一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法
2023-12-01 12:26:16 1
專利名稱：一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法
技術領域：
本發明屬於中藥有效成分提取技術領域，特別涉及一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的提取方法，該方法分離得到的總香豆素可作為製藥生產的原料。
背景技術：
中藥蛇床子(Fructus Cnidii )為傘形科蛇床屬植物蛇床monnier (L)Cusson的乾燥成熟果實，具有溫腎、壯陽、燥溼、祛風、殺蟲之功效。臨床上外用治療外陰溼疹，滴蟲性陰道炎，急性滲出性皮膚病等病症。內服用於陽痿，宮冷，不孕，寒溼帶下，溼鼻腰痛的症。蛇床子的有效成分可分為香豆素類和揮髮油，其中香豆素成分是蛇床子顯示各種生理活性的主要成分，從蛇床子香豆素中已分離得到的單體主要有六種，包括蛇床子素(osthole),佛手柑內酯(bergapten),異虎耳草素(isopimpinellin),花椒毒酹(xanthotoxol),花椒毒素(xanthotoxin),歐療屬素乙(imperatoriu),其中蛇床子素含量最高，一般佔總香豆素的90%以上。現代藥理實驗表明蛇床子總香豆素具有抗炎、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗凝血、抗菌等多種生物活性，因而蛇床子總香豆素在臨床上有著廣泛的應用前景。有關蛇床子總香豆素的提取已有報導，多採用水提、醇沉、石油醚提取等方法，分離方法多採用柱層析、用不同比例的有機溶劑洗脫，收集洗脫液，回收有機溶劑，檢測等步驟。這些方法均不同程度地存在提取率較低，有機溶劑用量大、處理時間長、環境汙染嚴重、不利於人體健康等。最近有關於CO2超臨界和高速逆流提取分離蛇床子香豆素的報導，但這些方法需要特殊或較為昂貴的設備才能進行，工業放大受到一定限制。因此研究綠色環保、簡單方便的中藥成分提取分離方法已成為當今生物醫藥的前沿課題之一。膜分離技術根據分子相對分子質量的大小，通過膜孔的篩分、吸附等作用，對體系中的不同組分實現選擇性的分離，達到分子水平上的分離和濃縮。雙水相分離技術與水-有機相萃取原理相似，是利用不同物質在特定的體系中有不同的分配係數，當物質進入雙水相體系後，在上相和下相間進行選擇性分配，表現出一定的分配係數，從而達到分離純化的目的，具有活性損失小、分離步驟少、操作條件溫和，易於工藝放大和連續操作等優點。
發明內容
本發明的目的是提供一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取即可得到蛇床子總香豆素，該方法使用的乙醇有機溶劑，對環境和人員安全，具有獲得產品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，具有汙染小，生產成本低，操作簡單，易於工藝放大和連續操作，所得產品無溶劑殘留等特點，克服現有技術中的不足，是一種綠色環保型萃取技術。本發明所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，按下列步驟進行
a、取蛇床子藥材，粉碎，過20-40目篩得到蛇床子粉；
b、將步驟a得到的蛇床子粉中在室溫下加入8-10倍量濃度為80-95%的乙醇，浸泡提取2-3次，合併提取液，浸泡時間8-12小時；
C、將步驟b得到的提取液過濾，加入超濾膜進行超濾，將超濾後的提取液按體積比1:1加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入納濾膜濃縮，得濃縮液；
d、將步驟c得到的濃縮液採用雙水相萃取，萃取溶劑為乙醇水磷酸氫二鉀，高速離心，萃取後的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧乾燥，即可得到總香豆素。步驟c中超濾膜的截留分子量為3000-9000的中空纖維超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維膜。 步驟d萃取溶劑體積比為乙醇水磷酸氫二鉀=4-6 mL:4-6 mL: I. 0-1. 5g。本發明所述的一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取得到蛇床子總香豆素，採用膜分離技術是一種物理分離方法，根據物質分子量選擇不同的孔徑截留，既不破壞物質成分，又有選擇性，是一種低能耗，低汙染的分離方法。該方法提高了目標成分-總香豆素的含量，去除了大部分無效成分，產品的活性成分得到了有效富集，納濾膜分離系統在截留目標物質的同時，也是一種低溫無相變的濃縮過程，減少了有效成分損失和濃縮時間；同時採用乙醇/水/磷酸氫二鉀雙水相體系分離純化蛇床子總香豆素，該方法只使用乙醇這種無害有機溶劑，對環境和人員安全，具有獲得產品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，易於工藝放大和連續操作等優點，是一種綠色環保型萃取技術。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
進一步說明本發明，但並不局限於下列實施方式。實施例I
取蛇床子藥材，粉碎，過20目篩，得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為10倍量的濃度為80%乙醇溶液浸泡12小時提取2次，合併提取液；
將提取液過濾，加入截留分子量為3000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾後的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為200的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
將濃縮液採用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇水磷酸氫二鉀=6 mL:4 mL:1.0g，高速離心，萃取後的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧乾燥得蛇床子總香豆素327g，含量檢測91. 4% (採用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。實施例2
取蛇床子藥材，粉碎，過30目篩得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為8倍量的濃度為90%乙醇溶液浸泡10小時，提取3次，合併提取液；
取提取液過濾，加入截留分子量為6000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾後的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為300的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
濃縮液採用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇水磷酸氫二鉀=5 mL:5 mL:1.2g，高速離心，溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧乾燥得蛇床子總香豆素361g，含量檢測93. 7% (採用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。實施例3
取蛇床子藥材，粉碎，過40目篩得到蛇床子粉；
取5kg蛇床子粉，在室溫下加入按重量比為9倍量的濃度為95%乙醇溶液浸泡8小時，提取3次，合併提取液；
將提取液濾過，加入截留分子量為9000的中空纖維素膜進行超濾，將超濾後的提取液按體積比I: I加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入截留分子量為200的納濾膜濃縮，得到濃縮液；
濃縮液採用雙水相萃取，萃取溶劑為體積比乙醇(無水)水磷酸氫二鉀=4 mL:6mL:1.5 g，高速離心，溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧乾燥得蛇床子總香豆素368g，含量檢測93. 5% (採用高效液相色譜儀分析，以蛇床子素為基準測定總香豆素的含量，詳細操作參見《中華人民共和國藥典》2010版一部P295)。
權利要求
1.一種從中藥蛇床子中提取總香豆素的方法，其特徵在於按下列步驟進行 a、取蛇床子藥材，粉碎，過20-40目篩得到蛇床子粉； b、將步驟a得到的蛇床子粉中在室溫下加入8-10倍量濃度為80-95%的乙醇，浸泡提取2-3次，合併提取液，浸泡時間8-12小時； C、將步驟b得到的提取液過濾，加入超濾膜進行超濾，將超濾後的提取液按體積比1:1加入濃度為80%乙醇溶液透析，收集透過液，再加入納濾膜濃縮，得濃縮液； d、將步驟c得到的濃縮液採用雙水相萃取，萃取溶劑為乙醇水磷酸氫二鉀，高速離心，萃取後的溶液形成兩相，取上相減壓濃縮，噴霧乾燥，即可得到蛇床子總香豆素。
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於步驟c中超濾膜的截留分子量為3000-9000的中空纖維超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維膜。
3.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於步驟d萃取溶劑體積比為乙醇水磷酸氫二鉀=4-6 ml,:4-6 mL: I. 0-1. 5 g。
全文摘要
本發明涉及一種中藥蛇床子中總香豆素的提取方法，該方法運用膜分離和雙水相萃取即可得到蛇床子總香豆素，該方法使用的乙醇有機溶劑，對環境和人員安全，具有獲得產品純度高，無溶劑殘留，分離步驟少、操作條件溫和，具有汙染小，生產成本低，操作簡單，易於工藝放大和連續操作等特點，克服現有技術中的不足，是一種綠色環保型萃取技術。
文檔編號A61P31/04GK102908373SQ20121046263
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月16日 優先權日2012年11月16日
發明者周軍, 孫江兵, 張瓊, 曾平 申請人:中國人民解放軍蘭州軍區烏魯木齊總醫院