檢測肝炎病毒免疫球蛋白m抗體的免疫膠體金試劑及方法

2023-12-09 04:38:56 2

專利名稱：檢測肝炎病毒免疫球蛋白m抗體的免疫膠體金試劑及方法
技術領域：
本發明屬於採用免疫測定法檢測肝炎所用的試劑及方法技術領域。
目前在臨床上用於檢測肝炎病毒免疫球蛋白M類抗體所用的一種檢測儀器為γ計數儀，採用放射免疫測定法來檢測，該儀器所用的放射性同位素很容易汙染環境，不利於操作人員的身體健康，而且這種儀器價格昂貴、操作複雜，不利於廣泛推廣使用。另外一種檢測儀器為酶聯檢測儀，採用酶聯免疫吸附試驗法來檢測，該儀器同樣價格昂貴、而且採用活性較好的酶進行標記，實驗流程較長，做一次檢測需要2～24小時，操作複雜。上述兩種檢測儀器及檢測方法僅能在科研單位和較大型醫院使用，很難得到廣泛推廣使用。
本發明的目的在於克服上述兩種測試儀器及檢測方法的缺點，提供一種不需要測試儀器、簡單、快速、敏感性高、重複性好、操作簡單，能準確快速地檢測肝炎病毒免疫球蛋白M類抗體所用的檢測試劑以及方法。
為達到上述目的，本發明採用的解決方案是以下述配比的組分為原料製成的檢測試劑氯金酸0.01～1g抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g蒸餾水加至1000ml應用上述試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法按以下次序的幾個步驟進行將A型肝炎病毒抗原、B型肝炎病毒核心抗原、C型肝炎病毒抗原分區滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，乾燥後加血清1～15μl；經滲濾，加本發明檢測試劑3～20μl；滲濾後，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液50～500μl，單項陽性者出現單個紅色斑點，多項陽性者出現多個紅色斑點，無色者為陰性。
採用本發明試劑及方法可在3至5分鐘內同時檢測出A型肝炎病毒免疫球蛋白M抗體、B型肝炎病毒免疫球蛋白M核心抗體、C型肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的結果，也可在3至5分鐘內檢測出上述三項中任意一項或任意兩項的結果，所用的檢測樣本量比酶聯檢測儀少10～100倍，而檢測結果與酶聯檢測儀相當。本發明與γ記數儀、與酶聯檢測儀，以及檢測方法相比，具有操作簡便、快速、特異敏感、重複性好、經濟等優點，可在大小醫療單位廣泛推廣使用。
發明人給出了本發明第一個實施例(以生產本發明產品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸0.5g抗人免疫球蛋白M 0.05g蒸餾水 加至1000ml其製備工藝如下1、原材料預處理對已購買的氯金酸和抗人免疫球蛋白M的質量進行檢測，其中的有效成份含量均應符合規定的範圍，按配比稱取各原料。
蒸餾水中應無雜質，用蒸餾水器將蒸餾水重新蒸餾一次，或用離子交換樹脂製成去離子水。
將氯金酸溶解於蒸餾水中，配製成0.05％的氯金酸水溶液，抗人免疫球蛋白M用蒸餾水配製成0.005g/ml的水溶液。
2、氯金酸膠體金溶液的製備採用檸檬酸三鈉還原法製備氯金酸膠體金溶液。取0.01％的氯金酸水溶液100ml，加溫至沸騰，加入4ml 1％的檸檬酸三鈉水溶液，用攪拌器充分攪拌至均勻混合，加溫煮沸，製成氯金酸膠體金溶液。
3、成品製作將已配製好的抗人免疫球蛋白M水溶液倒入已製備的氯金酸膠體金溶液，用攪拌器充分攪拌至均勻混合，倒入低速離心機，經低速離心機旋轉分離後，取上清液，再倒入高速離心機，經高速離心機旋轉分離後，去除上清液，取沉澱物，加入1％的小牛血清白蛋白1～5g，加蒸餾水至1000ml，製成本發明試劑，經質量檢查合格後，放入冰箱保存備用。
發明人給出了本發明第二個實施例(以生產本發明產品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸 0.015g抗人免疫球蛋白M0.005g蒸餾水 加至1000ml其製備工藝與第一個實施例完全相同。
發明人給出了本發明第三個實施例(以生產本發明產品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸 0.8g抗人免疫球蛋白M 0.09g蒸餾水 加至1000ml其製備工藝與第一個實施例完全相同。
發明人給出了採用本發明試劑檢測病毒性肝炎免疫球蛋白M抗體的方法的一個實施例如下將A型肝炎病毒抗原、B型肝炎病毒核心抗原、C型肝炎病毒抗原分區滴在硝酸纖維素膜上，乾燥後加血清8μl，經滲濾，加本發明第一個實施例檢測試劑10μl，滲濾後，加磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩衝液200μl，單項陽性者出現單個紅色斑點，多項陽性者出現多個紅色斑點，無色者為陰性。
發明人採用本發明第一個實施例製備的檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，採用本發明檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法的一個實施例與用酶聯檢測儀採用酶聯免疫吸附試驗法對肝炎病毒免疫球蛋白M抗體、進行了對比檢測血清標本156份，測試結果如下用酶聯檢測儀採用酶聯免疫吸附試驗法測得抗A型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性32份、抗B型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性15份、抗C型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性7份，抗A型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗B型肝炎病毒免疫球蛋白M雙陽性4份，抗A型肝炎病毒免疫球蛋白M、抗B型肝炎病毒免疫球蛋白M和抗C型肝炎病毒免疫球蛋白M三陽性2份。用本發明檢測試劑以及採用本發明檢測方法，除抗A型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性31份、抗B型肝炎病毒免疫球蛋白M陽性16份外，其餘結果均與酶聯檢測儀採用酶聯免疫吸附試驗法測得的結果相符。採用兩種檢測手段和兩種檢測方法的總符合率為99.6％，若以酶聯免疫吸附試驗法為標準，本發明檢測方法的檢測靈敏度為98％、特異度為99％。隨機抽取28份陽性標本經2-巰基乙醇溶液做破壞性試驗後，再用本發明檢測方法試驗全轉為陰性；將這28份陽性標本用本發明檢測方法重複試驗4次，試驗結果完全相符。
本發明檢測試劑以及檢測方法還可用於檢測其它的病原微生物特異性免疫球蛋白M(IgM)。
權利要求
1.一種檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，其特徵在於它是以下述配比的組分為原料製成的檢測試劑氯金酸 0.01～1g抗人免疫球蛋白M0.004～0.1g蒸餾水 加至1000ml
2.一種應用權利要求1所述的試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法，其特徵在於它按以下次序的幾個步驟進行將A型肝炎病毒抗原、B型肝炎病毒核心抗原、C型肝炎病毒抗原分區滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，乾燥後加血清1～15μl；經滲濾，加本發明檢測試劑3～20μl；滲濾後，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩衝液50～500μl，單項陽性者出現單個紅色斑點，多項陽性者出現多個紅色斑點，無色者為陰性。
全文摘要
一種檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的免疫膠體金試劑，在1000ml試劑中含氯金酸0.01～1g，含抗人免疫球蛋白M 0.004～0.1g，用本試劑檢測肝炎病毒免疫球蛋白M抗體的方法為將肝炎病毒抗原分區滴在硝酸纖維或醋酸纖維的微孔濾膜上，乾燥後加血清，經滲濾，加本發明檢測試劑，滲濾後加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷——鹽酸，出現紅色斑點者為陽性，無色者為陰性，可同時檢測多型肝炎病毒特異性免疫球蛋白M抗體。
文檔編號G01N33/576GK1140259SQ9511360
公開日1997年1月15日 申請日期1995年7月5日 優先權日1995年7月5日
發明者肖樂義, 閻小君, 陳遠鑫, 李陝區 申請人:中國人民解放軍第四軍醫大學