無糖產物和使用方法

2023-10-10 23:48:44

專利名稱：：無糖產物和使用方法
技術領域：
：本發明涉及產物和方法的發現，該產物和方法有助於活體綴合碳水化合物成分病症的診斷和治療，該活體綴合碳水化合物可引起細胞機能陣礙和細胞死亡.
背景技術：
：過去，關於細胞機能陣礙、細胞死亡和特殊疾病狀態的很多表面上看來無關的觀察結果不被理解也無法被理解，現在，由於本發明的方法和組合物而能夠被理解了，本發明第一次定義了無糖病理學的狀態與後果、它的產物以及用於它的檢測與治療的產物與方法.
發明內容本發明在一方面提供了肽，特別是無糖(aglyco)10B的肽成分，它們是負責機體免疫系統識別抗原的致免疫表位.本發明在這方面的一個實施方案提供了分離的複合糖，其中包含至少一種與序列1或序列2所列胺基酸序列締合的碳水化合物.這些無糖10B的肽成分可在體內產生無糖10B的特異性抗體，抗無糖10B(抗致惡性素抗體).本發明在這方面的另一個實施方案中，肽各自或聯合包括在治療組合物中，用於在必要時增加患者抗致惡性素抗體的濃度.本發明在另一方面提供了防止或抑制流感病毒顆粒附著於患者細胞的方法，包括給患者治療有效劑重的複合糖，從而與所述流感病毒顆粒結合，防止或抑制該顆粒附著於細胞受體.本發明在另一方面提供了治療精神分裂症的方法，包括在必要時給患者治療有效刑量的D-葡糖胺-HCl,從而增加所述患者腦複合糖的濃度.本發明在另一方面提供了抗具有序列2胺基酸序列的肽的單克隆抗體和抗無糖蛋白IOB的單克隆抗體.本發明在另一方面提供了診斷患者與癌症形成有關的慢性病毒性疾病的方法，包括通過檢測患者異常升高的抗無糖蛋白10B抗體水平來檢測向惡性細胞的轉化.困1是顯示精神分裂症與非精神分裂症患者中神經氨酸、己糖胺和己糖數量的條狀困.圖2是不同年齡健康個體中存在的抗致惡性素抗體的數量圖.圖3是健康個體和患有各種形式癌症的個體中抗致惡性素抗體數量的散點圖.困4是在乳腺癌患者中，在惡性腫瘤期間和癌症治療數年後觀測到的抗致惡性素抗體數量的散點圖.圖5是用抗致惡性素抗體進行免疫染色的惡性細胞的照片組合.圖6是顯示抗致惡性素抗體對小細胞肺癌細胞生長的體外抑制作用的條狀圖.圖7是良性增生、炎症和癌症中抗致惡性素抗體濃度的條狀圖.圖8A和8B是注射12聚體(iner)合成肽後在兔體內產生的抗致惡性素抗體數量的條狀圖.圖9A和9B是注射16聚體合成肽後在兔體內產生的抗致惡性素抗體數量的條狀困.具體實施例方式本發明的方法和組合物來自無糖複合物病理學的研究結果.本發明人已經發現，複合糖的碳水化合物成分與脂質或蛋白質共價結合形成複合糖，該成分有助於細胞的穩定性、細胞的受體與識別功能和細胞成分的保護作用，免受天然與外來物質的損害，當這些正常的碳水化合物成分濃度降低或結構改變時，這裡一起定義為"無糖狀態"和"無糖病理學"，這些碳水化合物的穩定性、受體識別與保護功能減少或喪失，導致細胞機能陣礙和細胞死亡，所致疾病狀態因細胞機能障礙或細胞死亡的位置而異.這裡顯示的證據表明，這些例如在神經系統中的疾病狀態是細胞機能障礙或細胞死亡(即細胞缺失)的結果.這樣的疾病狀態包括但不限於痴呆，例如精神分裂症(早發性痴呆)，和腦腫瘤，以及帕金森症候群和阿爾茨海默病.糖蛋白IOB是人腦中一種正常的250KD膜成分.這種複合糖業已顯示參與鴿腦中的訓練過程.業已假定，在腦成膠質細胞瘤中，細胞分裂接觸抑制作用的明顯喪失伴隨無限制增殖，10B的結構可能已有所改變.的確，人們發現10B的結構在腦成膠質細胞瘤中明顯改變碳水化合物基團在數量上減少大約50、並存在異質性的喪失.正常10B中，有九種不同的破水化合物成分；腫瘤10B(無糖10B)中，減少至五或六種.此外，IOB的蛋白質部分過度產生或過度表達七至十倍.星形細胞素(astrocytin)是賦予從腦肺瘤10B裂解下來的10KD肽的名稱.從生長在組織培養物中的成膠質細胞瘤細胞分離到星形細胞素的等價物，致惡性素，證實它與星形細胞素具有非常密切的結構相關性.之所以稱為致惡性素，是因為在組織培養物中這種肽的表達、及其在每mg可提取的膜蛋白中的濃度隨每單位時間細胞分裂速率的增加而增加.認識素M是富含穀氨酸和天冬氨酸的10kD癌多肽抗原，已經從MCF7惡性乳腺細胞中分離得到.這種多肽與已經從神經膠質性腦胂瘤中分離到的致惡性素(Glu13，Asp9，His2)有關.抗認識素M,抗致惡性素的IgM自身抗體已經從人血清中分離得到，以鼠單克隆抗體形式產生，通過用抗原體外作用於人淋巴細胞而產生人型單克隆抗體，還已經從惡性細胞中分離到，該惡性細胞是通過洗脫和免疫吸附於固定純化抗原，在手術和屍體解剖時得到的.美國的三家獨立實驗室和英國的三家醫院與一家實驗室，有數百名醫師參加了一項歷時20年的隨機主要為盲法的研究，研究證明，血清中抗致惡性素(抗無糖10B)的濃度，以"g/ml計，(1)在30~70歲間的正常健康無腫瘤攜帶人群中，每10年適度增加，癌症的危險隨之增加(p〈.001;N-1972)(圖1),(2)在高危癌症家族至今尚未明顯受累的成員中、增加得更早而且更顯著，(p〈.001;N-1106)(困l和2)，和(3)在人血清中的濃度在發生惡性轉化為臨床乳腺癌的數周內顯著增加，但(在不變量的意義上)不是特徵性的，因為它在成功治療的三個月內恢復正常，並在成功治療後維持在正常範圍內甚至長達27年(困2和3)(p〉195，180(1962))，後者據信充當病毒困套，從而防止病毒附著和進入細胞.所產生的唾液應答素濃度與病毒的血細胞凝集濃度有關.本方法和組合物應用了這種關於複合糖在病毒感染中的作用的知識.含有神經氨酸-己糖胺連接的複合糖或產物、或任何其它被病毒識別為受體的複合糖或結構相似單元均可用作流感和其它病毒或其它利用這種或相似構型作為受體的感染的預防性或治療性團套.因此本發明在一方面，將這些無糖圍套經口、經皮、全身(例如靜脈內或腹膜內)、或作為具腔或呼吸道噴霧劑、或通過任何其它方式給藥，使病毒和團套能夠在病毒第一次感染細胞或在離開原始耙向細胞後感染其它細胞之前彼此接觸.因此，本發明在這方面提供了防止或抑制流感病毒感染及其後果、即神經4^酸喪失的方法.精神分裂症中的流感病毒感染、腦細胞損失和神經氨酸與己糖胺無糖產物缺乏由發育中的腦流感病毒感染引起的細胞損傷或細胞死亡據信可導致神經元病症，例如精神分裂症，或者在其致病中起一定作用.以前的定童神經化學研究提示，神經氨酸和己糖胺是複合糖細胞內識別"符號後(sign-post)"系統的一部分，該系統形成承擔正常腦發育和行為的神經網絡，最近，精神分裂症腦的組織學研究揭示，神經元組織破壞業已提示是由發育損傷導致的.現在，流行病學研究提示，產前感染含有神經氨酸苷酶的流感病毒有易患精神分裂症的傾向.此外，現已發現，腦脊液中綴合的神經氨酸和己糖胺的濃度在精神分裂症患者中定量降低.從最近的流行病學觀察結果可知，在母親妊娠的中間三個月感染流感病毒的個體(Callaghan等《柳葉刀》》337，1248-1250(1991))和患有高頻神經節苷脂與其它糖脂病症的人群Uahav等《美國精神病學雜誌》143(10),1249-1254(1986))中，精神分裂症出現的頻率增加.組織學研究證明在精神分裂症腦中有神經元細胞損失和神經元組織破壞(F.E.Bloom,《普通精神病學文獻》50,224-227(1993)),神經氨酸被流感病毒酶、神經氨酸苷酶(涎酶)從其綴合物中除去，可能對未成熟腦中的神經元細胞識別分子造成損傷.上述最近的流行病學和組織學發現與定量神經化學數據有關，這些數據顯示，精神分裂症患者的腦脊液(CSF)中神經氨酸和己糖胺綴合物的實際濃度降低了(S.Bogoch《美國精神病學雜誌》114,172，(1957)).而且，對腦中複合糖(糖脂、糖蛋白)識別物質所進行的有關工作(S.Bogoch《美國化學協會雜誌》79，3286,(1957))得出了神經元連接性和神經系統成熟的"符號後"假說(S.Bogoch《記憶的生物化學；腦類粘蛋白功能探索》牛津大學出版社1968).以前已經證明，存在於神經系統中的複合糖是識別物質(S.Bogoch《美國化學協會雜誌》79，3286,(1957);S.Bogoch《生物化學雜誌》68，319-324，(1958)).腦神經節苷脂的結構首先被測定後，神經節苷脂顯示體外既充當流感病毒的受體，也充當刺激蛤心臟和平滑肌的效應器.腦內另外給予的神經節苷脂體內充當"圏套"，抑制腦神經元被流感病毒感染.人腦糖蛋白已經可以大量分離、區分和對其碳水化合物成分進行部分特徵鑑定.複合糖已經顯示存在於突觸膜中，參與哺乳動物神經發育和鴿子的訓練與學習任務.神經系統中複合糖的"符號後"功能在發育成熟過程中和在體驗中都是建立神經網絡的先決條件.業已顯示精神分裂症患者CSF中綴合的神經氨酸和己糖胺比其它精神病患者和正常人顯著減少(S.Bogoch《自然〉〉184，1628-1629(1959)).這種減少與疾病的嚴重性有定量比例關係，並且隨著臨床狀態的改善而朝正常值增加(Bogoch等《新英格蘭醫學雜誌》264，251-258(1961)),本發明提供了精神分裂症和其它無糖蛋白濃度升高的醫學疾患的有益治療.在治療精神分裂症的本方法中，複合糖的濃度升高，患者腦中無糖蛋白的量減少.在治療精神分裂症的本方法中，將神經氨酸和己糖胺前體D-葡糖胺-HCl給予精神分裂症患者，以改善這些患者的精神病狀態.確切地說，給予約50-500mgD-葡糖胺-HCl、優選約100250mgD-葡糖胺-HCl/天、最優選約200mgD-葡糖胺-HCl/天，通過升高腦中糖蛋白濃度和降低腦無糖濃度，而改善精神分裂症患者的總體臨床健康水平.阿爾茨海默病中的無糖產物阿爾茨海默病是神經細胞損失的毀滅性消耗病，表現為認知障礙，主要為早期記憶喪失.某些澱粉樣蛋白前體蛋白(APP)衍生物是這種疾病特徵性異常腦沉積的元兇.儘管APP已知是一種糖蛋白，不過對APP中的碳水化合物還沒有引起關注.由於本發明的原因，無糖產物可以這樣檢測(1)直接對腦脊液中碳水化合物組分減少了的APP衍生物加以分離和特徵鑑定，和/或(2)間接對患者血清中的抗無糖APP抗體加以檢測和量化.腦中早期前澱粉樣蛋白沉積物已在出現神經原纖維纏結、即神經細胞破壞的產物前顯現，並顯示參與阿爾茨海默斑塊的"成熟".這些前澱粉樣蛋白沉積物象成熟斑塊一樣含有Ab肽，它是39-42個胺基酸殘基長的APP降解產物.由前澱粉樣蛋白向成熟的澱粉樣蛋白斑塊的轉變是可能的，因為在唐氏症候群患者腦中出現變性軸突之前，前澱粉樣蛋白沉積物可以存在數年，前澱粉樣蛋白沉積可能更易治療，即在發生神經細胞損傷之前，可將之溶解排洩.給予二苯乙內醯脲(DPH)能夠提供對抗斑塊進一步蓄積的保護作用，本發明證明它升高腦中與蛋白質結合的己糖濃度.DPH可經肌內、皮下或靜脈內對患者給藥，給藥刑量在約每天0.5~2mg/kg體重的範閨內，給藥持續時間視需要而定.結果是患者腦內與蛋白結合的己糖量增加.本發明的另一方面，在腦腫瘤和其它疾病狀態下，腦複合糖的碳水化合物成分濃度降低，通過給予某些藥物例如二苯乙內跣脲(DPH)，可以朝正常濃度升高.DPH的給約刑量範圍約為0.5-2mg/kg體重，優選約為lmg/kg體重，即使在沒有肺瘤的情況下，也升高與腦蛋白結合的己糖濃度.因此在本發明的這種實施方案中，提供了腦或其它惡性腫瘤的治療方法，該方法包括給予治療有效刑量的DPH，該劑量可引起患者複合糖水平升高.約lmg/kg/天給藥數天足以升高腦複合糖濃度至正常或接近正常的水平.治療可以持續必要的時間，優選直到惡性腫瘤體積縮小或完全消失時為止.其它導致新無糖抗原暴露並導致無糖抗體產生的疾患實例是帕金森氏病和多發硬化，本發明的方法應當適用於這些和其它病症，既適用於腦也適用於其它器官，既適用於診斷也適用於治療.無糖抗原肽和抗無糖肽抗體無糖腦糖蛋白10B及其特異性抗體(單克隆或多克隆)是在腦腫瘤和其它惡性腫瘤中發現的兩種無糖產物.無糖IOB是從正常糖蛋白10B中除去碳水化合物後得到的.無糖10B和若干無糖10B片段的胺基酸結構已經通過若干獨立的方法加以測定.無糖10B肽已經被若干方式消化為有用的12聚體和16聚體肽片段，它們已經顯示具有抗原性.抗無糖IOB抗體是IgM型的，可導致細胞死亡.純化無糖10B的三種肽成分的胺基酸序列通過碘代苯甲酸與胰蛋白酶水解、埃德曼降解、自動水解與微波水解和質譜法加以測定.儘管清楚地了解這些肽是無糖10B的成分，但最初並不知道這些肽是否是實際意義上的免疫表位(免疫學上的活性抗原片段).現已測定，兩個較長的序列代表免疫表位，負責被機體免疫系統識別並由此在體內產生特異性抗體、即抗無糖10B(抗致惡性素抗體).為了確認這個事實，無糖10B序列的知識已被用於體外合成相同序列的合成肽.將這些合成肽注射給動物，這些動物產生特異性抗致惡性素抗體、即抗無糖IOB，這一點已應用固定完整無糖IOB通過標準免疫吸附技術進行過驗證.因此，無糖IOB是抗原，這些肽片段是真正的表位，用於抗無糖IOB(抗致惡性素抗體)的產生和結合.這些合成肽在注射給動物時，可誘導抗致惡性素抗體濃度升高，因此嚴格地確認，天然生物無糖物質亊實上參與人類腫瘤中發現的免疫應答.另外，這些合成肽作為合成疫苗，可用於提高機體自身的抗致惡性素抗體濃度.以前已經確認，血清中抗致惡性素抗體濃度與癌症患者存活長短有定童關係，已經生產出合成抗癌疫苗.在很多不同細胞類型的常見惡性腫瘤中都觀察到抗無糖蛋白10B抗體(抗無糖10B或抗致惡性素)的絕對濃度升高，例如肺、乳腺、結腸等的癌症.抗體的增加說明無糖病理學是普遍存在的病理學現象，並不限於腦.抗無糖10B濃度升高的檢測是一種有用的惡性腫瘤診斷方法.無糖產物和方法用於病毒性疾病的早期診斷和治療，該病毒被保護在細胞內的安全屏障中若干病毒，例如B型肝炎和C型肝炎病毒，感染後可引起肝細胞癌，再如HIV,可導致AIDS和若干惡性腫瘤的頻率增加，它們都部分地耐受通過給予抗病毒製劑而進行的診斷和治療，這是因為病毒局限在細胞內，處於慢性潛伏狀態，已知稱為細胞內的安全屏陣.因此，儘管已有大量有效的抗病毒製劑，例如用於HIV的抗蛋白酵，能夠滅活或破壞存在於細胞外液中的HIV病毒，但它們不能根除體內所有病毒，因為有些病毒存在於細胞安全屏陣內，例如在淋巴細胞內.因此，儘管現在通過抗病毒製劑治療可達到血液的無病毒狀態，但當這些治療停止後，安全屏障內的病毒經常迅速地釋放到細胞外，進入血流，並感染新的細胞.因此，這些潛伏的病毒可以在任意時間複製並釋放進入細胞外液，感染其它細胞，最終戰勝宿主.病毒利用安全屏障的另一個例子是，乙型或C型肝炎病毒以在肝、淋巴細胞或其它細胞中持續潛伏或慢性感染達很多年，通過既定的病毒致癌作用，導致肝細胞癌.由乙型或C型肝炎致癌作用所導致的癌症通常經過數年才達到臨床可檢測的狀態，在本發明之前沒有辦法更早地檢測惡性細胞，從而更早地治療癌症.現已發現，這些病毒安全屏障可以比以前的檢測方法提前數年被檢測到.被感染細胞向惡性(永生)狀態的轉化是頻繁的，也許需要方法以建立和維持病毒安全屏障，因此，甚至在感染後的前幾年，這些安全屏障也能夠通過給予無糖IOB或無糖IOB合成抗原表位(疫苗)或抗無糖10B產物(抗體)加以破壞(治療)肝內癌發生是人乙型或C型肝炎病毒感染的既定後果(據估計，該病毒在美國的感染人群超過li，在亞洲為2X),但是肝細胞癌(HCC)存在與否的檢測僅在該惡性腫瘤生長的晚期才是可能的(通常在最初的病毒感染之後10至25年).這種檢測藉助於標記物例如甲胎蛋白、去-Y-凝血酶原和血小板衍生的內皮細胞生長因子水平，或者藉助掃描技術分辨可以看見的癌(0.5-lcm,代表數十億細胞)，但所有的方法也僅在疾病晚期才是完全有效的，此時其它惡性腫瘤跡象也已經在臨床上表現出來.向惡性腫瘤的轉化包括細胞的永生化，使細胞永遠存活，也不分裂.這種情況為病毒創造穩定的細胞屏陣.在惡性腫瘤進展的第二階段，細胞分裂增加(增殖)，這提供了在本發明之前的唯一跡象，說明第一階段的轉化在事實上已經發生了.不幸的是到那時候(10~25年後)，增殖階段產生臨床可檢測到的肺瘤，例如臨床上明顯的肝細胞癌，成功治療該惡性肺瘤是極其困難的.本發明中，存在於肝惡性腫瘤中惡性轉化早期階段的特異性無糖應答提供了早期檢測的可能.而且，由於所檢測的無糖改變的性質，本發明方法提供了新穎的潛伏性病毒感染的特異性治療.通過患者血液中特異性無糖產物增加的檢測，現已發現，肝細胞向惡性狀態轉化比以前所認為的要早發生數十年一在感染後的前幾年內.病毒性無糖病症的診斷和治療本發明提供了肝細胞癌和其它癌症的早期檢測和治療方案.在病毒性無糖病症的診斷和治療中，可以採用單獨的下列通用程序，或者與其它已知的治療方法聯合應用，或者用於病毒檢測，該檢測可用於早期治療(在臨床癌症清晰可見之前)已經轉化為惡性狀態的細胞以及破壞病毒感染動物的細胞內安全屏陣.a)通過熟知的標準程序診斷諸如乙型或C型肝炎或HIV等病毒性病症或其它慢性病毒感染，例如通過現在常用的既定方法測童對抗病毒蛋白質的特異性血清抗體；b)可以通過下列實施例所述程序測定血清中升高的抗致惡性素抗體水平證實轉化(惡性、永生)細胞的存在；c)可以進行患者血液中病毒基線(預處理)濃度的測定(例如血清中特異性病毒RNA的定量測定，例如HIV-1RNA測定法)；d)可以進行血液和其它體液中無糖10B或其片段肽的存在和濃度的測定，其片段肽例如無糖10B"碘肽"和"胰蛋白醉肽"(見實施例)；e)注射一種或多種根據本發明的合成肽疫苗，優選為皮下注射，注射量例如約為50~200微克，優選約為100微克，重複注射，例如但不限於每14天，或由主治醫師確定的其它適合時間，直到通過血清中的定量測定觀察到抗致惡性素抗體達到最大增重時為止；f)通過本領域既定的方法施行抗病毒化學療法(例如蛋白酶抑制劑，阿昔洛韋)，以破壞或中和已經從細胞內安全屏障釋放到細胞外的病毒；g)血液中的病毒濃度可以再次按照程序c)(預處理)加以測定(後處理)，h)無糖IOB或其片段肽的存在和濃度按照程序d)加以測定.i)程序a)至h)可以重複進行直到下列指標提示所有轉化的惡性細胞都被破壞時為止，這在最後一次疫苗注射後大約90-120天按照程序b)，血清中的抗致惡性素抗體恢復至正常水平(低於135|ig/ml);根據程序c)的測定結果，病毒沒有進一步釋放進入血液；如程序d)所示，無糖IOB或其片段肽不存在，這些都說明，轉化的惡性細胞(含有無糖抗原產物)不再存在於體內.j)可以驗證在上述治療結束時不存在轉化為惡性腫瘤的細胞，並且惡性細胞的細胞增殖程度可以在上述治療過程中這樣加以目測、定量和監測將與99鎝或其它適合的放射體綴合的抗致惡性素抗體通過靜脈內方式給藥，用(計數器進行記錄，例如在乙型或C型肝炎的情況下記錄肝中惡性細胞群的數量和體積，其體積小於用非特異性掃描技術所檢測到的結果，再如在HIV感染和AIDS的情況下記錄淋巴結、脾和腦.k)任何頑固的病毒安全屏陣都可以通過抗致惡性素抗體或任意其它優先破壞惡性細胞的胂瘤化療藥物加以治療.類似地，下面是在臨床癌症清晰可見之前或在惡性腫瘤病程中用於已經轉化為惡性狀態的細胞的早期治療、破壞或滅活的程序，其中該轉化劑不是病毒.可以採用下列步驟或部分步驟的任意組合.這些步猓和方法可以與其它已知的檢測和治療癌症的方法聯合使用.a)通過測定血清中升高的抗致惡性素抗體水平測定轉化(惡性、永生)細胞的存在；b)測定血液和/或其它體液中無糖10B或其片段肽的存在和濃度；C)注射一種或多種根據本發明的合成肽疫苗，優選為皮下注射，注射量例如約為50~200微克，優選約為100微克，重複注射，例如但不限於每14天，直到通過血清中的定量測定觀察到抗致惡性素抗體達到最大增量時為止；d)無糖10B或其片段肽的存在和濃度按照程序b)和/或通過測定血清中升高的抗致惡性素抗體水平加以測定；e)程序a)至d)可以重複進行直到下列指標提示所有轉化的惡性細胞都被破壞時為止，這在最後一次疫苗注射後大約90~120天按照程序b)，血清中的抗致惡性素抗體恢復至正常水平(低於135pg/ml);按照程序d)，無糖10B或其片段肽不存在，這些都說明，轉化的惡性細胞(含有無糖抗原產物)不再存在於體內；f)可以驗證在上述治療結束時不存在轉化為惡性腫瘤的細胞，並且惡性細胞的細胞增殖程度可以在上述治療過程中這樣加以目測、定量和監測將與99鎝或其它適合的放射體綴合的抗致惡性素抗體通過靜脈內方式給藥，用(照相機進行記錄；g)任何頑固的惡性細胞通過抗致惡性素抗體或任意其它優先破壞惡性細胞的腫瘤化療藥物加以治療.實施例實施例1我們在這裡所闡述的雙盲研究證明，與非精神分裂症的精神病患者相比，精神分裂症的CSF中綴合的神經氨酸和己糖胺減少，19名患者中，有兩名患者因為臨床診斷不明確而被排除在外.其餘17名患者，如果臨床上符合，則被稱為"精神分裂症"(N-ll)，若診斷不是精神分裂症，則稱為"非精神分裂症"的其它精神病(N-6).這些診斷是在仔細的臨床準備下提出的，包括由已經完成最少三年的精神病住院醫師培訓的精神病專家收集患者的全程病史，以及用精神病特徵量表(Campbell等《美國精神病學雜誌》123,952-962(1967))評價精神狀態，所有診斷經過高級精神病學專家的確認.提供17名患者的腰穿CSF標本，各為5-18ml，編號，沒有臨床信息.將每份樣本凍幹，在0-5TC下徹底地對蒸餾水透析(玻璃紙孔徑約為MW12000道爾頓)，以除去游離的神經氨酸和游離的己糖，不可透析的部分一式兩份，通過比阿耳氏苔黑酚和硫代巴比妥酸(TBA)法定量分析綴合的神經氨酸，綴合的己糖胺和綴合的己糖已如前迷(s.Bogoch《生物化學雜誌》235，16-20(1960)).所有樣本的神經化學試驗都完成後，解密患者的標識碼.儘管樣本量小，雙尾t檢驗顯示精神分裂症組具有統計學上顯著低的綴合的神經氨酸濃度(p〈.025)和綴合的己糖胺濃度(p〈.006)，而綴合的己糖濃度不低.81.8X精神分裂症患者中綴合的神經氨酸值低於7.5Mg/mlCSF，而83.3X非精神分裂症患者中綴合的神經氛酸值高於7.5Mg/mlCSF.用三名患者重複試驗，一名非精神分裂症和兩名精神分裂症患者，他們分隔數周抽取CSF，神經化學分析結果與隨機雙盲樣本的相似.不過，用TBA法測定綴合的神經氨酸是不可靠的(Bogoch等《自然》195,180(1962)).應當強調的是，在本項和所有以前進行的體外和體內研究中，只有綴合的、而不是游離的神經氨酸對精神分裂症具有生物學活性或起皺性(creased)因此，由以前的神經化學數據得出正常的"符號後"假說，但是複合糖的病理學性質直到本發明之前還不被人所理解.作為複合糖的神經氨酸和己糖胺的濃度降低的意義以前還不被人所理解.由病毒或其它急性或慢性原因引起的這些複合糖在分娩前或分娩後的減少是精神分裂症發病機理中的關鍵，這一點僅在現在才被認識到.綜合考慮在妊娠中間三個期間，流感病毒感染與精神分裂症頻率之間關係的流行病學證據，腦細胞損失和結構破壞的組織學證據，以及複合糖中神經氨酸和己糖胺濃度定量降低的直接證據，得出了本項無糖病理學發現。實施例2給精神分裂症患者應用神經氨酸和己糖胺前體，產生改善作用.將D-葡糖胺HC1每天200mg經口給予住院的慢性精神分裂症患者，連續30天.應用精神病學特徵等級量表以及全面的臨床觀察，檢測改善作用的有無.一半以上的患者有良好反應，不存在亊與願違的反應.實施例3鴒子在訓練過程中，腦複合糖己糖和"C-葡萄糖的摻入增加.比較靜息和在Skinner箱內訓練的鴿子的腦的(a)複合糖己糖的絕對量和(b)摻入腦複合糖的"C-葡萄糖.tableseeoriginaldocumentpage17將小鼠分成兩組，一半皮下接種腦室管膜瘤，另一半不接種.這兩組各自再分成兩組.一半每天接受lmg/kg體重的皮下注射DPH,另一半不接受DPH,僅注射鹽水.在室管膜瘤充分生長到將要破裂皮膚表面時處死動物.在DPH給藥的情況下腫瘤的生長顯著減少.收集每個亞組的腦，同實施例3提取與蛋白質結合的己糖，得到下列結果.肺瘤腦中與蛋白質的己糖，以蛋白質的x表示沒有給予DPH給予DPH不存在4.6,5.57.9,8.0存在2.6,2.36.8,7.0無論腫瘤是否存在，給予DPH都引起腦中與蛋白質結合的己糖濃度升高.實施例5無糖產物的體外合成12聚體與16聚體的合成肽我們體外合成了測定的兩個無糖IOB序列(實施例8)，即12聚體的"胰蛋白酵肽"GLSDGSNTESDI和16聚體的"碘肽"YKAGVAFLHKKNDIDE.在Genosys肽合成設備中，採用Abacus系統高偶聯效率的標準Fmoc化學方法，結合胺基酸的TBTU活化，與非溶脹性恆定體積的PEG聚苯乙烯樹脂偶聯，該樹脂有助於維持高濃度的活化胺基酸，以驅使每個偶聯反應進行完全.產品的純化採用C8柱，用100iA至20XA:B洗脫.A是0.1X三象乙酸(TFA)的蒸憤水溶液.B是0.1TFA的乙猜溶液.收集所有的峰.洗脫液在220nm下讀數，純化標準如下峰組分用質謙法測量(Perspective生產的Maldi-TOF),進行HPLC(PerspectiveBiosystems生產的BioCad)以確保純度>95、每種肽用質詳法和分析性HPLC進行分析，以確認肽的結構，然後再次進行製備性HPLC，分離所需的峰，終產物再次用反相HPLC和質謙法分析，得到肽的最終純度.在12聚體肽和16聚體肽的情況下，合成肽的序列分別確認為正是用無糖10B的質譜法所測定的序列，即"胰蛋白蘇肽"和"碘肽".實施例6合成的無糖12聚體與16聚體肽是體內和體外產生抗無糖產物的疫苗在無糖10B中所測定的肽序列是用於抗致惡性素抗體產生的真正表位的證據a)12聚體合成肽第l天，測定兩隻3~9月齡，以前沒有經過注射的紐西蘭白兔#508和#507血清抗致惡性素抗體的基線濃度後，給每隻兔子皮下注射100微克12聚體合成肽GLSDGSNTESDI，該肽是體外合成的，並與KLH(鑰孔狀透明血清蛋白)佐劑和弗羅因德氏佐劑綴合.在第14天和笫42天，進行相同肽的加強注射.從動物耳動脈放血，通過前述標準方法測定抗致惡性素抗體濃度，如困6所示；也就是說，抗體被免疫吸附到完整的、固定的無糖10B(致惡性素)上，後者是從生長在組織培養基中的惡性成膠質細胞瘤細胞中分離得到的.在笫21天、第26天和第55天對兔血清進行抗體測定.兩隻(2/2)兔子都產生了超過未注射基線血清水平的抗致惡性素抗體.圖7A顯示f508兔每次放血時的抗致惡性素抗體濃度，既有快結合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結合抗體(S-TAG,實心柱).我們看到S-TAG濃度增加到最大量時大約是基線水平的七倍.圖7B顯示W07兔每次放血時的抗致惡性素抗體濃度，既有快結合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結合抗體(S-TAG，實心柱).我們看到S-TAG濃度與基線水平相比，增加大約三倍，F-TAG濃度與基線水平相比，增加大約五倍.困7B還顯示了莽507兔笫26天放血和#508兔較少程度第21天放血表明的事實，即F-TAG的增加在S-TAG濃度的最大增加之前.這種先於S-TAG增加的F-TAG增加與體外觀察結果相同，該結果觀察了完整的無糖10B誘導組織培養物中所分離的淋巴細胞產生抗致惡性素抗休(《癌症的檢測和預防》12:313-320,1988).給兔子注射合成肽表位重複出現這種現象進一步確認這樣的事實，合成肽確實複製抗致惡性素抗體的產生並釋放進入血清.除了產生新穎的合成產物以外，這些合成肽在注射給動物時誘導高濃度抗致惡性素抗體產生的事實確立了天然生物無糖物質事實上參與在人癌症中所發現的免疫應答(見困6).正如以前左1988年的一項研究(《癌症的檢測和預防》〉12:313-320，1988)中所測定的，對抗無糖10B的抗致惡性素抗體是IgM型的，沒有或幾乎沒有IgG型.在現在的研究中，將全合成的抗原、即12聚體的合成肽注射給兔子，單獨測定所產生的抗體，以測定是否IgG是更普遍的.於是也用醃聯免疫吸附測定法(ELISA)測定抗肽抗體效價，其中游離的合成16聚體肽結合在固相中(lMg/ml).結果以血清稀釋度的倒數表示，OD405為0.2.利用生物素標記的抗兔IgG、HRP-SA綴合物和ABTS進行檢測.兩隻兔子#507和#508注射後的IgG水平與注射前沒有區別一都低於50.不過，參見下列16聚體合成肽的結果.b)16聚體合成肽類似地在第l天，測定兩隻3~9月齡，以前沒有經過注射的紐西蘭白兔#505和#506血清抗致惡性素抗體的基線濃度後，給每隻兔子皮下注射100微克16聚體合成肽YKAGVAFLHKKNDIDE，該肽如下所述體外合成，並與KLH(鑰孔狀透明血清蛋白)佐劑和弗羅因德氏佐刑綴合.在笫14天和笫42天，進行相同肽的加強注射.從動物耳動脈放血，通過如圖6所示的標準方法測定抗致惡性素抗體濃度.也就是說，抗體被免疫吸附到完整的、固定的無糖10B(致惡性素)上，後者是從生長在組織培養基中的惡性成膠質細胞瘤細胞中分離得到.在第21天、第26天和第55天對兔血清進行抗體測定.兩隻(2/2)兔子都產生了另外的抗致惡性素抗體.關於16聚體的合成肽，圖8A顯示脊505兔每次放血時的抗致惡性素抗體濃度，既有快結合抗體(F-TAG,空心柱)，也有慢結合抗體(S-TAG，實心柱).我們看到S-TAG濃度增加了，但沒有圖7A或7B中12聚體合成肽增加的那麼多.圖8B顯示f506兔每次放血時的抗致惡性素抗體濃度，既有快結合抗體(F-TAG，空心柱)，也有慢結合抗體(S-TAG,實心柱).我們看到S-TAG濃度增加了大約2.5倍.類似地，用12聚體合成肽或16聚體合成肽誘導在組織培養基中體外分離的淋巴細胞，用量為I-IOmg/ml，以複製抗致惡性素抗體.在這種產生作用中，刺激性肽是合成的12聚體或16聚體肽，而不是完整的無糖IOB，我們所用的方法見《癌症的檢測和預防》12:313-320,1988.正如以前在1988年的一項研究中所測定的，若"生物學"完整的無糖10B是抗原，則體內和體外產生的抗致惡性素抗體都是IgM型的，沒有或幾乎沒有1￡^_.在現在的研究中，將全合成的抗原、即16聚體的合成肽注射給兔子，單獨測定所產生的抗體，以測定是否存在IgG.於是也用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定抗肽抗體效價，其中游離的合成16聚體肽結合在固相中(lMg/邁l).結果以血清稀釋度的倒數表示，0D405為0.2.利用生物素標記的抗兔IgG、HRP-SA綴合物和ABTS進行檢測.與用12聚體合成肽所得結果相反，關於16聚體合成肽，兩隻兔子#507和#508注射後的IgG水平上升到非常高的水平.#507和#508兔的注射前水平都低於50;#507兔笫26天水平為18031，#508兔為71326;#507和#508兔第55天水平都超過204800.因此，通過16聚體合成肽的注射，不僅產生IgM型產物，而且已經產生了IgG型抗致惡性素抗體.由於以前注射"生物學"完整的無糖10B給動物和淋巴細胞的組織培養基都總是產生IgM型抗致惡性素抗體，而且從人血清中分離的人抗體也是IgM型的，因此假定這種抗體不轉化為IgG型，與大多數、但不是全部抗體的情況相同.因此通過16聚體合成肽的注射而產生的IgG型抗致惡性素抗體是一種新型抗體.IgG型優於IgM型，因為IgG型分子量更小(150000對900000道爾頓)，因此將比IgM型更容易進入細胞外與細胞內間隙.這與抗體的掃描和治療用途都有關，而且抗體可以單獨使用或者作為化療藥物的栽體.實施例7抗致惡性素抗體的正常濃度與升高濃度範圍的確定升高的抗體僅與惡性轉變有關在上述研究的繼續和擴展研究中，有9873名個體，包括健康對照、醫學病症、乳腺癌和其它與細胞類型無關的常見癌症，向惡性狀態的轉變已經顯示與在數天內增加134jig/ml以上)的特異性抗體、即血清抗致惡性素抗體(AMAS)濃度有關，濃度用免疫吸附法對抗固定化無糖10B抗原測定(正常水平為0~134pg/ml血清).這些水平已經在本研究中得到證實.如困10所示，在炎症狀態沒有惡性轉化的情況下不發生抗致惡性素抗體濃度的增加；在沒有轉化的純增殖狀態，如在良性腫瘤中，也沒有抗致惡性素抗體濃度的增加.困6顯示，在並非惡性或終末期的早期活動型臨床癌症中，濃度増加超過正常水平僅發生於惡性轉化，如圖6(原發性)肝癌和其它癌症.由於癌細胞膜糖蛋白10B的碳水化合物單元喪失而發生這種免疫應答，結果潛在的肽表位暴露，這些表位被識別為外來物質，隨後產生抗致惡性素抗體.困6中包括正常個體的結果，作為肝炎/肝硬化結果的對照.困6顯示了在美國和亞洲個體中測定的抗無糖10B抗體(抗致惡性素抗體)濃度.美國和亞洲健康對照出現"假陽性"(上升)的比例分別為4.5X和8X，相形之下，發現抗致惡性素抗體濃度增加超過134jig/ml的比例，在乙型或C型肝炎/肝炎後肝硬化患者中為35.5、在慢性乙型或C型肝炎病毒感染繼發的明確臨床癌症患者中為75X(有些可能是終末期，於是抗體減少)，其它癌症為95X.由於全部對照組個體隨機散布於肝炎病例中，並採取育法測定，因此對照組與肝炎病例之間的差異是非常顯著的(p〈.001).由於這種抗體濃度在很多其它病毒病症，其它炎症，其它感染性或醫學病症，或者與肝炎、肝硬化或惡性胂瘤無關的健康對照中不增加，因此可以得出結論，如其他腫瘤一樣，所觀察到的抗致惡性素抗體增加意味著惡性細胞的存在.因此，乙型或C型肝炎陽性個體抗致惡性素抗體濃度的測定(1)使人病毒致癌發生的早期階段檢測成為可行，(2)使乙型或C型肝炎病毒感染中進行惡性轉變比先前可能更早的檢測和治療成為可行.此外，惡性腫瘤表位的序列已經通過水解和質譜法加以測定，併合成.這些合成的肽作為疫苗，可用於增加對癌細胞特異性的免疫應答。這些肽已經顯示可以增加抗致惡性素抗體的濃度，該抗體在皮下注射後，在微微克(費摩爾)每癌細胞劑量下具有細胞毒性(困5),類似地，在AIDS患者中出現臨床癌症之前很久就已觀察到這種血清抗無糖10B(抗致惡性素)抗體濃度上升超過134Mg/m1.因此得出結論，早期惡性轉化提示細胞的永生化已經發生了，從而成為HIV病毒的安全屏陣.因此，這些安全屏陣可以象治療乙型或C型肝炎一樣加以治療.實施例8大量人群血液和其它體液中12聚體與16聚體肽的定量測定的自動化方法以前沒有描述過12聚體與16聚體肽表位的常規定重測定方法，事實上也沒有適合於診斷用途的血液或其它體液中完整無糖10B抗原常規定量測定方法，更沒有適用於大量人群的方法.目前可用於血液中抗原測定的方法例如使用腫瘤標記物CEA、PSA和CA125，不是非常可靠，實際應用也有限，因為它們得出大量假陰性和假陽性結果.例如，前列腺特異性產物釋放進入血清的PSA假陽性率範圍為15X~70%，反映了良性前列腺増生或運動，而不是前列腺癌.數以千計的實驗室在進行測定時很少進行實驗室間的質量控制，導致實驗室之間的結果沒有可比性.因此，需要發明新的更加可靠的方法，適合於大量人群，經濟實用.此外，因為血清抗致惡性素抗體濃度測定的使用作為惡性或終末期癌症診斷的輔助手段不是很有效，因為此時抗體的免疫應答失敗而且已知在疾病晚期更常發生抗原釋放進入血液，所以，測定釋放進入血液的抗原的方法更加有用，但是直到本發明以前還沒有可以利用的方法.下列方法可用於無糖10B的12聚體與16聚體肽(抗原)的測定，此外還可用於血液或其他細胞外液中任何已知的腫瘤標記物或任何其它可檢測產物.可用於該方法的是一種試刑盒，含有(l)無菌的、帶條形碼的、帶刻度的、塑料收集吸移管，具有膨大的頭部，包括可壓縮的球("球部")和帶刻度的透明錐形莖("莖部")，直徑約0.1~0.3mm,長約310cm，例如由CorningSamco製造的轉移吸移管.吸移管蓬部內壁塗有抗致惡性素抗體、蛋白醃抑制劑和抗凝劑；(2)無菌的柳葉刀，用於刺破手指取一滴血；和(3)申請表.將一滴血吸入吸移管尖，將試劑盒郵寄到指定的實驗室.所收集和運送的試刑盒優選為足夠小的，以便裝入大約4x9-10英寸的帶條形碼的商業信封內.淦有抗體、蛋白酶抽製劑和抗凝劑的收集吸移營的製備將吸移管塗以抗致惡性素抗體，優選藉助吸移管頭的可壓縮球部從溶液儲液器("抗體儲液器")中吸取吸移管莖部全長的溶液，該溶液含有約200pg/ml的抗致惡性素抗體加蛋白酶抑制劑(例如，每50ml一片BoehringerMannheim"完全"蛋白酶抑制刑，其中還含有EDTA抗凝劑)，使溶液留在吸移管內，優選過夜，以便抗體能夠吸附於吸移管壁.然後排出溶液.該製備過程可以通過儀器("自動吸移管裝填-排放器")自動進行，其中，每支吸移管莖頂部被擠壓夾垂直固定，一系列吸移管就這樣保持在適當的位置，儀器內還含有兩個水平金屬條，大約l/4英寸厚，l英寸寬，吸移管頭排列在它們之間.通過同時移動兩個水平金屬條，擠壓吸移管頭部的可壓縮球部，排出吸移管的內容物.通過分開兩個水平金屬條，放鬆吸移管頭部的可壓縮球部，從浸在儲液器液體中的吸移管尖將儲液器液體吸入吸移管莖部.將溶液排放到儲液器後，將吸移管內壁風乾，方法是在沒有儲液器的存在下，反覆自動地擠壓和釋放可壓縮球部，使空氣吸入和吹出吸移管尖，直到吸移管幹燥為止.填裝一系列吸移管後測定儲液器液體的濃度；如果儲液器內抗體濃度低於100Mg/ml，那麼向儲液器溶液中加入抗體和蛋白蘇抑制刑，使濃度重新達到大約200pg/ml.吸移管裝填-排放器整體能夠傾斜大約45度，以便在一種位置時將吸移管尖放入儲液器，在另一種位置時將吸移管尖放入另一個儲液器或廢液排放容器或空氣中.用子實驗室測定的樣本獲得和運送在血液樣本的情況下，試劑盒優選含有至少一支塗過溶液的吸移管、柳葉刀和申請表，申請表含有吸取血液和運送給實驗室的要求，以及醫師的姓名和地址，以便實驗室將測定結果發送給醫師.個人可以填好申請表，放入郵件.仔細地洗手，刺破指尖，然後壓縮吸移管頭的球部，將血液吸入吸移管莖尖.然後將樣本郵寄給實驗室.在除血液以外的體液樣本情況下，試劑盒內可以包括特別的要求.12聚體與16聚體肽的實驗室定量測定實驗室收到試劑盒後，進行下列常規操作，不過技術人員在必要時可以進行修改(1)實驗室技術員將每支吸移管在自動吸移管裝填-排放器中按順序夾好；(2)用條形碼讀數器自動記錄每支吸移管的條形碼數，輸入對自動吸移管裝填-排放器進行操作的計算機(測定結果也列在該數字下)；(3)技術員將每支吸移管內的血液體積和所有申請表數據記錄在計算機中的條形碼數下；(4)血液通過自動吸移管裝填-排放器排放到廢液容器(儲液器A)中；(5)自動吸移管裝填-排放器自動從另一個儲液器(儲液器B)中吸取蜂酸鹽緩衝鹽水(PBS)，洗滌吸移管內壁兩次，每次洗液自動排放到廢液容器(儲液器A)中，方法是將自動吸移管裝填-排放器交替傾斜45度，以便吸移管尖交替與廢液容器和含有磷酸鹽緩衝鹽水的儲液器接近；(6)將抗致惡性素抗體從另一個儲液器(儲液器C)中吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸兩小時，然後排放到廢液容器(儲液器A)中；(7)吸移管再次用PBS洗滌兩次，同上步驟(5);(8)將大約100|Lig/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結合的發光發射體，例如吖啶鋪醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘；(9)按照上步(5)將吸移管用褲酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌兩次；(10)用發光計測重所發射的光，將發光計旋轉調整到適當的位置，使其接收發光的埠指向吸移管的莖部；和(ll)每支吸移管的發光結果以發光單位計數，通過相同操作測定基於已知量的12聚體與16聚體肽的等摩爾混合物的標準曲線，由該曲線經過計算將發光結果轉化為肽的微克數，結果對每支吸移管內最初血液體積進行修正，列印出來和/或傳送到任意的電子數據儲存文檔中.家用試劑盒或者，尤其對於日常監測血液或其他體液(下稱"血液")抗12聚體與16聚體肽抗體濃度來說，不用將血液郵寄給實驗室，向個人或有能力的親屬提供用於在家中進行測定的設備和指導，發光計的讀數不被個人觀測到，而是通過國際互連網或其它電子裝置自動傳送給實驗室或醫師.於是，個人通過電子方式輸入申請表信息，通過電子方式讀取和輸入吸移管內血液體積，將裝有血液的吸移管放入水箱(0~5TC)(不冷凍)約兩個小時，取出吸移管，將血液排放到將要郵寄給實驗室的、拉鎖密封的塑料廢液容器中，用所提供的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌吸移管兩次，PBS排放到廢液容器中，將大約100pg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結合的發光發射體，例如但不限於吖澱鎩醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘.將吸移管內容物排放到廢液容器中，吸移管用PBS洗滌兩次，PBS也排放到廢液容器中.將吸移管插入發光計數，測量所發射的光.每支吸移管的結果以發光單位計，通過國際網際網路或其它電子裝置自動傳送給實驗室或醫師，通過相同操作測定基於已知重的抗致惡性素抗體的標準曲線，由該曲線經過計算將發光結果轉化為抗致惡性素抗體蛋白的微克數，結果對吸移管內最初血液體積進行修正，列印出來和/或傳送到任意的電子數據儲存文檔中.實施例9大量人群血液和其它體液中抗12聚體與16聚體肽特異性抗體的定量測定的自動化方法現在可用於測定抗這兩種肽抗體(抗致惡性素抗體)的方法儘管小心操作，是定量和可靠的，但在實際應用卻明顯受限，因為它們需要特殊的管子用於吸取和運送，需要實驗室、靜脈切開者或醫師從靜脈採集血樣，需要用於凝血、冷凍離心、立即在幹水上運送過夜的操作一所有這些都費時，或者在大多數地區不易獲得，並且價格昂貴.另外，目前的試刑製備方法是用生物學方法從生長在組織培養基中的惡性成膠質細胞瘤細胞產生的共價結合的致惡性素，經提取、分離、純化和與溴乙醯纖維素共價結合得到的——立即用昂貴的、手工的、非自動化的6小時免疫吸附法測定，該方法按照標準要求更多的人員訓練，並在操作中需要極其仔細小心.因此，適合於大量人群的經濟實用的新方法是必要的.在抗體的吸取、運送和立即測定時，採取大多數上迷預防措施以避免由於在抗體吸附管內貯存血清或在低於-7or:的溫度下貯存超過8小時而發現的損失或再現性(《癌症的檢測和預防》11:100,1987).現已發現，這些昂責和費時的預防措施不便普及，但如果在含有抗凝劑和蛋白蘇抑制刑的容器內收集和運送全血，並且肽或抗體分別用與發光底物結合的肽抗體自動測定，那麼這些措施是不必要的.本發明提供一種價格適宜的抗致惡性素抗體的測試方法，適用於大量人群.下列方法用於抗12聚體與16聚體合成肽(抗原)抗體的一般測定，此外還能用於血液或其它細胞外液中的任何其它抗體的測定，下列試劑盒可用於進行該搮作，它含有(l)無菌的、帶條形碼的、帶刻度的、塑料收集吸移管，具有膨大的頭部，包括可壓縮的球("球部")和帶刻度的透明錐形莖("莖部")，直徑約0.1~0.3mm，長約3~10cm，例如由CorningSamco製造的轉移吸移管.吸移管莖部內壁塗有12鏈節和16鏈節合成肽等摩爾混合物、蛋白酶抑制刑和抗凝劑；(2)無菌的柳葉刀，用於刺破手指取一滴血；和(3)申請表.將一滴血吸入吸移管尖，將試劑盒郵寄到指定的實驗室.所收集和運送的試劑盒是足夠小的，以便裝入大約4x9-10英寸的帶條形碼的商業信封內。塗有12聚體與16聚休合成肽、蛋白酶抑制劑和抗凝劑的收集吸移營的製備將吸移管塗以12聚體與16聚體合成肽的等摩爾混合物("肽")，優選藉助吸移管頭的可壓縮球部從溶液儲液器("肽儲液器")中吸取吸移管莖部全長的溶液，該溶液含有約200Mg/ml的l2聚體與16聚體合成肽的一種或等摩爾混合物，加蛋白酶抑制劑(例如，每50ml—片BoehringerMannheim"完全"蛋白酶抑制刑，其中還含有EDTA抗凝刑)，使溶液留在吸移管內，優選過夜，以便抗體能夠吸附於吸移管壁.然後排出溶液.該製備過程可以通過儀器("自動吸移管裝填-排放器")自動進行，其中，每支吸移管莖頂部被擠壓夾垂直固定，一系列吸移管就這樣保持在適當的位置，儀器內還含有兩個水平金屬條，大約l/4英寸厚，l英寸寬，吸移管頭排列在它們之間.通過同時移動兩個水平金屬條，擠壓吸移管頭部的可壓縮球部，排出吸移管的內容物.通過分開兩個水平金屬條，放鬆吸移管頭部的可壓縮球部，從浸在儲液器液體中的吸移管尖將儲液器液體吸入吸移管莖部.將溶液排放到儲液器後，將吸移管內壁風乾，方法是在沒有儲液器的存在下，反覆自動地擠壓和釋放可壓縮球部，使空氣吸入和吹出吸移管尖，直到吸移管幹燥為止.填裝一系列吸移管後測定儲液器液體的濃度；如果儲液器內抗體濃度低於100pg/ml，那麼向儲液器溶液中加入抗體和蛋白酶抑制劑，使濃度重新達到大約200Mg/ml.吸移管裝填-排放器整體能夠傾斜大約45度，以便在一種位置時將吸移管尖放入儲液器，在另一種位置時將吸移管尖放入另一個儲液器或廢液排放容器或空氣中.用千實驗室測定的樣本獲得和運送在血液樣本的情況下，試刑盒優選含有至少一支塗過溶液的吸移管、柳葉刀和申請表，申請表含有吸取血液和運送給實驗室的要求，以及醫師的姓名和地址，以便實驗室將測定結果發送給醫師.個人可以填好申請表，放入郵件.仔細地洗手，刺破指尖，然後壓縮吸移管頭的球部，將血液吸入吸移管莖尖.然後將樣本郵寄給實驗室.在除血液以外的體液樣本情況下，試刑盒內可以包括特別的要求.抗無糖10B12聚體與16聚體肽抗體的實驗室定量測定實驗室收到試劑盒後，(1)實驗室技術員將每支吸移管在自動吸移管裝填-排放器中按順序夾好；(2)用條形碼讀數器自動記錄每支吸移管的條形碼數和所有申請表數據，輸入對自動吸移管裝填-排放器進行操作的計算機(測定結果也列在該數字下)；(3)技術員將每支吸移管內的血液體積記錄在計算機中的條形碼數下；(4)血液通過自動吸移管裝填-排放器排放到廢液容器(儲液器A)中；(5)自動吸移管裝填-排放器自動從另一個儲液器(儲液器B)中吸取磷酸鹽緩衝鹽水(PBS),洗滌吸移管內壁兩次，每次洗液自動排放到廢液容器(儲液器A)中，方法是將自動吸移管裝填-排放器交替傾斜45度，以便吸移管尖交替與廢液容器和含有砩酸鹽緩衝鹽水的儲液器接近；(6)將抗致惡性素抗體從另一個儲液器(儲液器C)中吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸兩小時，然後排放到廢液容器(儲液器A)中；(7)吸移管再次用PBS洗滌兩次，同上步驟(5);(8)將大約100jjg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結合的發光發射體，例如吖啶鋪醋吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘；(9)按照上步(5)將吸移管用礴酸鹽援沖鹽水(PBS)洗滌兩次；(10)用發光計測量所發射的光，將發光計旋轉調整到適當的位置，使其接收發光的埠指向吸移管的莖部；和(11)每支吸移管的發光結果以發光單位計數，通過相同操作測定基於已知量抗致惡性素抗體的標準曲線，由該曲線經過計算將發光結果轉化為肽的微克數，結果對每支吸移管內最初血液體積進行修正，列印出來和/或傳送到任意的電子數據儲存文檔中.家用試劑盒或者，尤其對於日常監測血液或其他體液(下稱"血液")抗12聚體與16聚體肽抗體濃度來說，不用將血液郵寄給實驗室，向個人或有能力的親屬提供用於在家中進行測定的設備和指導，發光計的讀數不被個人觀測到，而是通過國際互連網或其它電子裝置自動傳送給實驗室或醫師.於是，個人通過電子方式輸入申請表信息，通過電子方式讀取和輸入吸移管內血液體積，將裝有血液的吸移管放入冰箱(0~5"C)(不冷凍)約兩個小時，取出吸移管，將血液排放到將要郵寄給實驗室的、拉鎖密封的塑料廢液容器中，用所提供的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌吸移管兩次，PBS排放到度液容器中，將大約100pg/ml的與抗人抗體，例如羊或兔抗人抗體結合的、發光發射體、例如但不限於吖咬銻SS吸入吸移管，保持與吸移管壁接觸30分鐘.將吸移管內容物排放到廢液容器中，吸移管用PBS洗滌兩次，PBS也排放到廢液容器中.將吸移管插入發光計，測量所發射的光.每支吸移管的結果以發光單位計數，通過國際網際網路或其它電子裝置自動傳送給實驗室或醫師，通過相同操作測定基於已知量的抗致惡性素抗體的標準曲線，由該曲線經過計算將發光結果轉化為抗致惡性素抗體蛋白的微克數，結果對吸移管內最初血液體積進行修正，列印出來和/或傳送到任意的電子數據儲存文檔中.實施例10無糖10B的結構A.無糖10B的碘代苯甲酸水解之後進行埃德曼降解，得到具有下列序列的肽("碘肽")YKAGVAFLHKKNDIDE胺基酸殘基編號12345678910111213141516B.質詳法之後利用PerkinElmerSciex儀器公司的MacBioSpecSoftwareManual013048-A,PESCIEX進行計算，得到肽YKAGVAFLHKKNDIDE的下列性質N-端基團氬C-端基團游離酸MH+單同位素質量"1847.9656amuHPLC指數=43,40MH+平均質量-1849.0998amuBullftBreese值"80等電點(pl)-8.0元素組成C"HmN"O"C.質詳法上述1A中通過碘代苯甲酸水解得到的"碘肽"的序列獨立通過無糖10B片段質詳法加以確認，該片段是通過如下所述溶液中的無糖10B和固定在溴乙醯纖維素上的無糖10B(無糖10BC或A10BC)的四種不同酸水解而得到的.這些水解作用產生13種重疊的水解片段(其中下面兩個6-10和6-12是用兩種不同的水解方法得到的).這些重疊片段一起獨立確認了"碘肽"YKAGVAFLHKODIDE的肽序列如下.tableseeoriginaldocumentpage30,胺基酸的標準字母代碼如下Y-酪氨酸；K-賴氨酸；A-丙氨酸；G-甘氨酸；V-纈氨酸；F-苯丙氨酸；L-亮氨酸；H-組氡酸；N-天門冬醯胺；D-天門冬氨酸；I-異亮氨酸；E-穀氨酸.-與片段N-端和C-端胺基酸連接的胺基酸."溶液中的完整無糖10B是強酸，等電點約為2.7，置於室溫下數小時或0-5TC下更長時間可自動水解.C.無糖10B的狹蛋白酶水解之後進行埃德曼降解，得到具有下列序列的肽("胰蛋白酶肽")GLSDGSNTESDI胺基酸殘基編號123456789101112D.無糖IOB水解片段質詳法之後利用PerkinElmerSciex儀器公司的MacBioSpecSoftwareManual013048-A,PESCIEX進行計算，得到"胰蛋白酶肽"GLSDGSNTESDI的下列性質N-端基團氫C-端基團游離酸MH+單同位素質量-1194.5U6amuHPLC指數-O.70MH+平均質量-1195.1817amuBull&Breese值-2690等電點(pl)".4元素組成C"H"N"O"E.質讒法上述2C中通過胰蛋白酶水解得到的"胰蛋白酶肽"的序列獨立通過無糖10B片段質譜法加以確認，該片段是通過如下所述溶液中的無糖IOB和固定在溴乙醯纖維素上的無糖10B(無糖10BC或AIOBC)的四種不同酸水解而得到的.這些水解作用產生7種重疊的水解片段，這些重疊片段獨立確認了"胰蛋白醃肽〃(G)LSDGSNTESD(1)的肽序列的2-11殘基如下.tableseeoriginaldocumentpage31*胺基酸的標準字母代碼如下G-甘氨酸；L-亮氨酸；S-絲氡酸；D-天門冬氨酸；N-天門冬醯胺；T-蘇氨酸；E-穀氨酸；I-異亮氨酸."溶液中的完整無糖IOB是強酸，等電點約為2.7，在室溫下數小時或0-5匸下更長時間可自動水解.F.無糖10B的CNBr水解之後進行埃德曼降解，得到具有下列序的二肽("CNBr肽")MD胺基酸殘基編號12G.無糖1OB中，存在色基("發色團")，使無糖1OB的濃溶液(>100Mm/ml)微呈黃色，並顯示如圖5所示的吸收光謙.在整個純化階段，包括高效液相色謙法在內，發色團都保留在無糖IOB中.通過排空和熱密封含有無糖10B溶液的玻璃管，用氮取代氧，則無糖10B溶液變為深綠色.若玻璃管敞開在空氣中，則溶液立即回復為黃色.由於從氣合狀態的黃色轉變為缺氣狀態的深綠色、再回到氧合狀態的黃色是可逆的轉變，僅與氣的存在或不存在有關，因此得出結論，顏色改變是發色團的可逆性氧化-還原性質.H.克隆無糖IOB的基因通過本領域熟知的方法，無糖IOB以及具有完整胺基酸序列的10B的基因利用上述"硪肽"或上述"胰蛋白酶肽"或二者加以衍生，以構建正常和轉化神經膠質細胞文庫的RNA和cDNA探針.無糖10B和糖蛋白10B的基因整體或其結構片段可以用作疫苗.另外，完整的基因或其部分可被引入各種熟知的表達系統，以產生完整的IOB糖複合蛋白或無糖10B，這些產物可作為疫苗用於患者或動物，以產生抗完整分子或其片段的特異性抗體.由於已知糖蛋白IOB參與所有動物的認識和認知訓練，因此能夠通過給藥來改善動物和人的認知功能.序列表Bogoch,SamuelBogoch,Elenore無糖產物和使用方法0942S/"S7S203/1",7551998-09-0408/19B,1391994-02-172PatentlnVer.'2<212PRT人腦神經膠質癌TyrLysAlaGlyValAlaPheLeuHisLysLysAsnAsplieAspGluIS1015213>12PRT人腦神經膠質痏"00>2GlyLeuSerAspGlySerAsnThrGluSerAsplie1510權利要求1、一種分離的複合糖，包含至少一種碳水化合物部分，該部分與具有序列2的胺基酸序列的肽共價結合。2、具有序列2的胺基酸序列的分離的肽.3、權利要求1的分離的複合糖或權利要求2的分離的肽在製備用於抑制或防止流感病毒顆粒附著於人類患者細胞的藥物中的用途.4、權利要求3的用途，其中該複合糖包含神經氨酸-己糖胺鍵.5、權利要求3的用途，其中該患者處於妊娠的笫一個或第二個三月期.6、治療有效劑量的D-葡糖胺-HCl在製備用於治療有需要的患者的精神分裂症的藥物中的用途.7、權利要求6的用途，其中所述治療有效劑量為約每天50~500mg。8、權利要求6的用途，其中所述治療有效劑量為約每天200mg.9、一種純化的單克隆抗體，該抗體特異性識別具有序列2的胺基酸序列的肽.10、一種純化的單克隆抗體，該抗體特異性識別無糖蛋白10B.11、用於增加有需要的患者抗致惡性素抗體濃度的治療組合物，包含一種肽，選自序列2的肽、無糖蛋白IOB及其組合.12、治療有效劑量的選自序列2的肽、無糖蛋白IOB及其組合的肽在製備用於治療有需要的患者的慢性病毒感染的藥物中的用途.13、權利要求12的用途，其中該慢性病毒感染是HIV.14、無糖蛋白IOB在製備用於診斷患者的與慢性病毒性疾病有關的癌症的試劑盒中的用途.15、權利要求14的用途，其中與慢性病毒性疾病有關的癌症是肝癌。16、包含純化抗體的治療組合物，該抗體特異性識別一種肽，該肽選自序列2的肽、無糖蛋白IOB及其組合.17、治療有效劑量的二苯乙內醯脲在製備用於治療有需要的患者的腦腫瘤的藥物中的用途.18、權利要求17的用途，其中該治療有效劑量為約0.5~2mg/kg體重，19、用於測定存在於患者血液中的無糖蛋白IOB抗原性表位濃度的試劑盒，包含至少一支血液收集管或吸移管和抗致惡性素抗體.20、根據權利要求19的試劑盒，其中所述抗體是包被在試管或吸移管內表面上的.21、用於測定存在於患者血液中的抗致惡性素抗體濃度的試劑盒，包含至少一支血液收集管或吸移管和具有序列2的胺基酸序列的肽.22、權利要求21的試劑盒，其中該肽是包被在試管或吸移管內表面上的，23、分離的核酸，編碼包含序列2的胺基酸序列的肽.全文摘要本發明涉及無糖產物和使用方法。公開了複合糖、含有該複合糖的治療組合物和使用該複合糖的治療方法。確切地說，提供了無糖10B的肽成分，它是致免疫表位，負責抗原被免疫系統識別。這些複合糖可用於預防流感病毒與細胞結合、治療精神分裂症和診斷與癌症形成有關的慢性病毒性疾病。文檔編號C07K1/00GK101096382SQ20071010877公開日2008年1月2日申請日期1999年8月30日優先權日1998年9月4日發明者埃倫諾爾S·博戈奇,塞繆爾·博戈奇申請人:塞繆爾·博戈奇;埃倫諾爾·S·博戈奇