初乳的水解物和包含該水解物的皮膚美白組合物的製作方法

2024-04-15 06:54:05 1

初乳的水解物和包含該水解物的皮膚美白組合物
1.發明背景
1.發明領域
2.本發明涉及初乳的水解產物(「水解物」)和包含上述水解物的用於皮膚美白的化妝品組合物(「皮膚美白組合物」)。更具體地，本發明涉及通過水解初乳獲得的初乳水解物以及皮膚美白組合物，其包含上述初乳水解物作為其有效成分。
3.2.相關技術描述
4.人體器官中最大的器官是皮膚。皮膚由表皮和真皮組成。表皮包括連續的細胞分裂以形成多種類型的各層。此時，最外層的細胞死亡並變硬，這是保護身體免受外部應激的最傑出的防禦機制之一，且細菌也無法穿透皮膚。
5.皮膚有皮脂腺和汗腺，其中皮脂腺分泌皮脂，而汗腺分泌水分，因此人類產生皮脂膜來保護角質層自身。因此，可以保持人類皮膚始終處於溼潤、有光澤和光滑狀態。
6.就人類而言，當角質層的含水量為20％時，它是最理想的皮膚且美麗出眾。然而，皮膚可能會受到外部環境的影響而發生各種變化和老化，特別是暴露在陽光或其他外部光束下，從而導致皮膚疾病的發生。
7.特別是，當皮膚暴露在紫外線(uv)下時，皮膚變黑，且每個人的皮膚變黑程度不同。
8.大多數人都希望保持皮膚的純淨和清潔，尤其是呈現出偏愛白色皮膚的明顯傾向。
9.化妝品旨在保護皮膚免受外界影響，並裝扮和清潔皮膚。然而，如果仔細觀察化妝品的組分，就會發現其中含有一些對產品形成至關重要的成分，且與最初的含義和意圖不同，這些成分可能會刺激皮膚。例如，乳化劑、香料和防腐劑等屬於上述成分。由於這些成分主要由化學合成製備，對於敏感性皮膚，伴隨炎症反應、過敏、紅斑等的可能性越來越大。
10.近年來，隨著人們對天然化妝品的需求不斷增加，各種天然化妝品被開發出來。其中，還提出了使用牛乳或初乳製造化妝品的技術。
11.特別地，現有的初乳含有乳鐵蛋白，因此具有抗炎作用。眾所周知，乳鐵蛋白在調節腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和白細胞介素-1(il-1)中發揮作用(yamanaka,2003)。
12.此外，初乳含有胰島素樣生長因子-1(igf-1)，已知其可促進整體生長並調節細胞生長和擴增(uruakpa等人,2002年)。
13.初乳中所含的酪蛋白佔全乳成分的3％，約佔牛乳蛋白質的80％，並且已知在人體攝入時是一種過敏原(g.h.docena等人，1996年)。此外，儘管酪蛋白被用作化妝品成分，但其研究尚未充分實施。
14.此外，已知初乳含有去角質素(kwon yubin等，2007)，也已知含有抑制黑色素沉著的tgf-β(martinez-esparza m等，1997)，並且富含透明質酸，經證實具有極好的保溼效果(pedersen等人，2014年)。
15.作為用於皮膚護理或美白的化妝品成分，存在用於皮膚使用的傳統的化妝品，以
及作為食物攝入以顯示美容效果的內用美容品(食用美容品)也在發展中。
16.特別是，在牛乳或初乳作為天然成分變得流行的情況下，已知它們可以作為化妝品物質使用，具有不同的效果，例如皮膚保溼、改善皺紋、美白等。與牛乳不同，初乳包含不同的成分，且被認為是一種更好的物質，但是，在生產初期收集的初乳可能會腐爛，並且在儲存方面存在困難。此外，初乳難以處理，因此對其利用造成很大限制。
17.最近，發明人研究了基於初乳的發酵產物的功能性化妝品。在上述研究的基礎上，發明人在韓國專利申請公開號10-2019-0082159等中提出了一種基於初乳發酵產物的化妝品組合物，其在皮膚保溼、改善皺紋和美白等方面有效。
18.此外，作為使用例如初乳的現有化妝品組合物，韓國專利授權號10-0619289公開了一種美白化妝品的生產方法，其中初乳的白蛋白與熊果苷連接作為美白劑，韓國專利申請公開號10-2016-0110829提出了乳發酵產品的皮膚美白功效，韓國專利申請公開號10-2013-0108828提出了一種使用乳衍生的寡肽的美白化妝品組合物，以及韓國專利授權號10-2186872提出了一種包括乳外泌體的皮膚美白組合物。
19.此外，已經提出了許多具有不同類型功能性(例如美白)的化妝品組合物，其通過加工除初乳或牛乳之外的多種動物或植物天然資源而製備。
20.如上所述，在使用天然成分的傳統化妝品組合物中，特別傾向於優選使用由對人體非常有用的組分組成的牛乳和初乳。
21.關於公開了乳製品用途的上述專利或專利申請中的技術，已知初乳或牛乳直接使用或在發酵後使用。此外，還提出了初乳成分的不同功效和由於熊果苷的美白功效，使用初乳或牛乳的發酵物或其提取物的皮膚美白組合物等。
22.然而，上述常規技術包括牛乳或初乳的加工(例如發酵)，然而，上述工藝不能提供足夠的皮膚護理效果，並且不能充分利用初乳的特徵。
23.此外，尚未表明適用於使用初乳的化妝品的有效化妝品成分的技術，特別是具有良好皮膚美白效果的組合物。
24.本領域文獻
25.專利文獻
26.(專利文獻1)韓國專利申請公開號10-2019-0082159
27.(專利文獻2)韓國專利授權號10-0619289
28.(專利文獻3)韓國專利申請公開號10-2016-0110829
29.(專利文獻4)韓國專利申請公開號10-2013-0108828
30.(專利文獻5)韓國專利授權號10-2186872
31.發明簡述
32.本發明旨在克服上述問題，並基於對初乳成分可用性的研究結果，本發明的任務是提供通過水解初乳獲得的基於初乳的乳製品的水解產物及其新用途。
33.因此，本發明的目的是提供通過水解初乳獲得的初乳水解產物(「水解物」)。
34.本發明的另一個目的是提供初乳水解物的用途，其適用於皮膚美白組合物。
35.為了實現上述目的，本發明提供了一種通過水解初乳獲得的初乳水解物。
36.根據本發明的優選實施方案，初乳的水解可包括使用蛋白質水解(「蛋白水解」)酶水解蛋白質。
37.根據本發明的優選實施方案，本文使用的蛋白水解酶可以是選自風味蛋白酶、複合蛋白酶(protamax)、木瓜蛋白酶、蛋白酶、nutrease、鹼性蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶、dna糖基化酶、澱粉酶、核酸酶和解旋酶組成的組中的任何一種或多種。
38.此外，本發明可提供包含初乳水解物作為有效成分的皮膚美白組合物的用途。
39.根據本發明的優選實施方案，皮膚美白組合物可適用於化妝品組合物、食用美容品、保健食品組合物或藥物組合物。
40.本發明的初乳水解物可以通過水解來水解初乳中包含的特定有效成分，從而獲得色素沉著抑制效果和優異的美白效果。因此，與現有的牛乳、乳清或其發酵產物等類似原料相比，本發明的初乳水解物可表現出顯著優異的皮膚美白效果。
41.具體而言，本發明的初乳水解物可以通過簡單的工藝容易地生產，其是通過在傳統技術中廣泛使用的水解獲得的新形式的水解物，因此表現出高穩定性，且對人體沒有毒性。
42.根據本發明，可水解初乳以形成初乳的水解物，其中所產生的初乳水解物還具有遠優於粗初乳的成分配置，即組成成分。
43.因此，當使用本發明的初乳水解物製造化妝品等時，由於通過粗初乳水解產生的水解物的組成成分，化妝品可能表現出防止色素沉著和優異的美白效果，這與本領域已知的現有乳衍生加工的產品所表現的效果不同。因此，本發明的初乳水解對於製造具有防止色素沉著和優異的美白效果的化妝品等非常有用。
44.此外，本發明的初乳水解物也可適用於除美白化妝品組合物之外的對皮膚美白有效的內用美容組合物、保健食品組合物或藥物組合物。
45.附圖簡述
46.通過以下結合附圖的詳細描述，將更清楚地理解本發明的上述及其他目的、特徵和其他優點，其中：
47.圖1是與對照相比，在本發明實施方案中製備的初乳水解物在黑色素細胞培養溶液中的美白效果的實驗結果的示例性圖；和
48.圖2是與對照相比，在本發明實施方案中製備的初乳水解物在黑色素細胞自身中的美白作用的實驗結果的示例性圖。
49.發明詳述
50.在下文中，本發明將藉助其實施方案來更詳細地描述。
51.本發明的初乳水解物是一種比粗初乳具有更好利用度的水解產物，並且其本身具有新的物理性質。
52.本發明中獲得的初乳水解物具有優異的美白活性，因此，為了替代和補充通過化學合成產生的或從天然物質衍生的其他皮膚美白組合物，可將其應用於通過水解初乳生產天然化妝品組合物，從而提供一種具有提升的皮膚美白效果的皮膚美白組合物，用於其新用途。
53.本發明基於有效使用初乳作為水解原料並提高其可用性的意圖而開始。
54.根據本發明的優選實施方案，提供了通過水解初乳獲得的水解物和使用其的皮膚美白組合物。
55.根據本發明的優選實施方案，與其他乳製品(例如牛乳、乳清或其發酵產物)的水
解物相比，初乳的水解物表現出顯著優異的皮膚美白效果。
56.根據本發明，應用於初乳水解物的水解優選使用水解酶進行水解。
57.根據本發明的優選實施方案，適用於初乳水解的水解酶優選包括蛋白水解酶。
58.根據本發明的優選實施方案，本文中使用的蛋白水解酶可選自包括以下組成的組中的任何一種或多種：風味蛋白酶、複合蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶、nutrease、鹼性蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶、dna糖基化酶、澱粉酶、核酸酶和解旋酶。更優選地，可以使用風味蛋白酶、複合蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶、nutrease和鹼性蛋白酶中的一種或多種。
59.根據本發明的優選實施方案，具體而言，可以在水解之前或之後包括酪蛋白去除或酪蛋白巴氏滅菌法等的任何一個或多個過程。
60.本發明中使用的初乳優選通常在分娩後3天內製備的乳。
61.本發明中使用的初乳可以是家畜的初乳，例如奶牛、母山羊、野生白山羊等。
62.在本發明中，在各種類型的初乳中，可以使用奶牛初乳，其中初乳通常是包括家畜初乳的一個概念，例如母山羊、野生白山羊等，但不限於此。
63.根據本發明的優選實施方案，初乳可在快速冷卻後使用，然後在低溫下滅菌以製備基礎材料。在此過程中，可以使用無脂初乳作為基礎材料。
64.本發明中的低溫滅菌可根據常規的低溫巴氏殺菌方法進行。
65.根據本發明的優選實施方案，本發明的初乳水解物可以是其中在製造過程的任何隨機步驟中去除酪蛋白的水解物。
66.根據本發明的優選實施方案，例如為了去除酪蛋白，可以使用用作凝固酶的酶複合物。具體而言，例如，優選使用凝乳酶(rennet)。
67.同時，根據本發明的優選實施方案，本文使用的初乳可以是無脂初乳。在此方面，從初乳中去除脂肪的方法可包括普通離心、過濾、使用脂肪凝固劑等。
68.根據本發明的優選實施方案，初乳的水解物可在一個或多個其他過程(例如過濾、滅菌、提取或凍幹)後產生。
69.根據本發明獲得的水解物可在其生產後通過過濾兩次或多次來去除其中可能存在的細菌後使用。
70.本發明的水解過程可通過製備濃度為1-50％重量(「wt.％」)的初乳作為基礎材料，然後向其中添加0.1-5％重量(「wt.％」)的水解酶來進行。水解過程可在例如40至80℃的條件下進行1至12小時。獲得的水解物可在過濾後使用。
71.通過上述本發明方法獲得的水解物被證實具有非常有用的特性，這些特性不同於從現有的初乳或乳加工產品中衍生的任何成分的特性。具體而言，其被證實具有令人驚訝的出色的皮膚美白效果。
72.因此，本發明的特徵還在於初乳自身的水解物是一種新型的天然加工產品。
73.因此，本發明可包括通過初乳水解產生的初乳自身的水解物。
74.根據本發明的優選實施方案，本發明的水解物即使其用量非常小也可以表現出非常優異的美白效果。例如，當使用初乳時，採用0.1至500μg/ml、0.5至300μg/ml、1至200μg/ml、1至100μg/ml或甚至更小的用量(例如1至50μg/ml初乳)就表現出優異的美白效果。
75.也就是說，本發明的初乳水解物可以在比初乳更有利的條件下表現出皮膚美白效果。
76.因此，本發明的水解物，特別是初乳的水解物被證實顯著表現出例如酪氨酸抑制活性，即，抑制黑色素生成的作用。
77.黑色素是由酚類被氧化酶氧化而衍生的棕色或黑色聚合色素的上位術語，用於在活的生物體中吸收光。本發明的初乳發酵產物具有抑制黑色素細胞合成的顯著效果。
78.此外，本發明的水解物可排除酪蛋白等在進行純化時引起的缺點，使得功能性成分含量增加，從而表現出與其他乳製品或其發酵產品相比不可預測的更優異的皮膚美白效果。
79.因此，本發明提供了一種基於上述初乳水解物的皮膚美白組合物。
80.根據本發明的優選實施方案，具體而言，與現有美白組合物不同，本發明的初乳水解物即使使用少量水解物，仍然可以在抑制黑色素生成方面表現出實質性的和更優越的皮膚美白活性。同時，本發明水解物中所含的各種成分可以改善皮膚環境，使得天然化妝品可以產生清潔的皮膚環境並防止皮膚上發生色素沉著，因此非常理想地用作皮膚美白的化妝品。
81.因此，使用本發明的水解物的皮膚美白組合物可用於化妝品中，這是傳統技術中從未知道的天然美白化妝品的新概念。
82.根據本發明，使用上述水解物的這種美白組合物可以抑制黑色素的生成，從而表現出非常顯著的皮膚美白效果。
83.根據本發明的優選實施方案，通過上述方法產生的水解物可以各種形式添加到皮膚美白組合物中，例如，以任何形式的粉末、液體、納米膠囊、複合物等，並且優選以液體狀態添加。
84.根據本發明，含有上述水解物的用於皮膚美白的化妝品組合物可以用作化妝品製劑，例如化妝水(護膚液)、營養乳液、營養霜、按摩霜、營養精華液、清潔劑和面膜等，但它們並不特別限於這些。相反，其也可以用作具有不同功能效果的其他食品組合物或藥物組合物。
85.關於包括本發明水解物的美白化妝品，由於使用初乳作為原料，並且用於水解初乳的水解酶是傳統上用於製造食品的成分，因此與現有組合物相比，該水解物自身是高度安全的，並且可具有顯著優異的皮膚美白效果。
86.因此，如果將使用本發明水解物的皮膚美白組合物應用於在皮膚上使用的化妝品，則可以防止色素沉著或皮膚瑕疵的產生，此外，可以實現顯著優異的皮膚美白效果，因此有望成為非常有用的新概念的天然皮膚美白組合物。
87.此外，根據本發明的優選實施方案，該水解物可適用於表現皮膚美白效果的藥物組合物。此外，該水解物也可用作保健食品、內用美容組合物等的食品組合物。
88.因此，根據本發明的優選實施方案，該水解物用於皮膚美白的化妝品組合物非常有用，並且還可用於皮膚美白的藥物或醫療用品，例如皮膚軟膏、口服製劑等。
89.根據本發明的優選實施方案，當將水解物應用於藥物組合物時，例如，在皮膚軟膏的情況下，可將其以1至500μg/ml的量應用於皮膚數次。
90.具體而言，當使用適用於皮膚的皮膚美白化妝品材料將上述製劑生產成化妝品產品時，其劑量可為0.1至500μg/ml。
91.根據本發明的優選實施方案，更優選地，上述製劑可在任何情況下以1至400μg/ml
的劑量應用於皮膚。
92.因此，本發明提供了一種用於皮膚美白的化妝品組合物，其包括如上所述的水解物。
93.此外，本發明提供一種用於皮膚美白的藥物組合物，其包括如上所述的水解物作為有效成分。作為其示例，可包括用於皮膚美白的皮膚軟膏。
94.如上所述，根據本發明，該水解物可以用作皮膚美白組合物，化妝品可以使用其來製造，此外，該水解物可以根據需要應用於保健食品或藥物組合物，例如皮膚軟膏。
95.下文中，將通過實施例詳細描述本發明，但本發明不限於這些實施例。
96.實施例:初乳水解物的製備
97.在製備1升初乳後，向其中添加2％(w/w)的水解酶，然後將其在50℃的振蕩培養箱中處理2小時以進行水解。水解後，將產物在85℃下加熱2分鐘以完成酶水解。
98.水解完成後，在3000rpm下將產物離心30分鐘，收集上清液，然後通過0.22μm過濾器過濾。水解物在真空冷凍乾燥後使用。
99.實驗實施例1:使用黑色素瘤細胞評估皮膚美白
100.本實驗使用b16f1黑色素瘤細胞(小鼠黑色素瘤細胞系)作為細胞系實施。具體而言，b16f1黑色素瘤細胞粘附並生長在平板上，用0.05％胰蛋白酶-edta(gibco brl)處理，在細胞計數後用2x104個細胞/孔分配在24孔平板上，然後孵育24小時。在用新的10％fbs/dmem培養基替換孵育的細胞系後，將按濃度稀釋的樣品(對照和樣品a作為本實施例)分別在替換的培養基上預處理1小時。然後，每個樣品與1mmα-黑素細胞刺激素(α-msh)一起處理。作為陽性對照，使用熊果苷進行處理。
101.處理後，樣品經co2孵育(thermo)72小時。取100μl細胞培養液，移至96孔板上，然後在405nm處測量吸光度，以確定培養液中分泌的黑色素量。使用測得的o.d 405將測定量轉換為百分比。然後，基於100％的黑色素生成量，即，非處理組中黑色素瘤細胞生成的黑色素量，比較所處理樣品對黑色素生成的抑制程度。比較結果如圖1所示。
102.孵育後，通過使用0.05％胰蛋白酶-edta(gibco brl)處理，回收細胞，並在12,000rpm下離心5分鐘，然後去除上清液。向剩餘殘渣中添加100μl含有10％二甲基亞碸(dmso)的1n氫氧化鈉。將混合物在60℃下放置30分鐘，攪拌並混合，然後在405nm處測量吸光度，以定量測定黑色素的量。使用測得的o.d 405，將測定值轉換為百分比。然後，基於100％的黑色素生成量，即，非處理組中黑色素瘤細胞生成的黑色素量，比較所處理樣品對黑色素生成的抑制程度。比較結果如圖2所示。
103.參考圖1，作為黑色素細胞培養液的實驗結果，可以看出，與包括粗初乳在內的對照組相比，樣品a(實施例)表現出顯著優異的抑制效果。具體而言，在實施例(樣品a)的情況下，即使使用1ug/ml的非常少的量，也顯示出優異的黑色素抑制效果。
104.參考圖2，作為黑色素細胞本身的實驗結果，可以看出，與包括粗初乳在內的對照組相比，樣品a(實施例)表現出顯著優異的抑制效果，這與上述實驗基本相同。具體而言，在實施例(樣品a)的情況下，即使使用1ug/ml的非常少的量，也顯示出優異的黑色素抑制效果。
105.從以上實驗結果可以證實，本實施例中製備的初乳水解物具有顯著優異的皮膚美白效果。
106.實驗實施例2:細胞毒性實驗
107.mtt試驗是一種使用存在於活細胞的線粒體中的脫氫酶(「脫水酶」)測定細胞活力的方法，用於評估根據實施例的初乳水解物是否具有毒性。
108.本文使用的細胞系是b16f1細胞，含有10％fbs和100uls/p的dmem(達爾伯克改良伊格爾培養基,gibco)用作動物細胞培養基。將細胞放入96孔板的每個孔中，每孔4x103個細胞，並在37℃的5％co2培養箱中培養24小時。然後，將發酵的初乳提取物添加到培養基的平板中(實施例中的實驗組)，然後進一步培養72小時。將0.5mg/ml mtt溶液放入每個孔中，並進行4小時的反應。在去除上清液後，向其添加100μl dmso以完全溶解甲臢(formazan)晶體。使用平板讀數器測量520nm處的吸光度，以比較細胞活力。
109.比較測量結果，如下表1所示。
110.[表1]
[0111] 相對活力(％)對照100％實驗組101.3％
[0112]
如上表1所示，可以確認實施例的初乳水解物不具有細胞毒性。
[0113]
實驗實施例3:皮膚刺激實驗
[0114]
為了評估對皮膚的刺激程度，進行了人體斑貼試驗。對受試者(即30名20歲或以上的正常人)進行人體斑貼試驗。具體而言，分別在0.001％、0.01％、0.1％、1％和10％水溶性溶液中製備樣品(實施例)之後，通過finn室將每個樣品附著到上臂的內側部位48小時，然後移除，隨後首先讀取皮膚狀態。72小時後，進行二次讀取以確定皮膚反應的結果。評估結果表明，初乳水解物不會刺激皮膚。
[0115]
製備實施例：化妝品(面膜組合物)生產
[0116]
使用下表2中列出的組成成分和含量，分別分散和溶解水相和油相，然後混合在一起。然後，對混合物進行皂化並冷卻至室溫，從而製備面膜組合物。使用該組合物，生產了面膜。
[0117]
[表2]
[0118]
成分含量(重量％)硬脂酸6.5肉豆蔻酸28.0自乳化的單硬脂酸甘油酯3.0初乳水解物(實施例)12.0丙二醇5.0濃縮甘油10.0氫氧化鈉7.0乙二胺四乙酸鈉0.1白頭翁花(pasque flower)提取物0.5香料痕量純淨水配平