生物檢測試劑塗膜液的製作方法

2023-10-11 05:03:04

專利名稱：生物檢測試劑塗膜液的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及用於生物傳感器的生物檢測試劑塗膜液。
背景技術：
膠體金是一種常用的標記技術，是以膠體金作為示蹤標誌物應用於抗原、抗體的一種新型的免疫標記技術。自1971年Faulk和Taytor將膠體金引入免疫化學，免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。目前在醫學檢驗中的應用主要有免疫層析法(immunochromatogra-phy),又稱膠體金快速檢測法，用於檢測B型肝炎表面抗原(HBsAg)、人絨毛膜促性腺激素(HCG )和抗雙鏈DNA抗體(anti-dsDNA)等,具有簡單、快速、準確和無汙染等優點。 膠體金快速檢測法目前已發展成為用於測定生理樣本(如尿液、血液)中待分析物的濃度的常用試劑盒，例如通常所說的測試條、測試紙或者測試筆(例如用於測試早孕個體血樣或尿樣中HCG濃度的測試條、用於測試排卵時間的黃體酮測試條、用於測試血樣中B肝抗原的檢測試紙)。通常，測試條包含與樣本接觸的樣本墊、吸附有膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)的結合墊、固定有生物檢測試劑(特異性的抗原或抗體)形成控制線和測試線的膜。當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應，再移動至固定有生物檢測試劑的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。基於在膜(例如硝酸纖維素膜)上的抗原與抗體反應的膠體金免疫快速檢測法因其操作簡單、適合現場檢測、快速、不需要複雜儀器而只需肉眼觀察、穩定性好、檢測成本低，已經成功用於醫學和食品安全等領域的快速檢測。在應用膠體金快速檢測法的測試條、測試紙或測試筆中，控制線和測試線通常以橫線的形式固化在固體支撐材料(例如硝酸纖維素膜)上。例如，CN101294966A公開一種子宮外孕、懷孕天數膠體金法檢測劑及其製備方法，其中採用的檢測試紙中，控制線(包被羊抗鼠多克隆抗體)和測試線(包被HCG但克隆抗體)是以線狀設置在硝酸纖維素膜上。在測試過程中，觀察控制線和/或測試線的顯色情況來判斷尿液中HCG濃度。本發明人意識到根據線狀或帶狀顯色的方法的測試結果，顯色顏色和形式單一，因而對於患者來說不夠直觀。因此，提供一種能夠將測試結果以複雜圖形或文字的形式顯示，即、能夠以複雜圖形或文字形式設置於固體支撐材料上抗體組合物將是有利的。CN2779402Y公開一種彩色多形式HCG測試試紙條，其控制膠體金顆粒大小或採用不同顏色的乳膠顆粒使試紙條在測試時能顯示多種顏色(紅、藍、黑、紫等)，並通過調節生產工藝中噴膜機的設置程序使其能噴制條形、菱形、圓形、梅花形、十字形等。然而本發明人通過實驗發現將常規的抗體/抗原塗膜液以複雜圖形或文字噴塗在固體支撐材料上時，圖形邊緣易發生漫延，導致顯色效果不均勻，相應的測試靈敏度亦會受到影響。

發明內容
本發明人意識到要將生物檢測試劑(抗體或抗原)以複雜圖形或文字形式塗覆在固體支撐材料上，應改善抗體組合物的粘性和延展性，使之能夠以複雜的圖案或文字的形式均勻、牢固印刷於硝酸纖維素膜上，並在使用中仍能達到理想的顯色效果。在此，本發明提供一種生物檢測試劑塗膜液，包括能夠使所述生物檢測試劑以複雜圖形或文字塗覆於固體支撐材料上的輔助劑，所述輔助劑為聚乙二醇(PEG)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、甘油、海藻糖和/或蔗糖，相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量，所述輔助劑的重量百分含量(wt%)為O. 05 10%。在本發明中，在生物檢測試劑塗膜液中添加O. 05 10wt%的聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、甘油、海藻糖和/或蔗糖等輔助劑，可以改善形成的生物檢測試劑組合物在硝酸纖維素膜等固體支撐材料上的粘附性和延展性，在將其以複雜圖形或文字塗覆在硝酸纖維素膜上時，形成的圖形或文字邊緣清晰、整齊，而且在用於測試時顯色均勻並能保持較高的測試靈敏度。 在本發明中，所述生物檢測試劑可以是抗原或抗體，包括但不限定於a-HCG單克隆抗體、β -HCG單克隆抗體、a -LH單克隆抗體、β -LH單克隆抗體、HBsAg單克隆抗體、血源性HBsAg抗原、抗人血紅細胞(RBC)單克隆抗體、抗人血紅蛋白(Hb)單抗、抗人甲胎蛋白單克隆抗體、抗癌胚抗原單克隆抗體等，而廣泛用於激素檢測、B肝等傳染病檢測、腫瘤標記物檢測等。在本發明中，所述生物檢測試劑塗膜液中生物檢測試劑的含量可以為O. I 5mg/ml，優選 O. 5 2mg/ml。在本發明中，所用輔助劑優選O. 05 O. 5wt% SDS、1 10wt%甘油、I 10wt%海藻糖，更優選O. 05、. 2wt% SDS、3 6wt%海藻糖，最優選O. 05 O. 2wt% SDS。本發明還提供一種生物測試條，包括固體支撐材料及塗覆在固體支撐材料上以形成包被膜的塗膜組合物，所述塗膜組合物為本發明提供的生物檢測試劑塗膜液。所述生物測試條還可以包括底板，在底板上依次粘連的樣品墊、附有膠體金標記物的結合墊、塗覆有所述生物檢測試劑塗膜液的包被膜和吸水墊。本發明還提供一種生物測試條的製備方法，包括配製包括輔助劑的生物檢測試劑塗膜液，其中，所述輔助劑為聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、甘油、海藻糖和蔗糖中的任意之一或其任意組合，相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量，所述輔助劑的重量百分含量為O. 05 10% ;將所述生物檢測試劑塗膜液塗覆在固體支撐材料上形成包被膜；及在底板上依次粘連樣品墊、附有膠體金標記物的結合墊、塗覆有生物檢測試劑的包被膜和吸水墊形成所述測試條。採用本發明方法製備生物測試條，生物檢測試劑可以很好地以複雜圖形或文字塗覆在固體支撐材料上，便於患者檢測時觀察。形成的圖形或文字邊緣清晰、整齊，而且在用於測試時顯色均勻並能保持較高的測試靈敏度。


圖I為對照例的塗膜液以圖形形式塗覆在硝酸纖維素膜上製備的包被膜；
圖2為實施例5的塗膜液以圖形形式塗覆在硝酸纖維素膜上製備的包被膜；
圖3為實施例12的塗膜液以文字形式塗覆在硝酸纖維素膜上製備的包被膜。
具體實施例方式參照附圖，並結合下述實施方式進一步說明本發明，應理解，附圖及下述實施方式僅用於說明本發明，而非限制本發明。以下以測試條為例進行說明，應理解，測試紙或測試筆也可以採用類似的方式配置。通常，測試條包括在底板上依次相互粘接的樣品墊、塗覆膠體金標記物的結合墊、塗覆生物檢測試劑(通常所稱測試線)的包被膜。在一個實施例中，測試條為HCG測試條，結合墊和包被膜採用硝酸纖維素膜作為固體支撐材料，應理解，其他任何適合的固體支撐材料也是合適的，例如玻璃纖維素膜。在一個實施例中，膠體金標記物為膠體金標記的β-HCG單克隆抗體，生物檢測試劑為a-HCG單克隆抗體，其塗覆在硝酸纖維素膜上作為檢測區。在本發明中，檢測區可以形成複雜圖像或文字，例如圓形、笑臉圖形、漢字「孕」、字母「P」、十字形、數字等。在HCG測試條的一個實施例中，硝酸纖維素膜上還可以塗覆抗鼠IgG多克隆抗體作為控制線，控制線可以採用本領域常用技術以線狀或帶狀塗覆在硝酸纖維素薄膜上。 應理解，控制線不是必須的。膠體金標記物可以參照現有的常用製備方法來製備。在一個實施例中，以氯金酸為原料採用常用的化學還原法製備膠體金用超純水(例如雙蒸水)配置0.01%的氯金酸和1%的檸檬酸三鈉，將O. 01%的氯金酸加熱至沸並攪拌下加入1%的檸檬酸三鈉，繼續加熱保持沸騰直到液體呈紅色，冷卻至室溫，並補足蒸發的水分，可得到純淨、透明的膠體金備用。在一個實施例中，O. 01%的氯金酸與1%的檸檬酸三鈉的用量體積比可以為100 :I 100 :5，優選，100 2 100 :4。根據所要標記的抗體的性質，將上述製備所得的膠體金的PH調節至合適的範圍，例如。對於β -HCG單克隆抗體，可採用O. IM的碳酸鉀溶液調節膠體金的pH至7. 5左右，攪拌下加入β -HCG單克隆抗體，合適的抗體的加入量可是10 20 μ g/ml，繼續攪拌，離心分離，沉澱用標記洗滌液洗滌，加膠體金保存溶液溶解製得膠體金標記物。標記洗滌液、膠體金保存溶液溶解可採用磷酸緩衝液，膠體金保存溶液還可以包含O. I 1% BSA,O. I O. 5% PEG,2 10%蔗糖和/或O. 5 3%海藻糖等。應理解，在將抗體添加到膠體金中後，也可添加BSA或PEG進行攪拌反應，然後在離心分離。將製得的膠體金標記物噴到結合墊上、乾燥即可得附有膠體金標記物的結合墊。每平方釐米的結合墊上可噴3 100 μ L膠體金標記物。在一個實施例中，在將膠體金標記物噴到結合墊前，可將結合墊浸泡在前述的膠體金保存溶液中5 30分鐘,乾燥後,再在其上噴膠體金標記物。本發明所用的生物檢測試劑塗膜液是在現有的常規生物檢測試劑塗膜液中添加輔助劑，例如，對於HCG測試條，採用含a -HCG單克隆抗體的塗膜溶液，抗體可採用市售的ΜΑ092701 P/N#18095 (Lot#0807291. IP, 3. 17mg/ml)，塗膜溶液可採用常規的緩衝液配製，例如O. 1ΜρΗ7. O的磷酸緩衝液，配製的塗膜溶液中抗體濃度可以為O. I 5mg/ml，優選O. 5 2mg/ml。添加的輔助劑可以為PEG、SDS、甘油、海藻糖和鹿糖中的任意之一或其任意組合，添加的輔助劑的重量百分含量可為O. 05 10wt%。根據所用輔助劑，選擇合適的添加量，例如優選O. 05 O. 5wt% SDS、l 10wt%甘油、I 10wt%海藻糖，更優選O. 05 O. 2wt%SDS、3 6wt%海藻糖，最優選O. 05 O. 2wt% SDS。下面以舉例說明進一步描述生物檢測試劑塗膜液的製備，應理解，這些例子僅是示例性的而非限制性的。
對照例
取20 ml濃度為3. 17mg/ml的a -HCG單克隆抗體，將其加至22ml的ρΗ7· O PBS溶液中，攪拌得到抗體濃度約為I. 5mg/ml的常規塗膜溶液。在上述對照例製備的常規塗膜溶液中，添加一定量的PEG、SDS、甘油、海藻糖和/或蔗糖，可製得本發明的塗膜溶液，參見下表I。表I :
權利要求
1.一種生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，包括能夠使所述生物檢測試劑以複雜圖形或文字塗覆於固體支撐材料上的輔助劑，所述輔助劑為聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、甘油、海藻糖和蔗糖中的任意之一或其任意組合，相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量，所述輔 助劑的重量百分含量為0. 05 10%。
2.根據權利要求I所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，所述輔助劑為十二烷基硫酸鈉，其相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量的重量百分含量為0. 05 0. 5%。
3.根據權利要求2所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，十二烷基硫酸鈉相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量的重量百分含量為0. 05 0. 2%。
4.根據權利要求I所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，所述輔助劑為甘油，其相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量的重量百分含量為I 10%。
5.根據權利要求I所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，所述輔助劑為海藻糖，其相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量的重量百分含量為I 10%。
6.根據權利要求5所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，海藻糖相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量的重量百分含量為3 6%。
7.根據權利要求I所述的生物檢測試劑塗膜液，其特徵在於，所述生物檢測試劑為a -HCG單克隆抗體、P -HCG單克隆抗體、a -LH單克隆抗體、P -LH單克隆抗體、HBsAg單克隆抗體、血源性HBsAg抗原、抗人血紅細胞單克隆抗體、抗人血紅蛋白單抗、抗人甲胎蛋白單克隆抗體或抗癌胚抗原單克隆抗體，所述生物檢測試劑的濃度為0. I 5mg/ml。
8.—種生物測試條，包括固體支撐材料及塗覆在固體支撐材料上以形成包被膜的塗膜組合物，其特徵在於，所述塗膜組合物為權利要求I 7中任一項所述的生物檢測試劑塗膜液。
9.根據權利要求8所述的生物測試條，其特徵在於，包括底板以及在所述底板上依次粘連的樣品墊、附有膠體金標記物的結合墊、塗覆有所述生物檢測試劑塗膜液的所述包被膜和吸水墊。
10.一種生物測試條的製備方法，其特徵在於，包括 配製包括輔助劑的生物檢測試劑塗膜液，其中，所述輔助劑為聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、甘油、海藻糖和蔗糖中的任意之一或其任意組合，相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量，所述輔助劑的重量百分含量為0. 05 10% ； 將所述生物檢測試劑塗膜液塗覆在固體支撐材料上形成包被膜；及 在底板上依次粘連樣品墊、附有膠體金標記物的結合墊、塗覆有生物檢測試劑的包被膜和吸水墊形成所述生物測試條。
全文摘要
本發明涉及一種生物檢測試劑塗膜液，包括能夠使所述生物檢測試劑以複雜圖形或文字塗覆於固體支撐材料上的輔助劑，所述輔助劑為聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、甘油、海藻糖和蔗糖中的任意之一或其任意組合，相對所述生物檢測試劑塗膜液的總重量，所述輔助劑的重量百分含量為0.05～10%。採用本發明，生物檢測試劑可以很好地以複雜圖形或文字塗覆在固體支撐材料上，便於患者檢測時觀察。
文檔編號G01N33/558GK102778557SQ20111010832
公開日2012年11月14日 申請日期2011年4月28日 優先權日2011年4月28日
發明者田豐, 錢律, 黃雅萍 申請人:美艾利爾(上海)診斷產品有限公司