北冬蟲夏草提取物及其在製備治療腫瘤藥物上的應用的製作方法

2023-05-07 01:08:06 1

北冬蟲夏草提取物及其在製備治療腫瘤藥物上的應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為1－25:1。所述北冬蟲夏草提取物選自人工培育北冬蟲夏草子實體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物，及從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實體細粉的複合物。本發明還提供北冬蟲夏草提取物在製備治療腫瘤藥物上的應用。所述腫瘤包括實體瘤和非實體瘤，例如肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上或白血病。所述藥物還具有增強免疫功能、協同放療或化療的治療作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
【專利說明】北冬蟲夏草提取物及其在製備治療腫瘤藥物上的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及北冬蟲夏草的研究，特別涉及北冬蟲夏草的活性部位及其製備治療腫瘤藥物的應用。
【背景技術】
[0002]北冬蟲夏草，又名蛹蟲草，蛹草，北蟲草，蛹草菌等，在吉林省首次發現，經鑑定它與冬蟲夏草為同一屬，故定名為蛹草。分類學上屬於真菌門，子囊菌亞門，核菌綱，球殼目，麥角菌科，蟲草屬。北冬蟲夏草作為傳統珍貴中藥材，我國人民對其藥用價值早有認識。李時珍在《本草綱目》中指出，蟬花能主治「小兒天吊驚癇，夜啼，心悸」。據考證，當時的「蟬花」包括了蟬蟲草和蛹蟲草等多種寄生於蟲體或蛹體上的蟲草。趙學敏在《本草綱目拾遺》中把蟲草類的藥用歸之為「能治百虛百損」。《新華本草綱要》稱，蛹草「全草:味甘，性平。有益肺腎，補精髓，止血化痰的功能」，可見其功效與冬蟲夏草近似，故一些醫家將其作為冬蟲夏草的替代品入藥應用。北冬蟲夏草人工栽培成功以來，隨著人們對北冬蟲夏草的滋補保健功效和多種藥用價值的認識，其開發利用研究倍受關注。
[0003]《中國藥事》1985年第14卷第9期報導了人工發酵培養蟲草菌成功。中國專利申請201010278624.1和201010278637.9公開了複方發酵蟲草菌粉(蝙蝠蛾擬青黴Cs_4菌粉)及其組合藥物用於抗衰老、抗疲勞、耐缺氧、提高免疫力、鎮靜、抗休克、抗光輻射的用途。中國藥典2010年版記載有金水寶膠囊和金水寶片，都是由冬蟲夏草菌(蝙蝠蛾擬青黴Cs-4)發酵製成。其功效與主治為補肺益腎、秘精益氣。用於肺腎兩虛，精氣不足，久咳虛喘，神疲乏力，不寐健忘，腰膝瘦軟，月經不調，陽痿早洩；慢性支氣管炎、慢性腎功能不全、高脂血症、肝硬化見上述症候者。
[0004]本 申請人:早先申請的中國專利申請CN 102037854A公開了一種北冬蟲夏草子實體的培養方法。該方法將接種後的培養容器排列堆放於可控光培養架上置組培室中培養，在避光培養後通過可控光培`養架調控光照強度和光照周期進行光照培養，從而滿足了北冬蟲夏草正常生長對光照的需求，使出草率提高，生物轉化率提高，並通過調節出草管理階段的光照強度和光照周期使子實體內有效成分含量提高和增加子實體內生物量的積累。
[0005]本 申請人:還對北冬蟲夏草子實體和培養基進行了提取精製，對提取物進行了祛邪(抗腫瘤作用)、扶正(增強免疫功能)和減毒作用的藥理學研究。因此，本發明的目的是提供北冬蟲夏草提取物及其在製備治療腫瘤藥物上的應用。

【發明內容】

[0006]本發明提供一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為I 一25:1。
[0007]本發明提供的「北冬蟲夏草提取物」來自人工培育北冬蟲夏草子實體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物，以及從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實體細粉的複合物。[0008]本發明的北冬蟲夏草提取物中，蟲草多糖與蟲草素的重量比可為4-8:1，也可為5-10:1，或為 8-20:1。
[0009]本發明還提供這種北冬蟲夏草提取物在製備治療腫瘤藥物上的應用。
[0010]本發明對北冬蟲夏草提取物的臨床前藥理學研究顯示:
[0011]北冬蟲夏草提取物在600、300、150mg/kg三個劑量下，對小鼠肝癌H22、小鼠Lewis肺癌和小鼠S180肉瘤的生長均有不同程度的抑制作用，與化療藥5FU、CDDP, CTX合用顯示了一定的相加作用，療效好於單獨用藥。北冬蟲夏草提取物單用及合併CTX對荷白血病P388小鼠的生命有一定的延長作用。
[0012]北冬蟲夏草提取物對移植於裸鼠的人體乳腺癌MDA-MB-435、人體肺癌A549成瘤後開始給藥，均具有一定的生長抑制作用，量效關係明顯。分別與化療藥Taxol和Gemzar合用，顯不了一定的相加作用。
[0013]北冬蟲夏草提取物與放療合併使用，抑瘤作用也明顯強於單獨放療。
[0014]北冬蟲夏草提取物對荷瘤小鼠的免疫功能有明顯的促進作用。[0015]北冬蟲夏草提取物對大劑量環磷醯胺引起的小鼠白細胞降低有明顯的治療作用。
[0016]因此，本發明提供北冬蟲夏草提取物在製備治療腫瘤藥物上的應用，所述腫瘤包括實體瘤和非實體瘤。實體瘤為諸如肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上。非實體瘤為諸如白血病。
[0017]本發明提供的北冬蟲夏草提取物在製備治療腫瘤藥物上的應用，除了提供抑制腫瘤細胞的作用外，還具有增強免疫功能、協同放療或化療的治療作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
[0018]本說明書中涉及的比例或百分比，若非特別指出，均為重量比或重量百分比。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1顯示三種劑量北冬蟲夏草提取物對環磷醯胺引起的白細胞降低的影響。【具體實施方式】
[0020]以下用實驗例對本發明作進一步闡述。本【技術領域】普通技術人員應當認識到，這些實驗例僅僅用於舉例說明本發明而不對本發明的範圍構成任何限制，對本發明所作的任何改變，只要不違背本發明的精神實質，都將落在權利要求範圍內。
[0021]實施例1:北冬蟲夏草提取物的製備
[0022]I)北冬蟲夏草子實體提取物的製備
[0023]將人工培育的北冬蟲夏草子實體乾燥、粉碎後用去離子水浸泡20h後過濾，根據情況可重複幾次，用水量和浸泡時間漸減。濾液離心後上清液流經732 #陽離子交換樹脂柱。將流穿液的PH調節至7.0-7.5，用截留分子量為4000的超濾膜超濾，截留液減壓濃縮乾燥後得蟲草多糖提取物，其中蟲草多糖含量為60-85%。樹脂柱用lmol/L氨水洗脫至洗脫液幾近無色，將洗脫液減壓濃縮乾燥後得蟲草素提取物，其中蟲草素含量為15-40%。
[0024]將人工培育北冬蟲夏草子實體的蟲草多糖提取物和蟲草素提取物合併，組成人工培育北冬蟲夏草子實體的提取物，其中蟲草多糖:蟲草素=1- 25:1。
[0025]2)北冬蟲夏草培養基提取物的製備[0026]將人工培育北冬蟲夏草後的培養基幹燥、粉碎後用去離子水浸泡20h後過濾，根據提取情況可重複幾次，用水量和浸泡時間可漸減。濾液離心後上清液流經732 #陽離子交換樹脂柱，流速為25ml/min。將流穿液的pH調節至7.0-7.5，用截留分子量為4000的超濾膜超濾，截留液減壓縮並乾燥後得蟲草多糖提取物，其中蟲草多糖含量為50-80%。樹脂柱用lmol/L氨水洗脫至洗脫液幾近無色，將洗脫液減壓濃縮乾燥後即得蟲草素提取物，其中蟲草素含量為15-30%。[0027]將人工培育北冬蟲夏草培養基的蟲草多糖提取物和蟲草素提取物合併，得到北冬蟲夏草培養基提取物其中蟲草多糖:蟲草素=1- 25:1。
[0028]3)北冬蟲夏草培養基提取物+北冬蟲夏草子實體細粉混合物的製備
[0029]按上述2)製得北冬蟲夏草培養基提取物。
[0030]將乾燥的北冬蟲夏草子實體製成80-200目細粉。
[0031]將北冬蟲夏草培養基提取物和北冬蟲夏草子實體細粉均勻混合，其中蟲草多糖:蟲草素=I — 25:10
[0032]以上三種產品統稱北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖:蟲草素=I 一 25:1。
[0033]以下實驗例中採用的材料和裝置:
[0034]受試藥物均為北冬蟲夏草提取物(實施例1的產物，淡棕色粉末，簡稱提取物，由上海國寶企業發展中心提供北冬蟲夏草，上海醫藥工業研究院中藥研究室製備提取物，批號080606 )，用蒸餾水配至所需濃度。提取物低、中、高劑量組分別為150mg/kg、300mg/kg和600mg/kg。
[0035]陽性對照藥:金水寶膠囊(江蘇濟民可信金水寶製藥有限公司，號041007，20mg/片)，用蒸餾水配至所需濃度；氟尿嘧啶注射液(5FU)(上海華聯製藥有限公司生產，批號080409，無色澄明液體，0.25g/10ml)、注射用順鉬(⑶DP)(錦州九泰藥業有限責任公司生產，批號060604，黃色結晶性粉末，20mg/瓶)、環磷醯胺(CTX)(江蘇恆瑞醫藥股份有限公司生產，批號08041521，白色結晶，200mg/瓶)、紫杉醇注射液(Taxol)(浙江海正藥業股份有限公司生產，批號071001，液體，30mg/5ml)、注射用鹽酸吉西他濱(健擇，Gemzar) (LillyFrance S.A.生產，批號A404170(2007.06-2010.05)，200mg/支)，用滅菌生理鹽水稀釋，其中紫杉醇注射液現配現用。
[0036]其它材料:培養基RPM1-1640，Gibco產品，內含15% NBS、巰基乙醇、Ifepes等；刀豆球蛋白A(ConA)，中國醫藥(集團)上海化學試劑公司，50 μ g/ml ；Yac-l細胞；白細胞計數液(3 %冰醋酸+數滴龍膽紫)。
[0037]實驗動物:昆明種小鼠、C57BL/6小鼠、DBA/2小鼠、BALB/C裸鼠(SPF級)，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司供應，生產許可證號=SCXK (滬)2007-0005，使用許可證號:SYXK (滬)2004-0015。
[0038]鈷60輻照裝置:鈷60 (Co60)(照射單位:第二軍醫大學；劑量率:2Gy/min ;照射劑量:4Gy)0
[0039]全自動酶標儀(WellscanMK2):Labsystems。
[0040]預實驗顯示，北冬蟲夏草提取物中蟲草多糖與蟲草素的重量比為1-3:1或4-8:1或5-10:1或8-20:1或10:25:1時均有抗腫瘤、增強免疫功能和減輕化、放療副作用的效果。以下採取蟲草多糖與蟲草素的重量比為4-8:1進行藥效學試驗。[0041]實驗例1:北冬蟲夏草提取物單用及合併5FU對小鼠肝癌H22生長的抑制作用
[0042]健康昆明種小鼠，19_21g，雌雄兼用，每批試驗同一性別，共進行兩批試驗。
[0043]第一批試驗取生長良好的小鼠肝癌H22腹水，用生理鹽水1:4稀釋後(細胞濃度約I~2 X IO7個/ml )，每隻小鼠(早)腋皮下接種0.2ml，隨機分為:空白對照組、5FU (15mg/kg, ipX5)組、金水寶膠囊(600mg/kg, igX7)組、提取物低、中、高劑量組,及提取物低、中、高劑量組分別+5FU (給藥方案同單獨給藥)。
[0044]接種次日起按以上方案開始給藥,連續給藥7天,給藥體積為0.5ml/20g體重。接種第10天處死動物，稱體重後解剖取瘤塊並稱重，根據以下公式計算抑瘤率:
[0045]
【權利要求】
1.一種北冬蟲夏草提取物，其中蟲草多糖與蟲草素的重量比為I 一 25:1。
2.如權利要求1所述的北冬蟲夏草提取物，所述北冬蟲夏草提取物選自人工培育北冬蟲夏草子實體的提取物、從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物，及從人工培育北冬蟲夏草培養基中得到的提取物加北冬蟲夏草子實體細粉的複合物。
3.權利要求1所述北冬蟲夏草提取物在製備治療腫瘤藥物上的應用。
4.如權利要求3所述的應用，其中所述腫瘤包括實體瘤和非實體瘤。
5.如權利要求4所述的應用，其中所述實體瘤為肝癌、肺癌、乳腺癌和肉瘤中的一種或一種以上。
6.如權利要求4所述的應用，其中所述非實體瘤為白血病。
7.如權利要求3-6中任何一項所述的應用，其中所述治療腫瘤藥物還具有增強免疫功能、協同放療或化療的治療 作用和降低放療或化療藥物毒性的作用。
【文檔編號】A61K36/068GK103520222SQ201210225528
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2012年7月2日 優先權日:2012年7月2日
【發明者】唐永範, 唐亮 申請人:上海國寶企業發展中心, 上海國寶生物工程研究所