活化素受體樣激酶-1的人單克隆抗體的製作方法

2023-10-09 13:09:19 3

專利名稱：：活化素受體樣激酶-1的人單克隆抗體的製作方法
技術領域：
：本發明涉及與活化素受體樣激酶-1(ALK-1)胞外域(ECD)結合的人單克隆抗體及其抗原結合部分。本發明也涉及編碼此類抗體和抗原結合部分的核苷酸分子，獲得抗ALK-1人抗體和抗原結合部分的方法，包括這些抗體和抗原結合部分的組合物以及這些抗體、抗原結合部分和組合物的4吏用方法。
背景技術：
：ALK-1是轉化生長因子P受體1型(TGF-P-1)的I型細胞表面受體。人ALK-1是503個胺基酸的多肽，其包括信號肽(胺基酸1-21),N端的細胞外TGF-P-1配體結合結構域或ECD(胺基酸22-118)，單次跨膜結構域(胺基酸119-141)，富含甘氨酸/絲氨酸(GS)的調節結構域(胺基酸142-202)以及C端的絲氨酸-蘇氨酸激酶結構域(202-492)。Attisanoetal.Cell,1993，vol.75，pp.671-680揭露的人ALK-1胺基酸序列包括172位的絲氨酸(基因庫編號L17075)，而美國專利6，316,217聲稱人ALK-1胺基酸序列172位為蘇氨酸(基因庫編號腿-000020)。AUisano等揭露的編碼人全長ALK-1的ACVRLl基因可從Invitrogen公司購買得到，其克隆ID為IOH21048,ALK-1與其它I型受體(從ALK-2到ALK-7)享有60-80°/。的同源性，但是，ALK-1的BCD明顯不同於ALK家族其它成員的ECD。例如，在人類中，只有ALK-2的ECD與ALK-1的ECD顯著相關(享有25%左右的胺基酸同一性)。美國專利6，316，217;tenDijkeetal.Oi3coge/7e，1993，vol.8，pp.2879-2887;Attisanoetal.Co",1993，vol.75，pp.671-680。通常，TGF-p超家族的配體發揮生物學活性，是通過結合至兩類(I型和II型)絲氨酸/蘇氨酸激酶形成的異型受體複合物。II型受體是具有組成活性的激酶，一旦與配體結合，就可以使I型受體磷酸化。其後，活化的I型激酶促使下遊的信號分子(包括各種Smads)磷酸化，所述信號分子進入細胞核並引起轉錄反應。Heldinetal.m訂e，1997，vol.390，pp.465-471。對於ALK-1，我們已經發現Smadl被特異磷酸化並進入細胞核直接調節Smadl應答基因Idl和EphB2的表達。ALK-1在內皮細胞和其它高度血管化組織例如胎盤或腦中選擇性高表達。通過Affymetrix分析和實時RT-PCR，我們已經發現ALK-1在內皮細胞中的表達明顯超過它的共受體II型活化素和內皮因子，它的配體TGF-P-1或ALK-5。ALK-1的突變與遺傳性出血性毛細血管擴張症(HHT)相關，表明ALK-l在調控血管發生或修復中的重要作用。Abdallaetal./.6^/ef，2003，vol.40，pp.494-502;Sadicketal.^z"0/og/cfl/r力e〃e邁"o/owJ.，2005，vol.90，818-828。此外，兩個ALK-1敲除小鼠的獨立實驗為ALK-1在血管生成中的作用提供了重要體內依據。Ohetal.iVocA""7^cadSc/"5^，2000，vol.97,pp.2626-2631;Urnessetal.#"uretoe〃",2000，vol.26，pp.328-331。血管生成是一個生理學過程，包括從預先存在的血管和/或循環內皮幹細胞形成新的血管。這在生長、發育以及創傷癒合中是一個正常過程。但是，在腫瘤從休眠狀態到惡性狀態的轉變過程中，這也是一個重要步驟。HanahanandFolkman，"PatternsandEmergingMechanismsoftheAngiogenicSwitchDuringTumorigenesis,"Ce//86(3):353—364，1996;Carmeliet,"AngiogenesisinHealthandDisease,"腳/c2'/7e，9(6):653-660，2003;BergersandBenjamin,"TumoreigenesisandtheAngiogenicSwitch,"^"wreWeWe^，3:401-410，2003。發生疾病例如肺瘤時，機體喪失維持血管生成平衡的能力。新生血管滋生異常組織，破壞正常組織，並且對於某些腫瘤，新生血管允許肺瘤細胞逃逸到循環系統並在其它器官留居(腫瘤轉移)。血管生成抑制劑，包括單克隆抗體(mAbs)，是一類非常有希望的藥物，所述藥物靶向抑制該異常過程從而阻斷或減緩腫瘤生長，除了在實體瘤生長和轉移中的作用，其它值得注意的具有血管生成現象的症狀例如有關節炎、牛皮褲、新生血管性與年齡相關的黃斑變性糖尿病性視網膜病。Bonnetetal."Osteoarthritis,AngiogenesisandInflammation,"Rheumatology,2005，vol.44，pp.7-16;Creameretal."Angiogenesisinpsoriasis,"^^/0ge/7e^，2002，vol.5，pp.231-236;Claveletal."Recentdataontheroleforangiogenesisinrheumatoidarthritis,"/o//^5>/加，2003，vol.70，pp.321-326;Anandarajahetal."Pathogenesisofpsoriaticarthritis,"Cwrr.O;7//7.W力e咖"o人，2004，vol.16，pp.338-343;Ngetal."Targetingangiogenesis,theunderlyingdisorderinneovascularage-relatedmaculardegeneration,"C線/.，2005，vol.40，pp.352-368;Witmeretal."Vascularendothelialgrowthfactorsandangiogenesisineyedisease,"戶ro^re^//z及e〃/za/《f/eiesea"力，2003,vol.22，pp.1-29;Adamisetal."Angiogenesisandophthalmicdisease,"iln^7ogei3es/s，1999，vol.3，pp.9-14。抗血管生成療法本質上是一個長期過程。相應地，具有高選擇性內皮功能的靶標例如ALK-l,能夠減少副反應引起的摩擦。此外，由於ALK-l的ECD與ALK家族其它成員的ECDs存在顯著差異，針對人ALK-lECD荻得的mAb被指望選擇性靶向ALK-1。基於這些考慮，針對ALK-1胞外域的單克隆抗體可以抑制II型受體的二聚化，並進而阻斷Smadl磷酸化以及下遊的轉錄反應，這是非常有希望的。R&DSystems公司生產並銷售抗人ALK-1的單克隆抗體(Cat.#MAB370)，所述抗體產自小鼠骨髓瘤和B細胞融合的雜交瘤，其中B細胞來自用純化的、NS0衍生的、重組人ALK-1胞外域免疫後的小鼠。我們已經發現，該抗體既不中和ALK-1和TGF-P-1之間的反應，也不抑制Smadl磷酸化。已經獲得兔抗血清，其針對相應於ALK-1部分胞內近膜結構域(胺基酸殘基145-166)的合成肽(與鑰孔嘁血藍素(KLH)(美國專利6，692，925)偶聯)，以及針對除前導序列以外的完整ALK-1胞夕卜域(Luxetal.，/.5/o/.Oe邁.，1999,vol.274,pp.9984-9992)。Abdalla等(ywzw/#o/.6"e/.，2000，vol.9，pp.1227-1237)用重組的痘苗病毒構建體獲得抗ALK-1多克隆抗體。MDSystems公司生產並銷售抗人ALK-1的多克隆抗體(Cat.#AF370),其產自用純化的、NS0衍生的、重組人ALK-1胞外域免疫後的山羊。迄今為止，還沒有完整的抗ALK-1ECD的人單克隆抗體見諸報導，並且還沒有人證明任一抗ALK-1ECD單克隆抗體在抑制ALK-1/TGF-P-l/Smadl信號通路中的作用。發明概述本發明是分離的中和性抗ALK-1單克隆抗體或其抗原結合部分，與靈長類ALK-1結合，優選靈長類ALK-1ECD結合，更優選與人ALK-1ECD結合。在一個優選的具體實施方式中，中和性抗體是完全的人單克隆抗體或其抗原結合部分。另一方面，本發明是一個抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分抑制ALK-1/TGF-p-1/Smadl信號通路。在一個優選的具體實施方式中，抗體是完全的人單克隆抗體或其抗原結合部分。另一方面，本發明是一個抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分是TGF-P-1激發的血管生成的拮抗劑。在一個優選的具體實施方式中，抗體是完全的人單克隆抗體或其抗原結合部分。另一方面，本發明是一個完全的抗ALK-1人抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分是TGF-P-1激發的肺瘤血管生成的拮抗劑。另一方面，本發明是一個具有良好耐受性、可注射的、完全的抗ALK-1人抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分是TGF-P-1激發的血管生成的拮抗劑。另一方面，本發明是一個抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分抑制ALK-1某一特定下遊靶基因Idl的上調。在一個優選的具體實施方式中，抗體是完全的的人單克隆抗體或其抗原結合部分。另一方面，本發明是一個抗ALK-1單克隆抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或其抗原結合部分至少符合如下所述若干功能特性之一。例如，在一個具體實施方式中，抗體或其抗原結合部分結合於靈長類ALK-1胞外域，其中親和力值為1jiM或更小(通過表面等離子共振技術測得)。在進一步的具體實施方式中，抗體或部分結合於靈長類ALK-1胞外域，其中親和力值小於100nM、小於5nM、小於1nM、小於500pM、小於100pM、小於50pM、小於20pM、小於10pM、或小於1pM(通過表面等離子共振技術測得)。在特定的具體實施方式中，親和力值從O.lpM到lpM。在其它具體實施方式中，親和力值從lpM到100nM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到5nM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到500pM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到100pM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到10pM。在另一個具體實施方式中，抗體或其抗原結合部分結合於人ALK-1胞外域，其中親和力值為100nM或更小(通過表面等離子共振技術測得)。在進一步的具體實施方式中，抗體或其部分結合於人ALK-1胞外域，其中親和力值小於IOnM、小於5nM、小於1nM、小於500pM、小於100pM、小於50pM、小於20pM、小於10pM、或小於1pM(通過表面等離子共振技術測得)。在特定的具體實施方式中，親和力值從1pM到100nM。在其它具體實施方式中，親和力值從lpM到5nM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到500pM。在其它具體實施方式中，親和力值從1pM到100pM。在其它具體實施方式中，親和力值從lpM到10pM。在另一個具體實施方式中抗體或其部分對人ALK-1的解離速率(k。ff)為5xl(T3s—'或更小，其是通過表面等離子共振技術測得的。例如，在特定的具體實施方式中，抗體或片段對人ALK-1的k。ff小於103s1、小於5x10—4s—\小於10—4s—、小於5x105s1、小於10-5s_1、或小於5xl(T6s_1。在其它具體實施方式中，k。ff從10—6s^到10—4s-1。在其它具體實施方式中，k。ff從l(T6s^到5x10—5s—\在另一個具體實施方式中，抗體或其部分結合於靈長類ALK-l,其中K。為1000nM或更少。在進一步的具體實施方式中，抗體或片段結合於人ALK-1，其中K。小於500nM、小於100nM、小於50nM、小於20nM、小於10nM、或小於1nM(通過表面等離子共振技術測得)。在特定的具體實施方式中，K。從lpM到100nM。在其它具體實施方式中，K。從100nM到10nM。在其它具體實施方式中，K。從50nM到0.1nM。該K。值可通過所屬領域技術人員已知的任一技術進行測定，例如通過ELISAs、RIAs、流式細胞術、或表面等離子共振技術，例如BIACORE。在另一個具體實施方式中，抗體或其部分對靈長類ALK-1的結合親和力(Kd(P))高於對嚙齒類ALK-1的結合親和力(Kd(R))。在一個具體實施方式中，本發明抗體或其抗原結合部分的K。(R)/Kd(P)大於或等於1.5。在進一步的具體實施方式中，本發明抗體或其抗原結合部分的Kd(R)/K。(P)大於或等於2、大於或等於3、大於或等於5、大於或等於IO、大於或等於20、大於或等於50、大於或等於IOO、大於或等於200、大於或等於500、或大於或等於1000。對靈長類ALK-1或嚙齒類ALK-1的K。值可通過所屬領域技術人員已知的任一技術進行測定，例如通過流式細胞術、ELISAs、RIA、或表面等離子共振技術，例如BIAC0RETM。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分的ICs。為500nM或更小，其通過測定其抑制ALK-1的某一特定下遊靶基因Idl上調的能力獲得。在進一步的具體實施方式中，該ICs。小於300nM、小於200nM、小於150nM、小於100nM、小於50nM、小於20nM、小於10nM、或小於1nM。在特定的具體實施方式中，ICs。從1nM到500nM。在其它具體實施方式中，ICs。從5nM到250nM。在其它具體實施方式中，ICs。從10nM到100nM。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分的ICs。為250nM或更小，其通過測定其抑制Smadl磷酸化的能力獲得，其中磷酸化的通過Western印跡，採用OdysseyInfrared成4象系統而測定的。在進一步的具體實施方式中，該ICs。小於200nM、小於150nM、小於100nM、小於50nM、小於20nM、小於10nM、或小於1nM。在特定的具體實施方式中，ICs。從lnM到250nM。在其它具體實施方式中，ICs。從5nM到200nM。在其它具體實施方式中，I"從10nM到100nM。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中人黑色素瘤M24met胂瘤細胞通過皮內注射植入，且通過IHC分析人CD-31信號，與對照樣品相比，至少40%被抑制。在進一步的具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中人黑色素瘤M24met腫瘤細胞通過皮內注射植入，且與對照樣品相比，至少30%、至少40%、至少50%、或至少60%被抑制。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分的ECs。為500nM或更小，其是通過測定其在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成的能力獲得，其中人黑色素瘤M24met腫瘤細胞通過皮內注射植入。在進一步的具體實施方式中，該ECs。小於400nM、小於300nM、小於200nM、小於150nM、小於100nM、小於50nM、小於25nM、或小於5nM。在特定的具體實施方式中，ECs。從5nM到500nM。在其它具體實施方式中，ICs。從25nM到300nM。在其它具體實施方式中，ICs。從50nM到150nM。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中人大血管內皮細胞與膠原的混合物通過皮內注射植入，且通過IHC分析人CD-31信號，與對照樣品相比，至少25°"皮抑制。在進一步的具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中膠原通過皮內注射植入，且與對照樣品相比，至少50%被抑制。在進一步的具體實施方式中，與對照樣品相比，抗ALK-l抗體或其部分抑制至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1節I)、1.12,1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的抗體竟爭結合於ALK-1。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1,1)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27,1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的抗體交叉竟爭結合於ALK-1。在另一個具體實施方式中，抗ALK-l抗體或其部分與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1,1)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的抗體結合於ALK-1的相同抗原表位。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其部分與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的抗體和ALK-1結合的K。基本相同。在另一個具體實施方式中，抗ALK-l抗體或其部分與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1,183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的一個抗體和ALK-1結合的K。n基本相同。本發明的另一方面是一個抗體或其抗原結合部分，其具有上述功能特性中的至少，並包括vh結構域，該vh結構域的其胺基酸序列至少90%相同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任意一個。在一個具體實施方式中，該vh結構域的胺基酸序列至少91%、至少93%、至少95%、至少97%、至少99%、或100%相同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任意一個。在進一步的具體實施方式中，抗體或其部分至少具有上述功能特性之一，並包括Vh結枸域，所述vh結構域為一SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任意一個，或者由於至少一個保守胺基酸置換而不同於任一SEQIDN0:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104,例如，Vh結枸域由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任何一個。在進一步的具體實施方式中，這些保守胺基酸置換中的任何一個可以出現在CDR1、CDR2和/或CDR3區。本發明的另一方面是一個抗體或其抗原結合部分，該抗體或其抗原結合部分至少符合上述功能特性之一，並包括一個Vl結枸域，該結構域中90%的氦基酸序列等同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任意一個。在一個具體實施方式中，該VL結構域的胺基酸序列至少91%、至少93%、至少95%、至少97%、至少99%、或100%相同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任意一個。在進一步的具體實施方式中，抗體或其部分至少具有上述功能特性之一，並包括一個Vl結枸域，其為SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任意一個，或者由於至少一個保守胺基酸置換而不同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127的序列中的任意一個。例如，Vl結枸域由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任意一個。在進一步的具體實施方式中，這些保守胺基酸置換中任何一個可以出現在CDR1、CDR2和/或CDR3區，本發明的另一方面是一個抗體或其抗原結合部分，該抗體或抗原結合部分具有至少上述功能特性之一，其中，l和V^結構域的胺基酸序列各自分別90%相同於1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29D、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1中任一單克隆抗體的VL和Vh結枸域。例如，Vl和VH結構域的胺基酸序列各自分別至少91%、93%、95°/。、97%、99%或100%相同於1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1中任一單克隆抗體的VL和Vh結枸域。本發明的另一方面是一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其選自a)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:6所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:8所述的Vt結構域；b)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:10所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:12所述的W結構域；c)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:14所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:16所述的Vl結枸域；d)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:18所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:20所述的Vl結枸域；e)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:22所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:24所述的Vl結枸域；f)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:26所述的Vh結構域和一個SEQIDNO:28所述的l結構域；g)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:30所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:32所述的VL結構域；h)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:34所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:36所述的Vl結枸域；i)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:38所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:40所述的Vt結構域；j)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:42所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:44所述的Vt結構域；k)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:46所述的VH結構域和一個SEQIDNO:48所述的Vt結構域；1)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:50所述的VH結構域和一個SEQIDNO:52所述的Vt結構域；m)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:54所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:56所述的Vl結枸域；n)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:58所述的VH結構域和一個SBQIDNO:60所述的Vl結枸域；o)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:62所述的Va結構域和一個SEQIDNO:64所述的l結構域；p)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:66所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:68所述的Vl結枸域；q)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:70所述的Vh結構域和一個SEQIDNO:72所述的Vl結枸域；r)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:74所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:76所述的VL結構域；s)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:78所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:80所述的W結構域；t)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:82所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:84所述的Vt結構域；u)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:86所述的VH結構域和一個SEQIDNO:88所述的Vt結構域；v)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:90所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:92所述的Vt結構域；w)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:104所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:127所述的Vl結枸域；x)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:6所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:127所述的Vl結枸域；y)抗體或其部分含有一個SEQIDNO:104所述的Vh結枸域和一個SEQIDNO:8所述的Vl結枸域。在進一步的具體實施方式中，對於上述a)到v)組的任一抗體或其部分，其Vh和/或l結構域可通過至少一個保守胺基酸置換不同於其中所述的特定SEQIDNO。例如，Vh和/或^結構域由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換而不同於所述SEQIDNO。在進一步的具體實施方式中，這些保守胺基酸置換中的任何一個可以出現在CDR1、CDR2和/或CDR3區。在另一個具體實施方式中，本發明提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其至少具有上述功能特性之一，其中，vh結構域獨立選自SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任意一個，或由於至少一個保守胺基酸置換而不同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104的任意一個的序列，而Vt結構域獨立選自SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任意一個，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127的任意一個的序列。例如，Vh和、結構域各自由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換分別不同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104,和8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127。在進一步的具體實施方式中，本發明提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其具有至少上述功能特性之一，其中該抗體或片段含有VHCDR1、CDR2和CDR3序列，它們分別獨立選自SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中任意一個序列的重鏈CDR1、CDR2或CDR3序列，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中任一序列的重鏈CDR1、CDR2或CDR3序列。例如，VHCDR1、CDR2和CDR3由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換分別不同於SEQIDNO:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中任何一個序列的CDR1、CDR2和CDR3。在進一步的具體實施方式中，本發明提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其至少具有上述功能特性之一，其中，該抗體或片段含有VlCDR1、CDR2和CDR3序列，它們分別獨立選自任一SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任一序列的輕鏈CDR1、CDR2或CDR3序列，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任一序列的輕鏈CDR1、CDR2或CDR3。例如，VLCDR1、CDR2和CDR3由於1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換分別不同於SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任何一個序列的CDR1、CDR2和CDR3。本發明進一步提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其至少具有上述功能特性之一，其中，該抗體或抗原結合部分含有1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1中任一單克隆抗體的Vh和VlCDR1，Vh和VlCDR2，以及Vh和VlCDR3序列。本發明進一步提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其至少具有上述功能特性之一，其中，該抗體或抗原結合部分含有，利用人Vh4-31、VH3-11、VH3-15、VH3-33、VH4-61或VH4-59基因的重鏈。在某些具體實施方式中，重鏈利用人VH3-33基因，人D6-19基因和人Jh3B基因；人Vh4-31,人D6-19基因和人JH4B基因；人VH4-61基因，人D6-19基因和人Jh4B基因；人Vh4-31基因，人D3-3基因和人Jh3B基因；人Vh4-31基因和人Jh3B基因；人Vh4-59基因，人D6-19基因和人JH4B基因；人Vh3-11基因，人D3-22基因和人Jh6B基因；人Vh3-15基因，人D3-22基因和人Jh4B基因；人VH4-31基因，人D5-12基因和人Jh6B基因；人Vh4-31基因，人D4-23基因和人JH4B基因；人Vh4-31基因，人D2-2基因和人JH5B基因；人Vh4-31基因和人Jh6B基因；人Vh3-15基因，人D1-1基因和人Jh4B基因；人Vh3-11基因，人D6-19基因和人Jh6B基因；人Vh3-11基因，人D3-10基因和人Jh6B基因；或者人Vh3-11基因，人D6-6基因和人Jh6B基因。本發明進一步提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，其至少具有上述功能特性之一，其中，該抗體或抗原結合部分含有一條輕鏈，利用人VkA27、VkA2、VkAl、VKA3、VKB3、VKB2、VKLl或VKL2基因的輕鏈。在某些具體實施方式中，輕鏈利用人VkLl基因和人L4基因；人VkA27基因和人JK5基因或人Jk4基因；人VkB3基因和人Jkl基因；人VkL2基因和人Jk3基因；人VkA2基因和人Jkl基因；人VkA3基因和人Jk4基因；人VkAl基因和人Jk1基因；人VkB2基因和人Jk4基因；或者人VkA2基因和人Jkl基因。本發明進一步提供一個單克隆抗體或其抗原結合部分，adw至少具有上述功能特性之一，其中，該抗體或抗原結合部分含有一條或多條重鏈和/或輕鏈FRl、FR2、FR3或FR4胺基酸序列，其中所述胺基酸序列存在於1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.l節I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1,14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27,1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.l和5.59.1中的任一單克隆抗體。本發明進一步提供一個單克隆抗體，其胺基酸序列如a)SEQIDN0:2和SEQIDNO:4;b)SEQIDNO:2和SEQIDNO:102;c)SEQIDNO:100和SEQIDNO:4;d)SEQIDNO:100和SEQIDNO:102所示。在進一步的具體實施方式中，本發明是上述任一抗體，即，IgG、IgM、IgE、IgA、或IgD分子，或其衍生物。例如抗體可以是IgGt或IgG2。另一個具體實施方式提供上述任一抗體或抗原結合部分，基夥Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段、單鏈Fv片段、單鏈VH片段、單鏈Vl片段、人源化抗體、嵌合抗體或雙特異性抗體。在進一步的具體實施方式中，本發明是一個衍生化抗體或抗原結合部分，其包括上述任一抗體或其部分以及至少一個其它分子基團。例如，該分子基團可以是另一個抗體(例如一個雙特異性抗體或雙價小抗體)，一種檢測試劑，標籤，細胞毒試劑，藥學試劑，和/或蛋白或多肽，它們可介導抗體或其抗體片段與另一分子(例如鏈霹集合素核心區或多組氨酸標籤)結合。例如，用於衍生本發明抗體或抗原結合部分的檢測試劑包括螢光化合物，例如螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、5-二甲氨基-l-萘磺醯氯、藻紅蛋白、鑭磷光劑等等。抗體也可以用檢測酶進行標記，例如辣根過氧化物酶、P-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等等。在進一步的具體實施方式中，本發明抗體或其部分也可以用生物素或預先設定的能被第二個受體識別的多肽抗原表位(例如亮氨酸拉鏈互補序列、第二個抗體的結合位點、金屬結合結構域、表位標籤)進行標記。在本發明進一步的具體實施方式中，任一抗體或其部分也可以用一個化學基團衍生，例如聚乙二醇(PEG)，甲基或乙基，或者糖基。在某些具體實施方式中，本文描述的抗ALK-1抗體或抗原結合部分連接在一個固體支撐物上。在某些具體實施方式中，本發明任一抗ALK-1抗體的重鏈C端賴氨酸被剪切在本發明的各個具體實施方式中，抗ALK-1抗體的重鏈和輕鏈可任選的包括一個信號序列。本發明也提供藥物組合物，其包括上述任一抗體或其抗原結合部分以及一個藥學可接受的載體。在另一個具體實施方式中，本發明涉及分離的核酸分子，其含有編碼描述的任一抗體或其抗原結合部分的核苷酸序列。在一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有SEQIDN0:1所示的核苷酸序列，該序列編碼重鏈。在另一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有SEQIDNO:3所示的核苷酸序列，該序列編碼輕鏈。在另一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有多聚核苷酸，該多聚核苷酸包括一個克隆的cDNA序列的開放閱讀框，該克隆以ATCC保藏號PTA-6864保存。在另一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有多聚核苷酸，該多聚核苷酸包括一個克隆的cDNA序列的開放閱讀框，該克隆以ATCC保藏號PTA-6865保存。在另一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有SEQIDNO:95或128所示的核苷酸序列，兩段序列各自編碼重鏈。在另一個特定的具體實施方式中，分離的核酸分子含有SEQIDNO:101所示的核苷酸序列，該序列編碼輕鏈。本發明進一步涉及一個栽體，其含有本文描述的任一核酸分子，其中，載體任選地含有表達調控序列，該表達調控序列任選的連接在酸分子上。另一個具體實施方式提供一種宿主細胞，其含有本文描述的任一載體或含有本文描述的任一核酸分子。本發明也提供一種分離的細胞系，其產生本文描述的任一抗體或抗原結合部分或產生任一該抗體或該抗原結合部分的重鏈或輕鏈。在另一個具體實施方式中，本發明涉及一種用於產生抗ALK-1抗體或其抗原結合部分的方法，其包括在合適的條件下培養本文描述的任一宿主細胞或細胞系並回收該抗體或抗原結合部分。本發明也涉及一種非人類轉基因動物或轉基因植物，其含有本文描述的任一核酸，其中非人類轉基因動物或轉基因植物表達該核酸。本發明進一步提供一種用於分離與ALK-1結合的抗體或其抗原結合部分的方法，其包括從本文描述的非人類轉基因動物或轉基因植物中分離抗體的步驟。在另一個具體實施方式中，本發明涉及一抹雜交瘤，其以ATCC保藏號PTA-6808保存。本發明也提供一種方法，用於測定物質是否抑制ALK-1某一特定下遊靶基因Idl的上調，該方法包括用物質接觸表達Idl的首選細胞樣品，並測定Idl表達是否被抑制，其中，與對照細胞樣品相比，Idl表達水平在與該物質接觸的細胞樣品中降低，表明該物質抑制Idl的表達。本發明進一步提供方法，其中，該物質是與ALK-1胞外域結合的抗體。本發明也提供一種用於治療細胞在其所需哺乳動物中的異常生長的方法，其包括給藥步驟，即給予該哺乳動物本文描述的任一抗體或其抗原結合部分或者任一藥物組合物。本發明進一步提供一種方法，用於採用ALK-1結合的抗體或其抗原結合部分治療細胞在其所需哺乳動物中的異常生長，其包括給藥步驟，即將有效量本文描述的任一核酸分子的在允許該核酸分子表達的合適條件下施用至該哺乳動物。在另一個具體實施方式中，治療異常細胞生長的方法包括施用一定量的一種或多種，選自抗腫瘤試劑、抗血管生成試劑、信號轉導抑制劑以及抗增殖試劑的物質，所述量可聯合有效治療該異常細胞生長。在特定的具體實施方式中，該異常細胞生長是瘤性的。本發明也提供一個分離的短尾猴(cynomolgusmonkey)ALK-1蛋白，其具有SEQIDNO:93胺基酸序列。本發明進一步提供一個分離的核酸分子，其編碼具有SEQIDNO:93胺基酸序列的蛋白。本發明進一步提供一個分離的SEQIDNO:94核酸分子。附圖簡述圖1顯示錶位結合數據的例子。注射1.12.1(M29I/D19A)抗體10分鐘，接著再注射1.12.1(M29I/D19A)抗體IO分鐘。這限定了該抗體注射20分鐘的最大反應。同樣測得1.27.1抗體注射20分鐘的最大反應。注射1.12.1(M29I/D19A)抗體IO分鐘，接著注射1.27.1抗體10分鐘。如果總反應跌落在兩個限定的最大反應之間，則兩種抗體一定結合於同一抗原表位。如果總反應超過最大反應的最高值，則兩種抗體一定結合於不同抗原表位。根據例9描述的反向注射順序重複本實驗。圖2表示人和狗ALK-1蛋白的序列比對。圖3表示測定重組1.12.1抗體結合於細胞表面ALK-1的K。。(a)人，(b)狗。1.12.1(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中重鏈29位的曱硫氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。圖4表示ID1滴定的例子，用ID1TaqmanAssay滴定1.12.1抗體變體。1.12.l是mAb1.12.l變體，其分離自雜交瘤。1.12.l(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體，其中重鏈29位的曱疏氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。圖5表示ID1滴定的例子，其中用ID1TaqmanAssay滴定1.12.1抗體序列變體和Fab衍生物。1.12.l是mAb1.12.l變體，其分離自雜交瘤。1.12.l(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。Fab1.12.1(M29I/D19A)是mAb1.12.1(M29I/D19A)的Fab片段，該片段用蛋白酶消化1.12.1(M29I/D19A)IgGl製備得到。圖6表示ALK-1內化，(a)監測殘留在細胞表面的中和抗體，(b)監測殘留的細胞表面受體ALK-1。圖7A表示本發明抗ALK-1抗體的可變區與種系序列的比對。與種系相比的突變是巨大的。下面加劃線的是CDR序列。圖7B表示抗ALK-1抗體1.12.1、1.14.1、1.162.1、1.31.1、4.62.1和4.72.1輕鏈可變區的預測胺基酸序列與人種系A27L序列的比對。圖7C和7D表示抗ALK-1抗體1.12.1、1.151.1、1.162.1、1.8.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1和5.34.1重鏈可變區的預測胺基酸序列與人種系4-31L序列的比對。圖8表示手術後人移植皮膚的解剖切片的組織學(H&E染色)分析的例子。圖9(A)表示人皮膚嵌合體鼠中膠原的三色染色法。圖9(B)表示檢測移植於人包皮嵌合體鼠中的膠原凝膠的人血管。紅人血管。FITC:鼠血管。黃色共染。圖10表示人包皮SCID嵌合鼠中M24met腫瘤的人血管(紅色)和鼠血管(綠色)的免疫螢光圖。圖ll表示人包皮SCID嵌合鼠中M24met腫瘤的人血管(棕色)的IHC圖。圖12表示在人包皮SCID嵌合鼠中，經1.12.1(M29I/D19A)抗體(10mg/kg)處理的M24met胂瘤和對照中人血管(紅色)和鼠血管(綠色)的代表性免疫螢光圖。圖13表示1.12.1(M29I/D19A)抗體在人包皮SCID嵌合鼠模型中劑量依賴性抑制人腫瘤血管生成。圖14表示1.12.1(M29I/D19A)抗體的SCID小鼠血漿濃度。圖15表示1.12.1(M29I/D19A)抗體在M24met包皮SCID嵌合鼠模型中估計的ECs。。0.1nM的人造血清濃度作為100%的對照值用於作圖。這不改變表，見ECs。。發明詳述定義和一般技術除非在此另外定義，本發明使用的科學和技術術語具有所屬領域的普通技術人員所普遍了解的含義。此外，除非上下文另外要求，單數術語應包括複數，而複數術語應包括單數。通常，本文描述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質和的。除非另外指明，本發明的方法和技術通常根據此項技術上已熟知文獻所描述的內容得以完成。例如見SambrookJ.&RussellD..#o/ecw7srC/ac//^..爿Zs6or"or/他/2t/"，3rded.，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(2000)jAusubeletal.，SAo"戶rofoeo/s//7#o7ecu7flrA/o/ofJ》/o7o^7，Wiley,John&Sons,Inc.(2002);HarlowandLane^s//7g爿/7〃6o(Z/wJL260rafor/#a/7i/a/，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1998)和Coliganetal.，化o"屍rofoco7s//戶rofe2'/7*yc/e/7ce，Wiley,John&Sons，Inc.(2003)，將其以引用的方式併入本文中。酶促反應和純化技術根據廠商說明書完成，如所屬領域
技術領域：
中通常所完成的那樣或根據本文描述的內容完成。本文描述的分析化學、合成有機化學、藥物化學和藥劑化學中使用的術語和實驗操作及技術是所屬領域普遍使用和熟知的。以下術語，除非另外指明，應理解成具有以下含義在此使用的術語"ALK-1"是哺乳動物活化素受體樣激酶-1。術語ALK-1包括重組ALK-1和ALK-1的重組嵌合體形式，它們可通過標準重組表達方法製備。在此使用的縮寫"mAb"是單克隆抗體。在此使用的由編號指代的抗體是單克隆抗體(mAb)，其來自同一編號的雜交瘤。例如，單克隆抗體l.12.l來自雜交瘤1.12.1。1.12.l是mAb1.12.l變體，其分離自雜交瘤。1.12.l(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中重鏈29位的曱硫氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。在此使用的"異常細胞生長"，除非另外指明，是不依賴於正常調控機制(例如喪失接觸抑制)的細胞生長。在此使用的術語"毗連"是直接連接在一起的核苷酸序列，不存在插入核苷酸。例如，五核苷酸5'-AAAAA-3'與三核苷酸5'-TTT-3'按5'-AAAAATTT-3'或5'-TTTAAAAA-3'方式連接，當按5'-AAAAACTTT-3'方式連接時，兩者則不是毗連的。在此使用的術語"試劑"表示一種化合物、化合物混合物、生物學大分子、或者來自生物學材料的提取物。在此使用的"減輕"疾病、障礙或狀態表示降低疾病、障礙或狀態症狀的嚴童性。這包括但不限於，與治療前患者或缺乏治療患者的這些相同參數相比，影響患者的腫瘤體積、生長和/或重量、轉移程度或進展等等。在此使用的縮寫"Idl"指ALK-1某一特定下遊靶基因Idl基因，對血管生成很重要。已經有報導，Idl基因在特定胂瘤中通過抑制天然存在的血管生成抑制劑凝血酶敏感素-1(TSP-1)產生而調控血管生成途徑。例如，已經有^L道，Idl基因在黑色素瘤、乳腺、頭頸部、腦、頸部、前列腺、胰臟和睪丸腫瘤中高表達，從而降低TSP-1表達並增加腫瘤血管形成。Volpert，OlgaV.etal，"Idlregulatesangiogenesisthroughtranscriptionalrepressionofthrombospondin-l，"CancerCell,Dec.2002，Vol.2，pp.473-483。在此使用的術語"Smad"是在線蟲到人類的一系列物種中發現的Smad結構域蛋白。這些高度保守的蛋白含有與DNA接觸的N端MH1結構域，並通過下述短連接子區與C端的MH2結構域分開，後者與叉頭相關(FHA)結構域表現出驚人的相似性。FHA和Smad(MH2)結構域共享一個相同結構，由ll條P鏈在兩個片層中的夾層結構和希臘鑰匙拓樸結構組成。Smad蛋白通過TGF-P/活化素/BMP-2/4細胞因子介導從位於細胞表面的受體Ser/Thr蛋白激酶到細胞核內的信號傳遞。Smad蛋白按功能分為三類:受體調控的Smads(R-Smads)，包括Smadl、-2、-3、-5和-8，其中每個都參與配體特異的信號通路；共介導者Smads(co-Smads)，包括Smad4，其與R-Smads相互作用從而參與信號傳遞；抑制性Smads(I-Smads),包括Smad-6和-7，其阻斷R-Smads和Co-Smads的激活，從而負調節信號通路。在此使用的術語"TGF-P"是轉化生長因子-0，其組成一個調控細胞生長和分化的多功能細胞因子家族(TGF-P1-5)。轉化生長因子(TGF)是天然存在的許多特徵性生長因子之一。它在重度聯合免疫缺陷的"SCID，，小鼠中發揮重要作用。許多細胞合成TGF-P，並且基本上都存在該多肽的特異受體。TGF-P調節其它許多多肽生長因子的作用，並決定這些效應的正或負方向。TGF-P是一個腫瘤抑制細胞因子，具有抑制上皮細胞生長的作用。TGF-P也通過引起上皮細胞到間質細胞的轉變作為腫瘤啟動劑發揮作用。TGF-p使參與細胞周期進程的幾個蛋白失活，通過引起細胞周期阻滯在Gl期從而發揮抑制上皮細胞生長的作用。該蛋白作為一個二硫鍵連接的同型二聚體發揮作用。其序列特徵是存在若干C端半胱氨酸殘基，形成排列在結節樣拓樸結構中的閉環二硫鍵連接。已經在某些與電壓門控Ca"通道結合的酶抑制劑和神經毒素結構中發現相似的"胱氨酸結節"排列，但精確的拓樸結構存在差異。TGF-P基因的差異表達表明不同TGF-P種類在體內可有不同的生理學功能。在此使用的術語"TGF-pl"是轉化生長因子P受體1型，是下述含有112個胺基酸殘基的多肽，通過蛋白水解切割而從前體蛋白C端獲得。比較成年鼠組織中TGF-P1的mRNA水平，表明其主要在脾臟、肺和胎盤中表達。TGF-P1被認為在病理學過程中發揮重要作用。在此使用的術語"SCID"是患有重度聯合免疫缺陷的小鼠。在此使用的術語"HUVEC"是人胯靜脈內皮細胞。在此使用的"胺基酸"用其全名、相應的三字母密碼或相應的單字母密碼表示，如下表所示全名天門冬氨酸穀氨酸半胱氨酸門冬醯胺氨谷胺醯胺絲氨酸蘇氨酸甘氨酸丙氨酸纈氨酸亮氨酸異亮氨酸蛋氨酸脯氨酸苯丙氨酸色氨酸.字母密碼AspGluLysArgHisTyrCysAsnGinSerThrGlyAlaValLeulieMetProPheTrp單字母密碼DEKRHYCNQsTGAVIMPFW在此使用的二十個常規胺基酸及其縮寫遵循常規用法。見/邁邁Mo7o^7-J^7/7^6es/s(2ndEdition,E.S.GolubandD.R,Gren，Eds"SinauerAssociates,Sunderland,Mass.(1991))，以引用的方式將其併入本文中。"保守胺基酸置換"指一個胺基酸殘基被另一個帶有具有相似化學性質(例如電荷或疏水性)的R基側鏈的胺基酸殘基置換。通常，一個保守胺基酸置換不會在本質上改變一個蛋白的功能特性。兩個或更多胺基酸序列由於保守置換彼此相同時，需要上調序列同一性百分數或相似程度來校正置換的保守性質。校正方法是所屬領域技術人員已熟知的。例如見Pearson,VeMof/s#oA243:307-31(1994)帶有化學性質相似的R基側鏈胺基酸組例如包括l)脂肪族側鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基側鏈絲氨酸和蘇氨酸；3)含醯胺的側鏈門冬醯胺和穀氨醯胺；4)芳香族側鏈苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)鹼性側鏈賴氨酸、精氨酸和組氨酸；6)酸性側鏈天門冬氨酸和穀氨酸；以及7)含硫側鏈半胱氨酸和蛋氨酸。優選的保守胺基酸置換基團是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴氨酸-精氨酸，丙氨酸-纈氨酸，穀氨醯胺-門冬醯胺，以及天門冬氨酸-穀氨酸。或者，保守置換是指任何變化，所述變化在Gonnetetal.，^c/eice256:1443—45(1992)給出的PAM250log-likelihoodmatrix中具有正值，將上述文獻以引用的方式併入本文中。"適度保守"置換是指在PAM250log-likelihoodmatrix中具有非負值的任何變化。在特定的具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其抗原結合部分的胺基酸置換可以(l)降低蛋白水解的敏感性，(2)降低氧化作用的易感性，(3)改變形成蛋白複合物的結合親和力，以及(4)添加或改變該類似物的其它生物化學特點或功能特性，但仍保留與ALK-l特異結合的能力。類似物可包括天然存在多肽序列的各種置換。例如，單個或多個胺基酸置換，優選保守胺基酸置換，可發生在天然存在的序列中，例如在形成分子間接觸的結構域之外的多肽部分中。胺基酸置換也可以出現在形成分子間接觸的結構域中，改善多肽活性。保守胺基酸置換不應該在本質上改變原序列的結構特徵，例如，置換的胺基酸不應改變原序列中存在的形成免疫球蛋白結合結構域的反向平行P片層，或者破壞原序列特徵性的其它二級結構類型。通常，甘氨酸和脯氨酸不應出現在反向平行P片層中。本領域認識到的多肽二級結構和三級結構的例子描述在StructuresandMolecularPrinciples(Creighton，Ed.，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984))、IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze，eds.GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991))和Thorntonetal.，Nature354:105(1991)中，將其以引用的方式併入本文中。多肽的序列相似性，也指序列同一性，通常用序列分析軟體進行測得。通過指定各種置換、缺失和其它修飾包括保守胺基酸置換為相似性，蛋白分析軟體匹配相似序列。例如，GCG有"Gap"和"Bestfit"程序，其可採用預設參數測定兩個緊密相關多肽之間的序列同源性或序列同一性，例如來自不同生物種類的同源多肽或者野生型蛋白與其突變蛋白之間。例如見GCG6.1版本。多肽序列也可以用FASTA通過預設參數或優選參數進行比較，這是GCG6.1版本中的一個程序。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供搜索序列和查詢序列之間最佳重疊區域的序列比對和序列同一性百分數(Pearson,WeMo^五力z7邊0A183:63—98(1990);Pearson,#e^o&#o7.A/o/.132:185-219(2000))。將本發明的某一序列與含有來自不同生物的大量序列的資料庫進行比較時，另一個優選是算法採用預設參數的電腦程式BLAST,尤其是blastp或tblastn。例如見Altschuletal.,/#0/.215:403-410(1990);Altschuletal.，齒c/e/cJc油to.25:3389-402(1997),以引用的方式併入本文中。用於同源性比較的多肽序列長度一般至少16個胺基酸殘基左右，通常至少20個殘基左右，更普遍的至少24個殘基左右，典型的至少28個殘基左右，以及優選35個以上殘基。在含有來自不同生物的大量序列的資料庫中搜索時，優選胺基酸序列比較。在此使用的術語"類似物"是至少25個胺基酸片段組成的多肽，與天然存在的推測的胺基酸序列片段基本相同，並且至少具有天然存在多肽的特點之一。通常，多肽類似物含有針對天然存在序列的一個保守胺基酸置換(或添加或缺失)。典型的類似物至少20個胺基酸長度，優選50個胺基酸長度或更長，並且經常與天然存在的全長多肽同一長度。多肽類似物通常作為非肽藥物在製藥工業中使用，具有與模版多肽類似的性質。這些類非肽化合物被稱為"肽模擬物"或"擬肽"。Fauchere，/.脅.Zrz^^y.15:29(1986);VeberandFreidingerr房p.392(1985)以及Evansetal./.歸.C力e瓜30:1229(1987)，以引用的方式併入本文中。這些化合物通常在計算機分子模擬的幫助下得以產生。與用於治療的多肽相似具有相似結構的肽模擬物可產生相當的治療或預防效果。通常，擬肽在結構上與一個多肽例子相似(即具有生化性質或藥理學活性的多肽)例如人抗體，但具有一個或多個肽鍵，該肽鍵通過技術上已知的方法被選自由-CH2NH-、-CH2S—、-CH2—CH廣、一CH-CH-(順式和反式)、-COCH廣、-CH(OH)CH廣和CH2SO-組成的群組的鍵取代。用相同類型的D-胺基酸系統取代共有序列的一個或多個胺基酸(例如D-賴氨酸取代L-賴氨酸)，可產生更穩定的多肽。此外，其中含有下述共有序列或下述基本相同的共有序列變體限制性多肽，可用本領域已知的方法獲得(RizoandGieraschWey.A/oc力e瓜61:387(1992)，以引用的方式併入本文中)；例如，添加內在的半胱氨酸殘基，形成分子內二疏鍵，使多肽環化。一個完整的"抗體"或"免疫球蛋白"(Ig)包括通過二石克鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈(50-70kDa左右)和兩條輕(L)鏈(大約2SkDa)，。只存在兩種輕鏈類型入和k。在人類中，兩者相似，但每個抗體只存在一種類型。重鏈類型分為M、5、Y、a或s，並分別規定同種型抗體為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。通常見FundamentalImmunologyCh.7(Paul,W.，ed.，2nded.RavenPress,N.Y.(1989))(整體以引用的方式併入本文中，用於各種目的)。在一個優選的具體實施方式中，抗體是IgG和IgGl、IgG2、IgG3或IgG4亞型。在一個尤為優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體是IgG2亞類。每條重鏈包括一個重鏈可變區(VJ和一個重鏈恆定區(CH)。重鏈恆定區包括三個結構域CH1、CH2和CH3。每條輕鏈包括一個輕鏈可變區(VJ和一個輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包括一個結構域C"在重鏈和輕鏈中，可變區和恆定區通過含12個胺基酸或更多胺基酸的"j"區連接，在重鏈中也包括一個含3個胺基酸或更多胺基酸的"D"區。Vh和VL區可進一步細分為高變異區，被稱為"互補決定區"(CDR)，其被更保守的稱為"框架區"(FR)的區域隔開。毎個Vh和Vl包括3個CDRs和4個FRs，從氨基端到羧基端按以下順序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。每個結構域的胺基酸排列遵循Kabat，iS^we/creso/rc^e//7so/*/咖w2o/og/ca///ztere"(NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD(1987and1991))或者Chothia&Lesk，/.A/o人196:901-917(1987);Chothiaetal.，^^/re342:878-883(1989)的定義。每對重/輕鏈可變區(Vh和Vl)形成與抗原相互作用的抗體結合位點。因此，一個完整的IgG抗體，例如，存在兩個結合位點。除了雙功能或雙特異性抗體，兩個結合位點相同。抗體的恆定區可能介導免疫球蛋白結合於宿主組織或因子，包括免疫系統的多種細胞(例如效應細胞)和經典補體系統的第一組分(CIq)。抗體必須具有足夠的抗原結合多樣性來識別每個可能的病原體(許多V區)，同時維持它們C區的生物學有效性(少數C區)。Ig基因由基因節段隨機拼接在一起，其允許使用多個V區和少數C區。編碼IgH、k和X鏈的基因節段出現在三個不同染色體中。在B細胞的發育過程中，重組酶去除DNA的內含子和某些外顯子，並將節段拼接獲得功能性Ig基因。哺乳動物的Ig基因節段成組排列"可變"(V)、"多樣"(D)、"連接"(j)和"恆定"(C),每個Vk(Vk)節段編碼k鏈V區的前2個CDR和3個FR，外加幾個CDR3的殘基。每個Jk(Jk)節段編碼CDR3剩餘部分和第4個FR。Ck(Ck)編碼k輕鏈的完整C區。編碼人k鏈的DNA包括大約40個功能性Vk(Vk)節段，5個Jk(Jk)節段，和1個Ck(Ck)基因節段，某些基因節段還含有終止密碼子(假基因)。人人(入)鏈DNA含有大約30個功能性V人(V入)節段以及4個JA(J入)和C入(C人)節段的組合。一個特定的J入(J入)始終與它相應的C入(CX)配對，而不像Jk(Jk)均與同一Ck(CK)配對。人H鏈的DNA和含有大約50個功能性Va節段，30個Da節段和6個h節段。重鏈可變區的前2個CDR和3個FR由1編碼。CDR3由Vh的幾個核香酸、整個Dh和部分jh編碼，而FR4由L基因節段的剩餘部分編碼。對於每個同種型的各個重鏈結構域和細胞膜區域，DNA中也存在單基因節段，按其在B細胞中表達的順序進行排列。術語"多肽"包括天然或人工蛋白，蛋白片段以及某一蛋白序列的多肽類似物。多肽可以是單體或多聚體。術語"分離的蛋白"、"分離的多肽"或"分離的抗體"是一個蛋白、多肽或抗體，其來源或衍生物來源(l)不帶有其天然狀態伴隨的天然相關組分，(2)不帶有同一物種的其它蛋白，(3)由不同物種的細胞表達，或者(4)不是天然存在的。因此，一個化學合成多肽或一個在非天然來源細胞形式的細胞系統中合成的多肽，與其天然相關組分"分離"。一個蛋白也可採用所屬領域已知的蛋白純化技術通過分離從本質上去除天然相關成分。分離的抗體例如包括但不限於，用ALK-1親合純化後的抗ALK-1抗體、由細胞系體外合成的抗ALK-1抗體。當至少60%到75%左右的樣品表現出單一種類多肽時，蛋白或多肽是"純淨"、"基本同源"或"基本純化"的。多肽或蛋白可以是單體或聚合體。一個基本純淨的典型多肽或蛋白包括50%、60%、70%、80%或9(^w/w左右的純淨蛋白樣品，95%左右更普遍，優選99%以上。蛋白純度或均一性可通過技術上已知的許多方法指示，例如蛋白樣品經聚丙烯醯胺凝膠電泳，用本領域已知的染料對凝膠染色，觀察單個多肽條帶.為了特定用途，利用HPLC或純化領域中已知的其它方法可獲得更高的解析度。在此使用的術語"多肽片段"是一個多肽，其具有氨基端和/或羧基端缺失，但其剩餘的胺基酸序列與天然存在序列的相應位置相同。在某些具體實施方式中，片段至少5、6、8或10個胺基酸長度。在其它具體實施方式中，片段至少14、至少20、至少50或至少70、80、90、100、150或200個胺基酸長度。在此使用的術語"類似物"或"多肽類似物"是一個多肽，其包括這樣的片段，即該片段與對照胺基酸序列基本相同並且與對照胺基酸序列的功能或活性基本相同。典型地，多肽類似物與對照序列相比包括保守胺基酸置換(或插入或缺失)。類似物至少20或25個胺基酸長度，或至少50、60、70、80、90、100、150或200個胺基酸長度或更長，並且經常與全長多肽一樣長。本發明的某些具體實施方式包括多肽片段或多肽類似物抗體，與種系胺基酸序列相比存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17個置換。抗體或免疫球蛋白分子的類似物或片段可以由所屬領域技術人員根據該說明書內容輕易製備得到。在此使用的術語抗體的"抗原結合部分"(或簡稱"抗體部分")是一個或多個抗體片段，其保留了與抗原特異結合的能力(例如ALK-1或ALK-1ECD)。已經表明，抗體的抗原結合功能可以由全長抗體的片段完成。術語抗體的"抗原結合部分"包含的結合片段例如包括U)Fab片段，由VL、Vh、Cl和Ch1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab02片段，包括兩個Fab片段的二價片段，通過鉸鏈區的二硫鍵連接。(iii)Fd片段，由Vh和CH1結構域組成；(iv)Fv片段，由抗體單臂的Vl和VH結構域組成；(v)dAb片段(Wardetal.，(1989)A^&re341:544-546)，由一個1結構域組成；以及(vi)—個分離的互補決定區(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結構域VL和VH由不同基因編碼，但是，它們可以用重組方法進行連接，通過一個合成接頭使其成為一條蛋白鏈，其中Vl和Vh區配對形成單價分子(已知有單鏈Fv(scFv));例如見Birdetal.Sc/e/ce242:423-426(1988)和Hustonetal.戶roc.#"人Jcad.^$^485:5879-5883(1988))。該單鏈抗體也包含在抗體的"抗原結合部分"術語中。也包括單鏈抗體的其它形式，例如雙體。雙體是二價、雙特異性抗體，其中，Vh和W結構域在一條多肽鏈上表達，通過一個長度不足以使同一鏈的兩個結構域配對的接頭進行連接，從而使結構域與另一條鏈的互補結構域配對，並形成2個抗原結合位點(見Holligeretal./Voc.化〃.JcadSci.USA90:6444-6448(1993);Poljaketal.^ru"i/re2:1121-1123(1994))。另一方面，抗體或其抗原結合部分是更大的免疫球蛋白分子的一部分，所述抗體或抗體片段通過共價鍵或非共價鍵連接一個或多個其它蛋白或多肽而形成。該免疫粘合分子例如包括利用抗生物素蛋白鏈菌素核區獲得scFv四聚體分子((Kipriyanovetal.A/邁a/7j/7〃60i/2'e51a/zdiy/6n0鵬5r6:93-101(1995))以及利用半胱氨酸殘基、標記肽和C端多組氨酸標籤獲得二價scFv分子和生物素化scFv分子(Kipriyanovetal.Mol.Immunol.31:1047-1058(1994))。其它例子包括抗體的一個或多個CDRs以共價或非共價形式整合到分子中，使其成為一個免疫粘合素，該粘合素特異結合於目的抗原例如ALK-1或ALK-1ECD。在這些具體實施方式中，CDR(s)可被整合為更大多肽鏈的一部分，可共價連接於另一多肽鏈，或非共價整合。抗體部分，例如Fab和F(ab')2片段，可分別利用常規技術從完整抗體中製備得到，如番木瓜蛋白酶或胃蛋白酶水解完整抗體。此外，如本文所述抗體、抗體片段和免疫粘合分子可以利用標準重組DNA技術獲得。在此使用的術語"人抗體"表示其可變區和恆定區序列是人序列的任一抗體。該術語包括序列衍生自人基因的抗體，但其已經發生變化，以降低例如可能的免疫原性，增加親和力，去除可能引起不良摺疊的半胱氨酸等等。該術語也包括非人類細胞重組產生的抗體，可能含有人細胞不存在的糖基化。這些抗體可通過多種方法製備，如下所述。在此使用的術語"中和抗體"、"抑制性抗體"或拮抗抗體表示能夠抑制ALK-1/TGF-P-1/Smadl信號通路的抗體。在一個優選的具體實施方式中，抗體抑制ALK-1/TGF-P-1/Smadl信號通路至少20%左右，優選40%，更優選60%，尤其優選80%或85°/。。抗ALK-1人抗體的中和能力或抑制能力可被測定，例如通過它們抑制ALK-1某一特定下遊乾基因Idl上調的能力，如在實施例12中所示；抑制Smadl磷酸化的能力是通過Western印跡，並利用來自LI-CORBiosciences的OdysseyInfrared成像系統來測定的，如在實施例13中所示。在此使用的術語"嵌合抗體"表示一個抗體，其含有兩個或更多不同抗體的結構域。例如，嵌合抗體的一個或多個CDRs來自一個抗ALK-1人抗體。再例如，所有CDRs都來自抗ALK-1人抗體。再例如，來自一個以上抗ALK-1人抗體的CDRs可組合在一個嵌合抗體中。例如，嵌合抗體可包括來自第一個抗ALK-1人抗體輕鏈的CDR1，來自第二個抗ALK-1人抗體輕鏈的CDR2，以及來自第三個抗ALK-1人抗體輕鏈的CDR3,以及來自來自一個或多個其它抗ALK-1抗體重鏈的CDRs。此外，框架區可來自一個抗ALK-1抗體，該抗體被去除了其中的一個或多個CDRs,或者來自一個或多個不同的人抗體。此外，如上所述，嵌合抗體包括一個抗體，其包含來自一個物種以上的種系序列的部分。在某些具體實施方式中，本發明嵌合抗體是一個人源化抗ALK-1抗體。本發明人源化抗ALK-1抗體含有來自本發明一個或多個抗ALK-1人抗體至少一個恆定區部分的一個或多個框架區的胺基酸序列，和/或胺基酸序列，並進一步包括來自一個抗ALK-1非人抗體的序列，例如CDR序列。在此使用的術語"ELISA"指酶聯免疫吸附試驗。該分析方法是所屬領域技術人員已知的。該分析例子可在Vaughan，T.J.etal.，NatureBiotech.14:309-314(1996)中以及在本申請的例2中找到。在此使用的術語"表面等離子共振技術"是一種光學現象，其允許通過檢測生物傳感器基質中蛋白濃度的變化，例如利用BIAC0RE系統(PharmaciaBiosensorAB，Uppsala,SwedenandPiscataway，N.J.)用於實時分析生物特異性反應。更多描述見Jonssonetal.，An/.51:19—26(1993);Jonssonetal.，A/ofecA力i《i/es11:620—627(1991);Jonssonetal.，/.#o/.Weco^".8:125-131(1995)和Johnssonetal.，A/oc力e瓜198:268-277(1991)。術語"親和力"是抗原和抗體之間的吸引力大小。抗體對抗原的內在吸引力通常表示為特定抗體—抗原相互作用的結合平衡常數(Kd)。當K"lmM，尤其<100nM時，表示與抗原特異結合。K。結合平衡常數可例如利用例7和例8描述的BIACORETM系統通過表面離子共振技術測得。術語"k。rf"是特定抗體-抗原相互作用的解離速率常數。k。ff解離速率常數可例如利用例7和例8表示的BIAcore系統通過表面離子共振技術測得。術語"親和力"是抗體與其抗原的功能性結合強度，由抗體效價和親和力同時決定。在此使用的該術語描述了免疫球蛋白多個抗原結合位點導致的親和力增加。在此使用的術語"分子選擇性"是抗體對某個特定抗原的結合親和力高於其它抗原。例如，本發明抗體選擇ALK-1而不是ALK-2到ALK-7,表示該抗體對ALK-1的結合親和力比ALK-2到ALK-7至少高2倍，例如高4倍或IO倍或50倍或IOO倍或更高。結合親和力可利用所屬領域技術人員已知的標準技術測得。術語"抗原表位"包括能與免疫球蛋白或T細胞受體或其它相互作用分子特異結合的任一蛋白。抗原表位的決定因素通常由分子的化學活性表面基團包括胺基酸或糖類或糖基側鏈組成，並且通常具有特異的三維結構特徵以及以及特異的電荷特徵。抗原表位可以是"線性"或"構象"結構。在線性抗原表位中，蛋白和相互作用分子(例如抗體)之間的所有相互作用位點線性排列於蛋白的初級胺基酸序列上。在構象抗原表位中，相互作用位點出現在彼此隔離蛋白的胺基酸殘基上。確定了抗原的一個目的抗原表位後，可以產生針對該抗原表位的抗體，例如利用本發明描述的技術。或者，在發現過程中，抗體的產生和鑑定可能提供目的抗原表位的信息。其後，根據該信息，可竟爭篩選結合於同一抗原表位的抗體。其完成方法是開展交叉竟爭試驗，找到彼此竟爭結合的抗體，例如抗體竟爭結合於抗原。基於其交叉竟爭的高通量"框並"抗體方法描述在國際專利申請WO03/48731中。在此使用的術語"框並"是一種根據其抗原結合特徵對抗體分類的方法。框的指定在一定程度上是隨意的，這取決於所有受試抗體中觀察到的結合模式差異程度。因此，框不一定與其它方法測得的抗原表位相關，並不能用於定義抗原表位。關於抗體，在此使用的術語"竟爭"表示第一個抗體或其抗原結合部分與第二個抗體或其抗原結合部分竟爭結合於抗原，其中，存在第二個抗體時，檢測到第一個抗體與其同種抗原表位的結合降低(與不存在第二個抗體時第一個抗體的結合相比)。或者，同時檢測到，存在第一個抗體時，第二個抗體與其抗原表位的結合降低，這種情形可以出現，但不是必需的。即，第一個抗體可以抑制第二個抗體與其抗原表位結合，而第二個抗體不抑制第一個抗體與其抗原表位結合。但是，當檢測到每個抗體都抑制另一個抗體與其同種抗原或配體結合時，無論程度是否相同、更高或更低，認為抗體彼此"交叉竟爭"結合於它們各自的抗原表位。竟爭和"交叉竟爭"抗體都包括在本發明中。除了竟爭或交叉竟爭的發生機制(例如位阻，構象變化，結合於相同抗原表位或其片段，等等)，技術人員將根據在此提供的內容，了解其包括的竟爭和/或交叉竟爭抗體，並可用於本文描述的方法。在此涉及的術語"多聚核苷酸"表示至少10個鹼基長度的核普酸的聚合形式，可以是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或任一核苷酸類型的寸務飾形式。該術語包括單鏈和雙鏈形式。在此使用的術語"分離的多聚核苷酸"表示基因組、cDNA或合成來源的多聚核苷酸或其組合，由於"分離的多聚核苷酸"的來源(l)不與天然"分離的多聚核苷酸"的多聚核苷酸的一部分或全部結合，(2)與天然狀態時不連接的下述多聚核普酸連接，或者(3)不是天然存在的更大序列的一部分。在此使用的術語"天然存在的核苷酸"包括脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。在此使用的術語"修飾核苷酸"包括帶有修飾或取代糖基的核苷酸等等。在此涉及的術語"寡核苷酸鍵"包括寡核苷酸鍵，例如磷硫醯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、磷醯胺酸酯等等。例如見LaPlancheetal.，A^c厶^c/"14:9081(1986);Stecetal.，J.Am.Chem.Soc.106:6077(1984);Steinetal.，A^/c7.及es.16:3209(1988);Zonetal.，紐/-Ca/7cer"ri/g"e".^36:539(1991);Zonetal.，0//#o"wc/eo〃cfesa/7dJ/2s/0^/wJ戶rac〃ca/y4卯roac力，pp.87-108(F.Eckstein,Ed.，OxfordUniversityPress,OxfordEngland(1991));美國專利5，151，510;Uhlmann和Peyman，C力e邊/cWWeWe^90:543(1990)，其內容以引用的方式併入本文中。需要時，寡核苷酸可包括檢測標籤。"可操作連接的"序列同時包括與目的基因相鄰的表達調控序列，以及遠距離調控目的基因或起反式控制目的基因的表達調控序列。在此使用的術語"表達調控序列"表示多聚核苷酸序列，是影響其連接的編碼序列表達和加工所必需的。表達調控序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子和增強子序列，有效的RNA加工信號例如剪接和多腺苷酸化信號，穩定細胞質mRNA的序列，提高翻譯效率的序歹ij(即Kozak共有序列)，增加蛋白質穩定性的序列，以及需要時，增加蛋白質分泌的序列。調控序列的性質根據不同宿主生物存在差別；在原核生物中，調控序列通常包括啟動子、核糖體結合位點和轉錄終止序列；在真核生物中，調控序列通常包括啟動子和轉錄終止序列。術語"調控序列"至少包括表達和加工必需的所有組分，也可包括有益的其它組分，例如前導序列和融合伴侶序列。在此使用的術語"載體"表示核酸分子，能夠轉運其已經連接的另一核酸。在某些具體實施方式終，載體是一個質粒，即環狀雙鏈DNA，能夠連接其它DNA片段。在某些具體實施方式中，載體是一個病毒載體，其中，其它DNA片段可連接在病毒基因組中。在某些具體實施方式中，載體能夠在其導入的宿主細胞中自主複製(例如具有細菌複製起始區的細菌載體和游離的哺乳動物載體)。在其它具體實施方式中，載體(例如非游離的哺乳動物載體)在導入宿主細胞後能夠整合到宿主細胞的基因組中，從而隨宿主基因組進行複製。此外，特定載體能夠指導它們連接的基因的表達。在此，這些載體指"重組表達載體，，(或簡稱"表達載體")。在此使用的術語"重組宿主細胞"(或簡稱"宿主細胞")表示已經導入重組表達載體的細胞。應了解"重組宿主細胞"和"宿主細胞"不僅表示特定的處理細胞也包括該細胞的子代。由於突變或環境影響，連續傳代可能產生特定修飾，因此，子代實際上可能與母代細胞不同，但仍然屬於在此使用的術語"宿主細胞"範疇。在此使用的術語"種系"指通過生殖細胞從親代傳遞到子代的。種系序列不同於成熟B細胞抗體的編碼核苷酸序列，其在B細胞成熟過程中由於重組和高突變事件發生變化。抗體"利用"特定種系時，最接近的比對。這些抗體與種系序列相比通常發生突變。在核苷酸序列的上下文中，術語"序列同一性百分數"表示兩條序列在最佳對準時相同的殘基。序列同一性比較的長度至少大於9個核苷酸左右，通常至少18個核苷酸左右，更普遍的至少24個核苷酸左右，典型的至少28個核苷酸左右，更典型的至少32個核苷酸左右，優選至少36、48個核苷酸左右或更多。技術上已知有多種不同算法可用於測定核苷酸序列同一性。例如，多聚核苷酸序列可利用FASTA、Gap或Bestfit進行比較，這是WisconsinPackage10.0版本、GeneticsComputerGroup(GCG)、Madison、Wisconsin中的程序。FASTA例如包括FASTA2和FASTA3，提供搜索序列和查詢序列之間最佳重疊區域的序列比對和序列同一性百分數(Pearson,#e^o&^nzy邁0/.183:63—98(1990);Pearson,#0/.A/o/.132:185-219(2000);Pearson,^az戸o/.266:227-258(1996);Pearson,/.#0/.J/o7.276:71-84(1998);以引用的方式併入本文中)。除非另外說明，特定程序或算法採用預設參數。例如，核苷酸序列之間的序列同一性百分數可以利用FASTA及其預設參數(字體大小為6，以及N0PAM因素作為評分字母)或者利用GCG6.l版本提供的Gap及其預設參數進行測定，在此將它們以引用的方式併入本文中。除非另外說明，核苷酸序列的對照包括其互補序列。因此，具有特定序列的核苷酸對照應理解成包括具有其互補序列的互補鏈。術語"基本相似"或"基本序列相似"，在涉及核苷酸或其片段時，表示在具有適當的核苷酸插入或缺失(或其互補鏈)的最佳對準時，核苷酸序列同一性至少為85%左右，優選至少90°/左右，更優選至少95%、96°/。、97%、98%或99%左右，其中它們由任一已知的序列同一性算法測得，例如上述的FASTA、BLAST或Gap。在胺基酸序列上下文中，術語"序列同一性百分數"表示兩條序列在最佳對準時相同的殘基。序列同一性比較的長度至少大於5個胺基酸左右，通常至少20個胺基酸左右，更普遍的至少30個胺基酸左右，典型的至少50個胺基酸左右，更典型的至少IOO個胺基酸左右，尤其典型的至少150、200個胺基酸左右或更多。所屬領域已知有多種不同算法可用於測定胺基酸序列同一性。例如，胺基酸序列利用FASTA、Gap或Bestfit進行比較，這是WisconsinPackage10.0版本、GeneticsComputerGroup(GCG)、Madison、Wisconsin中的程序。用於多肽時，術語"基本相同"或"基本相似"表示兩個胺基酸序列通過GAP或BESTFIT程序利用程序提供的預設空白參數最佳對準時，共享至少70%、75%或80%的序列同一性，優選至少90%或95%的序列同一性，更優選至少97%、98%或99%的序列同一性。在特定的具體實施方式中，存在差異的殘基位置是由於保守胺基酸置換。術語"信號序列"，也稱信號肽、前導肽，指位於蛋白N端的15到30個左右的胺基酸片段，能夠促進蛋白分泌(通過細胞膜)。該前導肽在蛋白分泌時被去除。在此使用的術語"標籤"或"標記的"涉及另一分子整合到抗體中。在一個具體實施方式中，標籤是可檢測的標記，例如整合一個放射標記的胺基酸或者連接一個生物素化多肽，其能被標記的抗生物素蛋白檢測到(例如帶有螢光標記或酶活性的抗生物素蛋白鏈菌素，可通過光學方法或比色法檢測到)。在另一個具體實施方式中，標籤或標記具有治療作用，例如藥物結合物或毒素。糖蛋白和多肽的多種標記方法在技術上已知並能利用。多肽標籤例如包括但不限於放射性同位素或放射性核素(例如3H、"C、15N、35S、9DY、"Tc、mIn、125I、131I)，螢光標籤(例如FITC、羅丹明、鑭磷光劑)，酶標籤(例如辣^L過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶酶)，化學發光標記，生物素基團，預先設定的能被第二個受體識別的多肽抗原表位(例如亮氨酸拉鏈互補序列、第二個抗體的結合位點、金屬結合結構域、附加表位)，磁性試劑例如釓螯合物，毒素例如百日咳毒素、紫杉醇、細胞鬆弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐根鹼、絲裂黴素、表鬼臼毒、鬼臼噻吩戒、長春新鹼、秋水仙鹼、阿黴素、柔紅黴素、二羥基蒽二酮、鹽酸米託蒽醌、光輝黴素、放線菌素D、1-去氫睪丸酮、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤黴素及其類似物或同系物。在某些具體實施方式中，標籤通過不同長度的間隔臂進行連接，以此降低潛在位阻。術語"靈長類"涉及一種靈長類級別的哺乳動物，包括類人猿和原猴，其特徵是四肢進化，鼻子縮短，並有一個大體積的腦部。哺乳動物級別的靈長類包括人、猿、猴、以及原猴，或低等靈長類。"治療有效劑量"涉及治療試劑的給藥劑量，在一定程度上減輕治療疾病的一種或多種症狀。在治療肺瘤時，治療有效劑量涉及其劑量至少有以下一種效應縮小腫瘤體積，抑制(即在一定程度上減緩，更好停止)腫瘤轉移，在一定程度上抑制(即在一定程度上減緩，停止更好)腫瘤生長，在一定程度上減輕(或者，更好消除)腫瘤相關的一種或多種症狀。"處理"，"治療"和"整治"涉及一種方法，減輕或消除生物學紊亂和/或其相關症狀。對於腫瘤，這些術語只表示癌症患者的預期壽命延長，或者疾病的一種或多種症狀減輕。"接觸"涉及本發明的抗體或其抗原結合部分與乾ALK-1或其抗原表位以抗體能夠影響ALK-1生物學活性的方式集合在一起。該"接觸"能夠"在體外"完成，即在試管、培養皿中等等。在試管中，接觸可以只包括一個抗體或其抗原結合部分和ALK-1或其抗原表位，或者可以包括全細胞。細胞也可以停留或生長在細胞培養皿中，並在該環境中接觸抗體或其抗原結合部分。在上下文中，特定抗體或其抗原結合部分影響ALK-1相關疾病的能力，即抗體的IC5。，其可以在體內使用抗體前測定，以用於更複雜的活體。對於體外細胞，存在多種所屬領域技術人員熟知的方法，用於ALK-1和抗體或其抗原結合部分的接觸。縮寫"FACS"指螢光激活細胞分選術。縮寫FACS和流式細胞術可交換使用。螢光標記後可研究細胞的結構和功能。免疫螢光法是使用最廣泛的方法，包括用連接了螢光染料如螢光素和藻紅蛋白的抗體對細胞進行染色。該方法通常用於標記細胞表面的分子，但是抗體可以靶向細胞質。在直接免疫螢光法中，針對某分子的抗體直接連接螢光染料，細胞染色一步完成。在間接免疫螢光法中，第一個抗體不標記，加入第二個與第一個抗體特異結合的螢光偶聯抗體。抗ALK-1抗體本發明關於分離的中和性抗ALK-1單克隆抗體或其抗原結合部分，與靈長類ALK-1結合，優選靈長類ALK-1ECD,更優選人ALK-1ECD。在一個優選的具體實施方式中，本發明關於分離的中和抗體，其為完整的人單克隆抗體或其抗原結合部分。優選地，人抗體是重組的抗ALK-1人抗體，其對ALK-1的親和力比ALK-2到ALK-7強。在某些具體實施方式中，抗ALK-1人抗體通過免疫非人類轉基因動物獲得，例如嚙齒類，其基因組含有人免疫球蛋白的基因，因此轉基因動物產生人抗體。本發明的多個方面涉及這些抗體和抗原結合部分，及其藥物組合物，以及用於獲取這些抗體和抗原結合部分的核普酸，重組表達載體和宿主細胞。利用本發明抗體和抗原結合部分，抑制ALK-1/TGF-p-l/Smadl信號通路或檢測ALK-1(無論是在體內或體外)的方法也包括在本發明中。本發明抗ALK-1抗體可含有一條人k輕鏈或人X輕鏈或其來源的胺基酸序列。在某些含有人k輕鏈的具體實施方式中，輕鏈可變區(VL)利用人A27、A2、Al、A3、B3、B2、Ll或L2Vk基因。在某些具體實施方式中，輕鏈利用人VkLl基因和人Jk4基因；人VkA27基因和人JK5基因或人Jk4基因；人VkB3基因和人JK1基因；人VkL2基因和人Jk3基因；人VkA2基因和人Jkl基因；人VkA3基因和人Jk4基因；人VkAl基因和人Jkl基因；人VkB2基因和人Jk4基因；或者人VkA2基因和人"l基因。在某些具體實施方式中，抗ALK-1抗體的Vl含有一個或多個氛基酸置換、缺失或插入(添加)(與種系VK胺基酸序列相比)。在某些具體實施方式中，抗ALK-1抗體的Vl包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個置換(與種系Vx胺基酸序列相比)。在某些具體實施方式中，種系的一個或多個置換出現在輕鏈CDR區。在某些具體實施方式中，相對於種系的VK胺基酸置換出現在一個或多個相同位置(與相對於種系的出現在此處提供的抗體的一個或多個W中的置換相同，例如見圖7所示)。在某些具體實施方式中，胺基酸變化出現在一個或多個相同位置，但包括一個不同於對照抗體的置換。在某些具體實施方式中，相對於種系的胺基酸置換出現在一個或多個相同位置(抗體1.11.1、1.12.1、1.12.l(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68，1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的任一VL中種系的置換相同)，但是，這些置換可以代表這些位點的保守胺基酸置換(與對照抗體的胺基酸相比)。例如，如果其中一個抗體與種系相比，其某一特定位置發生變化，並穀氨酸化，那麼可以取代該位置的是天門冬氨酸。相似的，在舉例說明的抗體中，如果某一胺基酸置換與種系相比是絲氨酸，那麼可以用蘇氨酸保守置換該位置的絲氨酸。保守胺基酸置換如上所述。在某些具體實施方式中，抗ALK-1抗體含有SEQIDNO:4的輕鏈胺基酸序列。在其它具體實施方式中，輕鏈含有抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29D、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4,24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1的輕鏈胺基酸序列。在某些具體實施方式中，抗ALK-1人抗體輕鏈含有抗體1.12.1(SEQIDNO:8)、1.11.1(SEQIDNO:12)、1.13.1(SEQIDNO:16)、1.14.1(SEQIDNO:20)、1.151.1(SEQIDNO:24)、1.162.1(SEQIDNO:28)、1.183.1(SEQIDNO:32)、1.8.1(SEQIDNO:36)、1.9.1(SEQIDNO:40)、4.10.1(SEQIDNO:44)、4.24.1(SEQIDNO:48)、4.38.1(SEQIDNO:52)、4.58.1(SEQIDNO:56)、4.62.1(SEQIDNO:60)、4.68.1(SEQIDNO:64)、4.72.1(SEQIDNO:68)、5.13.1(SEQIDNO:72)、5.34.1(SEQIDNO:76)、5.53.1(SEQIDNO:80)、5,56.1(SEQIDNO:84)、5.57.1(SEQIDNO:88)或5.59.1(SEQIDNO:92)的1胺基酸序列，或者所述胺基酸序列存在高達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換和/或總計達3個非保守胺基酸置換。在其它具體實施方式中，抗ALK-1抗體輕鏈含有抗體1.27.1、1.29.1或1.31.1的1胺基酸序列。在某些具體實施方式中，輕鏈含有上述任一抗體的從CDR1開始到CDR3結束的胺基酸序列。在某些具體實施方式中，輕鏈可含有CDR1、CDR2和CDR3區的胺基酸序列，其分別獨立選自一個或多個單克隆抗體的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3區，其中單克隆抗體選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1,162.1、1.183.1、1.27.1、1.29,1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34,1、5.53,1、5,56.1、5.57.1、或5.59.1，或者CDR區各自含有小於3個或小於2個的保守胺基酸置換和/或總計3個或更少的非保守胺基酸置換。在特定的具體實施方式中，抗ALK-1抗體輕鏈含有選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4,68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1、或5.59.1的單克隆抗體的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3區胺基酸序列，或者所述CDR區各自含有小於3個或小於2個的保守胺基酸置換和/或總計3個或更少的非保守胺基酸置換。關於重鏈，在某些具體實施方式中，可變區(V)利用人Vh4-31、Vh3-11、VH3-15、VH3-33、VH4-61或VH4-59基因。在某些具體實施方式中，抗ALK-1抗體VH序列含有一個或多個胺基酸置換、缺失或插入(添加)(均為相對於種系Vh氛基酸序列的"突變")。在某些具體實施方式中，重鏈可變區包括種系VH胺基酸序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個突變。在某些具體實施方式中，突變是非保守胺基酸置換，與種系胺基酸序列相比。在某些具體實施方式中，突變出現在重鏈的CDR區。在某些具體實施方式中，重鏈利用人VH3-33基因，人D6-19基因和人Jh3B基因；人Vh4-31,人D6-19基因和人Jh4B基因；人Vh4-61基因，人D6-19基因和人JH4B基因；人VH4-31基因，人D3-3基因和人Jh3B基因；人Vh4-31基因和人Jh3B基因；人Vh4-59基因，人D6-19基因和人JH4B基因；人Vn3-11基因，人D3-22基因和人JH6B基因；人VH3-15基因，人D3-22基因和人Jh4B基因；人Vh4-31基因，人D5-12基因和人Jh6B基因；人Vh4-31基因，人D4-23基因和人Jh4B基因；人Vh4-31基因，人D2-2基因和人Jh5B基因；人Vh4-31基因和人Jh6B基因；人Vh3-15基因，人D1-1基因和人Jh4B基因；人Vh3-11基因，人D6-19基因和人JH6B基因；人VH3-11基因，人D3-10基因和人JH6B基因；或者人Vh3-11基因，人D6-6基因和人Jh6B基因。在某些具體實施方式中，胺基酸置換出現在一個或多個相同位置(與抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D119A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1,183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1的一個或多個VH中種系的置換位置相同)。在其它具體實施方式中，胺基酸變化出現在一個或多個相同位置，但包括一個不同於對照抗體的置換。在某些具體實施方式中，重鏈含有SEQIDNO:2的一條胺基酸序列。在其它具體實施方式中，重鏈含有抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1的重鏈胺基酸序列。在某些具體實施方式中，重鏈含有抗體1.12.1(SEQIDNO:6)、1.11.1(SEQIDNO:10)、1.13.1(SEQIDNO:14)、1.14.1(SEQIDNO:18)、1.151.1(SEQIDNO:22)、1.162.1(SEQIDNO:26)、1.183.1(SEQIDNO:30)、1.8.1(SEQIDNO:34)、1.9.1(SEQIDNO:38)、4.10.1(SEQIDNO:42)、4.24.1(SEQIDNO:46)、4.38.1(SEQIDNO:50)、4.58.1(SEQIDNO:54)、4.62.1(SEQIDNO:58)、4.68.1(SEQIDNO:62)、4.72.1(SEQIDNO:66)、5.13.1(SEQIDNO:70)、5.34.1(SEQIDNO:74)、5.53.1(SEQIDNO:78)、5.56.1(SEQIDNO:82)、5.57.1(SEQIDNO:86)或5.59.1(SEQIDNO:90)的Vh氛基酸序列，或者該1胺基酸序列存在高達1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個保守胺基酸置換和/或總計3個非保守胺基酸置換。在其它具體實施方式中，重鏈含有抗體l.27.1、1.29.1或1.31.1的VH胺基酸序列。在某些具體實施方式中，重鏈含有上述任一抗體從CDR1開始到CDR3結束的胺基酸序列。在某些具體實施方式中，重鏈包括抗體1.11.1、1.12.1、1.12.l(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1的重鏈CDR1、CDR2和CDR3區，或者CDR區各自含有小於8個、小於6個、小於4個或小於3個的保守胺基酸置換和/或總計3個或更少的非保守胺基酸置換。在某些具體實施方式中，重鏈CDR區獨立選自2個或更多抗體的CDR區，所述抗體選自1.11.1、1.12.1、1.12.l(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1,31.1、1.8.1、1.9,1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5,53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1。在另一具體實施方式中，抗體包括上述輕鏈和上述重鏈。在進一步的具體實施方式中，輕鏈CDRs和重鏈CDRs來自相同抗體。在多個具體實施方式中，抗ALK-1抗體含有本文所提供的抗ALK-1抗體的全長的重鏈和全長輕鏈胺基酸序列，Vh和Vl氛基酸序列，重鏈CDR1、CDR2和CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列，或者從CDR1開始到CDR3結束的重鏈胺基酸序列和從CDR1開始到CDR3結束的輕鏈鏈胺基酸序列。胺基酸置換的一種類型是改變抗體的一個或多個可與另一殘基起化學反應的半胱氨酸，所述另一殘基例如，但不限於，丙氨酸或絲氨酸。在一個具體實施方式中，存在非標準半胱氨酸的置換。該置換可出現在可變區的CDR或框架區或考抗體的恆定區。在某些具體實施方式中，半胱氨酸是標準的。胺基酸置換的另一種類型是去除抗體中潛在的蛋白水解位點。該位點可出現在可變區的CDR或框架區或者抗體的恆定區。置換半胱氨酸殘基和去除蛋白水解位點可降低抗體產物的異質性風險從而提高其同質性。胺基酸置換的另一種類型是改變一個或兩個殘基以消除形成潛在的脫醯胺位點的門冬醯胺—甘氨酸配對。在某些具體實施方式中，本發明抗ALK-1抗體重鏈的C端賴氨酸被剪切。在本發明的多個具體實施方式中，抗ALK-1抗體重鏈和輕鏈任選的包括下述信號序列。一方面，本發明提供25個抑制性抗ALK-1人單克隆抗體和產生它們的雜交瘤細胞系。在特定的具體實施方式中，本發明抗體是IgGs,其被指定為1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12,1節I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1。在優選的具體實施方式中，抗ALK-1人抗體是抗體1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M291)、1.12.1(D19A)、1.27.1、1.14.1、1.162.1、1.31.1、4.62.1或4.72.1。抗體識別抗原表面的暴露表位為線性(一級)序列或構象(二級)序列區。BIAcore用於定義功能性抗原表位範疇，並測定抗本發明例舉的ALK-1抗體的抗原表位專一性。表1列出了編碼1.12.1抗體變體全長重鏈和輕鏈以及本發明抗ALK-1抗體的含可變區部分以及相應的推測的胺基酸序列的核酸序列標識符(SEQIDN0)。58表1序列標識符(SEQIDNO)全長含V結構域的片段tableseeoriginaldocumentpage591.12.1(M29I/D19A)涉及抗ALK-1抗體，其包括重鏈單個特定胺基酸突變(29位的曱硫氨酸被異亮氨酸取代)，以及輕鏈單個特定胺基酸突變U9位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)，如實施例4所述。1.12.1涉及mAb1.12.1變體，其分離自雜交瘤。1.12.1(rWT)涉及作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體，描述在實施例3中。本發明進一步提供上述特定抗ALK-1人抗體的重鏈和/或輕鏈變體，其包括一個或多個胺基酸修飾。為了命名變體，第一個字母是天然存在抗體鏈的胺基酸單字母符號，數字表示胺基酸位置(其中第一位是FR1的N端胺基酸)，而第二個字母是變體胺基酸的單字母符號。在進一步的具體實施方式中，本發明包括含有可變區胺基酸序列的抗體，該可變區序列與上述任一抗ALK-1人抗體的可變區胺基酸序列存在80%以上、85%以上、90%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上或99%以上的序列同一性。抗ALK-1抗體的類型和亞型抗ALK-1抗體的類型和亞型可通過本領域已知的任一方法測定。通常，抗體的類型和亞型可利用抗體類型和亞型的特異抗體進行測定。這種抗體可商業購買獲得。類型和亞型可通過ELISA、Western印跡以及其它技術測定。或者，類型和亞型的測定可通過測定抗體重鏈和/或輕鏈部分或全部恆定區的序列，將它們的胺基酸序列與免疫球蛋白不同類型和亞型的已知胺基酸序列進行比較，從而確定抗體的類型和亞型。上述獲得的抗ALK-1抗體類型可相互轉換。在本發明的一方面，編碼Vl或VH的核苷酸分子利用本領域已知的方法分離，因此它不包括Cl或CH的編碼核脊酸序歹'J。"AntibodyEngineering"(Kontermann&Dubel，Eds.，Springer-Verlag，Berlin(2001))。其後，Vl或VH的核編碼苷酸分子被分別連接到Cl或CH的編碼核苷酸序列，來自不同類型的免疫球蛋白分子。這可以利用一個栽體或者含Cl或CH鏈的核苷酸分子完成，如上所述。例如，最初為IgM的抗ALK-l抗體可類型轉換成IgG。此外，類型轉換可用於轉換IgG亞型，例如從IgGl到IgG2。用於產生本發明含目的抗原表位的抗體的優選方法，包括步驟分離抗ALK-1抗體重鏈的編碼核苷酸分子和抗ALK-1抗體輕鏈的編碼核普酸分子，獲得重鏈可變區，連接目的抗原表位的重鏈可變區和重鏈恆定區，在細胞中表達輕鏈和所連接的重鏈，以及回收帶有目的抗原表位的抗ALK-l抗體。在某些具體實施方式中，抗ALK-1抗體是單克隆抗體。抗ALK-160抗體可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。在優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體是IgG以及IgGl、IgG2、IgG3、IgG4亞型。在另一個具體實施方式中，抗體是IgG2亞型。鑑定抗ALK-1抗體識別的ALK-1抗原表位本發明提供抗ALK-1人單克隆抗體，其與ALK-1結合，並竟爭或交叉竟爭和/或結合於相同抗原表位，如(a)選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.l的抗體;(b)含有具有SEQIDN0:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104的VH結構域的胺基酸序列中的任一個重鏈可變區的抗體；(c)含有具有SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127的Vt結構域的胺基酸序列中的任一個輕鏈可變區抗體；(d)同時含有(b)定義的重鏈可變區和(a)定義的輕鏈可變區的抗體。利用本領域已知的方法能夠測定抗體是否結合於相同抗原表位或交叉竟爭結合抗ALK-1抗體。在一個具體實施方式中，允許本發明抗ALK-1抗體在高嚴謹度條件下與ALK-1結合，然後測定受試抗體結合ALK-1的能力，如果受試抗體能夠與抗ALK-1對照抗體同時結合ALK-l，那麼，受試抗體與抗ALK-1對照抗體結合不同抗原表位。但是，如果受試抗體不能同時結合ALK-1，那麼，受試抗體結合相同抗原表位，重疊抗原表位或者抗原表位緊挨於本發明抗ALK-1抗體結合的抗原表位。該實驗可利用ELISA、RIA、BIACORETM或流式細胞術完成。為了測定抗ALK-1抗體是否交叉竟爭另一抗ALK-1抗體，可以利用上述竟爭方法雙向測定，即已知抗體是否阻斷受試抗體，反之亦然。在優選的具體實施方式中，本發明用biacoretm完成。抗ALK-1抗體與ALK-1的結合親和力抗ALK-1抗體或其抗原結合片段與ALK-1的結合親和力(KD)和解離速率(k。ff)可通過本領域已知的方法測定。結合親和力可用ELISA、RIA、流失細胞術或表面等離子共振技術測定，例如BIACORETM。解離速率用表面等離子共振技術測定。優選，結合親和力和解離速率用表面等離子共振技術測定。更優選，結合親和力和解離速率用BIAC0RE測定。利用本領域已知的方法，可以測定抗體是否與抗ALK-1抗體存在大體相同的KD。K。和k。ff的這些測定方法可用於初期篩選階段以及後期優化階段。抗ALK-1抗體抑制ALK-1活性抑制ALK-1結合的抗ALK-1單克隆抗體，可利用多種方法得以鑑定。例如，中和性抗ALK-1抗體通過抑制ALK-1某一特定下遊靶基因Idl上調得以鑑定，描述在例12中。優選抗ALK-l抗體的ICs。不大於500nM、300nM、200nM、150nM、100nM、50nM、20nM、10nM或1nM。也可以通過Western印跡利用OdysseyInfrared成像系統領'J定測定抗ALK-1抗體抑制Smadi磷酸化的能力，如實施例13所述。在多個具體實施方式中，抗ALK-l抗體在該分析中的IC5。不大於250nM、200nM、150nM、100nM、50nM、20nM、10nM或1nM。抗ALK-1抗體抑制血管生成在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其片段在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中，將人黑色素瘤M24met腫瘤細胞通過皮內注射植入，通過IHC分析人CD-31信號，與對照樣品相比，至少40%被抑制，如實施例17所述和表13所示。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其片段在移植了人包皮組織的SCID小鼠中抑制人血管生成，其中，通過膠原通過皮內注射植入，通過IHC分析人CD-31信號，與對照樣品相比，至少50%被抑制，如實施例16中所述和表12所示。物種和分子選擇性在本發明的另一方面，抗ALK-1抗體同時具有種族和分子選擇性。根據本說明書的內容，能夠測定抗ALK-1抗體的種族或分子選擇性，利用本領域已知的方法。例如，用Western印跡，表面等離子共振技術例如BIAcore，ELISA,免疫共沉澱或RIA測定。在某些具體實施方式中，通過流式細胞術測定時，抗ALK-1抗體結合靈長類ALK-1的K。比嚙齒類ALK-1的K。至少小2倍。在進一步的具體實施方式中，靈長類ALK-1的K。比嚙齒類ALK-1的K。至少小3倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少200倍、至少500倍或至少1000倍。在其它具體實施方式中，抗ALK-1抗體對ALK-1的選擇性超過對ALK-2到ALK-7的。在某些具體實施方式中，除ALK-1外，抗ALK-1抗體不存在任何其它蛋白的任何可見特異性結合，優選，抗ALK-1抗體結合於人ALK-1的ECD。抗體和抗體產生細胞系的產生方法在某些具體實施方式中，ALK-l免疫原或抗原是分離的和/或純化的ALK-1。在某些具體實施方式中，ALK-1免疫原是人ALK-1。在優選原是人ALK-1ECD。人ALK-1或其抗原結合片段可根據所屬領域技術人員已知的方法得以製備，或購買自供應商。人ALK-1胺基酸序列和核苷酸序列已知(例如見基因庫編號L17075)。編碼全長ALK-1的ACVRL1基因可以從Invitrogen7^司購買得到，克隆ID為IOH21048。例如，R&DSystems乂>司銷售重組人ALK-1/Fc嵌合體(目錄號370-AL)，製備自ALK-1ECD胺基酸殘基1-118的DNA編碼序列的表達，該DNA通過下述多肽接頭的編碼DNA序列連接於人IgGF。區的DNA編碼序列，在小鼠骨髄瘤細胞系中表達。重組的成熟人ALK-l/Fc嵌合體是二硫鍵連接的同種異形蛋白，氨基端含有Asp22。此外，實施例1中描述了ALK-1ECDHis-Tag蛋白的製備，其用於產生本發明的抗ALK-l抗體產生雜交瘤的形成。在其它具體實施方式中，ALK-1抗原是表達或過表達ALK-1的細胞。在其它具體實施方式中，ALK-1抗原是重組蛋白，表達自酵母、昆蟲細胞、細菌例如Aco//，或者其它重組技術來源。^瘦在某些具體實施方式中，人抗體通過ALK-1抗原免疫非人類轉基因動物得以產生，其基因組中包括部分或全部人免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座。在一個優選的具體實施方式中，非人類動物是XENOMOUSE動物(Abgenix，Inc.,Fremont,CA)。XEN0M0USE⑧小鼠是基因工程小鼠品系，含有人免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因座的大量片段，並且在小鼠抗體產生中是免疫缺陷的。例如見Greenetal.，NatureGenetics7:13-21(1994)和美國專利5，916，771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091，001、6,114,598、6,130,364、6，162，963和6，150，584,以及W091/10741、WO94/02602、WO96/34096、WO96/33735、WO98/16654、W098/24893、W098/50433、W099/45031、W099/53049，WO00/09560和WO00/037504。64另一方面，本發明提供一種方法，從非人類、非小鼠動物中製備抗ALK-1抗體，通過ALK-1抗原免疫含有人免疫球蛋白基因座的非人類轉基因動物。利用上文引用材料描述的方法，可以獲得這些抗體。這些材料所示的方法可以改良，描述在美國專利5，994，619中，以引用的方式併入本文中。美國專利5，994,619描述了來自豬和牛的培養內細胞團(CICM)細胞和細胞系的產生方法，轉基因CICM^胞已經插入異源DNA。CICM轉基因細胞可用於產生克隆化轉基因胚胎、胎和子代。'619專利也描述了轉基因動物的產生方法，能夠把異源DM傳遞給子代。在本發明優選的具體實施方式中，非人類動物是哺乳動物，例如兔、羊、豬、山羊、牛、馬或雞。XEN0M0USE⑧小鼠產生完整人抗體在成人中的所有組成成分，並產生抗原特異的人抗體。在某些具體實施方式中，XEN0M0USE⑧小鼠含有人抗體V基因所有組成成分的80%左右，通過導入酵母人工染色體(YAC)人重鏈基因座和k輕鏈基因座的含大量鹼基的種繫結構片段。在其它具體實施方式中，XEN0M0USE⑧小鼠進一步包括幾乎全部人入輕鏈基因座。見Mendezetal.，NatureGenetics15:146-156(1997)，GreenandJakobovits，J.Exp.Med.188:483-495(1998)和W098/24893，其內容以引用的方式併入本文中。在某些具體實施方式中，含有人免疫球蛋白基因的非人類動物是帶有人免疫球蛋白"微基因座"的動物。在微基因座方法中，通過納入Ig基因座的單基因，模擬外源Ig基因座。因此，一個或多個Vh基因，一個或多個Dh基因，一個或多個Jh基因，一個jli恆定區和第二個恆定區(首選Y恆定區)形成一個構建產物，用於導入動物。方法描述在，尤其是，美國專利5，545，807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,591,669、5,612,205、5,721,367、5,789,215和5,643,763，以引用的方式併入本文中。另一方面，本發明提供用於製備人源化抗ALK-1抗體的方法。在某些具體實施方式中，用ALK-1抗原免疫非人類動物，如下所述，在允許抗體產生的條件下。抗體產生細胞分離自動物，而抗ALK-1目的抗體重鏈和輕鏈的編碼核苷酸從分離的抗體產生細胞中分離得到，或者來自於這些細胞產生的永生化細胞系。這些核苷酸隨後用所屬領域技術人員已知的技術進行改造，在下面進一步描述，以此降低非人類序列數目，即，使抗體人源化以減少人體免疫反應。可以利用本領域已知的4壬一方法免疫動物。例如見HarlowandLane,Antibodies:ALaboratoryManual,NewYork:ColdSpringHarborPress,1990。非人類動物例如小鼠、大鼠、羊、山羊、豬、牛和馬的免疫方法在本領域已知。例如見上迷HarlowandLane和美國專利5,994,619。在優選的具體實施方式中，ALK-l抗原與佐劑一起用於刺激免疫反應。典型的佐劑包括完全或不完全弗氏佐劑，RIBI(胞壁醯二肽)或ISC0M(免疫刺激複合物)。這些佐劑可以保護多肽免於快速分散，將其隔離在局部沉澱中，或者它們含有某些物質，剌激宿主分泌巨噬細胞趨化因子以及免疫系統的其它組分。優選，在給予多肽時，免疫程序包括多肽給予兩次或兩次以上，跨越數周時間。例2舉例說明XEN0M0USE⑧小鼠產生抗ALK-l單克隆抗體的方法。拔琳和戎琳,^:勿^磁^用ALK-l抗原免疫動物後，抗體和/或抗體產生細胞可從動物中獲得。在某些具體實施方式中，含抗ALK-l抗體的血清來自動物，通過取血或處死動物。可以利用來自動物的血清，免疫球蛋白成分可從血清中獲得，或者抗ALK-l抗體可從血清中純化得到。在某些具體實施方式中，抗體產生細胞系製備自從免疫動物分離的細胞。在免疫後，處死動物，淋巴結和/或脾B細胞通過本領域已知的任一方法永生化。細胞的永生化方法包括，但不限於，用致癌基因轉染細胞，用致癌劑或突變劑處理細胞，將細胞與永生化細胞融合例如骨髓瘤細胞，以及使抑癌基因失活。例如見上述HarlowandLane。採用骨髓瘤細胞融合時，優選骨髓瘤細胞不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌細胞系)。永生化細胞用ALK-1或其片段篩選。在優選的具體實施方式中，用酶聯免疫測定法ULISA)或放射免疫測定法進行初期篩選。ELISA篩選例子由W000/37504提供，以引用的方式併入本文中。抗ALK-1抗體產生細胞例如雜交瘤，經過篩選，克隆並進一步篩選，獲得目的特徵，包括生長快，抗體產生多以及目的抗體特徵，在下面進一步描述。雜交瘤可以在同系動物和免疫系統缺陷動物例如棵鼠中體內擴增，或者在培養細胞中體外擴增。雜交瘤的篩選、克隆和擴增方法是所屬領域技術人員已知的。在優選的具體實施方式中，免疫動物是表達人免疫球蛋白基因的非人類動物，脾B細胞與來自同一非人類動物物種的骨髓瘤細胞系融合。在尤為優選的具體實施方式中，免疫動物是XEN0M0USE⑧小鼠，骨髄瘤細胞系是P3-X63-Ag8.653(美國典型培養物保藏中心)，如實施例2所述。因此，在一個具體實施方式中，本發明提供方法用於產生細胞系，其產生針對ALK-1的人單克隆抗體或其片段，包括(a)用ALK-1、ALK-1片段或者表達ALK-1的細胞或組織免疫非人類轉基因動物；(b)使轉基因動物對ALK-1產生免疫反應；(c)從轉基因動物中分離抗體產生細胞；(d)使抗體產生細胞永生化；(e)獲得永生化抗體產生細胞的不同單克隆群體；以及(f)篩選永生化抗體產生細胞，鑑定針對ALK-1的抗體。在另一方面，本發明提供產生抗ALK-1的人抗體的細胞系。在某些具體實施方式中，細胞系是雜交瘤細胞系。在某些具體實施方式中，雜交瘤是鼠雜交瘤，如上所述。在其它具體實施方式中，雜交瘤來自非人類，非小鼠物種，例如大鼠、羊、豬、山羊、牛或馬。在另一個具體實施方式中，雜交瘤是人雜交瘤。在另一個具體實施方式中，轉基因動物用ALK-1抗原進行免疫，原代細胞例如脾B細胞或外周血B細胞分離自免疫的轉基因動物，並鑑定抗原特異目的抗體的產生細胞。提取來自各種不同細胞的多腺苷酸化mRNA，進行反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)，利用退火後連接在可變區序列的正義引物，例如簡併引物，識別人重鏈和輕鏈可變區的大部分或全部FR1區基因，以及退火後連接在恆定區或連接區序列的反義引物。接著，重鏈和輕鏈可變區的cDNAs在適當的任一宿主細胞例如骨髄瘤細胞中擴增並表達，與各自免疫球蛋白的恆定區形成嵌合抗體，例如重鏈和K或入恆定區。見Babcook，J.S.etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-48，1996，以引用的方式併入本文中。接著，可根據在此描述的方法鑑定並分離抗ALK-1抗體。在另一個具體實施方式中，用噬菌體展示技術產生抗體庫，所述噬菌體展示技術其包括具有不同ALK-1親和力的抗體的所有組成成分。為了產生所有組成成分，來自免疫動物的B細胞不需要永生化。當然，原代B細胞可直接作為DNA來源。來自B細胞，例如來自脾臟B細胞的cDNAs混合物，可用於製備表達庫，例如，噬菌體展示庫轉染至Aco//。測定受體細胞對ALK-1的免疫反應性。從這些表達庫中鑑定高親和力人抗體的技術描述於Griffithsetal.，EMBOJ.，13:3245-3260(1994)、Nissimetal.，ibid,pp.692-698以及Griffithsetal.，ibid,12:725-734,以引用的方式併入本文中。最後，鑑定來自表達庫的克隆，其產生預期大小的抗原結合親和力，將負責結合的產物的編碼DM回收並處理，用於標準重組表達。也可以利用先前處理過的核苷酸序列構建噬菌體展示庫，用相似的方式進行篩選。通常，重鏈和輕鏈的編碼cDMs是獨立提供或連接以形成Fv，用於產生噬菌體庫。接著，篩選噬菌體庫，獲得具有最高ALK-1親和力的抗體，並從適當的克隆中回收遺傳物質。更多輪的篩選可增加最初分離的抗體的親和力。製備抗體的核苷酸、載體、宿主細胞和重組方法裙茅^68本發明也包括核苷酸分子，其編碼抗ALK-1抗體或其抗原結合片段。在某些具體實施方式中，不同核苷酸分子編碼抗ALK-1免疫球蛋白的重鏈和輕鏈。在某些具體實施方式中，相同核苷酸分子編碼抗ALK-1免疫球蛋白的重鏈和輕鏈。在某些具體實施方式中，輕鏈可變區(Vl)的編碼核苷酸分子利用人A27、A2、Al、A3、B3、B2、Ll或L2Vk基因，以及人Jk5、JKl、Jk3或Jk4基因。在某些具體實施方式中，核苷酸分子利用人A27Vk基因和人Jk5基因。在其它具體實施方式中，核苷酸分子利用人A2基因和人Jk1基因。在某些具體實施方式中，輕鏈的編碼核苷酸分子編碼含有l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個置換的胺基酸序列，與種系胺基酸序列相比。在某些具體實施方式中，核苷酸分子包括下述核苷酸序列，其編碼的、胺基酸序列與種系Vk和Jk序列相比，含有l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個保守胺基酸置換和/或1、2、或3個非保守胺基酸置換。置換可以在CDR區、框架區或恆定區。在某些具體實施方式中，核苷酸分子編碼下述VL胺基酸序列，其與種系序列相比含有一個或多個突變，其與在1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4,24.1、4,38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1中的任一抗體的VL中發現的來自種系的突變一致。在某些具體實施方式中，與種系序列相比，核苷酸分子編碼含有至少3個胺基酸突變的Vl氛基酸序列，其與1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4,24.1、4,38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53,1、5.56.1、5.57.1或5.59.1中的任一抗體的VL中發現的來自種系的突變一致。在某些具體實施方式中，核苷酸分子包括下述核苷酸序列，其選自包括SEQIDNO:7、11、15、19、23、27、31、35、39、43、47、51、55、59、63、67、71、75、79、83、87、91或126的群組，編碼單克隆抗體1.12.1(M29I/D19A)、1.11.1、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1、5.59.1或1.12.1的Vt胺基酸序列。在某些具體實施方式中，核苷酸分子包括下述核苷酸序列，其編碼SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127其中之一的胺基酸序列。在某些具體實施方式中，核苷酸分子含有SEQIDNO:3或其片段的核苷酸序列。在某些具體實施方式中，核苷酸編碼該抗體l個，2個或3個CDR輕鏈的胺基酸序列。在某些具體實施方式中，該序列編碼抗ALK-1抗體輕鏈從CDR1到CDR3的連續區域。在某些具體實施方式中，核苷酸分子編碼下述VL胺基酸序列，其至少70°/。、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%相同於1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4,38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1中任一抗體的l胺基酸序列，或者SEQIDNO:4的^胺基酸。本發胡的核苷酸分子包括核苷酸，在高嚴謹度條件下可雜交於，如上所述，或者至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%相同於編碼SEQIDNO:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或126^區胺基酸序列的核苷酸，或者含有SEQIDNO:4的Vt區核苷酸序列的核苷在其它優選的具體實施方式中，核苷酸分子編碼重鏈可變區(VH)，其利用人VH4-31、VH3-11、VH3-15、VH3-33、VH4-61或VH4-59基因序列或其來源的序列。在某些具體實施方式中，核苷酸分子利用人Vh4-31基因、DH6-19基因和熱JH4B基因。在某些具體實施方式中，核苷酸分子編碼下述核苷酸序列，其與人V、D或J基因的種系胺基酸序列相比，含有l、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個突變。在某些具體實施方式中，該突變在VH區。在某些具體實施方式中，該突變在CDR區。在某些具體實施方式中，核苷酸分子編碼下述Vh序列，與種系Vh序列相比含有一個或多個突變，與1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1中的任一單克隆抗體的VH的胺基酸突變一致。在某些具體實施方式中，核苷酸編碼至少3個胺基酸突變，與種系序列相比，與上述任一抗體的至少3個胺基酸突變一致。在某些具體實施方式中，核苷酸分子包括下述核苷酸序列，其選自包括SEQIDNO:5、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89或103的組群，編碼單克隆抗體1.12.1(M29I/D19A)、1.11.1、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24,1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1、5.59.1或1.12.1的Vh氛基酸序列。在某些具體實施方式中，核苷酸分子包括下述核苷酸序列，其編碼SEQIDNO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104其中之一的胺基酸序列。在多個優選的具體實施方式中，核普酸分子至少包括SEQIDNO:1或95核苷酸序列的一部分。在某些具體實施方式中，該序列片段編碼VH區，1個CDR3區，3個CDR區，或包括CDR1到CDR3的連續區域。在某些具體實施方式中，核苷酸分子編碼下述VH胺基酸序列，至少70°/。、75%、80°/。、85%、90%、95%、97%、98%或99°/。相同於任一SEQIDNO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104的Va胺基酸序列。本發明的核苷酸分子包括核苷酸，在高嚴謹度條件下可雜交於，如上所述，或者至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%相同於編碼SEQIDNO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、100或104胺基酸序列的核普酸，或者含有SEQIDNO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、95、103、128或129核苷酸序列或其VH區編碼核苷酸序列的核苷酸。在另一個具體實施方式中，核苷酸編碼抗體的一條全長重鏈，抗體選自包括1.11.1、1.12.1、1.12.l(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58,1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的群組，或者含有SEQIDNO:2胺基酸序列的重鏈。此外，核苷酸可含有SEQIDNO:l或95核苷酸序列。編碼抗ALK-1抗體或其部分的重鏈或輕鏈的核苷酸分子可分離自產生該抗體的任一來源。在各個具體實施方式中，核苷酸分子分離自表達抗ALK-1抗體的B細胞或該B細胞來源的永生化細胞，抗體分離自用ALK-l免疫的動物。抗體編碼核苷酸的分離方法在技術上已知。例如見SambrookJ.&RussellD.#o/eci/7arC/o/2'w^Za60r"or7臉/zi/fl/，3rded"ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(2000)。mRNA可被分離並產生cDNA，用於聚合酶鏈反應(PCR)或抗體基因的cDNA克隆。在優選的具體實施方式中，核苷酸分子分離自雜交瘤，其融合了一種非人類轉基因動物的細胞作為其融合伴侶，該細胞產生人免疫球蛋白。在一個尤為優選的具體實施方式中，產生人免疫球蛋白的細胞分離自XEN0M0USE⑧動物。在另一個具體實施方式中，產生人免疫球蛋白的細胞分離自非人類、非小鼠轉基因動物，如上所述。在另一個具體實施方式中，核苷酸分離自非人類、非轉基因動物。分離自非人類、非轉基因動物的核苷酸分子可以被利用，例如使抗體人源化，其包括一條或多條本發明抗ALK-1人抗體的胺基酸序列。在某些具體實施方式中，本發明抗ALK-1抗體一條重鏈的編碼核苷酸可含有下述編碼本發明VH結構域的核普酸序列，連接於任一來源的重鏈恆定區的編碼核普酸序列。相似的，本發明抗ALK-1抗體一條輕鏈的編碼核苷酸分子可含有下述編碼本發明l結構域的核苷酸序列，連接於任一來源的輕鏈恆定區的編碼核苷酸序列。在本發明的另一方面，重鏈可變區(Vh)和/或輕鏈可變區(Vl)的編碼核苷酸分子被"轉換"成全長抗體基因。在一個具體實施方式中，Vh或Vt結構域的編碼核苷酸分子被轉換成全長抗體基因，其分別插入到已經編碼重鏈恆定區(CJ或輕鏈恆定區(CL)的表達載體中，這樣，Vh片段在栽體中連接於Ch片段，和/或W片段在載體中連接於C,片段。在另一個具體實施方式中，VH和/或l結構域的編碼核苷酸分子通過連接被轉換成全長抗體基因，例如，利用標準分子生物學技術，逸接Vh和/或VL結構的編碼核苷酸分子和Ch和/或CL結構域的編碼核苷酸分子。人重鏈和輕鏈免疫球蛋白恆定區基因的核苷酸序列在技術上已知。例如見Kabatetal.,Je《i/e/7cesof戶rofe/zLyo//咖""o/o^7cfl/Zn^e"，5thEd"NIHPubl.No.91-3242，1991。接著，全長重鏈和/或輕鏈的編碼核苷酸分子可在其導入的細胞中表達，並分離抗ALK-1抗體。核苷酸分子可用於重組表達大量抗ALK-1抗體。核苷酸分子也可用於產生嵌合抗體、雙特異性抗體、單鏈抗體、免疫粘合素、雙體、突變的抗體和抗體衍生物，在下面進一步描述。如果核苷酸分子來自非人類、非轉基因動物，核苷酸分子可用於抗體人源化，也如下所述。在另一個具體實施方式中，本發明的核苷酸分子可作為探針或特定抗體序列的PCR引物使用。例如，核苷酸可作為探針用於診斷方法，或者作為PCR引物用於擴增有用的DM片段，尤其用於分離其它編碼抗ALK-1抗體的可變區的核苷酸分子。在某些具體實施方式中，核苷酸分子是寡核苷酸。在某些具體實施方式中，寡核苷酸來自目的抗體重鏈和輕鏈的高可變區。在某些具體實施方式中，寡核苷酸編碼抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5嗎57.1、或5.59.1或其本文描述的變體的一個或多個CDRs的部分或全部。本發明提供載體，其含有本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分重鏈的編碼核苷酸分子。本發明也提供載體，其含有這些抗體或其抗原結合部分輕鏈的編碼核苷酸分子。本發明進一步提供載體，其含有融合蛋白、改良抗體、抗體片段及其探針的編碼核苷酸分子。在某些具體實施方式中，本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分被表達，在表達載體中插入如上所述獲得的部分或全長重鏈和輕鏈的編碼DNAs，因而基因被連接在必需的表達調控序列上，例如轉錄和翻譯調控序列。表達載體包括質粒、逆轉錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒(AAV)、植物病毒例如花椰菜花葉病毒、菸草花葉病毒、粘粒、YACs、EBV來源的游離基因等等。抗體基因被連接入載體，因而載體中的轉擇表達載體和表達調控序列，使其與所用的表達宿主細胞相匹配。抗體輕鏈基因和抗體重鏈基因可插入到獨立的載體中.在優選的具體實施方式中，兩個基因插入到同一表達栽體中。抗體基因通過標準方法插入到表達載體中(例如，連接抗體基因片段和載體的互補限制性酶切位點，或者在不含限制性酶切位點時平端連接)。一個便利的載體可編碼功能完整的人CH或G免疫球蛋白序列，帶有適當的限制性酶切位點，從而使任一Vh或l序列可以輕易插入並表達，如上所述。在這些載體中，剪接通常發生在插入J區的剪接供體位點和位於人c結構域之前的剪接受體位點之間，剪接區也發生在人"外顯子。多腺苷酸化和轉錄終止發生在天然的染色體位點，位於編碼區下遊。重組表達載體也可編碼下述信號肽，促進抗體從宿主細胞分泌。抗體鏈基因可克隆入載體，信號肽連接在免疫球蛋白鏈的氨基端。信號肽可以是一個免疫球蛋白信號肽或一個異源信號肽(即來自非免疫球蛋白的信號肽)。除了抗體鏈基因，本發明重組表達載體攜帶調控序列，調控抗體鏈基因在宿主細胞中表達。所屬領域技術人員應了解表達載體的設計，包括調控序列的選擇依賴於這些因素，例如轉染細胞的選擇，蛋白的預期表達水平等等。哺乳動物宿主細胞表達所優選的調控序列包括可指導蛋白在哺乳動物細胞中高表達的病毒元件，例如啟動子和/或增強子，來自逆轉錄病毒LTRs、細胞巨化病毒(CMV)(例如CMV啟動子/增強子)，猿猴病毒40(SV40)(例如SV40啟動子/增強子)，腺病毒(腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP)),多瘤和強哺乳動物啟動子例如免疫球蛋白和肌動蛋白啟動子。為進一步描述病毒調控元件及其序列，例如見美國專利5，168，062、美國專利4，510，245和美國專利No.4,968,615。抗體在植物中的表達方法，包括啟動子和載體的描述以及植物的轉化，在技術上已知。例如見美國專利6,517,529，以引用的方式併入本文中。多肽在細菌細胞或真菌細胞例如酵母細胞中的表達方法，在^L術上也已知。除了抗體鏈基因和調控序列，本發明重組表達載體可攜帶其它序列，例如調控載體在宿主細胞中複製的序列(例如複製起始區)以及選擇標記基因。選擇標記基因促進篩選已導入載體的宿主細胞(例如見美國專利4，399,216、4，634，665和5,179,017，以引用的方式併入本文中)。例如，選擇標記基因通常在已導入載體的宿主細胞上產生藥物抗性，例如G418，潮黴素或甲氨喋呤。例如，選擇標記包括二氬葉酸還原酶(DHFR)基因(用於dhfr宿主細胞，用曱氨喋呤篩選/擴75增)，neo基因(用G418篩選)，以及穀氨酸合成酶基因。券染it4涼2敘磁和重逸/^f^W才法抗ALK-1抗體的編碼核苷酸分子和含有這些核苷酸的載體可用於轉染適當的哺乳動物、植物、細菌或酵母宿主細胞。在哺乳動物細胞中導入異源多聚核苷酸的方法在技術上已知，包括葡聚糖介導的轉染，磷酸鉤沉澱，聚凝胺介導的轉染，原生質融合，電穿孔，將多聚核苷酸封裝於脂質體，以及直接將DNA注射到細胞核。此外，核苷酸分子可通過病毒載體導入哺乳動物細胞。細胞的轉化方法在技術上已知。例如見美國專利4，399,216、4，912，040、4，740，461和4，959，455，以引用的方式併入本文中。植物細胞的轉化方法在技術上已知，例如農桿菌介導的轉化，生物轉化，直接注射，電穿孔和病毒轉化。細菌和酵母細胞的轉化方法在技術上也已知。可作為表達宿主的哺乳動物細胞系在技術上已知，包括許多來自美國典型培養物保藏中心(ATCC)的永生化細胞系。尤其包括中國倉鼠卵巢(CH0)細胞，NSO細胞，SP2細胞，HEK-293T細胞，293Freestyle細胞(Invitrogen)，NIH-3T3細胞，HeLa細胞，幼倉鼠腎(BHK)細胞，非洲綠猴腎細胞(COS)，人肝細胞癌細胞(例如HepG2)，A549細胞以及許多其它細胞系。具有特殊偏好的細胞系通過測定細胞系是否具有高表達水平進行篩選。其它可以利用的細胞系是昆蟲細胞系，例如Sf9或Sf21細胞。編碼抗體基因的重組表達載體被導入哺乳動物宿主細胞時，抗體被表達，通過培養宿主細胞下述時間足以使抗體在宿主細胞中表達，或者，抗體最好分泌到宿主細胞生長的培養基中。利用標準蛋白純化方法從培養基中回收抗體。植物宿主細胞包括，例如菸草、擬南芥、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯等等。細菌宿主細胞包括Aco/Z和鏈黴菌。酵母宿主細胞包括粟酒裂殖酵母，釀酒酵母和畢赤酵母。此外，本發明抗體在產生細胞系中的表達可通過多種已知技術得以增強。例如，穀氨醯胺合成酶基因表達系統(GS系統)是特定條件下增加表達的通用方法。GS系統部分或完整描述於歐洲專利0216846、0256055、0323997和0338841。不同細胞系或轉基因動物表達的抗體彼此可能存在不同的糖基化。但是，不管抗體的糖基化，由在此提供的核苷酸分子編碼的或含有在此提供的胺基酸序列的所有抗體都屬於本發明。脊Jt厲^參和控參本發明抗ALK-1抗體也可以通過基因工程產生，產生含有免疫球蛋白重鏈和輕鏈目的序列的轉基因動物或植物，並從中產生可回收形式的抗體。與哺乳動物的轉基因產物一起，抗ALK-1抗體可產生於綿羊、牛或其它動物的乳汁中，並從中回收。例如見美國專利5，827，690、5,756,687、5,750,172和5,741，957，以引用的方式併入本文中。在某些具體實施方式中，含有人免疫球蛋白基因座的非人類轉基因動物用ALK-1或其免疫原片段進行免疫，如上所述。在植物中製備抗體的方法描述於，例如美國專利6,046,037和5,959,177，以引用的方式併入本文中。在某些具體實施方式中，非人類轉基因動物或植物被產生，通過標準轉基因技術在動物或植物中導入本發明抗ALK-1抗體的一個或多個編碼核苷酸分子。見上述Hogan和美國專利6,417,429。用於製備轉基因動物的轉基因細胞可以是胚胎幹細胞或體細胞或受精卵。非人類轉基因生物可以是嵌合體、非嵌合體雜合子以及非嵌合體純合子。例如見Hoganetal.，ManipulatingtheMouseEmbryo:ALaboratoryManual2nded.，ColdSpringHarborPress(1999);Jacksonetal.，MouseGeneticsandTransgenics:APracticalApproach,OxfordUniversityPress(2000)以及Pinkert，TransgenicAnimalTechnology:ALaboratoryHandbook.AcademicPress(1999)，全部以引用的方式併入本文中。在某些具體實施方式中，非人類轉基因動物存在一個耙向斷裂和置換，通過一個編碼目的重鏈和/或輕鏈的乾向構建產物。在一個優選的具體實施方式中，轉基因動物包括並表達核苷酸分子，其編碼的重鏈和輕鏈特異結合ALK-1，優選人ALK-1。在某些具體實施方式中，轉基因動物包括核苷酸分子，其編碼改良的抗體例如單鏈抗體、嵌合抗體或人源化抗體。抗ALK-1抗體可在任一轉基因動物中產生。在一個優選的具體實施方式中，非人類動物是小鼠、大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬。非人類轉基因動物在血液、乳汁、尿液、唾液、淚液、粘液和其它體液中表達所編碼的多肽。贈似峙本發明提供一種方法，用於產生抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，其包括步驟合成噬菌體表面人抗體庫，用ALK-1或其抗原結合部分篩選文庫，分離ALK-1結合的噬菌體，並從噬菌體中獲取抗體。例如，一種在噬菌體展示技術中使用的抗體庫製備方法，包括步驟用ALK-1或其免疫原片段免疫含有人免疫球蛋白基因座的非人類動物，產生免疫反應，從免疫動物中選取抗體產生細胞；從選取的細胞中分離本發明抗體重鏈和輕鏈的編碼RNA，將RNA逆轉錄成cDNA，利用引物擴增cDNA，並將cDNA插入到噬菌體展示載體中，從而使抗體在噬菌體上表達。本發明重組抗ALK-1抗體可通過這種方式獲得。本發明重組人抗ALK-1抗體可通過篩選重組組合抗體庫得以分離。優選文庫是scFv噬菌體展示庫，利用製備自從B細胞分離的mRM的人Vl和VHcDNAs產生。製備並篩選該文庫的方法在技術上已知。產生噬菌體展示庫的試劑盒可商業購買得到(例如thePharmaciaRecombinantPhageAntibodySystem,catalogno.27—9400—01和theStratageneSurfZAPphagedisplaykit,catalogno.240612)。也有其它方法和試劑可用於產生並篩選抗體展示庫(例如見美國專利5,223,409;PCTPublicationNos.W092/18619、WO91/17271、W092/20791、W092/15679、W093/01288、W092/01047、WO92/09690;Fuchsetal.，"/o/Tec力/zo/柳9:1370-1372(1991);Hayetal.，〃咖.J/7〃嵐3:81-85(1992);Huseetal.，5We"ce246:1275-1281(1989);McCaffertyetal.，#"wre348:552-554(1990);Griffithsetal.，^#^7/.12:725-734(1993);Hawkinsetal.，/.#o/."/o人226:889-896(1992);Clacksonetal.，iVafi/re352:624—628(1991);Grametal.，^f厶ScA89:3576-3580(1992);Garradetal.，"/o/7"ec力加7og/9:1373-1377(1991);Hoogenboometal.，to.Jc/"es.19:4133-4137(1991)和Barbasetal.，/Voc.Ais〃.Jcad.ScA^S^88:7978-7982(1991)),全部以引用的方式併入本文中。在一個具體實施方式中，為了分離並產生具有目的特徵的抗ALK-1人抗體，一個描述於此的抗ALK-1人抗體首先用於選擇人重鏈和輕鏈序列，具有相似的ALK-1結合活性，釆用PCTPublicationNo.W093/06213描述的抗原表位記憶方法，以引用的方式併入本文中。優選該方法使用的抗體庫是scFv庫，其製備和篩選描述於PCTPublicationNo.W092/01047,McCaffertyetal.，iV"wre348:552—554(1990)和Griffithsetal.，/12:725—734(1993)，全部以引用的方式併入本文中。優選scFv抗體庫篩選用人ALK-1作為抗原。選擇了最初的l和VH結構域後，開展"混合和匹配"實驗，對最初選擇的W和VH片段的不同配對進行篩選，用於結合ALK-1，選擇優選的WVH配對組合。此外，為了進一步改善抗體特性，優選VJVB配對的l和Vh片段可被隨機突交，優選在Vh和/或Vl的CDR3區，用一個類似於體內體細胞突變的過程，其在天然免疫反應中負責抗體的親和力突變。該體外親和力突變可通過擴增VH和^結構域得以完成，利用分別互補於VHCDR3或VLCDR3的PCR引物，通過四個核普酸鹼基在特定位置的隨機混合，引物被"分叉"，因此，合成的PCR產物編碼Vh和Vl片段，在其Vh和/或WCDR3區中已引入隨機突變。這些隨機突變的Vh和VL片段可再次篩選，用於結合ALK-1。79從重組免疫球蛋白展示庫中篩選並分離到一個本發明抗ALK-1後，可從展示庫中(例如從噬菌體基因座中)回收所選抗體的編碼核苷酸，並通過標準重組DNA技術亞克隆入其它表達載體。需要時，可進一步處理核苷酸以產生本發明其它抗體形式，如下所述。為了使組合庫篩選分離得到的重組人抗體表達，抗體的編碼DNA被克隆入重組表達載體並導入哺乳動物宿主細胞，如上所述。在本發明的另一方面，抗體可脫免疫以降低免疫原性，其技術描述於，例如PCTPublicationNos.W098/52976和WO00/34317(以引用的方式併入本文中)。在另一個具體實施方式中，核苷酸分子、載體和宿主細胞可用於獲取突變的抗ALK-1抗體。抗體可突變在重鏈和/或輕鏈的可變區，例如，改變抗體的結合特性。例如，突變可發生在一個或多個CDR區，從而增加或降低抗體對ALK-1的KD，增加或降低K。ff,或者改變抗體的結合特異性。定向誘變技術在技術上已知。例如見上述Sambrook等和Ausubel等。在另一個具體實施方式中，一個或多個突變可發生在與種系相比已經發生變化的胺基酸殘基中，位於單克隆抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1,13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1。突變可發生在可變區的CDR區或框架區，或恆定區。在一個優選的具體實施方式中，突變發生在可變區。在某些具體實施方式中，一個或多個突變發生在與種系相比已經發生變化的胺基酸殘基中，位於可變區的CDR區或框架區，其胺基酸序列為SEQIDN0:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92或127，或其核苷酸序列為SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、95、102或126。在另一個具體實施方式中，框架區被突變，從而使框架區具有相應種系基因的胺基酸序列。突變可發生在框架區或恆定區，增加抗ALK-1抗體的半衰期。例如見PCTPublicationNo.WO00/09560，以引用的方式併入本文中。框架區或恆定區的突變也可用於改變抗體的免疫原性，為另一個分子提供共價或非共價結合位點，或者改變抗體特性例如補體結合、FcR結合以及抗體依賴細胞介導的細胞毒性(ADCC)。根據本發明，單個抗體可突變在可變區的任一個或多個CDRs或框架區或者恆定區。在某些具體實施方式中，1到13個胺基酸突變，包括其中任何一個數字，可發生在突變的抗ALK-1抗體的Vh或Vl結枸域中，與突變前的抗ALK-1抗體相比。在上述任一抗體中，突變可發生在一個或多個CDR區。此外，任何一個突變可以是保守胺基酸突變。在某些具體實施方式中，恆定區存在不超過5、4、3、2或1個胺基酸突變。在另一個具體實施方式中，可製備融合抗體或免疫粘合素，包括本發明抗ALK-1抗體的部分或全部，連接於另一個多肽。在一個優選的具體實施方式中，只有抗ALK-1抗體的可變區連接於多肽。在另一個優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體的VH結構域連接於第一個多肽，而抗ALK-1抗體的VL結構域連接於第二個多肽，與第一個多肽以Vh和l結構域能夠相互作用形成抗原結合位點的方式進行連接。在另一個優選的具體實施方式中，VH結構域通過一個接頭與W結構域隔開，從而使Vh和VL結構域能夠相互作用(見下面的單鏈抗體部分)。其後，Vf接頭-W抗體被連接到目的多肽上。此外，可製備融合抗體，其中，2個(或多個)單鏈抗體相互連接。這可用於製備一條多肽鏈上的單價或多價抗體，或製備雙特異性抗體。為製備單鏈抗體，(scFv)Vh和Vl編碼DM片段連接於另一個片段，其編碼柔性接頭，例如編碼胺基酸序列(Gly4-Ser)3，因而VH和VL序列可被表達為一個連續的單鏈蛋白，其Vl和VH結構域通過柔性接頭連接，例如見Birdetal.，5^/e/7ce242:423-426(1988);Hustonetal.，Aoc.艇/.Jc".85:5879-5883(1988);McCaffertyetal.，A^&re348:552-554(1990)。單鏈抗體可以是單價，在只有一個Vh和VL被利用時；二價，在2個VH和VL被利用時；或多價，在2個以上Vh和Vt被利用時。可製備雙特異性抗體或多價抗體，與ALK-1和另一個分子特異結合。在其它具體實施方式中，可製備其它改良的抗體，利用抗ALK-1抗體編碼核苷酸分子。例如，"k體"(IIIetal.，ProteinEng.10:949-57(1997)),"Minibodies"(Martinetal.,EMBOJ.13:5303-9(1994))，"雙體"(Holligeretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993))或"Janusins"(Trauneckeretal.，EMBOJ.10:3655-3659(1991)andTrauneckeretal.，Int.J.Cancer(Suppl.)7:51-52(1992))可利用標準分子生物學技術根據本說明書的內容得以製備。雙特異性抗體或抗原結合部分可通過多種方法製備，包括融合雜交瘤或連接Fab'片段。例如見Songsivilai&Lachmann，C7//z.腳./zH邁woA79:315-321(1990)，Kostelnyetal.，/./鵬1//20/.148:1547-1553(1992)。此外，雙特異性抗體可以是"雙體"或"Janusins"形式。在某些具體實施方式中，雙特異性抗體結合於ALK-1的2個不同抗原表位。在某些具體實施方式中，雙特異性抗體具有來自單克隆抗體1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5,13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1或5.59.1的第一條重鏈和第一條輕鏈，以及另一條抗體重鏈和輕鏈。在某些具體實施方式中，另一條輕鏈和重鏈也來自上述的一個單克隆抗體，但不同於第一條重鏈和輕鏈。在某些具體實施方式中，製備上述改良的抗體，利用用在此提供的抗ALK-1人單克隆抗體的一個或多個可變區或CDR區。時和^^記時^;謬本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分可被衍生並連接於另一個分子(例如另一個多肽或蛋白)。通常，抗體或其部分通過衍生化或標記被衍生，其ALK-1結合沒有受到不利影響。相應地，本發明抗體或抗體片段同時包括本文描述的抗ALK-1抗體的最初形式和改良形式。例如，本發明抗體或抗體片段功能性連接(通過化學偶合、基因融合、非共價連接或其它)於一個或多個其它分子基團，例如另一個抗體(例如雙特異性抗體或雙體)，檢測試劑，藥用試劑，和/或能夠介導抗體或抗體片段與另一個分子結合的蛋白或多肽(抗生物素蛋白鏈菌素核區或多組氨酸標籤)。一種類型的衍生化抗體產生是通過交叉連接2個或多個抗體(屬於同一類型或不同類型，例如製備雙特異性抗體)。適當的交聯劑是異基雙功能劑，存在2個不同的反應基團，由適當的間隔區隔開(例如m-丁烯醯胺苯曱酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯)，或同基雙功能劑(雙號多白醜亞胺辛二酸酉旨)。這種交聯劑可從PierceChemicalCompany,Rockford，II購買得到。另一種類型的衍生化抗體是標記的抗體。有用的檢測試劑，用於83衍生本發明抗體或抗原結合部分，包括包括螢光化合物，例如螢光素、異硫氰酸螢光素、羅丹明、5-二甲氨基-l-萘磺醯氯、藻紅蛋白、鑭磷光劑等等。抗體也可以用檢測酶進行標記，例如辣根過氧化物酶、P-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等等。抗體用檢測酶進行標記時，其檢測是通過另外加入試劑，被酶利用並產生可以識別的反應產物。例如，存在辣根過氧化物酶時，加入過氧化氫和二氨基聯苯，從而產生可檢測的有色反應產物。抗體也可以用生物素進行標記，通過間接測定卵白素或抗生物素蛋白鏈菌素的結合得以檢測。抗體也可以用預先設定的可被第二個報告分子識別的多肽抗原表位進行標記(例如亮氨酸拉鏈互補序列、第二個抗體的結合位點、金屬結合結構域、附加表位)。在某些具體實施方式中，標籤通過不同長度的間隔臂進行連接，以降低潛在的位阻。抗ALK-1抗體也可以用化學基團衍生，例如聚乙二醇(PEG)，曱基或乙基，或者糖基。這些基團可用於改善抗體的生物學特性，例如增加血清半衰期。藥物組合物和給藥本發明也涉及一種藥物組合物，在哺乳動物包括人類中，治療異常血管生成增加相關的症狀，其包括一定數量的本文描述的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，在治療該症狀中有效，以及一個藥學可接受的載體.本發明抗體和抗原結合部分可組合成適合患者使用的藥物組合物。典型地，藥物組合物包括本發明的一個抗體或抗原結合部分，以及一個藥學可接受的栽體。在此適用的"藥學可接受的載體"表示任一和所有溶劑、分散劑、包衣、抗細菌和真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等，具有生理學相容性。藥學可接受的載體例如有水、鹽、磷酸鹽緩衝生理鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等等及其組合物。許多時候，優選在合劑中包括等滲劑，例如糖，多元醇例如甘露醇、山梨醇，或者氯化鈉。其它藥學可接受的物質例如有溼潤劑或少量輔劑，例如溼潤劑或乳化劑，防腐劑或緩衝劑，可延長貯存期或增加抗體有效性。本發明合劑可以有多種劑型，例如液體、半固體和固體劑型，例如液狀溶液(例如注射劑和不溶性液體)、分散劑或懸浮劑、片劑、丸劑、粉劑、質體和栓劑。優選劑型依賴於預期給藥方式和治療用途。典型優選的合劑劑型是注射劑或不溶性溶液，例如合劑與用於人體被動免疫的劑型相似。優選的給藥方式是胃腸道給藥(例如靜脈注射，皮下注射，腹膜內注射，肌內注射)。在一個優選的具體實施方式中，抗體通過靜脈輸注或注射給予。在另一個具體實施方式中，抗體通過肌內注射或皮下注射給予。注射劑型可以以單位劑量形式儲存，例如在安瓿或多劑量容器中，添加或不添加防腐劑。合劑劑型可以是懸浮劑、溶液或油狀乳化劑或親水性載體，並可含有配方試劑例如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。或者，活性成分是粉末形式，使用前分散在合適的栽體中，例如滅菌無熱原水。治療合劑必須無菌並在生產和儲存條件下穩定。合劑劑型可以是溶液、微乳劑、分散劑、脂質體或其它適於高藥物濃度的有序結構。製備無菌注射溶液，在適當的溶劑中摻入必需劑量的抗ALK-1抗體，以及需要時，同時摻入上面列舉的一種成分或其組合，隨後過濾除菌。通常，製備分散劑，將活性成分摻入無菌載體中，其含有一種基礎分散介質以及必需的上面列舉的其它成分。用無菌粉末製備無菌注射溶液時，優選的製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥，以此產生活性成分和其它任一目的成分的粉末，來自其預先過濾除菌的溶液。維持溶液固有的流動性可通過，例如，利用包衣例如卵磷脂，利用分散劑維持目的顆粒大小，以及利用表面活性劑。注射合劑吸收延長得以產生是通過在合劑中摻入一種可延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鹽和明膠。本發明抗體或抗原片段可通過技術上已知的多種方法給藥，但是，對於許多治療用途，優選的給藥途徑/方式是皮下注射、肌內注射或靜脈注射。技術人員應了解，給藥途徑和/或方式會根據預期目的發生變85化。在特定的具體實施方式中，製備本發明抗體合劑，含有一個可以保護抗體免於快速釋放的載體，例如緩控制劑，包括埋植劑、透皮貼劑，以及微嚢遞藥系統。可以利用可生物降解的生物相容多聚物，例如乙烯醋酸乙烯共聚物、聚酐、聚乙醇酸、膠原、多正酯類和聚乳酸。這些劑型的許多製備方法是所屬領域技術人員已知的。例如見SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystemsJ.R.Robinson,ed.，MarcelDekker，Inc.,NewYork,1978，以引用的方式併入本文中。其它活性組分也可摻入合劑中。在特定的具體實施方式中，本發明的一個抑制性抗ALK-1抗體與一個或多個其它治療試劑共同形成製劑和/或同時給藥。這些試劑包括，但不限於，結合其它乾位的抗體，抗腫瘤試劑、抗血管生成試劑、信號轉導抑制劑、抗增殖試劑、化療試劑或者抑制ALK-1的多肽類似物。這些組合療法可能要求更低劑量的抑制性抗ALK-1抗體和共給藥試劑，從而避免多種單一療法伴隨的可能毒性或併發症。如上所述，除了螯合劑，本發明合劑視情況可能進一步包括一個藥學可接受的抗氧化劑。合適的抗氧化劑包括，但不限於，甲硫氨酸、硫代硫酸鈉、過氧化氫酶和鉑。例如，合劑可能含有甲硫氨酸，其濃度範圍從1mM到100mM左右，尤其在27mM左右。例如，一個親水製劑可以是10mg/mL抗ALK-1抗體，20mM組氨酸，pH5,5，84mg/mL海藻糖二水化物，0.2mg/mL吐溫80，0.05mg/mL乙二胺四乙酸二鈉，0.1mg/mLL-蛋氨酸。本發明合劑可包括"治療有效劑量"或"預防有效劑量"的本發明抗體或抗原結合部分。"治療有效劑量"涉及一個劑量，其劑量經過必需的時間段可有效達到預期的治療目的。抗體或抗原結合部分的治療有效劑量可發生變化，根據如下因素患者的疾病狀態、年齡、性別和體重，以及抗體或抗體片段在患者中引起目的反應的能力。治療有效劑量也可以是抗體或抗原結合部分的治療有利反應優於其毒性或副反應的一個劑量。"預防有效劑量"涉及一個劑量，其劑量經過必需的時間段可有效達到預期的預防目的。通常，由於預防劑量是用於疾病早期階段或之前的患者，預防有效劑量應比治療有效劑量小。可調整給藥方案以獲得最佳目的反應(例如治療或預防反應)。例如，可以單次給藥，在下述時間內分次給藥，或者劑量隨治療情況的緊急程度按比例減少或增加。尤其有利的是，以單元劑量形式形成胃腸道合劑，方便給藥並保證劑量的均一性。在此使用的單元劑量形式涉及物理不連續單元，適合作為單元劑量用於需治療的哺乳動物患者。每個單元含有預先設定的活性組分劑量，與所需的藥學栽體一起用於產生目的治療效應。本發明單元劑量形式的規格決定並直接依賴於(a)希望獲得的抗ALK-1抗體或其部分的獨特性以及特定治療效應或預防效應，以及(b)技術上固有的局限性，將抗體混合用於患者敏感性治療。本發明的一個抗體或抗體片段的治療或預防有效劑量的典型非極限範圍是0.025到50mg/kg，更優選0.1到50mg/kg，更優選0.1-25，0.1到10或0.1到3mg/kg。在某些具體實施方式中，製劑含有5mg/mL抗體，緩衝液為20mM枸櫞酸鈉，pH5.5，140mMNaCl和0.2mg/mL吐溫80。應注意的是，劑量隨需要減輕的症狀的類型和嚴重性不同而發生變化。應進一步了解，對於任一特定患者，特定給藥方案應根據患者需要和患者的專業評價隨時間調整，並指導合劑的用藥，在此給出的劑量範圍只是舉例說明，並不限定合劑的使用或範圍。本發明的另一方面提供試劑盒，含有本發明的一個抗ALK-1抗體或抗原結合部分或者含有該抗體或片段的合劑。除了抗體或合劑以外，試劑盒可包括診斷或治療試劑。試劑盒也可包括診斷或治療方法的使用說明書。在一個優選的具體實施方式中，試劑盒包括抗體或一個含有抗體的合劑以及一種可用於如下所述方法的診斷試劑。在另一個優選的具體實施方式中，試劑盒包括抗體或一個含有抗體的合劑以及一種或多種可用於如下所述方法的診斷試劑。有用的診斷方法抗ALK-1抗體或其抗原結合部分可在診斷方法中使用，在體內或體外檢測生物樣品的ALK-1。例如，抗ALK-1抗體可用於常規免疫分析，包括但不限於ELISA、RIA、流式細胞術、免疫組化、Weatern印跡或免疫共沉澱。本發明抗ALK-1抗體可用於檢測人ALK-1。抗ALK-1抗體也可用於檢測其它靈長類來源的ALK-1，例如短尾猴。本發明提供一種方法，用於檢測生物樣品的ALK-1，其包括用本發明的一個抗ALK-1抗體接觸生物樣品並檢測結合的抗體。在一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體用檢測標籤直接標記。在另一具體實施方式中，抗ALK-1抗體(第一個抗體)未作標記，而能夠結合抗ALK-1抗體的第二個抗體或其它分子被標記。所屬領域技術人員已知的是，選擇第二個抗體，使其特異結合特定物種和種類的第一個抗體。例如，如果抗ALK-l抗體是人IgG，那麼，第二個抗體應為抗人IgG。其它能夠結合於抗體的分子包括，但不限於，蛋白A和蛋白G，兩者均可商業購買得到，例如來自PierceChemicalCo。用於抗體或笫二個抗體的適當標籤已經在前面討論，並包括不同的酶、輔基、螢光物質、發光物質和放射性物質。適當的酶例如包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；適當的輔基絡合物例如包括抗生物素蛋白鏈菌素/生物素和卵白素/生物素；適當的螢光物質例如包括扇形酮、螢光素、異硫氛酸螢光素、羅丹明、dichlorotriazinylaminefluorescein、丹碌酖氯、藻紅蛋白；發光物質例如包括魯米諾；以及適當的放射性物質包括mI，131I，35S在其它具體實施方式中，生物樣品的ALK-1可通過竟爭免疫分析法進行分析，利用標記了可檢測物質的ALK-1標準品以及一個未標記的抗ALK-1抗體。在這個分析中，混合生物樣品、標記的ALK-1標準品和抗ALK-1抗體，並測定與未標記抗體結合的標記ALK-1標準品的含量。生物樣品中ALK-1的含量與結合於未標記抗體的標記ALK-1標88準品的含量具有相反的比例。可以利用上述的免疫分析法，用於各種目的。例如，抗ALK-1抗體可用於檢測培養細胞的ALK-1。在一個優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體用於測定ALK-1的含量，其來自不同化合物處理的細胞。該方法可用於鑑定化合物，其調節ALK-1蛋白水平。根據該方法，一份細胞樣品經受試化合物處理下述時間，而另一份樣品不處理。測定總ALK-1水平時，細胞被裂解，總ALK-1水平通過上述一種免疫分析法進行測定。比較處理細胞和未處理細胞的總ALK-1水平，從而測定受試化合物的影響。一個優選的測定總ALK-1水平的免疫分析法時流式細胞術或免疫組化。方法例如ELISA、RIA、流式細胞術、Western印跡、免疫組化、固有膜蛋白的細胞表面標記以及免疫共沉澱在技術上已知。例如見上述HarlowandLane。此外，免疫分析可放大用於高通量篩選，測定大量化合物是否激活或抑制ALK-1表達。本發明抗ALK-1抗體也可用於測定組織或組織來源細胞的ALK-1水平。在某些具體實施方式中，組織時疾病組織。在該方法的某些具體實施方式中，組織或其活組織來自患者。其後，組織或活組織在免疫分析中用於測定，例如總ALK-1水平或ALK-1的定位，通過上述的方法。本發明抗體也在體內鑑定表達ALK-1的組織和器官。利用本發明抗ALK-l人抗體的一個優點是，它們可以在體內安全使用，給予抗體後不引起本質上的免疫反應，不同於非人類來源的抗體或人源化抗體或嵌合抗體。本方法包括步驟將可檢測的標記抗ALK-1抗體或含有該抗體的合劑用於需要這種診斷試驗的患者，患者接受成象分析從而確定ALK-1表達組織的定位。成象分析在醫學技術上已知，包括但不限於，X射線分析、核磁共振成像(MRI)或計算機斷層攝影術(CT)。抗體可通過任何適合體內成象的試劑進行標記，例如一種造影劑如硫酸鋇，用於X射線分析，或者一種磁性造影劑如釓螯合劑，用於MRI或CT。其它標記試劑包括，但不限於，放射性同位素例如"Tc。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體未作標記，其成象通過給予可以結合抗ALK-1抗體並可檢測的第二個抗體或其它分子。在一個具體實施方式中，活組織來自患者，測定母的組織是否表達ALK-1。有用的治療方法在另一個具體實施方式中，本發明提供一種抑制ALK-1活性的方法，通過給予所需患者一個抗ALK-1抗體。本文描述的任一抗體或其抗原結合部分可作為治療使用。在一個優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體是一個嵌合人抗體或人源化抗體。在另一個優選的具體實施方式中，抗ALK-1抗體是人抗體，而患者是人類患者。或者，患者可以是哺乳動物，其表達的ALK-1與抗ALK-1抗體起交叉反應。抗體可用於其表達的ALK-1與抗ALK-1抗體起交叉反應的非人類哺乳動物(例如短尾猴)，作為獸用，或者用於人疾病動物模型。這種動物模型在評價本發明抗體的治療效果時有用。在另一個具體實施方式中，抗ALK-1抗體或其抗原片段可用於患者，其異常表達高水平ALK-1。抗體可以單次給藥，但更優選多次給藥。給予抗體可以從每天三次到每六個月一次或更長時間間隔。給藥才艮據一個時間表，例如每天三次，每天兩次，每天一次，每兩天一次，每三天一次，每周一次，每兩周一次，每月一次，每兩個月一次，每三個月一次和每六個月一次。抗體也可以通過一個微泵連續給藥。抗體可通過黏膜、口腔、鼻內、吸入、靜脈、皮下、肌內、胃腸道或瘤內途徑給藥。抗體可以給予一次，至少兩次或至少持續下述時間直至症狀被治療、減輕或治癒。只要存在症狀，抗體通常一直給予。抗體通常作為上述藥學合劑的一部分給予。抗體的劑量範圍通常是0.1到100mg/kg，更優選0,5到50mg/kg，更優選1到20mg/kg，尤為優選l到10mg/kg。血清抗體濃度可通過本領域已知的任一方法測定。在一個具體實施方式中，抗體在一個劑型中給予，例如無菌水溶液，其pH範圍從約5.0到約6.5左右，並包括約1mg/ml到約200mg/ml左右的抗體，約1mmol到約100mmol左右的組氨酸緩衝液，約0.01mg/ml到約10mg/ml左右的吐溫80,從約100mmol到約400mmol左右的海藻糖以及約0.01mmol到約1.0mmol左右的EDTA二鈉二水化物。本發明進一步關注，此處的任一合劑可用於患者，其患有血管生成增加相關的症狀或對該症狀敏感("血管原症狀")。可用本發明合劑/方法治療/預防的血管原症狀例子包括，但不限於，癌症(固體和血液)、與年齡相關的黃斑退行性改變(AMD)、發育異常(器官發生)、糖尿病性失明、子宮內膜異位症、眼睛新生血管形成、牛皮癬、類風溼性關節炎(RA)以及皮膚變色(例如血管瘤、毛細血管瘤或單純痣)。例如，本發明涉及眼睛新生血管形成相關症狀的治療或預防方法。眼睛新生血管形成相關的症狀包括，但不限於，糖尿病性視網膜病、與年齡相關的黃斑退行性改變("ARMD，，)、虹膜紅變性青光眼、實質性角膜炎、早產兒視網膜病、局部缺血性視網膜病(例如鐮狀細胞)、病理近視、眼組織胞漿菌病、翼狀胬肉、凹點狀內脈絡膜病變等等。治療異常細胞生長本發明也涉及一種方法，在哺乳動物包括人類中治療異常細胞生長，其包括給予該哺乳動物一個治療有效劑量的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，描述於此，在治療異常細胞生長中有效。在該方法的一個具體實施方式中，異常細胞生長是腫瘤，包括但不限於，間皮瘤、肝膽管瘤(肝和膽管)、原發或繼發CNS瘤、原發或繼發腦癌、肺癌(NSCLC和SCLC)、骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼黑色素瘤、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、胃腸道腫瘤(胃、結腸直腸和十二指腸)、乳腺癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰戶癌、Hodgkin疾病(Hodgkin，sdisease)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、睪丸癌、慢性或急性白血病、慢性髓細胞樣白血病、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或輸尿管癌、腎細胞癌、腎孟癌、中樞神經系統(CNS)贅生物、原發性CNS淋巴瘤、非霍傑金淋巴瘤、脊柱腫瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、腎上腺皮質癌、膽嚢癌、多發性骨髓瘤、膽管癌、纖維肉瘤、成神經細胞瘤、視網膜成神經細胞瘤、或上述一種或多種腫瘤的組合。在本發明的一個優選具體實施方式中，腫瘤選自肺癌(NSCLC和SCLC)、頭頸癌、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、肛區癌、胃癌、乳腺癌、腎癌或輸尿管癌、腎細胞癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅生物、原發性CNS淋巴瘤、非霍金森氏淋巴瘤(nonhodgkins，slymphoma)、脊柱腫瘤或上述一種或多種腫瘤的組合。在本發明另一個優選的具體實施方式中，腫瘤選自肺癌(NSCLC和SCLC)、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、肛區癌或上述一種或多種肺瘤的組合。在該方法的另一個具體實施方式中，該異常細胞生長是一種良性增殖疾病，包括但不限於牛皮縳、良性前列腺肥大或再狹窄(benignprostatichypertrophyorrestinosis)。本發明也涉及一種方法，用於治療哺乳動物異常細胞生長，其包括給予該哺乳動物一定劑量的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，描述於此，與抗腫瘤藥一起可有效治療異常細胞生長，抗腫瘤藥選自包括有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝藥、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶、拓樸異構酶抑制劑、生物效應調節劑、抗體、細胞毒素、抗激素藥和抗雄激素藥的群組。本發明也涉及一種藥物組合物，用於治療哺乳動物包括人類的異常細胞生長，其包括一定劑量的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，描述於此，與藥學可接受的載體和抗肺瘤藥一起可有效治療異常細胞生長，抗腫瘤藥選自包括有絲分裂抑制劑、垸化劑、抗代謝藥、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶、拓樸異構酶抑制劑、生物效應調節劑、抗激素藥和抗雄激素藥的群組。本發明也涉及一種方法，用於治療哺乳動物的高增殖障礙(hyperproliferativedisorder)，其包括給予該哺享L動物治療有效劑量的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分，描述於此，以及一種抗腫瘤藥，選自包括抗增殖藥、激酶抑制劑、血管生成抑制劑、生長因子抑制劑、Cox-I抑制劑、Cox-II抑制劑、有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝藥、嵌入抗生素、生長因子抑制劑、放射線、細胞周期抑制劑、酶、拓樸異構酶抑制劑、生物效應調節劑、抗體、細胞毒素、抗激素藥、他汀類和抗雄激素藥的群組。在本發明的一個具體實施方式中，可與一種抗ALK-1抗體或其抗原結合部分以及本文描述的藥物組合物一起使用的抗腫瘤藥有抗血管生成藥、激酶抑制劑、pan激酶抑制劑或生長因子抑制劑。優選的pan激酶抑制劑包括Sutent(輝瑞，SU-11248)，描述於美國專利6，573，293(輝瑞，NY，USA)。抗血管生成藥包括但不限於以下試劑，例如EGF抑制劑、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑、VEGFR抑制劑、TIE2抑制劑、IGF1R抑制劑、COX-II(環氧合酶11)抑制劑、腿P-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑以及醒P-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑。優選的VEGF抑制劑例如包括阿瓦斯丁(貝伐單抗)，加拿大舊金山南部基因公司的一個抗VEGF單克隆抗體。其它VEGF抑制劑包括CP-547,632(輝瑞，紐約，美國)、阿西替尼(輝瑞；AG-013736)、ZD-6474(阿斯利康)、AEE788(諾華)、AZD-2171、VEGFTrap(Regeneron/安萬特)、瓦他拉尼(也稱PTK-787，ZK-222584:諾華和先靈公司)、Macugen(pegaptaniboctasodium，NX-1838，EYE-001，輝瑞/吉利德/Eyetech)、IM862(Cytranlnc.ofKirkland，華盛頓，USA)和一個來自Ribozyme公司(Boulder，科羅拉多)和開隆(Emeryville,加利福尼亞)的合成核酶angiozyme及其組合。本發明使用的VEGF抑制劑在美國專利6，534，524和6,235,764中公開，兩者以引用的方式併入本文中，用於各種目的。尤其優選的VEGF抑制劑包括CP-547，632、AG13736、瓦他拉尼、Macugen及其組合。其它VEGF抑制劑例如描述於WO99/24440(1999年5月20日公開)、PCT國際專利申請PCT/IB99/00797(1999年5月3日遞交)、W095/21613(1995年8月17日公開)、W099/61422(1999年12月2日公開)、美國專利6，534,524(公開AG13736)、美國專利5，834，504(1998年11月10日公開)、W098/50356(1998年11月12日公開)、美國專利5，883，113(1999年3月16日公開)、美國專利5,886,020(1999年3月23日公開)、美國專利5,792,783(1998年8月11日公開)、美國專利6,653,308(2003年11月25日公開)、W099/10349(1999年3月4日公開)、W097/32856(1997年9月12日公開)、W097/22596(1997年6月26日公開)、W098/54093(1998年12月3日公開)、W098/02438(1998年1月22日公開)、W099/16755(1999年4月8日公開)以及WO98/02437(1998年1月22日公開)，全部以完整引用的方式併入本文中。可與抗體或其抗原結合部分一起使用的本發明其它抗增殖試劑包括法尼基蛋白轉移酶抑制劑和受體酪氨酸激酶PDGFr抑制劑，包括下面的美國專利申請公開和要求的化合物09/221946(1998年12月28日遞交)、09/454058(1999年12月2日遞交)、09/501163(2000年2月9日遞交)、09/539930(2000年3月31日遞交)、09/202796(1997年5月22日遞交)、09/384339(1999年8月26日遞交)以及09/383755(1999年8月26日遞交)，以及下面的美國臨時專利申請公開和要求的化合物60/168207(1999年11月30日遞交)、60/170119(1999年12月10日遞交)、60/177718(2000年1月21日遞交)、60/168217(1999年11月30日遞交)和60/200834(2000年5月1日遞交)。上述每個專利申請和臨時專利申請以完整引用的方式併入本文中，其它PDGRr抑制劑見2001年7月7日公開的WO01/40217和2004年3月11日公開的WO2004/020431，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。優選的PDGFr抑制劑包括輝瑞的CP-868,596及其藥學可接受的鹽。優選的GARF抑制劑包括輝瑞的AG-2037(pelitrexol及其藥學可接受的鹽)。本發明使用的GARF抑制劑在美國專利5,608,082中公開，以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。94可與本文描述的一種抗ALK-1抗體或其抗原結合部分以及本文描述的藥物組合物一起使用的有效COX-II抑制劑例如包括CELEBREX(塞來考昔)、帕瑞考昔、德拉昔布、ABT-963、MK-663(艾託考昔)、COX-189(魯米考昔)、BMS347070、RS57067、NS-398、Bextra(伐地考昔)、帕雷考昔、韋克適(Vioxx)(羅非考昔)、SD-8381、4-曱基-2-(3，4-二曱苯基)-1-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯、2-(4-乙氧苯基)-4-曱基-l-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯、T-614、JTE-522、S-2474、SVT-2016、CT-3、SC-58125和Arcoxia(艾託考昔)。其它COX-II抑制劑見美國專利10/801,446和10/801,429，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。在一個優選的具體實施方式中，抗胂瘤藥是塞來考昔(celecoxib)，見美國專利5,466,823，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。塞來考昔的結構如下所示在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是伐地考昔(volecoxib)，見美國專利5,633,272，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。伐地考昔的結構如下所示在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是帕瑞考昔(parecoxib),見美國專利5,932,598，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。帕瑞考昔的結構如下所示CASNo."9590-42-55,466,82395在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是德拉昔布(deracoxib)，見美國專利5,521,207，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。德拉昔布的結構如下所示潔2tteracoxibCASNo.169590-41-5,521,207在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是SD-8381,見美國專利6，034，256，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。SD-8381的結構如下所示'CF3SD""816,034,256敘*175在一個優選的具體實施方式中，抗肺瘤藥是ABT-963，見國際公開W02002/24719，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。ABT-963的結構如下所示ABT—963恥00/24719H3C02S在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是羅非考昔(rofecoxib):如下所示rofecoxlbCASHo.l錢0U-90-7在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是MK-663(艾託考昔，etoricoxib)，見國際公開WO1998/03484，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。艾託考昔的結構如下所示戰-663CASNo*202409—33-WO9B/03"4:H3在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是COX-189(魯米考昔，Lumiracoxib)，見國際公開WO1999/11605，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。魯米考昔的結構如下所示IiumlracoxibCASNo,226991-20-8Nova^t土sWO99/11605在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是BMS-347070，見美國專利6，180，651，其內容以完整引用的方式併入本文中，用於各種目的。BMS-347070的結構如下所示在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是NS-398(CAS123653-11-2)。NS-398(CAS123653-11-2)的結構如下所示附—398CASNo,123653-11-2在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是RS57067(CAS17932-91-3)。RS-57067(CAS17932-91-3)的結構如下所示:RS57067CASNo,17932-91一3在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是4-甲基-2-(3，4-二甲苯基)-1-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯。4-甲基-2-(3，4-二甲苯基)-1-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯的結構如下所示:在一個優選的具體實施方式中，抗腫瘤藥是2-(4-乙氧苯基)-4-甲基-l-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯。2-(4-乙氧苯基)-4-甲基-1-(4-氨磺醯苯基)-lH-吡咯的結構如下所示在一個優選的具體實施方式中，抗胂瘤藥是美洛昔康Ueloxicam)。美洛昔康的結構如下所示作為抗腫瘤藥與本文描述的本發明抗體和藥物組合物綴合使用的其它有用的抑制劑包括阿司匹林、非甾體抗炎藥(NSAIDS)，其抑制合成前列腺素的酶(環氧合酶I和II)，導致前列腺素水平降低，所述抑制劑包括但不限於雙水楊酸(Amigesic)、雙弗尼酸(Dolobid)、布洛芬(Motrin)、優洛芬(Orudis)、萘普酮(Relafen)、吡羅昔康(Feldene)、甲氧萘丙酸(Aleve、萘普生)、雙氯芬酸(Voltaren)、吲哚美辛(Indocin)、舒林酸(Clinoril)、託美汀(Tolectin)、依託度酸(Lodine)、痛力克(Toradol)、噁丙嗪(Daypro)及其組合。優選的C0X-I抑制劑包括布洛芬(Motrin)、磺胺二甲噁唑、甲氧萘丙酸(Aleve)、巧l哚美辛(Indocin)、萘普酮(Relafen)及其組合。與本文描述的抗ALK-1抗體或其抗原結合部分以及本文描述的其藥物組合物一起使用的乾向試劑包括EGFr抑制劑，例如易瑞沙(吉非替尼，阿斯利康)、特羅凱(埃羅替尼或0SI-774，0SIPharmaceuticalsInc.)、愛必妥(西妥昔單抗，ImclonePharmaceuticals,Inc.)、EMD-7200(默克AG)、ABX-EGF(安進公司和亞伯基因公司(AbgenixInc.))、HR3(古巴政府)、IgA抗體(紐倫堡大學)、TP-38(IVAX)、EGFR融合蛋白、EGF疫苗、抗EGFr免疫脂質體(HermesBiosciencesInc.)及其組合物。優選的EGFr抑制劑包括易瑞沙、愛必妥、特羅凱及其組合。本發明還涉及選自panerb受體抑制劑或ErbB2受體抑制劑的抗腫瘤製劑，例如CP-724，714(輝瑞)、CI-1033(卡奈替尼，輝瑞)、赫賽汀(曲妥單抗，基因公司)、0mitarg(2C4，帕妥珠單抗，基因公司)、TAK-165(武田)、GW-572016(lonafarnib,葛蘭素史克)、GW-282974(葛蘭素史克)、EKB-569(惠氏)、PKI-66(諾華)、dHER2(HER2疫苗，Corixa和葛蘭素史克)、APC8024(HER2疫苗，Dendreon)、抗HER2/認雙特異性抗體(DecofCancerCenter)、B7.her2.IgG3(Agensys)、ASHER2(ResearchInstituteforRadBiology&Medicine)、三功能雙特異性抗體(trifuntionalbispecificantibodies)(慕尼黑大學)和mABAR-209(AronexPharmaceuticalsInc)和mAB2B-1(開隆)及其組合。優選的erb選擇性抗腫瘤製劑包括赫賽汀、TAK-165、CP-724，714、ABX-EGF、HER3及其組合。優選的panerbb受體抑制劑包括GW572016、CI-1033、EKB-569和Omitarg及其組合物。其它erbB2抑制劑包括W098/02434(1998年1月22日公開)、WO99/35146(1999年7月15日公開)、WO99/35132(1999年7月15日公開)、WO98/02437(1998年1月22日公開)、WO97/13760(1997年4月17日公開)、W095/19970(1995年7月27日公開)、美國專利5，587，458(1996年12月24日公開)以及美國專利5，877，305(1999年3月2日公開)，每個都以完整引用的方式併入本文中。本發明其它ErbB2受體抑制劑見美國專利6,465,449和6,284,764以及國際專利申請W02001/98277,每個都以完整引用的方式併入本文中。此外，其它抗腫瘤藥可選自以下試劑索拉非尼(Sorafenib，Onyx99PharmaceuticalsInc.;BAY-43-9006)、才艮那三思(Genasense，安眠酮，Genta)、西妥昔單抗(亞伯基因(Abgenix)/安進)、澤維靈(Zevalin,先靈)、百克沙(Corixa/葛蘭素史克)、阿巴瑞克、力比泰、EPO906(諾華)、迪斯德末萊(discodermolide，XAA-296)、ABT-510(雅培)、新伐司他(Aeterna)、安佐司汀(e證staurin，EliLilly)、考布他汀A4P(Oxigene)、ZD-6126(阿斯利康)、黃酮吡醇(安萬特)、CYC-202(Cyclacel)、AVE-8062(安萬特)、DMXAA(羅氏/Antisoma)，諾拉曲特(Eximias)、特莫達(Temodar，替莫唑胺，先靈葆雅)和來那度胺(Celegene)及其組合。其它抗腫瘤藥可選自以下試劑CyPat(醋酸環丙氯地孕酮)、組氨瑞林(醋酸組氨瑞林)、樸林納西(Plenaixis，阿巴瑞克己酸孕酮)、阿曲生坦(ABT-627)、沙鉑(JM-216)、thalomid(沙利度胺)、賽拉託樸(Theratope)、泰米立芬(Temi1ifene(DPPE))、ABI-007(紫杉醇)、易維特(雷洛昔芬)、阿他美坦(Biomed-777)、昔它司(Xyotax，聚穀氨酸紫杉醇)、貝卡洛汀(Targetin,貝沙羅汀)及其組合。此外，其它抗腫瘤藥可選自以下試劑替雜酮(Trizaone,替拉扎明)、Aposyn(依昔舒林)、新伐司他(AE-941)、賽普林(Ceplene，二鹽酸組胺)、0rathecin(盧比替康)、維魯利秦、Gastrimmune(G17DT)、DX-8951f(exatecanmesylate)、0nconase(豹蛙酶)、BEC2(米妥莫單抗)、Xcytrin(莫特沙芬釓)及其組合物。此外，抗腫瘤藥可選自以下試劑CeaVac(CEA)、三曲沙(NeuTrexin，曲美沙特葡萄糖醛酸)及其組合。其它抗腫瘤藥可選自以下試劑OvaRex(oregovomab)、0sidem(IDM-1)及其組合。其它抗腫瘤藥可選自以下試劑艾得新(Advexin,ING201)、替扎酮(Triazone,替拉扎明)及其組合。其它抗腫瘤藥可選自以下試劑RSR13(乙丙昔羅)、可他拉(Cotara，1311chTNT1/b)、NBI-3001(IL-4)及其組合。其它抗腫瘤藥可選自以下試劑康瓦新(Canvaxin)、GMK疫苗、PEG千擾能A(PEGInteronA)、他索瑞新(Taxoprexin，DHA/paciltaxel)及其組合。優選的其它抗胂瘤藥包括輝瑞的MEK1/2抑制劑PD325901,ArrayBiopharm公司的MEK抑制劑ARRY-142886,BristolMyer公司的CDK2抑制劑BMS-387,032,輝瑞的CDK抑制劑PD0332991和阿斯利康的AXD-5438及其組合。此外，還可以使用mT0R抑制劑，例如CCI-779(惠氏)和雷怕黴素衍生物MDOOl(諾華)和AP-23573(Ariad)，HDAC抑制劑SAHA(默克/AtonPharmaceuticals)及其組合。其它抗腫瘤藥包括aurora2抑制劑VX-680(Vertex)，Chkl/2抑制劑XL844(Exilixis)。下面的細胞毒試劑，例如選自包括表柔比星(Ellence)、多西他奇(泰索帝)、紫杉醇、右雷唑烷(Zinecard)(右丙亞胺)、利妥昔單抗(Rituxan)、甲磺酸伊馬替尼(Gleevec)及其組合中的一種或多種試劑，可與本文描述的一種抗ALK-1抗體或其抗原結合部分以及本文描述的其藥物組合物一起〗吏用。本發明也包括與激素療法一起使用本發明抗體及其抗原結合部分，包括但不限於依西美坦(阿諾新，輝瑞)、亮丙瑞林(Lupron或Leuplin，TAP/雅培/武田)、阿納託司唑(瑞寧得，阿斯利康)、戈舍瑞林(諾雷德，阿斯利康)、度骨化醇、法倔唑、福美坦、枸櫞酸他莫昔芬(它莫西芬，三苯氧胺，阿斯利康)、康士德(阿斯利康)、阿巴瑞克(Praecis)、曲普瑞林(Trelstar)及其組合物。本發明也涉及激素治療試劑，例如抗雌激素藥，包括但不限於氟維司群、託瑞米芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、來曲唑(弗隆，諾華)，抗雄激素藥例如比卡魯胺、氟他米特、米非司酮、尼魯米特、康士德⑧(4'-氰基-3-(4-氟苯磺醯)-2-羥基-2-甲基-3'-(三氟甲基)丙醯苯胺，比卡魯胺)及其組合。此外，本發明提供單獨使用或與一種或多種支持療法產物一起使用的本發明抗體，例如產物選自包括非格司亭(Neupogen)、奧坦西隆(樞復寧)、法安明、普洛克裡特(Procrit)、阿羅西(Aloxi)、艾曼德(Emend)或其組合。尤其優選的細胞毒試劑包括依利替康、愛必妥、易瑞沙、格列味(Gleevec)，泰索帝及其組合物。101下面的拓樸異構酶I抑制劑可作為抗腫瘤藥使用，喜樹鹼、鹽酸依利替康(Camptosar)、厄度他卡芮(edotecarin)、盧比替康(Supergen)、依沙替康(Daiichi)、BN-80915(羅氏)及其組合物。尤其優選的拓樸異構酶II抑制劑包括表柔比星(Ellence)。本發明抗體可與抗腫瘤藥、烷化劑、抗代謝物、抗生素、植物衍生的抗腫瘤藥、喜樹鹼衍生物、酪氨酸激酶抑制劑、其它抗體、幹擾素和/生物效應調節劑一起使用。烷化劑包括但不限於氮芥N-氧化物、環磷醯胺、異磷醯胺、美法倉、白消安、二溴甘露醇、卡波醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫司丁、替莫唑胺、AMD-473、六甲密胺、AP-5280、阿帕奇魁酮(apaziquone)、布如斯利辛(brostallicin)、苯達莫司汀、卡氮芥、磷雌氮芥、福替目丁、葡磷醯胺、異磷醯胺、KW-2170，馬磷醯胺和二溴衛矛醇；鉑類烷化劑包括但不限於順鉑、伯爾定(碳鉑)、依他鉑、洛鉑、奈達鉑、依羅他新(Eloxatin，奧沙利鉑，賽諾菲)或沙柏及其組合物。尤其優選的烷化劑包括依羅他新(奧沙利鉑)。抗代謝物包括但不限於甲氨喋呤、6-巰基嘌呤、巰嘌呤、5-氟脲嘧啶(5-FU)單獨使用或與亞葉酸聯合、喃氟啶、UFT、去氧氟尿苷、嘧福祿、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷十八烷基磷酸鈉(cytarabineocfosfate)、依諾他濱、S-l、力比泰(培美曲塞二鈉，LY231514,MTA)、健擇(吉西他濱，EliLilly)、氟達拉濱、5-氮雜胞苷、卡培他濱、克拉屈濱、克羅拉濱、地西他濱、依洛尼塞、乙細替定(ethynylcytidine)、阿糖胞普(cytosinearalinoside)、羥基脲、TS-1、美法倉、奈拉濱、諾拉曲塞、奧氟酯(ocfosfate)、培美曲塞二鈉、噴司他汀、噴立他索(pelitrexo1)、雷替曲塞、三阿平(triapine)、曲美沙特、阿糖腺苷、長春新鹼、長春瑞濱；或者例如，歐洲專利申請239362給出的一個優選的抗代謝物N-(5-[N-(3，4-二氫-2-甲基-4-氧喹唑啉-6-ylmethyl)-N-甲氨基]-2-蓉吩甲醯)-L-穀氨酸及其組合物。抗生素包括嵌入抗生素，但不限於阿柔比星、放線菌素D、氨柔比星、阿納黴素(annamycin)、阿黴素(adriamycin)、博來黴素、柔紅黴素、阿黴素(doxorubicin)、依沙蘆星、表柔比星、加柔比星、去甲氧正定黴素(idarubicin)、絲裂霹素C、奈莫柔比星、新制癌菌素(neocarzinostatin)、派來黴素、他柔比星、培洛輝素(rebeccamycin)、絲酉旨(stimalamei:)、鏈峻審素、戊柔t匕星、新弗'J癌菌素(zinostatin)及其組合物。長春鹼、紫衫碎l泰索帝)、紫杉醇及其組合物。''細胞毒拓樸異構酶抑制劑包括一種或多種試劑，選自包括阿柔比星、氨萘非特、貝洛替康、喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、氟替康(diflomotecan)、鹽酸伊立替康(Camptosar)、依朵卡新、表柔比星(Ellence)、鬼臼乙叉甙、依沙替康、基馬替康、勒託替康、米託蒽醌、吡柔比星、吡仙蒽醌、盧比替康、索布佐生、SN-38、泰輔泊苷(tafluposide)、託泊替康及其組合物的群組。優選的細胞毒拓樸異構酶抑制劑包括一種或多種試劑，選自包括喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、鹽酸伊立替康(Camptosar)、依朵卡新、表柔比星(Ellence)、鬼臼乙叉戒、SN-38、託泊替康及其組合物的群組。免疫物質包括幹擾素和其它許多免疫增強劑。幹擾素包括幹擾素a，幹擾素ot-2a,幹擾素ot-2b，幹擾素P，幹擾素Y-la，幹擾素y-lb(Actimmune)，或幹擾素y-nl及其組合物。其它試劑包括非格司亭、磨茹多糖、裂襉多糖、熱胱(TheraCys)、烏苯美司、WF-IO、阿地白介素、阿侖單抗、BAM-002,氮烯咪胺、達克珠單抗、地尼白介素、吉姆單抗、奧佐米星、替伊莫單抗、咪喹莫特、來諾拉提、磨茹多糖、黑瘤疫苗(Corixa)、莫拉司亭、0ncoVAX-CL、沙莫司亭、他索納明、替西白介素、胸腺法新、託西莫單抗、維魯利秦、Z-IOO、依帕珠單抗、米妥莫單抗、奧戈伏單抗、派土莫單抗(pemtumomab,Y-muHMFGl)、才卜:i口紋酉旨(Provenge，Dendreon)及其組合物。生物效應調節劑是改變生命體的防禦機制或生物反應的試劑，例如調節組織細胞的存活、生長或分化使其具有抗肺瘤活性。這些試劑包括103及雲芝多糖、蘑菇多糖、西佐喃、溶血性鏈球菌製劑(picibanil)、烏苯美司及其組合物。其它抗腫瘤藥包括阿利維A酸、聚肌胞、阿曲生坦、貝沙羅汀、硼替佐米、波生坦、鈣三醇、依昔舒林、非那司提、福替目丁、伊班膦酸、米替福新、米託蒽醌、I-門冬醯胺酶、曱基千肼、氮烯咪胺、羥基脲、天門冬醯胺酶、噴司他汀、他佐羅汀、Telcyta(TLK-286，TelikInc.)、Velcade(bortemazib，Millenium)、維曱酸及其組合物。其它抗血管生成化合物包括阿昔曲丁、芬維A胺、沙利度胺、唑來膦酸、血管他汀、米替福新(aplidine)、昔蘭普(cilengtide)、考布他汀A-4、內皮他汀、溴氯哌會酮、瑞馬司他、萊莫凡布(removab)、來那度胺、角鯊胺、烏克林(ukrain)、維他新(Vitaxin)及其組合物。鉑類化合物包括但不限於順鉑、碳鉑、奈達鉑、奧沙利鉑及其組合物。喜樹鹼衍生物包括但不限於喜樹鹼、10-羥基喜樹鹼、9-氨基喜樹鹼、依立替康、SN-38、依朵卡新(edotecarin)、託泊替康及其組合物。其它抗腫瘤藥包括米託蒽醌、I-門冬醯胺酶、甲基千肼、氮烯咪胺、羥基脲、噴司他汀、維甲酸及其組合物。也可以利用能夠增強抗腫瘤免疫反應的抗腫瘤藥，例如CTLA-4(細胞毒淋巴細胞抗原4)抗體以及其它能夠阻斷CTLA-4的試劑，例如美國專利6，682，736/〉開的MDX-010(Medarex)和CTLA-4化合物；以及抗增殖試劑例如其它法尼基蛋白轉移酶抑制劑，例如法尼基蛋白轉移酶抑制劑。本發明也可以利用其它特異性CTLA-4抗體，見美國臨時專利申請60/113，647(1998年12月23日提交)、美國專利6，682,736，兩者都以完整引用的方式併入本文中。例如，根據本發明可以使用的另一個抗CTLA-4抗體是泰西立木彈單抗(ticilimumab)，其含有美國專利6，682，736單克隆抗體11.2.1的序列。本發明使用的特異性IGF1R抗體見國際專利申請W02002/053596,以完整引用的方式併入本文中。本發明使用的特異性CD40抗體見國際專利申請WO2003/040170，以完整引用的方式併入本文中。基因治療試劑也可作為抗腫瘤藥使用，例如TNFerade(GeneVec)，對反射療法產生反應，表達TNFot。在本發明的一個具體實施方式中，他汀類可與本文描述的一種抗ALK-1抗體或其抗原結合部分及其藥物組合物一起使用。他汀類(服G-CoA還原酶抑制劑)可選自包括阿伐他汀(立普妥，輝瑞)、帕伐他汀(普拉固，百時美施貴寶)、洛伐他汀(Mevacor，默克)、辛伐他汀(Zocor，默克)、氟伐地汀(來適可，諾華)、西立伐他汀(拜可，拜耳)、羅蘇伐他汀(冠脂妥，阿斯利康)、洛伐他汀和煙酸(Advicor，KosPharmaceuticals)，衍生物及其組合物的群糹且。在一個優選的具體實施方式中，他汀類選自包括阿伐他汀和洛伐他汀，衍生物及其組合物的群組。其它作為抗腫瘤藥使用的試劑包括卡度特(Caduet)。抗ALK-1抗體或抗原結合部分與至少一種其它治療試劑聯合用藥治療本文描述的高增殖紊亂或異常細胞生長，對於其中任何一種方法，抗ALK-1抗體可與另一種抗腫瘤藥偶聯或衍生。這種治療試劑也可以獨立給藥，或者以非衍生或非偶聯的形式給藥。當這種治療試劑不衍生或不偶聯於抗體時，它可以與抗體在同一個製劑中給予，或者以一個獨立的製劑給予。治療視力減退本發明的化合物和包括它們的藥物組合物可用於治療嚴重的視力減退，來自與年齡相關的黃斑退行性改變和影響眼睛後段的其它疾病，例如脈絡膜新生血管、糖尿病性視網膜病、青光眼、色素性視網膜炎等等。例如，本發明合劑可在眼睛後部形成藥物儲備，並且，除了本文描105述的一種或多種非活性輔料以外，可包括一種或多種藥用活性試劑。用於本發明合劑的藥用活性試劑例如包括，但不限於，抗生素、抗病毒藥和抗真菌藥；抗過敏反應試劑和肥大細胞穩定劑(antiallergenicagentsandmastcellstabilizers);齒^—非齒#4^1藥(例:i口，帕芬胺)；環氧合酶抑制劑，包括但不限於CoxI和CoxII抑制劑；抗感染藥和抗炎藥聯用；解充血藥(減充血劑)；抗青光眼試劑，包括但不限於腎上腺素能藥物、P-腎上腺素能阻滯劑、ot-腎上腺素能激動劑、擬副交感神經藥、膽鹼酯酶抑制劑、碳酸酐酶抑制劑和前列腺素；抗青光眼試劑聯用；抗氧化劑；營養補充；治療嚢樣黃斑水腫的藥物，包括但不限於非甾體抗炎藥；治療與年齡相關的黃斑退行性改變(AMD)(包括滲出性(溼)和非滲出性(千))的藥物，包括但不限於血管生成抑制劑，例如抑制蛋白激酶受體的血管生成抑制劑，包括屬於VEGF受體的蛋白激酶受體；以及營養補充；治療皰滲感染和CMV眼部感染的藥物；治療增殖性玻璃體視網膜病變的藥物，包括但不限於抗代謝藥和纖溶劑；創傷調節劑(woundmodulatingagents),包括但不限於生長因子；抗代謝藥；神經保護藥物，包括但不限於依利羅地；以及治療後段26疾病或症狀的血管生成抑制甾醇，包括但不限於與年齡相關的黃斑退行性改變(AMD)(包括滲出性(溼)和非滲出性(幹))、脈絡膜新生血管、視網膜病、視網膜炎、眼色素層炎(uveitis)、黃斑水腫和青光眼。這些血管生成抑制甾醇(angiostaticsteroids)的其它信息見美國專利5，679，666和5，770，592。治療嚢樣黃斑水肺的一個非甾體抗炎藥是奈帕芬胺。眼睛用藥時，本發明的化合物通過一個藥學可接受的眼部載體輸送，因而，化合物在眼睛表面停留足夠長的時間使化合物滲透角膜和/或鞏膜以及眼睛的內部結構，例如包括前房、後房、玻璃體、房水、玻璃體液、角膜、虹膜/睫毛(iris/ciliary's)、晶狀體、脈絡膜/視網膜和鞏膜。藥學可接受的眼部載體可以是軟骨、植物油或膠嚢材料。本發明的化合物也可以直接注射入玻璃體液或房水。此外，化合物也可以通過已知的可接受的方法給予，例如眼球下注射和/或結膜下注射。在眼部技術上已知的是，斑點主要包括在視網膜錐中，並位於視網膜最大視力區。眼球嚢或眼球筋膜排列在鞏膜上。結膜覆蓋眼球的一小片區域，從眼球後部到膜(limbus，球結膜)，並分別向上(上面的結膜官窿)和向下(下面的結膜官窿)摺疊，從而覆蓋上眼瞼和下眼瞼的內部區域。結膜排列在眼球嚢上面。鞏膜和眼球嚢限定了眼球的外表面。治療眼部疾病時，例如與年齡相關的黃斑退行性改變(AMD)(包括滲出性(溼)和非滲出性(幹))，脈絡膜新生血管、視網膜病(例如糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病)、糖尿病性黃斑水腫、視網膜炎、眼色素層炎、嚢樣黃斑水腫(CME)、青光眼和眼部後段的其它疾病或症狀，優選在鞏膜外表面和眼球嚢下面直接形成眼部可接受藥用活性試劑的特定劑量儲備。此外，在治療與年齡相關的黃斑退行性改變(AMD)(包括滲出性(溼)和非滲出性(幹)AMD)和CME時，最好在在鞏膜外表面、眼球囊下面並通常在斑點上面直接形成儲備。化合物可形成儲備製劑。這種長效製劑可通過肌內注射或上述的眼球下注射或玻璃體內注射植入給藥(例如皮下或肌內)。或者，活性成分以粉末形式存在，使用前用適當的載體如無菌無熱原水溶解。在本發明特別優選的具體實施方式中，化合物製備成局部給藥，以鹽(聯合眼部製劑普遍使用的任一種防腐劑和抗微生物劑)和滴眼液的形式給予。溶液或混懸液製備成純淨形式，每天給藥數次。或者，上述製備的本發明合劑也可以直接用於角膜。在優選的具體實施方式中，合劑用一種結合於角膜的黏膜粘著劑聚合物進行製備。因此，化合物例如可以與多聚物或疏水材料(例如，在可接受油中的乳劑)或離子交換樹脂形成製劑，或形成微溶衍生物例如微溶的鹽。用於疏水化合物的藥用載體是一個潛溶劑系統，包括苯甲醇、一種非極性表面活性劑、一種可與水混溶的有機聚合物和一個水相。潛溶劑系統可以是VPD潛溶劑系統。VPD是一種溶液，含有3Ww/v苯曱醇，8%w/v非極性表面活性劑吐溫80，和65%w/v聚乙二醇300，溶於無水乙醇。VPD潛溶劑系統(VPD:5W)包括用5%葡萄糖水溶液1:1稀釋的VPD。潛溶劑系統可溶解疏水性化合物，並在全身用藥時產生低毒性。通常，潛溶劑系統的比例在不明顯破壞其溶解性和毒性特徵時可發生變化。此外，潛溶劑成分可發生變化例如，其它低毒性的非極性表面活性劑可替代吐溫80;聚乙二醇的比例可改變；其它生物相容的聚合物可替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯酮；以及其它糖或多糖可替代葡萄糖。或者，可以利用疏水性藥用化合物的其它遞藥系統。脂質體和乳劑是疏水性藥物已知的輸送介質或載體。也可以利用特定的有機溶劑，例如二甲基亞碸，但通常產生更大的毒性。此外，化合物可利用持續釋放系統輸送，例如含有治療藥物的固體疏水多聚物的半滲透性基質。已經確定了多種持續釋放材料，並在技術上已知。持續釋放膠嚢可根據其化學性質在數周直至100天以上的時間內釋放化合物。根據治療藥物的化學性質和生物穩定性，可以採用其它蛋白穩定策略。藥物組合物也可包括適當的固相或水相載體或輔料。這些載體或輔料例如包括碳酸鈣、磷酸鈣、糖、澱粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物例如聚乙二醇。任何形成製劑的合劑可用於患者。本發明的患者優選為哺乳動物，更優選人類。藥用製劑在此可進一步包括一種治療試劑，選自抗腫瘤藥、抗炎藥、抗菌藥、抗病毒藥、血管生成藥和抗血管生成藥。這些試劑的例子顯示於此。例如，抗胂瘤藥可選自鹽酸阿考達唑、阿克羅寧、阿多來新、阿地白介素、六甲密胺、安波黴素、醋酸阿美蒽醌(AmetantroneAcetate)、氨魯米特、安吖啶、阿納託司唑、安麴黴素、門冬跣胺酶、曲林菌素、氮雜胞苷、氮替派、固氮黴素、巴馬司他、爺替派、比卡魯胺、鹽酸比生群、雙奈法德雙敏使朗(BisnafideDimesylate)、比折來新、硫酸博來黴素、布喹那鈉、溴匹立明、白消安、放線菌素C(Cactinomycin)、卡普睪酮、卡醋胺、卡貝替姆、碳鉑、卡氮芥、鹽酸卡柔比星、鹽酸卡柔比星、西地芬戈、苯丁酸氮芥、西羅裡黴素、順鉑、克拉屈濱、克立那託敏^f吏朗(CrisnatolMesylate)、環磷醯胺、阿糖胞普、氮烯咪胺、更生黴素、鹽酸柔紅黴素、地西他濱、右奧馬鉑、地扎呱寧、地扎呱寧敏使朗(DezaguanineMesylate)、地吖醌、多西他奇、阿黴素、鹽酸阿黴素、屈洛昔芬、檸檬酸屈洛昔芬、丙酸甲雄烷酮、偶氮黴素、依達曲沙、鹽酸依洛尼塞、依沙蘆星、恩洛鉑、苯環丙炔酯、雙環氧哌啶、鹽酸表柔比星、厄布洛唑、鹽酸依索比星、磷雌氮芥、雌氮芥磷酸鈉、依他硝唑、乙碘油I131、鬼臼乙叉戒、磷酸鬼臼乙叉戒、氯苯乙嗜胺、鹽酸法羅唑啉、法扎拉濱、芬維A胺、氟尿苷(Floxuridine)、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟環胞苷、磷喹酮、福司曲星鈉、吉西他濱、鹽酸吉西他濱、金Au198(GoldAu198)、羥基脲、鹽酸伊達比星、異磷醯胺、因氟新(Imofosine)、幹擾素cx-2a、幹擾素ot-2b、幹擾素a-nl、幹擾素oc-n3、幹擾素p-la、幹擾素y-lb、異丙鉑、鹽酸依立替康、醋酸蘭瑞肽、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、鹽酸利阿唑、洛美曲索鈉、羅莫司丁、鹽酸洛索蒽醌、馬丙考、美登素、氮芥、醋酸曱地孕酮、醋酸甲地孕酮、美法倉、美諾立爾、巰嘌呤、絲裂吉菌素、絲裂馬菌素、絲裂黴素C、絲裂帕菌素、米託坦、鹽酸米託蒽醌、黴酚酸、噻氨酯噠唑、諾加黴素、奧馬鉑、亞磺醯吡咬、紫杉醇、天門冬醯胺酶、佩利黴素、溴新斯的明、硫酸培來黴素、過磷醯胺、溴丙哌嗪、嗪消安、鹽酸吡羅蒽醌、光神黴素、普洛美坦、卟吩姆鈉、泊非黴素、潑尼莫司汀、鹽酸甲基苄肼、嘌呤黴素、鹽酸嘌呤黴素、吡唑呋喃菌素、異戊烯腺苷、洛太米特、沙芬戈、鹽酸沙芬戈、甲環亞硝脲、辛曲秦、磷乙醯天冬氨酸鈉、稀疏黴素、鹽酸螺旋鍺、螺莫司汀、順螺鉑、鏈黑黴素、鏈唑黴素、氯化鍶Sr89(StrontiumChlorideSr89)、碌氯苯脲、他利黴索、紫杉烷(Taxane)、紫杉烷(Taxoid)、替可加蘭鈉、喃氟啶、鹽酸替洛蒽醌、替莫泊芬、鬼臼噻吩甙、替羅昔隆、睪內酯、硫咪嘌呤、硫鳥噪呤、塞替派、噻唑呋林、替拉扎明、鹽酸拓樸替康、枸櫞酸託瑞米芬、曲託龍(TrestoloneAcetate)、磷酸曲西立濱、曲美沙特、曲美沙特葡萄糖醛酸(TrimetrexateGlucuronate)、曲普瑞林、鹽酸妥布氯唑、尿嘧啶氮芥、尿烷亞胺、伐普肽、維替泊芬、硫酸長春鹼(VinblastineSulfate)、硫酸長春新鹼、長春鹼醯胺、硫酸長春鹼109醯胺、硫酸長春匹定、硫酸長春甘酯、硫酸環氧長春鹼、酒石酸長春瑞濱、硫酸異長春鹼、硫酸長春利定、伏氯唑、折尼拉汀、新制癌菌素、鹽酸佐柔比星。抗血管生成藥是任何能抑制血管的試劑，在此公開或技術上已知的。在一個優選的具體實施方式中，抗血管生成藥是抗VEGF試劑如Macugen(Eyetech，NewYork,NY)，或抗VEGF抗體。藥物組合物可通過標準技術形成製劑，利用一種或多種適當的載體、輔料和稀釋劑。例如見Remington'sPharmaceuticalSciences,(19thEd.Williams&Wilkins，1995)(以引用的方式併入本文中，用於各種目的)。適合胃腸道外給藥的製劑包括與目的受者血液等滲的水性和非水性製劑；以及水性和非水性無菌混懸劑，可包括混懸系統，使化合物乾向血液成分或者一個或多個器官。製劑可存在於單元劑量或多劑量密封容器，例如安瓿或玻璃瓶。對於眼內製劑，優選單元劑量，因為製劑中不存在任何防腐劑。對於其它腸道外製劑，考慮到多劑量容器，可以使用防腐劑。可製備臨時注射溶液或混懸液，例如來自無菌粉末。胃腸道外製劑和靜脈注射製劑也可包括礦物質和其它物質，使其與選擇的注射類型或遞藥系統相匹配。本發明關注的特定胃腸道外給藥包括眼球內和玻璃體內眼部給藥。眼球內和玻璃體內給藥的製劑配方包括磷酸鹽緩衝液(PBS)和等滲平衡鹽溶液(BSS)，有或無輔料，例如作為蛋白穩定劑的甘露醇或山梨醇。通常，水、合適的油、鹽、水溶右旋糖(葡萄糖)或相關的糖溶液和二醇類(glycols)例如丙二醇或聚乙二醇是胃腸道外溶液的合適載體。胃腸道外給藥的溶液優選包括活性成分的水溶性鹽，合適的穩定劑以及在需要時，包括緩衝物質。抗氧化劑，例如亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或維生素C，可單獨或聯合用作適當的穩定劑。也可以使用其檸檬酸鹽或EDTA鈉。此外，胃腸道外溶液可含有防腐劑，例如氯化苯甲烴銨、酯、或三氯叔丁醇。適當的藥用載體描述於上面引用的配方。在此處任一具體實施方式中，此處的合劑或藥用製劑可低壓凍幹。在此處任一具體實施方式中，藥用製劑每克治療試劑中優選含有小於IO單位左右的內毒素，更優選小於5，更優選小於3或更優選小於1。在某些具體實施方式中，在此公開的治療方法進一步包括給予患有血管生成症狀的患者一種或多種治療試劑，選自包括抗腫瘤藥、抗病毒藥、抗炎藥、抗菌藥、血管生成藥或抗血管生成藥的群組。這種聯合療法得以完成，可通過給予患者含有此處的合劑和其它治療試劑的共製劑，或者此處的合劑和治療試劑作為兩個獨立的藥用製劑給予。在一種以上合劑/治療試劑被給予患者的具體實施方式中，可利用更低劑量的合劑和/或治療試劑，這是兩種活性成分的協同效應導致的。可用於患者的抗腫瘤藥包括但不限於鹽酸阿柔比星、鹽酸阿考達唑、阿克羅寧、阿多來新、阿地白介素、六曱密胺、安波黴素、醋酸阿美蒽醌(AmetantroneAcetate)、氨魯米特、安吖咬、阿納託司哇、安麴黴素、門冬醯胺酶、曲林菌素、氮雜胞苷、氮替派、固氮黴素、巴馬司他、苄替派、比卡魯胺、鹽酸比生群、雙奈法德雙敏使朗(BisnafideDimesylate)、比折來新、石克酸博來黴素、布壹那鈉、溴匹立明、白消安、放線菌素C(Cactinomycin)、卡普睪酮、卡醋胺、卡貝替姆、碳鉑、卡氮芥、鹽酸卡柔比星、鹽酸卡柔比星、西地芬戈、苯丁酸氮芥、西羅裡黴素、順鉑、克拉屈濱、克立那託敏使朗(CrisnatolMesylate),環磷醯胺、阿糖胞苷、氮烯咪胺、更生黴素、鹽酸柔紅黴素、地西他濱、右奧馬鉑、地扎呱寧、地扎呱寧敏使朗(DezaguanineMesylate)、地吖醌、多西他奇、阿黴素、鹽酸阿黴素、屈洛昔芬、檸檬酸屈洛昔芬、丙酸甲雄烷酮、偶氮黴素、依達曲沙、鹽酸依洛尼塞、依沙聲星、恩洛鉑、苯環丙炔酯、雙環氧哌啶、鹽酸表柔比星、厄布洛唑、鹽酸依索比星、磷雌氮芥、雌氮芥磷酸鈉、依他硝唑、乙碘油I131、鬼臼乙叉戒、磷酸鬼臼乙叉甙、氯苯乙嘧胺、鹽酸法羅唑啉、法扎拉濱、芬維A胺、氟尿苷(Floxuridine)、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟環胞苷、磷喹酮、福司曲星鈉、吉西他濱、鹽酸吉西他濱、金Au198(GoldAu198)、羥基脲、鹽酸伊達比星、異磷醯胺、Imofosine、幹擾素oc-2a、幹擾素cc-2b、幹擾素ot-nl、幹擾素ot-n3、幹擾素p-la、幹擾素y-lb、異丙鉑、鹽酸依立替康、醋酸蘭瑞肽、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、鹽酸利阿唑、洛美曲索鈉、羅莫司丁、鹽酸洛索蒽醌、馬丙考、美登素、氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸甲地孕酮、美法倉、美諾立爾、巰嘌呤、絲裂吉菌素、絲裂馬菌素、絲裂黴素C、絲裂帕菌素、米託坦、鹽酸米託蒽醌、黴酚酸、瘞氨酯噠唑、諾加黴素、奧馬鉑、亞磺醯吡咬、紫杉醇、天門冬醯胺酶、佩利黴素、溴新斯的明、硫酸培來黴素、過磷跣胺、溴丙哌嗪、嗪消安、鹽酸吡羅蒽醌、光神黴素、普洛美坦、卟吩姆鈉、泊非黴素、潑尼莫司汀、鹽酸甲基苄肼、嘌呤黴素、鹽酸嘌呤黴素、吡唑呋喃菌素、異戊烯腺苷、洛太米特、沙芬戈、鹽酸沙芬戈、甲環亞硝脲、辛曲秦、磷乙醯天冬氨酸鈉、稀疏黴素、鹽酸螺旋鍺、螺莫司汀、順螺鉑、鏈黑黴素、鏈唑黴素、氯化鍶Sr89(StrontiumChlorideSr89)、磺氯苯脲、他利黴索、紫杉烷(Taxane)、紫杉烷(Taxoid)、替可加蘭鈉、喃氟啶、鹽酸替洛蒽醌、替莫泊芬、鬼臼噻吩甙、替羅昔隆、睪內酯、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤、塞替派、噻唑呋林、替拉扎明、鹽酸拓樸替康、枸櫞酸託瑞米芬、曲託龍(TrestoloneAcetate)、磷酸曲西立濱、曲美沙特、曲美沙特葡萄糖醛酸(TrimetrexateGlucuronate)、曲普瑞林、鹽酸妥布氯唑、尿嘧啶氮芥、尿烷亞胺、伐普肽、維替泊芬、疏酸長春鹼(VinblastineSulfate)、》琉釀長春新鹼、長春鹼醯胺、硫酸長春鹼醯胺、硫酸長春匹定、硫酸長春甘酯、硫酸環氧長春鹼、酒石酸長春瑞濱、硫酸異長春鹼、硫酸長春利定、伏氯唑、折尼拉汀、新制癌菌素、鹽酸佐柔比星。可用於患者的抗菌藥包括但不限於青黴素類、氨基糖甙類、大環內酯類、單醯胺菌素類、利福黴素類、四環素類、氯黴素、克林黴素、林可黴素、亞胺培南、夫西地酸、新生黴素、磷黴素、夫西地酸鈉、新黴素、多粘菌素、巻麴黴素、多粘菌素(粘菌素M、colistimethate)、可立其丁(粘菌素E、colistin)、短桿菌肽、米諾環素、脫氧土黴素、萬古黴素、桿菌肽、卡那黴素、慶大黴素、乙琥紅黴素和先鋒黴素類可用於患者的抗炎藥包括但不限於NSAIDS(例如阿司匹林(水楊醯胺)、水楊醯胺鈉、丐l咮布洛芬、丐l咮美辛、丐l咪美辛鈉三水化物(sodiumindomethacintrihydrate)、貝螺殺7"、巴非林"1、西樂葆7"、雙氯芬酸、Ecotrin、雙氟尼酸、非諾洛芬、曱氧萘丙酸、舒林酸、萬絡)、皮質激素或促腎上腺皮質激素(ACTH)、秋水仙鹼和醋酸阿奈可他。可用於患者的抗病毒藥包括但不限於oc-甲基-P-金剛烷甲胺、1，-D-呋核亞硝脲-l，2，4-三唑-3-三唑、9-[2-羥基-乙氧基]甲基鳥嘌呤、金剛烷胺、5-硤-2'-脫氧尿苷、三氟胸苷、幹擾素、阿糖腺苷、CD4、3'-疊氮基-3'-脫氧胸苷(AZT)、9-(2-羥乙氧甲基)-鳥嘌呤(阿昔洛維)、磷酸三鈉甲酸鹽、l-金剛烷胺、多肽引(peptideT)和2'，3'-雙脫氧胞苷。本發明合劑給予體內靶細胞可通過所屬領域技術人員已知的多種技術中的一種來完成。例如，本發明合劑可通過技術上已知的方法系統給藥或局部給藥(例如口服、目艮球內、血管內(i.v.)、皮內、肌內、經皮、經黏膜、腸道、腸道外、通過吸入噴霧、經直腸或局部給藥)，以單元劑量的形式，並包括常規的藥學可接受的載體、輔劑和介質。在此使用的術語眼球內包括玻璃體內、視網膜下等等。在此使用的術語胃腸道外包括皮下、靜脈內、肌內、胸骨內、輸注技術或腹膜內。直腸給藥的栓劑可通過藥物與一種合適的非灌注輔料混合得以製備，例如可可豆脂和聚乙二醇，其在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因而在直腸中融化並釋放藥物。利用本發明合劑治療疾病或紊亂的給藥方案是基於多種因素，包括疾病類型，患者的年齡、體重、性別、醫學症狀，症狀的嚴重性，給藥途徑以及使用的特定化合物。因此，給藥方案可發生變化，但可以用標準方法常規確定。對於全身用藥，本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分和/或一種或多種其它治療試劑優選給藥劑量為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10、20、30、40、50、75、100或150mg/kg體重。在其它具體實施方式中，此處多肽(優選二聚體或同型二聚體)和/或小分子的全身給藥劑量為0.1-100mg/kg，0.5-50mg/kg更優選1-30mg/kg體重，或更優選5-20mg/kg。對於局部給藥，本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分和/或一種或多種其它治療試劑優選給藥劑量為至少50Mg、100Mg、150Mg、200jag、250jig、300pg、350jjg、400jig、450yg、500jag、550jng、600Mg、650iug或700jig。在其它具體實施方式中，此處多肽(優選二聚體或同型二聚體)和/或小分子在每個位置的局部給藥劑量為50-1000jag,更優選100-800jng，更優選200-500Mg，或更優選300-400jjg。例如，對於皮膚用藥，本發明抗ALK-1抗體或其抗原結合部分和/或才莫擬肽(peptidomimetics)和/或一種或多種其它治療試劑的給藥劑量為50-1000lag/cm2，更優選100-800pg/cm2，或更優選200-500jag/cm2。再例如，對於眼部用藥，本發明多肽和/或模擬肽(peptidomimetics)和/或小分子的給藥劑量為50-1000pg/眼，更優選100-800fjg/眼，或更優選200-500yg/眼。藥物組合物優選包括活性成分(例如抗ALK-1抗體)的有效劑量，即，可獲得有效治療或預防效應的劑量。特定用法的實際有效劑量依賴於所治療的症狀和給藥途徑。確定有效劑量是在所屬領域技術人員的能力範圍之內，尤其在此處內容的幫助下。優選，活性成分例如抗ALK-1抗體的有效劑量為，患者每千克體重0.OOOlmg到500mg左右的活性試劑，更優選患者每千克體重0.001到250mg左右的活性試劑，更優選患者每千克體重0.01到100mg左右的活性試劑，更優選患者每千克體重0.5到50mg左右的活性試劑，以及最為優選患者每千克體重1到15mg左右的活性試劑。關於體重百分數，本發明製劑優選含有活性試劑例如抗ALK-1抗體的劑量為，更優選o.oooi到iowt.y。左右，更優選o.ooi到iwt.y。左右，更優選0.05到1wt.%左右，或者更優選0.1到0.5wt.%左右。基因療法編碼本發明抗體或抗原片段的核苷酸分子可通過基因療法用於其需要的患者。該療法可以在體內或體外。在優選的具體實施方式中，編碼一條重鏈和一條輕鏈的核普酸分子可用於患者。在一個更優選的具體實施方式中，給予核苷酸分子使其穩定整合到B細胞的染色體上，因為這些細胞專門產生抗體。在一個優選的具體實施方式中，前體B細胞在體外轉染或感染，並再植入其需要的患者。在另一個具體實施方式中，前體B細胞或其它細胞體外感染，用一種已知可感染目的細胞類型的病毒。用於基因療法的典型載體包括脂質體、質粒和病毒載體。典型病毒載體有逆轉錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒。在體內或體外感染後，抗體表達水平可通過獲取治療患者的樣品進行監測，利用技術上已知的或本文描述的任一免疫測定法。在一個優選的具體實施方式中，基因治療方法其步驟包括，給予編碼抗ALK-1抗體重鏈或其抗原結合部分的分離的核苷酸分子，並表達核苷酸分子。在另一個具體實施方式中，基因療法其步驟包括，給予編碼抗ALK-1抗體輕鏈或其抗原結合部分的分離的核苷酸分子，並表達核苷酸分子。在一個更優選的方法中，基因治療方法其步驟包括，給予編碼抗ALK-1抗體重鏈或其抗原結合部分的分離的核苷酸分於和編碼輕鏈或其抗原結合部分的分離的核苷酸分子，並表達核普酸分子。基因治療方法也可包括另一種治療試劑的給藥步驟，例如上述聯合治療中的任何一種試劑。ALK-1拮抗劑或激動劑的篩選方法在一個具體實施方式中，本發明提供一種方法，用於測定一種物質是否抑制ALK-1某一特定下遊靶基因Idl的上調，例如，Taqman分析Idl描述於實施例12中。方法包括用物質接觸表達Idl的細胞樣品，並測定Idl表達是否被抑制，其中，與對照細胞樣品相比，Idl在接觸物質的細胞樣品中表達水平降低，表明該物質抑制Idl的表達。在一個特定的具體實施方式中，該物質是一個與ALK-1胞外域結合的抗體。在另一個具體實施方式中，該物質是一個小分子。根據本發明，細胞可同時固有表達ALK-1和Idl，例如HUVEC，描述於實施例12中，或者細胞已經轉化或轉染了其中一個或兩個的編碼DNA。可以確定Idl的表達，例如利用Taqman分析Idl，描述於實施例12中。相反，活化劑或激動劑也可以被試驗或利用，根據相同的步驟。為了可以更好地理解本發明，給出了下面的實施例。這些實施例只作為說明，而不應逐字分析以任何方式限定本發明範圍。實施例在下面的實施例和製備中，"MW"表示分子量；"His-Tag"表示C端的多組氨酸(6個組氨酸)標籤，用於鎳螯合樹脂快速純化和抗組氨酸(C端)抗體的檢測；"BSA"表示牛血清白蛋白；"EDTA"表示乙二胺四乙酸；"DMSO"表示二甲基亞碸；"MOPS"表示3-(N-嗎啉)丙磺酸；"MES"表示2-(N-嗎啉)甲磺酸；"PBS"表示磷酸鹽緩衝液；"dPBS"表示Dulbecco磷酸緩衝液；"HEMA"表示2-羥基-乙基異丁烯酸；"DMEM"表示Dulbecco改良的Eagle培養基；"FBS"表示胎牛血清；"NEAA"表示非必需胺基酸；"HEPES"表示N-2-羥乙基哌,-『-2-甲磺酸；以及"DMF"表示二甲替甲醯胺。實施例1.製備ALK-1免疫原ALK-1ECD通過PCR從全長人ALK-1ORF克隆(Invitrogen，克隆IDIOH21048)中克隆得到，利用上遊引物5，—ACGGCCCAGCCGGCCGACCCTGTGAAGCCGTCT(SEQIDNO:96)和下遊引物5'-ACTAAGCTTTTAATGATGATGATGATGATGCTGGCCATCTGTTCCCG(SEQIDNO:97)。純化PCR產物，用Sfil/Hindlll限制性內切酶處理，並克隆入哺乳動物表達載體pSecTag2/Hygro(Invitrogen公司，CatalogNo.V910-20)的Sfil和HindIII位點。克隆用於瞬時轉染293T細胞，利用Fugene6轉染試劑(羅氏，CatalogNo.1814443)，根據廠商的實驗設計。在轉染後72小時，收集含有其分泌的靶蛋白的細胞培養上清，並與Ni-NTA樹脂(QIAGEN，CatalogNo.30430)在4t:結合過夜。接著，樹脂用緩沖液沖洗，其含有20mMTrispH8.0，25mM咪唑和300mM氯化鈉。His-Tag蛋白用緩沖液洗脫下來，其含有20mMTrispH8.0，300mM咪唑和300mM氯化鈉。利用CM瓊脂糖陽離子交換樹脂在20mM磷酸鈉(pH7.0)中進一步純化蛋白，並收集未結合的部分，其含有靶蛋白。通過透析，將蛋白緩衝液更換成PBS或10mMHEPES，pH7.4和150mM氯化鈉，並濃縮至0.2-1mg/mL，最終純度大於90%，通過考馬斯藍染色的SDSPAGE凝膠得以判斷。ALK-lECDHis-Tag蛋白被高度糖基化，表觀分子量為26KDa,而蛋白的理論MW為llKDa。ALK-lECDHis-Tagprotein(SEQIDNO:98)已經用於產生雜交瘤，其產生抗ALK-l抗體，描述於實施例2中。人ALK-lECDHis-Tag蛋白基因序列(小寫字母部分是分泌信號)atggagacagacacactcctgctatgggtactgctgctctgggttccaggttccactggtgTGAGAGCCCACATTGCAAGGGGCCTACCTGCCGGGGGGCCTGGTGCACAGTAGTGCTGGTGCGGGAGGAGGGGAGGCACCCCCAGGAACATCGGGGCTGCGGGAACTTGCACAGGGAGCTCTGCAGGGGGCGCCCCACCGAGTTCGTCAACCACTACTGCTGCGACAGCCACCTCTGCAACCACAACGTGTCCCTGGTGCTGGAGGCCACCCAACCTCCTTCGGAGCAGCCGGGAACAGATGGCCAGCATCATCATCATCATCAT(SEQIDNO:99)蛋白序列FVNHYCCDSHLCNHNVSLVLEATQPPSEQPGTDGQHHHHHH(SEQIDNO:98)實施例2.抗ALK-1抗體產生雜交瘤的產生8到10周齡的XENOMOUSE⑧小鼠在其後肢接受免疫，利用10|ag/只小鼠的重組人ALK-1/Fc嵌合體(R&DSystems,Inc.,CatalogNumber370-AL)或實施例1描述的ALK-1ECDHis-Tag蛋白。該劑量在3到5周內重複5到7次。融合前3到4天，用溶於PBS的免疫原最後一次注射小鼠。來自免疫小鼠的淋巴結淋巴細胞與非分泌性骨髄瘤P3-X63-Ag8.653細胞系通過電細胞融合儀融合(ATCCCat.No.CRL1580)，接著，這些融合細胞接受HA-DMEM篩選，如上所述(DMEM/15%FBS/1%200mML-穀氨醯胺/1%100X非必需胺基酸/l%100X青黴素/鏈黴素/10U/mlIL-6/1管/L0PI培養基補充物和0.5xHA(氮絲氨酸-次黃嘌呤，Sigma,Cat.#A9666))。收集一組雜交瘤，全部分泌ALK-1特異的人IgG2抗體。ELISA用於檢測抗體結合。用免疫原包被96孔免疫微量滴定板(NUNC-ImmunoTMplateMaxiSorpsurface,NalgeNuncInternational,Cat.No.439454)，以4jjg/mL溶於50mM的碳酸氫鈉緩沖液，4°C過夜。洗滌平板，接著用含有0.1%吐溫20和0.5%牛血清白蛋白的PBS封閉。在封閉的ELISA平板中加入抗體，孵育1小時，用含有吐溫20的PBS洗滌。結合的抗體通過抗人IgG辣根過氧化物斷Pierce,CatalogNo.31420)繼而加入ABTS(Pierce,CatalogNo.37615)得以檢測。比色法測定在405nm完成，利用酶標儀(SpectraMaxPlus384，MolecularDevices)。篩選了25林雜交瘤用於進一步研究。它們是通過有限稀釋得到的單細胞克隆，命名為1.11.1、1.12.1、1.12.1(rWT)、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12，1(D19A)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1。小鼠雜交瘤細胞系LN15916(雜交瘤1.12.1)在2005年6月21日根據布達佩斯條約命名並保存於美國典型培養物保藏中心(ATCC)，10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20110-2209。(MouseHybridomaCelllineLN15916(thehybridoma1.12.1)wasdepositedundertermsinaccordancewiththeBudapestTreatywiththeAmericanTypeCultureCollection(ATCC),10801UniversityBlvd.，ManassasVA20110-2209onJune21,2005.)雜交瘤1.12.1已經被指定為以下收藏號PTA-6808。實施例3.抗ALK-l抗體的序列為了分析根據本發明產生的抗體的結構，核苷酸#^克隆，其編碼的重鏈和輕鏈片段來自於抗ALK-1單克隆抗體產生雜交瘤。根據標準方法完成克隆和測序。對於每個ALK-1抗體，Poly(A)+mRM利用Fast-Track試劑盒(Invitrogen)分離自2X105左右的雜交瘤細胞。利用隨機引物，從mRNA合成cDM。隨機引物獲得的cDNA用PCR進行擴增，利用人Vh或人Vic家族特異的可變區引物以;5LACY2恆定區或Ck恆定區特弄的引物來擴增抗體的可變區，包括所有框架區(FRs)和互補決定區(CDRs)。通過直接測定兩條PCR產物的序列，獲得核苷酸序列，其編碼抗ALK-1產生雜交瘤的人重鏈和k輕鏈轉錄本。序列分析利用Abgenix的所有者軟體和免費獲得的人Vh和Vk基因序列信息，"V鹼基序列名錄"(Tomlinsonetal.，MRCCentreforProteinEngineering,CambridgeUK)。相同的結果可以利用免費獲得的序列比對軟體來完成，通過所屬領域4支術人員利用MacVector和Geneworks軟體程序。特別地，全長ALK-1抗體1.12.1被克隆入表達載體，如下利用RNeasyMiniKit(Qiagen)分離Poly(A)+mRNA，利用AdvantageRT-for-PCR試劑盒(BDBiosciences)和oligo(dT)引物從mRNA合成cDNA。Oligo(dT)引物獲得的克隆1.12.1的cDM利用表2列出的引物進行擴增。利用PfuUltra聚合酶(Stratagene)和PTC-200DNAEngine(MJResearch)完成擴增，循環如下3、95°C;25x(20"，95C30"，52。C，1'20"，72匸)；10',72匸。克隆的序列驗證利用Grills16thBDTv3.1/dGTP化學(AppliedBiosystemsInc)和3730x1DNA分析儀(AppliedBiosystemsInc)完成。在處理克隆1.12.1Vh的逸程中，在第8位的密碼子上引入了一個沉默突變，"GGC"被轉換成"GGT"。所有序列通過與"V鹼基序列目錄"的比對進行分析(Tomlinson，etal，/.#o7.A'o人，227，776-798(1992);#咖.#o/.fe/jef，3，853-860(1994);層0/.，14，4628-4638(1995))表2用於克隆全長1.12.1的重鏈和輕鏈擴增引物引物名稱引物序列SEQIDNO4-615'tcttcaagcUgatatctctagaagccgccaccATGAAACACCTGTGGTTCTTCCTCC3'105G1/2-FL—R5'UctctgatcagaattcctaCTATTTACCCGGAGACAGGGAGAGGC3，106All5'tcttcaagcttcccgggagccgccaccATGGAAACCCCAGCGCAGCTT3，107K-FL-R5，ttctttgatcagaattctcaCTAACACTCTCCCCTGTTGAAGCTCTTTG3'108用小寫字母表示非雜交鹼基實施例4.基因利用分析和CDR分析根據抗體的核苷酸序列和預期的胺基酸序列，可以鑑定每條抗體鏈的基因使用。表3根據本發明給出了所選抗體雜交瘤克隆的基因利用。表3:重鏈和輕鏈基因利用tableseeoriginaldocumentpage121克隆1.12.1的V"M29I)和VK(D19A)區的誘變是通過表4列出的引物和QuickChange試劑盒(Stratagene)根據廠商的實驗"沒計得以完成。對突變變體的序列進行驗證並通過標準程序克隆入表達載體。表4:誘變的寡核苷酸(從5'到):引物正義反義1.12.1CTCCAGGGGAAAGAGgCACCCTCTCCTGTAGGCCTACAGGAGAGGGTG&CTCTTTCCCCTGGAG(D19A)(SEQIDNO:109)(SEQIDNO:110)1.12.1GGTGGCTCCATgAGCAGTGGTGAATACTACGTAGTATTCACCACTGCT&ATGGAGCCACC(M291)(SEQIDNO:111)(SEQIDNO:112)突變用黑體和下劃線表示。編碼1.12.1(M29I/D19A)抗體重鏈可變區(SEQIDNO:5)和輕鏈可變區(SEQID:7)的核苷酸分子在2005年7月14日根據布達佩斯條約命名並保存於美國典型培養物保藏中心(ATCC)，10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20110-2209。保存的菌種已經被指定為下列收藏號含有質粒pCR2.1TOPO1.12.1VH(M29I):UC25502的E.coliDH5oc為ATCCNo.PTA-6864;含有質粒pCR2.1TOPO1.12.1VK(D19A):UC25503的E.coliDH5oc為ATCCNo.PTA-6865。許多抗ALK-1特異性人抗體在重鏈可變區的CDRl上具有相同模式。這些前導分子利用4-31或4-61重鏈V基因片段。與這些抗體重鏈對應的FR1和CDR1序列顯示在表4A中，與種系序列進行比對。比對中的短橫線(-)表示與種系相同的殘基。任何時候，CDRl末尾的GYYWS(SEQIDNO:136)模式已經通過體細胞突變產生新的序列模式，其中，12個例子中有9個，其G殘基變成一個酸性殘基(D或E),而最後的S殘基變成N。Vh其它區段的序列多祥性表明，可能是獨立的體細胞突變事件導致Vh的CDRl末尾出現相同的序列模式。1.13.1VH"1D6-19JH4B1.14.1VH"1D6-19JH4BQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS(SEGGSVSSGGYYWSQIDNO:124)(SEQIDNO:125)—H---------------------------一一D—N________-__一—一———--—t^t實施例5.製備1.12.1Fab分子1.12.1(M29I/D19A)Fab片段的製備是通過番木瓜蛋白酶水解1.12.1(M29I/D19A)IgGl獲得。經蛋白酶A純化的全長1.12.1(M29I/D19A)IgGl與番木瓜蛋白酶(YWR)以l:50的比例(番木瓜蛋白酶蛋白)在含有30mM磷酸鈉(pH7.0)、2mMEDTA和2mM半胱氨酸的緩沖液中3*7°C孵育2-3小時，接著，酶切混合物用蛋白A小柱去除其中未酶切的全長蛋白和Fc片段。未結合的Fab在通過柱子的液體中淨皮收集。其後，利用體積排阻柱(Superdex200，AmershamPharmaciaBiotech)進一步純化Fab蛋白並將緩沖液更換成PBS,蛋白表4AALK-1抗體重鏈序列模式fr1QVQLQESGPGLVKPSOTLSLTCTVS(SEQIDNO:122)CDR1GGSISSGGYYWS(SEQIDNO:123)-------D—N------D-—N______E____—----e——-----ND—N-------D-—N-------D—N-—M-—E—N^V-基因D-基因生殖系5.34.14.58.14.38.15,13.1.1IIIIIVH4-31VH4-31VH4-31VH"lVH4-31VH4-31VH4-31VH4-31VH4-31VH4-31D4-23D4-23-NA--NA-D5-12D5-12D5-12DW9D6-19J-基因624212172631644336664s溶液先後通過Detoxi凝膠(PIERCE)和VivapureMiniQ離子交換柱(VivaScience),從而去除內毒素。蛋白用0.2jam的注射器式濾器過濾，並用LAL鱟熱原試劑盒(Cambrex)檢測內毒素水平。純化蛋白的終濃度為2-3mg/mL，內毒素水平小於0.1EU/mg,純度大於95%。1.12.1(M29I/D19A)Fab片段在非還原狀態下經電子噴霧質鐠法顯示，其分子量為47,347。EdmanN端序列分析分別證實輕鏈N端序列為EIVLTQSPG(SEQIDNO:113)以及重鏈序列為QVQLQESG(SEQIDNO:114)。實施例6.利用BIACORETM通過表面等離子共振技術(SPR)測定全長抗ALK-1人單克隆抗體的親和力值根據廠商的實驗設計利用BIACORE3000儀器通過表面等離子共振技術測定抗ALK-1抗體的親和力，如下所述。為完成動力學分析，重組人ALK-1/Fc融合蛋白(hALK-l/Fc)和短尾猴ALK-l/Fc融合蛋白(cALK-l/Fc)利用常規胺偶聯固定在CM5BIAcore傳感器晶片的流動細胞上。表面的製備利用pH5.0的10mM醋酸鹽緩衝液作為緩衝液，hALK-l/Fc和cALK-l/Fc融合蛋白的蛋白濃度分別達到300和150RU。利用pH8.5的1M乙醇胺滅活惰性N-羥基琥珀醯亞胺酯。製備流動緩衝液中的抗體樣品，濃度範圍為0.125到2nM(包括只含有流動緩衝液的0nM溶液，作為空白對照)。樣品隨機化並注射10分鐘，設置2個平行，每個樣品都通過4組流動細胞，HBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性劑P20)作為流動緩沖液。(Sampleswererandomizedandinjectedinduplicatefor10minuteseachacrossall4flowcellsusingHBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCI，3mMEDTA，0.005%SurfactantP20)asrunningbuffer.)觀察到結合速率不依賴於流速，從1到100pL/min，這表明不存在物質傳遞卩艮制。(On-rateswereobservedtobeindependentofflowratesfrom1to100|aL/minindicatingno124masstransportlimitation.)利用25mL/min的流速測定親和力值。監測抗體解離10分鐘，表面通過注射100mMH3P04(25jliL/min)12秒得以再生。原始數據利用Scrubber(BioLogicSoftware)軟體包進行處理，並用CLAMP(BioLogicSoftware)軟體包進行分析。來自單個表面的多個數據組以及同一個時間點的6個數據組，利用相同的變量Rmax值，同時整體擬合成簡單1:1Langmuir結合模型。表5列出了本發明代表性抗ALK-1抗體的親和力值。代表性數據表明，根據本發明製備的抗體對人ALK-1具有高親和力和強結合常數。表5通過表面等離子技術(BIAcore)測定親和力值克隆1.12.1(M29I/D19A)1.14.21.27.31.31.11.162.11.183.24.24.24.38.14.58.24.62.14.68.24.72.25.13.3hALK-l/Fc親和力(pM)<6.8762.9<131822070100409.6867391hALK-l/FcK。ff(1/s)<5.Ox10—'5.6xl(T51.9xl(T5<5.Ox10—'1.1x10—53.1xl(T54.4x10—54.Ox10-51.6xl(T57.6x1063.8xIO墨53.4x1056.3xl(T5cALK-l/Fc親和力(pM)2728060150621800430150130193202801901.12.1(M29I/D19A)涉及作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。實施例7.利用BIACORETM通過表面等離子共振技術(SPR)測定全長抗ALK-1人單克隆抗體1.12.1的親和常數(KD)根據廠商的實騶"沒計利用BIACORE3000儀器通過表面等離子共振技術測定純化的抗ALK-1抗體的親和力，如下所述。為完成動力學分析，抗ALK-1人單克隆抗體1.12.1變體利用常規胺偶聯固定在CM5生物傳感器晶片的葡聚糖上。表面的製備利用pH5.0的lOniM醋酸鹽緩衝液作為固定緩沖液，蛋白濃度達到3500到4800RU。利用pH8.5的1M乙醇胺滅活惰性N-羥基琥珀醯亞胺酯。製備流動緩衝液中的單體ALK-ECD樣品，濃度範圍為2.63到640nM(包括只含有流動緩沖液的0nM溶液，作為空白對照)。樣品隨機化並注射2分鐘，每個樣品都通過4組流動細胞，HBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性劑P20)作為流動緩衝液。(Sampleswererandomizedandinjectedfor2minuteseachacrossall4flowcellsusingHBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCI，3mMEDTA，0.005%SurfactantP20)asrunningbuffer)。利用25juL/min的流速測定親和常數。監測單體ALK-ECD解離10分鐘，表面通過注射100mMH3P04(25nL/min)12秒得以再生。原始數據利用Scrubber(BioLogicSoftware)軟體包進行處理，並用CLAMP(BioLogicSoftware)軟體包進行分析。數據被整體擬合成簡單1:lLangmuir結合模型。表6列出了本發明抗ALK-1人單克隆抗體1.12.1變體的親和力測定結果。表6通過表面等離子技術(BIAcore)測定mAbl.12.1變體的親和常數L抗體結合速率(M's—')解離速率(s-1)KD(nM)1.12.11.9x1037.4xIO一5391.12.1(rWT)2.2x1035.8xl(T5261.12.1(D19A)2.6x1034.4xl(T5171.12.1(M29I)2.4x1039.1xl(T5381.12.1(M29I/D19A)(1)*2.2x1039.5xIO墨5431.12.1(M29I/D19A)(2)*2.3x1038.4x10—537*用2個獨立的表面測得1,12.1(M29I/D19A)的(1)和(2)的2個親和常數。1.12.1指分離自雜交瘤mAb1.12.1變體。1.12.l(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中重鏈29位的曱硫氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。實施例8.利用BIACORETM通過表面等離子共振技術(SPR)測定抗ALK-1代表性人單克隆抗體的親和常數(KD)根據廠商的實騶"沒計利用BIAC0RE3000儀器通過表面等離子共振技術測定純化的抗ALK-1抗體的親和力(K。和K。ff)，如下所述。為完成動力學分析，親和純化的mAbs利用常規胺偶聯固定在CM5生物傳感器晶片的葡聚糖上。表面的製備利用pH5.0的10mM醋酸鹽緩沖液作為固定緩衝液，蛋白濃度達到200-400RU。利用pH8.5的1M乙醇胺滅活惰性N-羥基琥珀醯亞胺酯。製備流動緩衝液中的單體ALK-ECD樣品，濃度範圍為3.125-400nM(包括只含有流動緩衝液的0nM溶液，作為空白對照)。樣品隨機化並注射2分鐘，設置2個平行，每個樣品都通過4組流動細胞，HBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCl，3mMEDTA，0.005%表面活性劑P20)作為流動緩衝液。(Sampleswererandomizedandinjectedinduplicatefor2minuteseachacrossall4flowcellsusingHBS-EP(10mMHEPESpH7.4，150mMNaCI，3mMEDTA，0.005%SurfactantP20)asrunningbuffer)。觀察到結合速率不依賴於流速，從1到100yL/min，這表明不存在物質傳遞P艮制。(On-rateswereobservedtobeindependentofflowratesfrom1to100nL/minindicatingnomasstransportlimitation.)利用25pL/min的流速測定親和常數。監測單體ALK-ECD解離10分鐘，表面通過注射100mMH3P04(25pL/min)12秒得以再生。原始數據利用Scrubber(BioLogicSoftware)軟體包進行處理，並用CLAMP(BioLogicSoftware)軟體包進行分析。數據被整體擬合成簡單1:lLangmuir結合模型。表7列出了本發明抗ALK-1代表性抗體的親和力測定結果。表7通過表面等離子技術(BIAcore)測定代表性單克隆抗體的親和常數KDmAb結合速率(M—V)解離速率(s1)KD(nM)1.12.1(M29I/D19A)3.3x1048.2x10—251.31.13.2x1041,9xl(T46.04.72,13.2x1042.5xlO-50.8Fab1.12.1(M29I/D19A)3.8x1048.2x10"22產生實施例8數據的單體ALK-ECD不同於產生實施例7數據的單體ALK-ECD。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代以及重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。Fab1.12.1(M29I/D19A)是mAb1.12.1(M29I/D19A)的Fab片段，通過番木瓜蛋白酶水解1.12.1(M29I/D19A)IgGl獲得。實施例9.鑑定抗ALK-1抗體的抗原表位選擇性交叉竟爭實驗是根據廠商的實驗設計利用BIACORE3000儀器(BiacoreInternationalAB，Uppsala,SwedenandPiscataway，N.J)完成。重組人ALK-1/Fc嵌合體利用常規胺偶聯固定在CM5生物傳感器晶片的葡聚糖上。晶片的製備利用pH5.0的lOmM醋酸鹽緩衝液作為固定緩沖液，蛋白濃度達到940RU。利用pH8.5的1M乙醇胺滅活惰性N-羥基琥珀醯亞胺酯。純化的mAbs用HBS-EP流動緩沖液(0.01MHEPESpH7.4，0.15MNaCl，3mMEDTA，0.005%吐溫20)稀釋成50nM的濃度。選取第一抗體，並注射通過流動細胞，持續600秒，速率IOjaL/min。在注射完成後，選取第二抗體，並注射通過相同的流動細胞，持續600秒，速率IOML/min。感受器表面通過注射100mMH3P04(25jaL/min)12秒得以再生。再生後，第一抗體再次注射通過流動細胞，持續600秒，速率10mL/min。在注射完成後，選取不同的第二抗體，並注射通過相同的流動細胞，持續600秒，速率10juL/min。14個抗體作為第二抗體使用，全部完成後，選取一個新的第一抗體，並用該新的第一抗體重複上述過程。重複這些過程，直到第一和第二抗體的所有可能組合都已經注射通過流動細胞。如果兩種抗體注射後觀察到的總反應超過兩者可能的閾值，那麼，認為第二抗體發生了結合。閾值的測定是利用相同的抗體同時作為第一抗體和第二抗體。如表8所示，設立一個反應矩陣，依賴於是否觀察到結合-表示未結合第二抗體，x表示觀察到結合(其反應大於單個抗體的閾值)。對表現出相同反應模式的克隆進行歸組，從而產生2個不同抗原表位框，l.ll.l在一個框中，而其它所有抗體在另一個框中。表8.BIAcore抗原表位框並反應矩陣(BIAcoreepitopebinningresponsematrix)tableseeoriginaldocumentpage130實施例10.分離短尾猴ALK-1基因短尾猴("Cyno")ALK-1基因提取自短尾猴肺組織。根據公開的人ALK-1基因序列(GenebankrecordL17075)，^殳計引物，用於PCR擴增全長短尾猴ALK-1。利用mRM純化試劑盒(Ambion，CatalogNo.1915)根據廠商的實驗設計從凍存的離體短尾猴組織(ca.1g)製備mRNA。200ng的mRNA被逆轉錄，並用0neStepRT-PCR試劑盒(Qiagen，CatalogNo.210210)PCR擴增，利用基因特異的引物5'-AGCGGGCCCAGAGGGACC/IW(SeqIDNO:115)(上遊)和5'-CAGAAAGGAATCAGGTGCTCCTGGG^(SeqIDNO:116)(下遊)，退火溫度為61°C。適當大小(~1.5Kb)的RT-PCR產物在電泳後從0.9%瓊脂糖凝膠上切取並純化，接著T0P0-TA克隆入pCR4-T0P0載體(Invitrogen,CatalogNo.K4575-01)。插入片段經測序驗證後，具有短尾猴ALK-1的0RF核苷酸序列。核苷酸序列和翻譯後預期的胺基酸序列分別在SEQIDNO:93和94中給出。基因的細胞質部分編碼相同的短尾猴和人蛋白序列，但是，在蛋白的胞外域(ECD，包括22-118位)中存在5個不同胺基酸，在跨膜區存在1個不同胺基酸。人和短尾猴之間的ECD序列同一性為94.8%。人和靈長類ECD的比對在圖2中給出。將一對引物(上遊5'-GATTATGGCCTTGGGCTCCCCCAGGAAA(SeqIDNO:117))和下遊5'-GGGCTATTGAATCACTTTAGGCTTCTCTGGACTGTTG(SeqIDNO:118))用於PCR擴增全長短尾猴ALK-1基因。實施例11.通過流式細胞術(FACS)測定細胞表面結合特徵和靈長類交叉雜交為產生可利用流式細胞術(FACS)檢測抗ALK-1結合親和力的ALK-l過表達細胞系，人、短尾猴和大鼠的全長ALK-1基因被分別克隆入Invitrogen的pcDNA5/FRT/ToT0P0(CatalogNo.K6510-20)，並轉染入293Flp-InT-Rex宿主細胞(Invitrogen，CatalogNo.R780-07)。用潮黴素進行篩選，從而獲得最終的穩定細胞系。代表性全長ALK-1蛋白的過表達是通過四環素(2jjg/mL)得以實現，37XV5%0)2孵育24小時。用FACS測定抗ALK-1mAbs對細胞表面ALK-1的結合親和力，利用ALK-l蛋白過表達的293穩定細胞。細胞用胰酶-EDTA消化，並用水冷的PBS-SA洗滌。細胞被鋪到96孔板以後，用血清進行封閉，並與不同濃度的特異性mAb在4"C孵育1小時。接著，洗滌細胞，並與連接了R-PE螢光基團的抗人K第二抗體孵育，其後用FACSCalibur流式細胞儀(BDBiosciences)進行分析。在不設定門的條件下，每個樣品收集10，000個細胞。如表9所示，每個樣品直方圖的幾何平均值對mAb濃度作圖，並在擬合成兩狀態平衡模型(two-stateequilibriummodel)後計算每個mAb的KD。人和靈長類相當的FACS實驗實施例在圖3中給出。表9FACS測得的抗ALK-1單克隆抗體對細胞表面人或短尾猴ALK-1的平均結合親和力(KD)結果抗體KD(nM)人短尾猴1.12.16.72.01.27.13.72.21.162.15.63.04.38.19.33.44.58.114.06.74.72.16.43.85.13.13.21.61.31.13.21.74.24:17.63.14.62.12.30.784.68.18.49.0此外，FACS分析顯示1.12.1與大鼠存在非常有跟的交叉結合(KD>100nM)，並且，由於大鼠/人和小鼠/人ALK-l之間的ECD序列同一性分別為74%和68%，預期1.12.1與小鼠存在非常低的交叉結合。FACS也用於測定重組1.12.1mAb變體的KD。如表10所示，結果表示與重組抗體相似的結合親和力。132表IOFACS測得的1.12.1(M29I/D19A)變體對細胞表面人或短尾猴ALK-1的平均結合親和力(Kd)結果tableseeoriginaldocumentpage1331.12.l是mAb1.12.l變體，分離自雜交瘤。1.12.l(rWT)是作為表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。1.12.1(M29I)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.l變體，其中重鏈29位的曱硫氨酸被異亮氨酸取代。1.12.1(D19A)是作為含單個特定胺基酸突變的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體，其中輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代。1.12.1(M29I/D19A)是作為含兩個特定胺基酸突變(重鏈29位的甲硫氨酸被異亮氨酸取代以及輕鏈19位的天門冬氨酸被丙氨酸取代)的表達的重組mAb的mAb1.12.1變體。Fab1.12.1(M29I/D19A)是mAb1.12.1(M29I/D19A)的Fab片段，通過番木瓜蛋白酶水解1.12.1(M29I/D19A)IgGl獲得。實施例12.Taqman分析IdlHUVECs(Biowhittaker，Cat.#CC-2519)被鋪在24孔板上，12000個細胞/孔，用600pi完全HUVEC培養基(EGM-2Bulletkit,Biowhittaker,Cat.#CC-3162)懸浮，培養過夜。第二天，細胞通常50%匯合。去除完全培養基，加入2Q0pL飢餓培養基(只加0.2%FBS的ebm-2)。細胞孵育2小時。接著，用40mL溶於PBS的抗體溶液處理細胞。低壓凍幹的Ab用無菌PBS溶解。最後，細胞用ly。FBS/基礎培養基(終濃度)處理30分鐘，去除培養基，根據廠商的實驗設計用400jnLRTL緩衝液(Rneasy96kit,Qiagen，Cat.#74182)裂解細胞。其後，利用RNeasy試劑盒(根據廠商的實驗設計)製備RNA。RNA被提取，並用RiboGreen的RNA定量試劑盒(Molecularprobes,Cat.#R-11490)進行定量。等量的總RNA被用於實時PCR，從而檢測Idl的RNA表達(ABI7900儀器)。PCR利用TaqmanOneStepPCRMasterMixKit(ABI，Cat.#4309169)完成，並利用下面列出的ID1引物/探針序列。PCR通過40個循環完成，利用下面的退火和擴增條件95匸，15秒，60匸，l分鐘。TaqMan探針CPG連接的5'-6-FAM和3'-TAMRA。名稱IDl探針序列CCAGCACGTCATCGACTACATCAGGGA(SeqIDNO:119)TaqmanPCR引物名稱ID1-F序列AAGGTGAGCAAGGTGGAGATTC3'(SeqIDNO:120)名稱ID1-R序列TTCCGAGTTCAGCTCCAACTG3'(SeqIDNO:121)1.12.1(M29I/D19A)前導分子(包括1.12.1序列變體)以及Fab衍生物的Idl滴定實施例在圖4和5中給出。該分析的平均ICs。值總結在表11中。所有ICs。測定重複進行三次。實施例13.用來自LI-CORBiosciences的Odyssey紅外成4象系統(OdysseyInfrared成像系統)檢測Smadl磷酸化(24孔板)HUVECs(Biowhittaker，Cat.#CC-2519)被鋪在24孔板上，18000個細胞/孔，用600p1完全HUVEC培養基(EGM-2Bulletkit,Biowhittaker，Cat.#CC-3162)懸浮，培養過夜。第二天，細胞通常50%匯合。去除完全培養基，加入200mL飢餓培養基(飢餓培養基只加0.2%FBS的EBM-2)。細胞醉育2小時。接著，用40jaL溶於PBS的抗體溶液處理細胞3小時。最後，細胞用0.3x完全培養基(終濃度)處理35分鐘，去除培養基，用80inLl.lx樣品緩沖液(Invitrogen，Cat.No.NP0007)裂解細胞。磷酸化的Smadl通過Western印跡測定，利用XCellSurelockMini-Cell和BlotModule(Invitrogen，Cat.#EI0002)。磷酸化的Smadl利用抗磷酸化Smadl兔抗體進行檢測(CellSignallingCat.NO.9511)，接著，該抗體被IRDye800連接的抗兔的IgG檢測到(RocklandImmunochemicals,Cat.No.611-732-127)。砩酸化的Smadl利用Odyssey成像儀(OdysseyInfraredImager)(Li-Cor)進行定量。Actin(SantaCruz,#sc-8432)用於校正(抗鼠Alex680，MolecularProbe,Cat.No.A-21058)。該分析的平均ICs。值總結在表11中。所有ICs。測定重複進行三次。表ll克隆ID1TagmanIC50nMpSmadlWesternIC50nM1.11.1ndnd1.12.1(M29I/D19A)16181.13.1t100871.27.182701.29.194821.31.124211.162.175151.183.158174.24.1100824.38.187524.58.114154.62.124344.68.11411104.72.121355.13.13068實施例14.抗ALK-l單克隆抗體的內攝特徵FACS用於監測殘留在細胞表面的受體ALK-1以及中和抗體的時間135過程。殘留在細胞表面的ALK-1通過一個標記抗體進行檢測，該標記抗體能夠結合細胞表面的ALK-l,與中和抗體識別不同的抗原表位。鑑定了一個抗人ALK-1ECD的鼠mAb(R&Dsytems,Cat.No#AF310)，在本實驗中作為標記抗體使用。利用內皮細胞系HUVEC和HUAEC研究內攝的時間過程。細胞在37°C、5%C02的條件下培養於24孔板，每孔含有200iiL完全培養基。在48小時的ll個時間點中，每個時間點在一個孔中加入2jjL1mg/mL抗體(中和抗體的終濃度為10yg/mL)。接著，平板放回到37°(;孵箱，直至0小時時間點，將平板置於冰上以終止內攝過程。在該時間點，標記抗體被加入孔中(終濃度為10jug/mL)並在水上孵育1小時。接著，細胞用PBS洗滌，用胰酶消化，並轉移到96孔板上。其後，細胞經過洗滌，封閉，並用含有不同螢光基團的第二抗體處理，從而同時檢測殘留在細胞表面的中和抗體和受體ALK-1。樣品在FACSCalibur流式細胞儀上進行分析，每個樣品計數3，000-5,000個細胞。計算每個樣品在特定螢光通道中的幾何平均值，並對時間作圖。數據被擬合成一個緩和的線性趨勢方程(amodifiedradio-decayequation)，從而獲得內攝半衰期(t1/2)以及內攝作用達到穩態時殘留在細胞表面的中和抗體或受體ALK-1的百分數。1.12.1(M29I/D19A)內攝半衰期為2小時左右。當50%抗體被內攝時，達到平衡。購買自R&Dsystems的一個多克隆抗體(Cat.No#AF370)內攝半衰期為1小時，並在~70%受體被內攝時達到穩態(圖6)。在本發明其它抗ALK-1人mAbs中觀察到相似的內攝特徵(未給出)。實施例15.建立人包皮-SCID嵌合體鼠手術步驟在先前已公開的步驟的基礎上加以大量改良，例如H-CYan，etal"Human/SevereCombinedImmunodeficientMouseChimeras,AnExperimentalInVivoModelSystemtoStudytheRegulationofHumanEndothelialCell-LeukocyteAdhesionMolecules",/.C///./"re"91:986,1993;J.Varner"RegulationofAngiogenesisin136VivobyLigationofIntegrina5blwiththeCentralCel卜BindingDomainofFibronectin"J邁er./.156(4):1345，2000;K.Tahtis，etal"ExpressionandTargetingofHumanFibroblastActivationProteininaHumanSkin/SevereCombinedI咖unodeficientMouseBreastCancerXenograftMode"脂.Ca飾r.Ther.2(8):729，2003。從NationalDiseaseResearchInstitute和CooperativeHumanTissueNetwork獲得人包皮塊後，去除其不健康的區域，並轉移到RPMI培養基中(Cellgro/Mediatech，Cat#MT-15-040-CV，添加青黴素和鏈黴素(Gibco/LifeTech,Cat#15070-063))(每500mLRPMI加入5mL青黴素/鏈黴素儲存液)。利用無菌有蓋培養亞中的手術刀和鑷子，皮膚被修剪成8x13mm左右的橢圓形，不含任何潰爛區域和結締組織，使用前儲存在水中。適當體積(4jiL/g動物體重)的100mg/mL氯胺酮(KetasetTR，FortDodgeAnimalHealth)/1mg/mL美託咪定(PfizerAnimalHealth-Dormitor)溶液被腹膜內注射入SCID小鼠的腹部(即，以45。角度，位於皮膚下，但沒有過於深入中心)。麻醉後，小鼠給予眼睛潤滑劑，皮下注射優洛芬(10mg/kg,FortDodgeAnimalHealth)，並剔除手術位置的毛。手術區用Clorahexiderm(Butler，Chclo-Scrub40,cat#WAB20109)如外科手術般洗滌3次，接著用酒精洗滌，從手術位置的中心開始，向外以環形運動，避免從髒的區域回到乾淨區域。小鼠轉移到準備好的手術艙中，並放置在加熱的水墊上(GaymarIndustries,cat#TP500T/Pump)，維持在37°C。接著，小鼠在整個手術過程中接受異氟醚麻醉。小.鼠背部用手術單覆蓋，露出手術位置。用鑷子夾起小鼠皮膚，並用彎形手術剪一次性剪去一塊橢圓形皮膚組織。將一塊適當大小的人皮膚放置在小鼠上。人皮膚和小鼠皮膚用Ethilon縫線(Ethiconcat#697H)縫合在一起，從橢圓的頂部開始，其後是底部，接著是右側最遠處，最後是左側最遠處。兩者之間可縫合更多次以進一步縫合組織。在皮膚周圍，等距離縫合8次左右。在手術過程中，含有生理鹽水的注射器在皮膚/小鼠的手術傷口變幹時用於衝洗。在傷口上放置一繃帶。接著用透明膠帶(3MTegadeim)寬鬆地纏繞繃帶。膠帶被剪成一定大小，使其可以覆蓋比繃帶略大的區域。接著，小鼠被給予阿替美唑(50-100jjL，PfizerAnimalHealth一Antisedan)，並在加熱的籠子中復甦5-10分鐘。7-10天以後，去除膠帶和繃帶，在第15天，大多數皮膚表現為斑點。完全治癒出現21-28天之間，此後，皮膚準備接種腫瘤細胞。圖8所示是關於植入皮膚解剖切片組織學(H&E染色)分析的實施例。植入皮膚的組織學類似於Tahtis，etal"ExpressionandTargetingofHumanFibroblastActivationProteininaHumanSkin/SevereCombinedI咖unodeficientMouseBreastCancerXenograftModel"顏.Cs腳r.T^er.2(8):729，2003所描述的小鼠所移植的皮膚的特徵。h.e.:人表皮層；h.d.:人外胚層。實施例16.人包皮-SCID嵌合體鼠的膠原模型膠原l儲存液(cat#354236,Becten-Dickinson)用0.02N的醋酸稀釋成4mg/mL，植入前在冰上保存。酸性的膠原溶液(8份)與10XM199(Sigma,Cat#M9163)(1份)和人血漿纖維連接蛋白(Fn)(cat#354008，Becten-Dickinson)混合，4吏Fn的終濃度達到90pL/mL;加入NaOH(1.0N)調節pH為7.2左右。使用前，膠原/Fn混合物在冰上保存。利用上面的膠原/Fn混合物和血管生成抑制劑製備植入混合物，有或無人微血管內皮細胞(HMVEC)(CascadeBiologies,Cat#C-010-5C)。HMVECs用PBS製備成6x1(t個細胞/mL。50-100yL植入混合液通過皮內注射植入scid嵌合體鼠的包皮中。7-14天以後，獲取膠原栓，用OCT化合物(cat#4583，SajuraFinetek，CA)包埋，冷凍切片用於免疫組織化學分析。包皮中的膠原栓通過Trichrome試劑盒(cat#KC1641,MaterTech，CA)鑑定為藍染，如圖9(A)所示。人血管是通過人P-CAM的染色得以鑑定，利用抗人CD-31抗體(克隆13.3，VectorLaboratories)(圖9(B))。表12總結了包皮-SCID嵌合體鼠膠原模型的人血管染色和定量。表12.膠原模型結果的總結tableseeoriginaldocumentpage139通常，在手術移植後5-IO周之間，小鼠可用於這些實驗。M24met細胞系由Mueller及其合作者描述在"Tissuefactor—initiatedthrombingenerationactivatesthesignalingthro邁binreceptoronmalignantmelanomacells"，CancerResearch,55(8):1629-32,1995中。M24met細胞懸液製備如下80%匯合的M24met細胞洗滌後，用胰酶/EDTA(Gibco，Cat#25200-056)消化，並收集在PRMI(Cellgro/Mediatech，cat井MT-15-040-CV)培養基中，培養基添加10%FBS(Cellgro/Mediatech，Cat#AKD-11775)和2mML-穀氨酖胺(Cellgro/Mediatech，Cat#25-005-CI)。細胞在600rpm離心5min，1用無菌PBS重懸。細胞數目用CoulterCounter(BeckmanCoulter,ModelZ2)估計。細胞在600rpm離心5分鐘，並用膠原/Fn(3mg/ml)混合液重懸，獲得4xl(T個細胞/ml的細胞懸浮液，用於移植。接種時，2xl6以上的細胞皮內注射(50nl,4xl0'個細胞/ml)入小鼠所移植的皮膚。移植後5-7天，可觸及到腫瘤，小鼠在給藥前被隨機分成對照組和治療組。對照組定義為不給藥，給予溶解抗ALK-1抗體的溶劑，或者給予同種型配對的IgG2人單克隆抗體抗KLH(輝瑞)的動物。治療組定義為給予抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)的動物。實施例18.人和鼠CD-31免疫螢光(IF)雙重染色冰凍組織切片在空氣乾燥後，用丙酮(Fisher,Cat#A16S-4)在-20。C固定10分鐘。樣品再次空氣乾燥，並用PBS洗3次，每次5分鐘。樣品用溶解於PBS的5%兔血清(VectorLaboratories,Cat#S-5000)在室溫下封閉30分鐘。用5%兔血清製備第一抗體混合液，抗人CD-31抗體(SantaCruz，Cat#SC1505)和抗鼠CD-31抗體(Pharmingen,CloneMecl3.3，Cat#01951A)分別以1:100和1:150稀釋。上述抗體混合液被加到組織樣品中，室溫下1小時。封閉後的切片用PBS洗3次，每次5分鐘，接著與第二抗體混合液在室溫下孵育1小時。第二抗體混合液用PBS/0.05%吐溫20(Sigma,Cat#P1379)製備，德克薩斯紅標記的兔抗羊抗體(JacksonLabs，Cat#305-075-003)和FITC標記的兔抗大鼠抗體(JacksonLabs,Cat#312-095-003)。利用凍存的抗體時，抗體以1:50稀釋，或者，利用新鮮的抗體時，抗體以1:100稀釋。切片再次用PBS洗3次，每次5分鐘，接著用Vectashield(HardSet,含DAPI的包埋劑，VectorLab,CA，Cat#H-1500)包埋。切片在圖像分析前4TC避光保存。用OlympusBX60螢光顯微鏡進行圖像分析，用Olympus數碼彩色照相機攝取圖片。圖片攝取自3-5個視野/切片，l張切片/動物，4-7隻動物/組，抗人CD-31陽性染色所指示的血管區通過3個工作人員利用ImageProPlusv4.5(MediaCybernetics)進行定量。藥效學終點(組平均)表示為相對於對照組的人CD-31抑制百分數，140或者表示為人血管的總面積。統計學意義通過AN0VA得以測定。圖10所示是人包皮SCID嵌合體鼠中M24met腫瘤的人血管(紅色)和鼠血管(綠色)的免疫螢光圖。實施例19.人CD-31免疫組織化學(IHC)染色冰凍組織切片在空氣乾燥後，用丙酮在-20。C固定IO分鐘。樣品再次空氣乾燥，並用PBS洗2次，每次5分鐘。樣品用0.075%&02/甲醇(FisherCat#A433-4)孵育15分鐘，並用PBS洗3次，每次5分鐘。樣品用5。/。兔血清/PBS封閉30分鐘，接著與抗人CD-31的抗體(SantaCruz，Cat#SC1505)在室溫下孵育1小時，抗體用5%兔血清以1:100稀釋。樣品用PBS洗2次，每次5分鐘，接著與兔抗羊抗體(VectorLabs，Cat#BA-5000)在室溫下孵育35分鐘，抗體用5%兔血清以l:200稀釋。接著，切片用PBS洗2次，每次5分鐘，加入新鮮配製的抗生物素蛋白鏈菌素(VectorLabs，ABCElitekit,Cat#PK-6100)。切片再次用PBS洗2次，每次5分鐘，接著在二氨基聯苯(DAB)(VectorLabs,Cat井SK-4100)中顯色。切片用PBS洗2次，每次5分鐘，接著用Mayers蘇木精(Sigma,Cat#HHS-32)染色5秒。樣品用diH20沖洗，並在稀釋的(1LdiH20中加入5ml儲存液)氨溶液(Sigma，Cat￡A-6899)中短暫浸泡2次，再次用diH20沖洗。接著，樣品用70%，90%和100%的乙醇(Harleco，Cat#65347/85)脫水，每個1分鐘，最後用二曱苯(JTBaker,Cat#516，09)。切片用Cytoseal60(StephensScientific,Cat#8310-4，)包埋，並蓋上蓋玻片，用於圖像分析。圖11所示是人包皮SCID嵌合體鼠中M24met胂瘤的人血管(棕色)的IHC圖。實施例20.抗ALK-l抗體l.12.1(M29I/D19A)的治療方法用於治療時，給藥可通過皮下注射(sc)或靜脈注射(iv)完成。通常，每個實驗給予一次1.12.1(M29I/D19A)抗體。需要時，在第9天或第10天，第二次給予ALK-1抗體。有時候，多個劑量水平，即l、5、10、50mg/kg，可用於研究人血管生長的劑量依賴性抑制。每天觀察動物，每周三次用測徑器測量肺瘤。在第14天到第17天時，腫瘤在250-350mms之間，從小鼠中取出腫瘤，並用0CT包埋，冷凍，用於IF或IHC分析。圖12所示是人包皮SCID嵌合體鼠中1.12.1(M29I/D19A)處理(10mg/kg)的M24met腫瘤和對照胂瘤的人血管(紅色)和鼠血管(綠色)的代表性免疫螢光圖。人包皮SCID嵌合體鼠中人血管被1.12.1(M29I/D19A)劑量依賴性抑制，其結果在圖13中給出，相關實驗的總結在表13中給出。表13:SCID嵌合體模型中M24met腫瘤的人血管生長抑制和體內模型特徵的總結tableseeoriginaldocumentpage142IgG(第瘤生長抑制1.12.110IV5和40(M29I/mg/kg10D19A)天)非特異10SC給藥014第一次測試M24met性人IgGmg/kg2次(第1.12.1(M29I/D19A)劑量依賴性抑制人CD31的活性.1.12.110SC5和43觀察到一些劑量依賴性效,1/mg/kg10應。PK結果表示單次給藥足D19A)天)以引起CD31的顯著降低。1.12.1l邁g/kgSC50未觀察到腫瘤生長抑制(M29I/D19A)1.12.10.lmg/SC20(M29I/kgD19A)未給藥Omg/kg無無ND16第二次測試同種型10SC給藥01.12.1(M29I/D19A)劑量依M24met配對的IgGmg/kg1次(第賴性抑制人CD31的活性。觀察到明確的抗-CD31劑量非特異10SC5天)ND依賴性效應。未觀察到胂瘤性人mg/kg生長抑制IgG1.12.11sc24(M29I/mg/kgD19A)1.12.15sc59(M29I/mg/kgD19A)1.12.110sc72(M29I/mg/kgD19A)同種型10sc給藥0141.12.1(M291/D19A)最後的配對的mg/kg1次大劑量範圍試驗.實驗表現IgG2(笫出良好的劑量依賴效應.數M24met1.12.1(M29I/D19A)1mg/kgsc5天)33據擬合成S形劑量效應曲線，獲得ICs。為93nM.未觀察到腫瘤生長抑制1.12.13sc41節1/mg/kgD19A)1.12.15sc60(M29I/mg/kg143tableseeoriginaldocumentpage144實施例21.體內ECs。測定人包皮SCID嵌合體鼠皮內移植入M24met細胞，並用1、3、5、7.5、10和50mg/kg的抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)或同種型配對的抗人KLH抗體(10mg/kg)處理(SC)。實驗結束後，每個腫瘤的人血管區根據上述方法定量。抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)在鼠血漿中的濃度利用下面描述的方法進行測定小鼠的血清樣品通過ELISA(酶聯免疫吸附試驗)用於分析抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)的濃度。ELISA板用溶解於PBS的10ug/ml羊抗人IgGFc特異性抗體(Pierce,cat#31123)4。C孵育過夜，接著用StartBlock封閉緩衝液(Pierce,cat#37542)在室溫下封閉1小時。血清樣品在分析前用StartBlock封閉液稀釋100倍或1000倍。用稀釋100倍和1000倍的空白血清製備2組標準品。標準品和稀釋的血清樣品在平板上孵育1小時。結合的抗ALK-1抗體1.I2.1(M"I/D19A)用辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗人IgG(Fab特異的)抗體(Sigma,cat#A0293)進行檢測。利用的底物是3，3'，5，5'-四甲基聯苯胺(Sigma,cat#T8665)。在Vmax酶標儀(MolecularDevices,MenloPark,CA)上讀取450nm的吸收度。標準曲線用非線性回歸進行擬合。該分析的檢測限是10ng/ml的抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)。SCID小鼠血漿中抗ALK-1抗體1.12.1(M29I/D19A)的濃度在圖15中給出。圖15表示1.12.1(M29I/D19A)在M24met包皮SCID嵌合體模型中的估計EC5。。每個治療組的人血管面積對實驗過程(14天)中的平均血漿PK作圖。擬合曲線通過Graphpad(Prizm)的S型劑量依賴程序(SigmoidalDoseDependentprogram)得以產生。從擬合曲線中獲得EC5。為93ng/ml(EC5。定義為人血管面積與對照組相比降低50%所需的血漿濃度)。所有在本說明書中引用的公開、專利和專利申請，如果每個公開或專利申請特別被指明是以引用的方式併入本文中，則全部以引用的方式併入本文中。上述發明已經通過圖解和實施例得以詳細描述，從而增加理解的清晰度，但是，在不脫離附加的權利要求的範圍或宗旨的條件下，所屬領域技術人員可以在本
發明內容的幫助下對本發明加以某些變化和改良，權利要求1.結合ALK-1的單克隆抗體或抗原結合部分，其包括包括SEQIDNO6的第一個可變區和包括SEQIDNO8的第二個可變區。2.權利要求1的單克隆抗體，其包括SEQIDNO:2的重鏈胺基酸序列和SEQIDNO:4的輕鏈胺基酸序列。3.權利要求1的單克隆抗體，其包括SEQIDNO:100的重鏈胺基酸序列和SEQIDNO:102的輕鏈胺基酸序列。4.權利要求1的單克隆抗體，其包括包括SEQIDNO:6的重鏈和包括SEQIDNO:8的輕鏈。5.權利要求1或4的單克隆抗體，所述單克隆抗體選自IgGl或IgG2。6.單克隆抗體或其抗原結合部分，其結合ALK-1，並至少具有至少一個選自下組的其它性質a)結合靈長類ALK-1的胞外域，且具有通過表面等離子共振技術測得的親和力值5nM或更小；b)結合人ALK-1的胞外域，且具有通過表面等離子共振技術測得的親和力值250pM或更小；c)對人ALK-l的解離速率(k。ff)為5x10—3s—'或更小，該解離速率是通過表面等離子共振技術測得的；d)結合靈長類ALK-1，且L為50nM，所述K。是通過流式細胞儀測得的；e)具有大於1.5的KD(嚙齒類)/KD(靈長類)；f)具有通過抑制ALK-1某一特定下遊靶基因Idl上調而測定的IC5。150nM或更小；g)具有通過用WesternBlotting測定Smadl砩酸化的抑制而測得的IC5o:150nM或更小，通過；h)通過IHC分析人CD-31信號，在移植了人包皮組織的SCID小鼠中與對照樣品相比至少40%地抑制人血管生成，其中人黑色素瘤M24met肺瘤細胞是皮內移植的；i)通過IHC分析人CD-31信號，在移植了人包皮組織的SCID小鼠中與對照樣品相比至少50%的抑制人血管生成，其中膠原皮內移植的；j)與選自如下組的抗體竟爭結合於ALK-1，所述組為1.11.1、1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.12.1(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38,1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1;k)與選自如下組的抗體交叉竟爭結合於ALK-1，所述組為1.11.1、1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1,1)、1.12.1(D19A)、1.12.1(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1;l)結合至與選自下組的抗體相同的ALK-1表位，所述組為1.11.1、1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.12.1(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56,1、5.57.1和5.59.1;m)以與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.12.1(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27,1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1的抗體基本相同的Kd結合於ALK-1;以及n)以與選自1.11.1、1.12.1、1.12.1(M29I/D19A)、1.12.1(M29I)、1.12.1(D19A)、1.12,1(rWT)、1.13.1、1.14.1、1.151.1、1.162.1、1.183.1、1.27.1、1.29.1、1.31.1、1.8.1、1.9.1、4.10.1、4.24.1、4.38.1、4.58.1、4.62.1、4.68.1、4.72.1、5.13.1、5.34.1、5.53.1、5.56.1、5.57.1和5.59.1抗體基本相同的K。ff結合於ALK-1。7.根據權利要求6的抗體或其抗原結合部分，其包括Vh結枸域，該結構域的胺基酸序列至少90%相同於SEQIDN0s:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中的任一個。8.根據權利要求6的抗體或其抗原結合部分，其包括Vl結枸域，該結構域的胺基酸序列至少90°/。相同於SEQIDN0s:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中的任一個。9.根據權利要求6的抗體或其抗原結合部分，其中，VH結構域選自SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104，或由於至少一個保守胺基酸置換而不同於SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中任一個的序列中的任意一個，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，而l結構域獨立選自SEQIDNOs:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127，或序列由於至少一個保守胺基酸置換而不同於SEQIDNOs:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任一個的序列中的任意一個，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列。10.權利要求6的抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或部分選自(a)抗體或部分,其含有VHCDR1、CDR2和CDR3序列，所述VBCDR1、CDR2和CDR3序列分別獨立選自如下組中任一個序列的重鏈CDR1、CDR2或CDR3序列，所述組的序列為SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、,78、82、86、90或104中任一序列的序列，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；以及(b)抗體或部分，其含有VLCDR1、CDR2和CDR3序列，所述VLCDR1、CDR2和CDR3序列分別獨立選自如下組中任一個序列的輕鏈CDR1、CDR2或CDR3序列，所述組的序列為SEQIDN0s:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0s:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任一序列的序列，其中，至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的氛基酸序列相同於未置換的序列。11.根據權利要求10的抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或部分選自(a)抗體或部分，其含有VHCDR1、CDR2和CDR3序列，所述VHCDR1、CDR2和CDR3序列為如下組中任一個序列的VHCDR1、CDR2和CDR3序列，所述組為SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNOs:6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90或104中任一序列的序列，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；以及(b)抗體或部分，其含有VLCDR1、CDR2和CDR3序列,所述VLCDR1、CDR2和CDR3序列為如下組中任一個序列的VLCDR1、CDR2和CDR3序列，所述組為SEQIDNOs:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127，或由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNOs:8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92或127中任一序列的序列，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列。12.根據權利要求10或11的抗體或部分，其選自a)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:6所示的Va結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:6的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:8所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:8的Vl結枸域，其中，至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；b)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:10所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:10的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°乂的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:12所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:12的^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少9(^的胺基酸序列相同於未置換的序列；c)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:14所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:14的1結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:16所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:16的、結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；d)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:18所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:18的VH結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDN0:20所示的Vl結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:20的^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；e)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:22所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:22的1結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:24所示的l結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:24的Vl結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列；f)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:26所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:26的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:28所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:28的Vl結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/的胺基酸序列相同於未置換的序列；g)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:30所示的VH結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:30的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:32所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:32的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列；h)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:34所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:34的1結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:36所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:36的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；i)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:38所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:38的VH結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/的胺基酸序列相同於未所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:40的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；j)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:42所示的VH結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:42的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:44所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:44的^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；k)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:46所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:46的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:48所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:48的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；l)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:50所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:50的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDN0:52所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:52的^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；m)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:54所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:54的VH結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDN0:56所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:56的^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；n)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:58所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:58的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:60所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:60的、結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列；o)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:62所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:62的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:64所示的、結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:18的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；p)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:66所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:66的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:68所示的VL結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:68的Vt結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；q)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:70所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:70的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少9(^的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:72所示的Vl結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:72的V^結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；r)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:74所示的VH結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:74的VH結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:76所示的、結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:76的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；s)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:78所示的、結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:78的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:80所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:80的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；t)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:82所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:82的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:84所示的Vl結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:84的Vl結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；u)抗體或其部分，其包括SEQIDN0:86所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:86的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDN0:88所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDN0:88的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；v)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:90所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:90的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90°/。的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:92所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:92的Vl結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；w)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:104所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:104的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:127所示的1結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:127的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；x)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:6所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:6的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:127所示的Vl結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:127的Vl結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；以及y)抗體或其部分，其包括SEQIDNO:104所示的Vh結枸域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:104的Vh結枸域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，以及包括SEQIDNO:8所示的Vt結構域，或者由於至少一個保守胺基酸置換不同於SEQIDNO:8的l結構域，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列；13.根據權利要求5的抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或抗原結合部分包括利用人Vh4-31、VH3-11、VH3-15、VH3-33、VH4-61或Vh4-59基因的重鏈，或者其中至少一個保守胺基酸置換出現在人VH4-31、VH3-11、VH3-15、VH3-33、VH4-61或VH4-59基因中，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列，14.根據權利要求6的抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或抗原結合部分包括利用人VkA27、VkA2、VkAl、VkA3、VKB3、VKB2、VKL1或VkL2基因的輕鏈，或者至少一個保守胺基酸置換出現在人VKA27、VKA2、VKAl、VKA3、VKB3、VKB2、VKLI或VKL2基因中，其中，所述的至少一個保守胺基酸置換的序列至少90%的胺基酸序列相同於未置換的序列。15.根據權利要求6-14中任何一項的抗體，其是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子，或其衍生物。16.分離的核酸分子，其包括SEQIDN0s:1、3、5、7、95、101、103、126、128或129中任一所示的核苷酸序列。17.分離的核酸分子，其包括SEQIDN0s:9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89或91中任一所示的核苷酸序列。18.雜交瘤，其以ATCC保藏號PTA-6808保藏。19.根據權利要求18的雜交瘤產生的抗體或其抗原結合部分。20.結合ALK-1的抗體或其抗原結合部分，所述抗體或抗原結合部分包括選自下組的胺基酸序列a)SEQIDNO:25b)SEQIDNO:4;c)SEQIDNO:65d)SEQIDNO:85e)SEQIDNO:100;12f)SEQIDNO:102;g)SEQIDNO:104;h)SEQIDNO:127;i)以ATCC保藏號PTA-6864保藏的克隆中的插入核苷酸序列所編碼的VH胺基酸序列；以及j)以ATCC保藏號PTA-6865保藏的克隆中的插入核苷酸序列所編碼的Vt胺基酸序列。21.根據權利要求20的單克隆抗體或其抗原結合部分，其包括選自下組的重鏈胺基酸序列和輕鏈胺基酸序列a)SEQIDNO:2的重鏈胺基酸序列和SEQIDNO:102的輕鏈胺基酸序列；b)SEQIDNO:100的重鏈胺基酸序列和SEQIDNO:4的輕鏈胺基酸序列；以及c)SEQIDNO:100的重鏈胺基酸序列和SEQIDNO:102的輕鏈胺基酸序列。22.藥物組合物，其包括權利要求1-15或19-21中任一項所述的抗體或其抗原結合部分以及藥學上可接受的載體。23.在所需哺乳動物中抑制血管生成的方法，其包括如下步驟，即將治療有效量的權利要求1-15或19-21中任一項所述的抗體或其抗原結合部分或者權利要求22所述的藥物組合物施用至哺乳動物。24.特異結合ALK-1的人單克隆抗體或其抗原結合部分，其中，該抗體或部分包括含有CDRl胺基酸序列的重鏈可變區，其中所述的CDRl胺基酸序列選自(a)包括SEQIDNO:136的CDRl胺基酸序列，其中，1位的G被D取代並且5位的S被N取代；以及(b)包括SEQIDNO:136的CDR1胺基酸序列，其中，l位的G被E取代並且5位的S被N取代。全文摘要本發明涉及與活化素受體樣激酶-1(ALK-1)胞外域(ECD)結合的人單克隆抗體及其抗原結合部分，其對ALK-1/TGF-β-1/Smad11信號傳導通路具有消除作用。本發明還涉及衍生子人抗ALK-1抗體的重鏈和輕鏈免疫球蛋白以及編碼此類免疫球蛋白的核苷酸分子，本發明還涉及製備抗ALK-1人抗體的方法，含有使用這些抗體和抗原結合部分的組合物以及這些抗體。還涉及包含本發明的核酸分子的轉基因動物或植物。文檔編號C07K16/00GK101517068SQ200680041490公開日2009年8月26日申請日期2006年9月6日優先權日2005年9月7日發明者D·D·胡-洛,G·R·威克曼,J·A·湯姆森,J·張,K·K·阿蒙森,M·A·諾斯,S·M·卡利希克,S·S·貝洛斯基,S-A·科勒曼,V·比蒂安,王建英,欣蔣申請人:安進弗裡蒙特公司;輝瑞大藥廠