一種增強人體免疫力的含輔酶Q10的組合物的製作方法

2023-06-01 02:34:41

本發明屬於保健品領域，具體涉及一種增強人體免疫力的含輔酶Q10的組合物和含該組合物的製劑及其製備方法。

背景技術：

免疫是人體的一種生理功能，人體依靠這種功能識別「自己」和「非己」成分，從而破壞和排斥進入人體的抗原物質，或人體本身所產生的損傷細胞和腫瘤細胞等，以維持人體的健康，抵抗或防止微生物或寄生物的感染或其它所不希望的生物侵入的狀態。執行免疫功能的是免疫系統，它是機體防衛病原體入侵最有效的武器，它能發現並清除異物、外來病原微生物等引起內環境波動的因素。免疫系統是由免疫器官(骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃體、小腸集合淋巴結、闌尾、胸腺等)、免疫細胞(淋巴細胞、單核吞噬細胞、中性粒細胞、嗜鹼粒細胞、嗜酸粒細胞、肥大細胞、血小板(因為血小板裡有IGG)等)，以及免疫分子(補體、免疫球蛋白、幹擾素、白細胞介素、腫瘤壞死因子等細胞因子等)組成。

參與免疫調節的細胞主要有T細胞、B細胞、NK細胞和巨噬細胞。T細胞作為免疫效應細胞主要行使兩方面功能，即介導DTH反應和作為Tc細胞直接殺傷靶細胞，T細胞又是免疫調節細胞，具有輔助其他免疫細胞分化和調節免疫應答的功能，因此，T細胞在機體的細胞免疫和體液免疫誘導中均有重要作用。B細胞是體內非常重要的免疫細胞，在抗感染免疫和腫瘤免疫等方面都起著重要的作用，可通過處理抗原和釋放可溶性因子對免疫功能起重要的調節作用。NK細胞參與非特異性免疫，是機體天然免疫的主要承擔者，同時它對T細胞、B細胞、骨髓幹細胞等均有調節作用，並通過釋放細胞因子對機體免疫功能進行調節。

輔酶Q10又名癸烯醌、泛醌，是一種脂溶性醌，結構類似於維生素K，近年來的研究表明，輔酶Q10是細胞自身產生的天然抗氧化劑，可阻止自由基的形成，有助於維護免疫系統的正常運作及延緩衰老，具有良好的增強免疫力、緩解體力疲勞、抗氧化等多種生物學作用，對預防冠心病、緩解牙周炎、治療糖尿病等方面有顯著效果，在高血壓、充血性心力衰竭及心絞痛、神經系統疾病和皮膚性疾病的治療方面也扮演著重要的角色，同時還有抗腫瘤作用，臨床對於癌細胞的轉移有一定療效。

人體中輔酶Q10的總含量僅為500-1500mg並隨著年長而減少。在人的器官中輔酶Q10的含量在20歲時達到高峰，然後迅速減少。在心臟中輔酶Q10濃度的減少特別明顯。77歲的老人比20歲的年輕人心肌中的輔酶Q10減少了57％。輔酶Q10是細胞自身產生的天然抗氧化劑，可阻止自由基的形成，有助於維護免疫系統的正常運作及延緩衰老。輔酶Q10還是一種免疫增強劑，增強網狀內皮系統吞噬功能，刺激對各種因子的抗體反應，從而增強機體防禦功能。同時，還可刺激淋巴細胞轉化，增強T細胞免疫功能，通過提高抑制性T細胞功能達到抑制B細胞功能亢進的目的。

因此，現在保健品市場或護膚品市場有很多含輔酶Q10的產品。但是因為輔酶Q10是脂溶性的，其普通口服製劑生物利用度較差，為了克服這個問題，很多人致力於研發口服生物利用度好的產品，如陳玉軍和龐睿等人(提高輔酶Q10口服生物利用度的方法與思考，J.《生物技術世界》2015第3期)將Gemini作為Q10的生物粘附材料，通過靜電作用粘附於胃腸道表面，增加製劑與胃腸道的接觸時間，從而提高Q10的生物利用度。還有一些產品是通過大豆油或米糠油等非極性基質增加Q10的吸收，或者將輔酶Q10製成納米級以提高生物利用度，但這些技術要麼使得產品成本過高，要麼限制含輔酶Q10的產品的製備工藝，比如不能採用幹法直壓工藝。

此外，輔酶Q10是容易被氧化的物質，將輔酶Q10與其他功能原料組合容易導致其被氧化變質，影響其有效性，也正是如此，目前市場上還沒有同時含輔酶Q10和其他功能成分的保健品。

技術實現要素：

為解決上述技術問題，本發明的目的在於提供一種具有增強免疫力的含輔酶Q10的組合物，該組合物生物利用度高，增強免疫力效果好。

本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：

一種增強人體免疫力的含輔酶Q10的組合物，該組合物含有輔酶Q10和葡萄籽提取物。本發明的組合物，其功能性成分可以只包括輔酶Q10和葡萄籽提取物，也可以還包括此2種成分外的其他功能性成分。

作為優選，本發明的組合物含有20-85重量份的輔酶Q10和25-85重量份的葡萄籽提取物。

作為優選，本發明的組合物含有20-45重量份的輔酶Q10和65-85重量份的葡萄籽提取物。

作為優選，本發明的組合物含有40重量份的輔酶Q10和70重量份的葡萄籽提取物。

本發明的組合物選用輔酶Q10和葡萄籽提取物為功能性原料，其中，輔酶Q10在氧化呼吸鏈中起傳遞電子和質子的作用，這種作用不僅是所有生命形式必不可少的，而且還是形成ATP的關鍵。而ATP是機體能量的主要儲存形式，也是所有細胞功能賴以正常發揮的重要基礎，是機體的非特異性免疫增強劑，因此顯示出極好抗疲勞作用，輔酶Q10使細胞保持良好健康的狀態，因而機體充滿活力，精力旺盛，腦力充沛。葡萄籽提取物是從葡萄籽中提取的一種人體內不能合成的新型高效天然抗氧化劑物質。它是目前自然界中發現的抗氧化、清除自由基能力最強的物質，其抗氧化活性為維生素E的50倍、維生素C的20倍，它能有效清除人體內多餘的自由基，具有超強的延緩衰老的作用。

本發明的發明人發現含有輔酶Q10和葡萄籽提取物的組合物具有意想不到的增強免疫力的效果，特別是本發明的優選實施例在體液免疫和細胞免疫中表現出非常顯著地增加免疫力功能。尤其是組合物的成分為：輔酶Q10 40重量份，葡萄籽提取物70重量份時，在不添加任何增強輔酶Q10口服生物利用度的助劑的情況下，可使含該組合物的片劑相比於普通市售輔酶Q10片劑，其生物利用度提高80％以上。輔酶Q10口服生物利用度提高的原因可能在於：葡萄籽提取物中含有大量的多酚類物質，當含本發明組合物的製劑經口服在胃腸道中崩解溶出後，這些物質可能成為促進輔酶Q10溶解於胃腸液的增溶性物質，並促進輔酶Q10的胃腸道轉運，因此極大的提高了輔酶Q10的生物利用度。而且葡萄籽提取物中含豐富的兒茶素類和原花青素類，以及亞油酸、亞麻酸等不飽和脂肪酸類，與輔酶Q10配伍，不會造成輔酶Q10被氧化失效，相反，可起到抗氧劑的作用。

本發明的組合物可以加入常規製劑輔料製備成各種製劑，最常用的是便於攜帶和服用的口服製劑，如膠囊劑、片劑、丸劑、散劑或顆粒劑。

上述常規製劑輔料視製劑類型進行選用，包括但不限於填充劑、抗氧化劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等。填充劑包括：澱粉、預膠化澱粉、乳糖、甘露醇、山梨醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；抗氧化劑包括：抗壞血酸、生育酚、黃酮類、丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、叔丁基對苯二酚等；崩解劑包括：澱粉、預膠化澱粉、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括：硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化矽等；助懸劑包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括：澱粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括：糖精鈉、阿斯帕甜、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括：甜味劑及各種香精；防腐劑包括：尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等。

本發明還提供了一種含上述組合物的咀嚼片劑及其製備方法。該咀嚼片劑除包含上述組合物外，還包含輔料甘露醇、山梨醇和硬脂酸鎂，優選甘露醇440-470重量份、山梨醇420-440重量份和硬脂酸鎂5-10重量份。

該咀嚼片劑的製備方法採用幹法直壓法，因為輔酶Q10和葡萄籽提取物的組合物具有生物利用度高、且不易被氧化的優點，所以可以無需加入抗氧化劑或其他提高輔酶Q10生物利用度的助劑，而且也不需要將輔酶Q10加工為納米級再製備製劑。本發明製備含輔酶Q10和葡萄籽提取物的咀嚼片劑的方法包括如下步驟：

A、將輔酶Q10、葡萄籽提取物、甘露醇、山梨醇和硬脂酸鎂分別粉碎過80目篩得細粉，備用；

B、先將輔酶Q10、葡萄籽提取物細粉混合均勻，再與山梨醇細粉混合均勻，其次將該混合粉與甘露醇細粉混合均勻，最後與硬脂酸鎂細粉混合均勻，得總混合粉；

C、將步驟B得到的總混合粉直接壓片，即得。

本發明的有益效果在於：本發明的組合物選用功能性原料輔酶Q10和葡萄籽提取物配伍，協同增效，極大的提高了組合物的增強免疫力功能。而且本發明組合物在加入葡萄籽提取物後，特別是加入優選重量份的葡萄籽提取物後，輔酶Q10的生物利用度大大提高，最優的實施例顯示其生物利用度比普通市售製劑可提高80％以上。

具體實施方式

以下通過具體實施方式，對本發明的上述內容做進一步的詳細說明。但不應該將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。

表1原料配比

輔酶Q10購自浙江新和成股份有限公司；葡萄籽提取物購自北京瑞芬生物科技有限公司。

實施例1製備實施例

將輔酶Q10、葡萄籽提取物、甘露醇、山梨醇和硬脂酸鎂分別按照表1對應的原料配比稱重，並粉碎過80目篩得細粉，備用；

先將輔酶Q10、葡萄籽提取物細粉混合均勻，再用等量遞增法與山梨醇細粉混合均勻，其次將該混合粉與甘露醇細粉混合均勻，最後與硬脂酸鎂細粉混合均勻，得總混合粉；

將上一步驟得到的總混合粉直接壓片，壓片規格1g/片。

實施例2-8

按照表1對應的原料配比備料，根據實施例1所述的方法製備。

實施例9

取40g輔酶Q10、450g甘露醇、430g山梨醇和10g硬脂酸鎂按照實施例1的方法製備產品。

實施例10功能效果試驗

1.1樣品：根據實施例6製備的樣品1、實施例9製備的樣品2以及購自衛材(中國)藥業有限公司的對照品(能氣朗片)進行功能學試驗。樣品置陰涼乾爽通風處保存。人口服樣品1的推薦用量為每人(成人)每日1g/60kg BW，試驗時用蒸餾水作溶劑配製受試物。

1.2試驗動物：由成都生物製品研究所實驗動物中心提供的昆明種雄性小鼠160隻，體重為18-22克，生產許可證號：SCXK(川)2011-08SPF級；試驗動物房為屏障系統，使用許可證號為SYXK(川)2011-043。溫度22—25℃，相對溼度：40—70％。

1.3劑量選擇：設各樣品低、中、高劑量組分別為：以輔酶Q10重量計，6.7mg、13.3mg、20mg/kg BW(分別相當於人體推薦用量的10、20、30倍)，設一個蒸餾水陰性對照組，每組10隻動物。分別根據以上給藥量，稱取樣品，各加蒸餾水至250mL，混勻、冷藏保存。小鼠按10mL/kg BW體重一次經口灌胃，至少連續灌胃30天。

1.4主要儀器與試劑：100uL微量注射器，動物臺秤、電子分析天平、離心機、潔淨工作檯、二氧化碳培養箱、恆溫水浴箱、顯微鏡、半自動生化儀、酶標儀，無菌手術器械、SRBC、微量注射器、細胞計數器、24孔和96孔平底細胞培養板、96孔U型細胞培養板、玻璃平皿、紗布、載玻片、試管、200目篩網、計時器血色素吸管，生理鹽水、Hank's液(pH 7.2—7.4)、RPMI1640培養液、小牛血清、青黴素、鏈黴素、ConA、1％冰醋酸、1mol/L的HCL溶液、異丙醇、MTT、DNFB、PBS緩衝液(pH7.2—7.4)、補體(豚鼠血清)、SA緩衝液、瓊脂糖、YAC-1細胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、0.2mol/L的Tris-HCL緩衝液、1％的NP40、印度墨汁、0.l％的碳酸鈉、雞紅細胞、甲醇、Gimsa染液等。

1.5實驗方法

1.5.1遲髮型變態反應(DTH)(足蹠增厚法)

給小鼠腹腔注射2％壓積SRBC(0.2mL/每鼠)致敏4天後，測量左後足蹠厚度，然後在測量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20ul/每鼠)，於注射後24h測量左後足蹠厚度，同一位置測量三次，取平均值，以攻擊前後足蹠厚度差值(足蹠腫脹程度)來表示DTH的程度。

1.5.2ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗(MTT法)：

無菌取脾，置於盛有適量無菌Hank's液的平皿中，製成細胞懸液，經200目篩網過濾。用Hank's液洗2次，每次離心l0min(1000r/min)。然後將細胞懸浮於1mL完全培養液中，計數活細胞數，用RPMI1640培養液調整細胞濃度為3*106個/mL.。再將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔1mL，在其中一孔加入75uL ConA液(相當於7.5uL/mL)，另一孔作為對照，置5％CO2，37℃二氧化碳孵箱中培養72h。培養結束前4h輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養液，同時加入MTT(5mg/mL)50uL/孔，繼續培養4h。培養結束後，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解，然後分裝到96孔培養板中，每個孔作3個平行孔，用酶標儀，以570nm波長測定光密度值。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。

1.5.3抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法)

取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心l0min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2％(v/v)的細胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。將免疫後5天的小鼠處死，取脾，輕輕磨碎，用Hank's液製成細胞懸液，200目篩網過濾，洗滌、離心2次，最後將細胞懸浮在5mL Hank's液中。將表層培養基(lg瓊脂糖加雙蒸水至l00mL)加熱溶解後，放45～50℃水浴保溫，與等量pH7.2—74、2倍濃度的Hank’s液混合，分裝小試管，每管0.5mL，再向管內加用SA液配製的10％SRBC50uL(v/v)、25uL脾細胞懸液，迅速混勻後傾倒於已刷瓊脂糖薄層的玻片上，待凝固後，將玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養箱中孵育1.5h，用SA緩衝液稀釋的補體(1:8)加入玻片架凹槽內，繼續孵育1.5h，計數溶血空斑數。用空斑數/全脾細胞表示抗體生成細胞數。

1.5.4血清溶血素的測定(血凝法)

取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心l0min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2％(v/v)的細胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。繼續灌胃5天後，摘除小鼠的眼球，取血於離心管內，放置約1h，2000r/min離心l0min，分離、收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置於微量血凝板內，每孔l00uL，再加入100u L 0.5％(V，v)的SRBC懸液，均勻，裝入溼潤的平盤內加蓋，於37℃溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度。按下式計算抗體積數：

抗體積數＝(S1+2S2+3S3…～nSn。)

式中1、2、3……n為對倍稀釋的指數，s為凝集程度的級別。

1.6實驗數據統計：應用SPSS統計軟體進行方差分析統計處理。

2.結果

2.1樣品對小鼠細胞免疫功能的影響

2.1.1樣品對小鼠遲髮型變態反應的影響

表2樣品對小鼠遲髮型變態反應(DTH)的影響

由上表可見，三個樣品各劑量組動物的足蹠腫脹度差值均大於陰性對照組，其中，樣品1的三個劑量組和對照品的中高劑量組與陰性對照組相比，差異具有顯著性(P<0.05)，並且樣品1的中高劑量組差異性非常顯著(P0.05)，只有樣品1表現出顯著差異性(P0.05)，而樣品1表現出顯著差異性(P<0.05)，特別是高劑量組，其差異具有非常顯著性(P<0.01)。

2.2.2樣品對小鼠血清溶血素的影響

表5小鼠溶血素測定結果

由表5可見，3個樣品各劑量組抗體積數均高於陰性對照組，樣品1各劑量組，樣品2中高劑量組以及對照品高劑量組與陰性對照組比較差異均具有顯著性(P<0.05)，且樣品1高劑量組表現出非常顯著的差異性(P<0.01)，表明該樣品具有顯著提高小鼠的血清溶血素水平的作用。

實施例11生物利用度實驗

1.1樣品：根據實施例1-9得到的樣品A-I，以及購自自衛材(中國)藥業有限公司的對照品(能氣朗片)。

1.2試驗劑量和對象：給藥劑量按輔酶Q10重量計，每天1次，每次40mg。健康男性受試者50人，每組5人，年齡(30±9)歲，身高(167±3)cm，體重(60±7)kg。受試者經全面體檢，肝腎功能正常，符合試驗要求。試驗期間以及試驗前2個月未服用其他藥物，試驗期間統一飲食。

1.3試驗方案和數據處理參加文獻肖淑華魏廣力陸榕等.輔酶Q10片的人體生物利用度研究,中國臨床藥理學與治療學,2000,5(1),39-41.計算各樣品相比於對照品的相對生物利用度。

1.4結果

表6樣品的相對生物利用度

由上表可見，樣品5-8相對於對照品，生物利用度大大提高，增加幅度達到40％以上，較佳的實施例生物利用度增加幅度達到80％以上。

本發明並不局限於前述的具體實施方式。本發明擴展到任何在本說明書中披露的新特徵或任何新的組合，以及披露的任一新的方法或過程的步驟或任何新的組合。