金銀花、黃芩、其提取物及含其提取物的製劑的質量控制方法
2023-10-26 05:32:37 1
專利名稱：金銀花、黃芩、其提取物及含其提取物的製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種原藥材、其提取物及包含提取物的製劑的質量控制方法，更具體地說是涉及一種金銀花葯材、黃芩藥材、其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的質量控制方法。
背景技術：
金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、紅花腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山銀花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的乾燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒、涼散風熱之功效，主要用於癰腫、疔瘡、喉痺、丹毒、熱血毒痢、溫病發熱等；黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的乾燥根，具有清熱燥溼、瀉火解毒之功效，主要用於肺熱咳嗽、高熱煩渴、癰腫瘡毒等。二味配伍而成的銀黃製劑是現代臨床用於治療風熱犯肺而致發熱、咳嗽、咽痛等症的優選藥物。
目前對銀黃製劑及其所用初始原料金銀花和黃芩來說，大多是以綠原酸或黃芩苷的有無或多少來判定其質量優劣，而金銀花、黃芩的品種，產地、採收季節等均會影響藥材及其提取物的各成分含量，進而影響到製劑的質量，此種方法不能更加準確地反映藥材或其提取物、製劑的整體質量狀況，因此存在很大的缺陷。如《中國藥典》及衛生部版標準記載的金銀花、黃芩及其提取物和製劑的質量控制方法均採用鑑別和一種或兩種物質含量測定的方法來控制其質量是否合格，而對其它的成分未做規定。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材及其製劑中所共有的、具有特徵性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥有效成分絕大多數沒有十分明確的情況下，指紋圖譜的建立對於有效控制中藥材及其提取物和製劑的質量具有重要的意義。目前，有關金銀花、黃芩指紋圖譜的研究已有報導，而包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的指紋圖譜尚未見報導，其相關性研究也尚未見報導。
發明內容
本發明的目的是提供一種通過建立金銀花葯材、黃芩藥材，金銀花提取物、黃芩提取物、包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的一系列指紋圖譜來進行質量控制的方法，該質量控制方法對原材料、中間體和最終的製劑都適用，因此是一種可以進行全面質量控制的方法。
本發明涉及一種金銀花葯材、黃芩藥材，其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的質量控制方法，該方法包括(1)對照品指紋圖譜的建立對照品溶液的製備綠原酸對照品溶液的製備稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶解並稀釋至所需刻度，即得；黃芩苷對照品溶液的製備稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解並稀釋至所需濃度，即得；對照品指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到對照品的指紋圖譜；色譜條件
色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠柱；採用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數以綠原酸計應不低於2000；(2)供試品指紋圖譜的測定供試品溶液的製備精密稱取金銀花葯材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取金銀花提取物適量，加水溶解並稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩提取物適量，加甲醇溶解並稀釋至所需濃度，即得；稱取注射用銀黃粉末適量或取銀黃注射液適量，加水溶解並稀釋至所需濃度，即得；分別吸取上述五種供試品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到供試品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠柱；採用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數以綠原酸計應不低於2000；(3)將對照品的峰設定為參照峰，將其它物質的峰和參照物的峰相比，以其它物質的保留時間和峰面積與參照峰的保留時間和峰面積比較，計算其相對峰面積和相對保留時間，以此進行從原料到製劑的質量控制。
本發明所述色譜條件的所述梯度洗脫條件進一步如下0分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；
5分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；25分鐘時，流動相A為30-45％的乙腈，流動相B為70-55％的0.05-0.5％磷酸；30分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸。
本發明所選的波長為327nm。
本發明中，其中當供試品溶液為金銀花葯材時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.844的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.024的峰為4-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.099的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.372的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.422的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸；以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含3，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.395-0.593，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.145-0.241。
本發明中，其中當供試品溶液為金銀花提取物時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.854的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.034的峰為4-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.382的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.427的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.466的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸。
進一步以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.347-0.645，所含4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.352-0.653，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.529-2.294，所含4，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.583-0.972，所含3，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.410-0.762，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.847-1.412。
本發明中，其中當供試品溶液為黃芩藥材時，標定了3個峰，以黃芩苷峰的保留時間進行計算，其餘兩個峰的相對保留時間分別為0.808和1.081。
本發明中，其中當供試品溶液為黃芩提取物時，標定了2個峰，以黃芩苷峰的保留時間進行計算，另一個峰的相對保留時間為0.837。
本發明中，其中當供試品溶液為含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.858的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.032的峰為4-O-啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.380的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.426的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸；相對保留時間為1.592的峰為黃芩苷。
進一步以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.645-1.198，所含4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.596-1.108，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.754-2.923，所含4，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.843-1.567，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的且相對峰面積為0.985-1.930，所含黃芩苷的峰的相對峰面積為6.307-9.461。
本發明中，還對金銀花葯材和提取物、黃芩藥材和黃芩提取物及其製劑指紋圖譜的相關性進行了研究分別將金銀花葯材和提取物及製劑、黃芩藥材和黃芩提取物及製劑指紋圖譜相比較，通過各指紋圖譜中共有峰的數目以及各共有峰間彼此對應關係情況來考察金銀花、黃芩及其提取物和製劑指紋圖譜的相關性。製劑中前七個峰來自金銀花，金銀花葯材和提取物中峰為一一對應，在處理過程中各峰之間相互轉換使藥材、提取物和製劑中各峰面積比不同。製劑中8號峰(黃芩苷)來自於黃芩。4個指紋圖譜均與製劑之間對應關係良好。本發明具有以下優點1.本發明在建立含有金銀花和黃芩的指紋圖譜的過程中，確證了各共有峰的化學成分，分別為5-O-咖啡醯奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡醯奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，4-O-咖啡醯奎寧酸、黃芩苷，並對其峰面積比進行了研究，保證了製劑的化學組成穩定性和使用安全性，而現有技術中，在採用指紋圖譜進行質量控制的過程中並沒有對所有共有峰的化學成分進行測定。
2.本發明應用指紋圖譜技術不僅監測和控制了反映包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的整體質量狀況，同時進一步控制了原料質量及整個生產工藝流程的穩定性，從而提供了一種從原料到成品的全面質量控制方法，確保了製劑療效的一致性，彌補了以往技術中只涉及某一方面的缺點。
3.本發明採用高效液相色譜方法進行檢測，方法簡便、穩定、精密度高、重現性好，較之於其他檢測方法如氣相色譜法、高效毛細管電泳法等更為實用，大大節約了成本和時間，其檢測波長選擇327nm，也是因為在該波長出峰較多，反應的信息較完全。
4.本發明採用高效液相色譜對金銀花、黃芩藥材及其提取物和製劑進行指紋圖譜及其相關性研究，與以往只通過綠原酸或黃芩苷的有無或多少來判定藥材或其提取物、製劑的質量優劣相比較，更為科學準確。
5.本發明包括了以金銀花和黃芩組方的製劑指紋圖譜研究，通過製劑中共有峰的數目、相對保留時間以及相對峰面積比值來控制製劑的質量，確保製劑質量的均一性、穩定性，使中藥製劑在應用過程中更加安全、可控，減少因中藥製劑成分複雜不清而引起的各種潛在危險。
6.本發明在對金銀花、黃芩藥材指紋圖譜的建立中，供試品溶液的製備所採用的提取溶劑為水，較之於其他提取溶劑如甲醇、乙醇、無水乙醇等更為貼近生產實際，使藥材、中間體和成品之間的相關性得到更好的體現，工藝過程的控制更簡單、易行。
7.本發明通過對金銀花及其提取物、黃芩藥材及黃芩苷和製劑指紋圖譜的相關性考察，結果表明金銀花、黃芩藥材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性很好，應用其相關性考察可有效控制金銀花、黃芩藥材及其提取物和製劑的質量狀況。
圖1顯示了本發明的金銀花葯材的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至7號峰。分別為5-O-咖啡醯奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡醯奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，4-O-咖啡醯奎寧酸。
圖2顯示了本發明的黃芩藥材的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至3號峰。
圖3顯示了本發明的金銀花提取物的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至7號峰。分別為5-O-咖啡醯奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡醯奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，4-O-咖啡醯奎寧酸。
圖4顯示了本發明的黃芩提取物(黃芩苷)的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至2號峰。
圖5顯示了本發明的製劑的指紋圖譜，其中從左到右分別是共有峰1至8號峰。分別為5-O-咖啡醯奎寧酸、綠原酸、4-O-咖啡醯奎寧酸、咖啡酸、4，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，5-O-咖啡醯奎寧酸、3，4-O-咖啡醯奎寧酸、黃芩苷。
具體實施例方式
實施例一、金銀花葯材指紋圖譜1、色譜條件laballiance高效液相色譜儀；seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸對照品(中國藥品生物製品鑑定所提供，批號11075-200212)；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純。
色譜柱KromasilC18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；採用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10ul。
2、對照品溶液的製備取綠原酸對照品5mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的製備精密稱取金銀花葯材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取1ml續濾液置於50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結果結合指紋圖譜的技術要求進行分析。共標定出7個共有峰；以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.844(1)，1.000(2)，1.024(3)，1.09 9(4)，1.372(5)，1.422(6)，1.464(7)。並規定相對保留時間為1.422和1.464的峰的相對峰面積比值為0.395～0.593(6)，0.145～0.241(7)。金銀花葯材各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值結果分別見下表。
金銀花葯材各共有峰相對保留時間
金銀花葯材各共有峰相對峰面積比值
6、指紋圖譜精密度考察按照指紋圖譜精密度考察要求，以第1批金銀花葯材為供試品，連續進樣6次，分別計算共有峰的相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％。
7、指紋圖譜重現性考察以第1批金銀花葯材為供試品，按照指紋圖譜重現性規定方法進行操作，分別計算共有峰的相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％。
8、指紋圖譜穩定性試驗按照指紋圖譜穩定性測定方法操作，以第1批金銀花葯材為供試品，考察24小時溶液的穩定性，分別計算共有峰相對保留時間及相對峰面積比值，RSD(％)不超過3％，供試品溶液24小時內穩定。
以上試驗表明，該測定方法穩定、可靠，指紋圖譜相對穩定。
實施例二、金銀花提取物指紋圖譜1、色譜條件laballiance高效液相色譜儀；seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸對照品(中國藥品生物製品鑑定所提供，批號11075-200212)；金銀花提取物(自製)；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；採用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10ul。
2、對照品溶液的製備取綠原酸對照品5mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的製備精密稱取金銀花提取物10mg，置於100ml容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結果結合指紋圖譜的技術要求進行分析。標定出7個共有峰；以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.854(1)，1.000(2)，1.034(3)，1.111(4)，1.382(5)，1.427(6)，1.466(7)。各共有峰的相對峰面積比值為0.347～0.645(1)，0.352～0.653(3)，1.529～2.294(4)，0.583～0.972(5)，0.410～0.762(6)，0.847～1.412(7)。金銀花提取物各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
金銀花提取物各共有峰相對保留時間統計結果
金銀花提取物各共有峰相對峰面積比值統計結果
該方法的精密度、重現性均符合指紋圖譜技術要求，樣品溶液在24小時內穩定。
實施例三、黃芩藥材指紋圖譜
1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
黃芩苷(中國藥品生物製品鑑定所提供，批號11015-200212)；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；採用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10ul。
2、對照品溶液的製備取黃芩苷對照品6mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的製備精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取1ml續濾液置於100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，5.結果結合指紋圖譜的技術要求進行分析。標定出3個共有峰；以2號峰(黃芩苷峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.808(1)，1.000(2)，1.081(3)。除黃芩苷峰外，各共有峰佔總峰面積均小於10％，故對相對峰面積比值不作規定。黃芩藥材各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值結果分別見下表黃芩藥材各共有峰相對保留時間
黃芩藥材各共有峰相對峰面積比值
該方法的精密度、重現性均符合指紋圖譜技術要求，樣品溶液在24小時內穩定。
實施例四、黃芩提取物指紋圖譜1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
黃芩苷對照品(中國藥品生物製品鑑定所提供，批號11015-200212)；黃芩苷(自製)；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；採用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10ul。
2、對照品溶液的製備取黃芩苷對照品6mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的製備精密稱取黃芩苷7mg，置於100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結果結合指紋圖譜的技術要求進行分析。標定出2個共有峰；以2號峰(黃芩苷峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.837(1)，1.000(2)。1號峰峰面積小於5％，故對其相對峰面積比值不做要求。黃芩苷各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
黃芩苷各共有峰相對保留時間統計結果
黃芩苷各共有峰相對峰面積比值統計結果
該方法的精密度、重現性均符合指紋圖譜技術要求，樣品溶液在24小時內穩定。
實施例五、含有金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的指紋圖譜1、色譜條件高效液相色譜儀lab alliance seriesIII二元泵；UV6000LP檢測器；Ezchrom Elite工作站。
綠原酸、黃芩苷、咖啡酸對照品為中國藥品生物製品鑑定所提供；4-O-咖啡醯奎寧酸、5-O-咖啡醯奎寧酸、3，4-O-咖啡醯奎寧酸、3，5-O-咖啡醯奎寧酸、4，5-O-咖啡醯奎寧酸對照品為自製，純度均在98％以上；乙腈為色譜純，其餘試劑均為分析純。
色譜柱Kromasil C18(Ф4.6×250mm，5um)；流動相A乙腈，流動相B0.1％磷酸；採用梯度洗脫，洗脫程序見下表；檢測波長327nm；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進樣量10ul。
2、對照品溶液的製備取各個對照品5mg，精密稱定，分別置100ml容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
3、供試品溶液的製備取注射用銀黃粉末(自製)10mg置於100ml容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
取銀黃注射液(自製)0.5ml於200ml量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
4、測定法分別精密吸取供試品溶液及參照物溶液各10ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。
5、結果結合指紋圖譜的技術要求進行分析。標定出8個共有峰。確定1號峰為5-O-咖啡醯奎寧酸；2號峰為綠原酸；3號峰為4-O-咖啡醯奎寧酸；4號峰為咖啡酸；5號峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸；6號峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸；7號峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸；8號峰為黃芩苷。以2號峰(綠原酸峰)為參照物峰(S)，各共有峰的相對保留時間分別為0.858(1)，1.000(2)，1.032(3)，1.111(4)，1.380(5)，1.426(6)，1.467(7)，1.592(8)；各共有峰的相對峰面積比值為0.645～1.198(1)，0.596～1.108(3)，1.754～2.923(4)，0.843～0.1.567(5)，0.985～1.930(7)，6.307～9.461(8)。
注射用銀黃(凍幹)各共有峰相對保留時間、相對峰面積比值分別見下表。
製劑各共有峰相對保留時間
製劑各共有峰相對峰面積比值
該方法的精密度、重現性均符合指紋圖譜技術要求，樣品溶液在24小時內穩定。
實施例六、金銀花、黃芩藥材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性考察1、金銀花葯材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性考察通過對金銀花葯材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性考察，結果發現金銀花葯材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花提取物指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應；金銀花葯材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花製劑指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應；金銀花提取物指紋圖譜中的1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰分別與金銀花製劑指紋圖譜中1號峰、2號峰(綠原酸峰)、3號峰、4號峰、5號峰、6號峰、7號峰相對應。結果表明金銀花葯材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性很好。
2、黃芩藥材及黃芩苷和製劑指紋圖譜相關性考察通過對黃芩藥材及其提取物和製劑指紋圖譜相關性考察，結果發現黃芩藥材指紋圖譜中的1號峰、2號峰(黃芩苷峰)分別與黃芩苷指紋圖譜中1號峰、2號峰(黃芩苷峰)相對應；黃芩藥材指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)與製劑指紋圖譜中的8號峰(黃芩苷峰)相對應；黃芩苷指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)與製劑指紋圖譜中的2號峰(黃芩苷峰)相對應。結果表明黃芩藥材及黃芩苷和製劑指紋圖譜相關性很好。
上述指紋圖譜及其相關性考察均可用於控制藥材及其提取物和製劑的質量。
實施例七取金銀花/或黃芩，按「發明內容」中「金銀花葯材指紋圖譜、黃芩藥材指紋圖譜」中的方法進行檢測，符合該指紋圖譜中的規定。
實施例八取金銀花提取物/或黃芩苷，按「發明內容」中「金銀花提取物指紋圖譜、黃芩提取物指紋圖譜」中的方法進行檢測，符合該指紋圖譜中的規定。
實施例九取含有金銀花和/或黃芩的製劑指紋圖譜，按「發明內容」中「含有金銀花和/或黃芩的製劑指紋圖譜」中的方法進行檢測，符合該指紋圖譜中的規定。
取實施例七、八中的指紋圖譜和製劑指紋圖譜照實施例6進行分析，相關性良好。
權利要求
1.一種金銀花葯材、黃芩藥材，其提取物以及包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的質量控制方法，該方法包括(1)對照品指紋圖譜的建立對照品溶液的製備綠原酸對照品溶液的製備稱取綠原酸對照品適量，加甲醇溶解並稀釋至所需刻度，即得；黃芩苷對照品溶液的製備稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇溶解並稀釋至所需濃度，即得；對照品指紋圖譜的測定吸取上述對照品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到對照品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠柱；採用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數以綠原酸計應不低於2000；(2)供試品指紋圖譜的測定供試品溶液的製備精密稱取金銀花葯材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取金銀花提取物適量，加水溶解並稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩藥材適量，加水回流提取，提取液放冷至室溫後過濾，取適量濾液加水稀釋至所需濃度，即得；精密稱取黃芩提取物適量，加甲醇溶解並稀釋至所需濃度，即得；稱取注射用銀黃粉末適量或取銀黃注射液適量，加水溶解並稀釋至所需濃度，即得；分別吸取上述五種供試品溶液注入高效液相色譜儀，依照高效液相色譜法測定，得到供試品的指紋圖譜；色譜條件色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠柱；採用梯度洗脫，流速0.5-1.2ml/分，流動相組成A乙腈，B0.05-0.5％磷酸；檢測波長300-345nm；分析時間30-60分；理論板數以綠原酸計應不低於2000；(3)將對照品的峰設定為參照峰，將其它物質的峰和參照物的峰相比，以其它物質的保留時間和峰面積與參照峰的保留時間和峰面積比較，計算其相對峰面積和相對保留時間，以此進行從原料到製劑的質量控制。
2.如權利要求1所述的質量控制方法，其中色譜條件中的所述梯度洗脫條件如下0分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；5分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸；25分鐘時，流動相A為30-45％的乙腈，流動相B為70-55％的0.05-0.5％磷酸；30分鐘時，流動相A為0-5％的乙腈，流動相B為100-95％的0.05-0.5％磷酸。
3.如權利要求1或2所述的質量控制方法，其中所選波長為327nm。
4.如權利要求1所述的質量控制方法，其中當供試品溶液為金銀花葯材時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.844的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.024的峰為4-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.099的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.372的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.422的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸；以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含3，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.395-0.593，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.145-0.241。
5.如權利要求1所述的質量控制方法，其中當供試品溶液為金銀花提取物時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.854的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.034的峰為4-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.382的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.427的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.466的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸。
6.如權利要求5所述的質量控制方法，其進一步以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.347-0.645，所含4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.352-0.653，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.529-2.294，所含4，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.583-0.972，所含3，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.410-0.762，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.847-1.412。
7.如權利要求1所述的質量控制方法，其中當供試品溶液為黃芩藥材時，標定了3個峰，以黃芩苷峰的保留時間進行計算，其餘兩個峰的相對保留時間分別為0.808和1.081。
8.如權利要求1所述的質量控制方法，其中當供試品溶液為黃芩提取物時，標定了2個峰，以黃芩苷峰的保留時間進行計算，另一個峰的相對保留時間為0.837。
9.如權利要求1所述的質量控制方法，其中當供試品溶液為含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑時，以綠原酸峰的保留時間進行計算，相對保留時間為0.858的峰為5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.032的峰為4-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.111的峰為咖啡酸，相對保留時間為1.380的峰為4，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.426的峰為3，5-O-咖啡醯奎寧酸，相對保留時間為1.467的峰為3，4-O-咖啡醯奎寧酸；相對保留時間為1.592的峰為黃芩苷。
10.如權利要求1所述的質量控制方法，其進一步以綠原酸峰的峰面積進行計算，供試品中所含5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.645-1.198，所含4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.596-1.108，所含咖啡酸的峰的相對峰面積為1.754-2.923，所含4，5-O-咖啡醯奎寧酸的峰的相對峰面積為0.843-1.567，所含3，4-O-咖啡醯奎寧酸的峰的且相對峰面積為0.98 5-1.930，所含黃芩苷的峰的相對峰面積為6.307-9.461。
全文摘要
本發明涉及一種金銀花葯材、黃芩藥材，其提取物及包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的質量控制方法。通過利用高溫液相色譜法建立了金銀花葯材、金銀花提取物、黃芩藥材、黃芩提取物以及包含金銀花提取物和黃芩提取物的製劑的從原料到最終製劑的一系列的指紋圖譜並對其之間的相關性進行了考察，從而建立了一種採用指紋圖譜對從原材料到中間體直至最終製劑成品的質量進行控制的方法，確保了產品工藝和產品質量的穩定、均一，同時也提供了一種有效的產品檢測方法。
文檔編號A61P11/14GK1969953SQ200610145989
公開日2007年5月30日 申請日期2006年11月30日 優先權日2006年11月30日
發明者石秀偉, 孔志雲 申請人:天津市軒宏醫藥技術有限公司