碳原子。在一些實施方式中，烯基含有2至11個碳原子。在一些實施方式中，烯基含有2至11個碳原子、2至10個碳原子、2至9個碳原子、2至8個碳原子、2至7個碳原子、2至6個碳原子、2至5個碳原子、2至4個碳原子、2至3個碳原子，並且在一些實施方式中，烯基含有2個碳原子。烯基的實例包括但不限於乙烯基(ethylenyl或vinyl)、丙烯基(烯丙基)、丁烯基、戊烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、5-己烯基等。[0044]如本文所使用的，術語「炔基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指可以任選地獨立地被一個或多個本文所描述的取代基取代的具有至少一個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈烴基。在一些實施方式中，烯基含有2至12個碳原子。在一些實施方式中，炔基含有2至11個碳原子。在一些實施方式中，炔基含有2至11個碳原子、2至10個碳原子、2至9個碳原子、2至8個碳原子、2至7個碳原子、2至6個碳原子、2至5個碳原子、2至4個碳原子、2至3個碳原子，並且在一些實施方式中，炔基含有2個碳原子。炔基的實例包括但不限於乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基等。[0045]如本文所使用的，術語「烷氧基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指如先前所定義的通過氧原子與母體分子連接的烷基。術語「ci-j烷氧基」意味著烷氧基的烷基部分具有i至j個碳原子。在一些實施方式中，烷氧基含有1至10個碳原子。在一些實施方式中，烷氧基含有1至9個碳原子。在一些實施方式中，烷氧基含有1至8個碳原子、1至7個碳原子、1至6個碳原子、1至5個碳原子、1至4個碳原子、1至3個碳原子或1至2個碳原子。「c1-6烷氧基」的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和異丙氧基)、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。[0046]如本文所使用的，術語「醯胺」是指-c(＝o)nr'-，其中r'表示氫、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團。[0047]如本文所使用的，術語「胺」是指氨的衍生物，其中一個或多個氫原子被取代基替換，並且可以由n(h)n(r')3-n表示，其中n為0、1或2，並且每個r'獨立地為羥基、硝基、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團，或者兩個r'與其所連接的氮原子一起形成任選地經取代的雜環基或雜芳基。[0048]如本文所使用的，術語「氨基」是指-nh2。[0049]如本文所使用的，術語「芳基」，不論作為另一術語的一部分還是獨立地使用，是指具有總共5至20個環成員的單環和多環體系，其中體系中的至少一個環是芳香族的，並且其中體系中的每個環含有3至12個環成員。「芳基」的實例包括但不限於可以帶有一個或多個取代基的苯基、聯苯基、萘基、蒽基等。如本文所使用的，術語「芳基」的範圍還包括芳環與一個或多個另外的環稠合的基團。在多環體系的情況下，僅需要一個環是芳香族的(例如，2,3-二氫吲哚)，但所有環都可以是芳香族的(例如，喹啉)。第二環也可以是稠合的或橋連的。多環芳基的實例包括但不限於苯並呋喃基、茚滿基、鄰苯二甲醯亞胺基、萘二甲醯亞胺基、菲啶基或四氫萘基等。芳基可以在一個或多個環位置處被如上文所描述的取代基取代。[0050]如本文所使用的，術語「氮雜-縮醛」是指-n-ch2-o-。[0051]如本文所使用的，術語「羧基(carboxylicgroup)或羧基(carboxyl)」是指-cooh。[0052]如本文所使用的，術語「環烷基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指單價非芳香族飽和或部分不飽和單環和多環體系，其中所有環原子均為碳，並且所述體系含有至少三個成環碳原子。在一些實施方式中，環烷基可以含有3至12個成環碳原子、3至10個成環碳原子、3至9個成環碳原子、3至8個成環碳原子、3至7個成環碳原子、3至6個成環碳原子、3至5個成環碳原子、4至12個成環碳原子、4至10個成環碳原子、4至9個成環碳原子、4至8個成環碳原子、4至7個成環碳原子、4至6個成環碳原子、4至5個成環碳原子。環烷基可以為飽和的或部分不飽和的。環烷基可以為經取代的。在一些實施方式中，環烷基可以為飽和環狀烷基。在一些實施方式中，環烷基可以為在其環體系中含有至少一個雙鍵或三鍵的部分不飽和環狀烷基。在一些實施方式中，環烷基可以為單環的或多環的。單環環烷基的實例包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基和環十二烷基。多環環烷基的實例包括但不限於金剛烷基、降冰片烷基、芴基、螺-戊二烯基、螺[3.6]-癸烷基、雙環[1,1,1]戊烯基、雙環[2,2,1]庚烯基等。[0053]如本文所使用的，術語「氰基」是指-cn。[0054]如本文所使用的，術語「酯」是指-c(＝o)o-。[0055]如本文所使用的，術語「氨基甲酸酯」是指-nr'(c＝o)o-，其中r'表示氫、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團。[0056]如本文所使用的，術語「硫代氨基甲酸酯」是指-nr'(c＝s)o-，其中r'表示氫、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團。[0057]如本文所使用的，術語「滷素」是指選自氟(fluorine或fluoro)、氯(chlorine或chloro)、溴(bromine或bromo)和碘(iodine或iodo)的原子。[0058]如本文所使用的，術語「雜原子」是指氮、氧或硫，並且包括氮或硫的任何氧化形式以及鹼性氮(包括n-氧化物)的任何季銨化形式。[0059]如本文所使用的，術語「雜芳基」，不論作為另一個術語的一部分還是獨立地使用，是指除碳原子之外還具有一個或多個雜原子的芳基。雜芳基可以為單環的。單環雜芳基的實例包括但不限於噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基、苯並呋喃基和蝶啶基。雜芳基還包括雜芳環與一個或多個芳基、脂環族或雜環基環稠合的多環基團，其中連接基團或連接點位於雜芳環上。多環雜芳基的實例包括但不限於吲哚基、異吲哚基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、苯並[1,3]二氧雜環戊烯基、二苯並呋喃基、吲唑基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、喹啉基、異喹啉基、二氫喹啉基、二氫異喹啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4h-喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩惡嗪基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基等。[0060]如本文所使用的，術語「雜環基」是指飽和或部分不飽和碳環基，其中一個或多個環原子為各自獨立地選自氧、硫、氮、磷等的雜原子，剩餘環原子為碳，其中一個或多個環原子可以任選地獨立地被一個或多個取代基取代。在一些實施方式中，雜環基為飽和雜環基。在一些實施方式中，雜環基為在其環體系中具有一個或多個雙鍵的部分不飽和雜環基。在一些實施方式中，雜環基可以含有碳、氮或硫的任何氧化形式以及鹼性氮的任何季銨化形式。「雜環基」還包括雜環基與飽和、部分不飽和或完全不飽和(即，芳香族)碳環或雜環稠合的基團。在可能的情況下，雜環基可以為碳連接的或氮連接的。在一些實施方式中，雜環為碳連接的。在一些實施方式中，雜環為氮連接的。例如，衍生自吡咯的基團可以為吡咯-1-基(氮連接的)或吡咯-3-基(碳連接的)。此外，衍生自咪唑的基團可以為咪唑-1-基(氮連接的)或咪唑-3-基(碳連接的)。[0061]在一些實施方式中，術語「3元至12元雜環基」是指具有1至3個各自獨立地選自氮、氧或硫的雜原子的3元至12元飽和或部分不飽和單環或多環雜環體系。稠合、螺和橋連環體系也包括在本定義的範圍內。單環雜環基的實例包括但不限於氧雜環丁烷基、1,1-二氧代硫雜環丁烷基吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、哌啶基、哌嗪基、哌啶基、嗎啉基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、三嗪基、吡啶酮基、嘧啶酮基、吡嗪酮基、嘧啶酮基、噠嗪酮基、吡咯烷基、三嗪酮基等。稠合雜環基的實例包括但不限於苯基稠環或吡啶基稠環，如喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、喹喔啉基、喹嗪基、喹唑啉基、氮雜吲哚嗪基、蝶啶基、色烯基、異色烯基、吲哚基、異吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、嘌呤基、苯並呋喃基、異苯並呋喃基、苯並咪唑基、苯並噻吩基、苯並噻唑基、咔唑基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡啶基、咪唑並[1,2-a]吡啶基、[1,2,4]三唑並[4,3-a]吡啶基、[1,2,3]三唑並[4,3-a]吡啶基等。螺雜環基的實例包括但不限於螺吡喃基、螺惡嗪基等。橋連雜環基的實例包括但不限於嗎啡烷基、六亞甲基四胺基、3-氮雜-雙環[3.1.0]己烷、8-氮雜-雙環[3.2.1]辛烷、1-氮雜-雙環[2.2.2]辛烷、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(dabco)等。[0062]如本文所使用的，術語「羥基」是指-oh。[0063]如本文所使用的，術語「硝基」是指-no2。[0064]如本文所使用的，術語「脲」是指-nr'(c＝o)nr」‑，其中r'和r」各自獨立地表示氫、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團。[0065]如本文所使用的，術語「硫脲」是指-nr'h(c＝s)nr」‑，其中r'和r」各自獨立地表示氫、n-保護基團、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團。[0066]如本文所使用的，術語「氨基磷酸酯」是指-(nr')p(＝o)(or')a(nr」)b-，其中r'和r」獨立地為空、氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基和其它合適的有機基團，a和b獨立地為0、1或2。[0067]如本文所使用的，術語「結合基團」或「bg」是指第一實體(例如，本文所提供的生物聚合物、治療劑)內處於特定位置的基團，所述基團能夠與來自第二實體(例如，本文所提供的連接子)的另一基團反應以形成鍵，由此將兩個實體連接在一起以形成一個實體。例如，一個實體中包括的羧基可以與另一個實體中包括的氨基反應以形成將所述兩個實體連接在一起的醯胺鍵，其中所述羧基和所述氨基可以被視為結合基團。[0068]如本文所使用的，術語「鍵」或「連接子」是指由至少兩個待連接的實體的官能團之間的化學反應形成的鍵或化學部分，由此形成一個分子或維持實體足夠緊鄰地締合。連接子可以被整合到所得到的連接分子或結構中而具有或不具有其反應的官能團。此類鍵可以是共價或非共價的。水解不穩定或可降解鍵意指所述鍵能夠在水或水溶液(包括例如體液，如血液)中降解。酶促不穩定或可降解鍵意指所述鍵可以由一種或多種酶降解。此類可降解鍵包括但不限於由一個實體中的羧酸與生物活性劑上的醇基形成的酯鍵，其中此類酯基一般在生理條件下水解以釋放生物活性劑。其它可水解降解鍵包括但不限於碳酸酯鍵、由胺與醛反應產生的亞胺鍵、由磷酸基與醇反應產生的磷酸酯鍵、由醯肼與醛反應產生的腙鍵、由醛與醇反應產生的縮醛鍵、由胺基與羧基反應產生的醯胺鍵。[0069]如本文所使用的，術語「部分不飽和的」是指包括至少一個雙鍵或三鍵的基團。術語「部分不飽和的」旨在涵蓋具有多個不飽和位點的環，但並不旨在包括芳香族(即，完全不飽和的)部分。[0070]如本文所使用的，術語「藥學上可接受的」表明物質或組合物在化學和/或毒理學上與構成調配物的其它成分和/或被治療的受試者相容。[0071]如本文所使用的，術語「取代的」，無論前面是否有術語「任選地」，都意味著指定部分的一個或多個氫被合適的取代基替代。應當理解，「取代」或「被...取代」包括隱含前提條件，即此類取代與被取代原子的允許化合價一致，並且取代產生穩定的或化學上可行的化合物，例如，不會自發地經歷如重排、環化、消除等轉化的化合物。除非另有說明，否則「任選地取代的」基團可以在基團的每個可取代位置處具有適當的取代基，並且在任何給定結構中的多於一個位置可以被多於一個選自指定組的取代基取代時，在每個位置處，取代基可以相同或不同。本領域技術人員應理解，如果合適的話，取代基本身可以被取代。除非特別陳述為「未取代」，否則對本文中的化學部分的提及應理解為包括取代的變體。例如，對「芳基」基團或部分的提及隱含地包括取代的變體和未取代的變體兩者。[0072]如本文所使用的，術語「治療劑」、「藥物」、「生物活性分子」、「生物活性劑」、「活性劑」等是指可能影響生物有機體(包括但不限於病毒、細菌、真菌、植物、動物和人)的任何物理或生物化學特性的任何物質。特別地，如本文所使用的，治療劑包括旨在用於診斷、治癒、緩和、治療或預防人類或其它動物的疾病或以其它方式增強人類或動物的身體或精神健康的任何物質。[0073]將治療劑通過藥物遞送到身體內的特定組織或位點存在各種挑戰，特別是在期望將高劑量的具有差水溶性的治療劑局部遞送到特定組織的情況下以及期望避免治療劑的高全身性濃度導致毒副作用的情況下。[0074]因此，一方面，本公開提供了一種能夠以受控速率局部遞送治療劑的藥物遞送系統。在一些實施方式中，所述藥物遞送系統包括生物聚合物、治療劑和連接子，所述連接子將所述生物聚合物與所述治療劑共價連接並且能夠將所述治療劑保留在施用位置。[0075]生物聚合物[0076]生物聚合物是由生物體產生的天然聚合物，並且含有共價鍵合以形成較大結構的單體單元。根據所使用的單體單元和所形成的生物聚合物的結構，生物聚合物分為三個主要類別：多核苷酸、多肽和多糖。更具體地，多核苷酸(如rna和dna)是由13個或更多個核苷酸單體構成的長聚合物。多肽或蛋白質是胺基酸的短聚合物，並且一些主要的實例包括膠原蛋白、肌動蛋白和纖維蛋白。多糖通常是線性鍵合的聚合碳水化合物結構，並且一些實例包括纖維素和藻酸鹽。生物聚合物的其它實例包括橡膠、軟木脂、黑色素和木質素。[0077]多種生物聚合物可用作聚合物遞送媒劑以將治療劑遞送到靶細胞或組織。適於特定應用的生物聚合物是基於其靶向特定組織、器官或細胞的能力以及其體內穩定性，即，在循環系統或特定組織、細胞或器官中的體內停留時間來選擇的。[0078]在一些實施方式中，所述生物聚合物選自至少包括第一結合基團bg1的生物相容性聚合物，所述第一結合基團能夠與來自第二實體(例如，本文所提供的連接子)的反應性官能團反應以形成鍵，由此將生物聚合物與第二實體(例如，連接子)連接。如本文所使用的，術語「生物相容性」是指對生物學功能沒有醫學上不可接受的毒性或傷害作用或身體可耐受的物質。[0079]在一些實施方式中，所述生物聚合物選自至少包括第一結合基團bg1的生物相容性聚合物，其中bg1選自由以下組成的組：羥基、羧基、氨基以及其組合。bg1用作綴合適合於將治療劑與生物聚合物連接的連接子的結合位點。bg1可以存在於生物聚合物的主鏈內的任何位點處，並且因此在生物聚合物與連接子之間形成的鍵可以存在於生物聚合物的任何部分處。[0080]在一些實施方式中，用於與來自連接子的反應性官能團反應的bg1可以相同或不同。在某些實施方式中，生物聚合物的bg1是相同的。在某些實施方式中，生物聚合物的bg1是不同的。[0081]在一些實施方式中，生物聚合物是生物相容性聚合物，所述生物相容性聚合物包括作為bg1的羧基，所述bg1能夠與合適的連接子的反應性官能團反應以形成將含羧基的生物聚合物與連接子連接的鍵。[0082]在某些實施方式中，連接子的反應性官能團是氨基或胺，所述氨基或胺與生物聚合物的羧基反應，使得醯胺鍵被形成。[0083]在某些實施方式中，連接子的反應性官能團是羥基，所述羥基與生物聚合物的羧基反應，使得酯鍵被形成。[0084]在某些實施方式中，連接子的反應性官能團是滷素，所述滷素與生物聚合物的羧基反應，使得酯鍵被形成。[0085]在一些實施方式中，生物聚合物是生物相容性聚合物，所述生物相容性聚合物包括作為bg1的氨基，所述bg1能夠與合適的連接子的反應性官能團反應以形成鍵，由此產生生物聚合物-連接子綴合物。[0086]在某些實施方式中，連接子的反應性官能團是羧基，所述羧基與生物聚合物的羥基反應，使得酯鍵被形成。[0087]在一些實施方式中，由生物聚合物的bg1與連接子的反應性官能團之間的反應形成的鍵選自由以下組成的組：-c(o)n(r1)-、和-c(o)o-，其中r1選自由以下組成的組：氫、烷基、烯基和炔基，是任選地包括選自n、o或s的一個或多個另外的雜原子的含氮雜環基。[0088]在某些實施方式中，r1是氫。[0089]在某些實施方式中，選自由以下組成的組：[0090][0091]在一些實施方式中，生物聚合物可以選自由以下組成的組：透明質酸(ha)、葡聚糖、纖維素、直鏈澱粉、殼聚糖、甲殼素、軟骨素、明膠、藻酸鹽、角叉菜膠、結冷膠、瓜爾豆膠、果膠、硬葡聚糖和黃原膠。[0092]在一些實施方式中，生物聚合物的數均分子量可以在400至3,000,000da的範圍內，例如，1,000至3,000,000da、5,000至3,000,000da、10,000至3,000,000da、20,000至3,000,000da、30,000至3,000,000da、40,000至3,000,000da、50,000至3,000,000da或50,000至2,000,000da。[0093]在一些實施方式中，生物聚合物選自由以下組成的組：ha、殼聚糖、甲殼素、軟骨素或其衍生物。[0094]在某些實施方式中，生物聚合物為ha。在某些實施方式中，ha可以衍生自任何來源。[0095]在某些實施方式中，ha的數均分子量可以在400至3,000,000da的範圍內，例如，1,000至3,000,000da、5,000至3,000,000da、10,000至3,000,000da、20,000至3,000,000da、30,000至3,000,000da、40,000至3,000,000da、50,000至3,000,000da或50,000至2,000,000da。[0096]治療劑[0097]本公開提供了用於局部遞送各種治療劑的經改進的遞送系統。[0098]在一些實施方式中，治療劑至少包括第二結合基團bg2，所述第二結合基團bg2能夠與來自第二實體(例如，本文所提供的連接子)的反應性官能團和任選的共反應物反應以形成鍵，由此將治療劑與第二實體(例如，連接子)連接。[0099]在一些實施方式中，治療劑至少包括第二結合基團bg2，所述第二結合基團bg2選自由以下組成的組：羥基、羧基、氨基、醯胺基、胺基以及其組合。bg2用作綴合適合於將治療劑與生物聚合物連接的連接子的結合位點。[0100]在一些實施方式中，治療劑包括作為bg2的胺基，所述bg2能夠與合適的連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應以形成將含胺的治療劑與連接子連接的鍵。[0101]在某些實施方式中，治療劑中的胺基與連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應，使得治療劑通過直接鍵、醯胺鍵、脲鍵、硫脲鍵、氨基甲酸酯鍵、硫代氨基甲酸酯鍵、氮雜-縮醛鍵、氨基磷酸酯鍵等與連接子連接。[0102]在某些實施方式中，由涉及治療劑的bg2和連接子的反應性官能團以及任選的共反應物的反應形成的鍵選自由以下組成的組：-n(r')2-、-c(＝o)n(r')-、-c(＝o)n(r')2-、-n(r2)c(＝o)n(r')2-、-n(r2)c(＝s)n(r')2-、-oc(＝o)n(r')2-、-oc(＝s)n(r')2-、-oc(＝o)och2n(r')2-、-n(r2)c(＝o)och2n(r')2-、-op(＝o)(oph)n(r')2-和-n(r2)p(＝o)(oph)n(r')2-，其中r2選自由以下組成的組：氫、烷基、烯基和炔基，並且r'獨立地選自由以下組成的組：氫、烷基、烯基和炔基，或者兩個r'與其均連接的氮原子一起形成雜環基。[0103]在某些實施方式中，r2是氫。[0104]在一些實施方式中，治療劑包括作為bg2的羧基，所述bg2能夠與合適的連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應以形成將含羧基的治療劑與連接子連接的鍵。[0105]在某些實施方式中，治療劑中的羧基與連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應，使得治療劑通過酯鍵與連接子連接。[0106]在一些實施方式中，治療劑包括作為bg2的羥基，所述bg2能夠與合適的連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應以形成將含羥基的治療劑與連接子連接的鍵。[0107]在某些實施方式中，治療劑中的羥基與連接子的反應性官能團和任選的共反應物反應，使得治療劑通過酯鍵與連接子連接。[0108]在一些實施方式中，待遞送的治療劑選自由以下組成的組：非甾體類抗炎藥(nsaid)、janus激酶(jak)抑制劑、血管內皮生長因子(vegf)抑制劑、抗癌藥物和任何可能具有嚴重全身毒性的藥物。[0109]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是nsaid，所述nsaid選自由以下組成的組：吡羅昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)和雙氯芬酸(diclofenac)。[0110]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是jak抑制劑，所述jak抑制劑選自由以下組成的組：託法替尼(tofacitinib)、魯索替尼(ruxolitinib)、巴瑞克替尼(baricitinib)、培非替尼(peficitinib)、菲卓替尼(fedratinib)、奧拉替尼(oclacitinib)和烏帕替尼(upadacitinib)。[0111]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是vegf抑制劑，所述vegf抑制劑選自由以下組成的組：阿昔替尼(axitinib)、拉帕替尼(lapatinib)、樂伐替尼(lenvatinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、尼替達尼(nintedanib)、舒尼替尼(sunitinib)和凡德他尼(vandetanib)。[0112]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是託法替尼。[0113]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是烏帕替尼。[0114]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是魯索替尼。[0115]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是巴瑞克替尼。[0116]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是奧拉替尼。[0117]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是尼替達尼。[0118]在一些實施方式中，待遞送的治療劑是舒尼替尼。[0119]連接子[0120]通過合適的連接子將治療劑與生物聚合物連接來實現治療劑的經改進的局部遞送。通過選擇合適的連接子，可以控制治療劑從生物聚合物釋放的速率，由此提供治療劑向靶細胞或組織的經改進的遞送。[0121]在一些實施方式中，多個連接子可以通過在生物條件下被裂解的可裂解鍵與治療劑連接，由此釋放治療劑。[0122]「可裂解鍵」是在生理條件下裂解的相對不穩定鍵。示例性可釋放鍵為在與水反應時裂解(即，水解)的可水解鍵。鍵在水中水解的趨勢可能不僅取決於連接兩個原子的一般類型的鍵，還取決於與這些原子連接的取代基。適當的水解不穩定或弱鍵包括但不限於羧酸酯、磷酸酯、酸酐、縮醛、縮酮、醯氧基烷基醚、亞胺、原酸酯、肽、寡核苷酸、硫酯、脲、硫脲、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氨基磷酸酯和碳酸鹽。某些官能團具有可以通過除水解外的工藝化學地降解的原子。這類示例性可釋放鍵包括某些氨基甲酸酯和fmoc衍生物。含有這些類別的適當鍵合的官能團的某些分子可以在鹼作用後經歷化學降解(釋放)。在此類情況下，「裂解」可以在較高ph值下發生或通過含有鹼性部分的生物分子(例如，組氨酸)的作用發生。另一示例性可裂解鍵為可酶促裂解鍵。「可酶促裂解鍵」意指經受由一種或多種酶裂解的鍵。[0123]在一些實施方式中，連接子通過由連接子的反應性官能團和生物聚合物中的bg1形成的鍵與生物聚合物連接，並且通過由連接子的另一反應性官能團和治療劑中的bg2形成的鍵與治療劑連接。[0124]在一些實施方式中，所述連接子包括式(i)的結構：[0125][0126]其中[0127]u通過所述生物聚合物的bg1與所述生物聚合物連接，使得選自酯或醯胺的至少一個鍵被形成，並且u選自由以下組成的組：直接鍵、n(r1)-、-o-、-c(＝o)-和其中是含氮雜環基，所述含氮雜環基任選地包括選自n、o或s的一個或多個另外的雜原子；[0128]a選自直接鍵、烷基和-(ch2ch2o)m-，其中所述烷基任選地被一個或多個ra基團取代；[0129]b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-o-環烷基、-o-雜環基、-o-芳基、-o-雜芳基，其中烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的每一個任選地被一個或多個rb基團取代；[0130]c選自直接鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)n(r2)-、-n(r2)c(＝o)-、-[ch2nhc(＝o)]n-、-[nhc(＝o)ch2]n-和-nh(ch2)pc(＝o)-；[0131]d選自直接鍵、烷基和芳基，其中所述烷基任選地被一個或多個rc基團取代；[0132]v通過所述治療劑中的bg2與所述治療劑連接，使得至少一個鍵被形成，所述至少一個鍵選自由以下組成的組：醯胺、脲、硫脲、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、氨基磷酸酯、氮雜-縮醛以及其組合，並且v選自由以下組成的組：直接鍵、-c(＝o)-、-n(r2)c(＝o)-、-n(r2)c(s)-、-oc(＝o)-、-oc(＝s)-、-oc(＝o)och2-、-c(＝o)och2-、-n(r2)c(＝o)och2-、-op(＝o)(oph)-和-n(r2)p(＝o)(oph)-；[0133]r1和r2獨立地選自由以下組成的組：氫、烷基、烯基和炔基；[0134]ra、rb和rc獨立地選自滷素、羥基、氨基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、-c(＝o)ore和＝nh；[0135]re是烷基；[0136]m為0至4的整數；[0137]n為1至4的整數；並且[0138]p為1至4的整數。[0139]在一些實施方式中，bg1是羧基並且u是-n(r1)-，使得醯胺鍵被形成以將所述生物聚合物與所述連接子連接。[0140]在一些實施方式中，bg1是羧基並且u是使得醯胺鍵被形成以將所述生物聚合物與所述連接子連接。[0141]在某些實施方式中，bg1是羧基並且u是選自由以下組成的組的[0142][0143]在一些實施方式中，bg1是羥基並且u是-c(＝o)-，使得酯鍵被形成以將所述生物聚合物與所述連接子連接。[0144]在一些實施方式中，bg1是羧基並且u是-o-或直接鍵，使得酯鍵被形成以將所述生物聚合物與所述連接子連接。[0145]在一些實施方式中，bg1是氨基並且u是-c(＝o)-，使得醯胺鍵被形成以將生物聚合物與連接子連接。[0146]在一些實施方式中，bg2是胺基，並且v選自以下之一：[0147](a)直接鍵；[0148](b)-n(r2)c(＝o)-，所述-n(r2)c(＝o)-通過bg2與所述治療劑連接，使得脲鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0149](c)-n(r2)c(s)-，所述-n(r2)c(s)-通過bg2與所述治療劑連接，使得硫脲鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0150](d)-oc(＝o)-，所述-oc(＝o)-通過bg2與所述治療劑連接，使得氨基甲酸酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0151](e)-oc(＝s)-，所述-oc(＝s)-通過bg2與所述治療劑連接，使得硫代氨基甲酸酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0152](f)-oc(＝o)och2-，所述-oc(＝o)och2-通過bg2與所述治療劑連接，使得氮雜-縮醛鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0153](g)-c(＝o)och2-，所述-c(＝o)och2-通過bg2與所述治療劑連接，使得氮雜-縮醛鍵被形成；[0154](h)-n(r2)c(＝o)och2-，所述-n(r2)c(＝o)och2-通過bg2與所述治療劑連接，使得氮雜-縮醛鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0155](i)-op(＝o)(oph)-，所述-op(＝o)(oph)-通過bg2與所述治療劑連接，使得氨基磷酸酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；或[0156](j)-n(r2)p(＝o)(oph)-，所述-n(r2)p(＝o)(oph)-通過bg2與所述治療劑連接，使得氨基磷酸酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接；[0157](k)-c(＝o)-，所述-c(＝o)-通過bg2與所述治療劑連接，使得醯胺鍵被形成。[0158]在某些實施方式中，bg2是羧基並且v是-o-或直接鍵，使得酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接。[0159]在某些實施方式中，bg2是羥基並且v是-c(＝o)-，使得酯鍵被形成以將所述治療劑與所述連接子連接。[0160]在一些實施方式中，a是直接鍵。[0161]在一些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的烷基。在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-10烷基。在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基。[0162]在一些實施方式中，ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。在某些實施方式中，ra是-c(＝o)ore，其中re是c1-8烷基、c1-7烷基、c1-6烷基、c1-5烷基、c1-4烷基或c1-3烷基。在某些實施方式中，ra是-c(＝o)och3。[0163]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-。[0164]在某些實施方式中，m為0至4的整數。在某些實施方式中，m是1。在某些實施方式中，m是2。在某些實施方式中，m是3。在某些實施方式中，m是4。[0165]在一些實施方式中，b是直接鍵。[0166]在一些實施方式中，b是烷基。在某些實施方式中，b是c1-6烷基、c1-5烷基、c1-4烷基、c1-3烷基或c1-2烷基。在某些實施方式中，b是乙基。[0167]在一些實施方式中，b是環烷基、芳基或雜芳基。[0168]在一些實施方式中，b是環烷基。[0169]在某些實施方式中，b是飽和的環烷基。在某些實施方式中，b是部分不飽和的環烷基。[0170]在某些實施方式中，b是3至8元環烷基、3至7元環烷基、3至6元環烷基、3至5元環烷基或3至4元環烷基。[0171]在某些實施方式中，b是飽和的3至6元環烷基。在某些實施方式中，b是環己基。[0172]在一些實施方式中，b是芳基。在某些實施方式中，b是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。[0173]在某些實施方式中，b是苯基。[0174]在一些實施方式中，b是雜芳基。在某些實施方式中，b是5至12元雜芳基、5至10元雜芳基、5至8元雜芳基或5至6元雜芳基。[0175]在某些實施方式中，b是吡啶基。[0176]在一些實施方式中，b是-o-芳基。在某些實施方式中，b是-o-苯基。[0177]在一些實施方式中，a是直接鍵，並且b選自由以下組成的組：直接鍵、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基。[0178]在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b選自由以下組成的組：直接鍵、環烷基、芳基和雜芳基。[0179]在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是直接鍵。[0180]在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是3至8元環烷基、3至7元環烷基、3至6元環烷基、3至5元環烷基或3至4元環烷基。在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是環己基。[0181]在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是苯基。[0182]在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是5至12元雜芳基、5至10元雜芳基、5至8元雜芳基或5至6元雜芳基。在某些實施方式中，a是直接鍵，並且b是吡啶基。[0183]在一些實施方式中，a是任選地經取代的烷基，並且b選自由以下組成的組：直接鍵、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-o-環烷基、-o-雜環基、-o-芳基和-o-雜芳基。[0184]在某些實施方式中，a是任選地經取代的烷基，b選自由以下組成的組：直接鍵、芳基和-o-芳基。[0185]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，並且b是直接鍵，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0186]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，並且b是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，並且b是苯基。[0187]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，並且b是-o-芳基。在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，並且b是-o-苯基。[0188]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基。[0189]在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、芳基和雜芳基。[0190]在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是直接鍵。[0191]在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是c1-6烷基、c1-5烷基、c1-4烷基、c1-3烷基或c1-2烷基。在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是乙基。[0192]在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是苯基。[0193]在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是5至12元雜芳基、5至10元雜芳基、5至8元雜芳基或5至6元雜芳基。在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是0至4的整數，並且b是吡啶基。[0194]在一些實施方式中，c是直接鍵。[0195]在一些實施方式中，c是-c(＝o)-。[0196]在一些實施方式中，c是-c(＝o)n(r2)-。[0197]在一些實施方式中，c是-n(r2)c(＝o)-。[0198]在一些實施方式中，c是-[ch2nhc(＝o)]n-。[0199]在一些實施方式中，c是-[nhc(＝o)ch2]n-。[0200]在一些實施方式中，c是-nh(ch2)pc(＝o)-。[0201]在一些實施方式中，a是烷基，b選自由以下組成的組：直接鍵、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-o-環烷基、-o-雜環基、-o-芳基和-o-雜芳基，並且c選自由以下組成的組：直接鍵、-c(＝o)-、-n(r2)c(＝o)-、-[ch2nhc(＝o)]n-、-[nhc(＝o)ch2]n-和-nh(ch2)pc(＝o)-。[0202]在一些實施方式中，a是烷基，b選自由以下組成的組：直接鍵、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、-o-環烷基、-o-雜環基、-o-芳基和-o-雜芳基，並且c是直接鍵、-n(r2)c(＝o)-或-[nhc(＝o)ch2]n-。[0203]在某些實施方式中，a是烷基，b選自由以下組成的組：直接鍵、芳基和-o-芳基，並且c是直接鍵或-n(r2)c(＝o)-。[0204]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，b是直接鍵，並且c是直接鍵或-n(r2)c(＝o)，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0205]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，b是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基，並且c是直接鍵或-n(r2)c(＝o)-，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0206]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，b是苯基，並且c是直接鍵或-n(r2)c(＝o)-，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0207]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，b是-o-芳基，並且c是直接鍵，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0208]在某些實施方式中，a是任選地被一個或多個ra基團取代的c1-8烷基，b是-o-苯基，並且c是直接鍵，其中ra是-c(＝o)ore，其中re是烷基。[0209]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，並且c是直接鍵或-n(r2)c(＝o)-。[0210]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b選自由以下組成的組：直接鍵、烷基、芳基和雜芳基，並且c是直接鍵。[0211]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是直接鍵，並且c是直接鍵。[0212]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是c1-6烷基、c1-5烷基、c1-4烷基、c1-3烷基或c1-2烷基，並且c是直接鍵。[0213]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是芳基，並且c是直接鍵。在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是苯基，並且c是直接鍵。[0214]在一些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是雜芳基，並且c是直接鍵。在某些實施方式中，a是-(ch2ch2o)m-，其中m是1、2、3或4，b是吡啶基，並且c是直接鍵。[0215]在一些實施方式中，d是直接鍵。[0216]在一些實施方式中，d是烷基。在某些實施方式中，d是c1-6烷基、c1-5烷基、c1-4烷基、c1-3烷基或c1-2烷基。[0217]在一些實施方式中，d是芳基。在某些實施方式中，d是5至12元芳基、5至10元芳基、5至8元芳基或5至6元芳基。在某些實施方式中，d是苯基。[0218]在一些實施方式中，本文所提供的連接子包括式(ia)至(im)的結構：[0219][0220][0221]其中，[0222]u和v如上文中所定義；[0223]m選自由以下組成的組：環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中每一個任選地被一個或多個rb基團取代；[0224]中的每一個任選地被-c(＝o)och3取代；並且[0225]q、r、s、t、u和v獨立地是0至4的整數。[0226]在一些實施方式中，m選自由以下組成的組：環己基、苯基、吡啶基、噻唑基、金剛烷基和2,5-二氮雜-雙環[2.2.1]庚烷基。[0227]在一些實施方式中，本文所提供的連接子包括選自由以下組成的組的結構：[0228][0229][0230][0231]其中和中的每一個任選地被-c(＝o)och3取代。[0232]藥物遞送系統[0233]在本公開的一方面，治療劑通過連接子與生物聚合物連接，由此提供用於向靶位點局部遞送治療劑的藥物遞送系統。[0234]本文所提供的藥物遞送系統的生物聚合物可以具有一種或多種通過連接子綴合的治療劑。生物聚合物可以通過生物聚合物主鏈中的羥基、羧基和/或氨基處的一個或多個連接子與所述一種或多種治療劑綴合。[0235]本公開的藥物遞送系統是通過生物聚合物與治療劑之間的綴合藉助於連接子通過在生物聚合物與連接子之間形成鍵並且在治療劑與連接子之間形成鍵而獲得的。[0236]在一些實施方式中，連接子的反應性官能團可以首先與治療劑的bg2反應以在治療劑與連接子之間形成鍵，由此提供治療劑-連接子綴合物。在連接子的末端處含有另一反應性官能團的治療劑-連接子綴合物隨後可以與生物聚合物的bg1反應以在生物聚合物與連接子之間形成鍵，由此提供本公開的藥物遞送系統。[0237]在某些實施方式中，可以首先使生物聚合物的bg1與連接子的反應性官能團反應以形成生物聚合物-連接子綴合物，並且隨後使治療劑的bg2與生物聚合物-連接子綴合物中的連接子的另一官能團反應，由此提供本公開的藥物遞送系統。[0238]在一些實施方式中，為本文所提供的藥物遞送系統選擇的生物聚合物是ha，並且為本文所提供的藥物遞送系統選擇的治療劑是託法替尼。[0239]在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統選自由以下組成的組：[0240][0241][0242][0243][0244][0245][0246][0247][0248][0249][0250][0251][0252]在一些實施方式中，治療劑可以通過連接子與生物聚合物綴合，如通過nmr測量的，所述治療劑與生物聚合物的藥物取代率(dsr)為至少1％、至少2％、至少3％、至少5％、至少8％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％，其中與生物聚合物的藥物取代率(dsr)是指被藥物取代的生物聚合物上的基團的摩爾量與生物聚合物上的能夠被藥物取代的基團的總摩爾量的比率。[0253]通過裂解連接子與生物聚合物或治療劑之間的鍵，治療劑可以從本文所提供的藥物遞送系統中釋放。在一些實施方式中，治療劑的釋放在生物聚合物與連接子之間的鍵被裂解以釋放治療劑-連接子綴合物的情況下發生，所述治療劑-連接子綴合物可以被視為前藥。隨後從連接子中釋放治療劑可以涉及治療劑與連接子之間的鍵的酶促或非酶促裂解。在一些實施方式中，治療劑的釋放在治療劑與連接子之間的鍵在生物聚合物與連接子之間的鍵未裂解或在裂解所述鍵之前裂解的情況下發生。治療劑的釋放也可以涉及酶促或非酶促過程。[0254]治療劑的釋放可能受到多種因素的影響，例如，特定治療劑、連接子和生物聚合物的選擇、藥物遞送系統的施用。本公開考慮具有不同分子量、結合基團bg1的生物聚合物、與連接子的鍵；具有不同反應性官能團和亞基的連接子；以及具有不同結合基團bg2的治療劑、與連接子的鍵。[0255]本公開還考慮本文所提供的藥物遞送系統的不同局部施用。在一些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統局部地施用於有需要的受試者。在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統通過注射局部地施用於有需要的受試者。在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統通過口服劑型局部地施用於有需要的受試者。在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統通過吸入局部地施用於有需要的受試者。在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統通過植入物局部地施用於有需要的受試者。在某些實施方式中，本文所提供的藥物遞送系統通過局部應用局部地施用於有需要的受試者。根據特定的治療劑、連接子和生物聚合物組合，在施用於受試者時治療劑的釋放可能發生在不同位置。方式如，治療劑的釋放可能發生在施用位點處。[0256]在一些實施方式中，向受試者施用本文所提供的藥物遞送系統可以在至少幾天到至少幾個月的時間段內提供治療劑的釋放。[0257]從本文所提供的藥物遞送系統中釋放治療劑的特徵可以為每天從藥物遞送系統中釋放的治療劑的百分比。在一些實施方式中，治療劑的釋放率可以在以下範圍內變化：約0.01％至約20％/天、約0.01％至約15％/天、約0.01％至約10％/天、約0.01％至約9％/天、約0.01％至約8％/天、約0.01％至約7％/天、約0.01％至約6％/天、約0.01％至約5％/天、約0.01％至約4％/天、約0.01％至約3％/天、約0.01％至約2％/天、約0.01％至約1％/天、約0.01％至約0.5％/天、約0.01％至約0.4％/天、約0.01％至約0.3％/天，約0.01％至約0.2％/天、約0.01％至約0.1％/天、約0.01％至約0.05％/天、約0.01％至約0.04％/天、約0.01％至約0.03％/天或約0.01％至約0.02％/天。[0258]藥物組合物[0259]另一方面，提供了包括本公開的藥物遞送系統的藥物組合物。[0260]另一方面，提供了包括本公開的藥物遞送系統的藥物組合物以及至少一種藥學上可接受的賦形劑。[0261]如本文所使用的，術語「藥物組合物」是指含有呈適於向受試者施用的形式的本公開的藥物遞送系統的調配物。[0262]如本文所使用的，術語「藥學上可接受的賦形劑」意指可用於製備通常安全、無毒並且在生物學上和其它方面均合乎需要的藥物組合物的賦形劑，並且包括對於獸醫用途以及人類藥物用途而言是可接受的賦形劑。如本文所使用的，「藥學上可接受的賦形劑」包括一種和多於一種此類賦形劑。術語「藥學上可接受的賦形劑」還涵蓋「藥學上可接受的載體」和「藥學上可接受的稀釋劑」。[0263]本文所提供的藥物組合物可以呈允許向受試者，包括但不限於人，施用組合物並且允許將組合物調配成與預期施用途徑相容的任何形式。[0264]針對本文所提供的藥物組合物考慮了多種途徑，並且因此本文所提供的藥物組合物可以取決於預期施用途徑而以散裝或單位劑型供應。例如，對於口服、經頰和舌下施用，粉劑、顆粒、片劑、丸劑、膠囊、軟膠囊和囊片作為固體劑型可以為可接受的，並且乳液、糖漿、酏劑、懸浮液和溶液作為液體劑型可以為可接受的。對於注射施用，凝膠、溶液、乳液和懸浮液作為液體劑型可以為可接受的，並且適於用合適溶液復原的粉劑作為固體劑型可以為可接受的。對於吸入施用，溶液、噴霧劑、乾粉和氣霧劑可以為可接受的劑型。對於局部(包括經頰和舌下)或經皮施用，粉劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、溶液和貼片可以為可接受的劑型。對於陰道施用，陰道栓劑、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫和噴霧劑可以為可接受的劑型。對於植入物施用，固體、半固體、凝膠可以為可接受的劑型。[0265]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可以呈口服施用調配物形式。[0266]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可以呈注射施用調配物形式。[0267]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可以呈吸入施用調配物形式。[0268]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可以呈局部施用調配物形式。[0269]在某些實施方式中，本文所提供的藥物組合物可以以本領域普通技術人員所熟知的皮膚貼片形式調配。[0270]除上文所描述的那些代表性劑型以外，藥學上可接受的賦形劑和載體對於本領域技術人員而言通常是已知的並且因此包括在本公開中。在例如以下參考文獻中描述了此類賦形劑和載體：《雷明頓氏藥物科學(remingtonspharmaceuticalsciences)》,新澤西州的馬克出版公司(mackpub.co.,新澤西州)(1991)；《雷明頓：藥學科學與實踐(remington:thescienceandpracticeofpharmacy)》,編輯費城科學大學(universityofthesciencesinphiladelphia),第21版,lww(2005)，所述參考文獻通過引用併入本文。[0271]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可以被調配成單劑量。本文所提供的化合物在單劑量中的量將根據所治療的受試者和具體的施用模式而變化。[0272]在一些實施方式中，本公開的藥物組合物可被調配成以數天、數周、數月或甚至更長的時間間隔向受試者施用。[0273]另一方面，還提供了包括本公開的藥物遞送系統的藥物組合物，作為兩種或更多種組合療法。[0274]藥物遞送系統的合成[0275]本文所提供的藥物遞送系統的合成在實施例中的合成方案中進行了說明。本文所提供的藥物遞送系統可以使用任何已知的有機合成技術來製備並且可以根據多種可能的合成途徑中的任何一種來合成，因此這些方案僅是說明性的，並不意味著限制可用於製備本文所提供的化合物的其它可能的方法。另外，方案中的步驟是為了更好地說明，並且可以酌情更改。實施例中的化合物的實施方式是出於研究和可能提交到監管機構的目的而合成的。[0276]用於製備本公開的藥物遞送系統的反應可以在合適的溶劑中進行，有機合成領域的技術人員可以容易地選擇合適的溶劑。合適的溶劑可以在進行反應的溫度(例如，範圍可以為從溶劑的凍結溫度到溶劑的沸騰溫度的溫度)下與起始材料(反應物)、中間體或產物基本上無反應性。給定反應可以在一種溶劑或多於一種溶劑的混合物中進行。取決於特定反應步驟，特定反應步驟的合適溶劑可以由本領域技術人員選擇。[0277]本公開的化合物的製備可以涉及各種化學基團的保護和脫保護。對保護和脫保護的需求和對適當的保護基團的選擇可以由所屬領域的技術人員容易地確定。可以在例如以下參考文獻中找到保護基團的化學：t.w.greene和p.g.m.wuts,《有機合成中的保護基團(protectivegroupsinorganicsynthesis)》,第3版,紐約的約翰威利父子出版公司,(1999)；p.kocienski,《保護基團(protectinggroups)》,喬治泰米出版社(georgthiemeverlag),2003；和peterg.m.wuts，《格林氏有機合成中的保護基團(greene'sprotectivegroupsinorganicsynthesis)》,第5版,wiley出版社(wiley),2014，所述參考文獻全都通過引用整體併入本文。[0278]可以根據本領域中已知的任何適合方法監測反應。例如，可以通過如核磁共振波譜法(例如，1h或13c)、紅外光譜法、分光光度法(例如，uv可見)、質譜法等光譜學手段或通過如高效液相色譜法(hplc)、液相色譜法-質譜法(lcms)或薄層色譜法(tlc)等色譜方法來監測產物形成。本領域技術人員可以通過各種方法對化合物進行純化，所述方法包括高效液相色譜法(hplc)(「製備型lc-ms純化：改進的化合物特定方法優化(preparativelc-mspurification:improvedcompoundspecificmethodoptimization)」karlf.blom,brianglass,richardsparks,andrewp.combs《組合化學雜誌(j.combi.chem.)》2004,6(6),874-883，所述參考文獻通過引用整體併入本文)和正相矽膠色譜法。[0279]本公開的已知起始材料可以通過使用或根據本領域已知的方法合成，或者可以從商業供應商處購買。除非另有說明，否則分析級溶劑和可商購獲得的試劑均在未經進一步純化的情況下使用。[0280]除非另有說明，否則本公開的反應均在氮氣或氬氣的正壓下或在無水溶劑中使用乾燥管進行，並且反應燒瓶通常裝配有橡膠隔墊以用於通過注射器引入底物和試劑。玻璃器皿經烘箱乾燥和/或加熱乾燥。[0281]治療疾病的方法[0282]另一方面，提供了一種治療有需要的受試者的病症的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的本文所提供的藥物遞送系統或藥物組合物。[0283]待治療的病症取決於所述藥物遞送系統中選定的治療劑或本文所提供的藥物組合物。在一些實施方式中，所述病症可以選自由以下組成的組：炎症、癌症、心血管疾病、呼吸道疾病、與血管內皮生長因子(vegf)相關的疾病、骨關節炎、新生血管性(溼性)年齡相關黃斑變性(amd)、視網膜靜脈阻塞後黃斑水腫(rvo)、糖尿病性黃斑水腫(dme)、糖尿病性視網膜病變(dr)、近視脈絡膜新生血管(mcnv)、皮炎、銀屑病、慢性阻塞性肺病、哮喘。[0284]在此背景下，術語「治療有效量」是指在本文所提供的藥物遞送系統或其藥學上可接受的鹽中選定的治療劑的量，所述量有效地向受試者提供「療法」或「治療」受試者的病症、疾病或病狀。[0285]實施例[0286]出於說明的目的，包括了以下實施例。然而，應理解，這些實施例並不限制本公開，並且僅意在表明實踐本公開的方法。本領域技術人員將認識到，可以容易地使所描述的化學反應適於製備本公開的多種其它化合物，並且用於製備本公開的化合物的可替代方法被視作處於本公開的範圍內。例如，通過對本領域技術人員而言顯而易見的修飾，例如通過適當地保護幹擾基團、通過利用本領域已知的除所描述的試劑和構建塊之外的其它合適的試劑和構建塊和/或通過對反應條件進行常規修改，可以成功地合成根據本公開的非示例性化合物。可替代地，本文所公開或本領域中已知的其它反應將被認為適用於製備本公開的其它化合物。[0287]實施例1[0288]n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0289][0290]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0291][0292]在n2下將三乙胺(1.2g，12mmol，2.5當量)添加到託法替尼(1.5g，4.8mmol，1當量)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1.61g，5.28mmol，1.1當量)於二氯甲烷(30ml)中的混合物中，將反應混合物加熱至回流持續3小時。然後添加(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(0.9g，4.82mmol，1當量)並使所得混合物回流持續12小時。在減壓下去除溶劑後，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(2.4g，產率：95％)；ms(m/z):c26h38n8o4的[m+h]+計算值，527.30；實驗值，527.2。[0293]步驟2：n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0294][0295]在n2下在0℃下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(9.6ml，38.4mmol)逐滴添加到(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(2.4g，4.56mmol，1當量)於乙酸乙酯(24ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌2天。在減壓下去除溶劑，將所得固體在乙酸乙酯(24ml)中攪拌0.5小時，然後過濾以得到呈hcl鹽的所期望產物(2.1g，產率：100％)；ms(m/z):c21h30n8o2的[m+h]+計算值，427.25；實驗值，427.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.38(d,j＝6.7hz,1h),7.82(d,j＝3.9hz1h),6.90(s,1h),4.72-4.53(m,1h),4.16-3.26(m,11h),3.04(d,j＝6.4hz2h),2.66-2.46(m,1h),2.03-1.90(m,1h),1.86-1.69(m,5h),1.12(d,j＝7.1hz,3h).[0296]步驟3：n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0297][0298]在0℃下將4-甲基嗎啉(0.066g，0.65mmol，1.5當量)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.076g，0.432mmol，1當量)添加到透明質酸鈉(mw50kda，0.161g，0.432mmol，1當量)於乙腈(22ml)和h2o(35ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，並且然後在室溫下攪拌1小時。[0299]向反應混合物中添加n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.432mmol，1當量)，並且然後用4-甲基嗎啉將反應混合物的ph調整到6.5至7。將所得反應混合物在室溫下攪拌3天。[0300]將含nacl(257mg，10當量)的h2o(2ml)添加到上述反應混合物中並攪拌0.5小時。然後將丙酮(350ml)逐滴添加到上述混合物中，同時形成沉澱物。過濾混合物並且用丙醇(10ml*3)洗滌濾餅。將溼餅溶解於乙腈(20ml)和h2o(40ml)中，並且然後用3.5kdamw截止膜對去離子水透析3次，然後進行凍幹以得到標題化合物(0.15g，產率：43.2％，dsr(藥物取代率)＝17％)。1h-nmr(400mhz,d2o/d-dmso＝3:1)δppm8.40-7.90(m,0.17h),7.75-7.20(m,0.17h),6.95-6.25(m,0.17h),4.70-4.20(m,2.47h),4.00-3.23(m,11.91h),2.55-2.30(m.0.34h),1.99(d,j＝19.7hz,3h),1.30(t,j＝6.8hz,0.17h),1.20-1.10(m,0.51h).[0301]在步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.16g，產率：46％，dsr＝22％)。nmr[0302]在步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.15g，產率：43.2％，dsr＝17％)。nmr[0303]實施例2[0304]n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0305][0306]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苄基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0307][0308]通過遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.5g，4.8mmol，1當量)、雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1.61g，5.28mmol，1.1當量)和(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.07g，4.8mmol，1當量)產生標題產物(1.8g，產率：67％)；ms(m/z):c29h36n8o4的[m+h]+計算值，562.29；實驗值，562.2。[0309]步驟2：n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0310][0311]通過遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，2.675mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.33g，產率：100％)；ms(m/z):c24h28n8o2的[m+h]+計算值，461.23；實驗值，461.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm)δ8.30-8.08(m,1h),7.7-7.3(m,5h),6.80-6.50(m,1h),4.55(s,2h),4.19(s,2h),4.09-3.88(m,3h),3.6-3.19(m,5h),2.44(br,1h),2.0-1.5(m,2h),1.25-1.0(m,3h).[0312]步驟3：n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0313][0314]通過遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.163g，0.403mmol，1當量)和n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.403mmol，1當量)反應混合物提供標題化合物(0.18g，產率：55％，dsr＝38％)；1h-nmr(400mhz,d2o/d-dmso＝3:1)δppm9.0-7.0(m,2.7h),4.75-4.4(m,5.5h),4.4-3.0(m,11h),2.7-2.45(m,0.38h),2.15(s,3h),1.9-1.4(m,0.74h),1.4-0.9(m,1.14h).[0315]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.15g，產率：44％，dsr＝21.4％)。[0316]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.18g，產率：53％，dsr＝20.7％)[0317]實施例3[0318](4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯與ha的綴合物的製備[0319][0320]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0321][0322]通過遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.5g，4.8mmol，1當量)和(4-氨基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.14g，4.8mmol，1當量)產生標題產物(2.2g，產率：79.7％)；ms(m/z):c30h38n8o4的[m+h]+計算值，575.30；實驗值，575.2。[0323]步驟2：n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0324][0325]通過遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，2.61mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.33g，產率：100％)；ms(m/z):c25h30n8o2的[m+h]+計算值，475.25；實驗值，475.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.31-8.01(m,1h),7.96-7.09(m,5h),6.98-6.54(m,1h),4.50(dd,2h),4.10-3.42(m,5h),3.25(d,j＝21.8hz,5h),3.02(t,2h),2.43(d,j＝5.7hz,1h),1.83(dd,j＝72.1,15.3hz,2h),1.13(dd,j＝18.5,13.3hz,3h).[0326]步驟3：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯與ha的綴合物的製備[0327][0328]通過遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.157g，0.39mmol，1當量)和n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.39mmol，1當量)提供標題化合物(0.19g，產率：33.4％，dsr＝19％)。1h-nmr(400mhz,d2o/dmso＝3:1)δppm8.5-8.25(m,0.09h),7.90-6.72(m,1.23h),4.75-4.25(m,1.98h),4.02-3.17(m,12h),3.10-2.75(m,0.76h),2.54(br,0.19h),2.04(s,3h),1.60-1.25(m,0.38h),1.18-0.98(m,0.57h).[0329]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.147g，產率：44％，dsr＝16％)，[0330]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.175g，產率：53％，dsr＝22.9％)。[0331]實施例4[0332]n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0333][0334]步驟1：(2-(2-(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0335][0336]通過遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(3g，9.6mmol，1當量)、(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.38g，9.6mmol，1當量)產生標題產物(3g，產率：54％)；ms(m/z):c28h42n8o6的[m+h]+計算值，587.32；實驗值，587.2。[0337]步驟2：n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0338][0339]通過遵循實施例1中的步驟2，(2-(2-(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，2.56mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.34g，產率：100％)；ms(m/z):c23h34n8o4的[m+h]+計算值，487.32；實驗值，487.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.40(br,1h),7.83(s,1h),6.91(s,1h),4.7-4.5(m,1h),4.06-3.92(m,3h),3.83-3.36(m,16h),3.17(s,2h),2.56(s,1h),2.00-1.72(m,2h),1.14(dd,j＝16.1,7.0hz,3h).[0340]步驟3：n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0341][0342]通過遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.153g，0.38mmol，1當量)和n-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.38mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：33％，dsr＝36.3％)。1h-nmr(400mhz,d2o/d-dmso＝3:1)δppm8.52-7.93(m,0.37h),7.82-7.20(m,0.33h),6.99-6.26(m,0.39h),4.75-3.8(m,5.09h),3.8-2.75(m,14.93h),2.5-2.25(m,0.36h),2.05(s,3h),1.82-1.30(m,0.73h),1.2-0.8(m,1.09h).[0343]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.186g，產率：56.5％，dsr＝32％)[0344]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.198g，產率：60.2％，dsr＝26.6％)。[0345]實施例5[0346]n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0347][0348]步驟1：(1-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)-1-氧代-5,8,11-三氧雜-2-氮雜三癸-13-基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0349][0350]通過遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.5g，4.8mmol，1當量)和(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.41g，4.8mmol，1當量)產生標題產物(1.8g，產率：60％)；ms(m/z):c30h46n8o7的[m+h]+計算值，631.35；實驗值，631.2。[0351]步驟2：n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0352][0353]通過遵循實施例1中的步驟2，(1-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)-1-氧代-5,8,11-三氧雜-2-氮雜三癸-13-基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，2.38mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1g，產率：80％)；ms(m/z):c25h38n8o5的[m+h]+計算值，531.30；實驗值，531.2。1h-nmr(400mhz,dmso)δppm9.74(s,1h),8.34(d,j＝7.0hz,1h),8.01(s,1h),7.69(s,1h),6.86(s,1h),4.85(d,j＝3.1hz,1h),4.35-4.0(m,10h),3.7-3.96(m,3h),3.65-3.5(m,10h),2.93(d,j＝4.3hz,2h),2.38(s,1h),1.89-1.68(m,1h),1.59(s,1h),1.01(d,j＝4.8hz,3h).[0354]步驟3：n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0355][0356]通過遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.141g，0.35mmol，1當量)和n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.35mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：62.7％，dsr＝24％)；1h-nmr(400mhz,d2o-dmso＝3:1)δppm8.7-8.2(m,0.24h),8.1-7.3(m,0.24h),7.2-6.6(m,0.24h),4.7-4.35(m,1h),4.3-3.1(m,17h),2.7-2.5(br,0.24h),2.14(br,3h),1.93(br,0.24h),1.46(br,0.24h),1.24(br,0.72h).[0357]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.186g，產率：58.4％，dsr＝26％)[0358]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.198g，產率：62.2％，dsr＝28％)。[0359]實施例6[0360]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0361][0362]步驟1：2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼-1-甲酸叔丁酯的製備[0363][0364]通過遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)和肼甲酸叔丁酯(0.845g，6.4mmol，1當量)產生標題產物(2.23g，產率：75％)；ms(m/z):c22h30n8o4的[m+h]+計算值，471.24；實驗值，471.2。[0365]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[0366][0367]通過遵循實施例1中的步驟2，2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼-1-甲酸叔丁酯(2g，4.25mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.5g，產率：85％)；ms(m/z):c17h22n8o2的[m+h]+計算值，371.19；實驗值，371.1。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.52(s,1h),7.89(d,j＝3.1hz,1h),7.13(d,j＝3.8hz,1h),4.83(s,1h),4.22-3.32(m,9h),2.55(br,1h),2.05-1.99(m,1h),1.90-1.67(m,1h),1.16(d,j＝7.0hz,3h).[0368]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0369][0370]通過遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.202g，0.5mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(0.2g，0.5mmol，1當量)提供標題化合物(0.15g，產率：43.2％，dsr＝32％)；1h-nmr(400mhz,d2o-dmso＝5:1):δppm8.4-7.8(m,0.32h),7.8-7.2(m,0.32h),7.0-6.0(m,0.32h),4.75-4.4(m,2.1h),4.26-3.19(m,11.1h),2.45(br,0.32h),2.05(br,3h),1.85-1.3(m,0.65h),1.18(br,0.95h).[0371]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.18g，產率：48.5％，dsr＝35％)。[0372]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.19g，產率：51.2％，dsr＝30％)。[0373]實施例7[0374]n-(2-氨基乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0375][0376]步驟1：(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0377][0378]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(3.2g，10.24mmol，1當量)和(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.64g，10.24mmol，1當量)產生標題產物(3g，產率：59％)；ms(m/z):c24h34n8o4的[m+h]+計算值，499.27；實驗值，499.1。[0379]步驟2：n-(2-氨基乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0380][0381]遵循實施例1中的步驟2，(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，2mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(870mg，產率：100％)；ms(m/z):c19h26n8o2的[m+h]+計算值，399.22；實驗值，399.1。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.49(s,1h),7.95(d,j＝3.6hz,1h),7.08(s,1h),4.08-3.73(m,7.5h),3.71-3.41(m,4.5h),3.27(t,2h),2.66-2.44(m,1h),2.00-1.67(m,2h),1.16(d,j＝7.0hz,3h).[0382]步驟3：n-(2-氨基乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0383][0384]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.186g，0.46mmol，1當量)和n-(2-氨基乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.46mmol，1當量)提供標題化合物(0.23g，產率：66％，dsr＝18％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm:8.23(m,0.18h),7.63(m,0.18h),6.80(m,0.18h),4.64–4.24(m,2.2h),4.05–2.96(m,12.3h),2.42(m,0.18h),1.98(s,3h),1.80–1.67(m,0.18h),1.26(m,0.18h),1.05(m,0.54h).1h-nmr(400mhz,d2o)δppm:8.5-7.9(m,0.18h),7.7-7.0(m,0.18h),7.0-5.8(m,0.18h),4.64-4.24(m,2.2h),4.05-2.96(m,12.3h),2.42(br,0.18h),1.98(s,3h),1.80-1.67(m,0.18h),1.26(br,0.18h),1.05(m,0.54h).[0385]實施例8[0386]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(甲基氨基)丁基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0387][0388]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0389][0390]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1g，3.2mmol，1當量)和(4-氨基丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.65g，3.2mmol，1當量)產生標題產物(1g，產率：58％)；ms(m/z):c27h40n8o4的[m+h]+計算值，541.32；實驗值，541.2。[0391]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(甲基氨基)丁基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0392][0393]遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)丁基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1g，1.85mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.88g，產率：100％)；ms(m/z):c22h32n8o2的[m+h]+計算值，441.26；實驗值，441.1。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.50(d,j＝4.7hz,1h),7.94(d,j＝3.7hz,1h),7.07(s,1h),4.20ꢀ‑3.81(m,3h),3.73-3.32(m,8h),3.08(t,2h),2.72(s,3h),2.55(br,1h),1.99(br,1h),1.91-1.67(m,5h),1.16(d,j＝6.9,5.2hz,3h).[0394]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(甲基氨基)丁基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0395][0396]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.169g，0.42mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(甲基氨基)丁基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.42mmol，1當量)提供標題化合物(0.236g，產率：34.4％，dsr＝10％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.4-7.9(m,0.1h),7.75-7.35(m,0.1h),6.95-6.5(m,0.1h),4.7-4.2(m,2.7h),4.0-3.2(m,11h),2.47(br,0.1h),2.02(br,3h),1.29(br,0.2h),1.2-0.95(m,0.3h).[0397]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.18g，產率：52.3％，dsr＝6％)。[0398]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物kda(0.17g，產率：49.4％，dsr＝3％)。[0399]實施例9[0400]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甲基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0401][0402]步驟1：2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-1-甲基肼-1-甲酸叔丁酯的製備[0403][0404]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(3.124g，10mmol，1當量)和1-甲基肼-1-甲酸叔丁酯(1.45g，10mmol，1當量)產生標題產物(2.2g，產率：46％)；ms(m/z):c23h32n8o4的[m+h]+計算值，485.25；實驗值，485.2。[0405]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甲基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[0406][0407]遵循實施例1中的步驟2，2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-1-甲基肼-1-甲酸叔丁酯(1g，2.06mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(870mg，產率：100％)；ms(m/z):c18h24n8o2的[m+h]+計算值，385.20；實驗值，385.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.44(d,j＝5.0hz,1h),7.79(d,j＝3.5hz,1h),6.98(s,1h),4.75(s,1h),4.15-3.79(m,4h),3.72-3.32(m,5h),3.03(s,3h),2.55(br,1h),1.97(br,1h),1.83(br,1h),1.13(dd,j＝15.1,7.1hz,3h).[0408]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甲基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0409][0410]遵循實施例1中的步驟2，透明質酸鈉(mw50kda，0.192g，0.475mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甲基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(0.2g，0.475mmol，1當量)提供標題化合物(0.323g，產率：90％，dsr＝15％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.4-8.2(m,0.15h),7.8-7.5(m,0.15h),7.05-6.75(m,0.15h),4.75-4.2(m,2.9h),4.0-3.2(m,11h),2.47(br,0.15h),2.02(br,3h),1.30(br,0.15h),1.08(m,0.45h).[0411]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.303g，產率：83％，dsr＝10％)。[0412]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.327g，產率：90.3％，dsr＝15％)。[0413]實施例10[0414]n'-烯丙基-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0415][0416]步驟1：1-烯丙基-2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼-1-甲酸叔丁酯的製備[0417][0418]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)、1-甲基肼-1-甲酸叔丁酯(1.1g，6.4mmol，1當量)產生標題產物(0.8g，產率：25％)；ms(m/z):c25h34n8o4的[m+h]+計算值，511.27；實驗值，511.1。[0419]步驟2：n'-烯丙基-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[0420][0421]遵循實施例1中的步驟2，1-烯丙基-2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼-1-甲酸叔丁酯(0.8g，1.57mmol)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.67g，產率：96％)；ms(m/z):c20h26n8o2的[m+h]+計算值，411.22；實驗值，411.1。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.50(d,j＝4.2hz,1h),7.86(s,1h),7.10(d,j＝3.8hz,1h),6.08-5.98(m,1h),5.61-5.52(m,2h),4.34-3.73(m,6h),3.73-3.32(m,6h),2.53(br,1h),2.05-1.9(m,1h),1.87-1.64(m,1h),1.17(d,j＝7.0hz3h).(氨基甲基)吡啶-2-基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.4mmol，1當量)提供標題化合物(0.17g，產率：50％，dsr＝20.5％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.6-7.3(m,1.12h),7.2-6.8(m,0.11h),4.7-4.3(m,2h),4.02-3.17(m,10.46h),2.40(br,0.21h),2.00(s,3h),1.61(br,0.21h),1.35-1.2(m,0.21h),1.15-0.85(m,0.65h).[0439]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.177g，產率：52.6％，dsr＝22.2％)。[0440]實施例12[0441]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0442][0443]步驟1：4-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[0444][0445]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(0.52g，1.66mmol，1當量)、4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.46g，1.66mmol，1當量)產生標題產物(0.65g，產率：65％)；ms(m/z):c32h41n9o4的[m+h]+計算值，616.33；實驗值，616.1。1-基)吡啶-2-基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0455][0456]步驟1：4-(6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[0457][0458]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.12g，3.59mmol，1當量)和4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，3.59mmol，1當量)產生標題產物(1.3g，產率：58.7％)；ms(m/z):c31h40n10o4的[m+h]+計算值，617.32；實驗值，617.2。[0459]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0468][0469]步驟1：(2-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0470][0471]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.24g，3.96mmol，1當量)和(2-(4-氨基苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，3.96mmol，1當量)產生標題產物(1.3g，產率：55.6％)；ms(m/z):c30h38n8o5的[m+h]+計算值，591.30；實驗值，591.2。[0472]步驟2：n-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0473][0474]遵循實施例1中的步驟2，(2-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，1.69mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.892g，產率：100％)；ms(m/z):c25h30n8o3的[m+h]+計算值，491.24；實驗值，491.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.15(s,1h),7.51(s,1h),7.34(dd,j＝16.5,8.8hz,2h),7.03(t,2h),6.63(s,1h),4.45(s,1h),4.38-3.38(m,10h),3.21(d,j＝15.1hz,2h),2.39(s,1h),2.0-1.6(m,2h),1.08(dd,j＝16.9,6.8hz,3h).[0475]步驟3：n-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0476][0477]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.153g，0.38mmol，1當量)和n-(4-(2-氨基乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.38mmol，1當量)提供標題化合物(0.22g，產率：66％，dsr＝11％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.0-6.6(m,0.77h),4.53(br,1.58h),4.01-3.19(m,12h),2.77-2.58(m,0.11h),1.95(s,3h),1.28(br,0.22h),1.15-0.95(m,0.33h).[0478]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.24g，產率：73％，dsr＝10％)。[0479]實施例15[0480]n-(4-(4-氨基丁氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0481][0482]步驟1：(4-(4-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0483][0484]在n2下在0℃下將nah(1.772g，44.3mmol，2.5當量)添加到(4-羥丁基)氨基甲酸叔丁酯(3.7g，19.5mmol，1.1當量)於thf(40ml)中的溶液中。將反應混合物在0℃攪拌30分鐘，並且然後向其中添加1-氟-4-硝基苯(2.5g，17.72mmol，1當量)。使所得混合物回流持續12小時。在大部分1-氟-4-硝基苯被消耗後，用飽和nh4cl水溶液(100ml)淬滅反應，並用乙酸乙酯(40ml*2)萃取。用飽和nacl水溶液(100ml)洗滌合併有機相，經無水na2so4乾燥並在高真空下濃縮。通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(4g，產率：73％)；ms(m/z):c15h22n2o5的[m+h]+計算值，311.15；實驗值，311.1。[0485]步驟2：(4-(4-氨基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0486][0487]將10％pd/c(0.2g)添加到(4-(4-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(2g，6.444mmol，1當量)於甲醇(30ml)中的溶液中，在室溫下在h2氣球下攪拌反應混合物持續24小時。在(4-(4-硝基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯被完全消耗後，通過硅藻土墊過濾反應混合物，並用甲醇(10ml*2)洗滌所述墊。濃縮合併的濾液以得到標題產物(1.8g，產率：100％)；ms(m/z):c15h24n2o3的[m+h]+計算值，281.18；實驗值，281.1。[0488]步驟3：(4-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0489][0490]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(2.23g，7.133mmol，1當量)和(4-(4-氨基苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(2g，7.133mmol，1當量)產生標題產物(2.6g，產率：59％)；ms(m/z):c32h42n8o5的[m+h]+計算值，619.33；實驗值，619.2。[0491]步驟4：n-(4-(4-氨基丁氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0492][0493]遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，2.1mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.1g，產率：100％)；ms(m/z):c27h34n8o3的[m+h]+計算值，519.28；實驗值，519.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.14-8.11(d,j＝10.8hz,1h),7.43-7.21(m,3h),6.83(d,j＝8.6hz,2h),6.70-6.45(m,1h),4.49(br,1h),4.12-3.09(m,13h),2.36(m,1h),1.85-1.55(m,6h),1.04(d,j＝7.4hz,3h).[0494]步驟5：n-(4-(4-氨基丁氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0495][0496]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.153g，0.38mmol，1當量)和n-(4-(4-氨基丁氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(00.2g，0.38mmol，1當量)提供標題化合物(0.22g，產率：66％，dsr＝31％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.60-5.22(m,2.17h),4.7-4.2(m,3.1h),4.0-3.25(m,12h),3.3-2.9(m,1.24h),2.84-2.11(m,0.31h),2.02(s,3h),1.79(br,1.24h),1.30(br,0.62h),1.15-0.5(m,0.93h).[0497]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.123g，產率：36％，dsr＝4％)。[0498]實施例16[0499]n-(4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0500][0501]步驟1：(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0502][0503]在n2下在0℃下將nah(1.42g，35.425mmol，2.5當量)添加到(2-(2-羥基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.2g，15.59mmol，1.1當量)於thf(40ml)中的溶液中，在0℃下攪拌反應混合物持續30分鐘，然後向其中添加1-氟-4-硝基苯(2g，14.17mmol，1當量)，使所得混合物回流持續12小時。在大部分1-氟-4-硝基苯被消耗後，用飽和nh4cl水溶液(100ml)淬滅反應，並用乙酸乙酯(50ml*2)萃取。用飽和nacl水溶液(100ml)洗滌合併有機相，經無水na2so4乾燥並在高真空下濃縮。通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(2g，產率：43.3％)；ms(m/z):c15h22n2o6的[m+h]+計算值，327.15；實驗值，327.1。[0504]步驟2：(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0505][0506]將添加10％pd/c(0.2g)添加到(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2g，6.13mmol，1當量)於甲醇(40ml)中的溶液中，在室溫下在h2氣球下攪拌反應混合物持續24小時。在(2-(2-(4-硝基苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯被完全消耗後，通過硅藻土墊過濾反應混合物，並用甲醇(20ml*2)洗滌所述墊。濃縮合併的濾液以得到標題產物(1.8g，產率：100％)；ms(m/z):c15h24n2o4的[m+h]+計算值，297.17；實驗值，297.1。[0507]步驟3：(2-(2-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0508][0509]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.9g，6.07mmol，1當量)和(2-(2-(4-氨基苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.8g，6.07mmol，1當量)產生標題產物(1.8g，產率：57％)；ms(m/z):c32h42n8o6的[m+h]+計算值，635.32；實驗值，635.2。[0510]步驟4：n-(4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0511][0512]遵循實施例1中的步驟2，(2-(2-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，1.575mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.89g，產率：100％)；ms(m/z):c27h34n8o4的[m+h]+計算值，535.27；實驗值，535.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.19(d,j＝9.4hz,1h),7.52(d,j＝15.7hz,1h),7.37(d,j＝8.8hz,2h),6.99(d,j＝8.8hz,2h),6.72-6.50(m,1h),4.63-4.54(m,1h),4.23(s,2h),4.09-3.81(m,7h),3.74-3.12(m,8h),2.42(s,1h),1.77(m,2h),1.08(d,j＝6.8hz,3h).[0513]步驟5：n-(4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0514][0515]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.141g，0.35mmol，1當量)和n-(4-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.35mmol，1當量)提供標題化合物(0.15g，產率：32％，dsr＝25％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.49-7.25(m,0.76h),7.25-5.75(m,1.0h),4.78-4.02(m,3.23h),4.02-3.22(m,12h),3.2-2.75(m,1.23h),2.5(br,0.25h),2.01(s,3h),1.63-1.16(m,0.5h),1.25-0.5(m,0.75h).[0516]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.132g，產率：42％，dsr＝28％)。[0517]實施例17[0518]3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-(哌嗪-1-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[0519][0520]步驟1：4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[0521][0522]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.68g，5.37mmol，1當量)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，5.37mmol，1當量)產生標題產物(0.9g，產率：32％)；ms(m/z):c26h36n8o4的[m+h]+計算值，525.29；實驗值，525.2。[0523]步驟2：3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-(哌嗪-1-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈鹽酸鹽的製備[0524][0525]遵循實施例1中的步驟2，4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.8g，1.525mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.7g，產率：100％)；ms(m/z):c21h28n8o2的[m+h]+計算值，425.23；實驗值，425.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.41(d,j＝5.5hz,1h),7.59(d,j＝3.9hz,1h),7.04(s,1h),4.74-4.57(m,1h),4.17-3.82(m,7h),3.80-3.06(m,10h),2.68-2.51(m,1h),2.06-1.90(m,1h),1.89-1.71(m,1h),1.16(dd,j＝14.8,7.1hz,3h).[0526]步驟3：3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-(哌嗪-1-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[0527][0528]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.175g，0.434mmol，1當量)和n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.434mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：57.3％，dsr＝24％)；11h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.21(br,0.24h),7.33(br,0.24h),6.91(br,0.24h),4.7-4.3(m,2.32h),4.18-3.12(m,14h),2.46(br,0.24h),2.02(s,3h),1.79(br,0.24h),1.30(m,0.24h),1.18-0.93(m,0.72h).[0529]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.162g，產率：46.4％，dsr＝28％)。[0530]實施例18[0531]3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-(哌嗪-1-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[0532]((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-(哌嗪-1-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈鹽酸鹽(0.2g，0.44mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：55％，dsr＝25％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.4-7.8(m,0.25h),7.7-7.2(m,0.25h),6.90-6.0(m,0.25h),4.45(br,2.5h),3.77-3.27(m,12h),3.17-3.06(m,0.51h),2.42(br,0.25h),1.96(s,3h),1.85-1.52(m,2h),1.24(br,0.5h),1.1-0.9(m,0.75h).[0542]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.109g，產率：30％，dsr＝9％)。[0543]實施例19[0544]n-(2-氨基環己基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0545][0546]步驟1：(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)環己基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0547][0548]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.46g，4.67mmol，1當量)和(2-氨基環己基)氨基甲酸叔丁酯(1g，4.67mmol，1當量)產生標題產物(2g，產率：78％)；ms(m/z):c28h40n8o4的[m+h]+計算值，553.32；實驗值，553.2。[0549]步驟2：n-(2-氨基環己基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0550][0551]遵循實施例1中的步驟2，(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)環己基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，2.352mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.15g，產率：100％)；ms(m/z):c23h32n8o2的[m+h]+計算值，453.26；實驗值，453.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.52-8.36(m,1h),7.90-7.78(m,1h),6.93(s,1h),4.63(m,2h),4.21-3.78(m,4h),3.70-3.25(m,6h),2.55(br,1h),2.14(m,1h),2.04-1.31(m,9h),1.20-1.04(m,3h).[0552]步驟3：n-(2-氨基環己基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0553][0554]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.161g，0.4mmol，1當量)和n-(2-氨基環己基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.4mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：59％，dsr＝18％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.62-7.85(m,0.18h),7.82-7.41(m,0.18h),6.86-6.70(m,0.18h),4.7-4.2(m,2h),4.23-2.54(m,12.16h),2.42(br,0.18h),2.00(s,3h),1.50-1.2(m,0.86h),1.22-0.87(m,1.05h).[0555]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.224g，產率：67％，dsr＝7％)。[0556]實施例20[0557]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-乙基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0558][0559]步驟1：2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-1-乙基肼-1-甲酸叔丁酯的製備[0560][0561]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(2.5g，8.114mmol，1當量)和1-乙基肼-1-甲酸叔丁酯(1.3g，8.114mmol，1當量)產生標題產物(1.745g，產率：43％)；ms(m/z):c24h34n8o4的[m+h]+計算值，499.27；實驗值，499.2。[0562]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-乙基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[0563][0564]遵循實施例1中的步驟2，2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-1-乙基肼-1-甲酸叔丁酯(1.4g，2.8mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1g，產率：82％)；ms(m/z):c19h26n8o2的[m+h]+計算值，399.22；實驗值，399.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.45(d,j＝4.8hz,1h),7.81(d,j＝3.6hz,1h),7.00(s,1h),4.76-4.67(m,1h),4.19-3.79(m,3h),3.72-3.31(m,8h),2.56(br,1h),2.06-1.70(m,2h),1.35(br,3h),1.14(dd,j＝15.2,7.1hz,3h)[0565]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-乙基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[0566][0567]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.186g，0.46mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-乙基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(0.2g，0.46mmol，1當量)提供標題化合物(0.12g，產率：34％，dsr＝9％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.4-8.3(m,0.09h),7.69(d,j＝23.0hz,0.09h),6.95(d,j＝10.7hz,0.09h),4.60-4.41(m,2.08h),3.84ꢀ‑3.34(m,10h),2.47(m,0.09h),2.01(s,3h),1.82-1.74(m,0.19h),1.31(br,0.27h),1.07(br,0.27h).[0568]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.198g，產率：55.3％，dsr＝5％)。[0569]實施例21[0570](4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-l-賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[0571][0572]步驟1：n6-(叔丁氧基羰基)-n2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-l-賴氨酸甲酯的製備(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2g，0.374mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：61％，dsr＝19％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.25(m,0.2h),7.56(m,0.2h),6.72(m,0.2h),4.72–2.85(m,15.2h),2.45(m,0.4h),2.02(s,3h),1.56(m,1.2h),1.31(m,0.2h),1.11(m,0.6h).1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.5-7.9(m,0.2h),7.8-7.1(m,0.2h),7.1-6.1(m,0.2h),4.72-2.85(m,15.2h),2.45(br,0.4h),2.02(s,3h),1.8-1.4(m,1.2h),1.31(br,0.2h),1.2-0.95(m,0.6h).[0581]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.2g，產率：61％，dsr＝23.2％)。[0582]實施例22[0583]n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0584][0585]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0586][0587]在n2下將n,n-二甲基吡啶-4-胺(2.15g，17.6mmol，2.5當量)添加到託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)和o-苯基氯硫代甲酸酯(2.14g，7.04mmol，1.1當量)於二氯甲烷(40ml)中的混合物中。將反應混合物加熱至回流持續3小時。然後添加(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，6.4mmol，1當量)，並使混合物回流持續另外12小時。在大部分託法替尼被消耗後，在減壓下去除溶劑，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(1.16g，產率：33.4％)；ms(m/z):c26h38n8o3s的[m+h]+計算值，543.28；實驗值，543.2。[0588]步驟2：n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽的製備[0589][0590]遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲硫代醯胺)丁基)氨基甲酸叔丁酯(1.16g，2.14mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1g，產率：100％)；ms(m/z):c21h30n8os的[m+h]+計算值，443.23；實驗值，443.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.36(d,j＝36.1hz,2h),6.92(s,1h),4.63(d,j＝1.2hz,1h),4.1-3.75(m,4h),3.39(s,3h),3.23(s,4h),2.96(t,j＝7.5hz,3h),2.47(s,1h),2.0-1.6(m,5h),1.23-1.06(m,4h).[0591]步驟3：n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0592][0593]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.170g，0.42mmol，1當量)和n-(4-氨基丁基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.42mmol，1當量)提供標題化合物(0.18g，產率：53％，dsr＝20％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.8-7.4(m,0.48h),7.0-6.0(m,0.12h),4.7-4.25(m,2h),4.18-3.03(m,12.8h),2.47(br,0.2h),2.03(s,3h),1.83(br,1h),1.30(br,0.2h),1.15-1.0(m,0.6h).[0594]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.196g，產率：56.8％，dsr＝30％)[0595]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.203g，產率：58.8％，dsr＝8％)。[0596]實施例23[0597]n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0598][0599]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺)苄基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0600][0601]遵循實施例22中的步驟1，託法替尼(3g，9.6mmol，1當量)和(4-氨基苄基)氨基甲酸叔丁酯(2.134g，9.6mmol，1當量)產生標題產物(0.3g，產率：5.5％)；ms(m/z):c29h36n8o3s的[m+h]+計算值，577.26；實驗值，577.2。[0602]步驟2：n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽的製備[0603][0604]遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺)苄基)氨基甲酸叔丁酯(0.375g，0.65mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.26g，產率：78.8％)；ms(m/z):c24h28n8os的[m+h]+計算值，477.21；實驗值，477.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.43-8.30(m,2h),7.85(d,j＝8.1hz,2h),7.51(d,j＝8.1hz,2h),6.94(s,1h),4.1-3.65(m,6h),3.63-3.25(m,6h),2.47(s,1h),1.93-1.56(m,2h),1.15-1.05(m,3h).[0605]步驟3：n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0606][0607]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.157g，0.39mmol，1當量)和n-(4-(氨基甲基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.39mmol，1當量)提供標題化合物(0.18g，產率：55％，dsr＝12％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.5-6.75(m,0.91h),4.52(m,3h),4.24-2.85(m,10.45h),2.55-2.42(m,0.12h),2.03(s,3h),1.30(m,0.24h),1.13(m,0.36h).[0608]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.166g，產率：49.8％，dsr＝24.3％)。[0609]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.132g，產率：39.7％，dsr＝14.7％)。[0610]實施例24[0611]n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0612][0613]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0614][0615]遵循實施例22中的步驟1，託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)和(4-氨基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.512g，6.4mmol，1當量)產生標題產物(0.78g，產率：20.6％)；ms(m/z):c30h38n8o3s的[m+h]+計算值，591.28；實驗值，591.2。[0616]步驟2：n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽的製備[0617][0618]遵循實施例1中的步驟2，(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.55g，0.931mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.49g，產率：100％)；ms(m/z):c25h30n8os的[m+h]+計算值，491.23；實驗值，491.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.43-8.30(m,2h),7.73(d,j＝7.7hz,2h),7.34(d,j＝7.9hz,2h),6.95(s,1h),4.69(s,1h),3.97-3.71(m,3h),3.61-3.37(m,4h),3.23-3.04(m,4h),2.95(t,2h),2.48(s,1h),1.92-1.62(m,2h),1.12(dd,j＝13.9,6.0hz,3h).[0619]步驟3：n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0620][0621]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.153g，0.38mmol，1當量)和n-(4-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.38mmol，1當量)提供標題化合物(0.18g，產率：55％，dsr＝14％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.27-6.85(m,0.98h),4.46(br,2h),3.97-3.15(m,11.96h),2.50-2.35(m,0.14h),1.98(s,3h),1.3-1.2(m,0.14h),1.1-0.95(m,0.42h).[0622]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.185g，產率：56％，dsr＝15％)。[0623]實施例25[0624]n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0625][0626]步驟1：(1-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)-1-硫代氧-5,8,11-三氧雜-2-氮雜三癸-13-基)氨基甲酸叔丁酯的製備[0627][0628]遵循實施例22中的步驟1，託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)和(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.871g，6.4mmol，1當量)產生標題產物(1.12g，產率：27％)；ms(m/z):c30h46n8o6s的[m+h]+計算值，647.33；實驗值，647.2。[0629]步驟2：n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽的製備[0630][0631]遵循實施例1中的步驟2，(1-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)-1-硫代氧-5,8,11-三氧雜-2-氮雜三癸-13-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1g，1.7mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.84g，產率：85％)；ms(m/z):c25h38n8o4s的[m+h]+計算值，547.27；實驗值，547.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.5-8.0(m,2h),6.61(s,1h),4.75-4.40(m,2h),4.05-3.5(m,18h),3.40-3.3(m,6h),2.45(br,1h),2.00-1.6(m,2h),1.17-1.04(m,3h).[0632]步驟3：n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺與ha的綴合物的製備[0633][0634]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.137g，0.34mmol，1當量)和n-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.34，1當量)提供標題化合物(0.17g，產率：55％，dsr＝31％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.2-7.6(m,0.43h),7.4-6.8(m,0.21h),6.80-6.0(m,0.3h),4.65-4.1(m,4.96h),4.0-3.0(m,15h),3.25(m,3.09h),2.30(br,0.31h),1.93(s,3h),1.62-1.15(m,0.62h),1.10-0.75(m,0.93h)。在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.185g，產率：58.8％，dsr＝25％)。[0635]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.231g，產率：73.4％，dsr＝30％)。[0636]實施例26[0637](4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[0638][0639]步驟1：n6-(叔丁氧基羰基)-n2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯的製備[0640][0641]遵循實施例22中的步驟1，託法替尼(2g，6.4mmol，1當量)和n6-(叔丁氧基羰基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽(1.9g，6.4mmol，1當量)產生標題產物(0.675g，產率：17.2％)；ms(m/z):c29h42n8o5s的[m+h]+計算值，615.30；實驗值，615.2。[0642]步驟2：(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽的製備[0643][0644]遵循實施例1中的步驟2，n6-(叔丁氧基羰基)-n2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯(0.625g，1.017mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.56g，產率：100％)；ms(m/z):c24h34n8o3s的[m+h]+計算值，515.25；實驗值，515.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.45(s,1h),8.33(s,1h),6.92(s,1h),5.09(t,j＝6.2hz,1h),4.63(br,1h),3.95-3.67(m,5h),3.60-3.28(m,4h),3.23(s,3h),2.88(br,2h),2.47(s,1h),2.21-1.96(m,2h),1.92-1.42(m,6h),1.10(d,j＝6.8hz3h).[0645]步驟3：(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[0646][0647]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.145g，0.36mmol，1當量)和(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽(0.2g，0.36mmol，1當量)提供標題化合物(0.13g，產率：41％，dsr＝10％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.75-7.5(m,0.27h),6.87(br,0.03h),5.25(m,0.14h),4.65-4.21(m,1.86h),4.0-2.8(m,11.6h),2.44(br,0.1h),2.00(s,3h),1.7-1.4(m,0.62h),1.28(t,0.1h),1.14-1.0(m,0.3h).[0648]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.117g，產率：36.3％，dsr＝10％)。[0649]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.161g，產率：50％，dsr＝5.7％)。[0650]實施例27[0651]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(氨基甲基)苄酯與ha的綴合物的製備[0652][0653]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄酯的製備[0654][0655]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.32g，4.214mmol，1當量)和(4-(羥甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯(2g，4.214mmol，1當量)產生標題產物(1.3g，產率：53.5％)；ms(m/z):c30h37n7o5的[m+h]+計算值，576.29；實驗值，576.2。[0656]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(氨基甲基)苄酯鹽酸鹽的製備[0657][0658]遵循實施例1中的步驟2，4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)苄酯(1.3g，2.25mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1g，產率：87％)；ms(m/z):c25h29n7o3的[m+h]+計算值，476.23；實驗值，476.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.30(dd,j＝36.1,9.5hz,1h),7.75-7.23(m,5h),6.84(d,j＝15.6hz,1h),4.70(br,3h),4.35-3.71(m,6h),3.71-3.23(m,5h),2.50(d,j＝33.4hz,1h),2.03-1.62(m,2h),1.17-0.99(m,3h).[0659]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(氨基甲基)苄酯與ha的綴合物的製備[0660][0661]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.157g，0.39mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(氨基甲基)苄酯鹽酸鹽(0.2g，0.39mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：60％，dsr＝22％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.37-7.89(m,0.18h),7.75-7.22(m,1.36h),4.71-4.32(m,2.75h),4.29-3.20(m,12.02h),3.14(br,0.34h),2.32(br,0.22h),2.02(s,3h),1.31(br,0.45h),1.06(br,0.65h).[0662]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.2g，產率：60％，dsr＝43.6％)。[0663]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.175g，產率：52.6％，dsr＝35.3％)。[0664]實施例28[0665]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-氨基-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯與ha的綴合物的製備[0666][0667]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯的製備[0668][0669]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(3g，9.62mmol，1當量)產生標題產物(1.7g，產率：28％)；ms(m/z):c32h39n7o7的[m+h]+計算值，634.29；實驗值，634.2。[0670]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-氨基-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯鹽酸鹽的製備[0671][0672]遵循實施例1中的步驟2，4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯(1g，1.578mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.9g，產率：100％)；ms(m/z):c27h31n7o5的[m+h]+計算值，534.24；實驗值，534.2。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.55-8.34(m,1h),7.52-7.42(m,3h),7.41-6.74(m,3h),5.28(s,1h),4.46-4.21(m,1h),4.09-3.85(m,5h),3.82(d,j＝4.2hz,3h),3.76-3.39(m,5h),3.26-3.03(m,1h),2.55(br,1h),2.0-1.65(m,2h),1.16(dd,j＝13.2,5.2hz,3h).[0673]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-氨基-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯與ha的綴合物的製備[0674][0675]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.141g，0.35mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-((s)-2-氨基-3-甲氧基-3-氧代丙基)苯酯鹽酸鹽(0.2g，0.35mmol，1當量)提供標題化合物(0.2g，產率：32％，dsr＝20％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm7.87–6.43(m,1.4h),4.51(m,2h),3.70(m,14.35h),2.48(m,0.2h),1.99(s,3h),1.81–1.67(m,0.2h),1.29(m,0.2h),1.06(m,0.6h).[0676]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.16g，產率：50％，dsr＝22％)。[0677]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.238g，產率：74.5％，dsr＝22％)。[0678]實施例29[0679]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-氨基辛酯與ha的綴合物的製備[0680][0681]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-((叔丁氧基羰基)氨基)辛酯的製備[0682][0683]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1.15g，3.67mmol，1當量)和(8-羥基辛基)氨基甲酸叔丁酯(0.9g，3.668mmol，1當量)產生標題產物(0.7g，產率：33％)；ms(m/z):c30h45n7o5的[m+h]+計算值，584.35；實驗值，584.3。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δppm8.46(d,j＝8.8hz,1h),7.46(dd,j＝10.6,4.2hz,1h),6.63(d,j＝4.1hz,1h),5.13(s,1h),4.65-4.33(m,2h),4.16-3.99(m,1h),3.89-3.74(m,1h),3.69-3.43(m,4h),3.37(d,j＝18.7hz,2h),3.10(d,j＝6.4hz,2h),2.62-2.41(m,1h),2.02-1.70(m,4h),1.45-1.3(m,12h),1.08(dd,j＝14.0,7.1hz,3h).[0684]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-氨基辛酯鹽酸鹽的製備[0685][0686]遵循實施例1中的步驟2，4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-((叔丁氧基羰基)氨基)辛酯(0.7g，1.2mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.6g，產率：96％)；ms(m/z):c25h37n7o3的[m+h]+計算值，484.30；實驗值，484.2。[0687]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-氨基辛酯與ha的綴合物的製備[0688][0689]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.153g，0.38mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸8-氨基辛酯鹽酸鹽(0.2g，0.38mmol，1當量)提供標題化合物(0.19g，產率：54％，dsr＝14％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.39(m,0.14h),7.67(m,0.14h),6.95(m,0.14h),4.53(m,2h),3.73(m,12h),2.51(m,0.24h),2.04(s,3h),1.87(m,0.82h),1.48(m,0.92h),1.11(m,0.57h).[0690]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.191g，產率：58.23％，dsr＝5.3％)。[0691]實施例30[0692]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[0693][0694]步驟1：4-[[(3s,4s)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酯的製備[0695][0696]將三乙胺(2.7ml，19.2mmol)添加到託法替尼(3000mg，9.6mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(3.22mg，10.6mmol)於二氯甲烷(60ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並在此溫度下攪拌5小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。添加4-(叔丁氧基羰基氨基)-1-丁醇(2000mg，10.6mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。用二氯甲烷稀釋溶液並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝1:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(2.64g，產率：52.1％)。ms(m/z):c26h37n7o5的[m+h]+計算值，528.28；實驗值，528.2。[0697]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-氨基丁酯鹽酸鹽的製備[0698][0699]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酯(2.955g，5.6mmol)提供呈白色固體的標題化合物(2.59g，產率：100％)。ms(m/z):c21h29n7o3的[m+h]+計算值，428.23；實驗值，428.2。1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.39(d,j＝6.9hz,1h),7.63(d,j＝3.8hz,1h),6.96(s,1h),5.04(s,1h),4.53(t,j＝6.2hz,2h),4.01–3.70(m,4h),3.67–3.54(m,1h),3.41(d,j＝30.2hz,4h),3.02(dd,j＝17.9,10.6hz,2h),2.46(s,1h),1.97–1.59(m,6h),1.12–0.96(m,3h).[0700]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[0701][0702]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，161.2mg，0.399mmol)、4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-氨基丁酯鹽酸鹽(200mg，0.399mmol)提供標題化合物(0.13g，產率：36.7％，dsr＝12％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.20–8.02(m,0.12h),7.53–7.25(m,0.12h),6.82–6.62(m,0.12h),4.53–4.15(m,2.12h),3.93–2.89(m,11.56h),2.02–1.44(m,3.6h),1.18–1.09(m,0.12h),1.01–0.82(m,0.36h).[0703]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.125g，產率：35.3％，dsr＝37％)。[0704]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.134g，產率：37.8％，dsr＝32％)。[0705]實施例31[0706]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基苯基)酯與ha的綴合物的製備[0707][0708]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(叔丁氧基羰基氨基)苯酯]的製備[0709][0710]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1562mg，5mmol)和(4-羥基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1256mg，6mmol)提供標題化合物(1.1g，產率：40％)。ms(m/z):c28h33n7o5的[m+h]+計算值，548.25；實驗值，548.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.48(d,j＝8.0hz,1h),8.14–8.05(m,1h),7.61(dd,j＝8.0,4.2hz,1h),7.42(m,1h),7.23(d,j＝8.9hz,2h),6.89–6.74(m,1h),6.58(s,1h),5.15(d,j＝3.9hz,1h),4.11–4.01(m,1h),3.88–3.78(m,1h),3.67–3.45(m,4h),3.43–3.31(m,3h),2.59–2.44(m,1h),1.94(tdd,j＝23.2,8.8,4.5hz,1h),1.83–1.69(m,1h),1.51(m,9h),1.15–1.03(m,3h).[0711]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基苯基)酯鹽酸鹽的製備[0712][0713]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(叔丁氧基羰基氨基)苯酯](0.8g，1.46mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.52g，產率：73.6％)；ms(m/z):c23h25n7o3的[m+h]+計算值，448.20；實驗值，448.3。[0714]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基苯基)酯與ha的綴合物的製備[0715][0716]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，116mg，0.288mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基苯基)酯鹽酸鹽(150mg，0.288mmol)提供標題化合物(0.126g，產率：48.3％，dsr：10％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.17(m,0.1h),7.72–7.51(m,0.2h),7.38–7.11(m,0.3h),6.90–6.78(m,0.1h),4.53–4.25(m,2.1h),4.07–3.09(m,10.9h),2.49–2.34(m,0.1h),2.12–1.78(m,3.1h),1.61–1.50(m,0.1h),1.26–0.92(m,0.3h).[0717]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.123g，產率：47.1％，dsr：24％)。[0718]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.138g，產率：52.9％，dsr：8％)。[0719]實施例32[0720]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環丁烷-3-基酯與ha的綴合物的製備[0721][0722]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(1-叔丁氧基羰基氨基-3-基)酯的製備[0723][0724]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1249.5mg，4mmol)和3-羥基氮雜環丁烷-1-甲酸叔丁酯(831.4mg，4.8mmol)提供標題化合物(0.48g，產率：23.4％)。ms(m/z):c25h33n7o5的[m+h]+計算值，512.25；實驗值，512.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.47(d,j＝8.4hz,1h),7.45(dd,j＝11.6,4.2hz,1h),6.65(dd,j＝15.6,4.0hz,1h),5.14(d,j＝3.0hz,1h),4.38(dd,j＝10.0,7.0hz,2h),4.11–3.75(m,3h),3.67–3.45(m,5h),3.41–3.33(m,3h),2.59–2.41(m,1h),2.02–1.84(m,1h),1.76(ddd,j＝23.8,13.5,8.5hz,2h),1.45(d,j＝6.8hz,9h),1.11–1.02(m,3h).[0725]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環丁烷-3-基酯鹽酸鹽的製備[0726][0727]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(1-叔丁氧基羰基氮雜環丁烷-3-基)酯(0.44g，0.86mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.366g，產率：95％)。ms(m/z):c20h25n7o3的[m+h]+計算值，412.20；實驗值，412.3。[0728]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環丁烷-3-基酯與ha的綴合物的製備[0729][0730]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，83.2mg，0.207mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環丁烷-3-基酯鹽酸鹽(100mg，0.207mmol)提供標題化合物(0.078g，產率：43.4％，dsr：12％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.27–8.17(s,0.12h),7.63–7.50(m,0.12h),6.92–6.78(m,0.12h),4.58–4.26(m,7.0hz,2.12h),4.07–3.05(m,11.56h),2.45–2.35(m,0.12h),2.13–1.55(m,3.24h),1.23(m,0.12h),1.11–0.89(m,0.36h).[0731]實施例33[0732]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸吡咯烷-3-基酯與ha的綴合物的製備[0733][0734]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-基)酯的製備nmr(400mhz,d2o)δppm8.34–8.18(m,0.2h),7.66–7.38(m,0.2h),6.87–6.68(m,0.2h),4.58–4.26(m,2.2h),4.07–3.07(m,12.6h),2.53–2.19(m,0.6h),2.10–1.60(m,3.4h),1.29–1.18(m,0.2h),1.15–0.86(m,0.6h).[0743]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.185g，產率：52.2％，dsr：33％)。[0744]實施例34[0745]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基丙酯與ha的綴合物的製備[0746][0747]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酯的製備[0748][0749]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1249.5mg，4mmol)和3-(boc-氨基)-1-丙醇(841.1mg，4.8mmol)提供標題化合物(1.03g，產率：50％)。ms(m/z):c25h35n7o5的[m+h]+計算值，514.26；實驗值，514.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.53(d,j＝10.4hz,1h),7.53(dd,j＝10.8,4.0hz,1h),7.15(s,1h),6.67(d,j＝4.1hz,1h),5.12(d,j＝30.4hz,1h),4.57(dd,j＝14.1,8.5hz,2h),4.06–3.78(m,2h),3.67–3.48(m,4h),3.47–3.41(m,2h),3.41–3.33(m,3h),2.56–2.36(m,1h),2.09–2.01(m,1h),1.93(tdd,j＝22.0,8.8,4.5hz,1h),1.83–1.65(m,2h),1.45(s,9h),1.07(dd,j＝16.9,7.1hz,3h).[0750]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基丙酯鹽酸鹽的製備[0751][0752]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-(叔丁氧基羰基氨基)丙酯(1.03g，2mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.9g，100％)。ms(m/z):c20h27n7o3的[m+h]+計算值，414.21；實驗值，414.3。[0753]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基丙酯與ha的綴合物的製備[0754][0755]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，165.6mg，0.411mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基丙基酯鹽酸鹽(200mg，0.411mmol)提供標題化合物(0.162g，產率：45.2％，dsr：15％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.34–8.20(m,0.15h),7.63–7.50(m,0.15h),6.91–6.78(m,0.15h),4.49–4.31(m,2.15h),4.06–3.07(m,11.95h),2.44–2.35(m,0.15h),2.16–1.56(m,3.3h),1.21(t,j＝7.0hz,0.15h),1.05–0.90(m,0.45h).[0756]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.161g，產率：44.9％，dsr：17％)。[0757]實施例35[0758]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基環己基)酯與ha的綴合物的製備[0759][0760]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸[4-(叔丁氧基羰基氨基)環己酯]的製備[0761][0762]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1249.5mg，4mmol)和(4-羥基環己基)氨基甲酸叔丁酯(1033.4mg，4.8mmol)提供標題化合物(0.851g，產率：45％)。ms(m/z):c28h39n7o5的[m+h]+計算值，554.30；實驗值，554.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.46(d,j＝5.8hz,1h),7.42(dd,j＝9.5,4.2hz,1h),6.61(d,j＝4.1hz,1h),5.19–5.04(m,1h),5.03–4.89(m,1h),4.45(s,1h),4.08–3.76(m,2h),3.63–3.46(m,4h),3.36(d,j＝16.4hz,3h),2.49(ddd,j＝24.3,11.9,6.4hz,1h),2.26–2.06(m,4h),1.93(dddd,j＝18.5,13.7,8.9,4.4hz,1h),1.82–1.59(m,4h),1.45(s,9h),1.34(td,j＝13.3,2.7hz,2h),1.15–0.99(m,3h).[0763]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基環己基)酯鹽酸鹽的製備[0764][0765]遵循實施例1中的步驟2，[4-(叔丁氧基羰基氨基)環己基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(0.62g，1.12mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.55g，產率：100％)。ms(m/z):c23h31n7o3的[m+h]+計算值，454.24；實驗值，454.3。[0766]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基環己基)酯與ha的綴合物的製備[0767][0768]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，153mg，0.38mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(4-氨基環己基)酯鹽酸鹽(200mg，0.38mmol)提供標題化合物(0.173g，產率：49.9％，dsr：11％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.24–8.02(m,0.11h),7.57–7.37(m,0.11h),6.80–6.64(m,0.11h),4.96–4.86(m,0.11h),4.57–4.27(m,2h),4.07–3.04(m,10.99h),2.46–2.30(m,0.11h),2.27–1.76(m,3.77h),1.74–1.33(m,0.66h),1.22(d,j＝6.9hz,0.11h),1.09–0.85(m,0.33h).[0769]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.162g，產率：46.7％，dsr：27％)。[0770]實施例36[0771]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-哌啶酯與ha的綴合物的製備[0772][0773]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)酯的製備[0774][0775]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(1249.5mg，4mmol)和4-羥基哌啶-1-甲酸叔丁酯(966mg，4.8mmol)提供標題化合物(0.537g，產率：24.9％)。ms(m/z):c27h37n7o5的[m+h]+計算值，540.28；實驗值，540.2。[0776]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-哌啶酯鹽酸鹽的製備[0777][0778]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)酯(0.47g，0.87mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.25g，產率：58％)。ms(m/z):c22h29n7o3的[m+h]+計算值，440.23；實驗值，440.3。[0779]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-哌啶酯與ha的綴合物的製備[0780][0781]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，169.7mg，0.421mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸4-哌啶基酯鹽酸鹽(200mg，0.421mmol)提供標題化合物0.161g，產率：44.4％，dsr：11％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.27–8.04(m,0.11h),7.61–7.38(m,0.11h),6.84–6.68(m,0.11h),4.61–4.28(m,2.11h),4.12–3.05(m,11.43h),2.41–2.30(m,0.11h),2.19–1.58(m,3.66h),1.20(t,j＝6.9hz,0.11h),1.08–0.85(m,0.33h).[0782]實施例37[0783]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(2-氨基乙氧基)乙酯與ha的綴合物的製備[0784][0785]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基]乙酯的製備[0786][0787]將三乙胺(1.1ml，8mmol)添加到託法替尼(1250mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於二氯甲烷(40ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。添加(2-(2-羥基乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(985.2mg，4.8mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。用二氯甲烷稀釋溶液並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並且然後在減壓下濃縮以提供標題化合物(1.3g，產率：59.8％)。ms(m/z):c26h37n7o6的[m+h]+計算值，544.28；實驗值，544.2。[0788]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(2-氨基乙氧基)乙酯鹽酸鹽的製備[0789][0790]遵循實施例1中的步驟2，4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基]乙酯(1.3g，2.39mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.1g，產率：95.9％)。ms(m/z):c21h29n7o4的[m+h]+計算值，444.22；實驗值，444.2。[0791]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(2-氨基乙氧基)乙酯與ha的綴合物的製備[0792][0793]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，156.4mg，0.388mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(2-氨基乙氧基)乙酯鹽酸鹽(200mg，0.388mmol)提供標題化合物(0.175g，產率：50％，dsr：15％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.23–8.09(m,0.15h),7.58–7.39(m,0.15h),6.86–6.65(m,0.15h),4.58–4.25(m,2.15h),4.02–2.94(m,12.55h),2.43–2.28(m,0.15h),2.16–1.56(m,3.3h),1.10–0.89(m,0.45h).[0794]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.182g，產率：52％，dsr：17％)。[0795]實施例38[0796](2s)-6-氨基-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯的綴合物的製備[0797][0798]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯的製備[0799][0800]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(1323mg，3mmol)、6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(1336mg，4.5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，863mg，4.5mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，608mg，4.5mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(2.08ml，15mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.726g，產率：83.3％)。ms(m/z):c33h49n9o7的[m+h]+計算值，684.37；實驗值，684.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm9.89(dd,j＝13.5,7.5hz,1h),8.29(d,j＝9.0hz,1h),7.72(dd,j＝11.9,4.0hz,1h),6.75–6.50(m,2h),5.14(s,1h),4.75–4.48(m,2h),4.12–3.76(m,2h),3.73–3.32(m,9h),3.11(d,j＝5.4hz,2h),2.58–2.42(m,1h),2.41–2.25(m,2h),2.09–1.65(m,6h),1.54–1.32(m,15h),1.10(dd,j＝12.7,7.1hz,3h).[0801]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[0802][0803]遵循實施例1中的步驟2，(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯(1.5g，2.137mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.426g，產率：99.6％)。ms(m/z):c28h41n9o5的[m+h]+計算值，584.32；實驗值，584.1。[0804]步驟3：(2s)-6-氨基-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯的綴合物的製備[0805][0806]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，123mg，0.305mmol)和(2s)-6-氨基-2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(200mg，0.36mmol)提供標題化合物(0.13g，產率：45％，dsr：5％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.29–8.16(m,0.05h),7.64–7.51(m,0.05h),6.82–6.65(m,0.05h),4.57–4.22(m,2.05h),3.99–2.89(m,10.75h),2.42–2.29(m,0.1h),2.14–1.55(m,3.3h),1.47–1.35(m,0.3h),1.24–1.11(m,0.15h).[0807]實施例39[0808]n-[4-(2-氨基乙基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0809][0810]步驟1：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸的製備[0811][0812]將三乙胺(33.9g，336.3mmol)添加到託法替尼(30g，96.1mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(43.3g，142.4mmol)於二氯甲烷(300ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並在此溫度下攪拌16小時。然後將反應混合物冷卻到0～10℃。添加300ml的4-氨基丁酸(19.8g，192.2mmol)、三乙胺(19.4g，192.2mmol)和四丁基溴化銨(0.3g)的水溶液。將反應混合物在0～10℃下攪拌16小時，使用20％檸檬酸水溶液將反應混合物的ph值調整到3-4，並用10％檸檬酸水溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌有機層。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(10.3g，24％)。ms(m/z):c21h27n7o4的[m+h]+計算值，442.2；實驗值，442.3。[0813]步驟2：n-[2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0814][0815]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(1323mg，3mmol)、n-boc-乙二胺(721mg，4.5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，863mg，4.5mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，607.5mg，4.5mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(1.25ml，9mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.58g，產率：90％)。ms(m/z):c28h41n9o5的[m+h]+計算值，584.32；實驗值，584.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.02–9.67(m,1h),8.29(d,j＝8.9hz,1h),7.72(dd,j＝10.5,4.0hz,1h),6.58(dd,j＝14.2,10.2hz,2h),5.32(d,j＝17.1hz,1h),5.13(s,1h),4.20–3.70(m,2h),3.69–3.44(m,6h),3.39–3.14(m,7h),2.60–2.40(m,1h),2.26(dt,j＝15.3,7.4hz,2h),2.11–1.83(m,3h),1.83–1.70(m,1h),1.41(d,j＝28.2hz,9h),1.09(dd,j＝12.6,7.1hz,3h).[0816]步驟3：n-[4-(2-氨基乙基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0817][0818]遵循實施例1中的步驟2，n-[2-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.18g，2mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.04g，產率：100％)。ms(m/z):c23h33n9o3的[m+h]+計算值，484.27；實驗值，484.3。[0819]步驟4：n-[4-(2-氨基乙基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0820][0821]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，145mg，0.36mmol)和n-[4-(2-氨基乙基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.36mmol)提供標題化合物(0.174g，產率：51.4％，dsr：30％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.24–8.13(m,0.2h),7.61–7.47(m,0.2h),6.79–6.61(m,0.2h),4.58–4.16(m,2.2h),4.10–2.77(m,13h),2.42–2.18(m,0.6h),2.04–1.55(m,4h),1.06–0.85(m,0.6h).[0822]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.186g，產率：54.9％，dsr：39％)。[0823]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.189g，產率：55.8％，dsr：30％)。[0824]實施例40[0825]n-[4-(4-氨基丁基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0826][0827]步驟1：n-[4-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0828][0829]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(886mg，2mmol)、n-boc-1,4-丁二胺(564mg，3mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，575.1mg，3mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，405mg，3mmol)溶解於二氯甲烷(30ml)中並且添加三乙胺(0.84ml，6mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.52g，產率：42.5％)。ms(m/z):c30h45n9o5的[m+h]+計算值，612.35；實驗值，612.1。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm9.62(s,1h),8.29(t,j＝14.4hz,1h),7.77(s,1h),7.61(d,j＝22.9hz,1h),6.77(d,j＝28.6hz,2h),4.86(s,1h),4.22–3.61(m,5h),3.43–3.33(m,3h),3.27(s,3h),2.94(d,j＝25.8hz,2h),2.86(s,2h),2.37(s,1h),2.13(t,j＝7.0hz,2h),1.91–1.39(m,5h),1.33(s,12h),0.97(t,j＝14.9hz,3h).[0830]步驟2：n-[4-(4-氨基丁基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0831][0832]遵循實施例1中的步驟2，n-[4-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯(0.5g，0.818mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.32g，產率：83％)。ms(m/z):c25h37n9o3的[m+h]+計算值，512.30；實驗值，512.3。[0833]步驟3：n-[4-(4-氨基丁基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0834][0835]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，147.2mg，0.365mmol)和n-[4-(4-氨基丁基氨基)-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.365mmol)提供標題化合物(0.162g，產率：47.5％，dsr：33％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–7.86(mhz,0.33h),7.64–7.18(m,0.33h),6.81–6.32(m,0.33h),4.52–4.28(m,2.33h),4.06–2.81(m,14.95h),2.41–2.21(m,0.99h),1.99–1.63(m,4.32h),1.47–1.26(m,1.32h),1.11-0.91(m,0.99h).[0836]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.243g，產率：71.3％，dsr：18％)。[0837]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.168g，產率：49.3％，dsr：20％)。[0838]實施例41[0839]n-[4-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0840][0841]步驟1：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸的製備[0842][0843]遵循實施例1中的步驟1，託法替尼(10g，32mmol)和4-氨基苯甲酸(8.7g，64mmol)提供標題化合物(9.5g，產率：62.5％)。ms(m/z):c24h25n7o4的[m+h]+計算值，476.1；實驗值，476.3。[0844]步驟2：n-[4-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0845][0846]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(950mg，2mmol)、n-boc-1,4-丁二胺(564mg，3mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，575.1mg，3mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，405mg，3mmol)溶解於二氯甲烷(24ml)中並且添加三乙胺(0.84ml，6mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝10:100～50:100)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.89g，產率：69％)。ms(m/z):c33h43n9o5的[m+h]+計算值，646.33；實驗值，646.1。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm12.21(s,1h),8.42(s,2h),7.89(d,j＝7.6hz,2h),7.73(d,j＝7.8hz,3h),6.84(d,j＝55.3hz,2h),4.89(s,1h),4.18–3.60(m,4h),3.47–3.32(m,2h),3.23(s,5h),2.92(s,2h),2.42–2.33(m,1h),1.90–1.17(m,15h),1.01(d,j＝5.2hz,3h).[0847]步驟3：n-[4-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0848][0849]遵循實施例1中的步驟2，n-[4-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯(0.87g，1.35mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1g，產率：83％)。ms(m/z):c28h35n9o3的[m+h]+計算值，546.28；實驗值，546.3。[0850]步驟4：n-[4-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0851][0852]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，138.6mg，0.344mmol)和n-[4-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.344mmol)提供標題化合物(0.26g，產率：93.9％，dsr：23％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.32–8.12(m,0.23h),7.88–7.23(m,1.15h),6.80–6.64(m,0.23h),4.54–4.30(m,2.23h),3.99–2.81(m,12.99h),2.06–1.37(m,4.61h),1.04–0.87(m,0.69h).[0853]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.145g，產率：52.4％，dsr：15％)。[0854]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.104g，產率：37.5％，dsr：33％)。[0855]實施例42[0856]n-[2-(4-氨基丁基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0857][0858]步驟1：2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸的製備[0859][0860]將三乙胺(97.2g，960.3mmol)添加到託法替尼(100g，320.1mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(146g，480.1mmol)於二氯甲烷(2000ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並在此溫度下攪拌16小時。然後將反應混合物冷卻到0～10℃。添加300ml的甘氨酸(48.1g，640.2mmol)、三乙胺(32g，316.8mmol)和四丁基溴化銨(10.3g)的水溶液。將反應混合物在0～10℃下攪拌16小時，使用乙酸將反應混合物的ph值調整到3-4，並用0.5n鹽酸溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌有機層。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:50～1:10)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(89.8g，產率：67.8％)。ms(m/z):c19h23n7o4的[m+h]+計算值，414.1；實驗值，414.5。[0861]步驟2：n-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0862][0863]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(619.5mg，1.5mmol)、n-boc-1,4-丁二胺(423mg，2.25mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，431.3mg，2.25mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，303.7mg，2.25mmol)溶解於二氯甲烷(10ml)中並且添加三乙胺(0.62ml，4.5mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:40)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.65g，產率：74％)。ms(m/z):c28h41n9o5的[m+h]+計算值，584.32；實驗值，584.2。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm9.92(t,j＝5.2hz,1h),8.32(d,j＝5.8hz,1h),8.07(t,j＝5.4hz,1h),7.63(d,j＝4.0hz,1h),6.79(d,j＝26.3hz,2h),4.86(s,1h),4.16–3.89(m,4h),3.86–3.54(m,2h),3.43–3.33(m,2h),3.28(s,3h),3.03(t,j＝19.0hz,2h),2.88(d,j＝5.7hz,2h),2.38(s,1h),1.72(dt,j＝78.7,27.2hz,3h),1.45–1.18(m,12h),1.00(d,j＝7.1hz,3h).[0864]步驟3：n-[2-(4-氨基丁基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0865][0866]遵循實施例1中的步驟2，n-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯(0.3g，0.51mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.26g，產率：98％)。ms(m/z):c23h33n9o3的[m+h]+計算值，484.27；實驗值，484.3。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm9.90(s,1h),8.34(d,j＝6.7hz,1h),8.21(s,1h),7.91(s,2h),7.66(s,1h),6.84(s,1h),4.85(s,1h),4.13–3.66(m,7h),3.39(s,1h),3.28(s,1h),3.10(d,j＝5.3hz,2h),2.70(d,j＝37.4hz,2h),2.34(d,j＝27.1hz,2h),1.77(d,j＝41.2hz,1h),1.55–1.39(m,4h),1.15(t,j＝7.1hz,2h),1.00(d,j＝6.5hz,3h).[0867]步驟4：n-[2-(4-氨基丁基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0868][0869]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，101mg，0.25mmol)和n-[2-(4-氨基丁基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(130mg，0.25mmol)提供標題化合物(0.102g，產率：45％，dsr：40％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–7.85(m,0.4h),7.63–7.18(m,0.4h),6.83–6.31(m,0.4h),4.58–4.28(m,2.4h),4.15–2.90(m,16h),2.43–2.10(m,0.8h),2.06–1.69(m,4.4h),1.59–1.37(m,1.2h),1.19–0.87(m,0.8h).[0870]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.092g，產率：40.6％，dsr：26％)。[0871]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.143g，產率：63％，dsr：21％)。[0872]實施例43[0873]n-[2-(2-氨基乙基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0874][0875]步驟1：n-[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0876][0877]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(1239mg，3mmol)、n-boc-乙二胺(721mg，4.5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，863mg，4.5mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，607.5mg，4.5mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(1.25ml，9mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:60)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.1g，產率：66％)。ms(m/z):c26h37n9o5的[m+h]+計算值，556.29；實驗值，556.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.37–10.14(m,1h),8.31(d,j＝6.3hz,1h),7.76–7.54(m,1h),7.03(t,j＝18.4hz,1h),6.59(d,j＝3.9hz,1h),5.13(s,1h),5.01(s,1h),4.26–4.11(m,2h),4.09–3.72(m,2h),3.67–3.46(m,4h),3.42–3.33(m,5h),3.28(dd,j＝10.8,5.5hz,2h),2.50(ddd,j＝18.5,12.3,6.0hz,1h),2.09–1.84(m,1h),1.83–1.72(m,1h),1.54–1.30(m,9h),1.09(dd,j＝11.8,7.1hz,3h).[0878]步驟2：n-[2-(2-氨基乙基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0879][0880]遵循實施例1中的步驟2，n-[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.89g，1.6mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.78g，產率：99％)。ms(m/z):c21h29n9o3的[m+h]+計算值，456.23；實驗值，456.2。[0881]步驟3：n-[2-(2-氨基乙基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0882][0883]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，152.7mg，0.379mmol)和n-[2-(2-氨基乙基氨基)-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.379mmol)提供標題化合物(0.165g，產率：47.7％，dsr：40％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–7.82(m,0.4h),7.60–7.26(m,0.4h),6.77–6.26(m,0.4h),4.60–4.21(m,2.4h),4.08–2.99(m,16h),2.42–2.18(m,0.4h),2.04–1.55(m,3.8h),1.06–0.85(m,1.2h).[0884]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.173g，產率：50％，dsr：28％)。[0885]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.18g，產率：52％，dsr：40％)。[0886]實施例44[0887]n-[2-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0888][0889]步驟1：n-[2-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]苯基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0890][0891]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(1652mg，4mmol)、4-氨基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(1418mg，6mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，1151mg，6mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，810mg，6mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(1.665ml，12mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:150～1:100)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.77g，產率：70％)。ms(m/z):c32h41n9o5的[m+h]+計算值，632.32；實驗值，632.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.59–10.19(m,1h),8.30(dd,j＝17.1,7.1hz,2h),7.67(dd,j＝13.2,4.0hz,1h),7.49(t,j＝11.3hz,2h),7.13(d,j＝8.2hz,2h),6.61(t,j＝4.7hz,1h),5.13(s,1h),4.54(s,1h),4.38–4.23(m,2h),4.13–3.72(m,2h),3.68–3.44(m,4h),3.42–3.24(m,5h),2.75(t,j＝6.8hz,2h),2.50(ddd,j＝19.1,11.9,5.6hz,1h),2.08–1.83(m,1h),1.83–1.64(m,1h),1.43(s,9h),1.09(t,j＝8.2hz,3h).[0892]步驟2：n-[2-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0893][0894]遵循實施例1中的步驟2，n-[2-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.48g，2.345mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.3g，產率：97.7％).ms(m/z):c27h33n9o3的[m+h]+計算值，532.27；實驗值，532.2。[0895]步驟3：n-[2-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0896][0897]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，133.4mg，0.331mmol)和n-[2-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-2-氧代-乙基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.331mmol)提供標題化合物(0.136g，產率：41.5％，dsr：20％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.33–8.06(m,0.2h),7.68–7.50(m,0.2h),7.48–7.13(m,0.8h),6.85–6.67(m,0.2h),4.59–4.23(m,2.2h),4.07–2.84(m,12.8h),2.46–2.22(m,0.4h),2.05–1.70(m,3.2h),1.21–1.25(mz,0.2h),1.07–0.90(m,0.6h).[0898]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.158g，產率：48.2％，dsr：22％)。[0899]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.146g，產率：44.5％，dsr：16％)。[0900]實施例45[0901](2s)-6-氨基-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯與ha的綴合物的製備[0902][0903]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯的製備[0904][0905]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(1239mg，3mmol)、6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(1336mg，4.5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，863mg，4.5mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，608mg，4.5mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(2.1ml，15mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.638g，產率：83.3％)。ms(m/z):c31h45n9o7的[m+h]+計算值，656.34；實驗值，656.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.36(dd,j＝12.6,7.1hz,1h),8.33(d,j＝9.1hz,1h),7.72(dd,j＝12.9,4.0hz,1h),6.72(d,j＝7.8hz,1h),6.61(t,j＝4.2hz,1h),5.14(s,1h),4.63(dt,j＝33.6,16.8hz,2h),4.19(t,j＝14.2hz,2h),4.11–3.76(m,2h),3.73(s,3h),3.66–3.57(m,1h),3.55–3.39(m,3h),3.36(s,2h),3.17–2.98(m,2h),2.59–2.41(m,1h),2.03–1.84(m,2h),1.83–1.68(m,2h),1.53–1.39(m,11h),1.39–1.26(m,3h),1.09(dd,j＝12.3,7.1hz,3h).[0906]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[0907][0908]遵循實施例1中的步驟2，(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯(1.4g，2.137mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.26g，產率：99.6％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c26h37n9o5的[m+h]+計算值，556.29；實驗值，556.2。[0909]步驟3：(2s)-6-氨基-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯與ha的綴合物的製備[0910][0911]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，128.2mg，0.318mmol)和(2s)-6-氨基-2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(200mg，0.318mmol)提供標題化合物(0.131g，產率：40.6％，dsr：30％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.27–7.99(m,0.3h),7.64–7.33(m,0.3h),6.82–6.51(m,0.3h),4.58–4.30(d,j＝28.8hz,2.3h),4.10–2.99(m,14.5h),2.41–2.27(m,0.3h),2.09–1.58(m,4.8h),1.53–1.29(m,0.9h),1.25–0.93(m,0.9h).[0912]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.134g，產率：41.5％，dsr：20％)。[0913]實施例46[0914]n-[4-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0915][0916]步驟1：n-[2-[4-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的製備[0917][0918]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(1764mg，4mmol)、4-氨基苯乙基氨基甲酸叔丁酯(1418mg，6mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，1151mg，6mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，810mg，6mmol)溶解於二氯甲烷(40ml)中並且添加三乙胺(1.66ml，12mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:150～1:100)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(2.02g，產率：76.6％)。ms(m/z):c34h45n9o5的[m+h]+計算值，660.35；實驗值，660.3。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.00(dd,j＝14.1,8.0hz,1h),8.48(d,j＝26.6hz,1h),8.28(d,j＝9.5hz,1h),7.73(dd,j＝10.8,4.0hz,1h),7.54(d,j＝8.3hz,2h),7.13(d,j＝8.1hz,2h),6.60(t,j＝4.6hz,1h),5.14(s,1h),4.56(s,1h),4.12–3.71(m,2h),3.62(t,j＝9.0hz,3h),3.48(s,3h),3.35(d,j＝8.6hz,5h),2.76(t,j＝6.8hz,2h),2.60–2.35(m,3h),2.14–2.04(m,2h),2.02–1.84(m,1h),1.84–1.68(m,1h),1.43(s,9h),1.10(dd,j＝12.0,7.1hz,3h).[0919]步驟2：n-[4-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0920][0921]遵循實施例1中的步驟2，n-[2-[4-[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁醯基氨基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.73g，2.625mmol)提供呈白色固體的標題化合物(1.56g，產率：99.8％)。ms(m/z):c29h37n9o3的[m+h]+計算值，560.30；實驗值，560.1。[0922]步驟3：n-[4-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0923][0924]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，127.3mg，0.316mmol)和n-[4-[4-(2-氨基乙基)苯胺基]-4-氧代-丁基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.316mmol)提供標題化合物(0.154g，產率：47.8％，dsr：33％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.10–7.85(m,0.33h),7.54–7.32(m,0.33h),7.24–6.81(m,1.32h),6.68–6.42(m,0.33h),4.59–4.21(m,2.33h),4.04–2.92(m,14.29h),2.73–2.63(m,0.66h),2.50–2.23(m,0.99h),2.11–1.56(m,3.99h),1.30–1.16(m,0.33h),1.13–0.87(m,0.99h).[0925]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.136g，產率：42.2％，dsr：18％)。[0926]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.158g，產率：49.1％，dsr：17％)。[0927]實施例47[0928]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-(4-哌嗪-1-基苯胺基)乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0929][0930]步驟1：4-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[0931][0932]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(619.5mg，1.5mmol)、4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(624mg，2.25mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，431.3mg，2.25mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，304mg，2.25mmol)溶解於二氯甲烷(20ml)中並且添加三乙胺(0.624ml，4.5mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.55g，產率：54.5％)。ms(m/z):c34h44n10o5的[m+h]+計算值，673.34；實驗值，673.3。ms(m/z):c34h44n10o5的[m+h]+計算值，673.34；實驗值，673.3。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.45(dd,j＝13.6,7.8hz,1h),8.33(d,j＝9.1hz,1h),8.07(d,j＝10.2hz,1h),7.69(dd,j＝12.1,4.0hz,1h),7.43(d,j＝8.9hz,2h),6.88(d,j＝8.9hz,2h),6.62(t,j＝4.3hz,1h),5.14(s,1h),4.30(d,j＝5.8hz,2h),4.11–3.74(m,2h),3.68–3.43(m,8h),3.38(d,j＝20.1hz,3h),3.10(dd,j＝28.1,23.2hz,4h),2.60–2.39(m,1h),2.01–1.84(m,1h),1.83–1.66(m,1h),1.48(s,9h),1.09(t,j＝8.5hz,3h).[0933]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-(4-哌嗪-1-基苯胺基)乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0934][0935]遵循實施例1中的步驟2，4-[4-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.48g，0.714mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.43g，產率：99％)。ms(m/z):c29h36n10o31的[m+h]+計算值，573.29；實驗值，573.2。[0936]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-(4-哌嗪-1-基苯胺基)乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0937][0938]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，99.54mg，0.247mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-(4-哌嗪-1-基苯胺基)乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(150mg，0.247mmol)提供標題化合物(0.121g，產率：49％，dsr：25％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.27–8.09(m,0.25h),7.62–6.96(m,0.25h),6.79–6.64(m,0.25h),4.57–4.24(m,2.15h),4.09–2.77(m,14.25h),2.41–2.31(m,0.25h),2.16–1.45(m,4.25h),1.24–1.12(m,0.25h),1.07–0.78(m,0.75h).[0939]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.107g，產率：43.6％，dsr：35％)。[0940]實施例48[0941]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-[(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)氨基]乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0942][0943]步驟1：4-[6-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[0944][0945]將2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(619.5mg，1.5mmol)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(626mg，2.25mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，431.3mg，2.25mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，304mg，2.25mmol)溶解於二氯甲烷(20ml)中並且添加三乙胺(0.624ml，4.5mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.4g，產率：39.6％)。ms(m/z):c33h43n11o5的[m+h]+計算值，674.34；實驗值，674.3。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.54–10.40(m,1h),8.55(d,j＝20.7hz,1h),8.34(d,j＝14.9hz,1h),8.12(t,j＝8.1hz,1h),7.93(d,j＝2.8hz,1h),7.70(d,j＝4.1hz,1h),7.33–7.28(m,1h),6.62(d,j＝3.7hz,1h),5.15(s,1h),4.33(d,j＝17.0hz,2h),4.14–3.77(m,2h),3.73–3.45(m,8h),3.39(d,j＝18.0hz,3h),3.18–2.99(m,4h),2.52(dd,j＝16.9,10.4hz,1h),2.01–1.85(m,1h),1.83–1.69(m,1h),1.48(s,9h),1.10(dd,j＝12.7,7.1hz,3h).[0946]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-[(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)氨基]乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[0947][0948]遵循實施例1中的步驟2，4-[6-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.36g，0.535mmol)提供呈白色固體的標題化合物(0.32g，產率：98％)。ms(m/z):c28h35n11o3的[m+h]+計算值，574.29；實驗值，574.3。[0949]步驟3：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-[(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)氨基]乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[0950][0951]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，99.14mg，0.246mmol)和4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]-n-[2-氧代-2-[(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)氨基]乙基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(150mg，0.246mmol)提供標題化合物(0.126g，產率：52.5％，dsr：22％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.07(m,0.22h),8.01–7.82(m,0.22h),7.71–7.40(m,0.44h),6.81–6.57(m,0.22h),4.64–4.28(m,2.22h),4.20–2.73(m,13.74h),2.42–2.32(m,0.22h),2.20–1.54(m,3.44h),1.09–0.78(m,0.66h).[0952]在實施例1中的步驟3的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.116g，產率：48.3％，dsr：26％)。[0953]實施例49[0954]2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸與ha的綴合物的製備[0955][0956]步驟1：2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯的製備[0957][0958]將n,n-二環己基碳二亞胺(494.4mg，2.4mmol)於二氯甲烷(20ml)中的溶液在冰浴下緩慢添加到2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(826mg，2mmol)和1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(276mg，2.4mmol)於二氯甲烷(20ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物過濾並且然後在減壓下濃縮以提供標題化合物(1g，產率：98％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c23h26n8o6的[m+h]+計算值，511.19；實驗值，511.1。[0959]步驟2：2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸與ha的綴合物的製備[0960][0961]將透明質酸鈉轉化為tba透明質酸。將強酸性離子交換樹脂amberlite732添加到透明質酸鈉水溶液中並且在室溫下攪拌混合物持續8小時。將溶液過濾，並且隨後用四丁基氫氧化銨(tba-oh)水溶液中和濾液。將所得水溶液立即冷凍並且凍幹成透明質酸的tba鹽(ha-tba)。[0962]在0～15℃下將三乙胺(0.12ml，0.875mmol)緩慢添加到透明質酸的tba鹽(ha-tba，331mg，0.5mmol)於無水dmso(20ml)中的攪拌混合物中。然後在0～15℃將含2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯(255mg，0.5mmol)的無水dmso(20ml)添加到反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物持續16小時。然後將2.5wt％氯化鈉溶液(7ml)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(250ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。透明質酸鈉mw10kdamw0.17g，產率：43.9％，dsr：20％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.12(m,0.2h),7.62–7.46(m,0.2h),6.80–6.67(m,0.2h),4.54–4.18(m,2.2h),4.09–2.94(m,12.2h),2.41–2.38(m,0.2h),2.12–1.58(m,3.4h),1.09–0.87(m,0.6h).[0963]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw50kda)的反應提供了對應的產物(0.245g，產率：613.3％，dsr：6％)。[0964]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.274g，產率：70.8％，dsr：23％)。[0965]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.237g，產率：61.2％，dsr：24％)。[0966]實施例50[0967]4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸與ha的綴合物的製備[0968][0969]步驟1：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯的製備[0970][0971]將n,n-二環己基碳二亞胺(494.4mg，2.4mmol)於二氯甲烷(15ml)中的溶液在冰浴下緩慢添加到4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(882mg，2mmol)和1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(276mg，2.4mmol)於二氯甲烷(25ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物過濾並且然後在減壓下濃縮以提供標題化合物(1g，產率：93％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c25h30n8o6的[m+h]+計算值，538.22；實驗值，538.1。[0972]步驟2：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸與ha的綴合物的製備[0973][0974]在0～15℃將三乙胺(0.12ml，0.875mmol)緩慢添加到透明質酸的tba鹽(ha-tba，331mg，0.5mmol)於無水dmso(20ml)中的攪拌混合物中。然後在0～15℃將含4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]丁酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯(269mg，0.5mmol)的無水dmso(20ml)添加到反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物持續16小時。然後將7ml的2.5wt％氯化鈉溶液添加到反應混合物中，將反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(250ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。透明質酸鈉mw10kda，0.166g，產率：41.3％，dsr：10％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.09(m,0.1h),7.61–7.44(m,0.1h),6.78–6.65(m,0.1h),4.60–4.22(m,2.1h),4.06–2.94(m,11.1h),2.55–2.31(m,0.3h),2.15–1.57(m,3.4.h),1.11–0.86(m,0.3h).透明質酸鈉mw50kda，0.181g，產率：45.1％，dsr：14％。[0975]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.263g，產率：65.5％，dsr：5％)。[0976]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.17g，產率：42.3％，dsr：7％)。[0977]實施例51[0978]4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸與ha的綴合物的製備[0979][0980]步驟1：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯的製備[0981][0982]將n,n-二環己基碳二亞胺(494.4mg，2.4mmol)於二氯甲烷(20ml)中的溶液在冰浴下緩慢添加到4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(950mg，2mmol)和1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(276mg，2.4mmol)於二氯甲烷(40ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。將反應混合物過濾並且然後在減壓下濃縮以提供標題化合物(1.1g，產率：96％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c28h28n8o6的[m+h]+計算值，573.21；實驗值，573.1。[0983]步驟2：4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸與ha的綴合物的製備[0984][0985]在0～15℃將三乙胺(0.12ml，0.875mmol)緩慢添加到透明質酸的tba鹽(ha-tba，331mg，0.5mmol)於無水dmso(20ml)中的攪拌混合物中。然後在0～15℃將含4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(2,5-二氧吡咯烷-1-基)酯(286mg，0.5mmol)的無水dmso(20ml)添加到反應混合物中。在室溫下攪拌反應混合物持續16小時。然後將7ml的2.5wt％氯化鈉溶液添加到反應混合物中，將反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(250ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。透明質酸鈉mw10kda，0.177：42.3％，dsr：10％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.09–7.92(m,0.2h),7.86–7.69(m,0.2h),7.54–7.32(m,0.3h),6.83–6.74(m,0.1h),4.58–4.22(m,2.1h),4.05–3.05(m,10.9h),2.39–2.27(m,0.1h),2.12–1.65(m,3.2h),1.11–0.92(m,0.3h).透明質酸鈉mw50kda，0.2g，產率：47.8％，dsr：6％。[0986]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw500kda)的反應提供了對應的產物(0.187g，產率：44.7％，dsr：5％)。[0987]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.1g，產率：23.9％，dsr：2％)。[0988]實施例52[0989]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-氨基苯基)酯與ha的綴合物的製備[0990][0991]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)酯的製備[0992][0993]在n2下將硫光氣(1.21g，10.5mmol，1.1當量)添加到(4-羥基苯基)氨基甲酸叔丁酯(2g，9.56mmol，1當量)和n,n-二甲基吡啶-4-胺(2.92g，23.9mmol，2.5當量)於二氯甲烷(40ml，20v)中的混合物中，在室溫下將反應混合物攪拌0.5小時。然後向其中添加託法替尼(2.99g，9.56mmol，1當量)，在室溫下將所得混合物攪拌另外12小時。在大部分託法替尼被消耗後，在減壓下去除溶劑，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(1.827g，產率：34％)；ms(m/z):c28h33n7o4s的[m+h]+計算值，564.23；實驗值，564.1。[0994]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-氨基苯基)酯鹽酸鹽的製備[0995][0996]遵循實施例1中的步驟2，4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-((叔丁氧基羰基)氨基)苯基)酯(1.5g，2.661mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(1.33g，產率：100％)；ms(m/z):c23h25n7o2s的[m+h]+計算值，64.18；實驗值，464.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.45-8.30(m,1h),7.66ꢀ‑7.44(m,2h),7.44-7.22(m,2h),7.09-6.74(m,2h),4.73(s,1h),4.06-3.94(m,3h),3.71-3.17(m,6h),2.56(s,1h),2.03-1.70(m,2h),1.13(dd,j＝14.8,6.8hz,3h).[0997]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-氨基苯基)酯與ha的綴合物的製備[0998][0999]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.161g，0.4mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(4-氨基苯基)酯鹽酸鹽(0.2g，0.4mmol，1當量)提供標題化合物(0.15g，產率：45％，dsr＝14.3％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm7.7-7.55(m,0.5h),7.35-7.2(m,0.5h),4.6-4.45(m,1.43h),3.85-3.4(m,12h),2.46-2.43(m,0.14h),2.00(s,3.0h),1.9-1.45(m,2.86h),1.3-1.25(m,0.43h).[1000]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.175g，產率：52％，dsr＝4.6％)。[1001]實施例53[1002]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(哌啶-4-基)酯與ha的綴合物的製備[1003][1004]步驟1：4-((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的製備[1005][1006]在n2下將硫光氣(1.26g，10.934mmol，1.1當量)添加到4-羥基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2g，9.94mmol，1當量)和n,n-二甲基吡啶-4-胺(3.03g，9.94mmol，2.5當量)於二氯甲烷(40ml，20v)中的混合物中，在室溫下將反應混合物攪拌0.5小時。然後向其中添加託法替尼(3.1g，9.94mmol，1當量)，在室溫下將所得混合物攪拌另外12小時。在大部分託法替尼被消耗後，在減壓下去除溶劑，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(1.2g，產率：22％)；ms(m/z):c27h37n7o4s的[m+h]+計算值，556.26；實驗值，556.2。[1007]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(哌啶-4-基)酯鹽酸鹽的製備[1008][1009]遵循實施例1中的步驟2，4-((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳醯基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，1.8mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.885g，產率：100％)；ms(m/z):c22h29n7o2s的[m+h]+計算值，456.21；實驗值，456.1。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.49(d,j＝9.7hz,1h),8.00(s,1h),7.03(s,1h),5.93(br,1h),5.03(s,1h),4.15-4.0(m,1h),3.79ꢀ‑3.31(m,11h),3.29-3.05(m,1h),2.52(br,1h),2.45-2.28(m,4h),2.0-1.7(m,3h),1.11(dd,j＝17.1,7.1hz,3h).[1010]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(哌啶-4-基)酯與ha的綴合物的製備[1011][1012]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.164g，0.406mmol，1當量)和4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-硫代碳酸o-(哌啶-4-基)酯鹽酸鹽(0.2g，0.406mmol，1當量)提供標題化合物(0.17g，產率：34％，dsr＝12.6％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppmδ8.25-7.0(m,0.22h),7.0-6.5(m,0.08h),5.95-5.49(m,0.08h),4.45-4.25(m,1.26h),3.8-2.9(m,12.63h),2.33(br,0.13h),1.88(s,3h),1.81-1.72(m,0.51h),1.23-1.07(m,0.25h),0.99-0.82(m,0.38h).[1013]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.192g，產率：56.6％，dsr＝4.6％)。[1014]實施例54[1015]((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)碳酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[1016][1017]步驟1：3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-((2-(三甲基甲矽烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈的製備[1018][1019]在n2下將dip乙酸乙酯(3.745g，28.81mmol，1當量)添加到託法替尼(9g，28.81mmol，1當量)於二氯甲烷(180ml，20v)中的混合物中，在室溫下將反應混合物攪拌0.5小時。然後向其中添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷(4.8g，28.81mmol，1當量)，在室溫下將所得混合物攪拌過夜。在大部分託法替尼被消耗後，在減壓下去除溶劑，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(9g，產率：71％)；ms(m/z):c22h34n6o2si的[m+h]+計算值，443.25；實驗值，443.2。[1020]步驟2：3-((3r,4r)-3-((7-(羥甲基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈的製備[1021][1022]在0℃下在n2下將tfa(6.44g，56.5mmol，5當量)逐滴添加到3-((3r,4r)-4-甲基-3-(甲基(7-((2-(三甲基甲矽烷基)乙氧基)甲基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-基)-3-氧代丙腈(5g，11.3mmol，1當量)於二氯甲烷(100ml，20v)中的混合物中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，使其溫熱到室溫，然後在此溫度下攪拌24小時。在大部分s.m被消耗後，向上述溶液中添加nahco3(飽和水溶液)，以在0℃下將ph調整到8。然後將混合物倒入分液漏鬥並分離。用nacl(飽和水溶液)洗滌有機相，經na2so4乾燥並且然後濃縮以得到標題產物(3.5g，產率：90％)；ms(m/z):c17h22n6o2的[m+h]+計算值，343.18；實驗值，343.1。[1023]步驟3：(4-((((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1024][1025]遵循實施例1中的步驟1，3-((3r,4r)-3-((7-(羥甲基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈(1g，2.92mmol，1當量)和(4-羥丁基)氨基甲酸叔丁酯(1g，2.92mmol，1當量)產生標題產物(0.85g，產率：52％)；ms(m/z):c27h39n7o6的[m+h]+計算值，558.30；實驗值，558.2。[1026]步驟4：((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)碳酸4-氨基丁酯鹽酸鹽的製備[1027][1028]遵循實施例1中的步驟2，(4-((((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲氧基)羰基)氧基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(0.85g，1.524mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.753mg，產率：100％)；ms(m/z):c22h31n7o4的[m+h]+計算值，458.24；實驗值，458.1。1h-nmr(400mhz,cd3od)δppm8.41(s,1h),7.64(d,j＝3.7hz,1h),7.01(d,j＝3.4hz,1h),6.28(s,2h),4.69(s,1h),4.21-3.40(m,11h),2.95(t,j＝6.8hz,1h),2.56(br,1h),2.05(br,1h),1.87ꢀ‑1.66(m,5h),1.23-1.14(m,3h).[1029]步驟5：((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)碳酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[1030][1031]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.161g，0.4mmol，1當量)和((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)碳酸4-氨基丁酯鹽酸鹽(0.2g，0.4mmol，1當量)提供標題化合物(0.18g，產率：56％，dsr＝21％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.2-7.9(m,0.21h),7.3-7.0(m,0.21h),6.8-6.3(m,0.21h),6.1-5.1(m,0.42h),4.45(d,j＝27.3hz,2.84h),3.8-3.3(m,12h),2.40(br,0.21h),1.97(s,3h),1.65-1.45(m,0.94h),1.25(t,j＝6.9hz,0.21h),1.05-0.75(m,0.7h).[1032]在此步驟的情況下，tba透明質酸(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.172g，產率：47.6％，dsr＝14％)。[1033]實施例55[1034](4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基(4-氨基丁基)氨基甲酸酯與ha的綴合物的製備[1035][1036]步驟1：((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)丁烷-1,4-二基二氨基甲酸叔丁酯的製備[1037][1038]遵循實施例1中的步驟1，3-((3r,4r)-3-((7-(羥甲基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈(0.6g，1.75mmol，1當量)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(0.587g，1.928mmol，1.1當量)和(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(0.33g，1.75mmol，1當量)產生標題產物(0.878g，產率：90％)；m/z(esi):557.31[m+h]+。ms(m/z):c27h40n8o5的[m+h]+計算值，557.31；實驗值，557.2。[1039]步驟2：(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基(4-氨基丁基)氨基甲酸酯鹽酸鹽的製備[1040][1041]遵循實施例1中的步驟2，((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)丁烷-1,4-二基二氨基甲酸叔丁酯(0.8g，1.44mmol，1當量)產生呈hcl鹽的所期望產物(0.7g，產率：100％)；ms(m/z):c22h32n8o3的[m+h]+計算值，457.25；實驗值，457.2。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.33(t,j＝6.7hz,1h),7.52(dd,j＝17.0,3.7hz,1h),6.88(d,j＝9.3hz,1h),6.17(d,j＝24.8hz,2h),4.58(s,1h),4.10-3.81(m,3h),3.68-3.16(m,5h),3.16-2.88(m,5h),2.56(br,1h),2.0-1.97(m,1h),1.83-1.72(m,1h),1.67-1.49(m,4h),1.13(dd,j＝14.9,7.0hz,3h).[1042]步驟3：(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基(4-氨基丁基)氨基甲酸酯與ha的綴合物的製備[1043][1044]遵循實施例1中的步驟3，透明質酸鈉(mw50kda，0.161g，0.4mmol，1當量)和(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基(4-氨基丁基)氨基甲酸4-氨基丁酯鹽酸鹽(0.2g，0.4mmol，1當量)提供標題化合物(0.17g，產率：50％，dsr＝6％)；1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.15-7.95(m,0.06h),7.27(br,0.06h),6.68(br,0.06h),6.1-5.9(m,0.12h),4.40(d,2h),3.93-3.11(m,10.8h),2.37(br,0.06h),2.01ꢀ‑1.79(s,3h),1.6-1.5(m,0.36h),1.0-0.9(m,0.18h).[1045]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.150g，產率：44.9％，dsr＝8％)。[1046]實施例56[1047]n-(2-氯乙基)-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1048][1049]步驟1：n-(2-氯乙基)-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺的製備[1050][1051]將三乙胺(0.558ml，8mmol)添加到託法替尼(1.245g，4mmol)於甲苯(50ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到50℃。然後將2-氯乙基異氰酸酯(1688mg，16mmol)添加到反應混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌4小時。然後將反應混合物過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:20)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.2g，71.9％)。ms(m/z):c19h24cln7o2的[m+h]+計算值，418.16；實驗值，418.1。[1052]步驟2：n-(2-氯乙基)-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1053][1054]將n-(2-氯乙基)-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺(209mg，0.5mmol)於無水dmso(2ml)中的溶液緩慢添加到透明質酸的tba鹽(ha-tba，331mg，0.5mmol，透明質酸鈉mw50kda)於無水dmso(20ml)中的攪拌混合物中。在室溫下將反應混合物攪拌7天並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在40ml的去離子水中。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。透明質酸鈉mw50kda，0.177g，產率：42.3％，dsr：10％；1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm8.29–8.17(m,0.1h),7.68–7.54(m,0.1h),6.82–6.68(m,0.1h),4.63–4.28(m,2.1h),4.23–3.17(m,11.3h),2.44–2.33(m,0.1h),2.14–1.58(m,3.2h),1.47–1.36(m,0.1h),1.28–1.17(m,0.1h),1.11–0.89(m,0.3h).[1055]實施例57[1056]4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-氯乙酯與ha的綴合物的製備[1057][1058]步驟1：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-氯乙酯的製備[1059][1060]將2-氯乙基氯甲酸酯(0.1ml，1mmol)添加到託法替尼(156mg，0.5mmol)和k2co3(138mg，1mmol)於無水dmf(2ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將溶液用二氯甲烷稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/二氯甲烷＝1:100～1:50)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.08g，40％)。ms(m/z):c19h23cln6o3的[m+h]+計算值，419.15；實驗值，419.3。[1061]步驟2：4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-氯乙酯與ha的綴合物的製備[1062][1063]將4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-氯乙酯(209mg，0.5mmol)於無水dmso(2ml)中的溶液緩慢添加到透明質酸的tba鹽(ha-tba，mw500kda；331mg，0.5mmol，透明質酸鈉mw50kda)於無水dmso(20ml)中的攪拌混合物中。在室溫下將反應混合物攪拌7天並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在40ml的去離子水中。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。0.28g，產率：73.5％，dsr：25％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.21–7.99(m,0.25h),7.57–7.10(m,0.25h),6.83–6.57(m,0.25h),4.54–4.31(m,2.25h),4.09–2.73(m,12.75h),2.39–2.23(m,0.25h),2.02–1.50(m,3.75h),1.32–1.21(m,0.25h),1.00–0.79(m,0.75h).[1064]在此步驟的情況下，ha-tba(透明質酸鈉mw2000kda)的反應提供了對應的產物nmr(400mhz,d-dmso)δppm8.28–8.14(m,0.1h),7.67–7.56(m,0.1h),6.82–6.68(m,0.1h),4.66–4.28(m,2.1h),4.23–3.17(m,11.3h),2.44–2.33(m,0.1h),2.19–1.55(m,3.2h),1.47–1.36(m,0.1h),1.28–1.17(m,0.1h),1.11–0.89(m,0.3h).[1074]在此步驟的情況下，ha-tba(透明質酸鈉mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.175g，產率：46.8％，dsr＝35％)。[1075]實施例59[1076]ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]-己酸甲酯之間的綴合物的製備[1077][1078]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]己酸甲酯的製備[1079][1080]4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(950mg，2mmol)、6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(890mg，3mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，575mg，3mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，405mg，3mmol)溶解於dcm(40ml)中並且添加三乙胺(1.39ml，10mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/dcm＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.1g，產率：76.7％)。ms(m/z):c36h47n9o7的[m+h]+計算值，718.35；實驗值，718.3。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm12.29(d,j＝30.5hz,1h),8.39(d,j＝8.5hz,1h),7.87(d,j＝8.6hz,2h),7.78(dd,j＝10.8,6.4hz,3h),6.85–6.70(m,1h),6.66(d,j＝3.7hz,1h),5.11(d,j＝23.2hz,1h),4.89–4.74(m,1h),4.62(s,1h),4.09(dd,j＝13.0,3.8hz,1h),3.95–3.70(m,4h),3.66–3.45(m,4h),3.39(d,j＝14.1hz,3h),3.13(d,j＝6.0hz,2h),2.60–2.43(m,1h),2.06–1.91(m,2h),1.91–1.75(m,2h),1.59–1.49(m,2h),1.40(d,j＝19.4hz,11h),1.27(d,j＝12.0hz,1h),1.10(t,j＝7.0hz,3h).[1081]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[1082][1083]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(4ml)在冰浴下緩慢添加到(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]己酸甲酯(1g，1.39mmol)於etoac(20ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.9g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c31h39n9o5的[m+h]+計算值，618.30；實驗值，618.1。[1084]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]-己酸甲酯之間的綴合物的製備[1085][1086]將透明質酸鈉(117mg，0.29mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的23.4ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加16ml的乙腈。將4-甲基嗎啉(nmm，59mg，0.58mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。然後將溶液冷卻到0℃，並且添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(51mg，0.29mmol)並且在室溫下攪拌1小時。將溶液與(2s)-6-氨基-2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(200mg，0.29mmol)混合併且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(170mg，2.9mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(290ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。0.119g，產率：41.9％，dsr：20％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.35–8.23(m,0.2h),7.89–7.40(m,1h),6.83–6.71(m,0.2h),4.61–4.16(m,2.2h),4.13–2.47(m,13.4h),2.09–1.29(m,4.6h),1.23–1.16(m,0.2h),1.06–0.81(m,0.6h).[1087]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.119g，產率：41.9％，dsr＝21％)。[1088]實施例60[1089]ha(透明質酸鈉)與n-[3-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺之間的綴合物的製備[1090][1091]步驟1：3-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸的製備[1092][1093]將三乙胺(1.12ml，8mmol)添加到託法替尼(1248mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1459mg，4.8mmol)於dcm(40ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌5小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。添加3-氨基苯甲酸(658mg，4.8mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌16小時。過濾反應混合物。將濾液用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝20:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.8g，產率：94.7％)。ms(m/z):c24h25n7o4的[m+h]+計算值，476.19；實驗值，476.1。[1094]步驟2：n-[4-[[3-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯的製備[1095][1096]將3-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(1188mg，2.5mmol)、n-boc-1,4-丁二胺(705mg，3.75mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci、719mg，3.75mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，507mg，3.75mmol)溶解於dcm(40ml)中並且添加三乙胺(1.04ml，7.5mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/dcm＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1g，產率：62％)。ms(m/z):c33h43n9o5的[m+h]+計算值，646.33；實驗值，646.3。[1097]步驟3：n-[3-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1098][1099]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到n-[4-[[3-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]丁基]氨基甲酸叔丁酯(0.6g，0.93mmol)於etoac(12ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.54g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c28h35n9o3的[m+h]+計算值，546.28；實驗值，546.3。[1100]步驟4：ha(透明質酸鈉)與n-[3-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺之間的綴合物的製備[1101][1102]將透明質酸鈉(186mg，0.462mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中37.2ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加24.2ml的乙腈。在室溫下將n-[3-(4-氨基丁基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(200mg，0.324mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，32mg，0.324mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，128mg，0.462mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(270mg，4.62mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(250ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。針對去離子水對溶液進行的廣泛透析(extentivedialysis)(mw截止值為3.5kda)和凍幹提供標題化合物。0.209g，產率：49.9％，dsr：22％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.06-7.86(m,0.22h),7.56-7.41(m,1.1h),6.56-6.42(m,0.22h),4.63-4.18(m,2.22h),4.05-2.37(m,12.86h),2.13-1.70(m,3.66h),1.69-1.07(m,1.54h).[1103]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.214g，產率：51.1％，dsr＝18％)。[1104]實施例61[1105]ha(透明質酸鈉)與n-[4-(2-氨基乙基氨基甲醯基)苯基]-4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺之間的綴合物的製備[1106][1107]步驟1：n-[2-[[4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲醯基]氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的製備[1108][1109]將4-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]苯甲酸(1425mg，3mmol)、n-boc-乙二胺(721mg，4.5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，863mg，4.5mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，607.5mg，4.5mmol)溶解於dcm(40ml)中並且添加三乙胺(1.25ml，9mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/dcm＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.23g，產率：66.4％)。ms(m/z):c31h39n9o5的[m+h]+計算值，618.30；實驗值，618.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm12.26(d,j＝23.3hz,1h),8.38(d,j＝9.3hz,1h),7.81(dd,j＝39.5,8.6hz,5h),7.24(s,1h),6.65(d,j＝4.0hz,1h),5.11(d,j＝33.0hz,2h),4.13–3.74(m,2h),3.68–3.11(m,11h),2.62–2.45(m,1h),2.08–1.72(m,2h),1.44(s,9h),1.10(t,j＝8.6hz,3h).8.36–8.18(m,0.22h),7.92–6.84(m,1.1h),6.68–6.55(m,0.22h),4.61–4.22(m,2.22h),4.13–2.65(m,12.86h),2.24–1.52(m,3.66h),1.30–1.09(m,0.66h).在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.24g，產率：52.9％，dsr＝26％)。[1116]實施例62[1117]ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1118][1119]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯的製備[1120][1121]將三乙胺(1.25ml，9mmol)添加到反式-n-甲基-1-[4-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]環己基]甲磺醯胺(1012mg，3mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1094mg，3.6mmol)於dcm(40ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌5小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。添加6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(1069mg，3.6mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌16小時。過濾反應混合物。將濾液用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝100:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.66g，產率：35.3％)。ms(m/z):c28h45n7o7s的[m+h]+計算值，624.31；實驗值，624.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.38(d,j＝7.6hz,1h),8.36(s,1h),7.67(d,j＝4.1hz,1h),6.59(d,j＝4.0hz,1h),4.78–4.69(m,2h),4.58(s,1h),4.22–4.05(m,1h),3.81(s,3h),3.24(s,3h),3.14(d,j＝5.4hz,2h),3.01(dd,j＝15.2,5.9hz,2h),2.86(d,j＝5.3hz,3h),2.21(d,j＝11.6hz,2h),2.07–1.87(m,5h),1.71(dd,j＝23.8,11.5hz,2h),1.59–1.48(m,4h),1.47–1.32(m,11h).[1122]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[1123][1124]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(0.61g，0.97mmol)於etoac(12ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到0℃並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.54g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c23h37n7o5的[m+h]+計算值，524.25；實驗值，524.2。[1125]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1126][1127]將透明質酸鈉(101.6mg，0.252mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的21ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加13.2ml的乙腈。將4-甲基嗎啉(nmm，51mg，0.504mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。然後將溶液冷卻到0℃，並且添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(44.3mg，0.252mmol)並且在室溫下攪拌1小時。將溶液與(2s)-6-氨基-2-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(150mg，0.252mmol)混合併且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(148mg，2.53mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(148mg，2.53mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.118g，產率：52.9％，dsr：16％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.29–8.17(m,0.16h),7.66–7.54(m,0.16h),6.84–6.70(m,0.16h),4.59–4.15(m,2.16h),4.11–2.37(m,12.24h),2.11–1.73(m,4.44h),1.71–1.11(m,0.96h).[1128]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.105g，產率：47.1％，dsr＝20％)。[1129]實施例63[1130]ha(透明質酸鈉)與1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-反式-n-甲基-甲磺醯胺之間的綴合物的製備[1131][1132]步驟1：n-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯的製備[1133][1134]在室溫下將反式-n-甲基-1-[4-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]環己基]甲磺醯胺(1350mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1337.6mg，4.4mmol)於dmso(14ml)中的混合物攪拌4小時。然後添加肼甲酸叔丁酯(634.4mg，4.8mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入飽和na2co3溶液中。將混合物過濾。用nahco3溶液和水洗滌濾餅。然後將濾餅溶解在dcm中並且用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾並且然後在減壓下濃縮以提供標題化合物(1.67g，產率：84.3％)。ms(m/z):c21h33n7o5s的[m+h]+計算值，496.22；實驗值，496.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm11.38(s,1h),8.30(s,1h),7.63(d,j＝4.1hz,1h),6.56(dd,j＝25.8,3.5hz,2h),4.75(s,1h),4.36(q,j＝5.1hz,1h),3.22(d,j＝11.1hz,3h),2.97(d,j＝6.3hz,2h),2.83(d,j＝5.3hz,3h),2.20(t,j＝14.4hz,2h),2.04–1.94(m,1h),1.87(d,j＝10.8hz,2h),1.74–1.62(m,2h),1.51(s,9h),1.43–1.32(m,2h).[1135]步驟2：1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-反式-n-甲基-甲磺醯胺鹽酸鹽的製備[1136][1137]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到n-[[反式-4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯(0.6g，1.21mmol)於etoac(12ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.52g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c16h25n7o3的[m+h]+計算值，396.17；實驗值，396.1。[1138]步驟3：ha(透明質酸鈉)與1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-反式-n-甲基-甲磺醯胺之間的綴合物的製備[1139][1140]將透明質酸鈉(246mg，0.61mmol甲酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的49.2ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加32ml的乙腈。將4-甲基嗎啉(nmm，43mg，0.427mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。在室溫下將1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-反式-n-甲基-甲磺醯胺鹽酸鹽(200mg，0.427mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，43mg，0.427mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，169mg，0.61mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(357mg，6.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(400ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(357mg，6.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.29g，產率：62.8％，dsr：23％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.09(m,0.23h),7.63–7.52(m,0.23h),6.85–6.67(m,0.23h),4.70–4.28(m,2.23h),4.20–2.53(m,11.84h),2.23–1.40(mz,4.61h),1.34–1.06(m,0.46h).[1141]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.305g，產率：66.1％，dsr＝31％)。[1142]實施例64[1143]ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1144][1145]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯的製備[1146][1147]將三乙胺(1.25ml，9mmol)添加到2-[1-乙基磺醯基-3-[4-(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)吡唑-1-基]氮雜環丁烷-3-基]乙腈(1114mg，3mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1094mg，3.6mmol)於dcm(40ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌5小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。添加6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(1069mg，3.6mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並且用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝100:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.3g，產率：65.9％)。ms(m/z):c29h39n9o7s的[m+h]+計算值，658.26；實驗值，658.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm9.93(d,j＝7.6hz,1h),8.95(s,1h),8.50(s,1h),8.35(s,1h),8.04(d,j＝4.0hz,1h),6.85(d,j＝4.1hz,1h),5.45–5.34(m,1h),4.76–4.71(m,1h),4.66(d,j＝9.4hz,2h),4.63–4.56(m,1h),4.52–4.42(m,1h),4.28(d,j＝9.6hz,2h),3.84(s,3h),3.44(s,2h),3.20–3.07(m,2h),2.10–1.94(m,2h),1.88–1.76(m,1h),1.61–1.35(m,12h),1.27(s,3h).[1148]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[1149][1150]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(4.92ml)在冰浴下緩慢添加到(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(1.23g，1.87mmol)於etoac(25ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(1.1g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c24h31n9o5s的[m+h]+計算值，558.21；實驗值，558.1。[1151]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1152][1153]將透明質酸鈉(175mg，0.434mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的35ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加23ml的乙腈。在室溫下將(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(200mg，0.317mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，32mg，0.317mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，120mg，0.434mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(254mg，4.34mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(254mg，4.34mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.2g，產率：50.1％，dsr：20％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.72–8.57(m,0.2h),8.41–8.16(m,0.2h),7.96–7.82(m,0.2h),7.45–7.29(m,0.2h),7.02–6.87(m,0.2h),4.56–4.02(m,3.4h),3.97–2.84(m,11.4h),2.03–1.81(m,3.6h),1.43(m,1.2h).[1154]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.154g，產率：38.6％，dsr＝30％)。[1155]實施例65[1156]ha(透明質酸鈉)與4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼之間的綴合物的製備[1157][1158]步驟1：n-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯的製備[1159][1160]在室溫下將2-[1-乙基磺醯基-3-[4(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)吡唑-1-基]氮雜環丁烷-3-基]乙腈(1486mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1337.6mg，4.4mmol)於dmso(20ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加肼甲酸叔丁酯(634.4mg，4.8mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入飽和na2co3溶液中。將混合物過濾。用nahco3溶液和水洗滌濾餅。然後將濾餅溶解在dcm中並且用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝100:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.758g，產率：35.8％)。ms(m/z):c22h27n9o5s的[m+h]+計算值，530.18；實驗值，530.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.93(d,j＝1.8hz,1h),8.87(s,1h),8.48(s,1h),8.32(s,1h),7.95(dd,j＝28.4,4.1hz,1h),6.82(t,j＝17.0hz,1h),6.70(s,1h),4.64(d,j＝9.3hz,2h),4.23(t,j＝23.2hz,2h),3.42(s,2h),3.09(q,j＝7.4hz,2h),1.52(s,9h),1.42(t,j＝7.4hz,3h).[1161]步驟2：4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼三氟乙酸酯的製備[1162][1163]將三氟乙酸(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到n-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯(0.6g，1.13mmol)於dcm(9.6ml)中的攪拌混合物中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.61g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c17h19n9o3的[m+h]+計算值，430.13；實驗值，430.0。[1164]步驟3：ha(透明質酸鈉)與4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼之間的綴合物的製備[1165][1166]將透明質酸鈉(212mg，0.526mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的42.4ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加28ml的乙腈。在室溫下將4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(200mg，0.368mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，37mg，0.368mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，146mg，0.526mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(308mg，5.26mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(308mg，5.26mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.2g，產率：48.1％，dsr：40％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.89–8.663(m,0.4h),8.49-8.17(m,0.4h),8.04–7.84(m,0.4h),7.05–6.91(m,0.4h),4.43(d,j＝34.6hz,3.6h),3.46(dd,j＝86.0,63.7hz,11.6h),1.93(s,3h),1.26(d,j＝43.7hz,1.2h).[1167]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.154g，產率：37％，dsr＝40％)。[1168]實施例66[1169]ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1170][1171]步驟1：(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯的製備[1172][1173]在室溫下將(3r)-3-環戊基-3-[4(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)吡唑-1-基]丙腈(1486mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1141mg，3.754mmol)於dmso(12ml)中的混合物攪拌7小時。添加6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(1448mg，4.88mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入飽和na2co3溶液中。將混合物過濾。用nahco3溶液和水洗滌濾餅。然後將濾餅溶解在dcm中並且用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝150:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.828g，產率：34.9％)。ms(m/z):c30h40n8o5的[m+h]+計算值，593.31；實驗值，593.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm9.95(d,j＝7.5hz,1h),8.91(s,1h),8.32(d,j＝11.9hz,2h),7.99(d,j＝4.0hz,1h),6.82(d,j＝4.0hz,1h),4.76(dd,j＝12.8,7.5hz,1h),4.60(s,1h),4.28(td,j＝9.9,3.8hz,1h),3.81(s,3h),3.22–3.05(m,3h),2.97(dd,j＝17.0,3.8hz,1h),2.61(dt,j＝16.5,8.4hz,1h),2.13–1.88(m,3h),1.65–1.50(m,7h),1.44–1.35(m,9h),1.27(d,j＝12.8hz,4h).[1174]步驟2：(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[1175][1176]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到(2s)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(0.6g，1.01mmol)於etoac(12ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.53g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c25h32n8o3的[m+h]+計算值，493.25；實驗值，493.2。[1177]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1178][1179]將透明質酸鈉(204mg，0.506mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的40.8ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加26.5ml的乙腈。在室溫下將(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(200mg，0.354mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，36mg，0.354mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，140mg，0.506mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(207mg，3.54mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(207mg，3.54mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.195g，產率：45.1％，dsr：27％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.59–8.45(m,0.27h),8.33–7.88(m,0.81h),6.91–6.80(m,0.27h),4.57–4.02(m,2.54h),3.97–2.72(m,11.89h),2.05–1.72(m,3.81h),1.70–0.99(m,2.97h).[1180]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.197g，產率：45.5％，dsr＝16％)。[1181]實施例67[1182]ha(透明質酸鈉)與4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼之間的綴合物的製備[1183][1184]步驟1：n-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯的製備[1185][1186]在室溫下將2-[1-乙基磺醯基-3-[4-(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)吡唑-1-基]氮雜環丁烷-3-基]乙腈(1617mg，4mmol)、三乙胺(1.67ml，12mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1337.6mg，4.4mmol)於dmso(20ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加肼甲酸叔丁酯(634.4mg，4.8mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入飽和na2co3溶液中。將混合物過濾。用nahco3溶液和水洗滌濾餅。然後將濾餅溶解在dcm中並且用水洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝100:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.02g，產率：54.9％)。ms(m/z):c23h28n8o3的[m+h]+計算值，465.22；實驗值，465.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.97(d,j＝1.9hz,1h),8.86(s,1h),8.31(d,j＝15.2hz,2h),7.97(d,j＝4.0hz,1h),6.87–6.84(m,1h),6.62(s,1h),4.27(td,j＝10.0,3.9hz,1h),3.14(dd,j＝17.0,8.6hz,1h),2.97(dd,j＝17.0,3.9hz,1h),2.61(dt,j＝17.0,8.6hz,1h),2.04–1.92(m,1h),1.79–1.62(m,5h),1.54(d,j＝13.3hz,9h),1.35–1.19(m,3h).[1187]步驟2：4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[1188][1189]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(3ml)在冰浴下緩慢添加到n-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]氨基甲酸叔丁酯(0.75g，1.61mmol)於etoac(15ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.557g，產率：95％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c18h20n8o的[m+h]+計算值，365.17；實驗值，365.1。[1190]步驟3：ha(透明質酸鈉)與4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼之間的綴合物的製備[1191][1192]將透明質酸鈉(263.5mg，0.654mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的53ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加34ml的乙腈。在室溫下將4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(200mg，0.458mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，46mg，0.458mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，181mg，0.654mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(382mg，6.54mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(382mg，6.54mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.316g，產率：66.5％，dsr：33％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.88–8.65(m,0.33h),8.45–7.28(m,0.99h),7.07–6.82(m,0.33h),4.68–4.27(m,2.33h),4.21–2.62(m,10.66h),2.47–2.23(m,0.33h),2.15–1.32(m,4.32h),1.31–1.02(m,0.99h).[1193]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.308g，產率：64.8％，dsr＝21％)。[1194]實施例68[1195]ha(透明質酸鈉)與2-氨基乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯之間的綴合物的製備[1196][1197]步驟1：2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯的製備[1198][1199]在0℃～10℃將3-[(3r,4r)-3-[[7-(羥甲基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]-4-甲基-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(600mg，1.754mmol)、2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸(1.23mg，7.02mmol)和三苯基膦(1840mg，7.02mmol)於thf(120ml)中的混合物攪拌10分鐘。然後逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(1420mg，7.02mmol)。將反應混合物在此溫度下攪拌16小時。在冰浴下將反應混合物倒入飽和nahco3溶液中。將混合物用etoac稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:2)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(400mg，產率：45.7％)。ms(m/z):c24h33n7o5的[m+h]+計算值，500.25；實驗值，500.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.31(t,j＝16.1hz,1h),7.15(dd,j＝13.4,3.7hz,1h),6.56(t,j＝3.9hz,1h),6.23(d,j＝2.8hz,2h),5.14(s,1h),4.96(s,1h),4.10–3.98(m,1h),3.97–3.76(m,3h),3.68–3.45(m,4h),3.42–3.30(m,3h),2.57–2.43(m,1h),2.01–1.85(m,1h),1.82–1.69(m,1h),1.51–1.32(m,9h),1.27–1.24(m,2h),1.13–1.09(m,1h).[1200]步驟2：2-氨基乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯三氟乙酸酯的製備[1201][1202]將三氟乙酸(2ml)在冰浴下緩慢添加到2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯(0.35g，0.7mmol)於dcm(10ml)中的攪拌混合物中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.27g，產率：96.7％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c19h25n7o3的[m+h]+計算值，400.20；實驗值，400.1。[1203]步驟3：ha(透明質酸鈉)與2-氨基乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯之間的綴合物的製備[1204][1205]將透明質酸鈉(178mg，0.443mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的53ml的去離子水中。在室溫下將2-氨基乙酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯三氟乙酸酯(150mg，0.443mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，44.8mg，0.443mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，122mg，0.443mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(259mg，4.43mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(259mg，4.43mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.15g，產率：44.5％，dsr：21％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.24–8.11(m,0.21h),7.40–7.27(m,0.21h),6.78–6.67(m,0.21h),6.31–6.07(m,0.42h),4.59–4.17(m,2.21h),4.11–2.95(m,12.31h),2.49–2.35(m,0.21h),2.00–1.61(m,3.42h),1.27–1.16(m,0.21h),1.07–0.90(m,0.42h).[1206]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.108g，產率：45.7％，dsr＝19％)。[1207]實施例69[1208]ha(透明質酸鈉)與4-氨基丁酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯之間的綴合物的製備[1209][1210]步驟1：4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸[5-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯的製備[1211][1212]在0℃～10℃將3-[(3r,4r)-3-[[7-(羥甲基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]-4-甲基-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(300mg，0.877mmol)、4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸(713mg，3.51mmol)和三苯基膦(920mg，3.51mmol)於thf(60ml)中的混合物攪拌10分鐘。然後逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(709.5mg，3.51mmol)。將反應混合物在此溫度下攪拌16小時。在冰浴下將反應混合物倒入飽和nahco3溶液中。將混合物用etoac稀釋並且用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:2)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(240mg，產率：51.9％)。ms(m/z):c26h37n7o5的[m+h]+計算值，528.28；實驗值，528.1。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm8.34(d,j＝7.5hz,1h),7.16(dd,j＝13.8,3.7hz,1h),6.55(t,j＝4.1hz,1h),6.17(d,j＝3.4hz,2h),5.14(s,1h),4.61(s,1h),4.09–3.99(m,1h),3.89–3.56(m,3h),3.54–3.31(m,5h),3.12(d,j＝6.1hz,2h),2.50(d,j＝26.3hz,1h),2.37(t,j＝7.3hz,2h),2.01–1.86(m,1h),1.78(dd,j＝14.2,7.1hz,2h),1.50–1.30(m,9h),1.31–1.21(m,3h),1.13–1.09(m,1h).[1213]步驟2：4-氨基丁酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯三氟乙酸酯的製備[1214][1215]將三氟乙酸(0.5ml)在冰浴下緩慢添加到4-(叔丁氧基羰基氨基)丁酸[5-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯(0.12g，0.221mmol)於dcm(5ml)中的攪拌混合物中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.9g，產率：95％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c21h29n7o3的[m+h]+計算值，428.23；實驗值，428.1。[1216]步驟3：ha(透明質酸鈉)與4-氨基丁酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯之間的綴合物的製備[1217][1218]將透明質酸鈉(127mg，0.31mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的53ml的去離子水中。在室溫下將4-氨基丁酸[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基]甲酯三氟乙酸酯(119mg，0.22mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，22mg，0.22mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，85.7mg，0.31mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(181mg，3.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(181mg，3.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.119g，產率：48.7％，dsr：24％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.23–7.99(m,0.24h),7.41–7.09(m,0.24h),6.83–6.63(m,0.24h),6.18–5.89(m,0.48h),4.59–4.16(m,2.24h),4.24–2.66(m,12.64h),2.50–2.18(m,0.72h),2.04–1.48(m,3.72h),1.27–1.18(m,0.24h),1.12–0.76(m,0.72h).[1219]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.109g，產率：44.6％，dsr＝22％)。[1220]實施例70[1221]ha(透明質酸鈉)與(3z)-1-[[(1s)-5-氨基-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]甲酯之間的綴合物的製備[1222][1223]步驟1：(3z)-1-[[(1s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯的製備[1224][1225]在室溫下將(3z)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(1079mg，2mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(668.8mg，2.2mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(593.6mg，2mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且凍幹。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝5:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1g，產率：60.6％)。ms(m/z):c44h50n7o9的[m+h]+計算值，826.40；實驗值，826.4。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm12.03(s,1h),9.60(d,j＝7.5hz,1h),8.93(d,j＝1.3hz,1h),7.63:1)以提供標題化合物(1g，己酸鹽)(593.6mg，二甲苯磺酸鹽(1079mg)),2.50–2.18(m,0.72h),dd,j＝12.7,7.4hz,1h),3.83(d,j＝16.3hz,6h),3.27–3.09(m,5h),2.80(s,2h),2.64–2.44(m,6h),2.37(s,3h),2.05–1.99(m,2h),1.91(dd,j＝13.9,8.9hz,4h),1.54(dd,j＝18.8,7.6hz,3h),1.42(s,9h).[1226]步驟2：(3z)-1-[[(1s)-5-氨基-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽的製備[1227][1228]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(2.4ml)在冰浴下緩慢添加到(3z)-1-[[(1s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(0.6g，0.686mmol)於etoac(12ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.51g，產率：97％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c39h47n7o7的[m+h]+計算值，726.35；實驗值，726.2。[1229]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(3z)-1-[[(1s)-5-氨基-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯之間的綴合物的製備[1230][1231]將透明質酸鈉(121mg，0.3mmol甲酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的24.2ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加15.7ml的乙腈。在室溫下將(3z)-1-[[(1s)-5-氨基-1-甲氧基羰基-戊基]氨基甲醯基]-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(160mg，0.21mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，21mg，0.21mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，83mg，0.3mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(123mg，2.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(123mg，2.1mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.142g，產率：43.5％，dsr：34％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.44–8.37(m,0.34h),7.50-6.59(m,3.4h),6.13-6.04(m,0.34h),4.58-4.12(m,2.34h),4.10-2.51(m,17.48h),2.12-1.82(m,2.04h),1.74-1.00(m,4.02h).[1232]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.13g，產率：39.9％)。[1233]實施例71[1234]ha(透明質酸鈉)與(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯之間的綴合物的製備[1235][1236]步驟1：(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯的製備[1237][1238]在室溫下將(3z)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(1079mg，2mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(668.8mg，2.2mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加肼甲酸叔丁酯(264.3mg，2mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝8:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.5g，產率：35.8％)。ms(m/z):c37h43n7o7的[m+h]+計算值，698.32；實驗值，698.1。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm11.79(s,1h),10.29(s,1h),9.26(s,1h),8.69(s,1h),7.76–7.33(m,6h),7.19(d,j＝8.3hz,2h),7.06(d,j＝7.7hz,2h),5.76(s,1h),3.80(s,3h),3.08(s,3h),2.74–2.53(m,2h),2.19(d,j＝28.7hz,10h),1.46(s,9h).[1239]步驟2：(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽的製備[1240][1241]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(1.6ml)在冰浴下緩慢添加到(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(0.4g，0.57mmol)於etoac(4ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.36g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c32h35n7o5的[m+h]+計算值，598.26；實驗值，598.1。[1242]步驟3：ha(透明質酸鈉)與(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯之間的綴合物的製備[1243][1244]將透明質酸鈉(136mg，0.337mmol羧酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的30ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加19.5ml的乙腈。在室溫下將(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽(150mg，0.236mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，23.9mg，0.236mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，93mg，0.337mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.153g，產率：47.3％，dsr：21％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.63–8.47(m,0.21h),7.75–6.81(m,2.1h),5.91–5.78(m,0.21h),4.66–4.34(m,2h),4.21–2.51(m,11.68h),2.44–1.63(m,5.31h).[1245]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物。[1246]實施例72[1247]ha(透明質酸鈉)與(2r)-6-氨基-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1248][1249]步驟1：2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙酸的製備[1250][1251]在室溫下將3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1248mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1.337mg，4.4mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加甘氨醯基-甘氨醯基-甘氨酸(758.8mg，4mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且凍幹。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝4:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.7g，產率：33.2％)。ms(m/z):c23h29n9o6的[m+h]+計算值，528.22；實驗值，528.1。1hnmr(400mhz,d-dmso)δppm12.78–12.38(m,1h),9.98(t,j＝5.3hz,1h),8.46(d,j＝5.7hz,1h),8.35(d,j＝5.7hz,1h),8.21(s,1h),7.67(d,j＝4.0hz,1h),6.85(s,1h),4.87(s,1h),4.21–4.02(m,4h),4.01–3.60(m,8h),3.39(d,j＝16.8hz,3h),2.39(d,j＝6.4hz,1h),1.78(d,j＝47.7hz,1h),1.60(d,j＝8.7hz,1h),1.02(d,j＝7.1hz,3h).[1252]步驟2：(2r)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯的製備[1253][1254]將2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙酸(768mg，1.46mmol)、6-氨基-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)己酸(s)-甲酯(454mg，1.53mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，335mg，1.75mmol)和1-羥基苯並三唑(hobt，236mg，1.75mmol)溶解於dcm(20ml)，dmf(2ml)中並且添加三乙胺(368mg，3.64mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(甲醇/dcm＝1:150～1:80)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.66g，產率：76.7％)。ms(m/z):c35h51n11o9的[m+h]+計算值，770.38；實驗值，770.2。1hnmr(400mhz,cdcl3)δppm10.41(s,1h),8.29(d,j＝8.0hz,1h),7.63(dd,j＝20.0,3.8hz,1h),7.41(s,1h),7.05–6.86(m,1h),6.60(dd,j＝12.6,4.0hz,1h),5.12(s,1h),4.89(s,1h),4.51(s,1h),4.16(d,j＝36.3hz,2h),4.13–3.80(m,5h),3.79–3.43(m,9h),3.42–3.28(m,3h),3.01(d,j＝26.8hz,2h),2.51(d,j＝6.2hz,1h),2.05–1.92(m,1h),1.86–1.76(m,1h),1.43(s,9h),1.38–1.16(m,6h),1.14–0.99(m,3h).[1255]步驟3：(2r)-6-氨基-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽的製備[1256][1257]將含4mhcl的乙酸乙酯(可商購獲得)(8.5ml)在冰浴下緩慢添加到(2r)-6-(叔丁氧基羰基氨基)-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯(0.51g，0.663mmol)於etoac(20ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.44g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c30h43n11o7的[m+h]+計算值，670.33；實驗值，670.1。[1258]步驟4：ha(透明質酸鈉)與(2r)-6-氨基-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯之間的綴合物的製備[1259][1260]將透明質酸鈉(245mg，0.607mmol甲酸，mw50kda)溶解於100ml圓底燒瓶中的60ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加39ml的乙腈。在室溫下將(2r)-6-氨基-2-[[2-[[2-[[2-[[4-[[(3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基-3-哌啶基]-甲基-氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]乙醯基]氨基]己酸甲酯鹽酸鹽(300mg，0.425mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，43mg，0.425mmol)添加到溶液中，從而使粘度暫時增加。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，168mg，0.607mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(355mg，6.07mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(400ml)。將混合物過濾。將濾餅溶解在80ml的去離子水和乙腈中(v/v＝3:1)。然後將nacl(355mg，6.07mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(400ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空中乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。0.25g，產率：41％，dsr：15％；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.13(m,0.15h),7.60–7.47(m,0.15h),6.80–6.66(m,0.15h),4.66–4.28(m,2.15h),4.24–2.69(m,13.15h),2.41–2.24(m,0.15h),2.04–1.42(m,3.3h),1.37–0.89(m,1.35h).[1261]在此步驟的情況下，透明質酸鈉(mw2000kda)的反應提供了對應的產物(0.26g，產率：42.6％，dsr＝14％)。1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.26–8.13(m,0.14h),7.59–7.48(m,0.14h),6.79–6.66(m,0.14h),4.66–4.28(m,2.14h),4.26–2.66(m,12.94h),2.40–2.24(m,0.14h),2.03–1.42(m,3.28h),1.35–0.89(m,1.26h).[1262]實施例73[1263]2-氮雜螺[3.3]庚-6-基-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸與ha的綴合物的製備[1264][1265]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(叔丁氧基羰基)-2-氮雜螺[3.3]庚-6-基酯的製備[1266][1267]將三乙胺(1.19ml，8.58mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(812mg，2.6mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(870mg，2.86mmol)於dcm(60ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加6-羥基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁酯(832mg，3.9mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝5:1～1:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.58g，產率：40％)。ms(m/z):c28h37n7o5的[m+h]+計算值，552.65；實驗值，552.2。[1268]步驟2：2-氮雜螺[3.3]庚-6-基-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸三氟乙酸的製備[1269][1270]將cf3cooh(3.3ml)在冰浴下緩慢添加到4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-(叔丁氧基羰基)-2-氮雜螺[3.3]庚-6-基酯(166mg，0.3mmol)於dcm(16.5ml)中的溶液中。使反應混合物溫熱到室溫並且然後在室溫下攪拌3小時。將溶液用dcm稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈棕色油狀物的標題化合物(0.2g，產率：100％)，所述標題化合物無需進一步純化即可用於下一步驟。ms(m/z):c23h29n7o3的[m+h]+計算值，452.53；實驗值，452.3。[1271]步驟3：2-氮雜螺[3.3]庚-6-基-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸與ha的綴合物的製備[1272][1273]將透明質酸溶液(161mg，0.4mmol)溶解於32ml的去離子水中，並且向20ml的乙腈中添加4-甲基嗎啉(nmm，28mg，0.28mmol)並且然後將溶液冷卻到0℃。添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(166mg，0.6mmol)並且在室溫下攪拌1小時。然後添加4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸2-氮雜螺[3.3]庚-6-基酯鹽酸鹽(157mg，0.28mmol)水溶液(5ml)並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw2000kda，0.14g，產率：61.5％，ds：3％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.27–8.18(m,0.03h),7.63–7.51(m,0.03h),6.90–6.77(m,0.03h),5.29–5.16(m,0.03h),4.57–4.28(m,2.03h),4.11–2.87(m,10.39h),2.64–2.47(m,0.12h),2.30–1.46(m,3.06h),1.07–0.97(m,0.09h).[1274]實施例74[1275]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基環丁酯與ha的綴合物的製備[1276][1277]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-((叔丁氧基羰基)氨基)環丁酯的製備[1278][1279]將三乙胺(1012mg，1.39ml，10mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1249.5mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dcm(120ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(3-羥基環丁基)氨基甲酸叔丁酯(1123mg，6mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:10～1:5)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.5g，產率：71.4％)。ms(m/z):c26h35n7o5的[m+h]+計算值，526.61；實驗值，526.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm8.47(d,j＝9.3hz,1h),7.44(dd,j＝11.3,4.2hz,1h),6.64(d,j＝4.2hz,1h),5.19(d,j＝33.2hz,2h),5.05(t,j＝6.8hz,1h),4.04(dd,j＝13.2,4.6hz,1h),3.82(dd,j＝13.7,7.4hz,1h),3.69–3.57(m,1h),3.56–3.44(m,2h),3.37(d,j＝18.8hz,3h),3.09–2.95(m,2h),2.50(dt,j＝14.1,6.3hz,1h),2.18(d,j＝10.0hz,2h),2.01–1.86(m,1h),1.83–1.69(m,1h),1.68–1.53(m,2h),1.45(s,9h),1.08(dd,j＝15.2,7.1hz,3h).[1280]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基環丁酯鹽酸鹽的製備[1281][1282]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(4ml，16mmol)逐滴添加到4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-((叔丁氧基羰基)氨基)環丁酯(0.525g，1mmol)於乙酸乙酯(20ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.46g，產率：99.6％)。ms(m/z):c21h27n7o3的[m+h]+計算值，426.49；實驗值，426.2。[1283]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基環丁酯與ha的綴合物的製備[1284][1285]將4-甲基嗎啉(nmm，50mg，0.5mmol)添加到透明質酸(201mg，0.5mmol)於40ml的去離子水和20ml的乙腈中的溶液中並且然後將溶液冷卻到0℃。添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(277.5mg，1mmol)並且然後在室溫下攪拌1小時。添加4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸3-氨基環丁酯鹽酸鹽(231mg，0.5mmol)並且然後在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(439mg，7.5mmol)添加到反應混合物中並攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.31g，產率：78.8％，ds：33％)；1hnmr(400mhz,氧化氘)δppm8.25–8.13(m,0.33h),7.60–7.47(m,0.33h),6.88–6.74(m,0.33h),5.12–4.95(m,0.66h),4.56–4.31(m,2h),4.15–2.88(m,13.3h),2.76–2.61(m,0.33h),2.43–2.19(m,0.66h),2.05–1.41(m,4.32h),1.09–0.80(m,0.99h).[1286](透明質酸鈉mw500kda，0.22g，產率：55.9％，ds：41％)。1hnmr(400mhz,氧化氘)δppm8.19–8.04(m,0.41h),7.54–7.38(m,0.41h),6.85–6.61(m,0.41h),5.10–4.95(m,0.82h),4.56–4.20(m,2h),4.06–2.70(m,14.1h),2.69–2.49(m,0.41h),2.40–2.15(m,0.82h),2.10–1.44(m,4.64h),1.08–0.68(m,1.23h).[1287](透明質酸鈉mw2000kda，0.2g，產率：50.8％，ds：49％)；1hnmr(400mhz,氧化氘)δppm8.20–7.89(m,0.49h),7.60–6.98(m,0.49h),6.61–6.54(m,0.49h),5.22–4.87(m,0.98h),4.64–4.26(m,2h),4.16–2.80(m,14.9h),2.78–2.63(m,0.49h),2.48–2.24(m,0.98h),2.07–1.47(m,4.96h),1.11–0.76(m,1.47h).[1288]實施例75[1289]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環庚-4-基酯與ha的綴合物的製備[1290][1291]步驟1：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸1-(叔丁氧基羰基)氮雜環庚-4-基酯的製備[1292][1293]將三乙胺(2.78ml，20mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(937mg，3mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1094mg，3.6mmol)於dcm(30ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到40℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加4-羥基氮雜環庚烷-1-甲酸叔丁酯(775mg，3.6mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:1～4:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.93g，產率：56％)。ms(m/z):c28h39n7o5的[m+h]+計算值，554.66；實驗值，554.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm8.45(d,j＝8.3hz,1h),7.44(dd,j＝12.1,4.1hz,1h),6.62(d,j＝4.0hz,1h),5.28(s,1h),5.14(s,1h),4.09–3.75(m,2h),3.69–3.28(m,11h),2.59–2.37(m,1h),2.14–1.84(m,6h),1.86–1.71(m,2h),1.48(s,9h),1.08(dd,j＝15.2,7.1hz,3h).[1294]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環庚-4-基酯鹽酸鹽的製備[1295][1296]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(4ml，16mmol)逐滴添加到4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸1-(叔丁氧基羰基)氮雜環庚-4-基酯(0.63g，1.14mmol，1當量)於乙酸乙酯(12ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.55g，產率：98.5％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c23h31n7o3的[m+h]+計算值，454.55；實驗值，454.2。[1297]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環庚-4-基酯與ha的綴合物的製備[1298][1299]將4-甲基嗎啉(nmm，50mg，0.5mmol)添加到透明質酸(201mg，0.5mmol羧酸)於40ml的去離子水和20ml的乙腈中的溶液中並且然後將溶液冷卻到0℃。添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(207.5mg，0.75mmol)並且在室溫下攪拌1小時。將溶液與4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲酸氮雜環庚-4-基酯鹽酸鹽(245mg，0.5mmol)混合併且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(439mg，7.5mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.18g，產率：44.2％，ds：12％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.31–8.13(m,0.12h),7.59–7.42(m,0.12h),6.89–6.76(m,0.12h),5.28–5.16(m,0.24h),4.60–4.30(m,2h),4.14–3.04(m,11.56h),2.47–2.34(d,j＝31.1hz,0.12h),2.19–1.49(m,3.96h),1.10–0.91(m,0.36h).[1300](透明質酸鈉mw2000kda，0.16g，產率：39.3％，ds：18％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.29–8.17(m,0.18h),7.57–7.41(m,0.18h),6.86–6.74(m,0.18h),5.29–5.16(m,0.36h),4.56–4.25(m,2h),4.13–2.77(m,12.34h),2.46–2.31(d,j＝31.1hz,0.18h),2.19–1.36(m,4.44h),1.08–0.82(m,0.54h).[1301]實施例76[1302]3-((3r,4r)-3-((7-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[1303][1304]步驟1：(1s,4s)-5-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯的製備[1305][1306]在室溫下將3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1250mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dmso(25ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加(1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(992mg，5mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝50:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(2g，產率：93.1％)。ms(m/z):c27h36n8o4的[m+h]+計算值，537.64；實驗值，537.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ8.30(d,j＝5.9hz,1h),7.30(d,j＝9.4hz,1h),6.74–6.52(m,1h),5.10(s,1h),4.68(d,j＝124.9hz,2h),4.17–4.02(m,1h),3.81(d,j＝53.0hz,3h),3.66–3.24(m,9h),2.59–2.45(m,1h),1.96(qd,j＝11.8,9.6,7.0hz,2h),1.77(s,2h),1.46(s,9h),1.11(dd,j＝10.0,7.1hz,3h).[1307]步驟2：3-((3r,4r)-3-((7-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈鹽酸鹽的製備[1308][1309]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(2ml，8mmol)逐滴添加到(1s,4s)-5-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(0.52g，0.97mmol)於乙酸乙酯(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.45g，產率：98.2％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c22h28n8o2的[m+h]+計算值，437.52；實驗值，437.3。[1310]步驟3：3-((3r,4r)-3-((7-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[1311][1312]將透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)溶解於100ml圓底燒瓶中的32ml的去離子水中，隨後在攪拌時逐滴添加21ml的乙腈。在室溫下將3-((3r,4r)-3-((7-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈鹽酸鹽(132mg，0.28mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，28mg，0.28mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw2000kda，0.19g，產率：59.5％，ds：29％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.23–8.08(m,0.29h),7.36–7.21(m,0.29h),6.85–6.73(m,0.29h),4.65–4.30(m,2.29h),4.10–2.72(m,14.35h),2.47–2.33(m,0.29h),2.03–1.44(m,2.58h),1.14–0.86(m,0.87h)[1313]實施例77[1314]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(2-(甲基氨基)乙基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1315][1316]步驟1：(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1317][1318]將三乙胺(2330mg，3.2ml，23mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(3442mg，11mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(3352mg，11mmol)於dcm(103ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(4-氨基苯乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2300mg，9.19mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:2～4:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(2.9g，產率：53.7％)。ms(m/z):c31h40n8o4的[m+h]+計算值，589.71；實驗值，589.2。[1319]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(2-(甲基氨基)乙基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1320][1321]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(8ml，32mmol)逐滴添加到(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.588g，1mmol，1當量)於乙酸乙酯(20ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.48g，產率：98.3％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c26h32n8o2的[m+h]+計算值，489.60；實驗值，489.3。[1322]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(2-(甲基氨基)乙基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1323][1324]將4-甲基嗎啉(nmm，21mg，0.21mmol)添加到透明質酸(121mg，0.3mmol)於24ml的去離子水和14ml的乙腈中的溶液中並且然後將溶液冷卻到0℃。添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(83mg，0.3mmol)並且在室溫下攪拌1小時。添加4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(2-(甲基氨基)乙基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(110mg，0.21mmol)並且在室溫下攪拌72小時。將nacl(175.5mg，3mmol)添加到反應混合物中並且攪拌1小時。在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)並且然後將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.22g，產率：86.3％，ds：30％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.04–7.93(m,0.3h),7.65–7.09(m,1.20h),6.87–6.63(m,0.60h),4.54–4.28(m,2.30h),4.04–2.64(m,14.8h),2.32–2.14(m,0.30h),2.04–1.41(m,3.60h),1.07–0.82(m,0.90h)[1325](透明質酸鈉mw2000kda，0.13g，產率：51％，ds：15％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.02–7.87(m,0.15h),7.34–6.88(m,0.60h),6.79–6.36(m,0.30h),4.55–4.14(m,2.15h),4.07–2.51(m,12.4h),2.36–2.22(m,0.15h),1.87(s,3h),1.47–1.37(m,0.30h),1.05–0.80(m,0.45h)[1326]實施例78[1327]n-(3-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1328][1329]步驟1：(3-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1330][1331]將三乙胺(1.3ml，9.5mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1190mg，3.81mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1390mg，4.57mmol)於dcm(24ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。將反應混合物冷卻到室溫並且添加(3-氨基苯乙基)氨基甲酸叔丁酯(900mg，3.81mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將混合物用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:2～4:5)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.687g，產率：31.4％)。ms(m/z):c30h38n8o4的[m+h]+計算值，575.69；實驗值，575.2.[1332]步驟2：n-(3-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1333][1334]將含4mhcl的乙酸乙酯(2.64ml)在冰浴下緩慢添加到n-(3-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺叔丁酯鹽酸鹽(0.66g，1.15mmol)於etoac(13.2ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物溫熱到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.55g，產率：93.5％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c25h30n8o2的[m+h]+計算值，475.57；實驗值，475.2。[1335]步驟3：n-(3-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1336][1337]在室溫下將n-(3-(2-氨基乙基)苯基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(143mg，0.28mmol)和4-甲基嗎啉(nmm、28mg，0.28mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol，mw50kda)於32ml的去離子水和21ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.234g，產率：70％，ds：50％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.99–7.85(m,0.50h),7.22–6.88(m,2h),6.66–6.42(m,1h),4.53–4.25(m,2.5h),4.09–2.44(m,16.5h),2.31–2.22(m,0.5h),2.02–1.70(m,3h),1.67–1.36(m,1h),0.99–0.83(m,1.5h).[1338](透明質酸鈉mw2000kda，0.229g，產率：68.5％，dsr：40％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.98–7.83(m,0.40h),7.22–6.89(m,1.6h),6.67–6.38(m,0.8h),4.51–4.23(m,2.40h),4.08–2.42(m,15.2h),2.31–2.15(m,0.40h),2.01–1.70(m,3h),1.65–1.35(m,0.80h),0.96–0.80(m,1.20h).[1339]實施例79[1340]n-(2-(2-氨基乙氧基)吡啶-4-基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1341][1342]步驟1：(2-((4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1343][1344]將三乙胺(1.3ml，9.5mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1190mg，3.81mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1390mg，4.57mmol)於dcm(24ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(2-((4-氨基吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(964mg，3.81mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:2～4:5)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.45g，產率：19.9％)。ms(m/z):c29h37n9o5的[m+h]+計算值，592.67；實驗值，592.3。[1345]步驟2：n-(2-(2-氨基乙氧基)吡啶-4-基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1346][1347]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(1.8ml，7.2mmol)逐滴添加到(2-((4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，0.76mmol)於乙酸乙酯(9ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.4g，產率：99.7％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c24h29n9o3的[m+h]+計算值，492.56；實驗值，492.3。[1348]步驟3：n-(2-(2-氨基乙氧基)吡啶-4-基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1349][1350]在0℃下將4-甲基嗎啉(0.058g，0.38mmol，1.5當量)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.067g，0.38mmol，1當量)添加到透明質酸鈉(0.153g，0.38mmol，1當量)於乙腈(22ml)和h2o(30ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌1小時。將n-(2-(2-氨基乙氧基)吡啶-4-基)-4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.2g，0.38mmol)添加到反應混合物中並且然後用4-甲基嗎啉將反應混合物的ph調整到6.5至7。將所得反應混合物在室溫下攪拌3天。將含nacl(222mg，10當量)的h2o(2ml)添加到上述反應混合物中並攪拌0.5小時。然後將丙酮(350ml)逐滴添加到上述混合物中，同時形成沉澱物。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.167g，產率：51.6％，dsr：18％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.52–8.19(m,0.18h),7.87–7.34(m,0.54h),7.08–6.68(m,0.36h),4.63–4.31(m,2.18h),4.13–2.93(m,12.34h),2.50–2.29(m,0.18h),2.22–1.52(m,3.36h),1.14–0.86(m,0.54h).[1351](透明質酸鈉mw2000kda，0.137g，產率：42.3％，dsr：30％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.42–8.28(m,0.30h),7.86–7.45(m,0.90h),7.12–6.77(m,0.60h),4.59–4.29(m,2.30h),4.13–2.82(m,13.90h),2.47–2.29(m,0.30h),2.03–1.47(m,3.60h),1.06–0.85(m,0.90h).[1352]實施例80[1353]n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[1354][1355]步驟1：n2-(叔丁氧基羰基)-n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸甲酯的製備[1356][1357]將三乙胺(1265mg，1.7ml，12.5mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1561mg，5mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1824mg，6mmol)於dcm(46ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌16小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(叔丁氧基羰基)賴氨酸甲酯(1300mg，5mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:5～3:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.6g，產率：20％)。ms(m/z):c29h42n8o6的[m+h]+計算值，599.71；實驗值，599.2。[1358]步驟2：n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸甲酯鹽酸鹽的製備[1359][1360]將含4mhcl的乙酸乙酯(2.7ml)在冰浴下緩慢添加到n2-(叔丁氧基羰基)-n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸(0.6g，1mmol)於etoac(30ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物溫熱到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.528g，產率：98.8％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c24h34n8o4的[m+h]+計算值，499.59；實驗值，499.2。[1361]步驟3：n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[1362][1363]在室溫下將n6-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)賴氨酸甲酯鹽酸鹽(150mg，0.28mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，28mg，0.28mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)於32ml和21ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.21g，產率：61.1％，ds：29％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.00–7.43(m,0.29h),7.29–6.64(m,0.29h),6.44–5.78(m,0.29h),4.63–4.22(m,2.29h),4.12–2.67(m,14.35h),2.44–1.29(m,4.32h),1.12–0.81(m,0.87h).[1364](透明質酸鈉mw2000kda，0.19g，產率：55.2％，dsr：52％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ8.00–7.53(m,0.52h),7.31–6.67(m,0.52h),6.43–5.87(m,0.52h),4.62–4.18(m,2.52h),4.10–2.52(m,17.80h),2.41–1.29(m,7.16h),1.11–0.78(m,1.56h).[1365]實施例81[1366]3-((3r,4r)-3-((7-(6-氨基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[1367][1368]步驟1：(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1369][1370]將三乙胺(1012mg，1.39ml，10mmol)添加到3-[(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-1-哌啶基]-3-氧代-丙腈(1249.5mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dcm(120ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌6小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(938mg，4.4mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(etoac:己烷＝1:20～1:7)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.5g，產率：68.1％)。ms(m/z):c28h38n8o4的[m+h]+計算值，551.66；實驗值，551.2。[1371]步驟2：3-((3r,4r)-3-((7-(6-氨基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈三氟乙酸的製備[1372][1373]將cf3cooh(2ml)在冰浴下緩慢添加到(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-2-氮雜螺[3.3]庚-6-基)氨基甲酸叔丁酯(275mg，0.5mmol)於dcm(10ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物冷卻到室溫並且然後在室溫下攪拌4小時。將溶液用dcm稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈棕色油狀物的標題化合物(0.26g，產率：78％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c23h30n8o2的[m+h]+計算值，451.55；實驗值，451.3。[1374]步驟3：3-((3r,4r)-3-((7-(6-氨基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈與ha的綴合物的製備[1375][1376]將4-甲基嗎啉(nmm，36mg，0.35mmol)添加到透明質酸(201mg，0.5mmol)於40ml的去離子水和acn(17ml)中的溶液中。然後將溶液冷卻到0℃，並且添加2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(201mg，0.5mmol)並且在室溫下攪拌1小時。將溶液與3-((3r,4r)-3-((7-(6-氨基-2-氮雜螺[3.3]庚烷-2-羰基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙腈三氟乙酸(197mg，0.35mmol)混合併且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(292.5mg，5mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(300ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。[1377](透明質酸鈉，mw50kda，0.21g，產率：51.7％，ds：15％)；1hnmr(400mhz,氧化氘)δ8.24–8.15(m,0.15h),7.35–7.22(m,0.15h),6.90–6.71(m,0.15h),4.61–4.37(m,2.15h),4.33–3.11(m,12.1h),2.77–2.51(m,0.30h),2.48–2.30(m,0.15h),2.11–1.60(m,3.6h),1.09–0.87(m,0.45h).[1378](透明質酸鈉mw2000kda，0.2g，產率：49.3％，dsr：11％)；1hnmr(400mhz,氧化氘)δ8.26–7.99(m,0.11h),7.36–7.17(m,0.11h),6.88–5.73(m,0.11h),4.62–4.35(m,2.11h),4.34–3.04(m,11.54h),2.73–2.52(m,0.22h),2.46–2.29(m,0.11h),2.12–1.54(m,3.44h),1.11–0.81(m,0.33h).[1379]實施例82[1380](z)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1381][1382]步驟1：(z)-1-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯的製備[1383][1384]在室溫下將(3z)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(1079mg，2mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(668.8mg，2.2mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加肼甲酸叔丁酯(264.3mg，2mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝8:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.5g，產率：35.8％)。ms(m/z):c41h49n7o7的[m+h]+計算值，752.89；實驗值，752.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm12.08(s,1h),7.58(dt,j＝14.8,7.2hz,3h),7.45(dd,j＝13.8,6.9hz,3h),6.98(d,j＝8.2hz,2h),6.80(d,j＝8.2hz,2h),5.97(d,j＝8.3hz,1h),3.85(s,12h),3.18(s,3h),2.85(d,j＝36.9hz,4h),2.51(d,j＝21.2hz,8h),1.49(s,9h).[1385]步驟2：(z)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽的製備[1386][1387]將含4mhcl的乙酸乙酯(1.6ml)在冰浴下緩慢添加到(z)-1-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯(0.4g，0.57mmol)於etoac(4ml)中的攪拌溶液中。使反應混合物溫熱到室溫並且然後在室溫下攪拌16小時。將溶液用etoac稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.36g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c36h41n7o5的[m+h]+計算值，652.77；實驗值，652.2。[1388]步驟3：(z)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1389][1390]在室溫下將(3z)-1-(肼羰基)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽(150mg，0.236mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，23.9mg，0.236mmol)添加到透明質酸鈉(136mg，0.337mmol)於30ml的去離子水和19.5ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，93mg，0.337mmol)並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。透明質酸鈉mw50kda，0.153g，產率：44.8％，ds：12％；1hnmr(400mhz,氧化氘)δ7.70–7.18(m,0.84h),7.10–6.79(m,0.36h),5.99–5.76(m,0.12h),4.59–4.30(m,2h),4.06–2.62(m,12.28h),2.34–2.12(m,0.96h),2.07–1.67(m,3h).[1391]實施例83[1392](z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1393][1394]步驟1：(z)-1-((1s,4s)-5-(叔丁氧基羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯的製備[1395][1396]在室溫下將(3z)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(1349mg，2.5mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(912mg，3mmol)於dmso(27ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加(1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(620mg，3.125mmol)。將反應混合物在40℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝20:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.15g，產率：60.3％)。ms(m/z):c42h49n7o7的[m+h]+計算值，764.90；實驗值，764.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ12.08(s,1h),7.91(d,j＝15.4hz,1h),7.65–7.51(m,3h),7.42(dt,j＝24.9,7.1hz,3h),6.99(dd,j＝8.2,4.9hz,2h),6.79(t,j＝7.8hz,2h),5.96(dd,j＝8.3,5.2hz,1h),4.93(s,1h),4.61(s,1h),3.81(d,j＝38.8hz,5h),3.51(s,2h),3.18(s,3h),2.78(s,2h),2.41(s,7h),2.12–1.88(m,5h),1.49(m,9h).[1397]步驟2：(z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽的製備[1398][1399]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(2.4ml，9.6mmol)逐滴添加到(z)-1-((1s,4s)-5-(叔丁氧基羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯(600mg，0.786mmol)於乙酸乙酯(12ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(540mg，產率：98％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c37h41n7o5的[m+h]+計算值，664.32；實驗值，664.3。[1400]步驟3：(z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1401][1402]在室溫下將(z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽(56mg，0.08mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，8mg，0.08mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)於32ml的去離子水和21ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。收集濾餅，用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.169g，產率：41.2％，dsr：14％)；1hnmr(400mhz,氧化氘)δ7.69–7.22(m,0.84h),7.21–6.78(m,0.56h),5.93–5.82(m,0.14h),4.96–4.79(m,0.14h),4.50–4.16(m,2.14h),4.00–2.49(m,12.66h),2.30–2.16(m,0.7h),2.00–1.52(m,3h).[1403]實施例84[1404]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1405][1406]將硫酸軟骨素(231.5mg，0.5mmol)溶解於40ml的去離子和26ml的乙腈中。在室溫下將4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼(129.5mg，0.35mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，138mg，0.5mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(293mg，5mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.23g，產率：55.5％，dsr：19％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm8.32-8.24(m,0.19h),7.67–7.58(m,0.19h),6.89–6.79(m,0.19h),4.64-4.33(m,2.19h),4.26–3.19(m,11.71h),2.05–1.44(m,3.57h),1.16–0.83(m,0.57h).[1407]實施例85[1408]4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1409][1410]將硫酸軟骨素(266mg，0.58mmol)溶解於50ml的去離子水和25ml的乙腈中。在室溫下將4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼(230mg，0.58mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，189mg，0.68mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(339mg，5.8mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.135g，產率：28.9％，dsr：7％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm8.94-8.57(m,0.14h),8.44-8.34(m,0.07h),8.03–7.88(m,0.07h),7.39–7.29(m,0.07h),4.67-4.34(m,2.07h),4.33–3.04(m,10.14h),2.23–1.78(m,3.14h),1.77–1.26(m,0.56h).[1411]實施例86[1412]4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1413][1414]將硫酸軟骨素(200mg，0.43mmol)溶解於40ml的去離子水和20ml的乙腈中。在室溫下將4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼(200mg，0.43mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，141mg，0.51mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(252mg，4.3mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.177g，產率：47.3％，dsr：3％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm9.06-8.86(m,0.06h),8.50-8.42(m,0.03h),8.14–8.06(m,0.03h),7.51–7.31(m,0.03h),4.62-4.28(m,2.12h),4.24–3.05(m,10.12h),2.55–1.57(m,3.09h).[1415]實施例87[1416]1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-n-甲基-甲磺醯胺與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1417][1418]在攪拌時將硫酸軟骨素(250mg，0.54mmol)溶解於50ml的去離子水和25ml的乙腈中。在室溫下將1-[4-[[7-(肼羰基)吡咯並[2,3-d]嘧啶-4-基]-甲基-氨基]環己基]-n-甲基-甲磺醯胺(230mg，0.54mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，175mg，0.54mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(316mg，5.4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.314g，產率：69.5％，dsr：16％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm8.44-8.35(m,0.16h),7.91–7.80(m,0.16h),7.04–6.92(m,0.16h),4.64-4.36(m,2h),4.35–3.05(m,10.48h),3.03–2.92(m,0.32h),2.77–2.60(m,0.48h),2.56–2.39(m,0.16h),2.20–1.58(m,3.8h),1.49–1.30(m,0.64h).[1419]實施例88[1420](4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-l-賴氨酸甲酯與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1421][1422]在攪拌時將硫酸軟骨素(231.5mg，0.5mmol)溶解於46ml的去離子水和23ml的乙腈中。在室溫下將(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)-l-賴氨酸甲酯(187mg，0.35mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，145mg，0.53mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(293mg，5mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.23g，產率：48.1％，dsr：35％)。1hnmr(400mhz,d2o)δ8.20–7.68(m,0.35h),7.33–6.95(m,0.35h),6.47–6.02(m,0.35h),4.80–4.18(m,2.35h),4.11–2.78(m,15.25h),2.33–1.16(m,5.8h),1.11–0.78(m,1.05h).[1423]實施例89[1424](2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1425][1426]在攪拌時將硫酸軟骨素(184mg，0.4mmol)溶解於42ml的去離子水和21ml的乙腈中。在室溫下將(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[(1r)-2-氰基-1-環戊基-乙基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(210mg，0.4mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，130mg，0.47mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mg，4mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(0.153g，產率：39％，ds：5％)1h-nmr(400mhz,d2o):δppm8.96-8.8(m,0.1h),8.44-8.34(m,0.05h),8.05–7.92(m,0.05h),7.40–7.27(m,0.05h),4.62-4.36(m,2.1h),4.29–3.03(m,10.25h),3.02–2.9(m,0.1h),2.47–2.25(m,0.05h),2.20–1.81(m,3.15h),1.72–1.24(m,0.55h).[1427]實施例90[1428](2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1429][1430]在攪拌時將硫酸軟骨素(117mg，0.25mmol)溶解於35ml的去離子水和20ml的乙腈中。在室溫下將(2s)-6-氨基-2-[[4-[1-[3-(氰基甲基)-1-乙基磺醯基-氮雜環丁烷-3-基]吡唑-4-基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(150mg，0.25mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，83mg，0.3mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(146mg，2.5mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.123g，產率：％，ds：4％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm9.04-8.96(m,0.08h),8.49-8.41(m,0.04h),8.12–8.03(m,0.04h),7.49–7.33(m,0.04h),4.62-4.29(m,2.16h),4.25–3.05(m,10.32h),3.03–2.84(m,0.08h),2.55–1.50(m,3.08h),1.47–1.19(m,0.28h).[1431]實施例91[1432](2s)-6-氨基-2-[[4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯與硫酸軟骨素的綴合物的製備[1433][1434]在攪拌時將硫酸軟骨素(331mg，0.72mmol)溶解於35ml的去離子水和20ml的乙腈中。在室溫下將(2s)-6-氨基-2-[[4-[甲基-[4-(甲基氨磺醯基甲基)環己基]氨基]吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基]氨基]己酸甲酯(400mg，0.72mmol)添加到溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，235mg，0.85mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(421mg，7.2mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加無水酒精(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用無水酒精洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物(0.255g，產率：35％，dsr：5％)。1h-nmr(400mhz,d2o):δppm8.44-8.34(m,0.05h),7.91–7.79(m,0.05h),7.02–6.92(m,0.05h),4.64-4.39(m,2.05h),4.31–3.06(m,10.5h),3.03–2.90(m,0.1h),2.52–2.35(m,0.15h),2.34–1.54(m,3.4h),1.48–1.24(m,0.35h).[1435]實施例92[1436]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(哌啶-4-基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1437][1438]步驟1：4-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的製備[1439][1440]在n2下將三乙胺(1.46g，14.4mmol，2.5當量)添加到託法替尼(1.8g，5.76mmol，1當量)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1.93g，6.34mmol，1.1當量)於dcm(30ml)中的混合物中並且將反應混合物加熱至回流持續3小時。然後添加4-(4-氨基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.591g，5.76mmol，1當量)並且使所得混合物回流持續12小時。在減壓下去除溶劑並且通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(1.25g，產率：35.3％)；ms(m/z):c33h42n8o4的[m+h]+計算值，615.33；實驗值，615.3。[1441]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(哌啶-4-基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1442][1443]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(4ml，16mmol)逐滴添加到4-(4-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺基)苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，3.18mmol)於乙酸乙酯(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌2天。在減壓下去除溶劑後，將所得固體在乙酸乙酯(24ml)中攪拌0.5小時，然後過濾以得到呈固體的所期望產物(0.9g，產率：100％)；ms(m/z):c28h34n8o2的[m+h]+計算值，515.28；實驗值，515.3。[1444]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(哌啶-4-基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1445][1446]將透明質酸鈉(0.174g，0.432mmol)溶解於mecn(22ml)和h2o(35ml)中。然後在0℃下將4-甲基嗎啉(0.066g，0.65mmol)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.076g，0.432mmol)添加到上述溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後溫熱到室溫並攪拌1小時。然後將4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n-(4-(哌啶-4-基)苯基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-甲醯胺鹽酸鹽(0.238g，0.432mmol)添加到上述溶液中，並且將所得溶液在室溫下攪拌3天。將含nacl(253mg，4.32mmol)的h2o(1ml)添加到上述反應混合物中並且攪拌0.5小時。然後將丙酮(350ml)逐滴添加到上述混合物中，同時形成沉澱物。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅。將固體溶解於mecn(20ml)和h2o(40ml)中以形成均勻溶液並且在3.5kdamw截止膜上對去離子水進行透析，並且然後凍幹以提供標題化合物(0.15g，產率：43.2％，ds：7.6％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm7.49-7.29(m,0.53h),4.70-4.20(m,2h),4.00-3.23(m,9.14h),2.50-2.30(m,0.19h),1.99(d,3h),1.60-1.40(m,0.51h),1.3-1.15(m,0.2h),1.15-0.85(m,0.2h).[1447]在步驟3反應條件的情況下，透明質酸鈉(0.174gmw2000kda)提供了對應的產物(0.16g，產率：46％，ds＝2.3％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm7.75-7.15(m,0.16h),4.50-4.25(m,2h),4.15-2.90(m,10.34h),2.45-2.35(m,0.09h),1.99(s,3h),1.25-1.15(m,0.05h),1.05-0.95(m,0.1h).[1448]實施例93[1449]4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甘氨醯基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[1450][1451]步驟1：(2-(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1452][1453]在室溫下將hatu(0.898g，2.364mmol)、dipea(0.512g，3.94mmol)添加到(叔丁氧基羰基)甘氨酸(0.414g，2.364mmol)於mecn(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後將4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(0.8g，1.97mmol，1當量)添加到上述溶液中。在室溫下將所得溶液攪拌10小時，然後在減壓下去除溶劑，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(0.642g，產率：62％)；ms(m/z):c24h33n9o5的[m+h]+計算值，528.26；實驗值，528.3。[1454]步驟2：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甘氨醯基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽的製備[1455][1456]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(4ml，16mmol)逐滴添加到(2-(2-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-羰基)肼基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.642g，1.217mmol)於乙酸乙酯(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌2天。在減壓下去除溶劑，將所得固體在乙酸乙酯(10ml)中攪拌0.5小時，然後過濾以得到呈固體的所期望產物(0.56g，產率：100％)；ms(m/z):c19h25n9o3的[m+h]+計算值，428.21；實驗值，428.2。[1457]步驟3：4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甘氨醯基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼與ha的綴合物的製備[1458][1459]在0℃下將4-甲基嗎啉(0.066g，0.65mmol)和2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(0.076g，0.431mmol)添加到透明質酸鈉(0.174g，0.431mmol)於在mecn(22ml)和h2o(35ml)中的混合物中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌1小時。然後將4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-n'-甘氨醯基-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-碳醯肼鹽酸鹽(0.2g，0.431mmol)添加到上述溶液中，並且將所得溶液在室溫下攪拌3天。添加含nacl(253mg)的h2o(2ml)並攪拌0.5小時。將丙酮(350ml)逐滴添加到上述混合物中，同時形成沉澱物。將混合物過濾，用丙酮洗滌濾餅並且然後將其溶解於mecn(20ml)和h2o(40ml)中以形成均勻溶液。在溶液的3.5kdamw截止膜上對去離子水進行透析，並且然後凍幹，提供標題化合物(0.183g，產率：49％，ds：11％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.90-7.40(m,0.11h),7.75-7.35(m,0.11h),6.95-6.50(m,0.11h),4.75-4.20(m,2h),4.00-3.23(m,11.36h),2.60-2.40(m,0.11h),1.99(s,3h),1.80-1.65(m,0.22h),1.15-0.85(m,0.33h).[1460]在步驟3反應條件的情況下，透明質酸鈉(0.174gmw2000kda)提供了對應的產物(0.19g，產率：51％，ds＝11％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δppm8.30-7.90(m,0.11h),7.65-7.20(m,0.11h),6.9-6.30(m,0.11h),4.60-4.20(m,2h),4.00-3.00(m,11.36h),2.50-2.30(m,0.11h),1.99(s,3h),1.70-1.60(m,0.22h),1.10-0.85(m,0.33h).[1461]實施例94[1462]n-(4-氨基丁基)-p-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)磷醯胺苯酯與ha的綴合物的製備[1463][1464]步驟1：(4-(((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)(苯氧基)磷醯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1465][1466]在n2下將n,n-二異丙基乙胺(1.45g，16mmol)添加到託法替尼(1g，3.2mmol)、(4-氨基丁基)氨基甲酸叔丁酯(603mg，3.2mmol)和二氯磷酸苯酯(675mg，3.2mmol)於mecn(20ml)中的混合物中，將反應混合物加熱至回流持續16小時。在減壓下去除溶劑後，通過矽膠色譜法純化殘餘物以得到標題產物(400mg，產率：19.6％)；ms(m/z):c31h43n8o5p的[m+h]+計算值，639.31；實驗值，639.3。[1467]步驟2：n-(4-氨基丁基)-p-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)磷醯胺苯酯鹽酸鹽的製備[1468][1469]在0℃下在n2下將含4.5mhcl的ea(0.9ml，4.5mmol)逐滴添加到(4-(((4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)(苯氧基)磷醯基)氨基)丁基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.313mmol)於ea(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌持續2天。在減壓下去除溶劑後，將所得固體在ea(20ml)中攪拌0.5小時，然後過濾以得到所期望產物(150mg，產率：83.4％)；ms(m/z):c26h35n8o3p的[m+h]+計算值，539.26；實驗值，539.3。[1470]步驟3：n-(4-氨基丁基)-p-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)磷醯胺苯酯與ha的綴合物的製備[1471][1472]在0℃下將4-甲基嗎啉(31.8mg，0.31mmol)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(36.6mg，0.21mmol)添加到透明質酸鈉(84mg，0.21mmol)於mecn(15.6ml)和h2o(24ml)中的混合物中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘，並且在室溫下攪拌1小時。然後將n-(4-氨基丁基)-p-(4-(((3r,4r)-1-(2-氰基乙醯基)-4-甲基哌啶-3-基)(甲基)氨基)-7h-吡咯並[2,3-d]嘧啶-7-基)磷醯胺苯酯鹽酸鹽(120mg，0.21mmol)添加到溶液中，並且用nmm將反應混合物的ph值調整在6.5至7之間。將所得溶液在室溫下攪拌3天。添加含nacl(122mg)的h2o(1ml)並攪拌0.5小時。然後逐滴添加丙酮(168ml)並且過濾所得混合物用丙酮洗滌濾餅並且將其溶解於mecn(8.4ml)和h2o(16.8ml)中以形成均勻溶液。溶液對去離子水透析3次，然後凍幹以提供標題化合物(82mg，產率：43.2％，ds＝31％)。1h-nmr(400mhz,d2o)δ8.35-8.25(m,0.28h),7.55-7.35(m,0.86h),7.30-7.15(m,0.94h),6.90-6.80(m,0.42h),4.60-4.20(m,2h),4.10-3.20(m,15.37h),2.65-2.55(m,0.53h),1.99(s,3h),1.75-1.40(m,2h),1.20-1.15(m,0.95h).[1473]實施例95[1474](z)-1-甘氨醯基-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1475][1476]步驟1：(z)-1-((叔丁氧基羰基)甘氨醯基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯的製備[1477][1478]將(3z)-3-[[4-[甲基-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯基]氨基]苯胺基]-苯基-亞甲基]-2-氧代-吲哚-6-甲酸甲酯(1079mg，2mmol)、(叔丁氧基羰基)甘氨酸(701mg，4mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，864.5mg，4.5mmol)、n,n-二甲基吡啶-4-胺(dmap，1098mg，9mmol)溶解於dcm(80ml)中。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm/meoh＝50:1～20:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(700mg，產率：50.2％)。ms(m/z):c38h44n6o7的[m+h]+計算值，697.81；實驗值，697.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ12.11(s,1h),8.91(d,j＝1.7hz,1h),7.64–7.50(m,4h),7.42–7.37(m,2h),7.06–7.00(m,2h),6.82(d,j＝8.4hz,2h),5.92(d,j＝8.3hz,1h),5.45(s,1h),4.83(d,j＝5.4hz,2h),3.87(s,3h),3.19(s,3h),2.96(q,j＝7.3hz,2h),2.79(s,2h),2.56–2.34(m,6h),2.28(s,3h),1.50(s,9h).[1479]步驟2：(z)-1-甘氨醯基-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯鹽酸鹽的製備[1480][1481]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(2ml，8mmol)逐滴添加到(z)-1-((叔丁氧基羰基)甘氨醯基)-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯(139mg，0.2mmol)於乙酸乙酯(10ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(83mg，產率：70％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c33h36n6o5的[m+h]+計算值，597.69；實驗值，597.2。[1482]步驟3：(z)-1-甘氨醯基-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯與ha的綴合物的製備[1483][1484]在室溫下將(z)-1-甘氨醯基-3-(((4-(n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醯胺基)苯基)氨基)(苯基)亞甲基)-2-氧代吲哚-6-甲酸甲酯(149mg，0.25mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，25mg，0.25mmol)添加到透明質酸鈉(201mg，0.5mmol)於去離子水(40ml)和乙腈(26ml)中的溶液中。在室溫下將反應混合物攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，104mg，0.75mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。將nacl(293mg)添加到反應混合物中並且攪拌1小時，並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(250mg，產率：52.2％，ds＝17％)。1hnmr(400mhz,d2o)δ8.58–8.40(m,0.17h),7.65–7.15(m,1.02h),7.07–6.75(m,0.68h),4.52–4.21(m,2h),4.01–2.50(m,12.89h),2.33–2.13(m,0.51h),2.00–1.59(m,3h)[1485]實施例96[1486](z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-(肼羰基)-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1487][1488]步驟1：(z)-n6-(叔丁氧基羰基)-n2-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-l-賴氨酸甲酯的製備[1489][1490]在室溫下將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(1594mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加n6-(叔丁氧基羰基)-l-賴氨酸甲酯(1250mg，4.8mmol)。將反應混合物在40℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝20:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.77g，產率：28.1％)。ms(m/z):c35h49fn6o7的[m+h]+計算值，685.81；實驗值，685.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm12.75(s,1h),9.31(d,j＝7.6hz,1h),8.17(d,j＝4.7hz,1h),7.42(s,1h),7.17(dd,j＝8.4,2.5hz,1h),6.91(td,j＝9.0,2.6hz,1h),6.63(s,1h),4.75–4.64(m,1h),4.60(s,1h),3.80(d,j＝6.4hz,3h),3.52(dd,j＝10.9,5.2hz,2h),3.14(d,j＝5.5hz,2h),2.76–2.46(m,12h),2.08–1.79(m,2h),1.60–1.37(m,13h),1.06(t,j＝7.1hz,6h).[1491]步驟2：(z)-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽的製備[1492][1493]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(3.6ml，14.4mmol)逐滴添加到(z)-n6-(叔丁氧基羰基)-n2-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-l-賴氨酸甲酯(600mg，0.877mmol)於乙酸乙酯(18ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈固體的標題化合物(498mg，產率：91.5％)。ms(m/z):c30h41fn6o5的[m+h]+計算值，585.69；實驗值，585.2。[1494]步驟3：(z)-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-l-賴氨酸甲酯與ha的綴合物的製備[1495][1496]在室溫下將(z)-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-l-賴氨酸甲酯鹽酸鹽(130mg，0.21mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，21mg，0.21mmol)添加到透明質酸鈉(130mg，0.21mmol)於去離子水(24ml)和乙腈(16ml)中的溶液中。在室溫下將反應混合物攪拌2小時。另外，添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，83mg，0.3mmol)並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(176mg)添加到反應混合物中並且攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.19g，產率：95.7％，ds：6％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.82–7.62(m,0.06h),7.38–7.13(m,0.06h),6.97–6.72(m,0.12h),4.55–4.27(m,2.06h),4.06–2.75(m,10.42h),2.53–1.48(m,4.08h),1.39–1.26(m,0.06h).[1497]實施例97氧代吲哚-1-羰基)肼-1-甲酸叔丁酯(1000mg，1.8mmol)於乙酸乙酯(40ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(410mg，產率：82.8％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c23h29fn6o3的[m+h]+計算值，457.52；實驗值，457.2。[1506]步驟3：(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-(肼羰基)-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1507][1508]在室溫下將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-(肼羰基)-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽(138mg，0.28mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，28mg，0.28mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)於去離子水(32ml)和乙腈(21ml)中的溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時並且然後添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)並且在室溫下攪拌72小時。將nacl(234mg)添加到反應混合物中並攪拌1小時並且然後隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.185g，產率：56.6％，ds：10％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.76–7.19(m,0.20h),7.08–6.66(m,0.20h),4.56–4.24(m,2h),4.07–2.88(m,10.20h),2.54–1.55(m,4.20h),1.41–1.22(m,0.60h).[1509]實施例98[1510](z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1511][1512]步驟1：(z)-4-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的製備[1513][1514]在室溫下將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(1594mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加哌嗪-1-甲酸叔丁酯(894mg，4.8mmol)並且在40℃下攪拌反應混合物持續16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝40:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.5g，產率：61.4％)。ms(m/z):c32h43fn6o5的[m+h]+計算值，611.73；實驗值，611.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm13.05(s,1h),7.39(s,1h),7.19(dd,j＝8.6,2.5hz,1h),7.11(dd,j＝8.7,4.3hz,1h),6.90(td,j＝8.9,2.5hz,1h),6.66(s,1h),3.89–3.30(m,10h),2.71(t,j＝5.9hz,2h),2.68–2.57(m,7h),2.51(s,3h),1.49(s,9h),1.07(t,j＝7.1hz,6h).[1515]步驟2：(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1516][1517]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(8ml，32mmol)逐滴添加到(z)-4-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1000mg，1.64mmol)於乙酸乙酯(50ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(890mg，產率：99％)。ms(m/z):c27h35fn6o3的[m+h]+計算值，511.61；實驗值，511.2。[1518]步驟3：(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1519][1520]在室溫下在攪拌時將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代-1-(哌嗪-1-羰基)吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽(109mg，0.2mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，20mg，0.2mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)於32ml的去離子水和22ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌2小時並且添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.197g，產率：56.5％，ds：10％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.64–7.46(m,0.10h),7.41–7.21(m,0.10h),7.04–6.71(m,0.20h),4.53–4.27(m,2h),4.06–2.97(m,11h),2.51–1.64(m,4.20h),1.39–1.24(m,0.60h).[1521]實施例99[1522]5-(((z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1523][1524]步驟1：(1s,4s)-5-((z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯的製備[1525][1526]在室溫下將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(1594mg，4mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(1460mg，4.8mmol)於dmso(30ml)中的混合物攪拌7小時。然後添加(1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(992mg，5mmol)。將反應混合物在40℃下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中並且用etoac萃取。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝8:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(1.3g，產率：52％)。ms(m/z):c33h43fn6o5的[m+h]+計算值，623.74；實驗值，623.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm13.07(s,1h),7.39(d,j＝9.9hz,1h),7.18(h,j＝6.6,5.5hz,2h),6.91(td,j＝8.6,2.7hz,1h),6.57(s,1h),4.98–4.43(m,2h),3.70(d,j＝14.5hz,2h),3.58–3.34(m,4h),2.68(t,j＝5.9hz,2h),2.64–2.56(m,7h),2.51(d,j＝3.1hz,3h),2.03(dd,j＝32.4,7.3hz,2h),1.47(dd,j＝20.0,8.9hz,9h),1.05(t,j＝7.1hz,6h).[1527]步驟2：5-(((z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1528][1529]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(2.9ml，11.6mmol)逐滴添加到(1s,4s)-5-((z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-羰基)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(730mg，1.17mmol，1當量)於乙酸乙酯(15ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.65g，產率：99％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c28h35fn6o3的[m+h]+計算值，523.63；實驗值，522.3。[1530]步驟3：5-(((z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1531][1532]在室溫下將5-(((z)-1-((1s,4s)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-羰基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽(45mg，0.08mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，8.1mg，0.08mmol)添加到透明質酸鈉(161mg，0.4mmol)於32ml的去離子水和22ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，111mg，0.4mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(234mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.17g，產率：48.1％，ds：12％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.61–6.69(m,0.48h),4.59–4.29(m,2.24h),4.20–2.93(m,10.72h),2.54–1.58(m,4.68h),1.41–1.23(m,0.72h).[1533]實施例100[1534](z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-甘氨醯基-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1535][1536]步驟1：(z)-(2-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1537][1538]將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(996mg，2.5mmol)、(叔丁氧基羰基)甘氨酸(876mg，5mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，1081mg，5.625mmol)、n,n-二甲基吡啶-4-胺(dmap，1372mg，11.25mmol)溶解於dcm(48ml)和dmf(12ml)中。在室溫下將反應混合物攪拌18小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm/甲醇＝50:1～20:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(440mg，產率：31.7％)。ms(m/z):c29h38fn5o5的[m+h]+計算值，556.65；實驗值，556.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm12.93(s,1h),7.81(dd,j＝8.9,4.5hz,2h),7.38(s,1h),7.18(dd,j＝8.4,2.6hz,1h),6.97–6.91(m,1h),4.72(s,1h),3.81(s,2h),3.28–3.00(m,8h),2.65(s,3h),2.58(s,3h),1.40(d,j＝28.3hz,15h).[1539]步驟2：(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-甘氨醯基-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1540][1541]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(3ml，12mmol)逐滴添加到(z)-(2-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(222mg，0.4mmol)於乙酸乙酯(20ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.14g，產率：71.2％)。ms(m/z):c24h30fn5o3的[m+h]+計算值，456.53；實驗值，456.2。[1542]步驟3：(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-甘氨醯基-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1543][1544]在室溫下將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-1-甘氨醯基-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽(56mg，0.1mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，10mg，0.1mmol)添加到透明質酸鈉(201mg，0.5mmol)於40ml的去離子水和26ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時並且添加4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，28mg，0.1mmol)並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.2g，產率：49％，ds：9％)；1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.03–7.80(m,0.09h),7.51–7.21(m,0.18h),6.99–6.73(m,0.09h),4.43–4.25(m,2.18h),4.11–2.81(m,10.90h),2.51–1.60(m,3.54h),1.40–1.22(m,0.54h).[1545]實施例101[1546](z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[1547][1548]步驟1：(z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酯的製備[1549][1550]將三乙胺(379.5mg，3.75mmol)添加到(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(598mg，1.5mmol)和雙(4-硝基苯基)碳酸酯(548mg，1.8mmol)於dcm(30ml)中的攪拌混合物中。將反應混合物加熱到45℃並且在此溫度下攪拌20小時。然後將反應混合物冷卻到室溫。然後添加(4-羥基丁基)氨基甲酸叔丁酯(426mg，2.25mmol)。在室溫下將反應混合物攪拌22小時。將溶液用dcm稀釋並且用飽和nahco3溶液、水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm:甲醇＝20:1～10:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(0.6g，產率：65.2％)。ms(m/z):c32h44fn5o6的[m+h]+計算值，614.73；實驗值，614.3。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δ12.93(s,1h),7.81(dd,j＝8.9,4.5hz,1h),7.38(s,1h),7.28(s,1h),7.18(dd,j＝8.4,2.6hz,1h),6.93(td,j＝9.0,2.6hz,1h),4.72(s,1h),4.49(t,j＝6.6hz,2h),3.81(s,2h),3.27–3.03(m,8h),2.65(s,3h),2.58(s,3h),1.90(t,j＝7.5hz,2h),1.71(q,j＝7.3hz,2h),1.44(s,9h),1.38(d,j＝9.3hz,6h).[1551]步驟2：(z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸4-氨基丁酯鹽酸鹽的製備[1552][1553]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(3ml，12mmol)逐滴添加到4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁基-(z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸(184mg，0.3mmol)於乙酸乙酯(15ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.12g，產率：72.7％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c27h36fn5o4的[m+h]+計算值，514.61；實驗值，514.2。[1554]步驟3：(z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸4-氨基丁酯與ha的綴合物的製備[1555][1556]在室溫下將(z)-3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-甲酸4-氨基丁酯鹽酸鹽(55mg，0.1mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，10mg，0.1mmol)添加到透明質酸鈉(201mg，0.5mmol)於40ml的去離子水和26ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，42mg，0.15mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後在攪拌時逐滴添加丙酮(40ml)。將混合物過濾。將濾餅用丙酮洗滌，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(透明質酸鈉mw50kda，0.2g，產率：45.7％，ds：28％)；1hnmr(400mhz,d2o)δ7.48–6.42(m,1.12h),4.57–4.18(m,2.56h),4.04–2.60(m,12.80h),2.41–1.58(m,4.8h),1.43–1.17(m,0.84h).[1557]實施例102[1558](z)-5-((1-(4-氨基丁醯基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1559][1560]步驟1：(z)-(4-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯的製備[1561][1562]將(z)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(797mg，2mmol)、4-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸(813mg，4mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(edci，864.5mg，4.5mmol)、n,n-二甲基吡啶-4-胺(dmap，1098mg，9mmol)和dipea(1034mg，8mmol)溶解於dcm(48ml)和dmf(12ml)中。在室溫下將反應混合物攪拌16小時。將溶液用dcm稀釋並用水和飽和鹽水溶液洗滌。將有機層經硫酸鈉乾燥、過濾並且然後在減壓下濃縮。通過柱色譜法(dcm/meoh＝50:1～10:1)純化粗殘餘物，以提供標題化合物(560mg，產率：48％)。ms(m/z):c31h42fn5o5的[m+h]+計算值，584.71；實驗值，584.2。1hnmr(400mhz,氯仿-d)δppm12.85(s,1h),8.21(dd,j＝9.0,4.7hz,1h),7.98(s,1h),7.37(s,1h),7.16(dd,j＝8.5,2.7hz,1h),6.92(td,j＝9.0,2.6hz,1h),4.73(s,1h),3.86(s,2h),3.33–3.19(m,5h),3.14(d,j＝7.6hz,3h),2.69(s,3h),2.58(s,3h),1.98(q,j＝7.1hz,2h),1.47–1.36(m,11h),1.35–1.18(m,6h).[1563]步驟2：(z)-5-((1-(4-氨基丁醯基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺鹽酸鹽的製備[1564][1565]在0℃下在n2下將含4mhcl的乙酸乙酯溶液(3ml，12mmol)逐滴添加到(z)-(4-(3-((4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基甲醯基)-3,5-二甲基-1h-吡咯-2-基)亞甲基)-5-氟-2-氧代吲哚-1-基)-4-氧代丁基)氨基甲酸叔丁酯(204mg，0.35mmol)於乙酸乙酯(15ml)中的溶液中。將所得反應混合物在0℃下攪拌30分鐘並且然後在室溫下攪拌20小時。將溶液用乙酸乙酯(20ml)稀釋並且在減壓下濃縮以提供呈白色固體的標題化合物(0.16g，產率：94.6％)，所述標題化合物無需進一步純化即可使用。ms(m/z):c26h34fn5o3的[m+h]+計算值，484.59；實驗值，484.2。[1566]步驟3：(z)-5-((1-(4-氨基丁醯基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺與ha的綴合物的製備[1567][1568]在室溫下將(z)-5-((1-(4-氨基丁醯基)-5-氟-2-氧代吲哚-3-亞基)甲基)-n-(2-(二乙基氨基)乙基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲醯胺(150mg，0.236mmol)和4-甲基嗎啉(nmm，23.9mg，0.236mmol)添加到透明質酸鈉(136mg，0.337mmol)於30ml的去離子水和19.5ml的乙腈中的溶液中。將反應混合物在此溫度下攪拌2小時。將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(dmtmm，93mg，0.337mmol)添加到溶液中並且在室溫下攪拌72小時。然後將nacl(197mg，3.37mmol)添加到反應混合物中，將所述反應混合物攪拌1小時並且隨後逐滴添加丙酮(200ml)。將混合物過濾並且用丙酮洗滌濾餅，並且在真空下乾燥以得到呈白色固體的標題化合物。(153mg，產率：53％，ds＝10％)。1hnmr(400mhz,d2o)δppm8.03–7.89(m,0.1h),7.47–7.25(m,0.2h),7.02–6.87(m,0.1h),4.58–4.17(m,2h),4.12–2.92(m,11h),2.56–2.45(m,0.6h),2.12–1.70(m,3.2h),1.58–1.46(m,0.2h),1.42–1.25(m,0.6h).[1569]實施例103[1570]藥物遞送系統的藥物釋放[1571]方法[1572]使用測試化合物進行藥物釋放和穩定性實驗。在milliporeultra-0.5ml30k超濾離心管中用10mmpbs緩衝液(ph＝7.4)製備約2.5±1.0mg/ml(關於綴合物)的每種測試化合物的溶液。溶液在室溫下保持膨脹持續1小時並且然後在37℃下以100rpm放置在振蕩器中進行連續實驗。在每天的同一時間點，將樣品以10000rpm離心1小時。將等分試樣轉移到hplc小瓶中以進行分析。向離心管中添加0.4ml的10mmpbs緩衝液並繼續實驗。[1573]對於每個時間點的hplc分析，獲取色譜圖中所有相關峰的峰面積並計算游離藥物的濃度。基於游離藥物的總量和實驗天數計算游離藥物的平均釋放。計算方程如下。[1574][1575]樣品降解率是基於綴合藥物的濃度和取代度(nmr)計算的，與實驗的初始起點有關(在t＝0時)。計算方程如下。[1576][1577]結果[1578]表1示出了本公開的示例性藥物遞送系統的藥物釋放的結果。[1579]表1[1580][1581][1582]前述說明書被認為僅是對本公開的原理的說明。進一步地，由於許多修改和變化對於本領域技術人員來說將顯而易見，所以並不期望將本發明限於如上文所描述的所示確切構造和過程。因此，所有合適的修改和等效物可以被視為落入由所附權利要求書限定的本發明的範圍內。當前第1頁12當前第1頁12