一種提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法

2024-01-26 01:13:15 3

專利名稱：一種提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用紫外輻射提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法。
背景技術：
紅豆杉系紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬(Taxus)的一類喬木和灌木，全世界共 11種，從歐亞大陸和北美的亞北極區到中美和東南亞的亞熱帶甚至熱帶地區均有分布。紫 杉醇是一種二萜類生物鹼，經臨床證明對治療卵巢癌、肺癌、結腸癌、轉移性乳腺癌、黑色素 瘤、白血病等多種癌症有特效，致使紫杉醇成為當前最熱門的抗癌藥物之一。目前紫杉醇主要從樹皮中獲取，來源極其有限，這不僅破壞了紅豆杉資源和生態 平衡，也根本無法滿足人們對紫杉醇日益增長的需求。利用植物組織細胞培養的方法，培養 紅豆杉細胞生產紫杉醇及其類似物是保護紅豆杉資源、擴大紫杉醇來源的一條有效途徑。 但是，紅豆杉細胞內紫杉醇含量少，工業化成本高。因此，如何提高紅豆杉中紫杉醇的含量 成為人們十分管住的問題，同時也是一個難度較大的問題。植物體內有一套防禦系統來生成一類抗病蛋白來地獄外來病菌、害蟲和損傷等不 良環境，這些抗病蛋白可用於增加細胞壁強度，形成愈傷瘤、或作為一種溶菌酶，以及合成 植物抗生素等。植物抗生素主要包括兩大類萜類和已黃素類。紫杉醇是二萜類化合物，與 植物防衛系統對抗昆蟲和病原菌侵襲產生植保素的合成路徑有部分重疊，作為誘導子的紫 外輻射能夠通過刺激植物防偽系統二促進其中一些此生代謝的生物轉化。紫外輻射的主要 作用是可以調節代謝過程中的某些酶活性，並能對某些關鍵酶在轉錄水平上進行調節。本發明的目的就是提供一種簡便、快速提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量 60% -140%的方法。

發明內容
本發明的目的，在於提供一種提高紅豆杉細胞中紫杉醇的含量的方法，該方法可 以明顯提高紫杉醇的含量。本發明通過以下技術方案實現。將紅豆杉細胞接種於B5固體培養基上，在24-26 攝氏度及黑暗條件下培養細胞，紅豆杉細胞生長周期為50-55天。50-55天後，收集成熟的 紅豆杉細胞，對其進行紫外輻射。其技術特徵在於培養50-55天的細胞收集照射紫外線。 其技術特徵在於其特徵在於紫外線波長為256nm-365nm，輻射時間為16-20小時。配製B5培養基，將紅豆杉細胞接種於B5培養基上，培養細胞的生長條件為24_26 攝氏度，暗培養。細胞生長至50-55天進行紫外輻射，照射條件為紫外線波長256nm-365nm ；輻射 時間為16-20小時。紫外輻射後，將紅豆杉細胞晾曬烘乾獲得成品，對幹細胞採用高效液相色譜測定 紫杉醇的含量。通過對比試驗，驗證本發明的效果。本發明的效果是十分顯著的。以東北紅豆杉細胞進行實驗，其結果是細胞中紫杉醇含量，進行紫外輻射的細胞含量是常規培養細胞含量0. 6-1. 4倍。本發明的優點在於，操 作簡單可靠，結果明顯，過程不汙染環境。
具體實施例方式1、製備B5培養基。2、在B5培養基中接種東北紅豆杉細胞組織，接種比為細胞鮮重培養基= 5g ； 50ml ο3、紅豆杉細胞暗培養50-55天後，對其進行紫外輻射，紫外線波長256nm-365nm ； 輻射時間為16-20小時。4、光照結束後，收集紅豆杉細胞，並乾燥。5、檢測結果採用高效液相色譜的方法對不同紫外輻射時間的細胞進行檢測，確定進行16-20 小時輻射的紅豆杉細胞其紫杉醇含量提高量較多。表1紫外線照射實驗
權利要求
一種提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法，是將紅豆杉細胞接種於B5固體培養基中，在溫度為24℃ 26℃及黑暗的條件下培養紅豆杉細胞；紅豆杉細胞生長周期為50 55天。50 55天後，收集成熟的紅豆杉細胞，對其進行紫外輻射；其技術特徵在於收集培養50 55天的紅豆杉細胞，收集起來的細胞照射紫外線。
2.按權利要求1所述的提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法，其特徵在於紫外線波長 為256nm-365nm，輻射時間為16-20小時，效果最佳。
全文摘要
本發明涉及一種提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的方法。該方法將紅豆杉細胞接種在B5培養基中培養至細胞成熟，將成熟的細胞收集，進行紫外輻射。通過紫外輻射的紅豆杉細胞，其紫杉醇含量大幅度提高，提高幅度為60％-140％。本發明採用的方法，操作簡單，成本極低，是提高紅豆杉細胞中紫杉醇含量的有效方法。
文檔編號C12N13/00GK101942430SQ201010224890
公開日2011年1月12日 申請日期2010年7月13日 優先權日2010年7月13日
發明者劉漢石 申請人:大連普瑞康生物技術有限公司;陳梓;初穎