新的乳酸細菌的製作方法

2023-12-02 07:03:56 6

專利名稱：：新的乳酸細菌的製作方法
技術領域：
：本發明涉及具有抗真菌活性和極好的益生菌活性的新型乳酸細菌。
背景技術：
：已知乳酸細菌產生多種抗微生物的物質(抗細菌物質)，諸如乳酸、有機酸、揮發性脂肪酸、過氧化氫、苯甲酸、細菌素(煙酸、大腸桿菌素等等)等。乳酸細菌不僅用作乳製品的發酵劑，而且還因其抗菌活性而用於食品保存(生物製品保存)。不過，不僅細菌會作為病原菌或腐敗細菌而自身繁殖，黴菌也會在食品保存期間自身繁殖。因而，大部分乳酸細菌不能有效抵抗黴菌的繁殖。尤其是，黴菌往往在動物飼料上進行自身繁殖。因此，有時會由於黴菌繁殖所引起的產熱或飼料腐臭氣味造成動物的飼料攝入率降低。此外，進料器的漏鬥開口有時會因黴菌繁殖而堵塞，從而阻斷了飼料的投放。另一方面，為了預防和消除真菌的繁殖，有時會在動物飼料中添加具有抗真菌活性的抗生素物質或諸如甲酸等抗真菌劑。不過，其中存在一些問題，即抗真菌劑引起腐蝕作用以及抗生素物質造成動物腹瀉或消化不良或者造成出現抗藥細菌或對動物而言反常的腸菌群等等。傳統上，除了Lactobacillussanfranciscencis(參閱專利公開1)和植物乳桿菌(Lactobacillusplantrum)(參閱非專利公開1)之外，對具有抗真菌活性的乳酸細菌所知甚少。通常乳酸細菌也用作益生菌。對於這一點，有許多提案包含唾液乳桿菌(lactobacillussalivarius)的治療牲畜的藥物(參閱專利公開2)；含有至少0.1％的混合微生物的除臭飼料，其中的混合微生物主要由超過N×106個乳酸球菌和產芽孢菌組成(參閱專利公開3)；在高品質有機物中添加了抗氧化物質和活的微生物製劑的飼料添加劑，將它們放入密封容器中並在25℃(攝氏溫度)至37℃(攝氏溫度)的溫度下發酵(參閱專利公開4)，等等。「益生菌」又稱為活的微生物製劑。依照最通常的定義，它是「通過改善腸道微生物平衡而有利地作用於宿主動物的活的微生物添加劑」(Fuller，R.Probioticsinmanandanimals.，J.Appl.Bacteriol.，66，365-378(1989))。不過，日前，廣義上它也可作為「有益於宿主保持健康的微生物」使用(Lee，Y.K.和Salminen，S.Thecomingofageofprobiotics.，TrendsFoodSci.Technol.6，241-245(1995))。因而，還有一種理解認為甚至被殺死的細菌也包括在益生菌的範圍內(Salminen，S.等probioticshowshouldtheybedefined？，TrendsFoodSci.Technol.，10，107-110(1999))。典型的作為益生菌的微生物是包括雙歧桿菌在內的乳酸細菌。此外，枯草芽孢桿菌、丁酸細菌、丙酸細菌、酵母等也可用作益生菌。專利公開1日本公開專利號2002-291466。非專利公開1PaolaLavermicocca等，AppliedandEnvironmentalMicrobiology，2000年9月，p4084-p4090，vol.66，No9)。專利公開2日本公開專利申請S50-132115。專利公開3日本公開專利申請H9-322714。專利公開4日本公開專利申請2001-299230。
發明內容本發明要解決的問題不過，迄今為止未有關於具抗真菌活性的德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)的報導。如專利公開2所述，曾有單獨使用乳酸細菌作為常規益生菌的提議。但是仍未獲得充足的效果。因此，如上所提及的，大部分情況是將乳酸細菌與其它微生物組合或聯合其它有用的物質一起使用。最近很少有關於單獨使用乳酸細菌能獲得足夠的益生菌的提議。鑑於上述情況，本發明的一個目標是提供具有抗真菌活性並且即使在單獨使用時仍具有極好的益生菌活性的新型乳酸細菌。解決問題的方法為了解決上述問題，依照本發明第一方面的新型乳酸細菌就是具有抗真菌活性的德氏乳桿菌。德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)優選作為該德氏乳桿菌。德氏乳桿菌優選由具有針對青黴菌屬真菌的抗真菌活性的德氏乳桿菌組成。依照本發明第二方面的動物飼料中添加了上述的德氏乳桿菌。依照本發明第三方面的動物飲料中添加了上述的德氏乳桿菌。依照本發明第四方面的的活的乳酸細菌劑含有上述德氏乳桿菌作為活性成分。依照本發明第五方面的動物飼料添加劑含有上述德氏乳桿菌作為活性成分。依照本發明第六方面的動物飼養改良方法使用了上述德氏乳桿菌。動物飼養的改進優選以下改進之一有關動物排洩物除臭的改進、提高動物的存活率、為收集蛋而提高母雞的產蛋率以及改進奶牛的牛奶質量。不過，動物飼養質量的提高廣泛地包含和包括了利用本發明乳酸細菌的益生菌活性獲得的效果。依照本發明第七方面的發酵食品是利用上述德氏乳桿菌製備的。依照本發明第八方面的發酵食品製備方法使用了上述德氏乳桿菌。依照本發明第九方面的發酵食品的保存方法使用了上述德氏乳桿菌。依照本發明第十方面的牲口棚(stable)的清潔方法是將上述德氏乳桿菌散布在牲口棚的地板或地面上。依照本發明第十一方面的水的清潔方法是將上述德氏乳桿菌直接散布到水中或者將它們放在可滲透的容器中以便將其浸泡和沉放在水中。本發明的效果由於本發明的新型乳酸細菌具有抗真菌活性，這種新的乳酸細菌可有效的用於在食品保存期間控制真菌、控制動物飼料中的真菌，等等。從而有可能減少由於添加抗生素物質或抗真菌製劑所引起的問題。此外，由於本發明的新型乳酸細菌具有極好的益生菌活性，這種乳酸細菌可以改善腸內菌群。由此它們可以提高諸如家禽或家畜等宿主的飼養質量。此外，在各自利用了上述新型乳酸細菌的動物飼料、動物飲料、活的乳酸細菌製劑、動物飼料添加劑、動物飼養的改良方法、發酵食品、發酵食品的製備方法、食品的保存方法、牲口棚的清潔方法和水的清潔方法中也發揮相同的效果。附圖描述[圖1]圖1顯示了通過16SrDNA基因序列分析所作的德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)的系統發生體系。圖2是顯示第一個比較實施例的牲畜飼料的照片圖像。圖3是顯示第一個應用實施例的牲畜飼料的照片圖像。圖4是顯示本發明的德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)在10％脫脂牛奶中抗真菌活性和pH的暫時變化以及與比較實施例的數據相比較的圖表(檢查案例號4)。圖5是顯示在飼料中添加本發明的德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)後的抗真菌活性與比較實施例的數據相比較而言的照片圖像(檢查案例號5)。圖6是顯示從圖5的比較實施例的飼料中分離的汙染綠色黴菌的顯微照片。圖7是顯示在飼料中添加本發明的德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)後的抗真菌活性與比較實施例的數據相比較而言的照片圖像(檢查案例號6)。發明的最佳實施方式本發明的德氏乳桿菌優選是德氏乳桿菌ANTIMUFFA，它在下文中可被稱為「本發明的細菌」或「本發明的菌株」。此菌株已保存於國家高等工業科學和技術研究院專利保藏中心(Central6，1-1-1，Tsukuba，IbarakiJapan)，保藏號為FERMP-19705。本發明的細菌是在研究乳酸細菌的抗菌活性中發現的。如圖1所示，由16SrDNA鹼基序列分析的譜系分析結果表明，本發明的細菌與德氏乳桿菌乳亞種(Lactobacillusdelbrueckiisubsp.Lactis)具有99.5％的同源性。因此，它被認為是屬於德氏乳桿菌乳亞種(Lactobacillusdelbrueckiisubsp.Lactis)的菌株。下文顯示了德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)的真菌特性，它是用適於乳酸細菌傳代的液體培養基人工培養的，該培養基是通過在蒸餾水中加入5.0g的葡萄糖、5.0g的乳糖、10.0g的胰蛋白腖、5.0g的酵母提取物、1.0g的Tween80和9.1g的L-半胱氨酸鹽酸鹽至總體積達到1000ml、將pH值調節至pH6.8-pH7.0之間、然後在121℃高壓蒸氣滅菌15分鐘而製得。至於糖的同化作用，用適於糖可發酵性檢測的基本培養基培養細菌，該培養基是通過在蒸餾水中加入10.0g胰蛋白腖、5.0g酵母提取物和0.06g溴甲酚紫至總體積1000ml、將pH值調節至pH6.8、然後在121℃(攝氏溫度)高壓蒸氣滅菌15分鐘而製得。細胞形狀桿菌，芽孢形成Nil，遷移Nil，革蘭氏菌株+(陽性)，抗氧表現兼性厭氧，15℃下的生長-(陰性)，45℃(攝氏溫度)下的生長+(陽性)，乳酸發酵同型-(陰性)，由葡萄糖產氣-(陰性)，由精氨酸產氨-(陰性)，馬尿酸鈉的水解能力-(陰性)，對4％氯化鈉的耐受性-(陰性)，糖同化作用阿拉伯糖-(陰性)，木糖-(陰性)，鼠李糖-(陰性)，核糖-(陰性)，葡萄糖+(陽性)，甘露糖+(陽性)，果糖+(陽性)，半乳糖+(陽性)，蔗糖+(陽性)，麥芽糖+(陽性)，纖維二糖+(陽性)，乳糖+(陽性)，海藻糖+(陽性)，蜜二糖-(陰性)，蜜三糖-(陰性)，松三糖-(陰性)，甘露醇-(陰性)，山梨醇-(陰性)，七葉苷+(陽性)，水楊苷+(陽性)，苦杏仁苷-(陰性)，葡糖酸鈉-(陰性)，產生的乳酸D-乳酸，所產生的乳酸的立體異構現象(HPLC，24小時)D(-)(90.7％)，L(-)(9.3％)，DNAGC含量(HPLC)48.7％。本發明的細菌可用MRS培養基、TYLG培養基、牛奶培養基等等培養乳酸細菌的常用培養基培養。培養溫度是20℃(攝氏溫度)至50℃(攝氏溫度)，優選30℃(攝氏溫度)至40℃(攝氏溫度)。培養pH是3.5-9.0，優選pH為4.5-7.0。培養時間優選6至30小時。本發明的細菌具有抗真菌活性，尤其是針對青黴屬真菌的抗真菌活性。本發明細菌對極易在動物飼料中繁殖的奧爾森青黴(Penicilliumolsonii)有阻滯作用。此外，本發明細菌對具有毒枝菌素(真菌毒素)生產能力的產毒青黴和婁地青黴(Penicilliumroquefortii)有阻滯作用。此外，本發明菌株強烈影響或抑制馬克斯克魯維酵母乳品種(Kluyveromycesmarxianusvar.lactis5Y307)的生長。本發明的細菌被添加在用於餵養家禽、牛、豬等牲畜的飼料中；餵養狗、貓等的寵物飼料中；餵養諸如鰻鱺等魚的水產養殖飼料中，以便通過其抗真菌活性影響或抑制飼料中的黴菌。此外，本發明的細菌可加入飲料中，諸如餵養家禽、家畜或寵物的飲用水中。本發明的細菌可用於製備活的或可存活的乳酸細菌製劑，其中將本發明的細菌作為活性成分。可存活的乳酸細菌製劑通常可單獨利用本發明細菌製備。或者，可以將其與作為本發明細菌營養來源的物質混合，諸如玉米、麩、米糠等。此外，活的乳酸細菌可與其它微生物或不會阻礙或幹擾本發明細菌生長的其它有用物質聯合使用。活的乳酸細菌可添加於動物飼料或動物飲料中。本發明細菌滿足安全性的要求，因此可用作發酵食品的發酵起始劑。此外，本發明細菌具有抗真菌活性，從而可以將其加入以便控制和阻礙致病細菌或腐敗細菌。因而，本發明細菌可用於食品保存中。此外，本發明細菌可用作益生菌。益生菌被定義為通過改善宿主的腸內菌群而對宿主產生有益影響的口服可吸收微生物。對宿主產生的有益影響意味著通過動物吸收穫得的多種效果促進動物生長、提高飼料的需用率、預防和改善腸道病、對排洩物的除臭作用、提高存活率、增加蛋雞的產蛋率、改善奶牛的牛奶質量，等等。在改進動物餵養方面也同樣有意義。本發明細菌由於其益生菌活性而能改善動物的餵養狀況，這可通過使動物攝入添加了含有本發明細菌作為活性成分的動物飼料添加劑的動物飼料而實現。第一個應用實施例儘管在展示應用實施例時對本發明進行了詳述，但本發明並不局限於以下應用實施例中。將本發明細菌接種於MRS培養基中並在30℃(攝氏溫度)至40℃(攝氏溫度)保溫24小時進行原代培養。然後，將培養液噴在無菌的糠上並在30℃(攝氏溫度)至40℃(攝氏溫度)保溫3天進行繼代培養，以便獲得活的乳酸細菌製劑。在所獲得的活乳酸細菌製劑中包含的本發明細菌的計數是5.3×109/g。將表1中試驗細菌菌株的真菌孢子塗在脫脂奶瓊脂平板上(10ml的無菌10％脫脂奶，5ml溶解了BCP(100mg/l)的2％瓊脂，150μl(微升)TYLG培養液(含有106/ml的本發明細菌))。然後，將5ml添加了50μl(微升)TYLG(含106/ml本發明細菌)的0.15％軟瓊脂鋪在上面。之後，將細菌在30℃(攝氏溫度)培養2天。經過培養後，與無真菌孢子塗在上面的對照進行比較，評估其抗真菌繁殖的抑制作用。結果如表1所示，表明它對青黴屬真菌具有強抑制作用。對於添加了本發明細菌的牲畜飼料是否能控制和抑制真菌的繁殖進行了測試。將獲自前述製備實施例的1克(5.3×109個)活乳酸細菌製劑加入20克動物飼料中(60wt％的穀類(玉米、黑麥)，26wt％的油籽餅粉，2wt％的穀殼和麩以及12wt％的其它物質(甜點廢料、mollasses等等))。然後，在所述動物飼料中加入20ml蒸餾水並放在杯子中室溫放置377天(第一個應用實施例)。在20克類似的牲畜飼料中只加入20ml蒸餾水並以相同方式放置(第一個比較實施例)。結果如圖2和圖3所示。在第一個比較實施例中，牲畜飼料中汙染的奧爾森青黴在飼料上繁殖且飼料顏色變成藍綠色。相反，在第一個應用實施方案中，奧爾森青黴的繁殖得到了控制和阻礙。圖2中的第一個比較實施例顯示了放置不理會31天後的狀態，而圖3的第一個應用實施方案則顯示了放置不理會377天後的狀態。對用牛奶瓊脂平板法篩選的本發明菌株的抗真菌活性進行檢查。婁地青黴PR-1菌株，下文也稱為「PR-1菌株」，被用作指示性真菌。首先，將10ml10％的脫脂牛奶、5ml含BPC(100mg/l)和150μl本發明菌株培養液的2％瓊脂溶液混合。待瓊脂凝固後，將稀釋10倍的PR-1菌株的真菌孢子塗在上面。製備真菌孢子時，在25℃(攝氏溫度)培養了7天的potate葡萄糖瓊脂斜面培養基中加入含吐溫80(0.1％)的正常鹽溶液並攪拌。然後，通過玻璃絲過濾製備試驗用孢子。其次，將添加了50μl(微升)本發明菌株培養液的5ml軟瓊脂(0.15％)鋪到上面並在30℃(攝氏溫度)保溫2至5天。結果證實了與單獨使用培養真菌(PR-1菌株)的培養基(對照平板)相比，在含有具抗真菌活性的本發明菌株的培養基(測試平板)中真菌(PR-1菌株)的生長被明顯抑制。因此，比較對照平板和測試平板之間真菌(PR-1菌株)的生長情況，從而測量本發明菌株的抗真菌活性。然後，檢查本發明菌株對10種真菌菌株的抗真菌活性圖譜。在牛奶瓊脂平板上30℃(攝氏溫度)保溫5天後進行該項檢查。結果證實了本發明菌株具有抗三種對飼料有不良影響的青黴屬細菌株系的抗真菌活性，即產黃青黴(JCM2056)、奧爾森青黴(野生型)和婁地青黴(PR-1)。其中，已證實產黃青黴(JCM2056)的生長被完全控制並抑制。通過菌落平板計數法檢查本發明菌株在10％脫脂奶中抗真菌活性(檢查案例4)和pH的隨時間變化情況。圖4中的線條圖(三條線)顯示了脫脂牛奶的pH。以三角形點表示的第一條線顯示了只接種了本發明菌株的脫脂牛奶的pH隨時間的變化情況。以菱形點表示的第二條線(最上面的線)顯示只接種了婁地青黴PR-1菌株的脫脂牛奶的pH隨時間的變化情況。以圓點表示的第三條線(線條大致與第一條線重疊)顯示既接種了婁地青黴PR-1菌株又接種了本發明菌株的脫脂牛奶的pH隨時間變化的情況。如圖4中線條圖所示的，在只接種了本發明菌株的脫脂牛奶中以及接種了婁地青黴PR-1菌株和本發明菌株二者的脫脂牛奶中pH下降。然而，在只接種了婁地青黴PR-1菌株的脫脂牛奶中則未發現有任何pH的降低。圖4中的棒狀圖(三條棒)顯示了本發明菌株和PR-1菌株中細菌的數目。左側的棒狀圖顯示了單獨培養的本發明菌株的細菌數。中間的棒顯示了單獨培養的PR-1菌株中細菌的數量。右側的棒顯示了在添加本發明菌株的條件下PR-1菌株的數量。如圖4中的棒狀圖所示，在添加本發明菌株的條件下PR-1菌株的繁殖得到了控制和抑制，而且在36小時後就檢測不到殘餘的PR-1菌株細菌計數。因而，顯然本發明菌株可以很好的應用於乳製品(發酵食品)中，例如酸奶等等。將適於下蛋母雞並添加了本發明菌株的飼料和適於下蛋母雞但未添加本發明菌株的飼料分別放置1年。然後，檢查真菌的產生情況。在圖5中，左側的照片顯示了在適於下蛋母雞的飼料中未加入本發明菌株的情況下真菌的產生狀態。圖5的右側照片顯示了在適於下蛋母雞的飼料中加入本發明菌株的情況下真菌的產生狀態。如圖5所示，未添加本發明菌株的下蛋母雞適用飼料變得發黴並且完全腐爛了。不過，在添加了本發明菌株的飼料中則未觀察到真菌的產生，而且該飼料也沒有腐爛。此外，如圖6所示，當從未加入本發明菌株且變得腐爛的下蛋母雞適用飼料中分離出汙染的真菌進行觀察時，可見一個或多個分生孢子相互排成行象四條擔孢子柄。因此，此真菌從其外形、生長於選擇培養基中以及分類學特徵上被鑑別為奧爾森青黴。這些結果證實了本發明菌株對奧爾森青黴的生長具有強抑制作用。以與檢查案例3同樣的方式檢測本發明菌株抗婁地青黴PR-1的抗真菌活性。觀察測試平板(培養添加了本發明菌株的培養PR-1菌株的培養基)和對照平板(單獨培養PR-1菌株的培養基)上PR-1菌株的生長狀態。在30℃(攝氏溫度)培養5天。結果如圖7中上方照片(A)所示，在未含本發明菌株的培養基中觀察到了許多PR-1菌株的生長。另一方面，如圖7中的下方照片所示，在含有本發明菌株的培養基中只觀察到了本發明菌株的生長而未觀察到PR-1菌株的生長。分別檢查豬圈、雞窩和牛棚中的氨濃度和氣味消除情況，以便如下檢查本發明細菌的除臭作用。作為第二個比較實施例，製備添加了0.2wt％的芽孢桿菌natto的豬飼料(60wt％的穀類(玉米、黑麥)、26wt％的油籽餅粉、2wt％的穀殼和12wt％的其它物質(甜點廢料、磨拉石、磷酸鈣等等)。然後，分別在適於斷奶後小豬的生殖房、飼養房和母豬房中固定時間內對2000隻豬供應第二次比較實施例的豬飼料。之後，在同樣的時間段後檢查豬圈中的氨濃度。通過在豬圈中1.5米高度處安置一氨氣探測管(由GASTECCORPORATION製造，3DL)來檢測氨濃度。另一方面，在前述豬飼料中加入用上述製備方法獲得的活乳酸細菌製劑以使每頭豬每天攝取4g(2.12×1010)該飼料作為第二個應用實施例。然後，對經第二個比較實施例的豬飼料餵養的生殖期後的上述2000隻豬分別供應第二個應用實施例的豬飼料。之後，分別在經第二個比較實施例的豬飼料餵養的生殖期後20天和40天，以與第二個比較實施例相同的方式檢測氨濃度。換而言之，在完成第二個比較實施例測試後進行第二個應用實施例的測試。結果如表2所示，與第二個比較實施例相比，第二個應用實施例顯示出顯著的除臭效果。尤其是，在40天後幾乎沒有氨的氣味產生。作為第三個比較實施例，製備添加了2.0wt％的商品化乳酸細菌材料(由乳酸細菌、酵母、絲狀細菌或真菌等等組成，由ACorporation製造)的下蛋母雞適用飼料(59wt％的玉米、23wt％的油籽餅粉、3wt％的穀殼和麩，1wt％的以動物為基礎的飼料(魚食)和14wt％的其它物質(碳酸鈣、動物油和脂肪、玉米浸出液等等)。然後，在固定時間內對12000隻下蛋母雞(ISABrown)供應第三次比較實施例的下蛋母雞適用飼料。之後，檢查雞籠中的氨濃度。另一方面，在前文所述類似的下蛋母雞適用飼料中加入1.0wt％的、用上述製備方法獲得的活乳酸細菌製劑作為第三個應用實施例。然後，對經第三個比較實施例的下蛋母雞適用飼料餵養的生殖期後的上述12000隻母雞(ISABrown)分別供應第三個應用實施例的下蛋母雞適用飼料。之後，檢測雞籠中的氨濃度。結果如表3所示。此外，在固定的時間內對經第三個比較實施例的下蛋母雞適用飼料餵養的生殖期後的上述12000隻下蛋母雞(ISABrown)供應與第三個實施方案相同的下蛋母雞適用飼料。在試驗開始後檢測雞籠內的氨濃度，即，在加入活乳酸細菌製劑5天、18天、25天和37天後。結果如表4所示。在此，在第三個比較實施例和第三個應用實施例中，通過與前述第二個應用實施例相同的檢測方法和檢測裝置進行氨濃度的檢測。此外，在第三個比較實施例測試進行超過15個月且用無添加劑的下蛋母雞適用飼料餵食下蛋母雞三個月後，進行第三個應用實施例的測試。而且，在第三個比較實施例和第三個應用實施例的每個測試中，為了調整比較條件，飼養條件都保持一致。例如，每隻雞籠的翅膀數目(每隻雞的面積)和雞籠的環境(設備等等)都保持一致。另一方面，對飼養期的時間間隔設置為如上所述的前期和後期。表3顯示了各15個月的第三個比較實施例和第三個應用實施例檢查期之間周期性檢測到的結果的平均值。結果如表3所示，對家禽而言本發明的細菌具有良好的除臭或消除氣味的作用。此外，如表4所示，氣味消除作用隨時間增加而增強。而且，與第三個比較實施例相比，用第三個應用實施例的下蛋母雞適用飼料餵養所獲得的存活率(87.39％比52.07％，提高了35.32％)和蛋產量(3698683比3389253，增加了309430)的數值更好。作為第四個比較實施例，製備添加了商品化乳酸細菌材料(由乳酸細菌、酵母、麴黴等組成，由BCorporation製備)的奶牛飼料(5kg玉米、3kg大麥、1.5-2.0kg甜菜、2kg棉花籽、1.2-1.3kg脫脂大豆、0.8kg-1kg大豆、8-10kg乾草和150-2001水)，使每頭奶牛每天攝取200g。然後，在固定時間內投放第四個比較實施例的奶牛飼料供130頭奶牛(Holstein)攝取。之後，檢測牛棚中的氨濃度。另一方面，在與前述飼料相同的奶牛飼料中添加用前述製備方法獲取的活乳酸細菌製劑而製備飼料使得每隻奶牛每天可以攝取40g作為第四個應用實施例。然後，在固定時間內投放第四個應用實施例的奶牛飼料供上述130隻奶牛各自攝取。之後，檢測牛棚中的氨濃度。在完成第四個比較實施例的測試且前述130隻奶牛各自攝取一個固定時間段的無添加劑奶牛飼料後進行第四個應用實施例測試。用與前述第二個應用實施例相同的檢測方法和檢測裝置進行氨濃度的檢測。結果如表5所示，對奶牛而言具有良好的除臭效果。在分別超過15個月、進行除臭效果檢查的上述第三個應用實施例測試中，與除臭作用測試一起還檢查了存活率和產蛋率。如上所述，第三個比較實施例3使家禽攝取了添加了商品化乳酸細菌材料的家禽飼料。另一方面，如上所述，第三個應用實施例使家禽攝取了添加了活乳酸細菌製劑的家禽飼料。結果如表6所示，攝取了本發明細菌的下蛋母雞的存活率非常高。此外，如表7所示，攝取了本發明細菌的下蛋母雞的產蛋率也很高。用與在前述第四個應用實施例除臭作用檢測所用的奶牛飼料中添加了商品化乳酸細菌物質的飼料(第四個比較實施例)類似的奶牛飼料(第五個比較實施例)和與在奶牛飼料在添加了前述製備方法獲取的活乳酸細菌製劑的飼料(第四個應用實施例)類似的奶牛飼料(第五個應用實施例)分別飼養奶牛。然後每隔10天對奶牛進行17次擠奶。從而進行所述牛奶中牛奶脂肪含量百分率、牛奶蛋白質含量百分率和脫脂牛奶固體含量百分率的檢測。在第五隔比較實施例中，給130頭奶牛(Holstein)餵食添加了商品化乳酸細菌物質的奶牛飼料。而且，在完成第五個比較實施例測試後使奶牛在固定時間內攝取無添加劑的奶牛飼料以及隨後使同樣130頭奶牛(Holstein)攝取添加了用前述製備方法獲取的活乳酸細菌製劑的奶牛飼料(第五個應用實施例的飼料)，進行第五個應用實施例的測試。用牛奶成分分析裝置(MilkoScanFT120，由SUJIHIRAINDUSTRYCO.，LTD製造)檢測從所述奶牛擠出的牛奶中的牛奶脂肪百分率、奶製品蛋白百分率和脫脂奶固體百分率。表8顯示了通過測試的17次檢測的平均值。結果如表8所示，攝取了本發明細菌的奶牛所產生牛奶中的牛奶脂肪百分率、牛奶蛋白質百分率和脫脂牛奶固體含量百分率都比第五個比較實施例中的各項參數要高，因而牛奶質量有所提高。從以上結果中可以認為，本發明細菌可以很好的停留在家禽或牲畜的腸道內以改進消化和吸收，從而即使在單獨使用本發明細菌的情況下也具有益生菌的活性。因此，本發明可具體化為益生菌(活的微生物製劑)並展示出上述作用。此外，如上所述，本發明不僅可加入動物飼料添加劑中，還可體現為添加了本發明菌株的動物飼料或添加了本發明菌株的動物飲料。在這方面，本發明具有與上文一樣的作用。此外，如上所述，本發明對動物飼養也有改良效果，諸如牲畜或家禽的飼養。此外，如果將本發明菌株加入食品中，有助於食品保存或控制食品微生物(生物保存)。在此情況下，本發明菌株具有傳統上通過上述特性或特徵觀察不到的適當效果。此外，如前述抗真菌活性的檢查案例4中所述，本發明菌株可加入發酵食品中以便用於製備發酵食品。因此，本發明菌株發揮了常規通過上述特性或特徵觀察不到的適當作用。此外，添加了本發明菌株的動物飼料等可在餵食動物等的時候有意散布或無意撒在飼養棚的地面、地板、排水溝等處。然後，本發明菌株可控制所述散布區域內微生物的生長。從而本發明菌株通過上述特性或特徵起到了對所散布區的清潔或除臭作用，以致達到了通常觀察不到的適當效果。或者，添加了本發明菌株的動物飼料等可直接散布在水中或裝在諸如網狀物等可滲透器具中沉澱或存放在水中。然後，本發明菌株可控制水中的微生物。從而本發明菌株通過上述特性或特徵對水起到了純化或消毒作用，以致達到了通常觀察不到的合適效果。權利要求1.具有抗真菌活性的德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)。2.如權利要求1所述的德氏乳桿菌，其由德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP-19705)組成。3.如權利要求1或2所述性的德氏乳桿菌，其具有針對青黴屬黴菌的抗真菌活。4.添加了如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌的動物飼料。5.添加了如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌的動物飲料。6.含有如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌作為活性成分的活乳酸細菌製劑。7.含有如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌作為活性成分的動物飼料添加劑。8.改進動物飼養的方法，其中利用如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌。9.如權利要求8所述的改進動物飼養的方法，其中對動物飼養的改進是改善了對動物排洩物的除臭效果。10.如權利要求8所述的改進動物飼養的方法，其中對動物飼養的改進是提高了動物的存活率。11.如權利要求8所述的改進動物飼養的方法，其中對動物飼養的改進是提高了用於收集蛋的母雞的產蛋率。12.如權利要求8所述的改進動物飼養的方法，其中對動物飼養的改進是提高了奶牛的牛奶質量。13.利用如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌製備的發酵食品。14.製備發酵食品的方法，其中利用如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌。15.保存發酵食品的方法，其中利用如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌。16.動物飼養棚的清潔方法，其中將如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌散布在飼養棚的地板或地面上。17.水的清潔方法，其中將如權利要求1-3中任一所述的德氏乳桿菌直接散布在水中或裝在可滲透器具中浸入和放置在水中。全文摘要本發明意圖提供具有抗真菌活性的德氏乳桿菌作為具有抗真菌活性的新型乳酸細菌。此德氏乳桿菌是德氏乳桿菌ANTIMUFFA(FERMP－19705)。德氏乳桿菌具有抗青黴菌屬真菌的抗真菌活性並且即使在單獨使用的情況下也顯現出極好的益生菌活性。文檔編號A61P1/00GK1930282SQ20058000704公開日2007年3月14日申請日期2005年3月4日優先權日2004年3月4日發明者宮本拓,內藤善夫申請人:株式會社生物平衡