三七皂苷R1治療腦卒中的製作方法

2023-06-23 15:37:56

本發明涉及三七皂苷r1對腦卒中的治療作用，增加三七皂苷r1的適應症，促進三七皂苷r1的開發，屬於藥物領域。

背景技術：

三七皂苷r1是五加科植物三七的乾燥根及根莖提取得到的一種活性物質，屬於四環三萜皂苷，主要存在於三七中。三七皂苷r1具有中樞神經抑制和安定作用，對血管內皮細胞分泌功能、心血管系統具有保護作用，另外研究表明具有抗衰老作用。

「腦卒中」(cerebralstroke)又稱「中風」、「腦血管意外」(cerebralvascularaccident，cva)。是一種急性腦血管疾病，是由於腦部血管突然破裂或因血管阻塞導致血液不能流入大腦而引起腦組織損傷的一組疾病，包括缺血性和出血性卒中。缺血性卒中的發病率高於出血性卒中，佔腦卒中總數的60％～70％。頸內動脈和椎動脈閉塞和狹窄可引起缺血性腦卒中，年齡多在40歲以上，男性較女性多，嚴重者可引起死亡。出血性卒中的死亡率較高。調查顯示，城鄉合計腦卒中已成為我國第一位死亡原因，也是中國成年人殘疾的首要原因，腦卒中具有發病率高、死亡率高和致殘率高的特點。不同類型的腦卒中，其治療方式不同。由於一直缺乏有效的治療手段，目前認為預防是最好的措施，其中高血壓是導致腦卒中的重要可控危險因素

因此，考察三七皂苷r1對腦卒中的治療作用的可行性與可能性，促進三七皂苷r1的二次開發。

技術實現要素：

有鑑於此，本發明的目的在於考察三七皂苷r1對腦卒中的治療作用的可行性與可能性，促進三七皂苷r1的二次開發。

在三七皂苷r1對腦卒中的治療作用的藥理活性研究過程中，建立腦缺血再灌注造成的大鼠腦損傷的體內模型，分成對照組、模型組、治療組(50mg/kg)，造模前預給藥5天及造模當天再灌注2h給藥，造模24h後比較不同組神經行為變化情況，取腦切5片，ttc染液染色，評價各組腦梗死情況。取病灶腦側組織，通過酶聯免疫法檢測不同濃度三七皂苷r1對腫瘤壞死因子-α(tnf-α)，白細胞介素-6(il-6)及白細胞介素-1β(il-1β)的影響。結果發現，造模後模型組腦病灶側出現大面積梗死，而三七皂苷r1可顯著減小腦梗死面積(p＜0.01)；造模後大鼠病灶腦側tnf-α表達升高，與對照組相比有顯著性差異(p＜0.05)，三七皂苷r1治療組的tnf-α表達下調(p＜0.01)；造模後大鼠病灶腦側il-1β表達顯著升高(p＜0.01)，與模型組相比，三七皂苷r1可下調由血清中il-1β的表達(p＜0.05)；造模後大鼠病灶腦側il-6表達升高(p＜0.05)，與模型組相比，三七皂苷r1可顯著下調由病灶腦側il-6的表達(p＜0.01)。

通過以上研究，系統地考察三七皂苷r1對腦卒中的治療作用的可行性與可能性，促進三七皂苷r1的二次開發。

附圖說明：

圖1：三七皂苷r1對造模大鼠腦梗死情況的改善(a)腦切片染色(b)腦梗死面積。

圖2：三七皂苷r1對造模大鼠病灶腦側炎症因子表達的影響(a)tnf-α(b)il-1β(c)il-6。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例，對本發明進行進一步的說明。

實施例1三七皂苷r1治療腦卒中的藥效作用研究

步驟一：線栓法建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型(mcao)：以10％水合氯醛0.3ml/kg腹腔麻醉。頸正中切口，暴露頸總動脈(cca)、頸外動脈(eca)及翼顎動脈。將0.26mm單絲尼龍魚線頭端0.5cm用石蠟包被，並於20mm長處標記，全部大鼠均通過右側cca切口處插入。栓線長度自cca分叉處約18～20mm，根據動物體重而定，栓塞右側大腦中動脈。然後縫合皮膚，栓線尾端部分固定於皮膚上。缺血達到2h後小心抽出栓線，即形成再灌注。

步驟二：給藥方案：治療組按50mg/kg.d三七皂苷r1灌胃給藥，造模前5天開始給藥，造模手術完成再灌注後給藥。對照組和模型組給予生理鹽水。

步驟三：三七皂苷r1對腦梗死情況的改善：麻醉後直接取腦，-20度冰箱中速凍20分鐘左右切片，切成5片，每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏鬥柄部位；第四刀在漏鬥柄與後葉尾極之間。將切片置於含1％ttc的0.2m磷酸緩衝液(ph7.4)中。避光放入37℃溫孵箱15～30min，不時翻動腦片，使均勻接觸到染色液。染色後白色部分為梗死部分。

結果表明：mcao造模明顯造成大鼠腦部大面積梗死。而與mcao組相比，治療組大鼠腦梗死面積明顯減小(p＝0.0197)，梗死症狀症狀減輕，見圖1。

步驟四：mcao模型大鼠病灶腦側的tnf-α(p＜0.05)、il-1β(p＜0.01)和il-6(p＜0.05)的表達顯著上調。與mcao模型組相比，三七皂苷r1顯著下調了由造模引起的tnf-a(p＜0.01)，il-1β(p＜0.05)和il-6(p＜0.01)的表達升高，見圖2。