使用黃嘌呤氧化還原酶抑制劑保護腎功能的方法

2023-10-07 23:35:49

專利名稱：：使用黃嘌呤氧化還原酶抑制劑保護腎功能的方法
技術領域：
：本發明涉及治療受試者以便保護腎功能的方法。更具體地說，本發明包括給予需要保護腎功能的受試者治療有效量的至少一種黃噪呤氧化還原酶抑制化合物或其鹽，以便保護這些患者的腎功能。
背景技術：
：業已觀察到，患有諸如高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病和/或腎石病(腎結石)病症的受試者，其腎功能有時可能會下降或損害，尤其是在長期病症發展的情況下(參見Johnson,祝ood戶w^/:,24:67-70(2006)，Siu,L.等人，A/AZ),47(1):51-99(2006)和Iseki,I.等人，A/XD,44(4):642-650(2004》。一般而言，當受試者的血清肌酸酐水平《1.5mg/dL而其肌酸酐清除率》50mL/分鐘時，他們被;現為具有正常的腎功能。如果血清月幾酸酐水平變得大於1.5mg/dL,或者如果肌酸酐清除率降至50mU分鐘以下，則受試者^皮i/v為是腎功能受損的。腎功能的另一個重要^f量標準是腎小球濾過率或GFR。GFR通過比較尿肌酸酐水平和血液測試結果來計算，被認為是腎臟狀態的更精確指示。對於大部分患者，GFR超過60ml/分鐘就足夠了。然而，如果GFR由先前的測試結果顯著下降，則這可能是需要藥物幹預的腎病的早期徵兆。在動物模型中，可使用腎微穿刺技術，尤其是本領域技術人員已知的方法，通過檢測尿蛋白排洩和腎小球血液動力學(包括全腎GFR、單個腎單位GFR、腎小球壓和流量、入球阻力和出球阻力)來評價腎功能。另外，針對腎近端小管的空泡變性、腎小管間質纖維化和入球小動脈血管壁增厚的腎組織學評價可用於進一步了解腎病的起因或病因。痛風的特徵在於由於胞外液的尿酸鹽過飽和而產生的尿酸鹽結晶在關節組織中有沉積症狀，尿酸鹽過飽和是高尿酸血症引起的生物化學異常(血清尿酸鹽水平男性超過7.0mg/dL,女性超過6.0mg/dL)。在患有痛風的患者中，腎結石或"結石，，發生率為10-25%,在那些患者中每年約1%將出現尿酸腎結石。正常血清尿酸鹽水平的長期恢復通常需要使用抗高尿S臾血劑。尿酸降低療法被推薦用於患有痛風和一種或多種以下病症的受試者急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病和/或腎石病(腎結石)。儘管已知多種降低血清尿酸鹽水平的療法，但還沒有完全了解它們對腎功能的影響。發明概述在一個實施方案中，本發明涉及在其需要的受試者中保護腎功能的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑或其藥學上可接受的鹽的步驟。在另一個實施方案中，本發明涉及在其需要的受試者中保護腎功能的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的化合物或其藥學上可接受的鹽的步驟，其中所述化合物具有下式結構其中R!和R2各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取7代的d-do烷基、未取代的或取代的d-d。烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、苯基亞硫醯基或氰基(-CN);其中R3和R4各自獨立為氫或如下所示的A、B、C或D:其中T將A、B、C或D連接至以上所示芳香環的R"R2、R3或R4處。其中R5和R6各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-Qo烷基、未取代的或取代的d-do烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、COO葡糖苷酸酯(Glucoronide)或COO-硫酸酯；其中R7和Rs各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-C,。烷基、未取代的或取代的Q-Cu)烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、COO-葡糖苷酸酯或COO-硫酸酯；其中R9為未取代的吡啶基或取代的吡啶基；和其中R^為氫或低級烷基、用新戊醯氧基取代的低級烷基，在每種情況下，RK)均4定合至以上所示的1,2，4-三唑環中的其中1個氮原子。在再一個實施方案中，本發明涉及在其需要的受試者中保護腎功能的方法，該方法包括給予受試者治療有效量的化合物或其藥學上可接受的鹽的步驟，其中所述化合物具有下式結構formulaseeoriginaldocumentpage8其中Rn和R!2各自獨立為氫、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基，或者Rn和R2可與它們連接的碳原子一起形成4元至8元-友環；其中R,3為氬或者取代的或未取代的低級烷基；其中R，4為1個或2個基團，所述基團選自氫、卣素、硝基、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基、-OR16和-S02NR17R17W,其中1116為氫、取代的或未取代的低級烷基、苯基取代的低級烷基、羧甲基或其酯、羥乙基或其酯、或者烯丙基；1117和Rn,各自獨立為氫或者取代的或未取代的低級烷基；其中Ris為氫或形成藥學活性酯的基團；其中A為具有1-5個碳原子的直鏈或支鏈烴基；其中B為卣素、氧或亞乙二硫代(ethylened他io);其中Y為氧、硫、氮或取代的氮；其中Z為氧、氮或取代的氮；和虛線指單鍵、雙鍵或兩個單鍵。依照本發明方法要治療的受試者可患有一種或多種以下疾病高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病或腎石病。或者，受試者可罹患進展性腎病，包括但不限於腎小管間質性疾病、腎小管細胞損傷、腎炎、腎小球疾病、腎小球性腎炎、腎缺血、腎缺血/再灌注損傷、腎血管疾病、腎動脈或靜脈栓塞、間質性腎炎、中毒性腎小球病變、腎結石/腎石病、長期性高血壓、糖尿病性腎病、充血性心力衰竭、起因於鐮刀細胞貧血和其它血液疾病的腎病、與肝炎、HIV、細小病毒和BK病毒(人多瘤病毒)相關的腎病、嚢腎疾病、狼瘡腎炎、膜性腎小球腎炎、膜性增生性腎小球腎炎、局灶性腎小球硬化、脈管炎、冷球蛋白血症、抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)-陽性脈管炎、ANCA-陰性脈管炎、澱粉樣變性病、多發性骨髓瘤、腎輕鏈沉積病、腎移植併發症、腎移植慢性排斥、慢性同種異體移植腎病和慢性腎免疫抑制作用。治療的受試者還可以是按已知的醫學測試方法檢測出的腎功能受損的受試者。例如，要治療的受試者可具有〉1.5mg/dL的血清肌酸酐水平或〈50mL/分鐘的肌酸酐清除率。同樣，要治療的受試者可具有〈60mg/分鐘的GFR。然而，依照本發明方法治療的受試者不需要具有任何特定病症或損傷，條件是確定了保護或穩定腎功能在醫學上是必需的或合乎需要的。附圖簡述圖1顯示了在有和沒有共存的氧溱酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對體重(BW)的作用。-*-顯示了僅RK大鼠的BW(對照)；-o畫顯示了用Fx治療的RK大鼠的BW;畫翻-顯示了用OA治療的RK大鼠的BW;而-口-顯示了用OA和Fx治療的RK的BW。圖2顯示了在有和沒有共存的氧溱酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對血漿尿酸(UA)的作用。-參-顯示了僅RK大鼠的UA(對照)；-o-顯示了用Fx治療的RK大鼠的UA;-■-顯示了用OA治療的RK大鼠的UA;而-口-顯示了用OA和Fx治療的RK的UA。圖3顯示了在有和沒有共存的氧嗪酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對收縮壓(SBP)的作用。-"顯示了僅RK大鼠的SBP(對照)；-o-顯示了用Fx治療的RK大鼠的SBP;-隨-顯示了用OA治療的RK大鼠的SBP;而-口-顯示了用OA和Fx治療的RK的SBP。圖4顯示了在有和沒有共存的氧口秦酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對平均動脈壓(在麻醉下)的作用。圖5顯示了在有和沒有共存的氧嗪酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對蛋白尿的作用。-"顯示了僅RK大鼠的蛋白尿(對照)；-o-顯示了用Fx治療的RK大鼠的蛋白尿；顯示了用OA治療的RK大鼠的蛋白尿；而-口-顯示了用OA和Fx治療的RK的蛋白尿。圖6顯示了在有和沒有共存的氧嗪酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對腎小球濾過率的作用。圖7顯示了在有和沒有共存的氧"秦酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對腎小J求血流動力學的作用。圖8顯示了在有和沒有共存的氧溱酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對腎d、動脈形態的作用。圖9顯示了在有和沒有共存的氧嗪酸(OA)誘導的高尿酸血症的殘餘腎臟(RK)大鼠中非布索坦(Fx)對腎小管間質纖維化的作用。發明詳述定義術語"給藥"或"給予"是指向受試者或患者提供藥物(例如黃噪呤氧化還原酶抑制劑或其鹽)的任何方式。給藥途徑可通過本領域技術人員已知的任何手段完成。這樣的手段包括但不限於口服、頰服、靜脈內、皮下、肌內、吸入等。本文使用的詞組"進展性腎病"、"末期腎病"、"慢性腎衰竭(CRF)"、"慢性腎病(CRD)"、"慢性腎臟疾病(CKD)"在本文全部可互換使用，是指在一定時間段內發生的任何腎臟病症或障礙，與突發事件相反(即急性腎病或腎衰竭)，其在受試者中引起腎功能逐漸下降。例如，進展性腎病、末期腎病、慢性腎病或慢性腎損傷包括但不限於由腎小管間質疾病引起的病症或障礙、腎小管細胞損傷、慢性感染、慢性炎症、腎炎、腎小球疾病、腎小球腎炎、腎缺血、腎缺血/再灌注損傷、血管疾病、腎動脈或靜脈栓塞、間質腎炎、藥物、毒素、外傷、腎結石/腎石病、慢性高尿酸血症、長期性高血壓、糖尿病、充血性心力衰竭、起因於鐮刀細胞貧血和其它血液疾病的腎病、與肝炎、HIV、細小病毒和BK病毒(人多瘤病毒)相關的腎病、嚢腎疾病、先天性畸形、梗塞、惡性疾病、不確定原因的腎病、狼瘡腎炎、膜性腎小球腎炎、膜性增生性腎小球腎炎、局灶性腎小球硬化、脈管炎、冷球蛋白血症、抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)-陽性脈管炎、ANCA-陰性ii脈管炎、澱粉樣變性病、多發性骨髓瘤、輕鏈沉積病、腎移植併發症、腎移植慢性排斥、慢性同種異體移植腎病和慢性免疫抑制作用。本文使用的術語"藥學上可接受的"包括在合理醫學判斷範圍內適用於與人類和低等動物的組織接觸而沒有不適當的毒性、刺激、變態反應等的部分或化合物，並符合合理的效益/風險比。本文使用的術語"受試者"是指動物，優選為哺乳動物，包括人或非人哺乳動物。術語患者和受試者在本文可互換使用。術語藥物(即至少一種黃嘌呤氧化還原酶抑制劑或其鹽)的"治療有效量，，或"預防有效量"是指無毒而足夠量的藥物，以在受試者中提供所需的腎功能保護作用。換句話說，這些術語是指例如組合物、黃噤呤氧化還原酶抑制化合物或製劑的足夠量，而且所述量是以適用於任何醫學治療的合理效益/風險比保護受試者的腎功能必需的。要理解的是，如同其它藥物一樣，本發明的藥物組合物的每日總用量由患者的主治醫師在合理醫學判斷範圍內決定。對任何具體患者的特定治療有效的或預防有效的劑量水平取決於多種因素，包括要治療的病症和疾病嚴重性；使用的具體化合物的活性；使用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所用的具體化合物的給藥時間、給藥途徑和排洩速率；治療時程；與所用具體化合物組合或同時(coincidental)使用的藥物；醫學領域的一般技術人員已知的其它因素。例如，本領域技術人員眾所周知以比實現所需治療作用低的水平開始化合物劑量，並逐漸增加劑量，直至達到所需的作用。因此，"有效的"或"預防的"藥物量將在受試者之間變化，取決於個體的年齡和一般健康狀況、具體的一種或多種藥物等。因此，不可能總是規定確切的"治療有效量"或"預防有效量"。然而，在任何單獨病例中的適宜的"治療有效量，，或"預防有效量"可由本領域技術人員確定。術語"治療"是指減輕症狀的嚴重程度和/或發生頻率、消除症狀和/或基礎病因、預防症狀和/或其基礎病因的出現以及改善或補救損傷。因此，例如，"治療"患者包括在易感個體中預防特定的病症或不利生理事件，也包括通過抑制或引起病症或疾病退化而治療在臨床上有症狀的個體。本文使用的術語"黃嘌呤氧化還原酶抑制劑"是指以下的任何化合物(l)其為黃嘌呤氧化還原酶(例如但不限於黃嘌呤氧化酶)的抑制劑；和(2)在化學上，其在其結構中不含嘌呤環(即其為"非嘌呤，，)。本文定義的詞組"黃嘌呤氧化還原酶抑制劑"還包括這樣的化合物的代謝物、多晶型、溶劑化物和前藥，包括如在以下的式I和式II中所述的示例性化合物的代謝物、多晶型、溶劑化物和前藥。黃嘌呤氧化還原酶抑制劑的實例包括但不限於2-[4-(2-羧基丙氧基)-3-氰基苯基]-4-曱基-5-p塞唑羧酸和具有以下式I或式II的化合物下式I的化合物其中Ri和R2各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-Cu)烷基、未取代的或取代的CVCu)烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、苯基亞硫醯基或氰基(-CN);其中R3和R4各自獨立為氫或如下所示的A、B、C或D:其中T將A、B、C或D連接至以上所示芳香環的R!、R2、R:或R4處。其中Rs和R6各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的CrC^烷基、未取代的或取代的CrC,。烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、COO-葡糖苷酸酯或COO-硫酸酯；其中R7和Rs各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-Qo烷基、未取代的或取代的d-do烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、COO-葡糖苷酸酯或COO-硫酸酯；其中R9為未取代的吡啶基或取代的吡咬基；和其中R,o為氫或低級烷基、用新戊醯氧基取代的低級烷基，在每種情況下，R,。均鍵合至以上式I所示的1,2，4-三唑環中的其中l個氮原子。下式II的化合物B其中Rn和R,2各自獨立為氫、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基(在該式II中的取代的苯基是指卣素或低級烷基等取代的苯基。實例包括但不限於對-曱苯基和對-氯苯基)，或者Ru和R,2可與它們連接的碳原子一起形成4元至8元碳環；其中R,3為氫或者為取代的或未取代的低級烷基；其中1114為選自氫、卣素、硝基、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基(在該式II中的取代的苯基是指卣素或低級烷基等取代的苯基。實例包括但不限於對-曱苯基和對-氯苯基)、-OR16和-S02NRnRn,的1個或2個基團，其中1116為氫、取代的或未取代的低級烷基、苯基取代的低級烷基、羧曱基或其酯、輕乙基或其酯或者為烯丙基；Rn和Rn,各自獨立為氫或者為取代的或未取代的低級烷基；其中R。為氫或形成藥學活性酯的基團；其中A為具有1-5個碳原子的直鏈或支鏈烴基；其中B為卣素、氧或亞乙二硫代；其中Y為氧、硫、氮或取代的氮；其中Z為氧、氮或取代的氮；和虛線是指單鍵、雙鍵或兩個單鍵(例如，當B為亞乙二硫代時，在環結構中所示的虛線可為兩個單鍵)。本文使用的術語"低級烷基"是指d-C7烷基，包括但不限於曱基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、庚基等。本文使用的術語"低級烷氧基"是指通過將低級烷基鍵合至氧原子形成的那些基團，包括但不限於曱氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基等。本文使用的術語"低級烷硫基"是指通過將低級烷基鍵合至硫原子形成的那些基團。本文使用的術語"滷素"是指氟、氯、溴和碘。本文使用的術語"取代的吡咬基"是指可用卣素、氰基、低級烷基、低級烷氧基或低級烷硫基取代的吡啶基。本文使用的術語"4元至8元碳環"是指環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基等。本文使用的詞組"形成藥物活性酯的基團"是指通過酯鍵結合羧基的基團。這些形成酯的基團可選自常用於製備藥物活性物質、尤其是前藥的羧基保護基。對於本發明用途，所述基團應選自能夠通過酯鍵結合具有式II(其中1115為氫)的化合物的那些基團。產生的酯有效增加胃腸道中相應的非酯化形式的、具有式II的所述化合物的穩定性、溶解性和吸收，還延長其有效的血液水平。另外，酯鍵可易於在體內於體液pH或通過酶作用被裂解，以提供生物活性形式的具有式II的化合物。優選的形成藥物活性酯的基團包括但不限於l-(氧取代的)-C2至C,5烷基，例如直鏈、支鏈、環形或部分環形的烷醯氧基烷基，如乙醯氧基曱基、乙醯氧基乙基、丙醯氧基曱基、新戊醯氧基甲基、新戊醯氧基乙基、環己烷乙醯氧基乙基、環己烷羰基氧基環己基曱基等，Q至C,5烷氧基羰基氧基烷基，如乙氧基羰基氧基乙基、異丙氧基羰基氧基乙基、異丙氧基羰基氧基丙基、叔丁氧基羰基氧基乙基、異戊氧基羰基氧基丙基、環己基氧基羰基氧基乙基、環己基曱氧基羰基氧基乙基、水片基羰基氧基異丙基等，C2至Cs烷氧基烷基，例如曱氧基甲基、曱氧基乙基等，C4至Q2-氧雜環烷基，如四氫吡喃基、四氫呋喃基等，取代的Q至d2芳烷基，例如苯曱醯曱基、2-苯並[C]呋喃酮亞基等，C6至C,2芳基，例如苯基二曱苯基、茚滿基等，C2至C,2烯基，例如烯丙基、(2-氧代-l，3-間二氧雜環戊烯基)曱基等，和[4,5-二氫-4-氧代-1H-吡唑並[3，4-司嘧啶-1-基]曱基等。在式II的R,6中，如在詞組"羧甲基酯"中使用的術語"酯"是指低級烷基酯，例如曱酯或乙酯；在詞組"輕乙基酯"中使用的術語"酯'，是指通過以脂肪族或芳香族烷基如千基取代羥乙基中羥基的氫原子而形成的酯。羧基保護基可以多種方式被取代。取代基的實例包括卣原子、烷基、烷氧基、烷硫基和羧基。本文在以上式II中的A定義中使用的術語"直鏈或支鏈烴基，，是指亞曱基、亞乙基、亞丙基、曱基亞曱基或異亞丙基。本文在以上式II中的Y和Z定義中使用的"取代的氮"的取代基為氫、低級烷基或醯基。本文使用的術語"苯基取代的低級烷基"是指苯基(如千基、苯乙基或苯基丙基)取代的低級烷基。本文使用的術語"前藥"是指在上述式I和式II中顯示的化合物的衍生物，所述化合物具有化學上或代謝上可切割的基團，並通過溶劑分解或在生理條件下變成在體內有藥學活性的化合物。羧酸酯是可用於本發明劑型的前藥的實例。曱酯前藥可通過使具有上述式的化合物在諸如曱醇的介質中與酸或鹼酯化催化劑(例如NaOH、H2S04)反應製備。乙酯前藥以類似的方式使用乙醇代替曱醇來製備。16具有上式I的化合物的實例為2-[3-氰基-4-(2-曱基丙氧基)苯基]_4-曱基噻唑-5-羧酸(也稱為"非布索坦")、2-[3-氰基-4-(3-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-[3-氰基-4-(2-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-(3-氰基-4-羥苯基)-4-甲基-5-噻唑羧酸、2-[4-(2-羧基丙氧基)-3-氰基苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、l-(3-氰基-4-(2，2-二曱基丙氧基)苯基)-1H-吡唑-4-羧酸、1-3-氰基-4-(2，2-二曱基丙氧基)苯基]-1//-吡唑-4-羧酸、吡唑並[l,S-a]-l，3,5-三"秦4-(lH)-酮，8-[3-曱氧基-4_(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(±)或3-(2-曱基-44匕咬基)-5-氰基-4-異丁氧基苯基)-1，2，4-三唑。具有上式I的優選化合物為2-[3-氰基-4-(2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基噻唑-5-羧酸、2-[3-氰基-4-(3-羥基-2-甲基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-[3-氰基-4-(2-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-(3-氰基-4-羥苯基)-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-[4-(2-羧基丙氧基)-3-氰基苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸。還已發現這些優選的化合物在受試者中以治療有效量對以下任一種涉及嘌呤和嘧啶代謝的酶的活性都不具有作用烏嘌呤脫氨酶、次黃嘌呤-烏嘌呤磷酸核糖基轉移酶、嘌呤核香酸磷酸化酶、乳清酸磷酸核糖基轉移酶或乳清酸核苷-5-單磷酸脫羧酶(即，是指涉及嘌呤和嘧啶代謝的這些酶中沒有一種是"選擇性的，，)。測定每一種上述酶的活性的測定都描述於YasuhiroTakano等人，h/eSc/e"c化76:1835-1847(2005)。這些優選的化合物在文獻中也被稱為黃噪呤氧化酶(NP/SIXO)的非噪呤選擇性抑制劑。具有上式II的化合物的實例描述於美國專利號5,268,386和EP0415566Al。除了吡唑並[l，5-a]-l,3,5-三嗪-4-(lH)-酮，8-[3-曱氧基-4-(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(士)以外，製備用於本發明方法的式I和II的黃噤呤氧化還原酶抑制化合物的方法是本領域已知的，例如描述於美國專利號5,268,386、5,614,520、6,225,474、7,074,816和EP0415566Al和出版物Ishibuchi，S.等人，MedC7ze肌11:879-882(2001)，這些文獻每個均通過引用整體結合到本文中。可在測定中使用黃噪呤氧化還原酶和黃噪呤發現其它黃噤呤氧化還原酶抑制化合物，以確定這些候選化合物是否可抑制黃噪呤轉變為尿酸。這樣的測定在本領域眾所周知。吡唑並[l，5-a]-l，3，5-三嗪-4-(lH)-酮,8-[3-曱氧基-4-(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(士)可得自OtsukaPharmaceuticalCo.Ltd.(Tokyo,Japan),並4苗述於以下的出片反物UematsuT.等人,"PharmacokineticandPharmacodynamicPropertiesofaNovelXanthineOxidaseInhibitor,BOF-4272,載於HealthyVolunteers,/P/^waco/ogy￡jc/m>e"to/772era/^w"a,270:453-459(1994年8月)，Sato，S.，ANovelXanthineDeydrogenaseInhibitor(BOF-4272)。/"屍wr/we朋dJ°yr/mWweMeto6ofewMa"，VII巻，A部，由P.A.Harkness編著，135-138頁，PlenumPress,NewYork。可使用本領域已知的常規技術製備吡唑並[l，5-a]-l,3,5-三唪-4-(lH)-酮,8-[3-甲氧基-4-(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(士)。本發明的描述如上簡述，本發明涉及在其需要的受試者中保護腎功能的方法。業已發現，被稱為黃噪呤氧化還原酶抑制劑的一類化合物不僅可用於降低受試者中的血清尿酸鹽水平，而且隨著時間推移，對所述受試者腎功能起保護作用。因為本發明的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑有效降低血清尿酸鹽水平，所以這些化合物可用於治療罹患高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病和/或腎石病的受試者。這樣的治療包括給予有效量的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑，以快速降低受試者的尿酸水平(即，在初次開始用黃噤呤氧化還原酶抑制劑治療的1周內(參見BeckerM,KisickiJ，KhosravanR,WuJ，MulfordD，HuntB,MacDonaldP,Joseph-RidgeN.，iVwc/eos/cfesM/c/eo"cfeM/c/e/c爿c/c/s,23(8&9):1111-1116(2004年10月))，並在長時間內保持受試者的血清尿酸鹽水平降低，優選至少4周(參見BeckerMA,SchumacherHRJr，WortmannRL，MacDonaldPA，PaloWA，EustaceD,VernilletL，Joseph-RidgeN，勿/zn'to朋e訓.，52(3):916-923(2005年3月))，更優選至少1年，再更加優選至少2年，仍更優選超過30個月以上(參見BeckerMA,SchumacherHRJr,WortmannRL，MacDonaldPA，EustaceD,PaloWA，StreitJ,Joseph-RidgeN.,TV￡"g//MW"354(6):1532-1533(2006年4月))。業已發現，在這樣的延長的時間段內，以有效降低受試者血清尿酸鹽水平的量給予的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑，在此時間革殳內也治療有效性保護受試者的腎功能。保護腎功能可通過眾所周知的檢測來評價，例如肌酸酐水平、"幾酸酐清除率和GFR。要理解的是，就保護腎功能而言，以黃噤呤氧化還原酶抑制劑治療的受試者的腎功能不僅優於以安慰劑治療的受試者，而且能將腎功能適度保持在接近基線水平，即穩定水平，不一定將腎功能由降低的或受損的水平改善至足夠的水平。換句話說，儘管給予黃嘌呤氧化還原酶抑制劑能有效將腎功能保護在受試者的現有水平，即穩定腎功能，但不一定能有效將腎功能改善至顯著超出這些水平。然而，保持現有的腎功能水平對患有如高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病和/或腎石病的病症的受試者很重要，因為其可能減慢這些患者中的腎病發展。當GFR用作腎功能檢測時，保護受試者的腎功能包括將受試者的GFR保持在與受試者的基線水平相比時至少約75%以上的水平；更優選地，保持在與受試者的基線水平相比時至少約80°/。以上的水平；再更優選地，保持在與受試者的基線水平相比時至少約90Q/。以上的水平。另外，還已發現，給予本發明的黃噪呤氧化還原酶抑制劑還可以用於在罹患進展性腎病的受試者中保護腎功能。這樣的受試者還可以患有或沒患有高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病和/或腎石病。患有進展性腎病的受試者的治療包括給予有效量的黃嘌呤氧化還原酶抑制劑，以在受試者中快速維持或改善腎功能(即，在初次開始用黃噤呤氧化還原酶抑制劑治療的2周內)，並在長時間內在受試者中保持這種改善的腎功能，優選至少4周，更優選至少l年，再更優選至少2年、仍更優選超過30個月以上。本文先前描述的檢測腎功能保護的方法還可以用於在患有進展性腎病的受試者中檢測腎功能的保護。要理解的是，就保護腎功能而言，以黃嘌呤氧化還原酶抑制劑治療的受試者中的腎功能不僅優於以安慰劑治療的受試者，而且將腎功能適度保持在接近基線水平，即穩定水平，不一定將腎功能由降^f氐的或受損的水平改善至足夠的水平。換句話說，儘管給予黃嘌呤氧化還原酶抑制劑能有效將腎功能保護在受試者的現有水平，即穩定腎功能，但不一定能有效將腎功能改善至顯著超出這些水平。然而，保持現有的腎功能水平對患有進展性腎病的受試者很重要，因為其可能減慢這些患者中的疾病發展。設想將含有至少一種黃嘌呤氧化還原酶抑制劑的組合物用於本發明的方法。使用下述賦形劑和劑型，含有這類組合的製劑可供本領域技術人員選擇。此外，本領域技術人員將認識到，在化合物組合不相容的情況下，可使用各種包衣或其它分隔技術。按照本發明方法使用的化合物可以來源於無機酸或有機酸的藥學上可接受的鹽的形式提供。藥學上可接受的鹽在本領域眾所周知。例如，S.M.Berge等人在/戶/w^macew"ca/5Wewc"66:1以下(1977)中詳述了藥學上可接受的鹽。所述鹽可在化合物的最終分離和純化過程中原位製備，或者用合適的有機酸與游離鹼官能團反應單獨製備。代表性的酸加成鹽包括但不限於乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯曱酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽(羥乙基磺酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、曱磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘>^黃酸鹽、20草酸鹽、樸酸鹽(palmitoate)、果膠酸鹽、過^5危酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、穀氨酸鹽、碳酸氫鹽、對曱苯磺酸鹽和十一酸鹽。另外，可用諸如以下的試劑使鹼性含氮基團季銨化低級烷基卣，如曱基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸鹽，如二曱基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸鹽；長鏈卣化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂醯基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卣，如節基和苯乙基溴化物等。從而得到水溶性或油溶性或者可分散在水或油中的產物。可用於形成藥學上可接受的酸加成鹽的酸的實例包括無才幾酸(如鹽酸、氫溴酸、^危酸和-疇酸)和有一幾酸(如草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸)。可通過使含羧酸的部分與合適的鹼(如藥學上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或者與氨或有機伯、仲或叔胺反應，在化合物的最終分離和純化過程中原位製備鹼加成鹽。藥學上可接受的鹽包括但不限於，基於;威金屬或鹼土金屬的陽離子，如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂和鋁鹽等，以及非毒性季銨和胺陽離子，包括銨、四曱銨、四乙銨、曱胺、二曱胺、三曱胺、三乙胺、二乙胺和乙胺等。用於形成鹼加成鹽的其它代表性有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。至少一種黃噤呤氧化還原酶抑制化合物或其鹽可以多種方式配製，所述化合物或其鹽主要是選擇問題，取決於所需的傳遞途徑。例如，口服給藥的固體劑型包括膠嚢劑、片劑、丸劑、散劑和粒劑。在這樣的固體劑型中，黃嘌呤氧化還原酶抑制化合物可與至少一種惰性的藥學上可接受的賦形劑或載體(如檸檬酸鈉或磷酸二鉤)和/或下列物質混合a)填充劑或增充劑，例如^f旦不限於澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和矽酸；b)粘合劑，例如但不限於羧曱基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；c)保溼劑，例如但不限於甘油；d)崩解劑，例如但不限於瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯澱粉或木薯澱粉、海藻酸、某些矽酸鹽和碳酸鈉；e)溶液阻滯劑，例如但不限於石蠟；0吸收加速劑，例如但不限於季銨化合物；g)溼潤劑，例如但不限於鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸收劑，例如但不限於高呤土和膨潤土；和i)潤滑劑，例如但不限於滑石、硬脂酸銅、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基^f克酸鈉及其混合物。還可用諸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)以及高分子量聚乙二醇等的賦形劑將相似類型的固體組合物用作軟和硬填充明膠膠嚢的填充劑。固體劑型的片劑、膠嚢劑、丸劑和粒劑可用包衣料和包殼料如腸溶衣及藥物製劑領域眾所周知的其它包衣料製備。它們任選地包含遮光劑，且還可以是只釋放活性成分或任選地以延遲方式優先在某部分腸道釋放的組合物。可使用的包埋組合物的實例包括聚合物和蠟。口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。除了黃。票呤氧化還原酶抑制化合物之外，液體劑型可包含本領域常用的惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如但不限於乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、千醇、苯曱酸節酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二曱基曱醯胺、油(特別是棉籽油、落花生油、玉米油、胚油、橄欖油、荒麻油和芝麻油)、甘油、四氬糠醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯及其混合物。還可以利用冠狀動脈內支架(由細絲篩組成的管狀裝置)或利用生物可降解聚合物，通過導管傳遞組合物，用於局部傳遞至靶位。適於胃腸外注射的組合物可包含藥學上可接受的無菌水性或非水性溶液、分散液、混懸液或乳液以及再配製成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉劑。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或溶媒的實例包括但不限於水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄欖油)、可注射的有機酯如油酸乙酯或其合適的混合物。這些組合物還可包含輔助劑，如防腐劑、溼潤劑、乳化劑和分散劑。可用各種抗細菌劑和抗真菌劑(如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、22山梨酸等)保證預防微生物的作用。還可能需要包含等滲劑，例如糖、氯化鈉等。可用延緩吸收的物質如單硬脂酸鋁和明膠延長可注射的藥物形式的吸收。除了活性化合物(即黃嘌呤氧化還原酶抑制化合物或其鹽)之外，混懸液還可包含助懸劑，如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminummetahydroxide)、膨潤土、瓊脂和黃蓍膠或這些物質的混合物等。例如，通過使用包衣材料如卵磷脂、就分散液而言通過維持需要的粒徑和通過使用表面活性劑，可維持適宜的流動性。在某些情況下，為了延長藥物(即黃噪呤氧化還原酶抑制化合物或其鹽)的作用，需要減慢皮下或肌內注射藥物的吸收。這可通過用水溶性低的晶體或非晶體物質的液體混懸液實現。藥物的吸收率則取決於其溶解率，所述溶解率又可取決於晶粒大小和晶形。或者，可通過使藥物溶解或懸浮於油性溶媒中實現對胃腸外給藥的藥物形式的延遲吸收。通過形成藥物在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中的微嚢化基質製備可注射的儲庫形式。根據藥物對聚合物的比率以及所用具體聚合物的性質，可控制藥物釋放速率。其它生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。還可通過將藥物包埋在與機體組織相容的脂質體或微乳劑中製備可注射的儲庫製劑。可將注射製劑滅菌，例如通過除菌濾器過濾或者通過加入無菌固體組合物形式的滅菌劑，可在臨用前即時將其溶解或分敉於無菌水或其它無菌可注射的介質中。本發明化合物的局部給藥劑型包括粉劑、噴霧劑、軟膏劑和吸入劑。在無菌條件下使活性化合物與藥學上可接受的載體和任何需要的防腐劑、緩衝劑或可能需要的推進劑混合。眼科製劑、眼膏、粉劑和溶液劑也考慮在本發明範圍之內。要理解的是，按照本發明使用的製劑一般將含有治療有效量的一種或多種黃嘌呤氧化還原酶抑制化合物。按照合理的醫學實踐，考慮個體患者的臨床病症、給藥部位和方法、給藥時間表和醫師已知的其它因素，給予和計量本發明的製劑。因此，根據本領域技術人員已知的這些考慮因素，可容易地確定用於本文用途的治療有效量或預防有效量。將每日治療有效量或預防有效量的黃噪呤氧化還原酶抑制化合物以在約0.01至約750mg/kg體重/天(mg/kg/天)範圍內的單劑量或分劑量給予患者。更具體地說，可每曰1次給予患者約5.0mg至約300mg黃噪呤氧化還原酶抑制化合物，優選每日1次約20mg至約240mg黃口票呤氧化還原酶抑制化合物，最優選每日1次約40mg至約120mg黃噪呤氧化還原酶抑制化合物。當然，本領域技術人員會理解，可利用其它給藥方案，例如每日l次以上給藥，利用緩釋的、控釋的或調釋的劑型等，以便達到保護受試者腎功能的預期目的。現將以實施例而非限制的方式給出本發明的實施例。實施例1登記研究前，根據受試者報告，在具有腎石病史的18名人受試者的亞組中前瞻性收集信息。在4周的雙盲2期研究中，將受試者隨機分配為4個治療組之一(1)非布索坦牝mg/天，p)非布索坦SOmg/天，(3)非布索坦120mg/天，或(4)安慰劑。完成雙盲研究的受試者進入開放標記的長期研究，並開始用80mg非布索坦/天治療。非布索坦劑量可基於受試者的血清尿酸鹽水平和不利事件的出現在初始的6個月內逐漸調整至40mg或120mg非布索坦/天。在研究亞組中，在已接受非布索坦》30個月的研究受試者(n-13)中進行腎石病的因果分析。萬一出現腎結石形成，則分析所有這些結石的礦物質含量。以下是納入研究的標準(l)根據美國風溼病學會(AmericanRheumatismAssociation)初步標準確定的痛風史存在痛風；(2)正常腎功能，定義為血清肌酸酐水平50mL/分鐘；(3)在雙盲研究開始時血清尿酸鹽水平>8.0mg/dL。以下是排除研究的標準(l)活動性肝病、黃噪呤尿或任何其它顯著的醫學病症的病史；和(2)在入選研究的1個月內具有任何p塞溱類利尿劑或類固醇療法的改變和長期使用NSAID的受試者。tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28表3提供了受試者過早終止參與的主要原因的匯總表3終止原因n研究撤回同意a3雙盲不利事件b1開放標記不依從1開方文衝示i己a受試者完成雙盲研究，但未被選擇進入開放標記研究。b優選項目肌酸酐增加(基線1.6mg/dL，停藥2.1mg/dL,第163個隨訪日，距藥物研究2周，1.9mg/dL)表4提供了在研究過程中最經常發生的不利事件的匯總。表411所有受試者N-18^1AE的所有受試者17MedDRA高水平項目上呼吸道感染12痢疾(排除感染)7關節相關的跡象和症狀6下呼吸道和肺感染骨骼肌和結締組織跡象和症狀nec非位點特異性損傷4胃腸和腹部疼痛(排除口和咽喉)3浮肺nec3疹、發滲和皮疹nec3尿道感染3nec-在別處未分類a由在開放標記研究中的>3名受試者報告的不利事件。29實施例l表明，在整個研究中接受非布索坦的受試者中腎功能以一般穩定的水平被保持。實施例2用懸浮在0.5%甲基纖維素中的非布索坦經口服管飼給藥初始6周齡的B6C3F1物種/品系小鼠。給予的日劑量為0mg(即對照組)、3mg、12mg、24mg或48mg。在給藥13周後針對腎近端小管的嚢泡退化(已知在齧齒動物中天然存在的變化)進行腎臟的組織病理學檢查。結果示於表5。表5tableseeoriginaldocumentpage30*p《0.05(Dunnett的非參數多重比較檢驗)**p《Q.01(Dunnett的非參數多重比較檢驗)實施例2表明，給予非布索坦以統計學顯著方式在研究的雄性動物中P爭4氐腎近端小管的嚢泡退化。實施例3如下使用雄性Wistar大鼠(295-340g)產生具有殘餘腎臟(RK)的大鼠。在用醚輕度麻醉下，通過除去右腎並選擇性連接左腎動脈的2-3個分支，進行5/6腎切除術。然後為大鼠指定4個治療組之一第1組，RK對照大鼠(n^7);第2組，RK+非布索坦(Fx)大鼠(n=8);第3組，RK+氧嗪酸(OA)大鼠(n-6);和第4組，RK+OA+Fx(n=10)。在5/6腎切除術後當日開始，以每日750mg/kg體重灌胃給予氧。秦酸(OA)(Sigma-Aldrich,StLouisMo.,USA)。在手術後立即開始在飲用水中以30mg/L(3-4mg/kg/天)給予非布索坦，而相應的對照只接受飲用水(加入3.5mg/LNaCl，以和含Fx的水保持相等的鹽濃度)。所有組別都治療4周。每天檢測體重(臨手術前開始)以及食物和水的攝取。通過尾套血壓計在清醒大鼠中檢測收縮壓，並在臨手術前(即於基線)和4周結束時檢測血漿尿酸(UA)水平。在基線以及2周和4周結束時檢測蛋白尿。在4周結束時實施腎微穿刺程序連同在戊巴比妥麻醉下進行系統血壓監測，之後進行腎臟腎小球前微血管的形態學評價。評價腎小#流動力學的微穿刺程序用戊巴比妥鈉(30mg/kg,腹膜內(ip))麻醉動物，並將動物放在溫度調節臺上，以將體溫維持在37°C。用聚乙烯管(PE-240、PE-50和PE-10)插管氣管、頸靜脈、股動脈和左輸尿管。暴露左腎，放置在有機玻璃支架中，用瓊脂密封，並用林格式溶液覆蓋。用連接至股動脈中的導管的壓力傳感器(p23db型；Gould,SanJuan，PuertoRico)監測平均動脈壓(MAP)，並用多導記錄4義(GrassInstruments,Quincy,MA,USA)記錄。定期取血樣，並用供體大鼠的血置換。通過在手術過程中灌輸10mL/kg體重的等滲大鼠血漿將大鼠保持在等容積性條件下，之後以2.2ml/h(Inutest;FreseniusKabi,Linz，Austria)灌輸25%果聚糖。在60分鐘後，獲得5-7種近端小管流體的樣品，以測定流速和果聚糖;農度。用servo-null裝置(ServoNullingPressureSystem;InstrumentationforPhysiologyandMedicine,SanDiego,Calif.,USA)在其它近端小管中檢測在自由流動(FF)和終止流動(SFP)條件下的腎小管內壓和管周毛細血管壓(Pc)。由得自股動脈(Ca)和表面出球微動脈(Ce)的血液的蛋白濃度估計腎小球膠體滲透壓。通過由Davidson和Sackner在"用於在清除研究中測定菊粉的簡化蒽酮法(Simplificationoftheanthronemethodforthedeterminationofinulininclearancestudies),"/丄a6C7z'"A/W.62:351-356(1963)中描述的基於蒽酮的技術檢測血漿和尿樣品中的果聚糖，所述文獻的內容在此引入作為參考。簡而言之，首先用三氯乙酸去蛋白化血漿樣品。在離心後，使用上清液進行果聚糖檢測。通過加入蒽酮試劑，之後於45。C溫育50分鐘，並於620nm波長在分光光度計裝置中讀數，評價血漿和尿樣品中的果聚糖濃度。通過使用標準曲線(0.01-0.05mg/mL)內插吸光度值計算濃度。使用下式GFR=(UxV)/P計算總GFR，其中U為尿中的果聚糖濃度，V為尿流速，P為血漿中的果聚糖濃度。由在已知內徑的不變孔毛細管中的液柱長度估計由各個近端小管收集的流體體積。腎小管果聚糖的濃度通過由Vurek和Pegram在"用於測定納克量的菊粉的螢光4會測法(Fluorometricmethodforthedeterminationofnanogramquantitiesofinulin)，"j5/oc/zew16:409-419(1966)中描述的微螢光測量方法檢測，該文獻的內容在此引入作為參考。具體地說，使用8-nL移液管，將腎小管流體樣品轉移至一端密封並含有3pL雙甲酮試劑(在10mL85%正磷酸中的100mg雙甲酮)的毛細管比色亞中。每個比色皿在加入樣品後立即密封。在血細胞比容離心機中以最大速度、5分鐘離心比色皿5次，並在沸水浴中力口熱10分鐘。寸吏用發光分光計(Series2;Aminco-Bowman,RochesterN.Y.,USA)分別於355和400nm的激發和發射波長對著為0%的試劑空白和為100%的10mg/mL果聚糖檢測螢光。對於每個比色皿，以4次讀數的平均值計算螢光，在讀取之間隨意旋轉支架。通過使用標準曲線(0.5-2.5mg/mL)內插螢光值計算果聚糖濃度。使用下式計算單個腎單位的腎小球濾過率(SNGFR):SNGFR=(TF/P)PFxV,其中PF為腎小管流體(TF)和血漿(P)中的果聚糖的濃度，V為通過定時收集腎小管流體獲得的腎小管流速(參見BaylisC等人，"某些血管擴張藥物對腎皮質中的^,毛細血管流體交換的作用(Effectsofsomevasodilatordrugsontranscapillaryfluidexchangeinrenalcortex)",力m/屍/2jvw/0/321148-1158(1976),該文獻的內容在此引入作為參考)。按照Viets等人在"使用螢光胺或鄰苯二醛確定納升血樣中的血清蛋白f農度(Determinationofserumproteinconcentrationinnanoliterbloodsamplesusingfluorescamineoro-phthalaldehyde),，，爿wa/88:513-521(1978)中描述的方法測定入球和出球樣品中的蛋白濃度，該文獻的內容在此引入作為參考。具體地說，將5nL血清與5pL含Brij和巰基乙醇的硼酸鹽緩衝溶液在100卞L玻璃毛細管中混合。另外，加入5|iL鄰笨二醛(OPT)試劑。通過在血細胞比容離心機中離心毛細管幾次混合內含物。在離心後分別於362和419nm的激發和發射波長在發光分光計(與前述相同)中^r測螢光30-60分鐘。通過對標準曲線(0.2-1.0mg/mL)內插在樣品中獲得的螢光值計算蛋白濃度。用先前在BrennerBM,"對腎損傷或切除的腎單位適應(Nephronadaptationtorenalinjuryorablation)"，v4w/P/>w'o/249:F324-F337,(1985)(該文獻的內容在此引入作為參考)中報告的以下等式計算MAP、GFR、腎小球毛細血管靜壓(PGC)、單個腎單位血漿流量(QA)、入球阻力(AR)、出球阻力(ER)和總阻力(TR)以及Kf:PGC=SFP+7ua,其中兀a為得自股動脈血的血漿的膠體滲透壓；QA=SNGFR/SNFF，其中SNFF為單個腎單位濾過率SNFF=l—(Ca/Ce);AR=(MAP—PGC/GBF)x(7,962x1010),其中GBF為腎小球血流量；GBF=QA/(1—Hct),其中Hct為血細胞比容；ER=(PGC—Pc/GBF—SNGFR)x(7.962xl010);TR=AR+ER;K/=SNGFR/EFP,其中EFP為有效的濾過壓；和EFP=[(PGC—兀a—FF)+(PGC—兀e—FF)]/2，其中丌e為得自表面出球小動脈的血液的血漿膠體滲透壓。評價每日測定食物和水攝取。使用自動化系統(XBP-100;KentScientificCo,Torrington，CT，USA)在清醒的動物中通過尾套血壓計檯r測收縮壓(SBP)。在每個實驗前1周將所有動物對血壓檢測預條件化。使用市售試劑盒(DiagnosticChemicalsLtd,Charlottetown,PEI，Canada)定量血漿尿酸。通過如在HenryRJ等人，"用磺基水楊酸和三氯乙酸進4亍蛋白油度測定(Turbidimetricdeterminationofproteinswithsulfosalicylicandtricholoroaceticacids)"，/Voc6bc5/o/ikfed92:748-751(1956)中所述的三氯乙酸方法利用比濁計測定蛋白尿，該文獻的內容在此引入作為參考。腎組織學和形態定量在微穿刺研究後，通過用磷酸緩衝鹽水灌注洗滌腎臟，然後用4%多聚曱醛固定。用石蠟包埋腎活檢組織。用高碘酸Schiff(PAS)試劑和馬松三色染色來染色4卞m厚的固定組織的切片。通過a平滑肌肌動蛋白(DAKOCorp,Carpinteria,CA.，USA)的間接過氧化物酶免疫染色評價小動脈形態。與正常兔血清溫育的腎切片用作對a平滑肌肌動蛋白免疫染色的陰性對照。對於每個小動脈，使用計算機分析產生血管及其內腔的外線(內皮除外)，以計算每個活;險品的10個小動脈中的全部中夾面積(外線-內線)。根據外線/內線關係計算中膜/內徑比率(參見Sanchez-LozadaLG等人，"輕微高尿酸血症在正常大鼠中誘發腎小球高血壓(Mildhyperuricemiainducesglomerularhypertensioninnormalmts)"，/P/z>w'o/Ae"a/P/2>w.o/283:Fl105-Fl110(2002);Sanchez-LozadaLG等人，"輕微高尿酸血症在正常和殘餘腎臟大鼠中誘發血管收縮並保持腎小球高血壓(Mildhyperuricemiainducesvasoconstrictionandmaintainsglomerularhypertensioninnormalandremantkidneyrats),"KW"e;;/W67:237-247(2005)，每個文獻的內容均在此引入作為參考)。定量以盲方式進行。在每個活檢品的10個非交叉皮質區域(100X)中定量腎小管間質纖維化的程度。通過光學顯微鏡(OlympusBX51;OlympusAmerican,Melville,NY.,USA)分析載玻片，並利用數碼影像照相才幾(CoolSnapPro;MediaCybernetics,SilverSpring,MD,USA)捕獲。在計算機上處理圖片，並使用ImagePro-Plus(5.0版；MediaCybernetics,SilverSpring,MD,USA)分析。利用該軟體的色彩識別能力，選擇正藍染色區域(纖維化)，並以像素單位定量；腎小球和血管被預先排除在該區域之外。對於每個活檢品，通過平均10個檢驗區域的值計算正藍染色區域的平均量。統計學分析值表示為平均值土平均值的標準偏差(SEM)。通過單因素方差分析(ANOVA)分析相應的4個治療組的值。當由ANOVA測定的p值<0.05時，使用Bonferroni多重比較4全驗進行以下的對比RK對照對RK+Fx，RK對照對RK+OA,RK對照對RK+OA+Fx以及RK+OA對RK+OA+Fx。通過關聯分析評價方差之間的關係。結果體重、食物和水攝取(圖1和表6)基線體重在全部4個治療組之間都是類似的。在手術後，所有治療組中的體重都降低；這有可能是因為在5/6腎切除術後的第一周內的食物消耗減少。由第2周至第4周，動物正常進食，並開始增加體重。在研究結束時，在4個治療組之間沒有顯著的體重差異或體重增加差異。在用非布索坦治療的兩個組中，大鼠一般傾向於吃得略少，水攝取和RK對照或RK+OA組相比一般顯著減少。先前在該特定實驗室中獲得的數據(表8)和其他人(參見KretschmerBD等人，"食物、餵飼方案和身體4歡煉對體重和胰島素抵抗的調節作用(Modulatoryroleoffood,feedingregimeandphysicalexerciseonbodyweightandinsulin35resistance)",h/e76:1553-1573,(2005))報告的數據表明,在正常雄性Wistar大鼠(體重》300g)中的每日水攝取通常為35-40mL。基於此信息，由研究清楚可見，每日水攝取在RK大鼠中顯著增加，在非布索坦治療過程中，水攝取降低至接近正常水平。我們對該行為沒有作出明確解釋，但對該藥物的味覺厭惡是非常不可能的，因為先前非布索坦在該特定實驗室對正常Sprague-Dawley大鼠的水l聶取沒有表現出作用。然而，眾所周知，尿酸鹽濃度隨著功能性腎質量的減少而下降(參見HayslettJP,"對腎質量下降的機能適應(Functionaladaptationtoreductioninrenalmass)"屍/2;w'0/iev59:137-164(1979))，該作用誘發多尿症，並增加水消耗。在這點上，業已提出，由於間質纖維化導致的髓質結構破壞可能通過防止產生高滲髓質間質促成尿濃縮缺陷(參見GilbertRM等人，"尿素在具有慢性實驗性腎盂腎炎的大鼠中的腎內再循環的研究(Astudyoftheintrarenalrecyclingofureaintheratwithchronicexperimentalpyelonephritis)"，/C7/"/"vast58:1348-1357(1976))。因為非布索坦治療顯著減輕RK大鼠中的腎小管間質纖維化(參見下文)，所以該作用有可能對殘餘腎臟的尿濃縮能力具有有利影響，在非布索坦治療的動物中產生正常化的水消耗。血漿尿酸(圖2)血漿尿酸濃度的基線值在全部4個治療組中都是類似的。在4周結束時，在接受非布索坦的RK大鼠中的尿酸降低至在RK對照大鼠中檢測的值的約63%，但該差異沒有顯著意義。正如所料，至4周結束時，在RK+OA大鼠中的血漿尿酸相對於RK對照大鼠顯著增加達2倍以上。將非布索坦加入OA治療的大鼠防止尿酸水平升高(參見圖2)。血壓(圖3和4)通過尾套法在清醒的動物中檢測的收縮壓值概述於圖3。所有治療組於基線都具有相似的值。在4周後，全部4組的大鼠都發生系統性高血壓，其程度大致相同。該發現在研究結束時通過在麻醉下直接動脈內插管評價平均動脈血壓來證實(參見圖4)。蛋白尿(圖5)在手術前的尿蛋白排洩值在4個治療組中是類似的。RK對照大鼠和RJC+OA大鼠至第2周出現顯著的蛋白尿，並至第4周持續增力口。患有高尿酸血症的RK大鼠一般比沒有高尿酸血症的RK大鼠蛋白尿高。用非布索坦治療在有和沒有高尿酸血症的RK大鼠中阻止尿蛋白排洩升高。在第2周，RK+Fx和RK+OA+Fx大鼠具有的尿蛋白排洩與在基線觀察到的類似；在第4周結束時，尿蛋白排洩比在其相應對照組中觀察到的值低75-80%(參見圖5)。腎小球血流動力學(圖6和7;表7和8)在4周結束時，在所有動物中通過微穿刺技術測定腎小球血流動力學。如先前在該腎損傷模型中所描述的，幾乎全部的腎切除在殘餘腎單位中誘發機能適應(參見Sanchez-LozadaLG等人，"輕微高尿酸血症在正常和殘餘腎臟大鼠中誘發血管收縮並保持腎小球高血壓(Mildhyperuricemiainducesvasoconstrictionandmaintainsglomerularhypertensioninnormalandremnantrats",A7t/wey/m67:237-247(2005))。儘管在RK對照大鼠中的腎小球濾過率(GFR)(0.28±0.04mL/分鐘；圖6)顯著降低，但單個腎單位GFR(66.8±5.2mL/分鐘；圖7)相比於在該特定實驗室中在正常Wistar大鼠組中獲得的歷史值增加幾乎兩倍(參見表8)。在殘餘腎單位中的超濾由腎小球壓和腎小球血漿流量的顯著增加產生；這兩種作用均有可能由於入球小動脈對系統性高血壓沒有響應而誘發，並因此在面對增加的系統動脈壓時保持低入球阻力(參見圖7、表7和表8)。如先前在Sprague-Dawley大鼠中所示(參見Sanchez-LozadaLG等人，"輕微高尿酸血症在正常和殘餘腎臟大鼠中誘發血管收縮並保持腎小球高血壓(Mildhyperuricemiainducesvasoconstrictionandmaintainsglomerularhypertensioninnormalandremnantmts)"尺油e少/"f67:237-247(2005))，RK模型存在附加的高尿酸血症在Wistar大鼠中產生額外的腎小球血液動力學變化。在RK+OA大鼠中的GFR類似於在RK對照組中一樣低(參見圖6);然而，單個腎單位GFR相比於RK對照組更低。而且，入球阻力在RK+OA大鼠中相比於RK對照大鼠顯著提升(參見圖7)。在RK+OA組中的該皮質血管收縮表現為顯著的腎小球血漿流量下降，儘管腎小球壓變化不大或沒有變化。在RK+Fx和RK+OA+Fx大鼠中的非布索坦治療相比於兩個未治療組用於增加GFR(參見圖6)，其通過維持腎小球壓和腎小球血漿流量的正常值防止單個腎單位超濾。RK+OA+Fx大鼠相比於其相應的未治療隊列還表現出較高的入球小動脈阻力，提示在這些動物中的被保護的自動調節機制(參見圖7)。與該機制相一致的是觀察到在入球小動脈阻力和腎小球壓之間存在負關聯(r--0.57,p<0.001)。在第4周，在尿酸和腎小球壓之間(r-0.47,p-0.008)以及腎小球壓和蛋白尿之間(r=0.55,p=0.001)存在正關聯。腎小動脈形態(圖8)給予RK動物非布索坦阻止在RK對照組中觀察到的腎小球前血管增厚(參見圖8)。相比於RK對照動物，RK+OA大鼠出現額外的入球小動脈增厚；這種改變被非布索坦治療阻止(參見圖8)。而且，發現存在以下的正關聯尿酸對小動脈區域0=0.69,p〈0.0001)和小動脈區域對腎小球壓(r-0.66,p<0.0001)。中膜/內徑(M/L)比率在多個組之間沒有統計學顯著差異(參見圖8);然而，非布索坦治療的大鼠相比於其相應的未治療的隊列存在M/L比率降低的趨勢。腎小管間質纖維化(圖9)RK對照和RK+OA組出現相似程度的腎小管間質(TI)纖維化。用非布索坦治療顯著減少了RK和RK+OA大鼠這二者中的該結構改變。另外，鑑定出以下的正關聯尿酸對TI纖維化(r-0.44，p=0.02);TI纖維化對蛋白尿0=0.74,p<0.0001);腎小球壓對TI纖維化(r-0.65,p=0.0001);和TI纖維化對小動脈區域(r=0.67,p<0.0001)。表6提供了在有和沒有共存的高尿酸血症的殘餘腎臟大鼠中非布索坦對體重、食物和水攝取的作用的匯總。tableseeoriginaldocumentpage39RK-殘餘腎臟；Fx-非布索坦；0八=氧嗪酸(用於誘發高尿酸血症)。1由每隻動物1周內的每日食物或水攝取的平均值計算，平均值±SEM。*表示與RK對照組的顯著差異。#表示與RK+OA組的顯著差異。表7描述了在有和沒有共存的高尿酸血症的殘餘腎臟大鼠中非布索坦對腎小球血流動力學的作用。tableseeoriginaldocumentpage39tableseeoriginaldocumentpage40RK-殘餘腎臟；Fx-非布索坦；OA=氧嗪酸(用於誘發高尿酸血症)。MAP:平均動脈壓；PGC:腎小球毛細血管壓；GFR:腎小球濾過率；SNGFR:單個腎單位GFR;QA:腎小球血漿流量；AR:入球阻力；ER:出球阻力；Kf:超濾係數。*表示與RK對照組的顯著差異。#表示與RK+OA組的顯著差異。表8表8描述了得自正常雄性wistar大鼠的歷史對照值。得自正常雄性Wistar大鼠的歷史對照值tableseeoriginaldocumentpage40tableseeoriginaldocumentpage41nd=無數據在該實施例3中描述的以上研究的結果表明，非布索坦治療在有和沒有共存的高尿酸血症的RK大鼠中防止蛋白尿和腎損傷。而且，因為非布索坦幫助保護腎小球前血管形態，所以即便在存在系統性高血壓的情況下也保持正常腎小球壓。該研究突顯了保護殘餘腎單位的自動調節能力以便延遲腎病發展的重要性。因此，在單獨的或組合共存的高尿酸血症的慢性腎病大鼠模型中，非布索坦治療減少由發展性和廣泛性腎組織損失誘發的功能性和結構性改變。儘管參考某些目前優選的實施方案描述了本發明，但要理解的是，對本領域技術人員顯而易見的修改及其變化包括在本發明範圍內。4權利要求1.一種在其需要的受試者中保護腎功能的方法，所述方法包括以下步驟給予受試者治療有效量的至少一種化合物，其中所述至少一種化合物為黃嘌呤氧化還原酶抑制劑或其藥學上可接受的鹽。2.權利要求1的方法，其中黃噪呤氧化還原酶抑制劑選自2-[3-氰基_4_(2_曱基丙氧基)苯基]_4-甲基噻唑_5-羧酸、2-[3-氰基-4-(3-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-[3-氰基-4-(2-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-(3-氰基-4-羥苯基)-4-曱基-5-噻唑羧酸、2-[4-(2-羧基丙氧基)-3-氰基苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸、l-(3-氰基-4-(2,2二曱基丙氧基)苯基)-lH-吡唑-4-羧酸、1-3-氰基-4-(2，2二曱基丙氧基)苯基]-lH-吡唑-4-羧酸、吡唑並[1,5力]-1,3,5-三嗓-4-(11"1)-酮，8-[3-曱氧基-4-(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(±)、3-(2-曱基-4-外匕啶基)-5-氰基_4-異丁氧基苯基)-1，2，4-三唑及其藥學上可接受的鹽。3.權利要求l的方法，其中所述受試者患有高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病或腎石病。4.權利要求1的方法，其中所述受試者患有進展性腎病。5.權利要求l的方法，其中與受試者的基線GFR水平相比，所述受試者的GFR水平至少保持約75%或更高。6.—種在其需要的受試者中保護腎功能的方法，所述方法包括以下步驟給予受試者治療有效量的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物具有下式結構其中R,和R2各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的CrC,o烷基、未取代的或取代的d-do烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、苯基亞硫醯基或氰基(-CN);其中R3和R4各自獨立為氫或如下所示的A、B、C或D:formulaseeoriginaldocumentpage3其中T將A、B、C或D連接至以上所示芳香環的R!、R2、R3或R4處。其中Rs和R6各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-C,。烷基、未取代的或取代的d-d。烷氧基、未取代的或取代的輕基烷氧基、COO-葡糖苷酸酯或COO-硫酸酯；其中R7和Rs各自獨立為氫、羥基、COOH基團、未取代的或取代的d-do烷基、未取代的或取代的C廣C化烷氧基、未取代的或取代的羥基烷氧基、COO-葡糖苦酸酯或COO-硫酸酯；其中R9為未取代的吡啶基或取代的吡^基；和其中R,o為氫或低級烷基、新戊醯氧基取代的低級烷基，在每種情況下，R,o均鍵合至以上所示的1,2，4-三唑環中的其中1個氮原子。7.權利要求6的方法，其中所述化合物為2-[3-氰基-4-(2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基噻唑-5-羧酸或其藥學上可接受的鹽。8.權利要求6的方法，其中所述化合物為2-[3-氰基-4-(3-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸或其藥學上可接受的鹽。9.權利要求6的方法，其中所述化合物為2-[3-氰基-4-(2-羥基-2-曱基丙氧基)苯基]-4-甲基-5-噻唑羧酸或其藥學上可接受的鹽。10.權利要求6的方法，其中所述化合物為2-(3-氰基-4-羥苯基)-4-曱基-5-噻唑*友酸或其藥學上可接受的鹽。11.權利要求6的方法，其中所述化合物為2-[4-(2-羧基丙氧基)-3-氰基苯基]-4-曱基-5-噻唑羧酸或其藥學上可接受的鹽。12.權利要求6的方法，其中所述化合物為l-3-氰基-4-(2,2二曱基丙氧基)苯基]-1//-吡唑-4-羧酸或其藥學上可接受的鹽。13.權利要求6的方法，其中所述化合物為吡唑並[l,5-a]-l，3,5-三。秦4-(lH)-酮,8-[3-曱氧基-4-(苯基亞硫醯基)苯基]-鈉鹽(士)。14.權利要求6的方法，其中所述化合物為3-(2-曱基-4-吡啶基)-5-氰基-4-異丁氧基苯基)-l，2，4-三唑或其藥學上可接受的鹽。15.權利要求6的方法，其中所述受試者患有高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病或腎石病。16.權利要求6的方法，其中所述受試者患有進展性腎病。17.權利要求6的方法，其中與受試者的基線GFR水平相比，所述受試者的GFR水平至少保持約75%或更高。18.—種在其需要的受試者中保護腎功能的方法，所述方法包括以下步驟給予受試者治療有效量的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中所述化合物具有下式結構formulaseeoriginaldocumentpage4其中Ru和Ru各自獨立為氫、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基，或者Ru和R,2可與它們連接的碳原子一起形成4元至8元-灰環；其中Ri3為氫或者取代的或未取代的低級烷基；其中R,4為1個或2個基團，所述基團選自氫、卣素、硝基、取代的或未取代的低級烷基、取代的或未取代的苯基、-OR16和-S02NR17R17,，其中R!6為氫、取代的或未取代的低級烷基、苯基取代的低級烷基、羧曱基或其酯、羥乙基或其酯或烯丙基；Rn和Rn,各自獨立為氫或者取代的或未取代的低級烷基；其中1115為氫或形成藥學活性酯的基團；其中A為具有1-5個碳原子的直鏈或支鏈烴基；其中B為卣素、氧或亞乙二好u代；其中Y為氧、硫、氮或取代的氮；其中Z為氧、氮或取代的氮；和虛線是指單鍵、雙^:或兩個單鍵。19.權利要求18的方法，其中所述受試者患有高尿酸血症、痛風、急性痛風性關節炎、慢性痛風性關節病、痛風石性痛風、尿酸性腎病或腎石病。20.權利要求18的方法，其中所述受試者患有進展性腎病。21.權利要求18的方法，其中與受試者的基線GFR水平相比，所述受試者的GFR水平至少保持約75%或更高。全文摘要本發明涉及通過給予治療有效量的至少一種黃嘌呤氧化還原酶抑制化合物或其鹽在需要其的受試者中保護腎功能的方法。文檔編號A61K31/425GK101677999SQ200780049607公開日2010年3月24日申請日期2007年11月13日優先權日2006年11月13日發明者C·拉德馬赫,P·麥唐納申請人:塔普醫藥產品公司