脫氧野尻黴素的一種純化方法
2023-05-02 09:42:11
專利名稱：脫氧野尻黴素的一種純化方法
技術領域：
本發明屬於生物與新醫藥技術領域，涉及從植物中提取活性化合物，即從桑葉中提取分離高純度的1-脫氧野尻黴素及高附加值副產物桑葉多糖。
背景技術：
1-脫氧野尻黴素(1-deoxynojirimycin，以下簡稱「1-DNJ」)是一種多羥基哌啶生物鹼，因其結構類似單糖也稱為亞胺基糖，其化學名稱是3，4，5-三羥基-2-羥甲基四氫吡啶，化學結構式如
圖1所示，分子式為C6H13NO4，分子量為163。I-DNJ具有多種生物活性，可用於治療糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病，同時可抑制腫瘤，對α-葡萄糖澱粉酶有抑制作用，並可用作載體用於高純度麥芽糖的酶合成。
權利要求
1.脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於(1)桑葉藥材除雜，乾燥後粉碎，過篩，得提取用桑葉粉末；(2)原料粉末在乙醇溶液內浸泡後，超聲波提取，分離固液相後獲得提取液，提取液濃縮並回收乙醇，離心，去沉澱；(3)將步驟( 得到的的離心濃縮液過陽離子樹脂層析柱上樣後用蒸餾水衝洗至流出液無色為止，用氨水洗脫，收集PH 9-12段洗脫液，濃縮至小體積；(4)將步驟(3)得到的濃縮液調節pH值至7.0左右，以氯仿萃取，留水相；(5)將步驟的水相用正丁醇萃取，保留正丁醇相，濃縮後收集析出固體；(6)將步驟(5)析出的固體用無水乙醇進行重結晶；(7)將步驟(6)獲得的晶體溶於水後，過凝膠過濾層析柱，流出液濃縮、乾燥獲得1-脫氧野尻黴素精製品，純度不低於98. 5%。
2.如權利要求1中所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟(1)所述的桑葉乾燥粉碎後過30 50目篩。
3.如權利要求1中所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟( 所述乙醇的浸泡濃度為60% 65%，浸泡時間為30 40min。
4.如權利要求1中所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟( 所述超聲波的提取功率為125W，溫度70°C，提取次數為2 3次，每次30min。
5.如權利要求1中所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟C3)中所述的陽離子樹脂為AB-8、732H、D152，氨水的洗脫濃度為0. 25 0. 30mol/L，洗脫速度為1 2mL/min。
6.如權利要求1中所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟(4)所述 PH值調節液為鹽酸、醋酸，氯仿與濃縮液的體積比為1 2-1 4，萃取次數為2 4次。
7.如權利要求1所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟(5)所述正丁醇與水相的體積比為1 2-1 4，萃取次數為4 6次。
8.如權利要求1所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟(6)所述無水乙醇重結晶的次數為2 3次。
9.如權利要求1所述的脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於，步驟(7)所述凝膠過濾層析柱Superose 4B, Sephdex 20等，純水洗脫。
10.脫氧野尻黴素的一種純化方法，其特徵在於製備獲得1-脫氧野尻黴素的同時可製備獲得桑葉多糖(1)將權利要求1步驟( 超聲波提取後分離獲得的固相加入2-3倍體積的蒸餾水，攪拌均勻後固液分離獲得提取液；(2)將權利要求10步驟(1)獲得提取液濃縮後加入乙醇、丙酮或異丙醇萃取，除去脂溶性部分，保留水相；(3)將權利要求10步驟⑵獲得水相內加入乙酸乙酯或石油醚萃取，去除葉綠色，保留水相；(4)將權利要求10步驟C3)獲得水相內加入無水乙醇，使其終濃度達到80%，攪拌均勻後4°C下靜置48h，抽濾，獲得沉澱物；(5)將權利要求10步驟(4)獲得沉澱物加水溶解後4°C下加入三氯乙酸，終濃度達到20%，攪拌20min後離心，保留液相，除蛋白；(6)將權利要求10步驟( 獲得液相過AB-8大孔徑吸附樹脂，蒸餾水洗脫，洗脫液濃縮後加活性炭脫色，脫色液加無水乙醇終濃度達到80%以上，攪拌均勻後4°C下靜置48h， 抽濾，沉澱分別用無水乙醇、丙酮各洗3-5次，得白色沉澱；(7)將權利要求10步驟(6)獲得沉澱溶解透析(分子量11000以上)，乾燥，獲得白色粉末，多糖含量高於90%。
全文摘要
本發明涉及一種從植物內提取化合物的純化技術，從天然產物桑葉中提取分離高純度1-脫氧野尻黴素，同時精製獲得桑葉多糖的方法，主要包括以下步驟原料預處理後溶於乙醇溶液，超聲波提取，提取液濃縮後過陽離子樹脂，洗脫液濃縮後經有機溶劑萃取、重結晶、凝膠過濾層析後製備獲得1-脫氧野尻黴素精製品，純度不低於98.5％。本工藝操作簡單，成本低，環境汙染低，設備典型，材料易於獲得，適合大規模生產。
文檔編號C08B37/00GK102491938SQ20111042278
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月16日 優先權日2011年12月16日
發明者殷紅 申請人:北京貫虹科技集團有限公司