一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法

2023-05-19 20:53:21

一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法
【專利摘要】本發明涉及一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，採用的技術方案是：1)蛋白棒模型體系的製備；2)樣品螢光染色；3)利用雷射共聚焦掃描顯微鏡進行樣品螢光漂白恢復測定。本發明具有可在線監測乳蛋白棒在貯藏過程中質地發生變化的程度，進而可預測蛋白棒等高蛋白產品的品質以及貨架期，最終從分子水平揭示蛋白棒在貯藏初期質地發生硬化的內在機理原因。
【專利說明】一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，特別是利用螢光漂白恢 復技術監測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法。

【背景技術】
[0002] 蛋白棒以其蛋白質含量高和營養豐富等優點，受到軍人、運動員等特殊人群以及 越來越多大眾的青睞。但是，目前市場上影響蛋白棒等產品發展的一個重要瓶頸原因是蛋 白棒在貯藏過程中發生質地硬化的現象，嚴重影響了蛋白棒的貯藏穩定性和食用品質，限 制了蛋白棒等產品的發展。而針對蛋白棒在貯藏過程中質地發生硬化的內在機理原因尚存 在爭議。
[0003] 螢光漂白恢復技術（FRAP)是通過採用雷射共聚焦掃描顯微鏡的高強度脈衝式激 光照射生物體（例如：細胞）的某一區域，使得該區域的螢光分子淬滅。再利用低強度的激 光掃描，來檢測該區域周圍非淬滅螢光分子向螢光漂白區域的擴散過程。
[0004] 在本發明中，通過藉助螢光漂白恢復技術對蛋白棒模擬體系進行實時動態監測， 從分子水平更直觀準確的來觀測蛋白質分子的遷移過程（包括遷移路徑、擴散速度等信 息），進而揭示造成蛋白棒尤其是在貯藏初期產品質地發生硬化的內在機理原因。


【發明內容】

[0005] 針對目前市售蛋白棒等產品在貯藏過程中發生質地硬化及其硬化機理尚不明確 等問題，本 申請人:經過研究，通過利用螢光漂白恢復技術，提供一種直觀監測蛋白棒在貯藏 過程中穩定性發生變化的方法，為今後解決有關蛋白棒質地硬化以及預測產品貨架期等問 題提供理論依據和數據支持。
[0006] 本發明的技術方案如下：
[0007] -種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，其特徵在於步驟如下：
[0008] (1)蛋白棒模型體系的製備。蛋白棒模型體系的配方如表1所示：
[0009] 表1蛋白棒模型體系製備配方
[0010]

【權利要求】
1. 一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，其特徵是將螢光染色的蛋白棒模型體 系採用螢光漂白恢復技術測定其分子遷移情況。
2. 如權利要求1所述的一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，其特徵是樣品熒 光染色具體工藝為：配製〇. 1?〇. 4mg/mL的異硫氰酸螢光素（FITC) /丙酮染色液，將4? 8 U g該染色液滴加於0. 5?1. 0g的樣品中並進行混合；混合均勻後，將其中0. 3g樣品轉 移至玻底培養皿中，蓋上蓋玻片，並用AB膠封邊；最後，將染色好的樣品置於25°C恆溫培養 箱中並避光儲存；此後，分別於第l、3、7d進行取樣測定。
3. 如權利要求1所述的一種直觀檢測蛋白棒貯藏穩定性變化的方法，其特徵是螢光 漂白恢復技術具體操作為：將染色好的待測樣品置於雷射掃描顯微鏡的載物臺上，並設定 樣品激發波長為485?495nm，發射波長為500?530nm，在1?20倍目鏡下進行樣品觀 測；在觀察區域內選擇邊長為20?50 y m的正方形區域作為漂白範圍；設定螢光漂白強度 100%，漂白程度為80%?100% ;之後，實時監測漂白區域FITC-蛋白體系的螢光恢復情 況，每隔一段時間進行圖像採集記錄螢光恢復情況。
【文檔編號】G01N21/64GK104406946SQ201410677500
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月21日 優先權日:2014年11月21日
【發明者】周鵬, 李娟 , 賈曉戈, 陸乃彥, 張軒 申請人:江南大學