藥物製劑的製作方法

2023-10-07 13:03:34 2

專利名稱：藥物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及包含具有pH依賴性溶解性的鹼性藥物活性成分的新的口服藥物製劑，所述藥物製劑在酸性pH(優選低於pH3)下抑制鹼性藥物活性成分從製劑中的釋放，並且優選在胃腸道中的寬pH範圍內提供藥物活性成分的基本上不pH依賴性控制釋放；製備所述製劑的方法；和所述製劑在醫藥中的應用。
有效的控釋藥物製劑是理想的藥物產品，因為其使得能夠將藥物治療最優化；有機會既降低用藥頻率，又將不良副作用降到最低程度。然而，設計這樣的控釋系統並不是一件容易的事情，特別是當藥物製劑是打算用於口服給藥並且必須通過胃腸道時更是如此，因為，除了其它特徵以外，胃腸道沿著其長度表現出相當大的pH值變化。
與更為中性的環境相比，許多表現出鹼性特徵的藥物在低pH值下發生離子化並，並且溶解性在該pH範圍顯著增強。在胃腸道中的這種pH依賴性溶解性表現可導致可變的藥物釋放特性以及平行發生的體內生物利用度問題。
一些設法克服鹼性藥物的pH依賴性溶解性問題的嘗試已經有所描述。這些方法包括使用在低pH值下不溶解的腸溶聚合物來阻止藥物在低pH環境中的釋放[參見例如US 4968508，和A.Streubel等人，J.Controlled Release，67，101-110(2000)]，或者加入低分子量有機酸以在製劑基質內產生酸性微環境pH，從而使藥物的溶解度保持恆定[參見例如K.E.Gabr.，Eur.J.Pharm.Biopharm.，38(6)，199-202(1992)，和V.K.Thoma與Th.Zimmer，Pharm.Ind.51(1)，98-101(1989)]。在還包含中性聚合物的藥物製劑中摻入表現出pH依賴性溶解性的陰離子聚合物(例如藻酸鈉)，在低pH下會產生不溶性膠凝作用特性，從而導致強的擴散屏障，推理其是阻止藥物在低pH下釋放的主要機制[US 4792452；和P.Timmins等人，PharmaceuticalDevelopment and Technology，2(1)，25-31(1997)]。其它方法涉及使用帶電荷的聚合物來影響藥物釋放，這是通過與藥物產生離子相互作用[參見C.Caramella等人，Pharm.Res.14(11)，531(1997)，H.Y.Park等人，Drug Delivery，513-18(1998)，N.Caram-Lelham，Ph.D.thesis，Uppsala University(1996)]或者影響這些聚合物的膠凝和膨脹特性[參見K.M.Picker，Drug Dev.and Ind.Pharmacy，25(3)339-346(1999)]來實現的。其中所使用的製劑通常是基於一類聚合物。
Baveja等人，Int JPharmaceutics 39，39-45(1987)中公開，當非離子聚合物(HPMC)與陰離子聚合物(NaCMC)混合時，釋放可以被阻止。Ranga Rao等人，Drug Dev Ind Pharmacy，14，2299(1988)中公開，甲基纖維素和NaCMC的混合物可以產生不同的釋放特性。λ-角叉採膠和活性成分的混合物公開在WO 99/21586中。
已經報導了產生不依賴於pH的釋放特性的聯合方法[參見WO96/26717、WO 99/29305和WO 99/39698]。所有這三篇專利都公開了包含三種具有典型的不同水溶解性和膨脹性的聚合物的三組分基質製劑，可改變製劑的組成來調節這些特性，從而實現可調節的釋放速度。其中兩種組分涉及具有顯著的pH依賴性溶解性的膠凝性聚合物例如藻酸鈉，和具有低的或不顯著的pH依賴性溶解性的膠凝性聚合物如羥甲基丙基纖維素(HPMC)或聚氧化乙烯。第三種組分涉及腸溶包衣聚合物，例如甲基丙烯酸共聚物(WO 96/26717)；EUDRAGITL或S，其是特別類型的甲基丙烯酸聚合物(WO 99/29305)；或水溶性聚合物，例如乙基纖維素(WO 99/39698)。然而，這些方法通常沒有具體鎖定的鹼性藥物，並且依賴於腸溶包衣類型或水不溶性聚合物例如甲基丙烯酸聚合物，或pH依賴性膠凝性聚合物例如藻酸鈉來阻止藥物在低pH環境中的釋放，至少在某些部分是如此。
本發明提供了包含τ-角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物和鹼性藥物活性成分的口服藥物製劑；所述製劑能夠抑制鹼性藥物活性成分在酸性pH(優選在pH3以下；特別優選約pH1)下從製劑中的釋放。
基本上不依賴於pH的釋放是指釋放速度在pH1被顯著阻止，而在pH 6.8略有增加或不受影響，這樣鹼性藥物活性成分在任何一個時刻的釋放就具有較小的pH依賴性。
本發明還提供了含有τ-角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物和鹼性藥物活性成分的口服藥物製劑。
τ-角叉菜膠優選以15％重量以上的水平存在於本發明製劑中。τ-角叉菜膠優選是天然來源的。一種藥物等級的τ-角叉菜膠(得自FMCBiopolymer)具有不低於5釐泊(cps)，優選為5-10cps的粘度(將1.5％溶液溫熱至82℃，然後在75℃用裝配有#1轉軸的Brookfield LV粘度計以30rpm的轉速旋轉來測量粘度)。一種技術等級的τ-角叉菜膠(得自Fluka Biochemica)具有不低於14mPa.s的粘度，其中所述濃度是這樣測定的將0.3％水溶液加熱至20℃，然後用與Lauda恆溫器C3和Hakke Mess-System III一起使用的Haake型落球式粘度計，並且使用密度為7.8g/cm3的鍍金不鏽鋼球來測定粘度。
中性膠凝性聚合物是單一的具有膠凝性質和基本上不依賴於pH的溶解性的中性可侵蝕聚合物，或者是一種以上這樣的聚合物的混合物。中性膠凝性聚合物優選以10％重量以上，但是。更優選20％重量以上的水平存在於製劑中。{「可侵蝕」和「侵蝕」是指單獨或聯合的溶解或崩解。溶解可通過混合來促進，而崩解則可以通過與固體物質的機械相互作用來促進。}合適的中性膠凝性聚合物包括聚氧化乙烯(PEO)、PEO家族的衍生物和成員(例如聚乙二醇(PEG)，優選以固態形式天然存在，具有合適的分子量或粘度)。因此，中性膠凝性聚合物是例如聚氧化乙烯或聚乙二醇。
如果使用單一的中性膠凝性聚合物，PEO優選具有≥4百萬(4M)的MW(例如4百萬-8百萬的MW)，這與1650-5500mPa.s(或1650-5500cps；在25℃，使用裝配有No.2轉軸的Brookfield RVF粘度計以2rpm測量1％水溶液)的水溶液粘度範圍相對應。合適的PEO的其它實例包括MW為約5百萬(5M)的PEO，這與5500-7500mPa.s的水溶液粘度範圍相對應，或MW為約8百萬(8M)的PEO，這與10000-15000mPa.s的水溶液粘度範圍相對應。這個範圍包括在25℃測量的，在USP 24/NF 19，2000edition，pp.2285-2286中引用於該聚合物的典型溶液粘度(以cps為單位)。因此，PEO可具有4百萬-8百萬的MW。
如果將PEG用做單一的中性膠凝性聚合物，其優選具有高分子量，例如約20000的MW，這與2700-3500mPa.s(或2700-3500cps)的水溶液粘度範圍相對應，其中所述粘度是用50％水溶液(w/w)，在20℃，用毛細管粘度計(Ubbelohde或等同儀器)測量的。[參考歐洲藥典第3版，2000，Supplement，pp.908-909.]其它合適的膠凝性聚合物包括具有適宜高粘度的纖維素衍生物，例如羥丙基甲基纖維素(HPMC)或羥乙基纖維素(HEC)(但優選HPMC)(例如「HPMC 10000cps」、「HPMC 15000cps」、「HH型HEC」或「H型HEC」)。當使用單一的中性聚合物時，羥丙基甲基纖維素例如「HPMC 10000cps」和「HPMC 15000cps」分別具有7500-14000mPa.s(或7500-14000cps)和11250-21000mPa.s(或11250-21000cps)的表觀粘度，其中所述粘度是這樣測量的在20℃，使用以乾燥物質為基準計算的2％(w/w)水溶液，用毛細管粘度計(Ubbelohde或等同儀器)測量。一類羥乙基纖維素聚合物，例如得自HerculesIncorporated(Aqualon)的「Natrosol 250Pharma，HH型」典型地表現出了約20,000mPa.s的Brookfield粘度，其中所述粘度是用Brookfield Synchro-Lectric Model LVF儀器在下述條件下測量的1％溶液濃度，轉軸no.4，轉速30rpm，因數200，25℃(參見NatrosolPhysical and Chemical Properties booklet，33.007-E6(1993)，p.21)。
當使用中性膠凝性聚合物的混合物時，該混合物可例如包含兩種或兩種以上的PEO、兩種或兩種以上的HPMC、PEO和HPMC或PEO和PEG的混合物或摻合物。例如，可將MW為4百萬、5百萬或8百萬的PEO可以與MW為1百萬的PEO、MW 400,000的PEO、MW 100,000的PEO或MW 6000的PEG混合。
或者，中性膠凝性聚合物(例如PEO)可以與非膠凝性中性聚合物(例如低MW的PEG，例如MW低於10000的PEG)聯合使用。在這樣的聯合使用中，低MW PEG的實例包括MW 8000的PEG(與260-510mPa.s的粘度範圍相對應)或MW 6000的PEG(與200-270mPa.s的粘度範圍相對應)。
兩種或兩種以上的HPMC等級的混合物或摻合物可包括較低粘度(非膠凝性)和較高粘度(膠凝性)等級。例如，按照前面所定義的方法，分別具有40-60mPa.s、11.3-21.0mPa.s和4.8-7.2mPa.s的表觀粘度的「HPMC 50 cps」、「HPMC 15cps」和「HPMC 6cps」可以作為混合物與「HPMC 10000cps」或「HPMC 15000cps」聯合使用。
當本發明製劑是片劑時，兩種或兩種以上相同種類但MW不同的聚合物可以產生更好的侵蝕控制。依據本發明，當單獨使用或以混合物形式使用時，PEO的MW越高，製備製劑所需的聚合物就越少。
本發明的確切製劑取決於所選的膠凝性聚合物的分子量和分子量分布，以及所用的每一種聚合物的質量。
在本發明的一個方面，中性膠凝性聚合物是MW為約4百萬的PEO、MW為約20000或更高的PEG或具有約7500cps或更高表觀粘度(如上所述測量的)的纖維素衍生物。
中性膠凝性聚合物(例如PEO、PEG或HPMC；特別是PEO或HPMC；或者它們彼此之間的混合物或兩種或更多種PEO或HPMC的混合物)與τ-角叉菜膠的比例優選為20∶80-80∶20(尤其是40∶60-60∶40，例如約50∶50)。
鹼性藥物活性成分具有一個或多個pKa優選為1-12(例如1-10(尤其是1-7))的鹼性基團，還任選具有pKa大於10的一個或多個鹼性基團。因此，鹼性藥物活性成分可具有一個或多個pKa值，但至少有一個優選為1-12(例如1-10(尤其是1-7))。在這些鹼性藥物活性成分中，pKa為1-12(例如1-10)的鹼性基團的實例包括羥基胺，仲胺或叔胺，或伯醯胺或仲醯胺。
合適的鹼性藥物活性成分優選具有低到中等大小的水溶解度(例如在25℃和pH 7.0條件下，水溶解度可最高達50mg/ml(尤其是0.001-20mg/ml))，並且在低pH(例如pH 1-6(尤其是pH 1-2))下帶有一個或多個正電荷(取決於藥物活性成分中鹼性基團的數量和pKa)。
合適的鹼性藥物活性成分是例如具有心血管活性的化合物(例如肽或類肽凝血酶抑制劑)。肽凝血酶抑制劑具有低於1000的分子量，具有1、2、3或4個肽鍵，並表現出pH依賴性溶解性。它們包括按屬類描述的，並且更具體地描述於Claesson在Blood Coagul.Fibrin.5，411，(1994)中發表的綜述性文章中的肽凝血酶抑制劑(及其前藥)，以及在下述專利中描述的那些美國專利4,346,078；國際專利申請WO 97/23499，WO 97/02284，WO97/46577，WO98/01422，WO93/05069，WO93/11152，WO95/23609，WO95/35309，WO96/25426，WO94/29336，WO93/18060和WO95/01168；和歐洲專利出版物623596，648780，468231，559046，641779，185390，526877，542525，195212，362002，364344，530167，293881，686642，669317和601459。肽凝血酶抑制劑(或其前藥)尤其包括伊諾加群、美拉加群{HOOC-CH2-RCgl-Aze-Pab-H；甘氨酸，N-[2-[2-[[[[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]甲基]氨基]羰基]-1-氮雜環丁烷基]-1-環己基-2-氧代乙基]-，[2R-[2S]]-}}和H376/95{ximelagatran；EtO2C-CH2-RCgl-Aze-Pab-OH；參見WO 97/23499的實施例17；甘氨酸，N-[1-環己基-2-[2-[[[[4-(羥基亞氨基)氨基甲基]苯基]甲基]氨基]羰基]-1-氮雜環丁烷基]-2-氧代乙基}-，乙酯，[S-(R*，S*)]-}。
在另一個方面，肽凝血酶抑制劑(或其前藥)包括伊諾加群、美拉加群、H376/95、Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)。
在另一個方面，本發明提供了本文所述的製劑，其中所述鹼性藥物活性成分是Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe){化合物A}；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe){化合物D}；Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe){化合物E}；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH){化合物F}；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OH){化合物G}；Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEI){化合物H}。
化合物G可通過類似於下文所述的製備化合物F和Hd方法製得。
在另一個方面，本發明提供了藥物製劑，其中所述鹼性藥物活性成分是1.4-({3-[7-(3，3-二甲基-2-氧代丁基)-9-氧雜-3，7-二氮雜二環[3.3.1]壬-3-基]丙基}氨基)苄腈(該化合物在下文中稱為化合物B)；2.2-{7-[3-(4-氰基苯氨基)丙基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環-[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯；3.2-{7-[4-(4-氰基苯基)丁基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環-[3.3.1]壬-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯；或4.2-{7-[(2S)-3-(4-氰基苯氧基)-2-羥基丙基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯(該化合物在下文中稱為化合物C)；這些化合物已經被描述於WO01/28992中。
在另一個方面，所述鹼性藥物活性成分是美託洛爾或其鹽(例如其琥珀酸鹽或酒石酸鹽)。
本發明製劑可包含加工添加劑、穩定劑、增塑劑、著色劑、滑潤劑(例如硬脂基富馬酸鈉)、粘合劑、填充劑或表面活性劑或其它常用於藥物製劑的賦形劑。
在一個特別的方面，本發明製劑包含滑潤劑(例如硬脂基富馬酸鈉)。
在本發明的另一個方面，τ-角叉菜膠與鹼性藥物活性成分的摩爾比為3∶1-1∶3。
在另-個方面，本發明藥物製劑包含15-80％的τ-角叉菜膠。
在另一個方面，本發明藥物製劑包含15-80％的一種或多種中性膠凝性聚合物。
在另一個方面，本發明藥物製劑包含1-50％的鹼性藥物活性成分。
在另一個方面，本發明藥物製劑包含0-10％(尤其是1-10％)的加工添加劑、穩定劑、增塑劑、著色劑、滑潤劑、粘合劑、填充劑或其它常用於藥物製劑的賦形劑。
據信，在酸性pH下，抑制鹼性藥物活性成分從製劑中釋放(尤其是基本上不依賴於pH的控制釋放)的機制如下。在低pH時，因為處於強的離子化狀態，預計鹼性藥物活性成分將具有較高的溶解度，並由此預計會表現出從任何中性基質中快速釋放的特性。其理論解釋是，在酸性pH和τ-角叉菜膠存在下，在帶負電荷的τ-角叉菜膠與帶正電荷的藥物之間存在離子吸引力，這種吸引力阻止了藥物的釋放並由此帶來更為恆定的釋放特性。在較高pH時，因為藥物的離子化不強或根本不離子化，所以預計會表現出從任何中性基質中緩慢釋放的特性。其理論解釋是，上面所提到的離子相互作用並不顯著，並且釋放特性主要受用於製劑中的中性膠凝性聚合物和陰離子聚合物的聯合膨脹、膠凝和侵蝕特性的控制。
本發明製劑的最終膨脹、膠凝和侵蝕特性與象膠凝性聚合物的分子量和分子量分布以及陰離子聚合物這樣的特性有關，並且也與陰離子聚合物的pH依賴性水解速度有關。因此，通過調節膠凝性聚合物的特性(例如分子量或分子量分布)、存在於製劑中的τ-角叉菜膠的量和/或膠凝性聚合物與τ-角叉菜膠之間的比例，就可以獲得鹼性藥物活性成分的不同釋放速度。
本發明製劑可以作為固體劑型提供(例如片劑、膠囊、丸劑或在適宜容器中分散的粉劑或複合製劑的形式(例如在片劑、膠囊或小藥囊中給藥的包衣丸劑))。
在一個方面，本發明提供了含有20-500mg(尤其是40-60mg)鹼性藥物活性成分(例如H376/95；或化合物A、B或C)的片劑。
當本發明製劑作為片劑提供時，將該片劑優選這樣製備，根據胃腸道的各個部分，使所有的鹼性藥物活性成分以離子化或非離子化的形式在約20小時例如18-22(或20-26小時)的期間內釋放。
在另一個方面，本發明提供了製備本發明製劑的方法，所述方法包括將τ-角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物和鹼性藥物活性成分混合，並任選將所述混合物(優選在滑潤劑{例如硬脂基富馬酸鈉，以商品名PRUVTM銷售}存在下)壓製成片劑。
片劑可例如通過直接壓片或溼法制粒技術來製備。
對於直接壓片技術，將鹼性藥物活性成分與膠凝性聚合物和τ-角叉菜膠以及如果需要的話另外的賦形劑充分混合。將滑潤劑(例如硬脂基富馬酸鈉)過篩，並加到τ-角叉菜膠混和物中，然後進一步混合。之後將所得混合物壓成片劑。
至於溼法制粒技術，將鹼性藥物活性成分與膠凝性聚合物和τ-角叉菜膠充分混合。然後可用下列物質將所得混合物溼潤溶解於適宜溶劑(例如乙醇或水)中的合適的粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP))的溶液；或合適的溶劑(例如乙醇或水)；使用標準或改進的制粒法(例如噴霧制粒法)將所得混合物制粒。將所得顆粒乾燥(例如在烘箱中於合適的溫度(例如約50℃)乾燥合適的時間(例如20-24小時))後，把顆粒磨碎(例如幹法或溼法研磨)，與滑潤劑(例如硬脂基富馬酸鈉、硬脂酸鎂或滑石粉)混合，然後將所得組合物壓成片劑。可以用乾燥的顆粒裝填膠囊(例如用明膠製成的膠囊)。
在另一個方面，本發明提供了用於製備上述製劑的方法。
凝血酶活性化合物及其前藥可用於治療和/或預防動物包括人血液和/或組織中的血栓形成和血凝固性過高。已知血凝固性過高可以導致血栓-栓塞疾病。可提及的與血凝固性過高和血栓-栓塞疾病有關的病症包括遺傳或獲得性活性蛋白C抗性，例如因子V-突變(因子VLeiden)，和遺傳或獲得性抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S、肝素輔因子II缺乏。已知與血凝固性過高和血栓-栓塞疾病有關的其它病症包括循環抗磷脂抗體(Lupus抗凝血劑)、高胱氨酸血、肝素引起的血小板減少症和纖維蛋白溶解缺損，以及凝血綜合症(例如播散性血管內凝血(DIC))和一般性血管損傷(例如由於手術所導致的血管損傷)。
在另外一個方面，本發明提供了用於治療(治療和預防)，例如用作藥物(例如用於治療心血管病症如血栓栓塞的藥物)的上述製劑。
本發明製劑可用於製備在治療上使用的藥物。
在另一個方面，本發明提供了在患有所述病症或有患所述病症危險的溫血動物中治療心血管病症(例如血栓栓塞)的方法，包括給需要這樣治療的動物施用治療有效量的本發明組合物。
一些肽凝血酶抑制劑或其前藥可以用下述方法製備。
一般操作TLC是用矽膠進行的。手性HPLC分析是用具有5cm保護柱的46mm×250mm Chiralcel OD柱進行的。柱溫保持在35℃。使用的1.0mL/分鐘的流速。在228nm使用Gilson 115UV檢測器。流動相由乙烷、乙醇和三氟乙酸組成，並且對於每種化合物列出了合適的比例。一般是將產物溶解在最小量的乙醇中，並用流動相稀釋。
在下述製備中，LC-MS/MS是用裝配有的CTC-PAL注射器和5Tm，4×100mm Thermo Quest，Hypersil BDS C18柱的HP-1100儀器進行的。使用API-3000(Sciex)MS檢測器。流速是1.2mL/分鐘，並且流動相(梯度)由10-90％乙腈與90-10％4mM乙酸銨組成，二者都含有0.2％甲酸。否則，低解析度質譜(LRMS)是用Micromass ZQ光譜儀以ESI posneg開關離子模式(質量範圍m/z 100-800)記錄的；高解析度質譜(HRMS)是用Micromass LCT光譜儀以ES負離子化模式(質量範圍m/z 100-1000)記錄的，使用亮氨酸腦啡肽(C28H37N5O7)作為內質量標準。
1H NMR光譜是用四甲基矽烷作為內標記錄的。
製備Ph(3-Cl)(5-OCHF)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe){化合物A} (i)3-氯-5-甲氧基苯甲醛在25℃，將在THF(200mL)中的3，5-二氯苯甲醚(74.0g，419mmol)滴加到在THF(100mL)內的金屬鎂(14.2g，585mmol，用0.5N HCl預洗滌過)中。加入完成後，滴加1，2-二溴乙烷(3.9g，20.8mmol)。將所得深棕色混合物加熱回流3小時。將該混合物冷卻至0℃，然後一次性加入N，N-二甲基甲醯胺(60mL)。將該混合物用乙醚(3×400mL)和6N HCl(500mL)分配。將合併的有機萃取液用鹽水(300mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾然後真空濃縮，獲得了油狀物。通過快速矽膠色譜(2×)純化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物(38.9g，54％)，其為黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.15(s，1H)，3.87(s，3H).
(ii)3-氯-5-羥基苯甲醛將3-氯-5-甲氧基苯甲醛(22.8g，134mmol；見上面步驟(i))在CH2Cl2(250mL)中的溶液冷卻至0℃。用15分鐘滴加三溴化硼(15.8mL，167mmol)。將反應混合物攪拌2小時後，緩慢地加入水(50mL)。然後用Et2O(2×100mL)萃取該溶液。將有機層合併，乾燥(Na2SO4)，過濾然後真空濃縮。通過快速矽膠色譜純化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物(5.2g，25％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.35(s，1H)，7.20(s，1H)，7.10(s，1H)，3.68(s，1H)(iii)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛將3-氯-5-羥基苯甲醛(7.5g，48mmol；見上面步驟(ii))在2-丙醇(250mL)和30％的KOH(100mL)中的溶液加熱至回流。在攪拌下向該反應混合物中通入CHClF22小時。將該反應混合物冷卻，用1N HCl酸化，用EtOAc(2×100mL)萃取。將該有機相用鹽水(100mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾然後真空濃縮。通過快速矽膠色譜純化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物(4.6g，46％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 9.95(s，1H)，7.72(s，1H)，7.52(s，1H)，7.40(s，1H)，6.60(t，JH-F＝71.1Hz，1H)(iv)Ph(3-Cl)(5-OCHF)-(R，S)CH(OTMS)CN將3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛(4.6g，22.3mmol；見上面步驟(iii))在CH2Cl2(200mL)中的溶液冷卻至0℃。加入ZnI2(1.8g，5.6mmol)和三甲基甲矽烷基氰化物(2.8g，27.9mmol)，讓該反應混合物升至室溫，攪拌15小時。在真空條件下將該混合物部分濃縮，獲得了本小標題化合物，為液體，其不用進一步純化和特徵確定而直接用於步驟(v)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.82g，假定是22.3mmol；見上面步驟(iv))滴加到HCl/EtOH(500mL)中。將該反應混合物攪拌15小時，然後在真空條件下將該混合物部分濃縮，獲得了本小標題化合物，為液體，其不用進一步純化和特徵確定而直接用於步驟(vi)。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt(6.24g，假定是22.3mmol；見上面步驟(v))溶解在THF(250mL)中，加入0.5M H2SO4(400mL)，在40℃將該反應物攪拌65小時，冷卻，然後在真空條件下部分濃縮以除去大部分THF。然後將該反應混合物用Et2O(3×100mL)萃取，乾燥(Na2SO4)，過濾，真空濃縮，獲得了本小標題化合物，為固體，其不用進一步純化和特徵確定而直接用於步驟(vii)。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH
在室溫，將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.25g，假定是22.3mmol；見上面步驟(vi))在2-丙醇(175mL)和20％KOH(350mL)中的溶液攪拌15小時。然後在真空條件下將該反應部分濃縮以除去大部分2-丙醇。將剩餘混合物用1M H2SO4酸化，用Et2O(3×100mL)萃取，乾燥(Na2SO4)，並真空濃縮，獲得了固體。通過快速矽膠色譜純化，用CHCl3∶MeOH∶NH4OH(6∶3∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物的銨鹽。然後將該銨鹽溶解在EtOAc(75mL)與H2O(75mL)的混合物中，用2N HCl酸化。分離出有機層，用鹽水(50mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，然後真空濃縮，獲得了小標題化合物(3.2g，從步驟(iv)至(vii)為57％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ 7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.16(s，1H)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHFo)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCHF(S)CH(OAc)C(O)OH(b)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，12.7mmol；見上面步驟(vii))和脂肪酶PS「Amano」(～2.0g)在乙酸乙烯酯(125mL)與MTBE(125mL)中的混合物加熱回流48小時。將該反應混合物冷卻，經由Celite過濾，用EtOAc洗滌濾餅。將該濾液真空濃縮，然後通過快速矽膠色譜純化，用CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物(a)和(b)的銨鹽。將鹽形式的化合物(a)溶於H2O，用2N HCl酸化，用EtOAc萃取。將有機層用鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，然後真空濃縮，獲得了本小標題化合物(a)(1.2g，37％)。
對於本小標題化合物(a)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1H2，1H)，5.17(s，1H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在0℃，將PyBOP(2.8g，5.3mmol)和可力丁(1.3g，10.6mmol)加到Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(1.1g，4.4mmol；見上面步驟(viii))和H-Aze-Pab(Teoc)(見國際專利申請WO 00/42059，2.6g，5.7mmol)在DMF(50mL)內的溶液中。在0℃將該反應攪拌2小時，然後在室溫攪拌15小時。將該反應混合物真空濃縮，通過快速矽膠色譜純化(3×)，首先用CHCl3∶EtOH(9∶1)洗脫，然後用EtOA∶EtOH(20∶1)洗脫，最後用CH2Cl2∶CH3OH(95∶5)洗脫，獲得了本小標題化合物(1.0g，37％)，為白色固體。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉異構體混合物)δ7.79-7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.15-7.48(m，5H)，6.89 and 6.91(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.12 and 5.20(s，1H)，4.75-4.85(m，1H)，3.97-4.55(m，6H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.15(m，2H)，0.09(s，9H)MS(m/z)611(M+1)+(x)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.40g，0.65mmol；見上面步驟(ix))溶解在20mL乙腈中，加入0.50g(6.0mmol)O-甲基羥基胺鹽酸鹽。將該混合物在70℃加熱2小時。將溶劑蒸發，將殘餘物在水與乙酸乙酯之間分配。將水相用乙酸乙酯萃取兩次以上，將合併的有機相用水、鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，然後蒸發。產量0.41g(91％)。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.83(bt，1H)，7.57(bs，1H)，7.47(d，2H)，7.30(d，2H)，7.20(m，1H)，7.14(m，1H)，7.01(m，1H)，6.53(t，1H)，4.89(s，1H)，4.87(m，1H)，4.47(m，2H)，4.4-4.2(b，1H)，4.17-4.1(m，3H)，3.95(s，3H)，3.67(m，1H)，2.68(m，1H)，2.42(m，1H)0.97(m，2H)，0.01(s，9H).
(xi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)(0.40g，0.62mmol；見上面步驟(x))溶解在5mL TFA中，然後讓其反應30分鐘。將TFA蒸發，將殘餘物在乙酸乙酯與NaHCO3(水溶液)之間分配。將水相用乙酸乙酯萃取兩次以上，將合併的有機相用水、鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，然後蒸發。將產品從水/乙腈中凍幹出來。不需要純化。產量0.28g(85％)。
1H-NMR(600MHz；CDCl3)δ7.89(bt，1H)，7.57(d，2H)，7.28(d，2H)，7.18(m，1H)，7.13(m，1H)，6.99(m，1H)，6.51(t，1H)，4.88(s，1H)，4.87(m，1H)，4.80(bs，2H)，4.48(dd，1H)，4.43(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.89(s，3H)，3.68(m，1H)，2.68(m，1H)，2.40(m，1H).
13C-NMR(125MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳，旋轉異構體)δ172.9，170.8，152.7，152.6HRMS C22H23ClF2N4O5(M-H)-計算值495.1242，實測值495.1247製備化合物D(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe))
(i)2，6-二氟-4[(甲基亞磺醯基](甲硫基)甲基)苄腈在氬氣氛下，將(甲基亞磺醯基)(甲硫基)甲烷(7.26g，0.0584mol)溶解在100mL無水THF中，然後冷卻至-78℃。在攪拌下滴加丁基鋰的己烷溶液(16mL 1.6M，0.0256mol)。將該混合物攪拌15分鐘。同時，在氬氣氛下將3，4，5-三氟苄腈(4.0g，0.025mmol)在100mL無水THF中的溶液冷卻至-78℃，用35分鐘經由套管將前面的溶液加到後面的溶液中。30分鐘後，移去冷卻浴，當反應物達到室溫時，將其倒入400mL水中。將THF蒸發，然後將剩餘的水層用乙醚萃取三次。將合併的乙醚相用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。產量2.0g(30％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.25(m，2H)，5.01(s，1H，非對映體)，4.91(s，1H，非對映體)，2.88(s，3H，非對映體)，2.52(s，3H，非對映體)，2.49(s，3H，非對映體)，2.34(s，3H，非對映體)，1.72(寬，1H)(ii)2，6-二氟-4-甲醯基苄腈將2，6-二氟-4[(甲基亞磺醯基](甲硫基)甲基)苄腈(2.17g，8.32mmol；見上面步驟(i))溶解在90mLTHF中，加入3.5mL濃硫酸。將該混合物在室溫放置3天，然後倒入450mL水中。用EtOAc萃取三次，隨後將合併的有機相用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌兩次，乾燥(Na2SO4)，蒸發。產量1.36g(9 8％)。通過13C NMR確認甲醯基的位置。在162.7ppm的得自氟化碳的信號表明了預期的偶合模式，兩個偶合常數分別在260Hz和6.3Hz，這與從氟原子的ipso和meta偶聯相對應。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.33(m，2H)(iii)2，6-二氟-4-羥基甲基苄腈將2，6-二氟-4-甲醯基苄腈(1.36g，8.13mmol；見上面步驟(ii))溶解在25mL甲醇中，然後在冰浴中冷卻。將在攪拌下分批加入硼氫化鈉(0.307g，8.12mmol)，將反應物放置65分鐘。將溶劑蒸發，然後將殘餘物在乙酸乙酯與碳酸氫鈉水溶液之間分配。再將有機層用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。粗產物很快結晶，並且不用進一步純化就可以直接使用。產量1.24g(90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，2H)，4.81(s，2H)，2.10(寬，1H)(iv)甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯在攪拌下，將三乙胺(0.81g，8.1mmol)加到2，6-二氟-4-羥基甲基苄腈(1.24g，7.32mmol；見上面步驟(iii))和甲磺醯氯(0.93g，8.1mmol在60mL二氯甲烷內的冰冷卻溶液中。在0℃反應3小時後，將混合物用1M HCl洗滌兩次，用水洗滌一次，乾燥(Na2SO4)，蒸發。該產物不用進一步純化就可以直接使用。產量1.61g(89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，5.33(s，2H)，3.07(s，3H)(v)4-疊氮基甲基-2，6-二氟苄腈將甲磺酸4-氰基-2，6-二氟苄基酯(1.61g，6.51mmol；見上面步驟(iv))和疊氮化鈉(0.72g，0.0111mol)在10mL水與20mLDMF中的混合物於室溫攪拌過夜。然後將其倒入200mL水中，用乙醚萃取三次。將合併的乙醚相用水洗滌5次，乾燥(Na2SO4)，蒸發。為了進行NMR測定，取少量樣本蒸發，產物結晶出來。將其餘產物小心地蒸發但不能使其完全變幹。基於NMR和分析HPLC，假定的產率(理論上1.26g)幾乎是定量的。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，4.46(s，2H)(vi)4-氨甲基-2，6-二氟苄腈本反應按照描述在J.Chem.Res.(M)(1992)3128中的方法進行。將硼氫化鈉(0.834g，0.0221mol)在20mL水中的溶液加到520mg10％Pd/C(含50％水份)在20mL水內的懸浮液中。有一些氣體釋放出來。將4-疊氮基甲基-2，6-二氟苄腈(1.26g，6.49mmol；見上面步驟(v))溶解於50mL THF中，用15分鐘加到在冰浴上的所述含水混合物中。將該混合物攪拌4小時，然後加入20mL 2M HCl，經由硅藻土過濾該混合物。用水洗滌硅藻土，將合併的水相用EtOAc洗滌，然後用2M NaOH鹼化。用二氯甲烷萃取三次，將合併的有機相用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。產量0.87g(80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，2H)，3.96(s，2H)，1.51(寬，2H)(vii)2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈將4-氨基甲基-2，6-二氟苄腈(0.876g，5.21mmol；見上面步驟(vi))溶解在50mL THF中，然後加入在10mL THF中的二碳酸二叔丁酯(1.14g，5.22mmol)。將該混合物攪拌3.5小時。將THF蒸發，將殘餘物在水與EtOAc之間分配。將有機層用0.5M HCl和水洗滌3次，乾燥(Na2SO4)，蒸發。該產物不用進一步純化就可以直接使用。產量1.38g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.21(m，2H)，4.95(寬，1H)，4.43(寬，2H)，1.52(s，9H)(viii)Boc-Pab(2，6-二F)(OH)在室溫，將2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苄腈(1.38g，5.16mmol；見上面步驟(vii))、羥基胺鹽酸鹽(1.08g，0.0155mol)和三乙胺(1.57g，0.0155mol)在20mL乙醇中的混合物攪拌36小時。將溶劑蒸發，將殘餘物在水與二氯甲烷之間分配。將有機層用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。該產物不用進一步純化就可以直接使用。產量1.43g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.14(m，2H)，4.97(寬，1H)，4.84(寬，2H)，4.40(寬，2H)，1.43(s，9H)(ix)Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc本反應按照由Judkins等人在Synth.Comm.(1998)4351中描述的方法進行。在5atm壓力下，將在100mL乙酸中的Boc-Pab(2，6-二F)(OH)(1.32g，4.37mmol；見上面步驟(viii))、乙酸酐(0.477g，4.68mmol)和442mg 10％Pd/C(含有50％水份)氫化3.5小時。經由硅藻土將該混合物過濾，用乙醇洗滌，蒸發。將殘餘物從乙腈和水以及幾滴乙醇中凍幹出來。本小標題產物不用進一步純化就可以直接使用。產量1.49g(99％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.45(m，2H)，4.34(s，2H)，1.90(s，3H)，1.40(s，9H)(x)Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)將2-(三甲基甲矽烷基)乙基對硝基苯基碳酸酯(1.67g，5.89mmol)加到Boc-Pab(2，6-二F)×HOAc(1.56g，5.49mmol；見上面步驟(ix))在100mL THF和1mL水內的溶液中。用5分鐘滴加碳酸鉀(1.57g，0.0114mol)在20mL水中的溶液。將該混合物攪拌過夜。將THF蒸發，將殘餘物在水與二氯甲烷之間分配。將水層用二氯甲烷萃取，將合併的有機相用碳酸氫鈉水溶液液洗滌兩次，乾燥(Na2SO4)，然後蒸發。通過快速矽膠色譜純化，用庚烷/EtOAc＝2/1洗脫，獲得了1.71g(73％)純化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(m，2H)，4.97(寬，1H)，4.41(寬，2H)，4.24(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)(xi)Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)將Boc-Pab(2，6-二F)(Teoc)(1.009g，2.35mmol；見上面步驟(x))溶解在50mL用HCl(氣體)飽和的EtOAc中。將該混合物放置10分鐘，蒸發，溶解在18mL DMF中，然後在冰浴上冷卻。依次加入Boc-Aze-OH(0.450g，2.24mmol)、PyBOP(1.24g，2.35mmol)和二異丙基乙胺(1.158g，8.96mmol)。將該反應混合物攪拌2小時，然後倒入350mL水中，用EtOAc提取三次。將合併的有機相用鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)。然後蒸發。通過快速矽膠色譜純化，用庚烷∶EtOAc(1∶3)洗脫，獲得了1.097g(96％)所需化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，4.23(m，2H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，1.40(s，9H)，1.10(m，2H)，0.05(s，9H)(xii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)將Boc-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(0.256g，0.500mmol；見上面步驟(xi))溶解在20mL用HCl(氣體)飽和的EtOAc中。將該混合物放置10分鐘，蒸發，溶解在5mL DMF中。依次加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120g，0.475mmol；見上面製備A(viii))、PyBOP(0.263g，0.498mmol)，最後加入二異丙基乙胺(0.245g，1.89mmol)。將該反應混合物攪拌2小時，然後倒入350mL水中，用EtOAc萃取3次。將該有機相用鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。通過快速矽膠色譜純化，用EtOAc洗脫，獲得了0.184g(60％)所需的本小標題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉異構體混合物)δ7.55-7.45(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋轉異構體)，7.27(m，1H，次要旋轉異構體)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋轉異構體)，6.86(t，1H，次要旋轉異構體)，5.15(s，1H，主要旋轉異構體)，5.12(m，1H，次要旋轉異構體)，5.06(s，1H，次要旋轉異構體)，4.72(m，1H，主要旋轉異構體)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋轉異構體)，4.24(m，2H)，4.13(m，1H，主要旋轉異構體)，4.04(m，1H，次要旋轉異構體)，3.95(m，1H，次要旋轉異構體)，2.62(m，1H，次要旋轉異構體)，2.48(m，1H，主要旋轉異構體)，2.22(m，1H，主要旋轉異構體)，2.10(m，1H，次要旋轉異構體)，1.07(m，2H)，0.07(m，9H)(xiii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Ome，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(Teoc)(64mg，0.099mmol；見上面步驟(xii))與O-甲基羥基胺鹽酸鹽(50mg，0.60mmol)在4mL乙腈中的混合物在70℃加熱3小時。將溶劑蒸發，將殘餘物在水與EtOAc之間分配。將水層用EtOAc萃取3次，將合併的有機相用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，然後蒸發。該產物不用進一步純化就可以直接使用。產量58mg(87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(bt，1H)，7.46(m，1H)，7.25-6.95(m，5H)，6.51，t，1H)，4.88(s，1H)，4.83(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.4-3.9(m，4H)，3.95(s，3H)，3.63(m，1H)，2.67(m，1H)，2.38(m，1H)，1.87(寬，1H)，0.98(m，2H)，0.01，s，9H)(xiv)Ph(3-Cl)(S-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-二F)(OMe，Teoc)(58mg，0.086mmol；見上面步驟(xiii))溶解在3mL TFA中，在冰浴上冷卻，然後讓其反應2小時。將TFA蒸發，將殘餘物溶解在EtOAc中。將有機層用碳酸鈉水溶液和水洗滌兩次，乾燥(Na2SO4)然後蒸發。將該殘餘物從水和乙腈中凍幹出來，獲得了42mg(92％)本標題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95(bt，1H)，7.2-7.1(m，4H)，6.99(m，1H)，6.52(t，1H)，4.88(s，1H)，4.85-4.75(m，3H)，4.6-4.45(m，2H)，4.29(寬，1H)，4.09(m，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，2.64(m，1H)，2.38(m，1H)，1.85(寬，1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ172.1，169.8，151.9APCI-MS(M+1)＝533/535m/z製備化合物E(Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe))(i)甲磺酸(2-一氟乙基)酯在0℃、氮氣氛下，將三乙胺(23.7g，234mmol)和甲磺醯氯(10.7g，93.7mmol)加到2-氟乙醇(5.0g，78.0mmol)在CH2Cl2(90mL)內的磁攪拌著的溶液中。將該混合物在0℃攪拌1.5小時，用CH2Cl2(100mL)稀釋，用2N HCl(100mL)洗滌。將水層用CH2Cl2(50mL)萃取，將合併的有機層用鹽水(75mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾，真空濃縮，獲得了本小標題化合物(9.7g，88％)，為黃色油狀物，其不用進一步純化就可直接使用。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.76(t，J＝4Hz，1H)，4.64(t，J＝4Hz，1H)，4.52(t，J＝4Hz，1H)，4.43(t，J＝4Hz，1H)，3.09(s，3H).
(ii)3-氯-5-一氟乙氧基苯甲醛在室溫、氮氣氛下，向3-氯-5-羥基苯甲醛(8.2g，52.5mmol；見上面製備A(ii))和碳酸鉀(9.4g，68.2mmol)在DMF(10mL)內的溶液中滴加甲磺酸(2-一氟乙基)酯(9.7g，68.2mmol；見上面步驟(i))在DMF(120mL)中的溶液。將該混合物在100℃加熱5小時，然後在室溫攪拌過夜。將該反應冷卻至0℃，倒入用冰冷卻的2N HCl中，用EtOAc萃取。將合併的有機萃取液用鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，過濾然後真空濃縮。將該棕色油狀物通過矽膠色譜純化，用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脫，獲得了本小標題化合物(7.6g，71％)，為黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.32(s，1H)，7.21(s，1H)，4.87(t，J＝4Hz，1H)，4.71(t，J＝3Hz，1H)，4.33(t，J＝3Hz，1H)，4.24(t，J＝3Hz，1H).
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN在0℃、氮氣圍下，將三甲基甲矽烷基氰化物(7.4g，75.0mmol)滴加到3-氯-5-一氟乙氧基苯甲醛(7.6g，37.5mmol；見上面步驟(ii))和碘化鋅(3.0g，9.38mmol)在CH2Cl2(310mL)內的溶液中。將該混合物在0℃攪拌3小時，然後在室溫攪拌過夜。將該反應用H2O(300mL)稀釋，分離出有機層，乾燥(Na2SO4)，過濾，然後真空濃縮，獲得了本小標題化合物(10.6g，94％)，為棕色油狀物，其不用進一步純化或特徵確定就可直接使用。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將濃鹽酸(100mL)加到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN(10.6g，5.8mmol；見上面步驟(iii))中，然後在將該溶液在100℃3小時。冷卻至室溫後，再將該反應進一步冷卻至0℃，用3N NaOH(～300mL)緩慢鹼化，然後用Et2O(3×200mL)洗滌。將水層用2N HCl(80mL)酸化，用EtOAc(3×300mL)萃取。將合併的EtOAc萃取液乾燥(Na2SO4)，過濾，然後真空濃縮，獲得了本小標題化合物(8.6g，98％)，為淡黃色固體，其不用進一步純化就可直接使用。
Rf＝0.28(90∶8∶2 CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H).
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)在氮氣氛下，將Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(8.6g，34.5mmol；見上面步驟(iv))和脂肪酶PS″Amano″(4.0g)在乙酸乙烯酯(250mL)和MTBE(250mL)中的溶液於70℃加熱3天。將該反應冷卻至室溫，通過經由Celite進行過濾來將酶除去。用EtOAc洗滌濾餅，將濾液真空濃縮。通過矽膠色譜純化，用CHCl3∶MeOH∶Et3N(90∶8∶2)洗脫，獲得了本小標題化合物(a)的三乙胺鹽，為黃色油狀物。此外，還獲得了本小標題化合物(b)的三乙胺鹽(4.0g)。將本小標題化合物(b)的鹽溶解在H2O(250mL)中，用2N HCl酸化，然後用EtOAc(3×200mL)萃取。將合併的有機萃取液乾燥(Na2SO4)，過濾，然後真空濃縮，獲得了本小標題化合物(b)(2.8g，32％)，為黃色油狀物。
本小標題化合物(b)的數據Rf＝0.28(90∶8∶2CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H).
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)在0℃、氮氣氛下，將HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.43g，4.27mmol，見國際專利申請WO 00/42059)、PyBOP(1.89g，3.68mmol)和DIPEA(1.06g，8.23mmol)加到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(818mg，3.29mmol；見上面步驟(v))在DMF(30mL)內的溶液中。將該反應在0℃攪拌2小時，然後在室溫攪拌過夜。將該混合物真空濃縮，將殘餘物用矽膠色譜純化兩次，首先用CHCl3∶EtOH(15∶1)洗脫，然後用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗脫，獲得了本標題化合物(880mg，54％)。
Rf＝0.60(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉異構體的複合混合物)δ7.58-7.60(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝7Hz，2H)，7.05-7.08(m，2H)，6.95-6.99(m，1H)，5.08-5.13(m，1H)，4.77-4.82(m，1H)，4.60-4.68(m，1H)，3.99-4.51(m，7H)，3.82(s，3H)，2.10-2.75(m，2H).
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ173.3，170.8，152.5.
APCI-MS(M+1)＝493m/z.
製備化合物F(Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.148g，0.24mmol；見上面製備D步驟(ix))溶解在9mL乙腈中，然後加入0.101g(1.45mmol)羥基胺鹽酸鹽。將該混合物在70℃加熱2.5小時，經由Celite過濾，然後蒸發。該粗產物(0.145g；75％純度)不用進一步純化就可以直接用於下一步驟。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)(0.145g，0.23mmol；見上面步驟(i))溶解在0.5mL CH2Cl2和9mLTFA中。讓該反應進行60分鐘。將TFA蒸發，然後將殘餘物用製備HPLC純化。將所要的級份合併，凍幹(2×)，獲得了72mg(兩個步驟的產率為62％)本標題化合物。
MS(m/z)482(M-1)-；484(M+1)+1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.58(d，2H)，7.33(m，3H)，7.15(m，2H)，6.89(t，1H主要旋轉異構體)，6.86(t，1H次要旋轉異構體)，5.18(s，1H主要旋轉異構體；和m，1H次要旋轉異構體)，5.12(s，1H次要旋轉異構體)，4.77(m，1H主要旋轉異構體)，4.42(m，2H)，4.34(m，1H主要旋轉異構體)，4.14(m，1H主要旋轉異構體)，4.06(m，1H次要旋轉異構體)，3.95(m，1H次要旋轉異構體)，2.66(m，1H次要旋轉異構體)，2.50(m，1H主要旋轉異構體)，2.27(m，1H主要旋轉異構體)，2.14(m，1H次要旋轉異構體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉異構體)δ172.4，172.3，172.0，171.4 152.3，152.1製備化合物H(Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH))(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)將Boc-Aze-Pab(Z)(見國際專利申請WO 97/02284，92mg，0.197mmol)溶解在10mL用HCl(氣體)飽和的EtOAc中，然後讓其反應10分鐘。將溶劑蒸發，將殘餘物依次與Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.188mmol)、PyBOP(109mg，0.209mmol)和二異丙基乙胺(96mg，0.75mmol)在2mL DMF中混合。將該混合物攪拌2小時，然後倒入50mL水中，用EtOAc萃取3次。將合併有機相用水洗滌，乾燥(Na2SO4)，蒸發。將該粗產物用快速矽膠色譜純化，用EtOAc∶MeOH(9∶1)洗脫。產量100mg(87％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉異構體混合物)δ7.85-7.75(m，2H)，7.45-7.25(m，7H)，7.11(m，1H，主要旋轉異構體)，7.08(m，1H，次要旋轉異構體)，7.05-6.9(m，2H)，6.13(bt，1H)，5.25-5.05(m，3H)，4.77(m，1H，被CD3OH信號部分隱藏)，4.5-3.9(m，7H)，2.64(m，1H，次要旋轉異構體)，2.47(m，1H，主要旋轉異構體)，2.25(m，1H，主要旋轉異構體)，2.13(m，1H，次要旋轉異構體)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)將羥基胺鹽酸鹽(65mg，0.94mmol)和三乙胺(0.319g，3.16mmol)在8mL THF中混和，然後在40℃超聲1小時。加入Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96mg，0.156mmol；見上面步驟(i))和8mL以上的THF。將該混合物在40℃攪拌4.5天。將溶劑蒸發，通過製備RPLC純化粗產物，用CH3CN∶0.1M NH4OAc(40∶60)洗脫。產量30mg(38％)。純度99％。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉異構體混合物)δ7.6-7.55(m，2H)，7.35-7.3(m，2H)，7.12(m，1H，主要旋轉異構體)，7.09(m，1H，次要旋轉異構體)，7.05-6.9(m，2H)，6.15(多個三重峰，1H)，5.15(m，1H，次要旋轉異構體)，5.13(s，1H，主要旋轉異構體)，5.08(s，1H，次要旋轉異構體)，4.77(m，1H，主要旋轉異構體)，4.5-4.2(m，5H)，4.08(m，1H，主要旋轉異構體)，3.97(m，1H，次要旋轉異構體)，2.66(m，1H，次要旋轉異構體)，2.50(m，1H，主要旋轉異構體)，2.27(m，1H，主要旋轉異構體)，2.14(m，1H，次要旋轉異構體).
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉異構體混合物)δ172.8，172.2，171.4，159.1，158.9，154.2.
APCI-MS(M+1)＝497/499m/z縮寫Ac＝乙醯基APCI＝常壓化學電離(關於MS)API＝常壓電離(關於MS)aq.＝含水的
Aze((S)-Aze)＝(S)-氮雜環丁烷-2-羧酸酯(除非另有說明)Boc＝叔丁氧基羰基br＝寬的(關於NMR)CI＝化學電離(關於MS)d＝天d＝雙峰(關於NMR)DCC＝二環己基碳二亞胺dd＝雙雙峰(關於NMR)DIBAL-H＝氫化二異丁基鋁DIPEA＝二異丙基乙胺DMAP＝4-(NN-二甲基氨基)吡啶DMF＝N，N-二甲基甲醯胺DMSO＝二甲亞碸DSC＝示差掃描量熱法DVT＝深度靜脈血栓形成EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽eq＝當量ES＝電子噴霧ESI＝電子噴霧界面Et＝乙基ether＝乙醚EtOAc＝乙酸乙酯EtOH＝乙醇Et2O＝乙醚HATU＝O-(氮雜苯並三唑-1-基)-N，N，N』，N』-四甲基脲六氟磷酸鹽HBTU＝[N，N，N』，N』-四甲基]-O-(苯並三唑-1-基)脲六氟磷酸鹽HCl＝鹽酸、氯化氫氣體或鹽酸鹽(根據含量)Hex＝己烷HOAc＝乙酸HPLC＝高效液相色譜法LC＝液相色譜法m＝多重峰(關於NMR)
Me＝甲基MeOH＝甲醇min.＝分鐘MS＝質譜MTBE＝甲基叔丁基醚NMR＝核磁共振OAc＝乙酸酯基Pab＝對脒基苄基氨基H-Pab＝對脒基苄基胺Pd/c＝披鈀炭Ph＝苯基PyBOP＝(苯並三唑-1-基氧基)三吡咯烷子基脲六氟磷酸鹽q＝四重峰(關於NMR)QF＝氟化四丁基銨rt/RT＝室溫s＝單峰(關於NMR)t＝三重峰(關於NMR)TBTU＝[N，N，N』，N』-四甲基-O-(苯並三唑-1-基)脲四氟硼酸鹽]TEA＝三乙胺Teoc＝2-(三甲基甲矽烷基)乙氧基羰基TEMPO＝2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基TFA＝三氟乙酸TGA＝熱重量分析THF＝四氫呋喃TLC＝薄層色譜UV＝紫外前綴正-、仲-、異-、叔-以及叔-具有其通常含義。
實施例1-5和8-14舉例說明了本發明。給出實施例6和7僅是為了比較，它們並不構成本發明的部分。在實施例和附圖中，括號裡所給出的比例是指中性膠凝性聚合物與τ-角叉菜膠的比例，而並沒有考慮鹼性藥物活性成分或任何其它可能存在的成分。在附圖中附

圖1H376/95從具有不同τ-角叉菜膠與PEO，4M組成比例的混合物中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
附圖2H376/95從具有一定組成比例(20∶80)的不同分子量的PEO與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
附圖3H376/95從具有一定組成比例(80∶20)的不同分子量的PEO與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
附圖4H376/95從具有不同τ-角叉菜膠與HPMC，10000cps組成比例的混合物中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
附圖5H376/95從具有一定組成比例(50∶50)的PEO，4M與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。片劑是在不同的人工介質中分析24小時。
附圖6H376/95從中性膠凝性聚合物PEO 4M中的釋放，其是在不同的人工介質中分析的。
附圖7H376/95從陰離子聚合物τ-角叉菜膠中的釋放，其是在不同的人工介質中分析的。
附圖8在pH 1和6.8，H376/95從具有一定組成比例(50∶50)的τ-角叉菜膠與PEO，4M的混合物中的釋放。片劑是在不同的人工介質中分析24小時。
附圖9在pH 1和6.8，化合物A從具有一定組成比例(50∶50)的τ-角叉菜膠與HPMC，10,000cps的混合物中的釋放。片劑是在不同的人工介質中分析24小時。
附圖10化合物B從以比例(50∶50)和(80∶20)與中性聚合物PEO，4M混合的τ-角叉菜膠中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
附圖11化合物B從以比例(50∶50)與中性聚合物HPMC，10,000cps混合的τ-角叉菜膠中的釋放。片劑是在pH 1分析2小時，其餘時間是在pH 6.8進行分析。
實施例1本實施例表明了H376/95從具有不同PEO，4M與τ-角叉菜膠組成比例的混合物中的釋放。將片劑在pH 1分析2小時，其餘時間在pH 6.8進行分析。
PEO，4M∶τ-角叉菜膠比例(80∶20) (50∶50) (20∶80)H376/95 55.5mg 55.5mg 55.5mg聚氧化乙烯，4M 160.0mg100.0mg40.0mgτ-角叉菜膠 40.0mg 100.0mg160.0mg硬脂基富馬酸鈉 2.5mg 2.5mg 2.5mg片劑重量253mg 253mg 253mg通過直接壓片來製備片劑。將活性成分、PEO，4M和τ-角叉菜膠充分混合，然後將滑潤劑硬脂基富馬酸鈉經由0.7mm篩加到其中。另外進行最終的混合，然後在單衝壓片機中，用9mm衝頭壓縮混合物。將片劑在含有0.1M HCl、pH1的溶解浴，UPS II(50rpm，37℃，人工介質)中分析2小時。然後，將片劑轉移到具有0.1M磷酸鹽緩衝液、pH 6.8的溶解浴中，並進一步分析。分析結果顯示於附圖1中。(50∶50)製劑在1-6.8的pH範圍內表現出基本上不依賴pH的釋放特性。另外還可以推斷出，通過將陰離子聚合物τ-角叉菜膠以不同比例與中性膠凝性聚合物PEO，4M混和，可以調整在具有不同pH的介質中的釋放速度。
實施例2本實施例表明了H376/95從具有一定組成比例(20∶80)的不同分子量的PEO與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。將片劑在pH 1分析2小時，其餘時間在pH 6.8進行分析。
PEO 4M或8M∶τ-角叉菜膠比例 (20∶80)H376/95 50.5mg聚氧化乙烯40.0mgτ-角叉菜膠 160.0mg硬脂基富馬酸鈉2.5mg片劑重量 253mg
按照實施例1製備和分析片劑。分析結果顯示於附圖2中，並且表明，使用較高分子量的中性膠凝性聚合物可以在中性pH下提供較為緩慢的釋放速度。在低pH下的釋放沒有受到影響，這是因為在製劑中包含了足量的陰離子聚合物所致。
實施例3本實施例表明了H376/95從具有一定組成比例(80∶20)的不同分子量的PEO與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。將片劑在pH 1分析2小時，其餘時間在pH 6.8進行分析。
PEO1M或4M∶τ-角叉菜膠比例 (80∶20)H376/95 50.5mg聚氧化乙烯 160.0mgτ-角叉菜膠 40.0mg硬脂基富馬酸鈉 2.5mg片劑重量253mg按照實施例1製備和分析片劑。附圖3顯示了在中性pH下，使用較高分子量的膠凝性聚合物是怎樣能夠降低釋放速度的。同時，與附圖2所示的實施例相比，由於τ-角叉菜膠的使用量較小，所以在pH1的釋放阻止效果並不明顯。
實施例4本實施例表明了H376/95從具有不同τ-角叉菜膠與HPMC，10000cps組成比例的混合物中的釋放。將片劑在pH 1分析2小時，其餘時間在pH 6.8進行分析。
HPMC∶τ-角叉菜膠比例(80∶20) (50∶50) (20∶80)H376/95 55.5mg 55.5mg 55.5mgHPMC，10,000cps 160.0mg100.0mg40.0mgτ-角叉菜膠 40.0mg 100.0mg160.0mg硬脂基富馬酸鈉 2.5mg 2.5mg 2.5mg片劑重量 253mg 253mg 253mg
按照實施例1製備和分析片劑。在不同溶解介質中的分析結果顯示於附圖4中。(50∶50)製劑再次表現出了在1-6.8pH範圍內基本上不依賴於pH的釋放特性。可以推斷，通過將各種其它中性膠凝性聚合物—在本實施例中是HPMC，10,000cps以不同比例與陰離子聚合物τ-角叉菜膠混和，同樣可以調整釋放速度。
實施例5本實施例表明了H376/95從具有一定組成比例(50∶50)的PEO，4M與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。將片劑在不同介質中分析24小時。
PEO，4M∶τ-角叉菜膠比例 (50∶50)H376/95 50.5mg聚氧化乙烯，4M 100.0mgτ-角叉菜膠 100.0mg硬脂基富馬酸鈉 2.5mg片劑重量253mg依據實施例1，通過直接壓片來製備片劑。在溶解浴(USP裝置2，片劑放在沿著流動方向的籃子1裡)中進行分析，其中在每種介質0.1MHCl和含有5％乙醇(EtOH)的pH 6.8的0.1M磷酸鹽緩衝液中將3個片劑分析24小時，加入乙醇是為了提高藥物溶解性。附圖5所示的結果清楚地表明，當使用相等份數的PEO 4M和τ-角叉菜膠時，可製得具有不依賴於pH的釋放特性的片劑。實施例6本實施例表明了在沒有τ-角叉菜膠存在的情況下，H376/95從中性膠凝性聚合物PEO 4M中的釋放，並且是在不同人工介質中的進行分析的。
H376/95 50.5mg聚氧化乙烯，4M200.0mg硬脂基富馬酸鈉2.5mg片劑重量 253mg依據實施例1，通過直接壓片來製備片劑。在不同的溶解浴中分別進行分析。將在含有0.1M HCl的容器中的片劑分析2小時。當使用0.1M磷酸鹽緩衝液作為溶解介質時，將片劑分析20小時。附圖6中的結果顯示，在pH 1的釋放速度顯著大於在pH 6.8的釋放速度，這表明，對於具有pH依賴性溶解性的鹼性藥物，單獨使用中性聚合物不足以產生不依賴於pH的釋放特性。
實施例7本實施例表明了在沒有中性膠凝性聚合物存在的情況下，H376/95從陰離子聚合物τ-角叉菜膠中的釋放，並且是在不同人工介質中的進行分析的。
H376/9550.5mgτ-角叉菜膠200.0mg硬脂基富馬酸鈉 2.5mg片劑重量 253mg依據實施例1，通過直接壓片來製備片劑。按照實施例6類似的方式，在不同的溶解浴中分別進行分析。圖7顯示了與在pH 6.8的釋放相比，在pH 1的釋放速度是怎樣減慢的。當使用任何其它我們已經作為基質聚合物測試過的均聚物時，這種效果沒有顯示出來。
實施例8本實施例表明了化合物A從具有一定組成比例(50∶50)的PEO 4M與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。將片劑在不同的人工介質中分析24小時。
重量(mg)化合物A 50.0
τ-角叉菜膠(Fluka)100.0PEO，4M(Union Carbide)100.0PRUVTM2.5用手將活性成分與聚合物和潤滑劑混和。將該混合物直接壓成片劑。
實施例9本實施例表明了化合物A從具有一定組成比例(50∶50)的HPMC，cps與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。將片劑在不同的人工介質中分析24小時。
重量(mg)化合物A 50.0τ-角叉菜膠(Fluka)100.0HPMC，10000cps100.0PRUVTM2.5用手將活性成分與聚合物和潤滑劑混和。將該混合物直接壓成片劑。
評價化合物A從實施例8和9的片劑中的累積釋放在37℃，使用USP溶解裝置2(槳+籃子1)50rpm在900ml介質中測試兩個單獨片劑的藥物釋放。所用的溶解介質是0.1M鹽酸(pH 1)和含有5％乙醇的0.1M磷酸鈉緩衝液(pH 6.8)，其中加入乙醇是為了提高藥物溶解性。已證實了加入乙醇不會顯著影響這些組合物的釋放速度。使用C Technologies纖維光學系統進行在線定量測定，當使用0.1M HCl作為溶解介質時，採用235nm的分析波長，當使用改進的磷酸鹽緩衝液pH 6.8作為溶解介質時，採用250nm的分析波長。使用350nm作為兩種介質的參照波長。實施例10本實施例表明了化合物B從具有一定組成比例(50∶50)的PEO 4M與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。
依據實施例9製備片劑。釋放數據顯示在附圖10中。
實施例11本實施例表明了化合物B從具有一定組成比例(80∶20)的PEO 4M與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。
依據實施例9製備片劑。釋放數據顯示在附圖10中。
實施例12本實施例表明了化合物B從具有一定組成比例(50∶50)的HPMC，10000cps與τ-角叉菜膠的混合物中的釋放。
依據實施例9製備片劑。釋放數據顯示在附圖11中。
實施例13化合物C與HPMC，10000cps的直接壓片將活性物質與賦形劑在攪打桶中混和。用硬脂基富馬酸鈉潤滑該混合物，使用壓片機(exenterpress)壓成片劑。
釋放速度數據
化合物C與比例為50∶50的HPMC，10000cps和τ-角叉菜膠的直接壓片將活性物質與賦形劑在攪打桶中混和。用硬脂基富馬酸鈉潤滑該混合物，使用壓片機(exenterpress)壓成片劑。
釋放速度數據
釋放速度是如下所述測定的。在37℃，使用USP溶解裝置2(槳+籃子1)以50rpm在900ml介質中測試3個單獨片劑的藥物釋放。所用的溶解介質是0.1M鹽酸(pH1)和0.1M磷酸鈉緩衝液(pH6.8)。使用C Technologies纖維光學系統進行在線定量測定，當使用0.1MHCl作為溶解介質時，採用220nm的分析波長，當使用磷酸鹽緩衝液pH6.8作為溶解介質時，採用260nm的分析波長。使用350nm作為兩種介質的參照波長。實施例14
該製劑是如實施例13所述製得的。
權利要求
1.包含τ-角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物和鹼性藥物活性成分的口服藥物製劑；所述製劑能夠抑制鹼性藥物活性成分在酸性pH下從製劑中的釋放。
2.權利要求1的製劑，其中所述鹼性藥物活性成分具有pKa為1-10的鹼性基團。
3.權利要求1或2的製劑，其中所述鹼性藥物活性成分是ximelagatran或Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)；Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2，6-二F)(OMe)；或Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe)。
4.權利要求1的製劑，其中所述鹼性藥物活性成分是4-({3-[7-(3，3-二甲基-2-氧代丁基)-9-氧雜-3，7-二氮雜二環[3.3.1]壬-3-基]丙基}氨基)苄腈；2-{7-[3-(4-氰基苯氨基)丙基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環-[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯；2-{7-[4-(4-氰基苯基)丁基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環-[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯；或2-(7-[(2S)-3-(4-氰基苯氧基)-2-羥基丙基]-9-氧雜-3，7-二氮雜二環[3.3.1]壬-3-基}乙基氨基甲酸叔丁酯。
5.權利要求1、2、3或4的製劑，其中所述中性膠凝性聚合物是聚氧化乙烯、聚乙二醇或兩種或更多種不同的聚氧化乙烯的混合物。
6.權利要求1、2、3或4的製劑，其中所述中性膠凝性聚合物是羥丙基甲基纖維素或兩種或更多種不同的羥丙基甲基纖維素的混合物。
7.權利要求1、2、3或4的製劑，其中所述中性膠凝性聚合物是羥丙基甲基纖維素與聚氧化乙烯的混合物。
8.前述權利要求任一項的製劑，其中所述中性膠凝性聚合物與τ-角叉菜膠的比例為20∶80-80∶20。
9.前述權利要求任一項的製劑，其中所述鹼性藥物活性成分是美託洛爾。
10.製備權利要求1的製劑的方法，所述方法包括將τ-角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物與鹼性藥物活性成分混和。
11.權利要求1的製劑作為藥物的應用。
12.權利要求1的製劑在製備用於治療心血管病症的藥物中的應用。
13.在患有心血管病症或有患心血管病症危險的患者中治療心血管病症的方法，包括給患者施用治療有效量的權利要求1的藥物製劑。
全文摘要
包含τ－角叉菜膠、一種或多種中性膠凝性聚合物和鹼性藥物活性成分的口服藥物製劑；所述製劑能夠抑制鹼性藥物活性成分在酸性pH下從製劑中的釋放；製備所述製劑的方法；和所述製劑在醫藥中的應用。
文檔編號A61K47/36GK1518462SQ02812534
公開日2004年8月4日 申請日期2002年6月19日 優先權日2001年6月21日
發明者C·蓋克－林霍, C 蓋克-林霍, H·古斯塔夫松, 顧 蛩 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司