一種蘭科植物組織培養方法
2023-12-12 20:33:42 4
一種蘭科植物組織培養方法
【專利摘要】本發明公開了一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟：a.製備蘭科植物的生根苗；b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；c.菌化生根苗移栽；所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴。本發明先後對蘭科植物接種白蘑科真菌和摩西球囊黴，並選用多不飽和脂肪酸促進二者與蘭科植物共生，使組培時蘭科植物的生根苗獲得優異的抗旱、抗高溫、抗溼等抗逆特性，無需經歷煉苗便可直接移栽，不但有效縮短了生產周期，提高生產效率，更能有效地促進植物的生長。
【專利說明】一種蘭科植物組織培養方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物組織培養方法，具體涉及一種蘭科植物組織培養方法。
【背景技術】
[0002]蘭科植物是是最難繁殖的一類單子葉植物，傳統的蘭科植物繁殖通常是採用分株繁殖法實現的，其繁殖係數小，產業化程度低。而蘭科植物中的一些富有經濟價值的物種，比如天麻、石斛、金線蓮等，利用傳統育種方法實現其繁殖尤為困難。特別是其中的金線蓮，是一種瀕危珍稀的藥用植物。自然條件下金線蓮種子難以萌發(萌發率低於5% )。金線蓮植株矮小，根系不發達，再生能力差。金線蓮由種子到開花需要3~4年，常需與某些真菌，共生才能萌發，很難有實生苗栽培。而傳統的分株扦插等無性繁殖方式的成活率低、生長速度慢、繁殖率低，加之近年來人們對野生金線蓮資源的掠奪式採挖，其生境被嚴重破壞，致使野生金線蓮瀕臨滅絕。現對蘭科的培養主要集中在組織誘導、基
本培養條件篩選和理化因子的考查等方面。還沒有找到一個切實有效地培養技術用以解決蘭科植物誘導和增殖中存在的疑點和難點，從而影響了臺灣金線蓮的深入研究和應用。自然環境中蘭科幼苗的生長需某些真菌與其共生，內生真菌除了可為蘭科植物提供營養物質外，還可以促進其對礦物質的吸收，產生植物生長發育所需維生素及植物激素類物質，增強植物抗逆性及抗病力(參考周德平等發表在《上海農業學報》第2005.21 (3)期《蘭科植物內生真菌的功能及應用前景[J]》)。由此可見，採用蘭科植物組培苗與菌根真菌共生的方法，有著可促進植物生長、增強植物抗逆性及抗病力等優點，可以克服目前組培苗生長緩慢、抗逆性弱、死亡率高等一些缺點。目前，在蘭科植物共生方面，國外尚未報導，國內郭順星等採用石斛小燕(Mycenadendrobii),紫萁小燕(Mycena osmundicola),蘭小燕(Mycenaorchidicola),開唇蘭小燕(Mycena anoectochila)與金線蓮共生(專利申請號:02100779.9 ;專利號:ZL200510117703.3)，效果並不理想(高微微、郭順星等《中藥草》第2002.33(6)期中《三種內生真菌對鐵皮石斛、金線蓮生長影響的研究》)，主要表現在菌種難以侵染植物組織、難以在植物組織內正常生長、對植物抗逆性的增強效果不明顯等。同時上述方法需採用紫萁小菇等罕見的菌`種實現，成本較高而不利於技術的推廣。由於現有技術中通過組織培養技術獲得的蘭科植物幼苗生命力低，在培養瓶中經歷製備愈傷組織、誘導愈傷組織生根等處理中蘭科植物幼苗往往因為瓶中溼度高而發生軟腐病；在移栽前幼苗還需移出培養瓶進行的煉苗，以增強其對外界的適應能力。煉苗處理耗時較長，且在煉苗過程中幼苗成活率較低。
【發明內容】
[0003]有鑑於此，本發明提供一種成本低廉、成活率高、培養周期短的蘭科植物組織培養方法。
[0004]一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗。[0005]b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0006]所述生根苗可通過製備愈傷組織，並誘導其生根獲得；或直接誘導腋芽發育獲得生根苗。除此以外，任意一種通過組織培養製備蘭科植物生根苗的方法均適用於本發明。通過組織培養方法培育生根苗的過程通常需要在將其浸泡遭高溫、高溼的密封培養瓶中進行，但蘭科植物的組織普遍存在畏熱怕溼的問題，在上述環境中容易發生軟腐病。白蘑科真菌是一種常見的食用菌，將其菌種與生根苗共同接種至共生培養基中，可有效提高其對培養瓶內的高溼、高溫條件的耐受能力，從而提高生根苗培養階段的成活率。所述摩西球囊黴是一種自然界常見的真菌，通常的宿主為黃瓜、番茄等葫蘆科或茄科的植物。本發明的發明人在研究中發現，本發明中接種摩西球囊黴的蘭科植物生根苗具有優秀的抗旱等耐受外界環境的抗逆特性，有一定證據表明上述抗逆特性是在所述白蘑科真菌及摩西球囊黴協效產生的，從而使本發明中的叢生芽無需經歷漫長的煉苗即可進行移栽培養。但摩西球囊黴對蘭科植物的侵染率較低，特別是當前序處理中生根苗已被接種白蘑科真菌的前提下，存在優勢菌群的情況下摩西球囊黴很難成功地成為移栽的叢生芽的內生菌。因此本發明特在叢生芽移栽至移栽基質並接種摩西球囊黴後，對生根苗及移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。經實驗驗證，多不飽和脂肪酸能夠有效提高摩西球囊黴對本發明叢生芽的侵染效率，降低白蘑科真菌與摩西球囊黴的拮抗作用，使之能夠與白蘑科真菌共同成為叢生芽的內生菌，使得上述的生根苗的抗逆特性表達更加穩定。同時，多不飽和脂肪酸本身對生根苗的生長同一具有明顯的促進作用，因此本發明選用噴灑的方式施加多不飽和脂肪酸培養液，使之能夠與生根苗地面部分 解除，從而獲得刺激生根苗生長的效果。
[0007]所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸/亞油酸/共軛亞油酸/ a -亞麻酸/ Y -亞麻酸/全順式_4，7，10, 13，16，19- 二十二碳六烯酸/全順式_5，8，11，14，17- 二十碳五烯酸中的一種或多種的混合物；所述培養液為濃度在lmL/L-3ml/L的所述多不飽和脂肪酸與水的乳濁液。
[0008]任意一種市售的多不飽和脂肪酸均能夠實現本發明的效果，經發明人驗證，當多不飽和脂肪酸為碳鏈長18-22、含有2-6個不飽和鍵的多不飽和脂肪酸時，其對摩西球囊黴侵染效率、生根苗生長效率的促進效果最優。在這個範圍的多不飽和脂肪酸中，花生四烯酸、亞油酸、共軛亞油酸、a-亞麻酸、Y-亞麻酸、全順式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸、全順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸，均是在現有工業體系中較易獲得、成本低廉的品種。尤其是其中的亞油酸，其對摩西球囊黴的侵染效率、生根苗生長笑了的促進作用特別明顯，遠超等價的其他多不飽和脂肪酸。因此特別有利於在大規模的栽培中使用。所述營養液可以是多不飽和脂肪酸與水混合成的溫度乳濁液。
[0009]進一步的，所述共生培養基中白蘑科真菌的濃度為0.01mg-0.5mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為70-120g/100株移栽苗。
[0010]白蘑科真菌的起始濃度過低，則其要經歷一較長時間的適應期方能進入對數生長期，不易於侵染生根苗成為生根苗內的優勢菌種，從而導致本發明所追求的技術效果無法實現；而白蘑科真菌的濃度過高，則一方面容易導致成本的升高，也會較大程度上地阻礙後續摩西球囊黴的接種。摩西球囊黴的接種量過低會受白蘑科真菌的抑制而無法成功與生根苗共生，而其接種量過高將同樣會升高生產成本，不利於推廣使用。因此在本發明中，每植有100株的移栽苗接種70-120g摩西球囊黴。
[0011]優選的，所述白蘑科真菌為蜜環菌屬或小蜜環菌屬中的一種或多種真菌。
[0012]蜜環菌屬本身是蘭科植物中的天麻內常見的共生菌，但由於現有的技術通常只接種蜜環菌這一單一菌種，無法有效提升蘭科植物幼苗的抗逆能力，因此培育時還需要較長時間的煉苗，其幼苗存活率較低。而在本發明中，蜜環菌與摩西球囊黴在多不飽和脂肪酸的作用下同時與蘭科植物的生根苗共生，則能有效地提升蘭科植物幼苗的抗逆特性，不但可縮短或減免煉苗時間，其幼苗的成活率、生長速率也有較大的提升。小蜜環菌屬，主要包含了假蜜環菌這一物種。在本發明中，採用假蜜環菌與蘭科植物生根苗共生，在多不飽和脂肪酸及摩西球囊黴的作用下，能使生根苗表現出優秀的抗逆特性及生命力，其生長速率遠超採用現有技術處理的空白對照組。特別要指出的是，發明人發現，在亞油酸的作用下，將假蜜環菌與摩西球囊黴接種至金線蓮生根苗中，其促進生根苗生長的效果尤其明顯，經處理有，金線蓮生根苗的生物量漲幅可比未經處理時高出30%以上。這一效果尚未有相關現有技術記載。
[0013]所述向所述生根苗和/或移栽基質噴灑噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液是指向生根苗和/或移栽基質噴灑3-4mL/10株生根苗的亞油酸水溶液。
[0014]亞油酸濃度過低，其效果並不能充分發揮。有鑑於亞油酸成本較高，施用亞油酸含量過高也不利於控制成本。根據小蜜環菌和蜜環菌屬的生長規律，本發明特別限定了亞油酸的使用量，可在保證作用效果的前提下，最大程度地降低生產成本。
[0015]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
[0016]本發明可以`在培養基被菌索覆蓋時——即白蘑科真菌成功與生根苗共生時將生根苗移栽。但考慮到共生初期，尚未在生根苗內形成數量足夠的菌群，生根苗活力較弱，本發明在生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm時，方將生根苗植入移栽基質。
[0017]所述步驟b中光照強度為30001ux，培養溫度為23_27°C。
[0018]更進一步，所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的大棚或密閉林地下培育，追肥，並以2-3天對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。
[0019]本發明的追肥可選用任一種適用於蘭科植物的追肥方法，特別優選的，可選用市售的胺基酸肥或Hogland營養液進行追肥。所述灌溉可選用噴灌或滴灌的方式進行，以保持移栽基質溼潤而不造成積水為標準。除大棚和密閉林地外，任意一種溼潤、陰涼而適於培育蘭科植物的環境均可適用於本發明。對蘭科植物的培育過程中的其他操作，均可採用現有做法實現。
[0020]所述蘭科植物包括石斛、天麻或金線蓮。
[0021]所述蘭科植物為金線蓮；所述白蘑科真菌為假蜜環菌；所述將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養是指將所述生根苗與假蜜環菌共同接種至共生培養基中，直至藍色菌索覆蓋培養基。
[0022]本發明先後對蘭科植物接種白蘑科真菌和摩西球囊黴，並選用多不飽和脂肪酸促進二者與蘭科植物共生，使組培時蘭科植物的生根苗獲得優異的抗旱、抗高溫、抗溼等抗逆特性，無需經歷煉苗便可直接移栽，不但有效縮短了生產周期，提高生產效率，更能有效地促進植物的生長；同時本發明更對兩種共生微生物的接種量、接種時機及多不飽和脂肪酸的施加量進行了設計，確保其作用最大化的同時有效控制了生產成本，使本發明的產業化成為可能。
【具體實施方式】
[0023]為了便於本領域技術人員理解，下面將結合實施例對本發明作進一步詳細描述: 實施例1
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。[0024]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中，所述白蘑科真菌為小蜜環菌屬的假蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用3ml濃度為2ml/L的亞油酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0025]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中假蜜環菌的濃度為0.05mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重100g摩西球囊黴菌劑。
[0026]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為6cm。
[0027]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為25°C。光照時間為24小時每天。
[0028]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的大棚或密閉林地下培育，追肥，並以2-3天對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。
[0029]實施例2
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0030]本實施例中，所述生根苗是通過誘導蘭科植物腋芽生根而獲得的。本實施例中，所述白蘑科真菌為小蜜環菌屬的假蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用4ml濃度為lml/L的亞油酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0031]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中假蜜環菌的濃度為0.5mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重70g摩西球囊黴菌劑。
[0032]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為7cm。
[0033]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為23°C。光照時間為24小時每天。
[0034]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的密閉林地下培育，採用胺基酸肥追肥，並以2-3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0035]實施例3
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0036]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中， 所述白蘑科真菌為小蜜環菌屬的假蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用3ml濃度為3ml/L的亞油酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0037]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中假蜜環菌的濃度為0.01mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重120g摩西球囊黴菌劑。
[0038]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3cm。
[0039]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為27°C。光照時間為24小時每天。
[0040]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的大棚或密閉林地下培育，採用胺基酸肥追肥，並以2-3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0041]實施例4
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0042]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中，所述白蘑科真菌為小蜜環菌屬的假蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用3.5ml濃度為2.5ml/L的亞油酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。[0043]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中假蜜環菌的濃度為0.lmg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重90g摩西球囊黴菌劑。
[0044]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
[0045]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為26°C。光照時間為24小時每天。
[0046]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的大棚培育，採用Hogland營養液追肥，並以2-3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0047]實施例5
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生 根苗和移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0048]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中，所述白蘑科真菌為蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用3ml濃度為3ml/L的a -亞麻酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0049]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中蜜環菌的濃度為菌體乾重0.09mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重70-120g摩西球囊黴菌劑。
[0050]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
[0051]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為27°C。光照時間為24小時每天。
[0052]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的密閉林地下培育，採用Hogland營養液追肥，並以2_3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0053]實施例6
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0054]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中，所述白蘑科真菌為蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為每10株生根苗用3-4ml濃度為2ml/L的a-亞麻酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0055]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中蜜環菌的濃度為菌體乾重0.2mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重70-120g摩西球囊黴菌劑。
[0056]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
[0057]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為23_27°C。光照時間為24小時每天。
[0058]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的密閉林地下培育，採用Hogland營養液追肥，並以2_3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0059]實施例7
本實施例提供一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟:
a.製備蘭科植物的生根苗；
b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗；
c.菌化生根苗移栽；
所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
[0060]本實施例中，所述生根苗是通過製備蘭科植物去毒愈傷組織，再誘導愈傷組織生根而獲得的。本實施例中，所述`白蘑科真菌為蜜環菌。本實施例中，所述摩西球囊黴為市售的摩西球囊黴菌劑。所述多不飽和脂肪酸為4ml濃度為3ml/L的花生四烯酸水溶液。所述移栽基質為置於苗盤中的腐殖土。
[0061]所述共生培養基可根據不同種類蘭科植物的特性，選擇其使用的市售組培營養液，所述共生培養基中假蜜環菌的濃度為菌體乾重0.03mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為每植有100株移栽苗的腐殖土施加乾重100g摩西球囊黴菌劑。
[0062]所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
[0063]所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為25°C。光照時間為24小時每天。
[0064]所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的密閉林地下培育，採用Hogland營養液追肥，並以2_3天頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。其餘栽培方式均與現有技術一致。
[0065]分別採用實施例1-7的方法培育金線蓮每組20株，。60日後測試一次平均幼苗的生物量，其結果如表1所示。
[0066]分別採用實施例1-7的方法培育天麻，每組20株，60日後檢測其平均幼苗生物量增長情況，其結果如表2所示。
[0067]對照例I
本對照例提供一種蘭科植物組培方法，其未使用多不飽和脂肪酸，其餘步驟與實施例1一致。
[0068]對照例2
本對照例提供一種蘭科植物組培方法，其未對生根苗接種白蘑科真菌，其餘步驟與實施例I 一致。
[0069]對照例3
本對照例提供一種蘭科植物組培方法，其未對生根苗接種摩西球囊黴，其餘步驟與實施例I 一致。
[0070]對照例4
本對照例提供一種蘭科植物組培方法，其未對生根苗接種摩西球囊黴、白蘑科真菌，亦未施用多不飽和脂肪酸。其餘步驟與實施例1 一致。
[0071 ] 採用對照例1-4的組培方法培育金線蓮，每組20株，60日後檢測其平均生物量，其結果如表1所示。
[0072]採用對照例1-4的組培方法培育天麻，每組20株，60日後檢測其平均生物量，其結果如表2所示。
[0073]表1培養60日金線蓮生物量及多糖含量_
【權利要求】
1.一種蘭科植物組織培養方法，包括以下步驟: a.製備蘭科植物的生根苗； b.將所述生根苗與白蘑科真菌共同接種至共生培養基中培養直至菌索完全覆蓋共生培養基，獲得菌化生根苗； c.菌化生根苗移栽； 所述菌化生根苗移栽包括將所述菌化生根苗植入移栽基質中，同時向移栽基質接種摩西球囊黴，再向所述菌化生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液。
2.根據權利要求1所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述多不飽和脂肪酸為花生四烯酸、亞油酸、共軛亞油酸、a -亞麻酸、Y -亞麻酸、全順式-4，7，10, 13，16，19-二十二碳六烯酸、全順式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酸中的一種或多種的混合物；所述培養液為濃度在lmL/L-3ml/L的所述多不飽和脂肪酸與水的乳濁液。
3.根據權利要求2所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述共生培養基中白蘑科真菌的濃度為0.01mg-0.5mg/ml ;所述摩西球囊黴的接種量為70_120g/100株移栽苗。
4.根據權利要求1-3任一項所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述白蘑科真菌為蜜環菌屬或小蜜環菌屬中的一種或多種真菌。
5.根據權利要求4所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述向所述生根苗和/或移栽基質噴灑含有多不飽和脂肪酸的培養液是指生根苗和/或移栽基質噴灑3-4mL/10株生根苗培養液。
6.根據權利要求5所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述步驟c中植入移栽基質的生根苗其根部至植物學頂端長度為3-7cm。
7.根據權利要求5-6任一項所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述步驟b中光照強度為30001UX，培養溫度為23-27°C。
8.根據權利要求5-6任一項所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述生根苗移栽還包括植入移栽基質後將移栽苗置於空氣溼度大於60%的大棚或密閉林地下培育，追肥，並以2-3天的頻率對其灌溉一次，保持移栽基質的溼潤。
9.根據權利要求1-3、5-6任一項所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述蘭科植物包括石斛、天麻或金線蓮。
10.根據權利要求 9所述的蘭科植物組織培養方法，其特徵在於:所述蘭科植物為金線連。
【文檔編號】A01H4/00GK103704138SQ201310728135
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月25日 優先權日:2013年12月25日
【發明者】魏曉辰 申請人:魏曉辰